SE446005B - Forfarande for framstellning av 3',4'-dideoxikanamycin - Google Patents

Description

79102734-8 2 aktiviteten hos ursprungsmaterialet kanamycin B, utan snarare uppnår en förbättrad eller modifierad 'an-tibakteriell verkan även mot de resistenta ' bakterierna. i _ Å andra sidan var det känt att butirosiner, som är aminoglykosidanti- biotika producerade av en Bacillus-art, är aktiva mot vissa kanamycin- och I ribostamycin-resistenta bakterier. Dessa butirosiner har identifierats som l-N- ((S)-2u-hydroxi-ll--aminobutyryD-li-O-B-D-xylofuranosyl- eller ribofuranosyl-nea- imin (se "Tetrahedron Letters" Vol. 28, sid. 2617-2620 (l97l); DE.-OS 19 145 27).

I Genom att jämföra den antibakteriella verkan av ribostamycin med verkan av butirosin B upptäckte man -att (S)-2-hydroxi-li-aminobutyryl-substituenten'på l- aminogruppen hos butirosiner spelar en viktig roll genom att göra ribostamycin ytterst aktivt även mot de resistenta bakterierna. Av denna upptäckt drog man slutsatsen attett aminoglykosidantibiotikum kan ges antibakteriell verkan mot ide *resistenta bakterierna genom att man inför en aminoacylgrupp i l- aminogruppen hos ett aminoglykosidantibiotikum. Efter denna upptäckt har l-N- aminoacyleringen applicerats på en .mångfald aminoglykosidantibiotika. Fram- gångsrik tillämpning av l-N-aminoacylering exemplifieras av amikacin (även kallat BB-KS), clvs.* l-N-((S)-2-h«ydr_oxi-4-aminobutyryl)-kanamycin A (se "Journal of Antibiotics" Vol. 25, sid 695-708 (-l972); US-PS 3,781 268). i _ Trots närvaron av 3'-' och lN-hydroxigrupper i amikacin-molekylen kan , amikacin inte inaktiveras av de kanamycin-resistenta bakterierna på grund av att 3'- och lP-hydroxigrupperna varken kan fosforyleras eller adenylyleras genom inverkan av I-N-((S)-2-hydroxi-#-aminobutyryD-substituenten i amikacin. Efter- som emellertid amikacin används allt oftare och i allt större omfattning på kliniker; kommer nya_ typer av resistenta bakterier, som är resistenta mot amikacin att uppträda. Under de allra sista åren har vissa rapporter visat att 4'- hydroxigruppen i amikacin adenylyleras" av vissa nya stammar av de resisistenta bakterierna, och att 3'-hydroxigruppen i amikacin fosforyleras (se Lex. “Anti- microbial Agents and Chemotherapy" sid. 619-624 (1977)).

Med hänsyn till ovan nämnda fakta och observationer kan man förvänta sig att, om 3'- och lfl-hydroxigrupperna kan avlägsnas från kanamycin A, sä skall den Bßlfl-dideoxikanamycin A som härvid eventuellt erhålls vara verksam även mot de nya typerna av resistenta bakterier.

Det har eincllertirl bekräftats experimentellt, att när kanamycin A endast iilslitts lör dvoxigc-iicririgsmctxiclcrri innefattande 3',(P-di-O-siilionylering och efterföljande behandling av 3',4'-di-O-sulfonsyraestern med natriumjodid och zinkpulver, som framgångsrikt kunnat användas vid halvsyntes av TJP-dideoxi- kanamycin B, så kan man likväl inte få Bßw-dideoxikanamycin A som förvänta- f: des. Ort-.aken hairtill iir att kanamycin A-rn-:ilekylen innehåller en T-hydroxigrupp intill T-hydroxigruppen, så att denna 2'-hydroxigrupp kan _sulfonyleras samtidigt med sulionylerlngen av 3'- och lV-hydroxigrupperna, med följden att när 2'- hydroxigruppen väl sulfonylerats, så kan den avlägsnas samtidigt som de sulfonylerade 3'- och lP-hydroxigrupperna avlägsnas genom behandling med natriumjodid och zinkpulver. _ Följaktligen har'vi ansett att Bßlfl-dideoxi-kanamycin A inte kan 'syntetiseras ur kanamycin A genom att applicera samma deoxigeneringsmetod « som den som infördes vid syntes av Bßlfl-dideoxikanamcyin B ur kanamycin B, såvida vi inte kan framställa och tillhandahålla ett sådant skyddat kanamycin A~ derivat, som skall tinderkastas det ovannämnda deoxigeneringsförfarandet; där 3'- -och lP-hydroxigrilpperna i kanamycin A är kvar i oskyddat tillstånd, medan den angränsande Zkhydroxigrlippen liksom alla övriga hydroxigrupper och samtliga aminogrupper föreligger i skyddat eller blockerat tillstånd. Emellertid observeras ingen större skillnad mellan 2'-,3'~ och lP-hydroxigrupperna i kanamycin A vad gäller deras reaktivitet, och följaktligen har det varit mycket svårt att finna något l örlarande, med vilket'T-hydroxigrupperi kan skyddas samtidigt som 3'- och lflhydrrixigrupperna bibehålls oskyddade. _ Vi har utfört omfattande forskning i ett försök att åstadkomma sådana lämpliga kanamycin A-derivat. Som resultat har vi nu funnit att ett sådant skyddat derivat av kanamycin A, som har 3'- och IP-hydroxigrupperna oblockera- de; som 'har en skyddad-eller oskyddad 2"-hydroxigrupp och som har de övriga . hydroxigrupperna (inklusive Zßhydroxigruppcn) liksom samtliga aminogrupper blockerade, framställs med hjälp av en kombination av ett sinnrikt val av naturen hos de hydroxi-Voch aminoskyddsgrupper som används, med ett omsorgsfullt utarbetat arrangemang av ordningsföljden för respektive steg för att skydda varje aminogrupp och varje hydroxigrupp, på så sätt att G-aminogruppen i kanamycin A, som är den mest reaktiva bland de fyra aminogrupperna i kanamycin A, först blockeras med en alkoxikarbonylgrupp, en aralkyloxikarbonyl- grupp, särskilt en bensyloxikarbonylgrupp, eller en aryloxikarbonylgrupp känd som någon av de konventionella aminoskyddsgrupperna; l-, 3- och PW-aminogrupperna i kanamycin A därefterwskyddas med en hydrokarbylsulfonylgrupp såsom en alkylsulfonylgr-uppl, en arylsulfonylgrupp eller en aralkylsulfonylgrupp; den fria ll'- hydroxigruppeiw och den alkoxikarbonylerade, aralkyloxikarbonylerade eller ary- loxikarbonylerade Q-arnínogruppen sedan kondenseras med varandra till bildning .av ett cykliskt karbarriat genom behandling med Lex. natriumhydrid, vilket resulterar i samtidigt skydd av lP-hydroxi- och óhaniinogrupperna; de båda 5- hydroxi- och T-hydroxigrupperna blockeras selektivt och samtidigt genom att 7910734-8" l;~ man däremellan iniör och bildar en brygga med en känd tvåvärd hydroxi- Sfkyddsgrupp, .såsom en aikylidengrupp, särskilt en isopropylidengrupp, cyklohexy- -lidengrupp, bensylidengrupp 'eller tetrahydro-Åi-pyranylidengrupp; den tidigare bildade 4',6'-karbamatringen ringklyvs genom behandling med alkali för att regenerera den fria lU-hydroxigruppen och den fria óßaminogruppen; och slutligen blockeras den fria G-aminogruppen med en alkoxikarbonyl- eller aralkyloxi- karbonylgrupp eller en alkanoylgruppfsåsoin' acetylfPâ detta sätthar vi lyckats framställa ett önskat, lämpligt skyddat derivat av kanamycin A, och följaktligen har vi nu lyckats åstadkomma en väg, med vilken halvsyntes av 3',#'~ dideoxikanamycin A uppnås.

