SK287481B6 - Farmaceutická kompozícia s terapeutickou synergiou pri liečení neoplastického ochorenia obsahujúca docetaxel a flavopiridol - Google Patents

Abstract

Opisuje sa farmaceutická kompozícia s terapeutickou synergiou pri liečení neoplastického ochorenia obsahujúca docetaxel a flavopiridol. Výhodne sa zložky kompozície podávajú oddelene a v časovom odstupe. Výhodne je neoplastickým ochorením rakovina prsníka alebo rakovina pľúc. Flavopiridol sa výhodne podáva orálne.

Description

Vynález sa týka synergických kombinácií Taxotere® a flavopiridolu pri liečení neoplastických ochorení.

Doterajší stav techniky

Taxány a taxoidy tvoria skupinu prirodzene sa vyskytujúcich diterpénových zlúčenín zahŕňajúcich silné protinádorové liečivo paclitaxel. Paclitaxel (Taxol®), ktorý sa pôvodne izoloval z kôry tisu pacifického (7axus brevifolia) sa ukázal byť vysoko účinný pri adjuvantnej a neoadjuvantnej terapii pacientov trpiacich rakovinou prsníka a vaječníkov. Nedávno sa zistilo, že aj jeho polosyntetický analóg docetaxel (Taxotere®) je terapeuticky účinný pri chemoterapii pacientov s rakovinou prsníka, pričom tiež vzrástol počet ochorení citlivých na túto skupinu protinádorovo účinných látok vrátane rakoviny pľúc a rakoviny hrubého čreva. Tak Taxol® (paclitaxel), ako aj Taxoter® (docetaxel) sa viaže k tubulínu, inhibujú rozdruženie mikrotubúl a narúšajú mitózu, čím blokujú priebeh fázy M bunkového cyklu a uľahčujú apoptózu.

Napriek nepochybnej celkovej klinickej úspešnosti taxoidov sú niektoré nádory rezistentné na tieto lieky. Táto lieková rezistencia môže byť vrodeným znakom nádoru alebo sa môže v nádore vyvinúť v priebehu času. Uvádzajú sa tri hlavné mechanizmy liekovej rezistencie (i) lokálne mutácie tubulínového génu, (ii) selekcia tubulínových izoforiem s nízkou schopnosťou väzby k taxánom a (iii) expresia fenotypu viacliekovej rezistencie (MDR, multidrug-Resistance) sprostredkovaná P-glykoproteínovou (P-gp) efluxnou pumpou kódovanou génom mdrl.

Mechanizmus (iii) môže vysvetľovať vrodenú rezistenciu na Taxol® a Taxotere® v nádoroch, ktoré často inherentne exprimujú P-gp, takých ako rakoviny hrubého čreva a obličiek.

Kombinácie alebo sústavy podľa vynálezu umožňujú vyhnúť sa alebo oddialiť fenomén pleiotropnej rezistencie alebo viacliekovej rezistencie.

Príprava zlúčenín Taxol®, Taxotere® a ich derivátov tvorí napríklad predmet európskych patentových dokumentov EP0253738 a EP0253739 a medzinárodnej prihlášky PCT WO 92/09589.

Podstata vynálezu

Predmetom vynálezu je farmaceutická kompozícia s terapeutickou synergiou pri liečení neoplastického ochorenia obsahujúca Taxotere® a flavopiridol.

Výhodne sa zložky kompozície podávajú oddelene a v časovom odstupe. Výhodne je neoplastickým ochorením rakovina prsníka alebo rakovina pľúc. Flavopiridol sa výhodne podáva orálne.

Flavopiridol (czs-5,7-dihydroxy-2-(2-chlórfenyl)-8-[4-(3-hydroxy-l-metyl)piperidinyl]-l-benzopyran-4-ón) je syntetickým flavónom, pri ktorom sa preukázalo, že má protinádorovú účinnosť proti rôznym nádorovým bunkovým radom, akými sú bunkové rady ľudského karcinómu pľúc a karcinómu prsníka, a že tiež inhibuje rast nádorov v rámci modelov xenoštepov. Zistilo sa, že indukuje zastavenie tak fázy Gl, ako aj G2 bunkového cyklu. Flavopiridol je potentným a selektívnym inhibítorom CDKs a jeho protinádorová účinnosť je podmienená jeho schopnosťou inhibovať CDK. Štúdie preukázali, že jeho schopnosť inhibovať rast nádorových buniek sa uplatňuje v bunkovom cykle špecifickým spôsobom. Pozri Bioorg. & Med. Chem. Letters 10:1037-1041 (2000).

