SI20585A - Gen PRV-1 in njegova uporaba - Google Patents
Gen PRV-1 in njegova uporaba Download PDFInfo
- Publication number
- SI20585A SI20585A SI9920078A SI9920078A SI20585A SI 20585 A SI20585 A SI 20585A SI 9920078 A SI9920078 A SI 9920078A SI 9920078 A SI9920078 A SI 9920078A SI 20585 A SI20585 A SI 20585A
- Authority
- SI
- Slovenia
- Prior art keywords
- sequence
- polypeptide
- prv
- amino acids
- polynucleotide
- Prior art date
Links
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title abstract description 42
- 101000980845 Homo sapiens CD177 antigen Proteins 0.000 claims abstract description 67
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 50
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims abstract description 49
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 49
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims abstract description 32
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims abstract description 30
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 19
- 102100024209 CD177 antigen Human genes 0.000 claims description 55
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 27
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 23
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims description 22
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims description 22
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims description 22
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 claims description 12
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 11
- 208000037244 polycythemia vera Diseases 0.000 claims description 10
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 claims description 9
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 8
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 claims description 7
- 206010033661 Pancytopenia Diseases 0.000 claims description 4
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 claims description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 4
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 claims description 4
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 claims description 3
- 230000003321 amplification Effects 0.000 claims description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 claims description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 claims 3
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 claims 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims 1
- 210000000777 hematopoietic system Anatomy 0.000 claims 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims 1
- 238000002731 protein assay Methods 0.000 claims 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 64
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 24
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 23
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 20
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 18
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 18
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 16
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 13
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 11
- 210000003013 erythroid precursor cell Anatomy 0.000 description 11
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 11
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 description 11
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 10
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 10
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 8
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 8
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 8
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 8
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 7
- 238000000636 Northern blotting Methods 0.000 description 6
- 240000006711 Pistacia vera Species 0.000 description 6
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 6
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 6
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 6
- 239000005090 green fluorescent protein Substances 0.000 description 6
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 5
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 5
- XKUKSGPZAADMRA-UHFFFAOYSA-N glycyl-glycyl-glycine Chemical compound NCC(=O)NCC(=O)NCC(O)=O XKUKSGPZAADMRA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 5
- 108010043121 Green Fluorescent Proteins Proteins 0.000 description 4
- 102000004144 Green Fluorescent Proteins Human genes 0.000 description 4
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 4
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 4
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 4
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 4
- LNAZSHAWQACDHT-XIYTZBAFSA-N (2r,3r,4s,5r,6s)-4,5-dimethoxy-2-(methoxymethyl)-3-[(2s,3r,4s,5r,6r)-3,4,5-trimethoxy-6-(methoxymethyl)oxan-2-yl]oxy-6-[(2r,3r,4s,5r,6r)-4,5,6-trimethoxy-2-(methoxymethyl)oxan-3-yl]oxyoxane Chemical compound CO[C@@H]1[C@@H](OC)[C@H](OC)[C@@H](COC)O[C@H]1O[C@H]1[C@H](OC)[C@@H](OC)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](OC)[C@H](OC)O[C@@H]2COC)OC)O[C@@H]1COC LNAZSHAWQACDHT-XIYTZBAFSA-N 0.000 description 3
- 108020005544 Antisense RNA Proteins 0.000 description 3
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 3
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 3
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 3
- 239000003184 complementary RNA Substances 0.000 description 3
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 3
- 230000000925 erythroid effect Effects 0.000 description 3
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 3
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 3
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 3
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 description 3
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 3
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 3
- 229960002900 methylcellulose Drugs 0.000 description 3
- 235000010981 methylcellulose Nutrition 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 3
- IVPNEDNYYYFAGI-GARJFASQSA-N Asp-Leu-Pro Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N IVPNEDNYYYFAGI-GARJFASQSA-N 0.000 description 2
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 2
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102000003951 Erythropoietin Human genes 0.000 description 2
- 108090000394 Erythropoietin Proteins 0.000 description 2
- 208000032027 Essential Thrombocythemia Diseases 0.000 description 2
- TVTZEOHWHUVYCG-KYNKHSRBSA-N Gly-Thr-Thr Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O TVTZEOHWHUVYCG-KYNKHSRBSA-N 0.000 description 2
- 208000014767 Myeloproliferative disease Diseases 0.000 description 2
- KZNQNBZMBZJQJO-UHFFFAOYSA-N N-glycyl-L-proline Natural products NCC(=O)N1CCCC1C(O)=O KZNQNBZMBZJQJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KDBHVPXBQADZKY-GUBZILKMSA-N Pro-Pro-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H]1NCCC1 KDBHVPXBQADZKY-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- 108010079005 RDV peptide Proteins 0.000 description 2
- 206010051379 Systemic Inflammatory Response Syndrome Diseases 0.000 description 2
- ZZDFLJFVSNQINX-HWHUXHBOSA-N Trp-Thr-Pro Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CNC3=CC=CC=C32)N)O ZZDFLJFVSNQINX-HWHUXHBOSA-N 0.000 description 2
- 208000017733 acquired polycythemia vera Diseases 0.000 description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 2
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 229940105423 erythropoietin Drugs 0.000 description 2
- 108010067216 glycyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 2
- 108010077515 glycylproline Proteins 0.000 description 2
- 108010064235 lysylglycine Proteins 0.000 description 2
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N potassium;[2-butyl-5-chloro-3-[[4-[2-(1,2,4-triaza-3-azanidacyclopenta-1,4-dien-5-yl)phenyl]phenyl]methyl]imidazol-4-yl]methanol Chemical compound [K+].CCCCC1=NC(Cl)=C(CO)N1CC1=CC=C(C=2C(=CC=CC=2)C2=N[N-]N=N2)C=C1 OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010093296 prolyl-prolyl-alanine Proteins 0.000 description 2
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 2
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 2
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 1
- JUEUYDRZJNQZGR-UHFFFAOYSA-N 2-[[2-[[2-[(2-amino-4-methylpentanoyl)amino]-4-methylpentanoyl]amino]acetyl]amino]-3-phenylpropanoic acid Chemical compound CC(C)CC(N)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NCC(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 JUEUYDRZJNQZGR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SVBXIUDNTRTKHE-CIUDSAMLSA-N Ala-Arg-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O SVBXIUDNTRTKHE-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- RUQBGIMJQUWXPP-CYDGBPFRSA-N Ala-Leu-Ala-Pro Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O RUQBGIMJQUWXPP-CYDGBPFRSA-N 0.000 description 1
- UWIQWPWWZUHBAO-ZLIFDBKOSA-N Ala-Leu-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)N)CC(C)C)C(O)=O)=CNC2=C1 UWIQWPWWZUHBAO-ZLIFDBKOSA-N 0.000 description 1
- OLVCTPPSXNRGKV-GUBZILKMSA-N Ala-Pro-Pro Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N1[C@H](C(O)=O)CCC1 OLVCTPPSXNRGKV-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- VXXHDZKEQNGXNU-QXEWZRGKSA-N Arg-Asp-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N VXXHDZKEQNGXNU-QXEWZRGKSA-N 0.000 description 1
- AQPVUEJJARLJHB-BQBZGAKWSA-N Arg-Gly-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N AQPVUEJJARLJHB-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- LVMUGODRNHFGRA-AVGNSLFASA-N Arg-Leu-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O LVMUGODRNHFGRA-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- MJINRRBEMOLJAK-DCAQKATOSA-N Arg-Lys-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N MJINRRBEMOLJAK-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- HLTLEIXYIJDFOY-ZLUOBGJFSA-N Asn-Cys-Asn Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O HLTLEIXYIJDFOY-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- RAQMSGVCGSJKCL-FOHZUACHSA-N Asn-Gly-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O RAQMSGVCGSJKCL-FOHZUACHSA-N 0.000 description 1
- SUEIIIFUBHDCCS-PBCZWWQYSA-N Asn-His-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O SUEIIIFUBHDCCS-PBCZWWQYSA-N 0.000 description 1
- NLRJGXZWTKXRHP-DCAQKATOSA-N Asn-Leu-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O NLRJGXZWTKXRHP-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- GLWFAWNYGWBMOC-SRVKXCTJSA-N Asn-Leu-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O GLWFAWNYGWBMOC-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- ZUFPUBYQYWCMDB-NUMRIWBASA-N Asn-Thr-Glu Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O ZUFPUBYQYWCMDB-NUMRIWBASA-N 0.000 description 1
- PGUYEUCYVNZGGV-QWRGUYRKSA-N Asp-Gly-Tyr Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 PGUYEUCYVNZGGV-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- AITKTFCQOBRJTG-CIUDSAMLSA-N Asp-Leu-Cys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N AITKTFCQOBRJTG-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- JSNWZMFSLIWAHS-HJGDQZAQSA-N Asp-Thr-Leu Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N)O JSNWZMFSLIWAHS-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 1
- LEYKQPDPZJIRTA-AQZXSJQPSA-N Asp-Trp-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O LEYKQPDPZJIRTA-AQZXSJQPSA-N 0.000 description 1