Således har vi nu fördet första lyckats syntetisera föreningen Bßlfl-dideoxikanamycin A, och vi har även Syflfefisfifêt l-N-(Ol-hydroxi-(A- amino-alkanoyli-B'flß-dideoxikanamycin A-föreningarl särskilt i-N-(Z-hydroxi-B- aminopropionyl)-TJP-dideoxikanamycin i A och l-N-((S)-2-hydroxi-Li-amino- butyryl)~3',4'-dideoxikanamycin 'genom att kondensera l-aminogruppen i 354'- ' dideoxikanamycin A med en isoserylgrupp, särskilt en DL- eller L- eller D-2- hydroxi-B-aminopropionylgrupp, eller med en (SLZ-hydroxi-li-aminobutyrylgrupp.

Vi har vidare funnit att de kanamycin A-derivat som vi nu syntetiserat är verksamma mot en mångfald resistenta bakterier. f En första aspekt av uppfinningen avser därför ffBmSfällHíHg HV 3_',li'- dideoxikanamycin A mêd f0rmeln: ' i CHZNHZ ' NHZ i 79101734-8 i De fysikalisk-kemiska och biologiska egenskaperna för de erhållna föreningarna beskrivs' nedan.

'Bßlvfl-Dideoxikanamycin A föreligger i form av ett färglöst pulver, som inte visar någon-bestämd smältpunkt. Dess karbonat gav en elementaranalys " (C 144,22, H 7,34, N 10,4596) som väsentligen överensstämde med dess molekyl- formel (C18H36N4O9.l,l l~l2C_O3). Dess specifika optiska vridning var [alâå +11e° (c = 1, vatten). _ i l-N-(DL-Z-hydroxi-B-arninopropionyU-Zv'JV-dideoxikanamycin A före- ligger i form av ett färglöst pulver, som inte visar någon bestämd smältpunkt.

Specifik optisk vridning (o: ]É5=_+93° (c _: l, vatten). 1-N-((S)-2-hvdroxi-4-aminobutyryl)-3'JV-dideoxikanamycin A föreligger också i form av ettufärlöst pulver, som inte visarxnågon bestämd smältpunkt.

Specifik optisk vridning (onlâj: +9l° (c = i, vatten).l De minimala hämningskoncentrationerna (11 g/ml) för före- ningen enligt uppfinningen mot olika rnikroöïganismer bestämdes enligt en standard-serieutspädningsrnetod med användning av näringsagar-inkubations- _ medium vid 37°C, varvid bestämningen gjordes efter 18 tim-mars inkubering. Som jämförelse bestämdes även minimala hämningskoncentrationen för kanamycin A, amikacin och dibekacin under samma försöksbetingelser. De sålunda erhållna försöksresultaten visas i Tabell l nedan som antibakteriella spektra för de erhållna föreningarna. '791Û754*8 .mwLOL R _ n< mb o män wflfi mm .H mmßm mw wmonfiwßnmæ mmcofioußwmm . 4 _ _ mwwfl Q: wm d mmßf @m.fl @m.fi mN_@ OOHA ~fl|M flflou mflnvflhwflomm mm.H @m.H mmßfl _@m,H ßN.@ NH_n Nfi|M fifioo wfizoflnmßomm “_ _ _ _ æmom u. Nw ooH^ ~fi_m Nfl.n ~H.m oofl A OOHA mmflnoasmøfi wflfiwflmpßfim mw m~.w Nflßm Nfinm mfiwfl mhwfl Hoofi How mmpsa maflufimm _ _ . . « _ N _ mofl mmwflahwflflgw w» o Nä m m>.o Nä M mw w mm msvoooofiñzmwpw | _~fi.m _ Nfißm mwßm _mw.@ m~_@ »mmm ma = 4 NH.m wm.H ~fl“n mwflm m~.@. oflwm ms = @>.o_ wm.~ @>_o @m.H ~H.m m.~fi _Hom< _ = m>.o ~H.fi _wm.H ~H@m_ NH_n _~H.w_ mmow ._ _ _ __ møwHøm møooøooaæsmmvm flflOdMwPflnH . M ...C _ N .ut ÉflOÜMHå ~ ...C _ d. EWHÉÜNHOOH vmwti PWUB wcëøhmm wcmcuëm mcwcmåm _ .nfloäHmrdM AÉÉE v .oHz .E mcficuhmmv < Sv»Emcmx~xowv=v.&.__mAïcommohmocmE Jafn-:>.>~=ß°===m-&¿x°.U>;-~Amv-zL~ ~ :wnmh .Eumxwnaw :oo cÜmšEm .< cfišëmcmx umE wflmšåšwh E> R mfm-Mxohušfiwlqnïzå .Q .E wcwcwhmmc < .Eubcmcwxfixouwfiv .S .E wcïwšmv < cwwàEwcmxqxomvwvJann .Q mbxumw wzofihuwxmfipc/w 7910734-8 mN.m QOHA oofl^ oofl^ oofl m_NH oofi^ oo~^.

Q0fl~ OQHA mm mmfiw OOHA @@fl^ @m.H_ mßmfi m>.o m.~H æ>“o ~H.m .wm.fl mN.@ m~.w Nfl_m Nfißm m~_w mw~w @m.H Nfi.m wm.H om @m~H om @m.fi m~»@ ~fl_m mflmfi mßwfl m-fi m.~H mßwfi m.Nfi m~.@ mfiwfl m~.@ oofl^ o@d^ m_NH ¶ oofi QQHA _mfl,m .oofl^ mßmfi oofl ¶ooH^ om mfiwfi ooH^_ OOHA mN_@ om oofi A oofi A oofi A 0ofl^ oofi A OOHA oofl^ oofl^ oo~^ m~.@ QOHA oofi^ ooH^¶ OQHA møvflcmhoohm Nwlw mwcflznm Dfim = www nmvomnonmpcm mD< finwmvvmn mßwwonm Q mflmvohm ,bM.>& : o .ma mflodmuflwohm ß = Qom = a«o mflpmfihwm ¶ som = Oma mflHwfimßmHM ._ ~...-. .._._..._.~_._.-.- ~791o7s4-a B Éoin Irarngâr av tabellen own uppvisar 3',/fl-dideoxikanamycin A en anmärkningsvärt högre antibakterielllverkan mot olika resistenta bakterier än moderföreningen kanamycin A, »och l-N-(ßl-Z-hydroxi-lß-aminobutyryl)-3',4'-di- .deoxikanamycin Auppvisar en* högre antibakteriell verkan-mot de olika resistenta bakterierna än amikacin, dvs. l-N-((S)-2-hydroxi-l+-aminobutyryU-kanamycin A.