Taxotere® a flavopiridol majú rôzne mechanizmy účinku, ktoré môžu zlepšovať účinnosť každého z nich. Zlepšená účinnosť kombinácie podľa vynálezu sa môže demonštrovať stanovením terapeutickej synergie. Kombinácia vykazuje terapeutickú synergiu v prípade, ak je terapeuticky lepšia ako jedna alebo druhá zo zložiek použitá v ich optimálnej dávke (T.H. Corbett a kol., Cancer Treatment Reports, 66: 1187 (1982)).

Na preukázanie účinnosti kombinácie môže byť nevyhnutné porovnať maximálne tolerovanú dávku kombinácie s maximálnou tolerovanou dávkou každej zo separátnych zložiek v rámci uvažovanej štúdie. Táto účinnosť sa môže kvantitatívne vyjadriť napríklad hodnotou logio bunková smrť (log₁₀ celí kill), ktorá sa stanoví podľa nasledujúceho vzorca:

logio bunková smrť = T-C(dni)/3,32 x T_d, v ktorom

T-C znamená čas bunkového rastu, ktorý je stredným časom, vyjadreným v počte dní, pre nádory ošetrovanej skupiny (T) a nádory ošetrovanej skupiny (C) potrebný na to, aby nádor dosiahol nejakú vopred stanovenú hmotnosť (napríklad hmotnosť 1 g), a

T_d znamená čas, vyjadrený v počte dní, potrebný na to, aby nádor zdvojnásobil svoj objem u kontrolných zvierat (T.H. Corbett a kol., Cancer, 40, 2660-2680 (1977); F.M. Schabel a kol., Cancer Drug Development,

Part B, Methods in Cancer Research, 17, 3-51, New York, Academic Press Inc. (1979)). Produkt je považovaný za účinný v prípade, ak jeho hodnota logio bunková smrť je väčšia alebo sa rovná 0,7. Produkt je považovaný za veľmi účinný v prípade, ak má hodnotu logio bunková smrť väčšiu ako 2,8.

Kombinácia použitá vo svojej maximálne tolerovateľnej dávke, v ktorej každá z ich zložiek bude prítomná v dávke všeobecne nepresahujúcej jej maximálne tolerovanú dávku, bude vykazovať terapeutickú synergiu v prípade, ak jej hodnota logio bunková smrť je väčšia ako hodnota log₁₀ bunková smrť najlepšej zložky v prípade, ak je podaná samotná.

Účinnosť kombinácií na tuhé nádory sa môže určiť experimentálne nasledujúcim spôsobom:

Zvieratám podstupujúcim tento experiment, všeobecne myšiam, sa subkutánne bilaterálne naočkuje 30 až 60 mg nádorový fragment v deň nula. Zvieratá nesúce nádor sa pred tým, ako sa podrobia rôznym ošetreniam alebo kontrolným zákrokom, premiešajú. V prípade ošetrenia pokročilých nádorov sa nádory nechajú dorásť do požadovanej veľkosti, pričom sa vylúčia zvieratá, ktoré majú nádor nedostatočne vyvinutý. Vybrané zvieratá sa náhodne rozdelia do kontrolných skupín a skupín, ktoré budú ošetrené. Zvieratá nenesúce žiadny nádor môžu byť tiež podrobené rovnakým ošetreniam, aké podstúpia zvieratá nesúce nádor, aby bolo možné rozlíšiť toxický účinok testovaných kombinácií od ich špecifického účinku na nádor. Chemoterapia všeobecne začína 3 až 22 dní po naočkovaní nádorov, a to v závislosti od typu nádoru, pričom sa zvieratá pozorujú každý deň. Jednotlivé skupiny zvierat sa vážia 3- alebo 4-krát týždenne až do okamihu, keď je dosiahnutá maximálna strata hmotnosti a potom sa skupiny vážia aspoň raz týždenne až do ukončenia experimentu.