- XWKPSMRPIKKDDU-RCOVLWMOSA-N Asp-Val-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(O)=O XWKPSMRPIKKDDU-RCOVLWMOSA-N 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 1
- KIQKJXYVGSYDFS-ZLUOBGJFSA-N Cys-Asn-Asn Chemical compound SC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O KIQKJXYVGSYDFS-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- TULNGKSILXCZQT-IMJSIDKUSA-N Cys-Asp Chemical compound SC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O TULNGKSILXCZQT-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- XLLSMEFANRROJE-GUBZILKMSA-N Cys-Leu-Glu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N XLLSMEFANRROJE-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- HMWBPUDETPKSSS-DCAQKATOSA-N Cys-Pro-Lys Chemical compound C1C[C@H](N(C1)C(=O)[C@H](CS)N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O HMWBPUDETPKSSS-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- TXGDWPBLUFQODU-XGEHTFHBSA-N Cys-Pro-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O TXGDWPBLUFQODU-XGEHTFHBSA-N 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- PAQUJCSYVIBPLC-AVGNSLFASA-N Glu-Asp-Phe Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 PAQUJCSYVIBPLC-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- AUTNXSQEVVHSJK-YVNDNENWSA-N Glu-Glu-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O AUTNXSQEVVHSJK-YVNDNENWSA-N 0.000 description 1
- LRPXYSGPOBVBEH-IUCAKERBSA-N Glu-Gly-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O LRPXYSGPOBVBEH-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- ITBHUUMCJJQUSC-LAEOZQHASA-N Glu-Ile-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(O)=O ITBHUUMCJJQUSC-LAEOZQHASA-N 0.000 description 1
- SJJHXJDSNQJMMW-SRVKXCTJSA-N Glu-Lys-Arg Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O SJJHXJDSNQJMMW-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- TWYFJOHWGCCRIR-DCAQKATOSA-N Glu-Pro-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O TWYFJOHWGCCRIR-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- SWDNPSMMEWRNOH-HJGDQZAQSA-N Glu-Pro-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O SWDNPSMMEWRNOH-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 1
- YQAQQKPWFOBSMU-WDCWCFNPSA-N Glu-Thr-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O YQAQQKPWFOBSMU-WDCWCFNPSA-N 0.000 description 1
- JVWPPCWUDRJGAE-YUMQZZPRSA-N Gly-Asn-Leu Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O JVWPPCWUDRJGAE-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- IWAXHBCACVWNHT-BQBZGAKWSA-N Gly-Asp-Arg Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N IWAXHBCACVWNHT-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- IANBSEOVTQNGBZ-BQBZGAKWSA-N Gly-Cys-Met Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O IANBSEOVTQNGBZ-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- PEZZSFLFXXFUQD-XPUUQOCRSA-N Gly-Cys-Val Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O PEZZSFLFXXFUQD-XPUUQOCRSA-N 0.000 description 1
- CCQOOWAONKGYKQ-BYPYZUCNSA-N Gly-Gly-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)CNC(=O)CN CCQOOWAONKGYKQ-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- CCBIBMKQNXHNIN-ZETCQYMHSA-N Gly-Leu-Gly Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O CCBIBMKQNXHNIN-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- UHPAZODVFFYEEL-QWRGUYRKSA-N Gly-Leu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CN UHPAZODVFFYEEL-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- NSVOVKWEKGEOQB-LURJTMIESA-N Gly-Pro-Gly Chemical compound NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(O)=O NSVOVKWEKGEOQB-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- XHVONGZZVUUORG-WEDXCCLWSA-N Gly-Thr-Lys Chemical compound NCC(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN XHVONGZZVUUORG-WEDXCCLWSA-N 0.000 description 1
- BAYQNCWLXIDLHX-ONGXEEELSA-N Gly-Val-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CN BAYQNCWLXIDLHX-ONGXEEELSA-N 0.000 description 1
- 201000005569 Gout Diseases 0.000 description 1
- 206010018690 Granulocytosis Diseases 0.000 description 1
- 208000023661 Haematological disease Diseases 0.000 description 1
- 206010019233 Headaches Diseases 0.000 description 1
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 1
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 1
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- ZIMTWPHIKZEHSE-UWVGGRQHSA-N His-Arg-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(O)=O ZIMTWPHIKZEHSE-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- UCDWNBFOZCZSNV-AVGNSLFASA-N His-Arg-Met Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O UCDWNBFOZCZSNV-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- WOAMZMXCLBBQKW-KKUMJFAQSA-N His-Cys-Tyr Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC2=CN=CN2)N)O WOAMZMXCLBBQKW-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- AKEDPWJFQULLPE-IUCAKERBSA-N His-Glu-Gly Chemical compound N[C@@H](Cc1cnc[nH]1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O AKEDPWJFQULLPE-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- VLDVBZICYBVQHB-IUCAKERBSA-N His-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C([O-])=O)NC(=O)[C@@H]([NH3+])CC1=CN=CN1 VLDVBZICYBVQHB-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 1
- MQFGXJNSUJTXDT-QSFUFRPTSA-N Ile-Gly-Ile Chemical compound N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)O MQFGXJNSUJTXDT-QSFUFRPTSA-N 0.000 description 1
- CMNMPCTVCWWYHY-MXAVVETBSA-N Ile-His-Leu Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)O)N CMNMPCTVCWWYHY-MXAVVETBSA-N 0.000 description 1
- PMMMQRVUMVURGJ-XUXIUFHCSA-N Ile-Leu-Pro Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O PMMMQRVUMVURGJ-XUXIUFHCSA-N 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- SENJXOPIZNYLHU-UHFFFAOYSA-N L-leucyl-L-arginine Natural products CC(C)CC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CCCN=C(N)N SENJXOPIZNYLHU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- CNNQBZRGQATKNY-DCAQKATOSA-N Leu-Arg-Cys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N CNNQBZRGQATKNY-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- HYMLKESRWLZDBR-WEDXCCLWSA-N Leu-Gly-Thr Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O HYMLKESRWLZDBR-WEDXCCLWSA-N 0.000 description 1
- IAJFFZORSWOZPQ-SRVKXCTJSA-N Leu-Leu-Asn Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O IAJFFZORSWOZPQ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- IFMPDNRWZZEZSL-SRVKXCTJSA-N Leu-Leu-Cys Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O IFMPDNRWZZEZSL-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- FAELBUXXFQLUAX-AJNGGQMLSA-N Leu-Leu-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C FAELBUXXFQLUAX-AJNGGQMLSA-N 0.000 description 1
- KWLWZYMNUZJKMZ-IHRRRGAJSA-N Leu-Pro-Leu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O KWLWZYMNUZJKMZ-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- DPURXCQCHSQPAN-AVGNSLFASA-N Leu-Pro-Pro Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N1[C@H](C(O)=O)CCC1 DPURXCQCHSQPAN-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- LRKCBIUDWAXNEG-CSMHCCOUSA-N Leu-Thr Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O LRKCBIUDWAXNEG-CSMHCCOUSA-N 0.000 description 1
- LINKCQUOMUDLKN-KATARQTJSA-N Leu-Thr-Cys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N)O LINKCQUOMUDLKN-KATARQTJSA-N 0.000 description 1
- QUCDKEKDPYISNX-HJGDQZAQSA-N Lys-Asn-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O QUCDKEKDPYISNX-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 1
- DKTNGXVSCZULPO-YUMQZZPRSA-N Lys-Gly-Cys Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O DKTNGXVSCZULPO-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- CAVRAQIDHUPECU-UVOCVTCTSA-N Lys-Thr-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O CAVRAQIDHUPECU-UVOCVTCTSA-N 0.000 description 1
- GILLQRYAWOMHED-DCAQKATOSA-N Lys-Val-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN GILLQRYAWOMHED-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- CNUPMMXDISGXMU-CIUDSAMLSA-N Met-Cys-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O CNUPMMXDISGXMU-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- YORIKIDJCPKBON-YUMQZZPRSA-N Met-Glu-Gly Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O YORIKIDJCPKBON-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- OSZTUONKUMCWEP-XUXIUFHCSA-N Met-Leu-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC OSZTUONKUMCWEP-XUXIUFHCSA-N 0.000 description 1
- FXBKQTOGURNXSL-HJGDQZAQSA-N Met-Thr-Glu Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O FXBKQTOGURNXSL-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 1
- KZKVVWBOGDKHKE-QTKMDUPCSA-N Met-Thr-His Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CNC=N1 KZKVVWBOGDKHKE-QTKMDUPCSA-N 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- SITLTJHOQZFJGG-UHFFFAOYSA-N N-L-alpha-glutamyl-L-valine Natural products CC(C)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(O)=O SITLTJHOQZFJGG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BQVUABVGYYSDCJ-UHFFFAOYSA-N Nalpha-L-Leucyl-L-tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(NC(=O)C(N)CC(C)C)C(O)=O)=CNC2=C1 BQVUABVGYYSDCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101100205189 Neurospora crassa (strain ATCC 24698 / 74-OR23-1A / CBS 708.71 / DSM 1257 / FGSC 987) leu-5 gene Proteins 0.000 description 1
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- QPVFUAUFEBPIPT-CDMKHQONSA-N Phe-Gly-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O QPVFUAUFEBPIPT-CDMKHQONSA-N 0.000 description 1
- YTILBRIUASDGBL-BZSNNMDCSA-N Phe-Leu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 YTILBRIUASDGBL-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- FELJDCNGZFDUNR-WDSKDSINSA-N Pro-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 FELJDCNGZFDUNR-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- XZGWNSIRZIUHHP-SRVKXCTJSA-N Pro-Arg-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 XZGWNSIRZIUHHP-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- QNZLIVROMORQFH-BQBZGAKWSA-N Pro-Gly-Cys Chemical compound C1C[C@H](NC1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O QNZLIVROMORQFH-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- HAEGAELAYWSUNC-WPRPVWTQSA-N Pro-Gly-Val Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O HAEGAELAYWSUNC-WPRPVWTQSA-N 0.000 description 1
- STGVYUTZKGPRCI-GUBZILKMSA-N Pro-Val-Cys Chemical compound SC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 STGVYUTZKGPRCI-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- FUOGXAQMNJMBFG-WPRPVWTQSA-N Pro-Val-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 FUOGXAQMNJMBFG-WPRPVWTQSA-N 0.000 description 1
- 208000003251 Pruritus Diseases 0.000 description 1
- 108010003201 RGH 0205 Proteins 0.000 description 1
- 208000001647 Renal Insufficiency Diseases 0.000 description 1
- 206010040047 Sepsis Diseases 0.000 description 1
- FIXILCYTSAUERA-FXQIFTODSA-N Ser-Ala-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O FIXILCYTSAUERA-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 description 1
- 238000002105 Southern blotting Methods 0.000 description 1
- 206010041660 Splenomegaly Diseases 0.000 description 1
- KWQBJOUOSNJDRR-XAVMHZPKSA-N Thr-Cys-Pro Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N)O KWQBJOUOSNJDRR-XAVMHZPKSA-N 0.000 description 1
- VGYBYGQXZJDZJU-XQXXSGGOSA-N Thr-Glu-Ala Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O VGYBYGQXZJDZJU-XQXXSGGOSA-N 0.000 description 1