Denna egenskap, att föfeflingfirna enligt uppfinningen uppvisar en förbättring av den antibakteriella effekten mot de resistenta bakterierna jämfört med de kända föreningarna kanamycin Å och' amikacin, kan förväntas' ökas i framtiden, allt eftersom amikacin får en minskad antibakteriell verkan mot de resistenta bakterierna. I enlighet med de nya resultat som erhållits av föreliggande, uppfinnare genom uppfinningen kan man kanske säga, att när ett 'aminoglykosidantibiotikum modifieras genom att det utsätts för 3',4'-di-deoxi- genering och l-N-aminoacylering i kombination, så ger en sådan modifiering ett aminoglykosidantibiotikumïderivat, som uppvisar en högre antibakteriell verkan mot de resistenta bakterierna än sådana som skulle kunna erhållas genom att utsätta aminoglykosidantibiotikumet antingen för Bßlifl-di-deoxigenering eller 1- N-aminoacylering enbart. _ _ _ Syraadditionssalterna av föreningarna med mfffleln (i) enligt uppfinningen kan vara farmaceutiskt godtagbara sådana och innefattar i Lex. salter därav med en .farmaceutiskt godtagbar 'Oorganisk syra, såsom klorvätesyra, bromvätesyra, svavelsyra, fosforsyra, salpetersyra och liknande, - eller med en farmaceutiskt godtagbar organisk syra, såsom ättiksyra, maleinsyra, citronsyra, askorbinsyra, metansulfonsyra och liknande. _ Bßlfl-dideoxikanamycin A-föreningarna med formeln (I) enligt uppfinningen erhålls vanligtvis i.form av den fria basen, ett hydrat eller ett karbonat- därav' från förfarandet för framställning av detsamma, men det kan omvandlas till ett farmaceutiskt godtagbart syraadditionssalt genom omsättning med en farmaceutiskt godtagbar oorganisk eller organisk syra såsom beskrivits ovan. ' ' I _ u Samtliga föreningar med formeln (l) enligt upp- finningen har låg toxicitet, vilket demonstreras av att de samtliga uppvisar ett LDflï-värde, som inte är mindre än 200 mg/kg vid intravenös injektion på möss för bestämning av deras akuta toxicitet. Föreningarna enligt uppfinningen är därför användbara vid terapeutisk behandling av infektioner av olika gram- _ negativa och gram-positiva bakterier, inklusive de resistenta bakteriestammarna.

Vid .uppskattning av den akuta' toxiciteten genom intravenös injektion av gentamicin, dibekacin och l-N-acylderivat därav, av vilka vissa i stor omfattning används kliniskt, har man funnit att dessa föreningar samtliga har ett LD”- 7910734-8 9 värde i omrâdet 80-120 rnglkg Följaktligen är den låga toxiciteten hos de ovan angivna föreninyzirna med formeln (l) enligt uppfinningen rzirimärltningsvärd, och den låga toxiciteten hos föreningarna enligt uppfinningen tillsammans med att den antibakteriella effekten bibehålls väsent~ ligen-lika hög som effekten av de 'ovan beskr-ivna, kända läkemedlen, underlättar den kliniska användningen av föreningarna och uppfyller de moderna I kraven på effektiva och mindre toxiska läkemedel.

Er. förstaaspekt av uppfinningen avser ett förfarande för framställning ' av föreningen inecl den ovan visade formeln (l)'. Således avser den första aspekten av uppfinningen ett förfarande för framställning av TJP-dideoxikana- mycin A, som innefattar följande steg: (a) Behandling av ett skyddat derivat av kanamycin A med-formeln: w (II) där varje A betecknar en alkylsulfonylgrupp innehållande l- ll kolatomer, en arylsulfonylgrupp, särskilt tosyl, eller 'en aralkylsulfonylgrupp, särskilt bensyl- sulionyl, som aininoskyddsgrupp, ß betecknar en alkoxikarbonyllgrupp inne- hållande 2 till 5 kolatomer, .en aralkyloxikarbonylgrupp, särskilt bensyloxi- karbonyl, eller en aryloxikarbonylgrupp, och Y betecknar en tvävärd hydroxi- skyddsgrupp, särskilt en alkylidengrupp innehållande l till 6 kolatomer (före- trädesvis isopropyliden), en cyklohexylidem, en bensyliden- eller en tetrahydro-/l- pyranylidengrupp, 791073448 i 10 med ett basiskt reagens såsom natriL-irritxydrid under vatteníria betingelser i ett organiskt lösningsmedel för framställning av- ett 4',6'-cyl med. formeln: /mrnz i _ inn o i (III) där A och Y har den ovaniangivna definitionen; - (b) omsättning av- fPß-karbamatföreningen med formeln (III) med 2,2- dimetoxipropan, Ll-dirnetoxicyklohexan, bensaldehyd, dimetylacetal eller 5,6- dihydro-lß-metoxi-ZH-pyran under vattenfria betingelser i ett organiskt lösnings- medel i närvaro av en surfkatalysator för framställning av ett 2',5-O-skyddat derivat med formeln: i 6: i HNHzC 7910734-8 ll där A och Y har den ovan angivna definitionen, och X kan vara samma som eller skild från Y och betecknar en isopropyliden-, cyklohexylidem, bensyliden- eller 'tetrahydro-lf-pyranylidengrupp, följt av isolering av det 2',5-O-skyddade deri- vatet (IV) från det som biprodukt bildade 2',3'-O-skyddade derivatet; (c) hydrolys av den 2',5-O-s| alkaliska betingelser för klyvning av ÅlZG-karbamatringeri och för regenerering av den fria lP-hydroxigruppen och den fria 6'-aminogruppen,_ följt av alkoxikarbony- lering, aralkyloxikarbonylering eller alkanoylering (särskilt acetylering) av den fria G-amlnogruppen i den ringkluvna produkten, så att man får ett 324'- dihydroxi-derivat med formeln: B 'HNHQC ' OH' HO _ där A, Y och X* har den ovan angivna innebörden och B' betecknar en alkoxikarbonylgrupp innehållande 2 till 5 kolatomer, en aralkyloxikarbonylgrupp, särskilt bensyloxikarbonyl, eller en alkanoylgrupp, särskilt acetyl; (d) sullonylering av 3',4'-dihydroxi-föreningen med formeln (V) genom omsättning med 'en alkylsulfonyl- eller aralkylsulfonylklorid eller -bromid med formeln: Rlsozci (vi) eller RISOKZBr (VP) eller en motsvarande sulíonsyraanhydrid med formeln: (izlsogzo (vw) där Rix betecknar en alkylgrupp irmehâllaiwde l till 4 kolatomer eller en - 7910734-8 12 aralkylgrupp, särskilt bensyl, som sulfonyleririgsrriedel under vattenfri-a betingelser i ett organiskt lösnings- . medel för framställning av ett 2",3'JP-tri-O-sulffmylderivat med formeln: IHA ' 1 - F' ' 7 I O 02 JR där A, B', RI, X och Y har den ovan angivna definitionen; (e) omvandling av den erhållna 2",3',lfl-tri-Oæulfonyl-kanamycin A- 'föreningen till en T-eno-kanamycin A-förening genom behandling med en ' alkalimetalljodid i frånvaro av zinkmetallpulver; (i) omvandling av Bl-eno-kanamycin A-föreningen till en 3',ll'-dideoxi- kanamycin A-förening genom reduktion med väte i närvaro av en hydrerings- katalysator för mättning 'av den Bßlfl-omättade bindningen i T-eno-kanamycin A- föreningen; n _ (g) eliminering av de hydroxiskyddsgrupper (X och Y) som är kvar i 5-, 2'-, (Pl- och 6"-ställningarna i kanamycin 'A-íöreningen genom syrahydrolys på känt sätt; I _ U I I' I (h) eliminering- av denlaminoskyddsgrupp (B') som är kvar vid 6'- aminogruppen i kanamycin A-föreningen på känt sätt; _ (i) elimineriiag av den ZWO-sulfonylgrupp FOZSRI) som är kvar vid 2"- hydroxigruppen och även samtliga sulfonylgrupper (A) som är kvar vid l-, 3- och T-arninogrupperna i kanamycin A-'íöreningen genom behandling med en alkali- metall eller en jordalkalimetall i flytande ammoniak; och varvid vart och ett av de ovan nämnda stegen (g), (h) och (i) utförs i någon godtycklig, valfri följd av dessa steg efter varandra och vid godtycklig tidpunkt 7910734-8 13 efter det att steg (d) för reaktion Inellan 3',fiHdihydroxi-kanarnycin A-löreningen med formeln (V) och sulfonyleringsrnedlet (Vi), (Vl') eller (Vl") har utförts.

