SK282931B6 - Lyofilizovaná zmes obsahujúca trehalózu a lipidové lipozómy, v ktorých je inkorporovaná biologicky aktívna substancia, a spôsob jej prípravy - Google Patents
Lyofilizovaná zmes obsahujúca trehalózu a lipidové lipozómy, v ktorých je inkorporovaná biologicky aktívna substancia, a spôsob jej prípravy Download PDFInfo
- Publication number
- SK282931B6 SK282931B6 SK1110-99A SK111099A SK282931B6 SK 282931 B6 SK282931 B6 SK 282931B6 SK 111099 A SK111099 A SK 111099A SK 282931 B6 SK282931 B6 SK 282931B6
- Authority
- SK
- Slovakia
- Prior art keywords
- trehalose
- liposomes
- preparation
- temperature
- active substance
- Prior art date
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/127—Liposomes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
- A61K9/19—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Lyofilizovaná zmes obsahuje trehalózu a lipidové lipozómy, v ktorých je inkorporovaná vo vode vysoko nerozpustná biologicky aktívna substancia. Hmotnostný pomer trehalóza/lipid sa rovná alebo je menší ako 1,5 a všetka trehalóza je mimo už vytvorených lipozómov pridaná pred lyofilizáciou.ŕ
Description
Oblasť techniky
Vynález sa týka farmaceutického prípravku obsahujúceho lyofilizované lipozómy enkapsulujúce biologicky aktívnu substanciu, ktorá je vysoko nerozpustná vo vode, a spôsobu prípravy tohto prípravku.
Obzvlášť sa vynález týka farmaceutického prípravku obsahujúceho lyofilizované lipozómy enkapsulujúce biologicky aktívnu substanciu, ktorá je vysoko nerozpustná vo vode a stabilná v čase.
V predkladanom opise a v patentových nárokoch je termín „vysoko nerozpustný vo vode“ používaný na opis všetkých tých zlúčenín, ktorých rozpustnosť vo vode sa rovná alebo je menšia ako 0,01 % (hmotnosť/objem).
Doterajší stav techniky
Je známe, že používanie lipozómov v liečení sa sťažovalo ťažkosťami, ktoré sa vyskytujú pri získavaní farmaceutických prípravkov, ktoré by boli dostatočne stabilné tak počas lyofilizácie, ako aj v priebehu času. Uvedené ťažkosti spočívajú predovšetkým v príprave lipozómov, ktoré ani nepraskajú, ani sa nespájajú. Inými slovami, lipozómy by mali zostať celé a vzájomne oddelené.
Štrukturálna integrita lipozómov je tiež obzvlášť dôležitá v tom prípade, keď je aktívna substancia vysoko nerozpustná vo vode. Praskanie lipozómov počas lyofilizácie a/alebo počas konzervácie nie je v skutočnosti pre aktívne substancie rozpustné vo vode prekážkou na vstup do roztoku, keď je vodný lipozomálny roztok rekonštituovaný pred podávaním pacientovi pridaním fyziologického roztoku. Na druhej strane v prípade praskania lipozómov obsahujúcich aktívne substancie, ktoré sú vysoko nerozpustné vo vode, rekonštitúcia lyofilizátu vedie k vzniku roztoku obsahujúceho menej aktívne substancie, ako sa požaduje. O čo je väčšie množstvo prasknutých lipozómov, o to je väčší rozdiel medzi teoretickým a skutočným množstvom aktívnej substancie v roztoku.
Spôsob lyofilizácie lipozómov obsahujúcich vo vode rozpustné biologicky aktívne substancie je opísaný v USA-4 857 319. Tento dokument opisuje lyoftlizáciu lipozómov, najlepšie s priemernou veľkosťou okolo 50 až 100 nm s prídavkom disacharidu ako konzervačného činidla iba na vnútornej strane (spolu s enkapsulovaným obsahom lipozómu) alebo iba na vonkajšej strane, alebo na vnútornej i vonkajšej strane. Pomer hmotnosti disacharid/lipid sa pohybuje v rozmedzí 0,1 : 1 až 4 : 1. Výhodne disacharidom je trehalóza. Fáza mrazenia sa vykonáva pri teplote kvapalného dusíka (-195,8 °C).
V uvedenom patente boli stabilitné charakteristiky počas lyofilizácie vyhodnocované prostredníctvom merania zadržania aktívnej substancie enkapsulovanej v lipozómoch po rekonštitúcii lyofilizáciou cestou rehydratácie.
Tabuľka 2 uvedeného patentu ukazuje, že zadržanie je vysoké (99 až 100 %) iba v prípade, keď pomer trehalóza/lipid je väčší ako 1,76 a keď je trehalóza prítomná tak vnútri, ako aj mimo lipozómov. Keď sa uvedený pomer rovná 0,11 a 0,19, sa zadržanie rovná 22 %, resp. 49 %, i keď je trehalóza prítomná tak vnútri, ako aj mimo lipozómov. Oproti tomu, keď je trehalóza prítomná iba vonku, jc množstvo zadržanej aktívnej substancie drasticky znížené, dokonca i keď je použité veľmi veľké množstvo trehalózy. Pokiaľ je pomer trehalóza/lipid 3,9, potom je v skutočnosti množstvo zadržanej substancie iba 26 %.
Uvedené výsledky nie sú však reprodukovateľné, ak je biologicky aktívna substancia vysoko nerozpustná vo vode.
Keď je trehalóza pridaná počas prípravy lipozómov, aby bola enkapsulovaná vnútri lipidových vezikúl, v skutočnosti sa získa nehomogénna, neextrudovateľná suspenzia (prípravky na porovnanie 1 a 2).