- HEJJDUDEHLPDAW-CUJWVEQBSA-N Thr-His-Cys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N)O HEJJDUDEHLPDAW-CUJWVEQBSA-N 0.000 description 1
- KZSYAEWQMJEGRZ-RHYQMDGZSA-N Thr-Leu-Val Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O KZSYAEWQMJEGRZ-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 1
- DCRHJDRLCFMEBI-RHYQMDGZSA-N Thr-Lys-Met Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O DCRHJDRLCFMEBI-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 1
- NHQVWACSJZJCGJ-FLBSBUHZSA-N Thr-Thr-Ile Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O NHQVWACSJZJCGJ-FLBSBUHZSA-N 0.000 description 1
- XEVHXNLPUBVQEX-DVJZZOLTSA-N Thr-Trp-Gly Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)NCC(=O)O)N)O XEVHXNLPUBVQEX-DVJZZOLTSA-N 0.000 description 1
- CKHWEVXPLJBEOZ-VQVTYTSYSA-N Thr-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C([O-])=O)NC(=O)[C@@H]([NH3+])[C@@H](C)O CKHWEVXPLJBEOZ-VQVTYTSYSA-N 0.000 description 1
- 208000005485 Thrombocytosis Diseases 0.000 description 1
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 1
- VZBWRZGNEPBRDE-HZUKXOBISA-N Trp-Ala-Pro Chemical compound C[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CNC3=CC=CC=C32)N VZBWRZGNEPBRDE-HZUKXOBISA-N 0.000 description 1
- WSGPBCAGEGHKQJ-BBRMVZONSA-N Trp-Gly-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)N WSGPBCAGEGHKQJ-BBRMVZONSA-N 0.000 description 1
- NLWCSMOXNKBRLC-WDSOQIARSA-N Trp-Lys-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O NLWCSMOXNKBRLC-WDSOQIARSA-N 0.000 description 1
- VSYROIRKNBCULO-BWAGICSOSA-N Tyr-Thr-His Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CC=C(C=C2)O)N)O VSYROIRKNBCULO-BWAGICSOSA-N 0.000 description 1
- LDKDSFQSEUOCOO-RPTUDFQQSA-N Tyr-Thr-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O LDKDSFQSEUOCOO-RPTUDFQQSA-N 0.000 description 1
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 1
- LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N Uric Acid Chemical compound N1C(=O)NC(=O)C2=C1NC(=O)N2 LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N Uric acid Natural products N1C(=O)NC(=O)C2NC(=O)NC21 TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WPSXZFTVLIAPCN-WDSKDSINSA-N Val-Cys Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O WPSXZFTVLIAPCN-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- FRUYSSRPJXNRRB-GUBZILKMSA-N Val-Cys-Arg Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)O)N FRUYSSRPJXNRRB-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- DLYOEFGPYTZVSP-AEJSXWLSSA-N Val-Cys-Pro Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N DLYOEFGPYTZVSP-AEJSXWLSSA-N 0.000 description 1
- URIRWLJVWHYLET-ONGXEEELSA-N Val-Gly-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)C(C)C URIRWLJVWHYLET-ONGXEEELSA-N 0.000 description 1
- UVHFONIHVHLDDQ-IFFSRLJSSA-N Val-Thr-Glu Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N)O UVHFONIHVHLDDQ-IFFSRLJSSA-N 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 238000001261 affinity purification Methods 0.000 description 1
- 108010087049 alanyl-alanyl-prolyl-valine Proteins 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 208000007502 anemia Diseases 0.000 description 1
- 108010013835 arginine glutamate Proteins 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 125000000613 asparagine group Chemical group N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)* 0.000 description 1
- 108010093581 aspartyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 208000034158 bleeding Diseases 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 239000012050 conventional carrier Substances 0.000 description 1
- 108010060199 cysteinylproline Proteins 0.000 description 1
- 108010069495 cysteinyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000022811 deglycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 1
- 230000004720 fertilization Effects 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 108010006664 gamma-glutamyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000003208 gene overexpression Methods 0.000 description 1
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 1
- 108010079547 glutamylmethionine Proteins 0.000 description 1
- KZNQNBZMBZJQJO-YFKPBYRVSA-N glyclproline Chemical compound NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O KZNQNBZMBZJQJO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 229930004094 glycosylphosphatidylinositol Natural products 0.000 description 1
- 108010089804 glycyl-threonine Proteins 0.000 description 1
- 231100000869 headache Toxicity 0.000 description 1
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 1
- 238000005534 hematocrit Methods 0.000 description 1
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 108010036413 histidylglycine Proteins 0.000 description 1
- 108010092114 histidylphenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 238000010237 hybrid technique Methods 0.000 description 1
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 108010027338 isoleucylcysteine Proteins 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 1
- 201000006370 kidney failure Diseases 0.000 description 1
- 108010073472 leucyl-prolyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 108010000761 leucylarginine Proteins 0.000 description 1
- 108010091871 leucylmethionine Proteins 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 108010005942 methionylglycine Proteins 0.000 description 1
- 230000002297 mitogenic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 208000004235 neutropenia Diseases 0.000 description 1
- 230000003448 neutrophilic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 238000012856 packing Methods 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 108010029020 prolylglycine Proteins 0.000 description 1
- 230000020978 protein processing Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 238000003153 stable transfection Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 210000002435 tendon Anatomy 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 206010043554 thrombocytopenia Diseases 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 1
- 108010045269 tryptophyltryptophan Proteins 0.000 description 1
- 231100000397 ulcer Toxicity 0.000 description 1
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 1
- 229940116269 uric acid Drugs 0.000 description 1
- 102000009816 urokinase plasminogen activator receptor activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108040001269 urokinase plasminogen activator receptor activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 108700026220 vif Genes Proteins 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/475—Growth factors; Growth regulators
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
- A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/04—Antipruritics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/06—Antigout agents, e.g. antihyperuricemic or uricosuric agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/04—Centrally acting analgesics, e.g. opioids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/06—Antianaemics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/12—Antihypertensives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Hematology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Oncology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Neurology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Izum se nanaša na nukleotidno sekvenco, ki kodira gen PRV-1, in v bistvu obsega sekvenco ID št. 1, na metodo za dokazovanje tega gena kot tudi polipeptida, ki je kodiran s tem genom.ŕ
Description
Opis
Opis se nanaša na nukleotidno sekvenco, ki kodira PRV-1-gen, na rekombinantno DNA, ki vsebuje to nukleotidno sekvenco, na vektorje, ki vsebujejo rekombinantno DNA in s temi vektorji transformirane celice, kot tudi na PRV-1-polipeptid, na protitelesa proti temu peptidu, na postopek za dokaz PRV-1-polipeptida in na zdravila, ki vsebujejo PRV-1-polipeptid ali protitelesa proti PRV-1-polipeptidu.
Polycythaemia rubra vera (eritremija), označena tudi kot polycythaemia vera ali p. vera, je maligna hematološka bolezen, pri kateri se poveča tvorba eritroidnih, granulocitarnih in megakariocitarnih celic. Bolezen je klonskega izvora in nastane z mutacijo ene same hematopoietične prekursorske celice. Pogostost p. vera znaša 4 do 6 na milijon prebivalcev v Nemčiji. Brez zdravljenja se bolezen v teku 18 mesecev konča s smrtjo. Zdravljenje s puščanjem krvi ali kemoterapijo podaljša povprečno življenjsko dobo za več kot 13 let.
Dokazovanje p. vera poteka s kliničnimi kriteriji. H klinični sliki spada glavobol, pruritus, splenomegalija pri dveh tretjinah pacientov, krvavitve ali tromboze, visok krvni tlak pri tretjini pacientov, protin, ki ga sproži povečana tvorba sečne kisline, in v nekaterih primerih septični ulkusi. Najpomembnejše pri laboratorijskem izvidu je povečanje vrednosti za hemoglobin, hematokrit, število eritrocitov in celotni volumen eritrocitov kot tudi v mnogih primerih nevtrofilna granulocitoza ali trombocitoza. Ker je po eni strani večina kriterijev precej meglenih, po drugi strani pa vsi pacienti ne izpolnjujejo teh kriterijev, je pogosto težavno razmejiti p. vera od drugih mieloproliferativnih bolezni, kot kronične granulocistične levkemije, ali esencialne trombocitemije, in s tem potrditi diagnozo. Zato je molekularni vzrok p. vera doslej še popolnoma neznan. Ker pa ima nezdravljena p. vera težak potek, je točnost diagnoze zelo važna.
Zato je bila naloga izuma, da ugotovimo molekularni vzrok za polycytaemia rubra vera in da ustvarimo možnost za njeno diagnozo.
To nalogo smo rešili z izolacijo gena, ki je specifičen pri p. vera in se ne eksprimira pri zdravih kontrolah. Ta gen je označen kot gen PRV-1 (polycythaemia rubra vera).
Podobna nukleotidna sekvenca je prikazana v mednarodni patentni prijavi WO 98/50552.
Predmet izuma je zato polinukleotid, ki kodira gen PRV-1 in zajema v bistvu sekvenco ID št. 1. Polinukleotidi po predmetnem izumu so lahko enojno- ali dvojno-verižna DNA ali RNA. Če gre za RNA, je strokovnjaku jasno, da namesto »T-nukleotidov« nastopajo »U-nukleotidi«. Pod »polinukleotidom« je treba razumeti nukleinske kisline s 15 ali več nukleotidi.
Nukleotidna sekvenca po predmetnem izumu je prikazana na Skici 1. Predmet izuma je torej polinukleotid, ki ustreza sekvenci na Skici 1, kot tudi polinukleotid, katerega nukleotidna sekvenca kaže malenkostna odstopanja. Pod malenkostnimi odstopanji razumemo v smislu predmetnega izuma take sekvence, pri katerih se da zamenjati samo nekatere maloštevilne, prednostno ne več kot 50 in posebno prednostno ne več kot 25 nukleotidov, pri čemer pa ostane nedotaknjena funkcija gena, kodiranega z nukleotidno sekvenco. Strokovnjaku je znano, da je možno nadomestiti bazni triplet, ki kodira neko aminokislino, z nekim drugim tripletom, ki kodira isto aminokislino. Razen tega so manj pomembna področja lahko malenkostno deletirana in/ali mutirana. Pri posebni izvedbeni obliki pa polinukleotid zajema nukleotide 36 do 1346 sekvence št. 1, torej tudi kodirajoče področje PRV-1-gena. Nadaljnja izvedbena oblika obsega nukleotide 36 do 1262 sekvence št. 1. To področje domnevno kodira aktivno področje PRV-1-polipeptida. Polinukleotid po predmetnem izumu lahko končno zajema tudi nukleotide 39 do 1346 ali 39 do 1262 sekvence št. 1, tako, da ni prisoten kodon, ki kodira začetni metionin. Prednostna izvedbena oblika je polinukleotid, ki zajema nukleotide 99-1346 ali 99 do 1262 sekvence št. 1. S tem niso vsebovani kodoni na 5’-koncu, ki kodirajo signalni peptid PRV1 -polipeptida.