Vid förfarandet enligt den först-a aspekten av uppfinningen är det därför möjligt att som en utföringsform eller en modifikation därav utföra 'förfarandet via en sådan väg, där (l) det ovannämnda steget (d) följs av t.ex. nedan angivna successiva steg i följande ordn-ingsföljd: t I , - omvandling av .den erhållna 2",3',lißtri-O-sulfonylkanamycin A-för- eningen med formeln (Vll) till motsvarande 3'-eno-kanarnycin A-förening med formeln: B fnimzc ligg o- »MM-___ x NHA (VIIKI) 2" 0-02 SR 1 genom behandling .av föreningen (Vll) med en alkalimetalljodid i frånvaro av zinkmetallpulver; -' eliminering av-de hydroxiskyddsgrupper (X och Y) som är kvar i 5-, 2'-, 41"- och 6"~ställningarna i F-eno-kanamycinA-föreningen (VIII) genom syrahydro- ' lys på känfsätt; - omvandling av den sålunda partiellt deblockerade T-eno-kanamycin A-föreningen till 'motsvarande Iåßlfl-dideoxikanainyicin A-förening genom reduk- tion med väte i närvaro av en hydreringskatalysator för att mätta 'den 324'- omättade bindningen i T-eno-kanamycin A-föreningen; - eliminering av den aminoskyddsgrupp (B') som är kvar vid 6'- aminogruppen (B') i den 3',4'-dideoxikanamycin A-förening som erhållits som hydreringsprodukt i det föregående steget; 7910734-s '14 - elixninorinig från den sålunda partiellt ytterligare deblockerade 3214'- . dideoxikanamycin A-föreningen av den återstående 2"-O-sulfonylgrupp (-OZSRI) som är kvar vid ï-hydroxigrtxppen och även samtliga sulfonylgrupper (A) som är kvar vid I-, 3- och IW-airninogrupperna i Bfllfl-dideoxikanamycin A-föreningen genom behandling av den senare med en alkalirrietall .eller en jordalkalimetall i flytande ammoniak, varigenom man får den önskade föreningen' 3',4'~dideoxi- kanam ycin A; rellenalternativt (2) det ovannämnda steget' (d) följs av 'de nedan angivna efterföljande stegen i följande ordning: - omvandling av den' erhållna 2",3',4'-tri-O-sulfonyl-kanamycin A- föreningen med formeln (-VII) till motsvarande ï-eno-.kanamycin A-förening med formeln (VIII) genom behandling av föreningen (VII) med en alkalimetalljodid i frånvaro av zinkmetallpulver; _ \ - omvandling av 3'-eno-ka'namycin A-föreningen (VIII) till motsvarande . Bßlif-dideoxikanamycin A-förening genom reduktion med väte i närvaro av en hydreringskatalysator för att mätta den 3',4'-omättade bindningen i 3'-eno- kanamycin A-föreningen; ' _ - eliminering av den aminoskyddsgrupp (B') som är kvar vid 6'- aminogruppen iden sålunda erhållna Bßßl-dideoxikanamycin A-föreningen på känt sätt; ' I _ -eliminering från den sålunda 'partiellt deblockerade Bßlfl-dideoxi- I- » kanamycin A-'fören-ingen av de hydroxiskyddsgrupper (X och Y) som är kvar i 5-, 2'-, ll"- och 6"-ställningarna i Bßw-dideoxikanamycin A-föreningen genom syrahydrolys på. känt sätt; och Ä -eliminering från den sålunda partiellt ytterligare deblockerade 334'- . dideoxikanamycin A-föreningen av den återstående 2"-O-sulfonylgrupp (-O2SR1) som-är kvar vid ïß-hydroxígruppen och även av samtliga sulfonylgrupper (A) som är kvar vid I-, 3~ och 3"-aminogrupperna i 3',4'-dideoxikanamy_cin A-föreningen genom behandling av den' senare med en alkalimetall eller jordalkalimetall i flytande ammoniak, varigenom man får den önskade föreningen 3',4'-dideoxi- kanamycin A; I . I eller som ytterligare alternativ. (3) det ovannämnda steget (d) följs av de nedan angivna senare stegen iíöljande ordningsföljdzi -omvandling av den erhållna 2",3',4'-tri~O-sulfonyl-kanamycin A-för- eningen med formeln (VII) till motsvarande Bßeno-kanamycin A-förening med formeln (VIII) genom behandling av föreningen' (VII) med en alkalimetalljodid i frånvaro av zinkmetallpulver; 7910754-8 '15 ~eliiiiimrring från ïeno-kaiiairiyrirx A-lörenirigeri (Vlll) av de hydroxi- skyddsgriiiuiaer (X och Y) som är kvar i S-, 2'-, och 14"- och 6"-ställningarna i 3'- eno-karxainycin A-föreningen genom syrahydrolys på känt sätt; ~eliminering från den sålunda partiellt deblockerade Bßeno-kanamycin Afföreningen av den återstående aminoskyddsgrupp som är kvar vid 6'- amínogruppen i T-eno-kanamycin A-före-ningen på känt sätt; - eliminering från den sålunda partiellt ytterligare deblockerade 3'-eno- _ kanamycin A-'föreningenavden återstående ZWO-sulfonylgrupp (-O2SRJ) som är kvar vid 2"-hydroxigruppen ochäven av samtliga sulfonylgrupper (A) som är kvar vid l-, 3- och 3"-aminogrupperna i Bkeno-kanamycin_A-föreningen genom behandling av den senare medlen alkalimetall eller jordalkalimetall i flytande ammoniak; och “ ~omvandling av den sålunda helt deblockerade 3'-eno-kanamycin A- föreningen till Bßlfl-dideoxikanamycin A genom reduktion 'med väte i närvaro av en hydreringskatalysator' för att mätta den 3',4'~omättade bindningen i 3'-eno- kanamycin A-föreningen, varigenom man får den önskade föreningen 324'- dideoxi-kanarnycin A.- _ _ ' Vid_ förfarandet enligt den fÖfSIö aspekten av uppfinningen medför steget (d), där 3',~'4'-'dihydroxiföreningen (V) får reagera med en alkylsulfonyl- eller aralkylsulfonylhalogenid (Vi) eller (V-l') eller en motsvarande sulfonsyra- anhydrid (Vl"), sulfonylering av 2"-hydroxigruppen i föreningen (V), och steget (e), där den erhållna 2",3',ÅU-tri-O-sulfonyl-föreningen, (VII) få reagera med en 'alkalimetalljodid, måste utföras i frånvaroavzinkmetallpulver för att åstad- komma Bßenoeringen. Om zink skulle vara närvarande i detta steg (e), så skulle det åtföljas av bildning .av en Kaziridinring mellan' ZW-aminogruppen och 2"- sulfonyloxigruppen, vilket ger ett oönskat derivat. Det är därför att föredra att dessförinnan skydda ZW-hydroxigruppen i 3',lß-dihydroxiföreningen (V) med en lämplig hydroxiskyddsgrupp, innan föreningen (V) omsätts med sulfonylerings- medlet med formeln (Vl), (VI') eller (VI"). Förfarandet enligt den andra aspekten av uppfinningen kan vidare modifieras, så att ett steg, där 2"-hydroxigruppen i föreningen (V) skyddas, inskjuts i detsamma.