Nádory sa merajú 2- alebo 3-krát týždenne až do času, keď nádor dosiahne hmotnosť asi 2 g alebo až do okamihu, keď zviera uhynie v prípade, ak k tomu dôjde ešte skôr, ako jeho nádor dosiahne hmotnosť 2 g. Po usmrtení sa zvieratá podrobia pitve.

Protinádorová účinnosť sa stanoví podľa rôznych parametrov uvedených v tabuľkách I a II.

Pri štúdii vplyvu kombinácií na leukémie sa zvieratám naočkuje určitý počet buniek a protinádorová účinnosť sa stanoví predĺžením času prežitia ošetrených myší oproti kontrolným myšiam. Produkt je považovaný za účinný v prípade, ak predĺženie času prežitia je väčšie ako 27 %, pričom produkt je považovaný za veľmi účinný v prípade, ak predĺženie času prežitia je väčšie ako 75 % v prípade leukémií P388.

V nasledujúcich príkladoch sa myšiam naočkoval adenokarcinóm prsníka MA 13/C a myši sa ošetrili kombináciami Taxotere® a flavopiridolu pri rôznych schémach podania a rôznych spôsoboch podania. Tak Taxol, ako aj Taxoter a rovnako tak flavopiridol môžu byť podané orálne a tiež intravenózne. Niektoré z týchto schém vykazujú jasnú terapeutickú synergiu.

Ďalšie predmety a výhody vynálezu sú jednak uvedené v nasledujúcom opise a jednak sú zrejmé z tohto opisu alebo môžu byť odvodené z praktického uskutočnenia vynálezu. Tieto predmety a výhody vynálezu sú realizované a dosiahnuté prostredníctvom prvkov a ich kombinácií obzvlášť definovaných v pripojených nárokoch a príkladoch. Je samozrejmé, že uvedené príklady majú len ilustračný charakter a nijako neobmedzujú vlastný rozsah vynálezu, ktorý je jednoznačne definovaný formuláciou patentových nárokov a obsahom opisnej časti.

Príklady uskutočnenia vynálezu

Príklad 1

S cieľom stanoviť účinnosť každej zložky kombinácie, sú tak Taxotere®, ako aj flavopiridol podávané samostatne myšiam s MA 13/C. Taxotere® sa podával intravenózne v dňoch 15 a 21; dávka podaná každý z uvedených dní predstavovala 30 mg/kg, čo predstavuje celkovú dávku 60 mg/kg. Pri separátnom použití sa dosiahla hodnota log₁₀ bunková smrť 4,7 a kompletná reakcia u všetkých piatich takto ošetrených myší. Samostatný flavopiridol sa podal v dňoch 15 a 21; dávka podaná každý z uvedených dní predstavovala 6 mg/kg, čo predstavuje celkovú dávku 12 mg/kg. Nedosiahla sa kompletná reakcia u všetkých piatich testovaných myší.

Uvedené zlúčeniny sa potom skombinovali dvoma spôsobmi a testovali v prerušovanom režime. V rámci prvej kombinácie sa flavopiridol podával ako prvý v dňoch 15 a 20 (celková dávka 9 mg/kg) a potom sa podal Taxotee® vždy v nasledujúcich dňoch 16 a 21 (celková dávka 45 mg/kg). Pri podaní týmto spôsobom sa dosiahla hodnota logio bunková smrť 5,5 a kompletná reakcia u 5 z 5 ošetrených myší. Pri tomto prerušovanom režime je hodnota logm bunková smrť lepšia ako pri Taxotere® podanom samostatne a ešte stále vedie k 5 z 5 kompletných reakcií napriek skutočnosti, že sa v tejto kombinácii podalo o 25 % menej Taxotere® a o 25 % menej flavopiridolu v porovnaní s kontrolou.