Polinukleotid po predmetnem izumu je lahko tudi fragment gena PRV-1. Fragment ima praviloma več kot 100 nukleotidov, prednostno pa več kot 300 nukleotidov. Fragmenti so lahko uporabljeni tudi kot primerji ali kot sonde, zlasti za PCR. V tem primeru so fragmenti lahko skrajšani ustrezno namenu uporabe. Običajno imajo primerji dolžino med 10 in 30 nukleotidov, sonde pa dolžino med 15 in 50 nukleotidov.
Gen PRV-1 je telesu lasten gen, ki pa je pri nekaterih zdravih osebah eksprimiran omejeno samo v nekaj maloštevilnih organih. Normalno se eksprimira pretežno v krvotvornih organih, to je v kostnem mozgu in v fetalnih jetrih, ter šibko v vranici, ne pa v srcu, mišicah, pankreasu ali ledvicah. Pri pacientih, obolelih na p. vera, je ta gen izrazito pre-eksprimiran, predvsem v hematopoietičnih celicah.
Gen PRV-1 kodira protein, ki ima na Skici 2 prikazano proteinsko sekvenco. Signalni peptid, ki je vsebovan v proteinski sekvenci prav vseh površinskih molekul in se pri procesiranju proteina običajno odstrani, je ločen z vezajem. Protein ima sekvenco ID št. 2. Nadaljnji vidik izuma je tudi v bistvu čist polipeptid s sekvenco št. 2, ali polipeptid s sekvenco št. 2, pri katerem signalni peptid ni prisoten (aminokisline 22 do 437 s sekvenco št. 2). Nadaljnje izvedbene oblike zajemajo aminokisline 1 do 409 ali 22 do 409 s sekvenco št. 2 (domnevno aktivno področje proteina).
Polipeptid po predmetnem izumu je glede na biološko aktivnost prednostno glikoziliran, najbolj prednostno je N-glikoziliran. Pri tem je lahko najmanj na eni izmed aminokislin Asn-46, Asn-189 in Asn-382 na PRV-1 -polipeptidu glikoziliran. (Oštevilčenje aminokislin se nanaša na sekvenco št. 2). Izum vključuje tudi fragmente polipeptidov po predmetnem izumu, ki so Nglikozilirani. Fragmenti so dolgi najmanj 50 aminokislin, prednostno najmanj 100 aminokislin in najbolj prednostno najmanj 150 aminokislin.
Pri neki drugi izvedbeni obliki je polipeptid lahko O-glikoziliran.
Za strokovnjaka je jasno, da je možno zamenjati določene aminokisline z drugimi, ne da bi bila prizadeta biološka aktivnost proteina. Take pretvorjene oblike polipeptidov so tudi predmet tega izuma. Pri aminokislinah gre za take, ki ne prizadenejo biološke aktivnosti proteina. Pri izbiranju zamenjave se strokovnjak lahko opira na splošno znana pravila.
PRV-1-polipeptid ima v odvisnosti od priprave lahko na primer glikozil-fosfatidilinozitolno sidro. Le-to je vezano na aminokisline, ki ustrezajo aminokislinam 407 do 409 s sekvenco ID št. 2. GPI-sidro rabi za to, da se protein zasidra s pomočjo lipida na zunanji strani celične membrane. Iz doslej še ne dokončno pojasnjenih razlogov pa je pogosto opazno, da so GPI-vezani proteini oddajani tudi v medij. Govorimo o tako imenovanem »shedding«. Ali je to specifičen proces, namreč ali se taki proteini na kontroliran način z encimi odcepijo iz membrane, ali pa gre za nespecifično izgubo sidra, doslej še ni pojasnjeno. Je torej zelo verjetno, da PRV-1 lahko najdemo tako na celični membrani kot tudi ekstracelularno. Za učinkovanje kot rastni faktor je verjetno važnejša izločena oblika, ki ni vezana na membrano, saj lahko difundira kot rastni faktor in doseže druge celice.
Za strokovnjaka je jasno, da lahko vpliva z manipulacijo teh aminokislin na nahajanje proteina v membrani. To velja predvsem za pripravo določenih DNAkonstruktov, ki so določeni za ekspresijo PRV-1-polipeptida ali njegovih fragmentov. Kodoni, ki kodirajo te aminokisline, so lahko mutirani ali deletirani. Gen kodira površinski receptor uPAR/Ly6-družine. Ta receptorska družina lahko prenaša mitogene signale, to je signale, ki vzbujajo delitev celic. Zato predpostavljamo, da prekomerna ekspresija PRV-1-gena, med drugim na granulocitih pacientov s p. vera, pripomore k hiperproliferaciji teh celic.
Ugotovili smo, da niti pri zdravih osebah niti pri pacientih z drugimi mieloproliferativnimi boleznimi, na primer s kronično granulocistično levkemijo, akutno granulocistično levkemijo in esencialno trombocitemijo, PRV-1 ni eksprimiran na granulocitih.
Da bi lahko uporabili polipeptid, kodiran z genom PRV-1, za analize in diagnostične postopke, ga na primeren način proizvedemo iz rekombinantne DNA, pri čemer rekombinantna DNA prednostno obsega nukleotidno sekvenco ID št. 1 ali pa vsaj kodirno področje PRV-1-gena, torej nukleotide 36 do 1346 sekvence ID št. 1, in vsaj nukleotide 39 do 1262, funkcionalno povezane s promotorjem. Rekombinantna DNA pa lahko obsega samo en fragment sekvence št. 1.
Nadaljnji predmet izuma je vektor, ki vsebuje rekombinantno DNA za PRV-1polipeptid ali njen fragment, kot tudi gostiteljsko celico, ki je transficirana ali transformirana s tem vektorjem. Gostiteljske celice so lahko prokariontske, na primer bakterije, kot E. coli. Pri tem se eksprimirajo ne-glikozilirani polipeptidi. Prednostne so zato evkariontske gostiteljske celice, ki eksprimirani protein lahko post-translacijsko glikozilirajo in drugje modificirajo. Primeri za eukariontske gostiteljske celice so insektne celice kot Sf9-celice za ekspresijo infekcije z rekombinantnimi bakulovirusi, sesalskimi celicami, kot so COScelice, CHO-celice, HeLa-celice. Ti primeri pa niso izčrpni. Tudi celice kvasovk so možne kot gostiteljske celice. Za strokovnjaka je jasno, da je glede na gostiteljsko celico lahko glikozilirni vzorec različen. S tem lahko variiramo tudi biološko aktivnost eksprimiranega produkta. Posebno prednostne so gostiteljske celice, ki tako glikozilirajo eksprimirani produkt, da ostane ohranjena biološka aktivnost proteina.
PRV-1-polipeptid, ki je iz granulocitov pridobljen ali rekombinantno proizveden, se da uporabiti tako za dokazovanje polycythaemia vera kot tudi za zdravljenje te bolezni.
Možnost terapije obstaja v tako imenovani »antisense« terapiji. Pri tem postopku uporabimo »antisense«-RNA molekulo, torej RNA, ki je komplementarna s PRV-RNA. Ker ima PRV-1-RNA na svojem začetku sekvenco 5’-AAAAGCAGAAAGAGATTACCAGCC-3’ (sekvenca ID-št. 3), bi imela potrebna antisense-RNA proti tej sekvenci naslednjo nukleotidno sekvenco: 5’-GGCTGGTAATCTCTTTCTGCTTTT-3’ (sekvenca ID-št. 4). Ta antisense-RNA se vgradi v vektor in vnese v celice p. vera. Vnašanje teh RNA poteka na primer preko transfekcije, pri čemer je za transfekcijo uporabljeni vektor prednostno tako izoblikovan, da ga specifično vnesemo v celice P. vera. Ekspresija antisense-RNA povzroči, da ni več možna translacija PRV-1-mRNA v polipeptid. V tako obdelanih celicah ne nastaja več PRV-1 -protein.
Nadaljnji predmet izuma je zato postopek za dokaz p. vera, ki je značilen po tem, da dokažemo PRV-1-polipeptid ali njegov epitop in določimo, kolikšna je ekspresija.
Prekomerna ekspresija tega receptorja iz zrelih celic zunaj kostnega mozga, to je na granulocitih, je močan indikator za obstoj bolezni p. vera. Primeren način dokazovanja je immunoassay metoda z uporabo protiteles, ki so usmerjena proti PRV-1-receptorju. Kot testni postopki so primerne znane variante immunoassay metod, pri katerih se uporablja za PRV-1-polipeptid specifična protitelesa, skupaj z nadaljnjimi markiranimi protitelesi, ki so lahko imobilizirana ali v raztopini. Markiranje lahko poteka na sam po sebi znan način, na primer z radioaktivnimi izotopi, s fluorescenco ali luminiscenco, z encimi, z barvnimi reakcijami, ali siceršnjimi skupinami, primernimi za dokazovanje. Te variante so strokovnjaku znane in jih tukaj ni treba podrobneje pojasnjevati. Po predmetnem izumu so posebno prednostni ELISA testi.
Za specifično dokazovanje PRV-1-receptorja potrebna protitelesa lahko prav tako pripravimo na sam po sebi znan način. Primerna so tako monoklonska kot tudi poliklonska protitelesa, pri čemer je prednostna uporaba monoklonskih protiteles.