En andra aspekt av uppfinningen avser därför, som en modifiering av förfarandet enligt den andra uppfinningsaspekten, ett förfarande för fram- ställning av 3',4'-dideoxikanamycin A, som innefattar följande steg: (a) behandling av ett skyddat' derivat av kanamycin A med den tidigare visade formeln (ll) med ett basiskt reagens såsom natririrnhydrid under vattenfria betingelser i ett organiskt lösningsmedel för att framställa det 4',6'-cykliska karbamatderivatet med den tidigare visade formeln (lll); 7910-734-8 i ,l6 (b) ornsiiftning av 4',6'-l formeln (ill) iried LZ-dimetoxipropari, lJ-dimetoxicyklohexan, berisaldeiiyd, dimetylacetaleller- 5,6-dihydro-ll-metoxi-ZH-pyran under vattenfria betingelser i ett organiskt lösningsmedel i närvaro av en sur katalysator för framställning av detBZQS-O-skyddade derivatet med den tidigare visade formeln (IV), följt av isolering av det 2',5-O-skyddade derivatet (Vl) från det som biprodukt bildade 2',3'-O-skyddade deljivatet; _ g _ (ni) skydd av 2"-hydroxigruppen i den 2',5-O-skyddade föreningen med formeln (IV) genom (l) omsättning av denna 2',5-O-skyddade förening (IV) med acetylklorid eller acetylanhydrid i pyridin för framställning av ett 3',2"-di-O- i acetylerat derivat med formelriz' HNHZC där A,_ X och Y har de ovan angivna definitionerna, och varje D betecknar en acetylgrupp, i _ _ _ _ (2) efterföljande behandling 'av det 3',2"-di-O-acetylerade derivatet (IV') med en jainmoniakalisk alkanol, särskilt ammoniakalisk etanol, för' företrädeseliminering av 2"-acetylgruppen därifrån, så att man får motsvarande T-mono-O-acetylerade derivat, och (3) reaktion av detta Zfl-mono-O-acetylerade derivat med 3,4- dihydro-ZH-pyran under vattenfria betingelser i ett organiskt lösningsmedel för omvandling av Zf-hydroxigruppen till en 2"-tetrahydropyranyloxigrupp; 7910734-8 17 (d) hydrolys av den erhållna 2"-tetrahydropyranyloxi-ll-',6'-l produlftern under alkalislca betingelser för elimincring av BHO-acetylgruppen därifrån och för klyvni-ng av lfióßkarbarnat-ringen, vilket ger ett TRO-skyddat ríngkluvet derivat med formeln ' " 'WA HZNHZC l .ÉO .

OH F10 ~ o-zn - där A, X och Y har den ovan angivnà definitionen och Z betecknar en tetrahydropyranylgrüpp Ü i - följt av all-çoxikarbonylering, aralkyloxikarbonylerirlg eller alkanoyleríng av den fria Q-arninogruuppen i den 2"-O-skyddade ringkluvna produkten med formeln (IV") till ett 3',lV-dihydroxi-ZWO-skyddat derivaf med formeln: ' B-'HNH ' NHA 2 7910734-s i 18 där: X, Y och Z har den ovan angivna definitionen, och B" betecknar en alkoxikarbonylgrupp innehållande 2 till 5 kolatoiner, en aralkyloxikarbonylgrupp, i särskilt bensyloxikarbonyl, eller en alkanoylgrupp, särskilt acetyl; ' (d')_ sulíonylering av det 3',lV-dihydroxi-2"-O-sl formeln-(V') genom reaktion med en alkylsulfonyl- eller aralkylsulfonylklorid eller -bromid med den ovan angivna formeln (VI) eller (VP) eller en sulfonsyraanhydrid _ med den ovan angivna formeln .(_VI") under vattenfria betingelser i ett organiskt lösningsmedel, 'särskilt i pyridin, för framställning av ett Bßlv-di-O-sulfonylderi- ai-vat med formeln: _ _ .- I - 0 _ - ' ' ' O-OZSR _ l __ é L O .R SOZ-O i'¿ B "HNH2C_ l o _. - -_-_ x (VIP) O-Z ~ där A, B", RI, X; Y och Z har den_ovan angivna definitionen; (e') omvandling 'av _den .erhållna 3',1+'-di~O-sulfonyl-kanamycin A-för- , eningen till T-eno-kanamycin Af-föreningen genom behandling med en alkali- metalljodid i närvaro av zinkmetallpulver eller med enbart natriumjodidå (F) oinvandling av Bkeno-kanarnycin A-íöreningen till en Bß-lfl-dideoxi- kanamycin A-förening genom reduktion med väte i närvaro av en hydrerings- katalysator för att mätta den 3',4'-omättade bindningen lT-eno-kanamycin A- föreningen; 7- I (g') eliminering av de hydroxiskyddsgrupper (X, Y och Z), som är kvar i 5-, 2'_-, 4"- och 6"- liksom 2"-ställningarna i kanamycin A-iöreningen genom syrahydrolys; 7910734-8 19 (h') eliininering av den arninoskyddsgrupp (B") som är kvar vid 6'- amínogruppen i kanamycin A-föreningen på känt sätt; ^ (i') elimineriiwg av samtliga sulfonylgrupper (A) som är kvar vid l-, 3- och Bfl-aminogriipperna i kanamycin A-föreningen genom behandling med en alkalimetall eller jordalkaliinetall i flytande ammoniak; och varvid vart och ett av de ovan angivna stegen (g'), (h') och (i') utförs i godtycklig, valfri ordningsföljd av dessa steg efter varandra och vid godtycklig tidpunkt efter det att steget (d'), där 3'JP-dihydroxi-kanamycin A-föreningen med formeln (V') sulfonyleras med sulfonyleringsmedlet (Vi), (Vl')_eller (Vl"), har utförts.