Podstata vynálezu
V súčasnosti sa prekvapujúco zistilo, že lipozómy obsahujúce biologicky aktívnu substanciu, ktorá je vysoko nerozpustná vo vode, zostávajú počas lyofilizácie v podstate celé, pokiaľ sa k lipozómom až pred lyofilizáciou pridá trehalóza v malom množstve a uvedená lyofilizácia sa vykonáva tak, že fáza mrazenia prebieha pri teplotách v rozmedzí -5 až -70 °C.
Predmetom predloženého vynálezu je poskytnutie lyoftlizovanej zmesi obsahujúcej trehalózu a lipidové lipozómy, v ktorých je zahrnutá biologicky aktívna substancia, vyznačujúca sa tým, že biologicky aktívna substancia je vysoko nerozpustná vo vode, hmotnostný pomer trehalóza/lipid sa rovná alebo je menší ako 1,5 a všetka trehalóza bola pred lyofilizáciou pridaná mimo už vytvorených lipozómov.
Po rekonštitúcii rehydratáciou zadržiava uvedená zmes v roztoku viac ako 95 % biologicky aktívnej substancie, ktorá je vysoko nerozpustná vo vode (príklady 1,2 a 3).
Typickými príkladmi biologicky aktívnych substancií, ktoré sú vysoko nerozpustné vo vode, sú lonidamín, melatonín, cyklosporín A a bindarit.
Lipidy lipozómovej zmesi, ktorá má byť vystavená procesu lyofilizácie podľa tohto vynálezu, sú výhodne zvolené zo skupiny zahrnujúcej fosfoglyceridy, glyceridy, diglyceridy, triglyceridy, fosfolipidy, galaktozyllipidy a glukozyllipidy, cholesterol a jeho deriváty, sfmgolipidy a ich zmesi. Výhodnými lipidmi sú fosfolipidy. Výhodný hmotnostný pomer trehalóza/lipid je medzi 1 : 2 a 1 : 1.
Priemerná veľkosť lipozómov môže byť v rozmedzí 50 až 250 nm. Najvýhodnejšia je v rozmedzí 50 až 100 nm.
Druhým predmetom tohto vynálezu je spôsob lyofilizácie, ktorý sa vyznačuje tým, že :
1. od 0,2 až do 1,5 dielov hmotnostných trehalózy sa pridá na každý diel hmotnostný lipidov vodnej lipozomálnej zmesi, v ktorej priemerná veľkosť lipozómov je v rozmedzí 50 až 250 nm a uvedené lipozómy obsahujú biologicky aktívnu substanciu, ktorá je vysoko nerozpustná vo vode,
2. uvedená zmes sa ochladí prostredníctvom chladiacej dosky lyofilizéra na teplotu v rozmedzí -5 až -70 °C, rýchlosťou chladenia medzi 0,5 až 2 °C/min.,
3. len čo je dosiahnutá vopred určená teplota, na ktorú má byť zmes ochladená, uvedená zmes sa udržiava v čase medzi 2 až 5 hodinami pri tejto teplote,
4. zmes sa vystaví podtlaku v rozmedzí 50 až 8 Pa, pričom teplota chladiacej dosky sa nechá na hodnote stanovenej v bode 2 v čase trvajúcom medzi 2 až 5 hodinami,
5. teplota chladiacej dosky sa upraví na -15 °C a udržiava sa dovtedy, kým sa voda celkom neodstráni.
Výhodné pracovné podmienky sú nasledujúce:
Fáza 2
| teplota mrazenia: | -20 až -30 °C |
| rýchlosť chladenia: | 0,77 °C/min. |
| Fáza 3 | |
| čas: | 3 hodiny |
| Fáza 4 | |
| podtlak: | 6 Pa |
| Fáza 5 |
(lonidamín), 1 x 10_1 mg/ml (bindarit) a prakticky absolútne nerozpustné sú melatonín (G. S. Shida a kol., J. Pineal Res.,
16, 198-201, (1994)) a cyklosporín A („Insoluble in Water“, monografia o cyklosporíne A v Analytical Profiles of
Drug Substances, 16,163 (1987)).
Nasledujúce príklady slúžia na ilustráciu predloženého vynálezu bez toho, aby ho nejakým spôsobom obmedzova-
a) Ak je teplota mrazenia (fáza 2) pod -15 °C, zvýši sa teplota chladiacej dosky na-15 °C rýchlosťou 0,5 až 2 °C a lyofilizácia prebieha 20 hodín, potom sa teplota chladiacej dosky upraví na-10 °C a po hodine na + 5 °C a lyofilizácia prebieha 16 hodín.
b) Ak je teplota mrazenia (íaza 2) vyššia alebo sa rovná-15 °C, pokračuje lyofilizácia 20 hodín, po ktorých uplynutí sa teplota chladiacej dosky' upraví na +5 °C a lyofílizácia prebieha 16 hodín.
Obzvlášť výhodné zloženie lipozómu podľa tohto vynálezu obsahuje:
| Zložka | hmotnostné % |
| fosfatidylcholín | 94 |
| lyzofosfatidylcholín | 3 |
| N-acyl-etanolamín | 1 |
| fosfatidyletanolamín | 0,1 |
| triglyceridy | 1 |
| voľné mastné kyseliny | 0,75 |
| DL-alfa-tokoferol | 0,15 |
Typicky sa vodná farmaceutická lipozomálna zmes podľa tohto vynálezu pripravuje tak, že:
a) biologicky aktívna substancia, ktorá je vysoko nerozpustná vo vode, sa disperguje v lipidoch pri teplote v rozmedzí 20 až 30 °C,
b) uvedená disperzia sa suspenduje vo vodnej fáze,
c) uvedená suspenzia sa nechá stáť pri teplote miestnosti počas 0 až 48 hodín,
d) zahrieva sa na 30 až 75 °C počas 10 až 40 minút,
e) zmrazí sa na -150 až -200 °C,
f) fázy d) a e) sa opakujú prinajmenšom dvakrát a nie viac ako osemkrát,
g) filtruje sa na filtračnej membráne s pórmi s priemerom 500 až 1 000 nm,
h) podrobí sa extrúzii na membráne s pórmi s priemerom 50 až 400 nm a súčasne
i) sa odstraňuje aktívna substancia, ktorá nebola zachytená.