Za pripravo protiteles lahko uporabimo tudi iz proteina izpeljane peptide. V okviru predmetnega izuma smo uspešno uporabili peptide s sekvencami: a) KVSDLPRQWTPKN (aminokisline 34 do 46) [sekvenca ID-št. 5] in
b) SAREKRDVQPPASQH (aminokisline 391 do 405) [sekvenca ID-št. 6],
Poliklonska protitelesa se običajno pridobi tako, da primernega gostitelja (kunca) imuniziramo s PRV-1-polipeptidom, opcijsko vezanim na imunološki nosilec (adjuvans), in sprožimo imunski odgovor. Monoklonska protitelesa lahko pridobimo na sam po sebi znan način s hibridoma tehniko. Protitelesa lahko očistimo z afinitetnim čiščenjem. Priprava in čiščenje protiteles sta na primer opisana v »Antibodies: A Laboratory Manual«, Harlow and Lane, Cold Spring Harbor Laboratory Press«.
Nadalje se da tovrstna poliklonska ali monoklonska protitelesa proti PRV-1 uporabiti tudi za terapijo pri bolezni.
Pri nadaljnji izvedbeni obliki lahko dokaženo PRV-1-receptor z RT-PCRpostopkom. Pri tem najprej iz celic, ki pretirano eksprimirajo PRV-1, praviloma granulocitov, izoliramo RNA. Nato na sam po sebi znan način izvedemo reverzno transkripcijo z RT-primerjem. RT-primer je prednostno primer z naslednjo nukleotidno sekvenco (SEQ ID-št. 7).
ATTAGGTTATGAGGTCAGAGGGAGGTT.
S tem je specifična PRV-1-RNA pretvorjena v DNA. To DNA nato v PCRreakciji na sam po sebi znan način amplificiramo. Za amplifikacijske cikle uporabimo prednostno oba naslednja primerja.
Kot »sense« primer (SEQ ID-št. 8)
GCAGAAAGAGATTACCAGCCACAGACGG.
Kot »antisense« primer (SEQ ID-št. 9)
GAATCGTGGGGGTAATAGAGTTAGCAGG.
S prikazano sekvenco lahko strokovnjak brez nadaljnjega poišče druge, prav tako ustrezne primerje.
Ker pri tem postopku uporabljamo RNA kot izhodni material, je PCR-signal pozitiven samo v takih primerih, v katerih se PRV-1-gen tudi eksprimira. Kot je zgoraj navedeno, to velja samo, kadar ima pacient p. vera. Pri zdravih osebah ne pride do PRV-ekspresije v granulocitih. Odsotnost RT-PCR-signala torej nakazuje odsotnost p. vera.
Pri nadaljnji alternativi lahko uporabimo tudi prenosno (»blotting«) tehniko, prednostno Northern blot, za dokazovanje p. vera. Za tovrsten postopek izoliramo RNA iz granulocitov in nato kontroliramo z blotting metodo, na primer Northern blot, za ekspresijo PRV-1. Kot sondo lahko uporabimo cDNA sekvenco SEQ ID št. 1, ali fragment sekvence. Hibridiziranje se pojavi samo takrat, kadar izvirajo granulociti od pacienta, ki ima p. vera, ker je samo takrat prisotna ekspresija na granulocitih. Odsotnost hibridizacije kaže na to, da oseba, od katere izvirajo granulociti, nima p. vera.
Za Northern blot hibridiziranje lahko uporabimo tudi fragment gena. Tovrsten fragment je običajno dolg več kot 100 baz, prednostno več kot 300 baz. Alternativno pa lahko z digestijo gena z nukleazami za restrikcijo koncev pripravimo raznovrstne različne fragmente gena, ki se jih da uporabiti kot sonde v Northern blot. Če fragmenti izvirajo iz cDNA, nastopajo kot dvojne verige, ki jih je treba za hibridizacijo ločiti na enojne verige. Ustrezni primeri so Bam HI Pstl-fragment baznega para 420 do baznega para 831, ali pa Pstl-Pstlfragment baznega para 831 do baznega para 1900.
Dokaz PRV-1 mRNA in s tem PRV-1-ekspresija lahko poteka tudi tako, da najprej z RT-PCR reakcijo izvedemo reverzno transkripcijo mRNA in zatem amplificiramo cDNA, nato pa dokažemo amplificirano DNA s sondo s pomočjo hibridizirne metode.
Pri pozitivni diagnozi je treba bolezen zdraviti, ker se sicer v sorazmerno kratkem času konča s smrtjo. Pri tem lahko uporabimo specifična protitelesa proti PRV-1, ki so lahko vezana na opcijsko citotoksične komponente.
Nadaljnji predmet izuma je zato zdravilo, ki vsebuje poleg običajnih nosilcev še
Ker se pri p. vera PRV-1-receptor pre-eksprimira, pride pri stiku z anti-PRV-1protitelesom do vezave mnogih protiteles na površini okuženih granulocitov.
Vezava mnogih protiteles na te celice je vzpodbuda za imunološke celice, da uničijo te granulocite. Na ta način je možno specifično odstranjevanje celic p.
vera.
protitelesa proti PRV-1 -receptorju.
Presenetljivo pa smo tudi ugotovili, da ima PRV-1-polipeptid hematopoietično aktivnost. PRV-1-polipeptid je v stanju, da v določenih hematopoietičnih prekursorskih celicah sproži tvorbo eritroidnih kolonij. Predvsem N-glikozilirani polipeptidi PRV-1 imajo to funkcijo. Izmed polipeptidov po predmetnem izumu zato dajemo prednost N-glikoziliranim PRV-1 -polipeptidom in njihovim fragmentom, ki imajo aktivnost rastnega faktorja.
Nadaljnji vidik izuma je zato zdravilo, ki vsebuje poleg farmacevtsko prenesljivega nosilca PRV-1-polipeptid ali njegov biološko aktiven fragment. Prednostno gre za glikoziliran PRV-1-polipeptid, še bolj prednostno za Nglikoziliran PRV-1-polipeptid ali za njegov biološko aktiven fragment. Izum se nanaša tudi na zdravila, ki vsebujejo najmanj en polinukleotid po izumu.
Predmetni izum se nadalje nanaša na uporabo PRV-1-polipeptida ali na njegov biološko aktiven fragment kot rastni faktor in vivo ter ex vivo. PRV-1-polipeptid ali njegov biološko aktiven fragment lahko uporabimo za terapijo prav vseh pancitopenij in pancitopatij v kostnem mozgu in v obtoku (sprememba celičnih sestavin periferne krvi in kostnega mozga). Polipeptidi predmetnega izuma se dajo uporabiti na primer za zdravljenje anemij pri odpovedi ledvic, kemoterapiji ali obsevanju celotnega telesa, za terapijo nevtropenij in trombocitopenij pri kemoterapiji ali obsevanju celotnega telesa, za ex vivo terapijo izvornih celic, ki so periferne ali iz kostnega mozga, za ekspanzijo (pomnoževanje) in retransfuzijo v pacienta, ter za zdravljenje sepse, sindroma sistemskega inflamatornega odziva (»systemic inflammatory response syndrome« (SIRS)), ali regionalnih vnetnih reakcij. Polipeptide po predmetnem izumu ali zdravila, ki jih vsebujejo, lahko apliciramo na najrazličnejše načine. Načini dajanja obsegajo intravenozno, intramuskularno, subkutano, intraperiotonealno, oralno, transdermalno in transmukoralno aplikacijo.
Tudi polinukleotidi po predmetnem izumu se dajo uporabiti za terapijo pancitopenij in pancitopatij. Pri tem je cilj ekspresija PRV-1 -polipeptida ali njegovega funkcionalnega fragmenta v celicah dotičnega pacienta. Pri tem pridejo v poštev vse metode genske terapije. Lahko izoliramo celice pacienta in izvedemo transfekcijo s polinukleotidom po predmetnem izumu (ex vivo manipulacija), da jih nato zopet uvedemo v pacienta. Možno pa si je tudi zamisliti postopke, pri katerih pridejo polinukleotidi po predmetnem izumu z virusnim transferom v tarčne celice. Ekspresija uvedenih nukleinskih kislin privede nato do hematopoietične aktivnosti.
Ta izum se nanaša tudi na kite za dokazovanje bodisi polycythaemia vera ali motenj hematopoietičnega sistema. Kiti vsebujejo polinukleotid po izumu in/ali polipeptid po izumu in/ali enega ali več protiteles po izumu. Razen tega lahko vsebuje kit še vsebnik ali sestavke, ki so primerni za izvedbo dokazovainih reakcij. Primeri za take sestavke so pufrske raztopine, reagenti za blokiranje membran, hibridizime raztopine, sekundarna protitelesa, raztopine substratov za diagnostične reakcije in drugo. Kit se uporablja prednostno za izvedbo PCRreakcij, Northern blot, Southern blot, VVestern blot, ELISA, RIA ali podobnih reakcij.
Za pojasnilo navajamo naslednje Primere.
Primer 1
Karakterizacija PRV-gena
Naslednje poskuse smo izvedli za karakterizacijo gena.
Granulocite smo vzeli iz konzervirane krvi ali iz puščane krvi pacientov s p. vera ter jih izolirali po naslednjem protokolu.
Krvi smo dodali enak volumen 3% dekstranske raztopine v 0.9% NaCI in pustili stati 20 minut pri sobni temperaturi (RT).
Nastavek smo ločili na dve fazi. Zgornjo svetlo fazo smo odvzeli in centrifugirali 10 minut pri 1800g in sobni temperaturi.
Supernatant smo zavrgli in celično peleto ponovno suspendirali v enakem volumnu 0.9% NaCI.
Vsakokrat po 35 mL celic v NaCI smo naslojili po 15 mL Ficoll-Hypaque.
Nato smo centrifugirali brez zavore 60 minut pri 1800g in pri sobni temperaturi. Tvori se celična peleta in dva sloja z vmesno fazo.
Sloja in vmesno fazo smo odsesali in celično peleto 30 minut ponovno suspendirali v 10 mL ledeno mrzle 0,2% NaCI. Po 30 sekundah smo takoj dodali 10 mL ledeno mrzle 1,6% NaCI.
Celice smo centrifugirali 10 minut pri 1800g in sobni temperaturi.
Nato smo enkrat izprali v 10 mL PBS in odcentrifugirali.
Celična peleta je vsebovala 95-99% čistih granulocitov.
Iz teh celic smo s standardnimi metodami izolirali RNA.
mg te RNA smo preiskali v Northern blot na ekspresijo PRV-1. Kot sondo smo uporabili celotno cDNA-sekvenco SEQ ID št. 1.