Vid förfarandet enligt den andra aspekten av uppfinningen är det även möjligt att, som en utföringsform 'eller en modifiering därav, utföra föreliggande förfarande via en sådan väg, där (l) det ovannämnda steget (d') följs av t.ex. de nedan angivna successiva stegen i följande ordningsföljd: -eiiminering av de hydroxiskyddsgrupper (X, Y och Z) som är kvar i 5-, 2'-, 4"- och 6"- liksom 2"-stäliningarna i Jßlß-di-Ofsulfonyl-kanamycin A- föreningen med formeln (Vli') genom syrahydrolys på känt sätt; - omvandling av den erhållna partieilt deblockerade Bßlß-di-O-sulfonyl- kanamycin A-föreningen (dvs. i G-N-alkyloxikarbonyl- eller G-N-aralkyloxi- l 3'-eno-kanamycin A-förening genom behandling med en alkalimetalljodid i närvaro av zinkmetallpulver eller med natriumjodid enbart; -omvandling av den erhållna T-eno-kanamycin A-föreningen till mot- svarande Bfllß-dideoxikanamycin A-förening genom reduktion med väte i närvaro av en hydreringskatalysator för att mätta den Bßlfl-omättade bindningen i 3'-eno- kanamycin A-föreningen; -eliminering av den .aminoskyddsgrupp (B") som är kvar vid 6'- aminogruppen i den Bßlfl-dideoxikanamycin A-förening som erhölls som hy- dreringsprodukt vid det föregående steget på känt sätt; och _ -eliminering från den sålunda partiellt ytterligare deblockerade 354'- dideoxikanamycin A-föreningeni(dvs. l,3,3"-tri-N-sulfonyl-få'JP-dideoxikanamyciri Ä) av samtliga sulfturiylgrupper (A) som är kvar vid l-, 3- och T-axninogrupperna i v Bßlfl-dideoxikanamycin A-föreningen, varigenom man får den önskade föreningen Bßêfl-dideóxikanarriycin A: eller alternativt (2) det ovannämnda steget (d') följs av de nedan angivna efterföljande stegen l följande ordning: -iomvandling av den erhållna TJV-di-O-sulfonyl-kanamycin A-för- eningen med formeln (Vli') till motsvarande T-cno-kanarnycin A-förcning med formeln: ;r79io734fs '20 (VIII') o-Z genom behandling av föreningen (VIl') med en alkalimetalljodid i närvaro av ~ zinkmetallpulver eller med enbarfc natriumjodid; I-omvandling av Bkeno-kanamycin A-föreningen till motsvarandellßfr- ' dideoxikanamycin A-förening' genom reduktion med väte i närvaro av en hydreringskatalysatpr för at-t mätta den Bßlfl-ornättade bindningen i 3'-eno- kanamycin A-iöreningen; " _ t g - avlägsnande från den erhållna Bßllldideoxikanamycin A-föreningen av' den återstående aminoskyddsgrupp (B") som är kvar vid óßaminogruppen i 3514'- dideoxikanamycin' A-föreningen pâkl<änt sätt; i _ -avlägsnande från den sålunda partiellt deblockerade 3',4'-dideoxi- kanamycin A-föreningen av de hydroxiskyddsgrupper (X, Y och Z) som är kvar i 5--_,-2'-, ll"- och 6"- liksom .2"-ställningarna i Bßlfl-dldeoxikanamycin A-íöreningen genom syrahydrolys på känt sätt; -avlåigsnandc från den sålunda particllt ytterligare clcb-lockcrdde 324'- dideoxikanarnycin A-Iöreningen av samtliga sulfonylgrupper (A) som är kvar vid l-, 3- och Bmaminogrnpperna därav, varigenom 'man får den önskade föreningen TW-dideoxikanamycin A; _ .eller som ytterligare alternativ (3) det ovannämnda steget (d') följs av de nedan angivna stegen i följande ordningsföljd: 7910734-se 21 - omvandling av den erhållna 2'Jflëdi-O-»sulfonylkanamycin .IX-föreningen med formeln (Vll') till motsvarande T-eno-kanainycin A-förening med formeln (Vlll') genom behandling med en alkalirrietalljodid i närvaro av zinkmetallpulver eller med riatriumjodid enbart; _ i -avlägsnande från Bßeno-kariainycin A-föreningen av den återstående aminoskyddsgruppen (B")'vid G-aminogruppen därav på känt sätt; _ -avlägsnande från den sålunda partiellt deblockerade Zfl-eno-kanamycin A-föreningen av _de hydroxiskyddsgrupper (X, Y och Z) som är kvar Ii 5-, 2'-, 4"- och 6"- liksom 2"-ställningarna därav genom syrahydrolys på känt sätt; -avlägsnande från den sålunda partiellt ytterligare deblockerade 3'- eno-kanainycin A-föreningen av samtliga sulfonylgrupper (A) som är kvar vid 1-, 3- och ZW-aminogrupperna i T-eno-kanamycin A-föreningen genom behandling av -denisenare med en alkaliinetall eller en jordalkalimetall i flytande ammoniak; och -omvandling av den sålunda helt deblockerade,T-eno-kanarnycin A- föreningen till_3',4'-dideoxikahamycin A genom reduktion med väte i närvaro av en hydreringskatalysator för att mätta-den BQIP-omâittade bindningen i 3'-eno- kanamycin A-föreningen, varigenom man' får .den önskade föreningen 354'- dideoxikanamycin A.