Trvanie fázy c) závisí od množstva aktívnej substancie, ktorá je vysoko nerozpustná vo vode, ktorá má byť v lipozómoch zachytená. Odborník v odbore nebude teda pri použití niekoľkých jednoduchých rutinných experimentov mať žiadne problémy pri určovaní vhodného času pre každý typ aktívnej substancie a lipozomálnej zmesi.
Najvhodnejšie zloženie vodnej fázy je 0,05 až 0,9 % (hmotnosť/objem) vodného roztoku chloridu sodného. Typicky je množstvo použitých lipidov 0,01 až 0,4 dielov hmotnostných na každý diel hmotnostný vodného roztoku. Množstvo aktívnej substancie všeobecne naopak je v rozmedzí 0,01 až 0,3 dielu hmotnostného na každý diel hmotnostný lipidov.
Extrúzia sa všeobecne vykonáva s použitím extrúzneho plynu, ktorým je buď stlačený vzduch alebo inertný plyn zo skupiny plynov zahrnujúcej dusík, hélium a argón. Výhodne inertným plynom je hélium. Tlak v extrúznej fáze je najvhodnejší v rozmedzí 500 až 5 500 kPa, najvhodnejšia teplota je v rozmedzí 20 až 75 °C, ešte vhodnejšie je rozmedzie teplôt 40 až 65 °C. Typickými príkladmi vhodných extrudérov sú extrudéry typu Lipex Biomembranes Thermobarrel Extruder alebo Emulsiflex CC Avestin s polykarbonátovou membránou Costar™ s pórmi s priemerom medzi 50 až 600 nm.
Podľa uvedeného postupu sa získajú vodné lipozomálne zmesi obsahujúce okolo 8 mg/ml melatonínu, 3,8 mg/ml lonidamínu, 1 mg/ml cyklosporínu A a 4 mg/ml bindaritu, pričom rozpustnosť týchto látok vo vode je 3 x 10'3 mg/ml
Príklady uskutočnenia vynálezu
Prípravok I
Podľa ďalej uvedeného opisu sa pripravila lipozómová zmes obsahujúca biologicky aktívnu substanciu, ktorá je vysoko nerozpustná vo vode.
100 mg melatonínu sa 10 minút disperguje v 1 g fosfolipidov pri teplote 30 °C pomocou homogenizátora typu Ultraturrax™. Hneď potom sa uvedená disperzia pomocou uvedeného homogenizátora suspenduje v 10 ml 0,9 % (hmotnosť/objem) vodného roztoku chloridu sodného a potom sa 20 minút zahrieva na vodnom kúpeli pri teplote 55 °C.
Takto získaná suspenzia sa vystaví nasledujúcemu cyklu ochladzovania a zahrievania:
- ochladzovanie v tekutom dusíku 1 minútu,
- zahrievanie na 55 °C, kým fosfolipidy nebudú celkom fluidizované.
Uvedený cyklus sa opakuje šesťkrát.
Suspenzia sa dvakrát filtruje filtrom s priemerom pórov s 0,6 pm s použitím prístroja Lipex Biomembranes.
Takto sa získala suspenzia „multilamelámych veľkých vezikúl“ (Multilamellar Large Vesicle (MLM)) a tá bola podrobená 6 kontinuálnym cyklom extrúzii s použitím 10 ml extrudéra typu Lipex Biomembranes Thermobarrel s polykarbonátovými filtrami Costar™ s priemerom pórov 0,1 pm pri teplote 55 °C s použitím hélia ako extrúzneho plynu pri tlaku v rozmedzí 1 000 až 4 800 kPa.
Prípravok II
Postupuje sa tak, ako je opísané pri prípravku I s tým rozdielom, že sa použijú 2 g fosfolipidov a 50 mg lonidaminu namiesto 1 g fosfolipidov a 100 mg melatonínu.
Prípravok III
Postupuje sa tak, ako je opísané pri prípravku 1 s tým rozdielom, že sa použijú 2 g fosfolipidov a 200 mg lonidamínu namiesto 1 g fosfolipidov a 100 mg melatonínu.
Prípravok IV
Postupuje sa tak, ak je opísané pri prípravku I s tým rozdielom, že extrúzia prebieha s použitím polykarbonátovej membrány s pórmi s priemerom 0,2 pm namiesto 0,1 pm.
Prípravok V mg cyklosporínu A sa 10 minút disperguje v 2 g fosfolipidov pri 30 °C pomocou homogenizátora typu Ultraturrax™. Hneď potom sa uvedená disperzia suspenduje v 0,9 % (hmotnosť/objem) vodnom roztoku chloridu sodného s použitím uvedeného homogenizátora a nechá sa stáť 24 hodín pri teplote miestnosti. Potom sa získaná suspenzia zahrieva 20 minút na vodnom kúpeli pri teplote 65 °C.
Takto získaná suspenzia sa vystaví nasledujúcemu cyklu chladenia a zahrievania:
- ochladzovanie v tekutom dusíku 1 minútu,
- zahrievanie na 65 °C, kým fosfolipidy nebudú celkom fluidizované.
Uvedený cyklus sa opakuje šesťkrát.
Suspenzia sa dvakrát filtruje filtrom s priemerom pórov 0,6 pm s použitím prístroja Lipex Biomembranes.