Keď sa poradie zložiek kombinácie obrátilo a Taxotere® sa podal ako prvý v dňoch 15 a 20 a v dňoch 16 a 21 sa podal flavopiridol v rovnakých množstvách, hodnota log₁₀ bunková smrť bola mierne nižšia ako pri Taxotere® samotnom, ale znova to bolo 5 z 5 kompletných reakcií. Tabuľka I ilustruje tieto výsledky a ukazuje, že kombinácia flavopiridolu a Taxotere® podaná v množstvách o 25 % nižších, má podobnú účinnosť ako samotný Taxotere®.

Tabuľka I

Kombinácia flavopiridol-Taxotere® u myší nesúcich MA 13/C;

odstup

IV-liečivo	Režim	HNTD(DT)	%bwl	Ick	Komentár
Docetaxel	Flavo
Taxoter Flavopiridol	15,21 15,21	30,0 (60,0)	6,0 (12,0)	8(27) 6(16)	4,7 0,4	5/5 CR HDE 0/5 CR
Kombinácia 24h odstup 1. Flavo Taxoter 1. Taxoter	15.20 16.21	22,5 (45,0) 22,5 (45,0)	4,5 (9,0) 4,5 (9,0)	7(22) 7(25)	5,5 4,4	5/5 CR HDE 5/5 CR

Td = 2,2 dňa; čas potrebný pre kontrolnú skupinu na dosiahnutie 1 g = 20,3 dňa; stredná hmotnosť nádoru pri začatí terapie = 130-160 mg;

CR = kompletná reakcia; IV = intravenózne; bwl = strata telesnej hmotnosti (v najhlbšom bode); (DT) = celková dávka;

HNTD = najvyššia netoxická dávka;

Ick = logio bunková smrť.

Príklad 2

Počet dní, pri ktorých sa podáva flavopiridol sa zvýšil a zistilo sa, že keď sa myši nesúce MA 13/C vystavia rovnakými dávkami flavopiridolu podávanými v priebehu 8 dní v 10 dennom cykle, zatiaľ čo Taxotere® je podaný prvý a posledný deň desaťdňového cyklu, je tam jednoznačná synergia.

Tabuľka 2 uvádza najvyššiu netoxickú dávku každej samotnej zložky: 96,8 mg/kg v prípade Taxotere® a 23,2 mg/kg v prípade flavopiridolu. V prípade, ak sa uvedené zložky podajú v kombinácii, pričom Taxotere® je podaný v dňoch 14 a 23 a flavopiridol je podávaný v dňoch 14-17 a 20-23, sú tri kombinácie jednoznačne synergické a štvrtá má účinnosť rovnajúcu sa účinnosti samotného Taxotere®. Výsledkom všetkých štyroch kombinácií bolo 6 zo 6 kompletných reakcií; t. j. 100 % kompletné reakcie.

U myší nesúcich merateľné nádory na začiatku terapie (230 mg) sa uskutočnila trojbloková štúdia dávka-reakcia. Zvoleným modelom bol myší adenokarcinóm prsníka MA 13/C vybraný na základe jeho chemosenzitivity na docetaxel. Myši sa ošetrili produktom Flavo (a síce raz denne v dňoch 14 až 17 a v dňoch 20 až 23 po implantácii nádoru) alebo docetaxelom (t. j. v dňoch 14 a 23) alebo ich kombináciou. Výsledky: pri najvyššej netoxickej dávke (NHTD 2,9 mg/kg/dávka, celková dávka 23,2 mg/kg) bol Flavo podávaný ako jediné činidlo neúčinný pri -0,4 log celí kill net (log celí kill net = odklad rastu nádoru - čas liečenia/3,32 x čas na zdvojnásobenie nádoru) a nekompletnej reakcie. Pri HNDR samotného docetaxelu (48,1 mg/kg/injekcia, celková dávka 96,8 mg/kg) sa tento prejavil veľmi účinným (3 log celí kill net, CR 6/6). Vyložená terapeutická synergia sa dosiahla pri najvyššej netoxickej dávke kombinácie (Flavo pri 1,93 mg/kg/dávka a docetaxel pri 53,2 mg/kg/injekcia) so 7,6 log celí kill net a CR 6/6. Táto kombinácia bola dobre znášaná, pričom spôsobila 13 % úbytok telesnej hmotnosti v najhlbšom bode, ku ktorému došlo 6 dní po poslednom podaní. Synergia sa zachovala aj pri 2 dodatočných nižších dávkových hladinách v porovnaní s HNTD docetaxelu. Táto synergia sa taktiež pozorovala v prípade, keď sa Flavo podával orálne.