Förfaraiidet enligt den första aspekten av uppfinningen beskrivs nu i detalj. , *Först och främst kan framställningen' av det skyddade derivatet av kanamycin A med formeln (Il), som används som utgångsmaterial vid förfarandet, utföras påföljande sätt. Kanamycin A används som utgångsmaterial, och dess 6'- aminogirupp skyddas genom att man selektivt alkoxikarbonylerar, aryloxi- karbonylerar eller aralkylokikarbonylerar denna aminogrupp på känt sätt för att införa den aminoskyddande' alkoxikarbonyl-, aryloxikarbonyl- eller aralkyloxi- karbonylgruppen (B). Eftersom óßaminogruppen är mycket mer reaktivän de andra aminogrijpiaerna i kanamycin A, så kan aininoskyddsgruppen (B) av alkoxikarbonyl-, aryloxikarbonyl- eller aralkyloxikarbonyltyp införas med före- triidc i (f-aininogruppcn, Lex. genom 'att oinsíitta cn rnoldel kanamycin A (fri bas) i vatten med 0,5 till 3 moldelar klorformiat med formeln: BCl I där B betecknar en alkoxikarbonylgrupp med 2 till 6 kolatomer, en aryloxikar- .bohylg-rupp, såsom fenyloxikarbonyl, eller en 'aralkyloxikarbonygrupp, såsom 'bensyloxikarbonyk vid en teinperatiir av O till l0°C 'enligt Kaxvaguchi et alzs -metod såsom beskrivs i Lex. "Journal of Antihiotics" 25, 695-708 (1972) eller US- 7910734-se 22 PS 3 781 268. Det lir då lämpligt att framställa t.ex. (f-N-bensyloxikarbonyl- -kanamycinA enligt metoden i Exempel l i US-PS 3 925' 353. Den så framställda föreningen éßN-alkoxikarbonylq 'óßN-aryloxikarbonyl- eller G-N-aralkyloxi- karboriyl-kanamycin A kan omvandlas til! motsvarande l,3,3"-tri-N-sulfonyl- kanamycin _A genom alkylsulfonylering, arylsulfonylering eller aralkylsulfony- lering däravi ett organiskt lösningsmedel såsom vattenhaltig-dioxan.

Framställningen av l,3,3"-tri>N-sulfonyl-kanamycin' A-derivatet kan företrädesvis utföras t.ex'. på följande' sätt. G-N-skyddat kanamycin A får reagera 'med en väsentligen stökiometrisk mängd (dvs. 3 moldelar eller mer) av en sulfonsyraklorid med formeln: ' ' _ 2 - R SOZCi .där RZSOZ- har samma betydelse som i-den ovan nämnda gruppen A, såsom tosylklorid, i ett inert organiskt lösningsmedel såsom dioxan eller vattenhaltíg dioxan vid en temperatur av 30 till 50°C i närvaro av en mängd .alkali såsom natriumkarbonat, så att man- får 6'-'N~skyddat-l,3,3"-tri-N-sulfonyl- kanamycin A. Det sålunda erhållna l,3,3"-tri~N-sulíonylerade kanamycin A får sedan reagera med ett alkylidenyleringsmedel, ett aralkylidenyleringsmedel, ett cyklohexylidenyleringsmedel, såsom l,P-dirnetoxicyklohexan, eller ett tetra- hydro-ll-pyranylidenyleringsmedel vid en temperatur av t.ex. 10 till SOOC för att ' skydda ll"-_ och 6"-hydroxigrupperna med en tvåvärd hydroxiskyddsgrupp (Y) på känt sätt såsom beskrivs i japanska patentpublikationen 7595/75 eller US-PS '3 929 762. Som alkyl-idenyleringsmedel, aralkylidenyleringsmedel, cyklohexy- lidenyleringsmedel och tetrahydroÄÅl-pyranylidenyleringsmedel för detta ändamål kan man använda sådana som nämns_i US-PS 3 9,29 762. På detta sätt skyddas 4"- och 6"-hydroxigrupperna genom -att de överförs 'till acetal- eller ketalform, vilket ger ett skyddat derivat av kanamycin A med den ovan angivna formeln (ll), hos vilket 4"- och 6"-hydroxigrupperna har' blotkerats samtidigt med en alkyliden- grupp, en aralkylidengrupp; en cyklohexylidengrupp eller en tetrahydro-ll- pyranylidengrupp (Y). ' i ' _' Vid förfarandet enligt den första aspekten av uppfinningen utförs steget (a) därav som' följer. Sålunda löses det skyddade kanamycin A-derivatet med .formeln (II) som' utgångsmaterial i' ett lämpligt inert organiskt lösningsmedel såsom dimetylformamid, och omsätts sedan med ett basiskt reagens, särskilt en alkalimetallhydrid såsom natriumhydrid, på liknande sätt som viden känd metod som beskrivs i "Journal of Antibiotics" Vol. 25, Nr. 12, 74l-7ll2 (1972) eller US-PS 3 925 354 eller ll 125 706, vilket ger 4',Gßcykliskt-karbamat-föreningen med den ovan angivna forrneln (lll). Om steget (a) för bildning av det 1+',6'-cyk|iska a791o7s4-a 23 karbainnttrt (lll) ulr-larnnas vid [iirelijgganrle lörlararirltr orh tiigårigsrriziterialet (II) sedan omedelbart lår reagera med ZJ-dimetoxipropari, Ll-diinetoxicyklohexan, bensaldehyd eller andra reagens som används vid steg (b) vid förfarandet, så kan inte Zßhydroxigriippen i kanamycin A-fiiren-irigen skyddas selektivt. Följaktligen är föreliggande förfarande littäiwkt att följa en väg, 'diii- det 4',6'-cykliska karbamatet först bildas i steg (a) och 22 och'5~liydroxigrupperna sedan blockeras i steg (b), följt av ringklyvning av 4',6'-karbairiat-ringeri i steg (c) för att frigöra den fria ltkhydroxig-ruppen. ^ l _ ' I steg (b) av förfarandet får det l+',6'-cykliska karbamatet med formeln (lII)_löst*i ett lämpligt inert, organiskt, lösningsmedel, såsom dikloretan, reagera .med ZJ-dimetoxipropan, hl-dimetoxicyklohezxan, bensaldehyd eller dimetyl- acetal eller Sß-dihydro-ü-metoxi-ZH-pyran under vattenfria betingelser i när- varo av en sur katalysator, såsom toluensulfiirisyra eller svavelsyra för att skydda 5- och -Zkhydrox-igrupperna i kanamycin 'A-förenirigeri med en tvâvärd hydroxi- skyddsgrupp härrörande från det använda acetal- eller ketal-bildande reagenset.

Vid denna reaktion bildas det 5,2'-iO-skyddade derivatet med formeln (IV) och ett motsvarande 2',3-O-skyddat derivat i väsentligen lika stora mängder. Den förra föreningen (IV) kan-separeras från den senare genom att utnyttja skillnaden i l deras löslighet i ett lämpligt-organiskt lösningsmedel, såsoinkloroform. För detta ändamål är även kromatografisk separation möjlig.