Takto sa získala suspenzia „multilamelámych veľkých vezikúl“ (Multilamellar Large Vesicle (MLV)) a tá bola podrobená 6 kontinuálnym cyklom extrúzii s použitím 10 ml extrudéra typu Lipex Biomembranes Thermobarrel s polykarbonátovými filtrami Costar™ s priemerom pórov 0,1 m pri teplote 65 °C s použitím hélia ako extrúzneho plynu pri tlaku v rozmedzí 1 000 až 4 800 kPa.
Prípravok VI
Postupuje sa tak, ako je opísané pri prípravku I s tým rozdielom, že sa použijú 2 g fosfolipidov a 50 mg bindaritu namiesto 1 g fosfolipidov a 100 mg melatonínu.
Prípravok na porovnanie 1
Prípravok 1A
100 mg melatonínu a 1 g trehalózy sa 10 minút disperguje v 1 g fosfolipidov pri teplote 30 °C pomocou homogenizátora typu Ultraturrax™. Hneď potom sa uvedená disperzia pomocou uvedeného homogenizátora suspenduje v 10 ml 0,9 % (hmotnosť/objem) vodného roztoku chloridu sodného a potom sa 20 minút zahrieva na vodnom kúpeli pri teplote 55 °C.
Takto získaná suspenzia sa vystaví nasledujúcemu cyklu ochladzovania a zahrievania:
- ochladzovanie v tekutom dusíku 1 minútu,
- zahrievanie na 55 °C, kým fosfolipidy nebudú celkom fluidizované.
Uvedený cyklus sa opakuje šesťkrát.
Suspenzia sa dvakrát filtruje filtrom s priemerom pórov 0,6 pm s použitím prístroja Lipex Biomembranes.
Takto sa získala veľmi hustá hmota. Pokus o jej extrúziu s použitím 10 ml extrudéra typu Lipex Biomembranes Thermobarrel s polykarbonátovými filtrami Costar™ s priemerom pórov 0,1 m pri teplote 55 °C s použitím hélia ako extrúzneho plynu pri tlaku v rozmedzí 1 000 až 4 800 kPa bol neúspešný.
Prípravok na porovnanie 2
Prípravok 2A
Postupuje sa tak, ako bolo opísané pri prípravku na porovnanie 1A s tým rozdielom, že namiesto 1 g fosfolipidov sa použili 2 g.
V tomto prípade sa rovnako získala veľmi hustá, neextrudovateľná hmota.
Prípravok 2B
Postupuje sa tak, ako bolo opísané pri prípravku na porovnanie 1B s tou výnimkou, že namiesto 1 g fosfolipidov sa použili 2 g.
V tomto prípade sa rovnako získala dokonale extrudovateľná MVL suspenzia.
Príklad 1
Prípravok II sa rozdelí na alikvotné časti s objemom 1 ml a ku každej z nich sa pridá trehalóza podľa hmotnostného pomeru trehalóza/lipid uvedeného v tabuľke 1/1.
Lyofilizácia sa vykonáva na doskovom lyofilizátore nasledujúcim spôsobom:
1. chladí sa na-25 °C rýchlosťou 0,77 °C/min,
2. uvedená teplota (-25 °C) sa udržiava 3 hodiny,
3. vystaví sa podtlaku (6 Pa) a udržiava sa 2 hodiny na uvedenej teplote (-25 °C),
4. 20 hodín sa zahrieva na -15 °C za podtlaku 6 Pa,
5. 2 hodiny sa zahrieva na -10 °C za podtlaku 6 Pa,
6. 20 hodín sa zahrieva na +5 °C za podtlaku 6 Pa,
7. skončí sa podtlak a
8. vpustí sa vzduch.
Lyofílizát (1 ml) sa rehydratuje 1 ml destilovanej vody a 30 minút sa udržiava pri teplote miestnosti, aby sa umožnila účinná rekonštrukcia lipozómov.
0,5 ml uvedeného roztoku sa ďalej nariedi 10 ml fyziologického roztoku, aby sa mohla pomocou prístroja NICOMP 370 zmerať priemerná veľkosť lipozómov.
Tabuľka 1/1 ukazuje získané výsledky:
Tabuľka 1/1
Priemerná veľkosť lipozómov pred lyofilizáciou a po lyofilizácii
| Šarža | Trehalóza/lipidy (hmotnostne) | Pred | Po |
| LM/302 | 0 | 102 | 911,7 |
| 1:2 | 102 | 115,9 | |
| 1 : 1 | 102 | 109,7 | |
| 2: 1 | 102 | 167,9 | |
| LM/303 | 0 | 99,2 | 911,7 |
| 1:2 | 99,2 | 98,7 | |
| 1 : 1 | 99,2 | 109,8 | |
| 2 : 1 | 99,2 | 291,3 | |
| LM/304 | 0 | 98,6 | 911,8 |
| 1:2 | 98,6 | 94,9 | |
| 1 : 1 | 98,6 | 105,8 | |
| 2: 1 | 98,6 | 794,0 |
V tabuľke 1/1 môžeme vidieť, že absencia trehalózy vedie k istému stupňu fúzie lipozómov, ktorú možno doložiť vzostupom ich priemernej veľkosti. Vzostup množstva trehalózy (trehalóza/lipid 2:1) prekvapujúco tiež spôsobuje istý stupeň fúzie s následným vzostupom priemernej veľkosti.
Podobné výsledky sa rovnako získali s prípravkom IV.
Priemerná veľkosť lipozómov a množstvo lonidamínu boli stanovené z istého počtu vzoriek, čerstvo pripravených tak, ako bolo opísané. Vzorky boli následne umiestnené do chladničky pri 5 °C a odoberané v daných intervaloch, rehydratované, aby sa stanovilo množstvo aktívnej substancie a priemerná veľkosť lipozómov. Takto získané výsledky ukazuje tabuľka 1/2.