Tabuľka II

Kombinácia Flavopiridol- Taxotere®

Adenokarcinóm prsníka MA 13/C opakovaná expozícia

IV liečivo mg/kg/dávka (celková dávka)	%bwl	Ick Gross	CR	Komentár
Taxoter dl4,23	Flavopiridol dl4-17,20-23
78,1(156,2)	-	20(29)	-	-	2/6 DD
48,1(96,8)		8(28)	4,4	6,6	HNTD
-	4,8(38,4)	>20	-	-	4/5 DD
-	2,9(23,2)	3(18)	1,0	0/6	HNTD
-	1,75(14)	+10(24)	0,0	0/6

48,4(96,8)	-2,9(23,2)	15(27)	-	-	2/5 DD
53,2(106,4)	1,93(15,44)	13(29)	9,0	6/6	HNTD
43,6(87,2)	1,6(12,8)	9(29)	7,0	6/6
26,3(72,6)	1,31(10,48)	3(29)	5,1	6/6
31,5(63,0)	1,14(9,12)	6(28)	4,4	6/6
24,2(48,4)	0,88(7,04)	5(19)	2,0	2/6

Td = 2,2 dňa;

čas potrebný pre kontrolnú skupinu na dosiahnutie lg = 17,8 dňa; stredná hmotnosť nádoru pri začatí terapie = 210-260 mg;

CR = kompletná;

IV = intravenózne;

bwl = strata telesnej hmotnosti (v najhlbšom bode);

(DT) = celková dávka;

HNTD = najvyššia netoxická dávka;

Ick = log₁₀ bunková smrť.

Príklad 3

V rámci tohto príkladu sa Taxotere® injikoval intravenózne v dňoch 14 a 25 po implantácii nádoru. Flavo sa podal orálne raz denne odo dňa 14 do dňa 18 a potom odo dňa 21 do dňa 25.

Flavopiridol (p.o.)-docetaxel (i.v.) Prolongovaná expozícia MA 13/C

Liečivo	Režim	HNTD(DT)(mg/kg) TXT Flavo	% bwl	Ick	Komentár
TXT Flavo	14,25 14-18, 21-25	30 (60) 2,7 (27)	3,6(33) 11,6 (26)	0,9 0,1	HNTD HNTD
Kombinácia TXT Kombinácia Flavo	14,25 14-18 21-25	45 (90)	4,5 (45)	9,7(19)	5	HNTD

hmotnosť nádoru v dni 14: asi 320 mg;

(BCM-1252)-experiment no.

Rovnako ako v príklade 2 sa zistilo, že kombinácia docetaxelu a opakovane denne podávaného produktu Flavo je pri ekvitoxických dávkach účinnejšia ako uvedené jednotlivé zložky. Synergia je demonštrovaná log 4 zvýšenia bunkovej smrti.

PATENTOVÉ NÁROKY

Claims (5)

1. Farmaceutická kompozícia s terapeutickou synergiou pri liečení neoplastického ochorenia, vyznačujúca sa tým, že obsahuje docetaxel a flavopiridol.

2. Farmaceutická kompozícia podľa nároku 1,vyznačujúca sa tým, že zložky kompozície sa podávajú oddelene a v časovom odstupe.

3. Farmaceutická kompozícia podľa nároku 1,vyznačujúca sa tým, že neoplastickým ochorením je rakovina prsníka.

4. Farmaceutická kompozícia podľa nároku 1,vyznačujúca sa tým, že neoplastickým ochorením je rakovina pľúc.

5. Farmaceutická kompozícia podľa nároku 1,vyznačujúca sa tým, že flavopiridol sa podáva orálne.