Ta poskus smo izvedli na 19 pacientih s P. vera in na 21 vzorcih konzervirane krvi. Ugotovili smo močno hibridiziranje PRV-1 sonde pri pacientih s P. vera. Pri kontrolnih zdravih osebah nismo ugotovili nobenega hibridiziranja.
Primer 2
PRV-1 ima aktivnost rastnega faktorja
Iz breje miši smo vzeli embrije na dan 13,5 po oploditvi. Odvzeli smo fetalna jetra. V njih vsebovane celice smo obarvali s protitelesi in s kolonsko kromatografijo obogatili določene celice, druge celične vrste smo pa odstranili. Nastane celična mešanica, ki je obogatena z določenimi hematopoietičnimi prekursorskimi celicami (tako imenovanimi »colony formimg units-erythroid, CFU-E). Tako je v fetalnih jetrih skupno približno 2% CFU-E, v obogatenih celicah pa 30-40% CFU-E.
S temi CFU-E smo izvedli retrovirusno transfekcijo. Za to smo 48 prej izvedli transfekcijo na sami, tako imenovani pakirni celični liniji (»packaging celi line«), označeni z 293-T. 293-T celice so uveljavljena celična linija iz ledvic humanega embrija. Z 293-T celicami izvedemo stabilno transfekcijo z nekaj stabilnimi retrovirusnimi geni. Če na teh 293-T celicah izvedemo transfekcijo z dvema plazmidoma, imenovanima pOS in pKAT, proizvedejo te 293-T celice retrovirus, ki je sposoben za inficiranje murinskih (mišjih) fetalnih jetrnih celic. Če izvedemo transfekcijo 293-T celic s praznim pOS vektorjem in pKAT, se producira retovirus divjega tipa (»wild-type virus«), ki eksprimira samo retrovirusne proteine. Po drugi strani pa kloniranje humanega gena, na primer PRV-1, v pOS vektor povzroči produkcijo retrovirusa, ki eksprimira ta protein, kadar inficira celice. 293-T celice izločajo retrovirus v medij celične kulture.
Po dveh dnehpospravimo medij celične kulture transficiranih 293-T celic, ki vsebuje retrovirus, ter ga enkrat filtriramo skozi o.45 pm filter. Za transfekcijo fetalnih jetrnih celic te celice pomešamo s filtriranim medijem celične kulture, ki vsebuje retrovirus, ter centrifugiramo 2 uri pri 1800 obr/min ter 20 °C v prisotnosti dodanega Polybren. Zatem transficirane fetalne jetrne celice gojimo v mediju (Methocult, proizv. Celi Systems), ki vsebuje poleg običajnih soli in amino kislin, še fetalni telečji serum, 0,0001-0,4 IU eritropoietina (EPO)/ml in metil celulozo (0,8 %). CFU-E terjajo Epo da tvorijo hematopoietičnne kolonije. Metil celuloza strjuje medij v obliki gela, s tem pa fiksira posamezne celice v tem gelu, tako, da se, nasprotno kot v tekočem mediju, ne morejo premakniti. Zato je možno opazovati, ali se hematopoietična kolonija tvori ali ne iz ene same celice. CFU-E tvorijo eritroidne kolonije, to je kolonije, ki vsebujejo rdeče krvne celice in njihove prekursorske celice.
Po treh dneh preštejemo, koliko hematopoietičnih kolonij je razvilo. Primerjamo različne mešanice. V vsakem poskusu nismo primerjali vseh mešanic; mešanice 1-3 so zelo podobne kontrole in vsako od njih lahko posamič primerjamo z mešanico 4.
Mešanica 1: Celice, ki niso transficirane z retrovirusom.
Mešanica 2: Celice, ki so transficirane s praznim pOS vektorjem.
Mešanica 3: Celice, ki so transficirane z »green fluorescent protein« (GFP) proteinom, ki ni hematopoietično aktiven.
Mešanica 4: Celice, ki so trannsficirane s pOS-PRV-1 (vektor + gen po predmetnem izumu).
Tabela 1: Tabela našteva rezultate, dobljene pri treh poskusih, ki so bili izvedeni na opisani način. Števila navajajo v vsakem primeru število kolonij.
| Mešanica 1 | Mešanica 2 | Mešanica 3 | Mešanica 4 | |
| ne-transficirano | prazen vektor (POS) | GFP (pOS-GFP) | PRV-1 (pOS-PRV-1) | |
| Poskus 1 | 116 | 156 | 80 | 326 |
| Poskus 2 | 271 | 273 | 410 | |
| Poskus 3 | 120 | 131 | 291 |
Poskusi kažejo, da CFU-E, na katerih je bila izvedena transfekcija s PRV-1, tvorijo mnogo več kolonij (do 3-krat več), kot pa različni kontrolni CFU-E. Ta rezultat nakazuje, daje PRV-1 rastni faktor za CFU-E.
Primer 3
Topnost PRV-1 rastnega faktorja
Nadaljnji poskus smo izvedli za raziskavo, ali je PRV-1 topen rastni faktor, ali pa je potreben stik celica-celica. Pakirna (»Packaging«) celična linija 293-T po transfekciji s pOS in pKAT vektorji ne producira samo retrovirusa, Poleg tega sintetizirajo 293-T celice tudi protein kodiran z genom, ki je kloniran v pOs, torej PRV-1 v predloženem primeru. Če je genski produkt topen protein, se izloča v medij, ki obdaja pakirno celično linijo 293-T. Če je transfekcija 293-T celic izvedena samo s pOS vektorjem, brez pKAT, se ne tvorijo retrovirusi. Tedaj vsebuje medij celične kulture samo topni protein, ki ga producirajo celice. Medij, ki izvira iz pOS-PRV1-transficiranih celic in ki ne vsebuje retrovirosov, pomešamo s CFU-E in celoto razprostremo v metil-celuloznem mediju; nato preštejemo nastale kolonije.
Dobili smo naslednje rezultate:
Tabela 2: Topnost PRV-1. Števila v vsakem primeru označujejo število kolonij.
| Mešanica 1 | Mešanica 2 | Mešanica 3 | Mešanica 4 | |
| ne-transficirano | prazen vektor (pOS) | GFP (pOS-GFP) | PRV-1 (pOS-PRV-1) | |
| Poskus 4 | 137 | 187 | 557 |
Tudi pri tem poskusu so CFU-E, ki so bili obdelani s PRV-1 vsebujočim medijem, tvorili mnogo več hematopoietičnih kolonij, kot pa kontrolne celice. Zato lahko zaključimo iz tega rezultata, da je PRV-1 topen rastni faktor.
Primer 4
Rastni faktor PRV-1 je N-glikoziliran
Granulocite smo izolirali iz pacientov s p. vera in iz teh celic pripravili proteinske ekstrakte z uporabo standardnega protokola. Te proteinske ekstrakte smo obdelali v skladu s protokolom za »N-Glycolidase F. Deglycosylation Kit« , dobavitelja Boehringer Mannheim. Podrobneje to pomeni, da so dodali »denaturacijski« pufer k proteinskim ekstraktom in zmesi segrevali pri 95 °C v teku 3 minut, nakar smo jih obdelali bodisi z »reakcijskim« pufrom ali z »reakcijskim« pufrom plus N-glikozidazo. Vsako mešanico smo čez noč inkubirali pri 37 °C in proteine analizirali s PAGE gelno elektroforezo, čemur je sledil VVestern blot. PRV-1-protein smo določali s protitelesom proti proteinu, ki ima aminokislinsko sekvenco ID št. 5, Rezultati kažejo, da ima PRV-1 protein takrat, ko je očiščen iz granulocitov, velikost 60-65 kDa, medtem ko ima po digestiji z N-glikozidazo velikost samo 40 kDa. To jasno dokazuje, da je PRV-1 glikoziliran na asparaginskih ostankih (asparagin = N).