Tabuľka 1/2
Hmotnostný pomer trehalóza/lipid 1 : 2
| Šarža | Čas (mesiace) | HPLC množstvo (mg/ml) | Priemerná veľkosť (nm) |
| LM/328 | U | 3,3 | 107 |
| 1 | 3,2 | 110 | |
| 3 | 3,2 | 114 | |
| 6 | 3,1 | 127,2 | |
| LM/329 | to | 3,2 | 103,3 |
| 1 | 3,2 | 101 | |
| 3 | 3,2 | 110,5 | |
| 6 | 3,1 | 115 | |
| LM/330 | to | 3,3 | 99,2 |
| 1 | 3,4 | 99,5 | |
| 3 | 3,2 | 100,5 | |
| 6 | 3,1 | 113,6 |
Príklad 2
Prípravok II sa lyofilizoval tak, ako bolo opísané v príklade 1 a priemerná veľkosť lipozómov pred lyofílizáciou a po lyofilizácii (tabuľka 2/1), rovnako ako priemerná veľkosť lipozómov a množstvo melatonínu v čerstvých prípravkoch a v tých, ktoré sa udržiavali pri 5 °C, sa stanoví tak, ako ie opísané v prv uvedenom príklade (tabuľka 2/2). Tabuľka 2/1
Priemerná veľkosť lipozómov pred lyofílizáciou a po lyofilizácii
| Šarža | Trehalóza/lipidy (hmotnostne) | Pred | Po |
| LM/336 | 0 | 92 | 16 953 |
| 1:2 | 92 | 6 875 | |
| 1 : 1 | 92 | 96,5 | |
| 2: 1 | 92 | 109,7 | |
| LM/337 | 1 :2 | 92 | 146,3 |
| 1 : 1 | 92 | 98,8 | |
| 2:1 | 92 | 8 319,8 | |
| LM/338 | 1 :2 | 92 | 179,7 |
| 1 : 1 | 92 | 225,7 | |
| 2:1 | 92 | 2 984 |
Podobné výsledky sa tiež dosiahli s prípravkom 1.
Tabuľka 2/2
Hmotnostný pomer trehalóza/lipid 1 : 1
| Šarža | Čas (mesiace) | HPLC množstvo (mg/ml) | Priemerná veľkosť (nm) |
| LM/359 | U | 6,0 | 104,0 |
| 1 | 6,0 | 103,2 | |
| 3 | 5,8 | 109,5 | |
| LM/360 | to | 6,5 | 107,2 |
| 1 | 6,5 | 106,3 | |
| 3 | 6,7 | 113,6 | |
| LM/361 | to | 6,2 | 98,4 |
| 1 | 6,3 | 99,0 | |
| 3 | 6,0 | 100,5 |
Príklad 3
Prípravok IV sa lyofilizuje tak, ako je opísaný v príklade 1 a priemerná veľkosť lipozómov pred lyofílizáciou a po lyofilizácii (tabuľka 3/1), rovnako ako priemerná veľkosť lipozómov a množstvo bindaritu v čerstvých prípravkoch a v tých, ktoré sa udržiavali pri 5 °C, sa stanoví tak, ako je opísané v prv uvedenom príklade (tabuľka 3/2).
Tabuľka 3/1
Priemerná veľkosť lipozómov pred lyofílizáciou a po lyofilizácii
| 1 : 1 | 102,7 | 112,2 | |
| 2:1 | 102,7 | 4 722,0 |
Tabuľka 3/2
Hmotnostný pomer trehalóza/lipid 1 : 1
| Šarža | Čas (mesiace) | HPLC množstvo (mg/ml) | Priemerná veľkosť (nm) |
| LM/356 | to | 3,2 | 135,0 |
| 1 | 3,1 | 128,0 | |
| 3 | 3,2 | 131,3 | |
| LM/357 | to | 3,1 | 122,0 |
| 1 | 3,1 | 121,0 | |
| 3 | 3,2 | 126,2 | |
| LM/358 | to | 3,1 | 126,0 |
| 1 | 3,1 | 122,8 | |
| 3 | 2,9 | 121,8 |
Príklady na porovnanie 1
Prípravok II sa rozdelí na alikvotné časti s objemom 1 ml a ku každej z nich sa pridá trehalóza podľa hmotnostného pomeru trehalóza/lipid uvedeného v porovnávacej tabuľke. 1.
Prípravok sa potom zmrazí na teplotu kvapalného dusíka (-195,8 °C) a 20 hodín lyofilizuje, pričom teplota nie je zvonka ovládaná.
Lyofilizát (1 ml) sa rehydratuje 1 ml destilovanej vody a 2 hodiny sa nechá pri teplote miestnosti.
0,5 ml uvedeného produktu sa ďalej nariedi 10 ml fyziologického roztoku, aby sa pomocou prístroja NICOMP 370 mohla zmerať priemerná veľkosť lipozomóv.
Získané výsledky sú ilustrované v porovnávacej tabuľke 1 uvedenej ďalej.
Porovnávacia tabuľka 1
Priemerná veľkosť lipozómov pred lyofílizáciou a po lyofilizácii
| Šarža | Trehalóza/lipidy (hmotnostne) | Pred | Po |
| LM/302 | 0 | 102 | 911,8 |
| 1:2 | 102 | 254,8 | |
| 1 : 1 | 102 | 219,3 | |
| 2: 1 | 102 | 773,7 | |
| LM/303 | 0 | 99,2 | 911,8 |
| 1 :2 | 99,2 | 349,9 | |
| 1 : 1 | 99,2 | 180,4 | |
| 2 : 1 | 99,2 | 717,2 | |
| LM/304 | 0 | 98,6 | 911,8 |
| 1 :2 | 98,6 | 722,5 | |
| 1 : 1 | 98,6 | 161,1 | |
| 2:1 | 98,6 | 150,0 |
| Šarža | Trehalóza/lipidy (hmotnostne) | Pred | Po |
| LM/342 | 0 | 102,7 | 7 524,1 |
| 1:2 | 102,7 | 928 | |
| 1 : 1 | 102,7 | 109 | |
| 2 : 1 | 102,7 | 140 | |
| LM/343 | 1 : 2 | 102,7 | 546,6 |
| 1 : 1 | 102,7 | 112,3 | |
| 2 : 1 | 102,7 | 1 559,2 | |
| LM/344 | 1 :2 | 102,7 | 194,9 |
V porovnávacej tabuľke 1 možno vidieť, že pokiaľ sa lyoftlizácia vykonáva pri teplote kvapalného dusíka, buď za neprítomnosti trehalózy alebo za jej prítomnosti v pomeroch uvedených v tabuľke hore, dochádza k určitému stupňu fúzie lipozómov, čo je doložené vzrastom ich priemernej veľkosti. Uvedené údaje navyše ukazujú, že pokiaľ sa lyofilizácia vykonáva pri teplote kvapalného dusíka, potom samotný priebeh lyofilizácie (pre prípravky toho istého zloženia) nie vždy vedie k reprodukovateľné rovnakým výsledkom.
Claims (12)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Lyofilizovaná zmes obsahujúca trehalózu a lipidové lipozómy, v ktorých je inkorporovaná biologicky aktívna substancia, vyznačujúca sa tým, že biologicky aktívna substancia má rozpustnosť vo vode rovnajúcu sa alebo menšiu ako 0,01 % (hmotnosť/objem), hmotnostný pomer trehalóza/lipid sa rovná alebo je menší ako 1,5 a všetka trehalóza bola pridaná mimo už vytvorených lipozómov pred lyofilizáciou.
- 2. Lyofilizovaná zmes podľa nároku 1, vyznačujúca sa tým, že biologicky aktívna substancia, ktorá má rozpustnosť vo vode rovnajúcu sa alebo menšiu ako 0,01 % (hmotnosť/objem), je zvolená zo skupiny zahrnujúcej lonidamín, melatonín, cyklosporín A a bindarit.
- 3. Lyofilizovaná zmes podľa nároku 1 alebo 2, v y značujúca sa tým, že lipidy sú zvolené zo súboru zahrnujúceho fosťoglyceridy, glyceridy, diglyceridy, triglyceridy, fosfolipidy, galaktozyllipidy a glukozillipidy, cholesterol a jeho deriváty, sfingolipidy a ich zmesi.
- 4. Lyofilizovaná zmes podľa nároku 3, vyznačujúca sa tým, že lipidy sú fosfolipidy.
- 5. Lyofilizovaná zmes podľa niektorého z nárokov 1 až4, vyznačujúca sa tým, že hmotnostný pomer trehalóza/lipid je v rozmedzí od 1 : 2 do 1:1.
- 6. Lyofilizovaná zmes podľa niektorého z nárokov 1 až5, vyznačujúca sa tým, že priemerná veľkosť lipozómov je 50 až 250 nm.
- 7. Lyofilizovaná zmes podľa nároku 6, vyznačujúca sa tým, že priemerná veľkosť lipozómov je 50 až 100 nm.
- 8. Spôsob prípravy lyofilizovanej zmesi obsahujúcej trehalózu a lipidové lipozómy, do ktorých bola inkorporovaná biologicky aktívna substancia podľa nároku 1, vyznačujúci sa tým, že:a) od 0,2 až do 1,5 dielov hmotnostných trehalózy sa pridá na každý diel hmotnostný lipidov vodného lipozomálneho prípravku, v ktorom priemerná veľkosť lipozómov je medzi 50 až 250 nm, a uvedené lipozómy obsahujú biologicky aktívnu substanciu, ktorá má rozpustnosť vo vode rovnajúcu sa alebo menšiu ako 0,01 % (hmotnosť/objem),b) uvedený prípravok sa ochladí prostredníctvom chladiacej dosky lyofilizéra na teplotu v rozmedzí -5 až -70 °C rýchlosťou chladenia medzi 0,5 až 2 °C/min.,c) len čo je dosiahnutá vopred určená teplota, pri ktorej má byť prípravok ochladený, uvedená zmes sa udržiava v čase medzi 2 až 5 hodinami pri tejto teplote,d) prípravok sa vystaví podtlaku v rozmedzí 50 až 8 Pa, pričom teplota chladiacej dosky sa nechá na hodnote stanovenej v bode b) v čase trvajúcom medzi 2 až 5 hodinami,e) teplota chladiacej dosky sa upraví na - 15 °C a udržiava sa dovtedy, kým sa voda celkom neodstráni.
- 9. Spôsob podľa nároku 8, vyznačujúci sa t ý m , že vo fáze b) je teplota chladenia medzi -20 až -30 °C.
- 10. Spôsob podľa nároku 8 alebo 9, vyznačujúci sa tým, že vo fáze b) je rýchlosť chladenia 0,77 °C/min.
- 11. Spôsob podľa niektorého z nárokov 8 až 10, vyznačujúci sa tým, že čas vo fáze c) je 3 hodiny.