4S
SEQUENCE LISTING <110> Universitatsklinikum Freiburg <120> The gene PRV-1 and its use <130> E980930 <140> PCT/EP99/07238 <141> 1999-09-30 <150> 198 49 044.5 <151> 1998-10-23 <160> 9 <170> PADAT Seguenzmodul, Version 1.0
AG
| <210> | 1 |
| <211> | 1600 |
| <2 12 > | DNA |
| <213 > | homo sapiens |
| <220> | |
| <22 3> | |
| <400> | 1 |
| aaaagcagaa | agagattacc | agccacagac | gggtcatgag | cgcggtatta | ctgctggccc | 60 |
| tcctggggtt | catcctccca | ctgccaggag | tgcaggcgct | gctctgocag | tttgggacag | 120 |
| ttcagcatgt | gtggaaggtg | tccgacctgc | cccggcaatg | gacccctaag | aacaccagct | 1Θ0 |
| gcgacagcgg | cttggggtgc | caggacacgt | tgatgctcat | tgagagcgga | ccccaagtga | 240 |
| gcctggtgct | ctccaagggc | tgcacggagg | ccaaggacca | ggagccccgc | gtcactgagc | 300 |
| accggatggg | cccoggcctc | tcoctgatct | cctacacott | cgtgtgccgc | caggaggact | 360 |
| tctgcaacaa | cctcgttaac | tccctcccgc | tttgggcccc | acagccccca | gcagacccag | 420 |
| gatccttgag | gtgcccagtc | tgcttgtcta | tggaaggctg | tctggagggg | acaacagaag | 480 |
| agatctgccc | caaggggacc | acacactgtt | atgatggcct | octcaggctc | aggggaggag | 540 |
| gcatcttctc | caatctgaga | gtccagggat | gcatgcccca | gccaggttgc | aacctgctca | 600 |
| atgggacaca | ggaaattggg | cccgtgggta | tgactgagaa | ctgcaatagg | aaagattttc | 660 |
| tgacctgtca | tcgggggacc | accattatga | cacacggaaa | cttggctcaa | gaacccactg | 720 |
| attggaccac | atcgaatacc | gagatgtgcg | aggtggggca | ggtgtgtcag | gagacgctgc | 780 |
| tgctcataga | tgtaggactc | acatcaaocc | tggtggggao | aaaaggctgc | agcactgttg | 840 |
| gggctcaaaa | ttcceagaag | accaccatcc | aotoagccco | tcctggggtg | cttgtggcct | 900 |
| cctataccca | cttctgctcc | tcggacctgt | gcaatagtgc | cagcagcagc | agcgttctgc | 960 |
| tgaactccct | ocotcctcaa | gctgcccctg | tcccaggaga | ccggoagtgt | cctacctgtg | 1020 |
| tgcagcccct | tggaacctgt | tcaagtggct | ccccccgaat | gacctgcccc | aggggcgcca | 1080 |
| ctcattgtta | tgatgggtac | attcatctct | caggaggtgg | gctgtccaco | aaaatgagca | 1140 |
| ttcagggctg | cgtggcccaa | ccttccagct | tcttgttgaa | ccacaccaga | caaatcggga | 1200 |
| tcttctctgc | gcgtgagaag | cgtgatgtgc | agcctcctgc | ctctcagcat | gagggaggtg | 1260 |
| gggctgaggg | cctggagtct | ctcacttggg | gggtggggct | ggcactggcc | ccagcgctgt | 1320 |
| ggtggggagt | ggtttgccct | tcctgctaac | tctattaccc | ccacgattct | tcaccgctgc | 1380 |
| tgaccaccca | cactcaacct | ccctctgacc | tcataaccta | atggccttgg | acaccagatt | 1440 |
| ctttcccatt | ctgtccatga | atcatcttcc | ccacacacaa | tcattcatat | ctactcacct | 1500 |
| aacagcaaca | ctggggagag | cctggagcat | ccggacttgc | cctatgggag | aggggacgct | 1560 |
| ggaggagtgg | ctgcatgtat | ctgataatac | agaccctgtc | 1600 |
<210> 2 <211> 437 <212> PRT <213> homo sapiens <400> 2
| Met 1 | Ser | Ala Val | Leu Leu Leu Ala Leu Leu Gly Phe | Ile | Leu | Pro 15 | Leu | ||||||||
| 5 | 10 | ||||||||||||||
| Pro | Gly | Val | Gin | Ala | Leu | Leu | Cys | Gin | Phe | Gly | Thr | Val | Gin | His | Val |
| 20 | 25 | 30 | |||||||||||||
| Trp | Lys | Val | Ser | Asp | Leu | Pro | Arg | Gin | Trp | Thr | Pro | Lys | Asn | Thr | Ser |
| 35 | 40 | 45 | |||||||||||||
| Cys | Asp | Ser | Gly | Leu | Gly | Cys | Gin | Asp | Thr | Leu | Met | Leu | Ile | Glu | Ser |
| 50 | 55 | 60 | |||||||||||||
| Gly | Pro | Gin | Val | Ser | Leu | Val. | Leu | Ser | Lys | Gly | Cys | Thr | Glu | Ala | Lys |
| 65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
| As p | Gin | Glu | Pro | Arg | Val | Thr | Glu | His | Arg | Met | Gly | Pro | Gly | Leu | Ser |
| 85 | 90 | 95 | |||||||||||||
| Leu | Ile | Ser | Tyr | Thr | Phe | Val | Cys | Arg | Gin | Glu | Asp | Phe | Cys | Asn | Asn |
| 100 | 105 | 110 | |||||||||||||
| Leu | Val | Asn | Ser | Leu | Pro | Leu | Trp | Ala | Pro | Gin | Pro | Pro | Ala | Asp | Pro |
| 115 | 120 | 125 | |||||||||||||
| Gly | Ser | Leu | Arg | Cys | Pro | Val | Cys | Leu | Ser | Met | Glu | Gly | Cys | Leu | Glu |
| 130 | 135 | 140 | |||||||||||||
| Gly | Thr | Thr | Glu | Glu | Ile | Cys | Pro | Lys | Gly | Thr | Thr | His | Cys | Tyr | Asp |
| 145 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||||
| Gly | Leu | Leu | Arg | Leu | Arg | Gly | Gly | Gly | Ile | Phe | Ser | Asn | Leu | Arg | Val |
| 165 | 170 | 175 | |||||||||||||
| Gin | Gly | Cys | Met | Pro | Gin | Pro | Gly | Cys | Asn | Leu | Leu | Asn | Gly | Thr | Gin |
| 180 | 185 | 190 | |||||||||||||
| Glu | Ile | Gly | Pro | Val | Gly | Met | Thr | Glu | Asn | Cys | Asn | Arg | Lys | Asp | Phe |
| 195 | 200 | 205 | |||||||||||||
| Leu | Thr | Cys | His | Arg | Gly | Thr | Thr | Ile | Met | Thr | His | Gly | Asn | Leu | Ala |
| 210 | 215 | 220 | |||||||||||||
| Gin | Glu | Pro | Thr | Asp | Trp | Thr | Thr | Ser | Asn | Thr | Glu | Met | Cys | Glu | Val |
| 225 | 230 | 235 | 240 | ||||||||||||
| Gly | Gin | Val | Cys | Gin | Glu | Thr | Leu | Leu | Leu | Ile | Asp | Val | Gly | Leu | Thr |
| 245 | 250 | 255 | |||||||||||||
| Ser | Thr | Leu | Val | Gly | Thr | Lys | Gly | Cys | Ser | Thr | Val | dy | Ala | Gin | Asn |
| 260 | 265 | 270 | |||||||||||||
| Ser | Gin | Lys | Thr | Thr | Ile | His | Ser | Ala | Pro | Pro | Gly | Val | Leu | Val | Ala |
| 275 | 280 | 285 | |||||||||||||
| Ser | Tyr | Thr | His | Phe | Cys | Ser | Ser | Asp | Leu | Cys | Asn | Ser | Ala | Ser | Ser |
| 290 | 295 | 300 | |||||||||||||
| Ser | Ser | Val | Leu | Leu | Asn | Ser | Leu | Pro | Pro | Gin | Ala | Ala | Pro | Val | Pro |
| 305 | 310 | 315 | 320 | ||||||||||||
| Gly | Asp | Arg | Gin | Cys | Pro | Thr | Cys | Val | Gin | Pro | Leu | Gly | Thr | Cys | Ser |
| 325 | 330 | 335 | |||||||||||||
| Ser | Gly | Ser | Pro | Arg | Met | Thr | Cys | Pro | Arg | Gly | Ala | Thr | His | Cys | Tyr |
| 340 | 345 | 350 | |||||||||||||
| Asp | Gly | Tyr | Ile | His | Leu | Ser | Gly | Gly | Gly | Leu | Ser | Thr | Lys | Met | Ser |
| 355 | 360 | 365 | |||||||||||||
| Ile | Gin | Gly | Cys | Val | Ala | Gin | Pro | Ser | Ser | Phe | Leu | Leu | Asn | His | Thr |
| 370 | 375 | 380 | |||||||||||||
| Arg | Gin | Ile | Gly | Ile | Phe | Ser | Ala | Arg | Glu | Lys | 'Arg | Asp | Val | Gin | Pro |
| 385 | 390 | 395 | 400 | ||||||||||||
| Pro | Ala | Ser | Gin | His | Glu | Gly | Gly | Gly | Ala | Glu | Gly | Leu | Glu | Ser | Leu |
| 405 | 410 | 415 | |||||||||||||
| Thr | Trp | Gly | Val | Gly | Leu | Ala | Leu | Ala | Pro | Ala | Leu | Trp | Trp | Gly | Val |
| 420 | 425 | 430 | |||||||||||||
| Val | Cys | Pro | Ser | Cys | |||||||||||
| 435 |
| <210> | 3 |
| <211> | 24 |
| <212> | RNA |
| <213> | homo sapiens |
| <220> | |
| <223> | |
| <400> | 3 |
| aaaagcagaa | agagattacc | agcc | 24 |
| <210> 4 <211> 24 <212> RNA < 213 > homo | sapiens | ||
| <220> <223> | |||
| <400> 4 | |||
| ggctggtaat | ctctttctgc | tttt | 24 |
<210> 5 <211> 13 <212> PRT <213> homo sapiens <400> 5
Lys Val Ser Asp Leu Pro Arg Gin Trp Thr Pro Lys Asn 15 10 <210> 6 <211> 15 <212> PRT <213> homo sapiens <400> 6
Ser Ala Arg Glu Lys Arg Asp Val Gin Pro Pro Ala Ser Gin His 1 5 10 15
| <210> | 7 |
| <211> | 27 |
| <212> | DNA |
| <213> | homo |
| <220> | |
| <223> | |
| <400> | 7 |
sapiens
| attaggttat | |
| <210> | 8 |
| <211> | 28 |
| <212> | DNA |
| <213> | homo |
| <220> | |
| <223> | |
| <400> | 8 |
gaggtcagag ggaggtt sapiens
| gcagaaagag | |
| <210> | 9 |
| <211> | 28 |
| <212> | DNA |
| <213> | homo |
sapiens attaccagcc acagacgg
Ίο <2 20>
< 2 2 3>
<400> 9 gaatcgtggg ggtaatagag ttagcagg 28
Claims (24)
- Patentni zahtevki1. N-glikoziliran polipeptid, ki v bistvu obsega eno izned naslednjih aminokislinskih sekvenc:aminokisline 1-437 sekvence št. 2;aminokisline 1-409 sekvence št. 2;aminokisline 22-437 sekvence št. 2;aminokisline 22-409 sekvence št. 2.
- 2. Polipeptid, ki v bistvu obsega eno izmed naslednjih aminokislinskih sekvenc: aminokisline 1-437 sekvence št. 2;aminokisline 1-409 sekvence št. 2;aminokisline 22-437 sekvence št. 2;aminokisline 22-409 sekvence št. 2.
- 3. V bistvu čist polipeptid sekvence ID št. 2.
- 4. Polinukleotid, ki obsega eno izmed naslednjih nukleotidnih sekvenc: nukleotide 1-1600 sekvence št. 1;nukleotide 36-1346 sekvence št. 1;nukleotide 36-1262 sekvence št. 1;nukleotide 39-1346 sekvence št. 1;nukleotide 39-1262 sekvence št. 1;nukleotide 99-1346 sekvence št. 1;nukleotide 99-1262 sekvence št. 1.
- 5. Rekombinantna DNA, ki obsega polinukleotid po zahtevku 4.
- 6. Rekombinantna DNA po zahtevku 5, značilna po tem, da je nukloetidna sekvenca funkcionalno vezana na promotor.