- 12. Spôsob podľa niektorého z nárokov 8 až 11, vyznačujúci sa tým, že podtlak je 6 Pa.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IT97MI000362A IT1289938B1 (it) | 1997-02-20 | 1997-02-20 | Preparazione farmaceutica comprendente liposomi liofilizzati in cui e' incapsulato un principio attivo altamente insolubile in acqua e |
| PCT/EP1998/000817 WO1998036736A1 (en) | 1997-02-20 | 1998-02-12 | Pharmaceutical preparation comprising lyophilized liposomes encapsulating an active principle which is highly insoluble in water, and the process for preparing the said preparation |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SK111099A3 SK111099A3 (en) | 2000-05-16 |
| SK282931B6 true SK282931B6 (sk) | 2003-01-09 |
Family
ID=11376097
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SK1110-99A SK282931B6 (sk) | 1997-02-20 | 1998-02-12 | Lyofilizovaná zmes obsahujúca trehalózu a lipidové lipozómy, v ktorých je inkorporovaná biologicky aktívna substancia, a spôsob jej prípravy |
Country Status (26)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6319517B1 (sk) |
| EP (1) | EP0981332B1 (sk) |
| JP (1) | JP4290767B2 (sk) |
| KR (1) | KR100496802B1 (sk) |
| CN (1) | CN1089581C (sk) |
| AR (1) | AR011681A1 (sk) |
| AT (1) | ATE285754T1 (sk) |
| AU (1) | AU744115B2 (sk) |
| BG (1) | BG64580B1 (sk) |
| CA (1) | CA2288958C (sk) |
| CZ (1) | CZ295998B6 (sk) |
| DE (1) | DE69828394T2 (sk) |
| EA (1) | EA001637B1 (sk) |
| ES (1) | ES2235320T3 (sk) |
| GE (1) | GEP20022734B (sk) |
| HK (1) | HK1026148A1 (sk) |
| HU (1) | HU225593B1 (sk) |
| IL (1) | IL131327A (sk) |
| IT (1) | IT1289938B1 (sk) |
| PL (1) | PL190628B1 (sk) |
| PT (1) | PT981332E (sk) |
| SK (1) | SK282931B6 (sk) |
| TR (1) | TR199902025T2 (sk) |
| UA (1) | UA70296A (sk) |
| WO (1) | WO1998036736A1 (sk) |
| ZA (1) | ZA981352B (sk) |
Families Citing this family (21)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ATE273516T1 (de) * | 1999-06-23 | 2004-08-15 | Cornell Res Foundation Inc | Entwässerung/rehydratisierung von markierten liposomen auf einer prüfeinrichtung |
| US6576460B1 (en) | 1999-10-28 | 2003-06-10 | Cornell Research Foundation, Inc. | Filtration-detection device and method of use |
| KR20050098249A (ko) * | 2003-01-17 | 2005-10-11 | 쓰레솔드 파마슈티컬스, 인코포레이티드 | 양성 전립선 비대증의 치료방법 |
| JP2008535921A (ja) | 2005-04-12 | 2008-09-04 | エラン・ファルマ・インターナショナル・リミテッド | シクロスポリンを含むナノ粒子および放出調節された組成物 |
| US20080131496A1 (en) * | 2006-09-22 | 2008-06-05 | Guilford F Timothy | Topical application of melatonin directly or in liposomes for the amelioration of itching and histamine and non histamine related inflammatory skin changes |
| CN101049504B (zh) * | 2007-04-05 | 2010-05-19 | 广州立恩生物科技有限公司 | 一种脂质体药物载体及其制备方法 |
| US9446147B2 (en) | 2011-02-24 | 2016-09-20 | The Ohio State University | Membrane stabilizing compositions and methods |
| KR102284689B1 (ko) | 2011-10-21 | 2021-08-02 | 셀라토 파마슈티칼즈, 인코포레이티드 | 동결건조된 리포좀 |
| US8999292B2 (en) | 2012-05-01 | 2015-04-07 | Translatum Medicus Inc. | Methods for treating and diagnosing blinding eye diseases |
| WO2014035206A2 (ko) * | 2012-08-31 | 2014-03-06 | 중앙대학교 산학협력단 | 색전용 마이크로스피어의 제조방법 및 약물 함유 나노수송체가 결합된 마이크로스피어의 제조방법 |
| US10722465B1 (en) | 2017-12-08 | 2020-07-28 | Quicksilber Scientific, Inc. | Transparent colloidal vitamin supplement |
| US11344497B1 (en) | 2017-12-08 | 2022-05-31 | Quicksilver Scientific, Inc. | Mitochondrial performance enhancement nanoemulsion |
| KR102649069B1 (ko) | 2018-05-31 | 2024-03-19 | 주식회사 엑소코바이오 | 줄기세포 유래의 엑소좀을 유효성분으로 포함하는 안면 홍조 개선용 조성물 |
| CA3104443A1 (en) * | 2018-06-27 | 2020-01-02 | Breath Therapeutics Gmbh | Inhalable compositions comprising macrocyclic immunosuppressants |
| AU2019295027A1 (en) * | 2018-06-27 | 2020-12-24 | Breath Therapeutics Gmbh | Pharmaceutical compositions in lyophilized form |
| WO2020027466A1 (ko) | 2018-07-28 | 2020-02-06 | 주식회사 엑소코바이오 | 엑소좀의 동결건조 방법 |
| KR102163806B1 (ko) | 2018-07-30 | 2020-10-07 | 주식회사 엑소코바이오 | 줄기세포 유래의 엑소좀을 유효성분으로 포함하는 피지분비 감소용 조성물 |
| EA202092892A1 (ru) | 2018-12-04 | 2021-05-27 | Брес Терапьютикс Гмбх | Ингаляционные композиции, содержащие макроциклические иммуносупрессанты |
| US11291702B1 (en) | 2019-04-15 | 2022-04-05 | Quicksilver Scientific, Inc. | Liver activation nanoemulsion, solid binding composition, and toxin excretion enhancement method |
| EP3990433A4 (en) | 2019-06-25 | 2023-07-26 | Translatum Medicus Inc. | METHODS FOR THE MANUFACTURE OF 2-((1-BENZYL-1H-INDAZOL-3-YL)METHOXY)-2-METHYLPROPANOIC ACID AND ITS DERIVATIVES |
| CN111358955B (zh) * | 2020-04-01 | 2023-05-02 | 重庆理工大学 | 一种用于治疗脂质代谢疾病的炎症靶向的宾达利纳米粒、制备方法及其应用 |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA1173360A (en) * | 1979-06-22 | 1984-08-28 | Jurg Schrank | Pharmaceutical preparations |
| FR2542749B1 (fr) * | 1983-03-18 | 1985-07-12 | Beghin Say Sa | Copolymere allyloligosaccharide-acrylique salifie, procede de preparation du copolymere et application comme super-absorbant |
| US4857319A (en) * | 1985-01-11 | 1989-08-15 | The Regents Of The University Of California | Method for preserving liposomes |
| US4963362A (en) * | 1987-08-07 | 1990-10-16 | Regents Of The University Of Minnesota | Freeze-dried liposome mixture containing cyclosporin |
| US5683714A (en) * | 1991-04-19 | 1997-11-04 | Nexstar Pharmaceuticals, Inc. | Liposomal cyclosporin pharmaceutical formulation |
| US5817336A (en) * | 1993-04-02 | 1998-10-06 | Orion-Yhtyma Oy | Composition containing selegiline |
| GB9320668D0 (en) * | 1993-10-07 | 1993-11-24 | Secr Defence | Liposomes containing particulare materials |
| DK0678017T3 (da) * | 1993-11-05 | 1998-10-19 | Amgen Inc | Liposomfremstilling og materialeindkapslingsfremgangsmåde |
-
1997
- 1997-02-20 IT IT97MI000362A patent/IT1289938B1/it active IP Right Grant
-
1998
- 1998-02-12 EP EP98910659A patent/EP0981332B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-02-12 SK SK1110-99A patent/SK282931B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1998-02-12 UA UA99095150A patent/UA70296A/uk unknown
- 1998-02-12 JP JP53622898A patent/JP4290767B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1998-02-12 KR KR10-1999-7007538A patent/KR100496802B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1998-02-12 CN CN98802737A patent/CN1089581C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1998-02-12 DE DE69828394T patent/DE69828394T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1998-02-12 AU AU64969/98A patent/AU744115B2/en not_active Ceased
- 1998-02-12 ES ES98910659T patent/ES2235320T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1998-02-12 EA EA199900751A patent/EA001637B1/ru not_active IP Right Cessation
- 1998-02-12 CA CA002288958A patent/CA2288958C/en not_active Expired - Fee Related
- 1998-02-12 PL PL98335207A patent/PL190628B1/pl unknown
- 1998-02-12 WO PCT/EP1998/000817 patent/WO1998036736A1/en active IP Right Grant
- 1998-02-12 US US09/367,715 patent/US6319517B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-02-12 AT AT98910659T patent/ATE285754T1/de active
- 1998-02-12 PT PT98910659T patent/PT981332E/pt unknown
- 1998-02-12 TR TR1999/02025T patent/TR199902025T2/xx unknown
- 1998-02-12 CZ CZ19992925A patent/CZ295998B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1998-02-12 IL IL13132798A patent/IL131327A/en not_active IP Right Cessation
- 1998-02-12 HU HU0001464A patent/HU225593B1/hu not_active IP Right Cessation
- 1998-02-12 GE GEAP19984991A patent/GEP20022734B/en unknown
- 1998-02-18 ZA ZA981352A patent/ZA981352B/xx unknown
- 1998-02-20 AR ARP980100754A patent/AR011681A1/es active IP Right Grant
-
1999
- 1999-09-16 BG BG103738A patent/BG64580B1/bg unknown
-
2000
- 2000-09-01 HK HK00105485A patent/HK1026148A1/xx not_active IP Right Cessation
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| SK282931B6 (sk) | Lyofilizovaná zmes obsahujúca trehalózu a lipidové lipozómy, v ktorých je inkorporovaná biologicky aktívna substancia, a spôsob jej prípravy | |
| US4743449A (en) | Drug-containing lipid vesicle preparation and method for preparing them | |
| RU2216315C2 (ru) | Способ получения липосом | |
| EP0437479B1 (en) | Method of making liposomes with improved stability during drying | |
| US4927571A (en) | Preparation of injectable doxorubicin/liposome suspension | |
| US4857319A (en) | Method for preserving liposomes | |
| US5082664A (en) | Prostaglandin-lipid formulations | |
| US5662931A (en) | Process for preparing liposome composition | |
| EP0231261B1 (en) | Multilamellar liposomes having improved trapping efficiencies | |
| EP0303683B1 (en) | Amphotericin b/cholesterol sulfate composition and method | |
| US5032582A (en) | Method for treating fungal infections with amphotericin B/cholesterol sulfate composition | |
| US4976964A (en) | Medicament formulation containing dihydropyridines and a process for its preparation | |
| AU612631B2 (en) | Dehydrating vesicule preparations for long-term storage | |
| CA2285985C (en) | A method for preparing aqueous liposomal compositions comprising an active ingredient which is highly insoluble in water | |
| MXPA99007684A (en) | Pharmaceutical preparation comprising lyophilized liposomes encapsulating an active principle which is highly insoluble in water, and the process for preparing thesaid preparation | |
| WO1992002208A1 (en) | Stable doxorubicin/liposome composition | |
| EP0380334A2 (en) | Urokinase precursor-lipid composite |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of maintenance fees |
Effective date: 20170212 |