- 7. Ekspresijski vektor, ki vsebuje rekombinantno DNA po zahtevku 5 ali 6.
- 8. Transformirana ali transficirana gostiteljska celica, ki vsebuje polinukleotid po zahtevku 4.
- 9. Protitelo proti polipeptidu po enem izmed zahtevkov 1 do 3 ali njegovemu epitopu.
- 10. Protitelo po zahtevku 9, značilno po tem, da je monoklonsko protitelo.
- 11. Postopek za dokazovanje polycythaemia vera, značilen po tem, da pri imunskem preizkusu (»imunoassay«) reagiramo polipeptid po enem izmed-TLzahtevkov 1 do 3 z enim ali več protiteles po zahtevku 9 ali 10.
- 12. Postopek po zahtevku 11, značilen po tem, da je uporabljeno protitelo poliklonsko ali monoklonsko protitelo po zahtevku 9.
- 13. Postopek za dokazovanje polycythaemia vera, značilen po tem, da je polinukleotid po zahtevku 4 dokazan z RT-PCR metodo ali s prenosno (»blotting«) metodo.
- 14. Zdravilo za zdravljenje polycythaemia vera, značilno po tem, da poleg običajnih dodatkov obsega še poliklonska ali monoklonska protitelesa po zahtevku 9 ali 10.
- 15. Zdravilo, ki obsega polipeptid po enem izmed zahtevkov 1 do 3 in najmanj en farmacevtsko prenesljiv dodatek.
- 16. Zdravilo, ki obsega polinukleotid po zahtevku 4 in najmanj en farmacevtsko prenesljiv dodatek.
- 17. Polipeptid po katerem koli izmed zahtevkov 1 do 3 za uporabo kot rastni faktor.
- 18. Uporaba polipeptida po katerem koli izmed zahtevkov 1 do 3 za proizvodnjo zdravila uporabnega kot rastni faktor.
- 19. Uporaba polipeptida po enem izmed zahtevkov 1 do 3 za proizvodnjo zdravila za zdravljenje pancitopenij in pancitopatij v kostnem mozgu in v obtoku.
- 20. Uporaba polinukleotida po zahtevku 4 za proizvodnjo zdravila za zdravljenje pancitopenij in pancitopatij v kostnem mozgu in v obtoku.
- 21. Uporaba polipeptida po enem izmed zahtevkov 1 do 3 za zdravljenje in/ali pomnoževanje endogenih celic in/ali uveljavljenih celičnih linij ex vivo ali in vitro.
- 22. Kit za dokazovanje polycythaemia vera, ki obsega najmanj en polinukleotid po zahtevku 4 ali njegov fragment, in/ali najmanj en polipeptid po enem izmed zahtevkov 1-3 in/ali najmanj eno protitelo po zahtevku 9 ali 10.
- 23. Kit za dokazovanje motenj hematopoietičnega sistema, ki obsega najmanj en polinukleotid po zahtevku 4 ali njegov fragment,-23in/ali najmanj en polipeptid po enem izmed zahtevkov 1 -3 in/ali najmanj eno protitelo po zahtevku 9 ali 10.
- 24. Kit za dokazovanje PRV-1-proteina po zahtevku 21 ali 22, značilen po tem, da je ELISA testni kit.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19849044A DE19849044A1 (de) | 1998-10-23 | 1998-10-23 | Das Gen PRV-1 und dessen Verwendung |
| PCT/EP1999/007238 WO2000024886A1 (de) | 1998-10-23 | 1999-09-30 | Das gen prv-1 und dessen verwendung |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SI20585A true SI20585A (sl) | 2001-12-31 |
Family
ID=7885492
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SI9920078A SI20585A (sl) | 1998-10-23 | 1999-09-30 | Gen PRV-1 in njegova uporaba |
Country Status (28)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US6686153B1 (sl) |
| EP (1) | EP1123392B1 (sl) |
| JP (1) | JP2002528077A (sl) |
| KR (1) | KR20010080883A (sl) |
| CN (1) | CN1190491C (sl) |
| AT (1) | ATE348109T1 (sl) |
| AU (1) | AU771772B2 (sl) |
| BG (1) | BG105460A (sl) |
| BR (1) | BR9915537A (sl) |
| CA (1) | CA2349211A1 (sl) |
| CZ (1) | CZ20011430A3 (sl) |
| DE (2) | DE19849044A1 (sl) |
| EA (1) | EA200100440A1 (sl) |
| EE (1) | EE200100234A (sl) |
| HR (1) | HRP20010294A2 (sl) |
| HU (1) | HUP0104954A3 (sl) |
| IL (1) | IL142664A0 (sl) |
| LT (1) | LT4877B (sl) |
| LV (1) | LV12722B (sl) |
| MX (1) | MXPA01004035A (sl) |
| NO (1) | NO20011961L (sl) |
| NZ (1) | NZ510970A (sl) |
| PL (1) | PL347413A1 (sl) |
| SI (1) | SI20585A (sl) |
| SK (1) | SK5402001A3 (sl) |
| WO (1) | WO2000024886A1 (sl) |
| YU (1) | YU29801A (sl) |
| ZA (1) | ZA200103210B (sl) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2000036102A2 (en) * | 1998-12-16 | 2000-06-22 | Genentech, Inc. | Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same |
| DE19947010A1 (de) * | 1999-09-30 | 2001-04-05 | Universitaetsklinikum Freiburg | Das Gen PRV-1 und dessen Verwendung |
| AU2008307643B9 (en) | 2007-09-28 | 2014-04-17 | Intrexon Corporation | Therapeutic gene-switch constructs and bioreactors for the expression of biotherapeutic molecules, and uses thereof |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1998050552A1 (en) * | 1997-05-06 | 1998-11-12 | Zymogenetics, Inc. | Novel tumor antigens |
-
1998
- 1998-10-23 DE DE19849044A patent/DE19849044A1/de not_active Withdrawn
-
1999
- 1999-09-30 US US09/830,189 patent/US6686153B1/en not_active Expired - Fee Related
- 1999-09-30 EA EA200100440A patent/EA200100440A1/ru unknown
- 1999-09-30 NZ NZ510970A patent/NZ510970A/xx unknown
- 1999-09-30 YU YU29801A patent/YU29801A/sh unknown
- 1999-09-30 EP EP99947439A patent/EP1123392B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1999-09-30 EE EEP200100234A patent/EE200100234A/xx unknown
- 1999-09-30 HU HU0104954A patent/HUP0104954A3/hu unknown
- 1999-09-30 PL PL99347413A patent/PL347413A1/xx not_active Application Discontinuation
- 1999-09-30 CA CA002349211A patent/CA2349211A1/en not_active Abandoned
- 1999-09-30 KR KR1020017005025A patent/KR20010080883A/ko not_active Application Discontinuation
- 1999-09-30 CZ CZ20011430A patent/CZ20011430A3/cs unknown
- 1999-09-30 MX MXPA01004035A patent/MXPA01004035A/es unknown
- 1999-09-30 AU AU60883/99A patent/AU771772B2/en not_active Ceased
- 1999-09-30 CN CNB998124834A patent/CN1190491C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1999-09-30 JP JP2000578440A patent/JP2002528077A/ja active Pending
- 1999-09-30 SI SI9920078A patent/SI20585A/sl not_active IP Right Cessation
- 1999-09-30 BR BR9915537-0A patent/BR9915537A/pt not_active IP Right Cessation
- 1999-09-30 DE DE59914061T patent/DE59914061D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1999-09-30 WO PCT/EP1999/007238 patent/WO2000024886A1/de active IP Right Grant
- 1999-09-30 SK SK540-2001A patent/SK5402001A3/sk unknown
- 1999-09-30 AT AT99947439T patent/ATE348109T1/de not_active IP Right Cessation
- 1999-09-30 IL IL14266499A patent/IL142664A0/xx unknown
-
2001
- 2001-04-19 ZA ZA200103210A patent/ZA200103210B/xx unknown
- 2001-04-20 NO NO20011961A patent/NO20011961L/no not_active Application Discontinuation
- 2001-04-20 BG BG105460A patent/BG105460A/xx unknown
- 2001-04-23 HR HR20010294A patent/HRP20010294A2/hr not_active Application Discontinuation
- 2001-05-22 LT LT2001055A patent/LT4877B/lt not_active IP Right Cessation
- 2001-05-22 LV LVP-01-61A patent/LV12722B/en unknown
-
2003
- 2003-12-05 US US10/727,619 patent/US20040259110A1/en not_active Abandoned
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP2005218453A (ja) | ８７個のヒト分泌タンパク質 | |
| JP2002518010A (ja) | ９４個のヒト分泌タンパク質 | |
| JP2002516103A (ja) | インターロイキン２１およびインターロイキン２２ | |
| JP2001524814A (ja) | ２８種類のヒト分泌タンパク質 | |
| JP2002533058A (ja) | ９７個のヒト分泌タンパク質 | |
| JP2002508167A (ja) | １１０個のヒト分泌タンパク質 | |
| JP2001521383A (ja) | ２０個のヒト分泌タンパク質 | |
| US5858701A (en) | DNA encoding an insulin receptor substrate | |
| US8703917B2 (en) | Epidermal growth factor receptor variants and pharmaceutical compositions thereof | |
| SI20585A (sl) | Gen PRV-1 in njegova uporaba | |
| BG106554A (bg) | Ген prv-1 и неговото приложение | |
| CN110713544A (zh) | 融合基因plekha6-ntrk3及其在lch中的应用 | |
| JP2002502601A (ja) | 樹状富化分泌リンパ球活性化分子 | |
| WO1999049041A1 (en) | Drm, a secreted protein with cell growth inhibiting activity, and related methods and compositions | |
| WO2012048667A1 (zh) | 表皮生长因子受体的外显子缺失变异体 | |
| WO2008118100A1 (en) | Method of enhancing migration of neural precursor cells | |
| Longo | Cloning and expression of HVACM, a cullin protein, from small cell lung cancer | |
| JP2003252802A (ja) | ヒト滑膜肉腫の治療薬剤 | |
| JP2002510192A (ja) | １８６個のヒトの分泌タンパク質 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| IF | Valid on the event date | ||
| KO00 | Lapse of patent |
Effective date: 20050722 |