I steg (c) av föreliggande förfarande utsätts den 2',5-O-skyddade »föreningen med formeln (IV) för hydrolys under alkaliska betingelser i ett vattenhaltigt organiskt lösningsmedel, såsom vattenhaltig dioxan, som innehåller ' en mängd av ett alkalimegtallkarbonat, såsom natriumkarbonat eller barium- lhydroxid, för att klyva _l4',i6'~karbamatrlngen i föreningen (IV), Hydrolysen kan utföras vid en temperatur av 20 till IOOOC (se US-P5 4 125 706). Till följd av den hydrolytiska klyvningen av lißóßkarbamatringen frigörs 'den fria lP-hydroxi- gruppen och den fria 6'-aminogruppen. Därefter blockeras den fria 6'-amino- gruppen i ringklyvningsprodukten genom alkoxikarbonylering, aralkyloxikar- bonylering eller alkanoylering, särskilt acetylering, på känt sätt i syfte att åstadkomma ett andra införande av aminoskyddsgruppen (B'). Alkoxikarbony- leringen eller aralkyloxikarbonyleringen av G-arninogruppen iringklyvningspro- dul eller aralkyloxikarbonylering av G-aminogruppen som utfördes vid det förfarande för framställning av det skyddade derivatet av kanamycin A med formeln (II) som beskrivits tidigare och med användning av ett klorformiatmed formeln: B'Cl där B' betecknar en alkoxikarbonyl- eller aralkyloxikarbonylgrupp, som kan vara g791o7z4-s 24 -densamma eller en annan än den ovannämnda aminoskyddande alkoxikarbonyl- eller aralkyloxikarbonylgruppen (B). I detta steg kan emellertid G-aminogruppen . även skyddas genonjr alkanoylering, företrädesvis genom acetylering. Alka- noyleringen av 6'~aminogruppen kan i detta-steg utföras med användning av en alkansyra med 2 till 6 kolatomer, såsom ättiksyra, eller någon reaktiv ekvivalent därav, såsom alkansyraklorid eller -anhydrid. På detta sätt. ger steg (c) av föreliggande förfarande ett Bßlß-dihydroxiderivat med formeln (V), i vilket 3'-, ll'- och ZW-hvdroxigrupperna- förblir oskyddade, men alla andra funktionella hydroxi- och aminogrupper är skyddade. . _ Efter steg (c) av n förfarandet enligt den första uppfinningsaspekten utförs steg (d), där Bßlß-dihydroxiderivatet (V) alkylsulfonyleras eller aralkyl- sulfonyleras' i ett inert .organiskt lösningsmedel, företrädesvis i pyridin, genom omsättning med sulfonyleringsmedlet (VI), (VI') eller (Vl"), så att man får 32422"- tri-O-sulfonylderivatet med formeln (Vil). Alkylsulfonyleringsrnedlet med for- meln (Vl), (VI') eller (Vl") kan lämpligtvis vara en lägre alkylsulfonsyrahalogenid med 1-4 kolatomer, såsom metansulfonylklorid eller etansulfonylklorid. Aralkyl- sulfonyleringsmedlet med formeln (VI) till (VI") kan lämpligtvis vara en bensylsulfonsyrahalogenid. Sulfonyleringen _av.3'-, 4'- och 2"-hydroxigrupperna i '_ detta steg kan utföras vid en temperatur av -l0 till l00°C och företrädesvis vid rumstemperatur 'och under en reaktionstid på 30 minuter till l dag. i I steg (e) av föreliggande förfarande löses den vid steg (d) ovan erhållna 2",3',li'-tri-O-sulfonylkanamycin Ai-föreningen i 'ett inert organiskt lösningsmedel och får sedan reageramed en alkalimetalljodid, såsom natriumjodíd, för att omvandlas till motsvarande Bßençl-kanamycin A-förening. Det organiska lösnings- - medel som används, kan. vara vilket som helst inert sådant, om detta i sig kan " lösa både den tri-O-sulfonylerade kanamycin A-föreningen (VII) och alkalimetall- jodiden, såsom litiumjodid, natriumjodid och kaliumjodid. Dimetylformamid, dimetylsulfoxid, aceton, dioxan och liknande kan vara lämpliga som detta lösningsmedel. Reaktionen kan lämpligen utföras vid en reaktionstemperatur av 50 till l50°C och under en reaktionstid på 10, minuter till l dag. I de flesta fall I. kan reaktionen fullbordas på ungefär lO timmar. Genom denna reaktion avlägsnas 3'- och lP-sulfonyloxigrupperna med bildning' av en olefinisk dubbelbindning mellan 3'- ochÄU-kolatomerna, vilket ger Bfleno-kanamycin A-föreningen. Vid föreliggande 'förfarande utförs T-enoeringssteget (e) genom reaktion med en alkalimetalljodid i frånvaro av zinkmetallpulver; I detta steg (e) får zinkmetall- pulver' inte användas. Om _2",3',4'-tri-O-sulfonyl-kanamycin A-föreriingen får reagera med en alkalimetalljodid i närvaro av zinkmetallpulver, så kan 2"- sulfonyloxigruppen reagera med 3"-aminogruppen med oönskad bildning av en _.- ,.___,.__.__ ..-___ f.-. _.._-.....__. ,. _..,, ... ~-_.. e 7910734-8 25 aziridiriring, vilket ger ett påfott ej önskvärt sätt :modifierat kanamycin A- derivat. Däremot kan en alkalirnetalljodid användas tillsammans med zinkmetall- pulver för T-enoeringen, om den TJU-O-sulfonylerade kanamycin A-föreningen har sin 2"-hydroxigrupp skyddadav någon annan skyddsgrupp än sulfonylgruppen, såsom anges i steg (e') av förfarandetenligt den andra aspekten av uppfinningen. i steg (f) av föreliggande förfarande omvandlas den så erhållna 3'-eno- kanamvcin _ A-föreningen till motsvarande Bßlv-dideoxikanamycin A-förening genom reduktion med väte i närvaro av en känd hydreringskatalysator för att åstadkomma hydrering av den 3',4'-omättade bindningen till en mättad bindning.

Réduktionen av TJV-dubbelbindningen med väte kan utföras på känt sätt, t.ex. som beskrivs i japanska patentpublikationen 7595/75 eller US-PS 3 753 973 genom 'att vätgas leds in i en l.ösning av Bbeno-kanamycin A-föreningen löst i ett inert lösningsmedel, såsom vatten, metanol, etanol, isopropanol, aceton, dioxan, pyridin, tetrahydrofuran, »dimetylformamid, cyklohexan, etylacetat eller ett blandat lösningsmedel av två eller flera av dessa vätskor i närvaro av en känd hydreringskatalysator såsom Raney-nickel., platina, platinaoxid, palladium, palla- * dium-på-kol, koboit-rodium-komplex, koppar och järn etc. Hydreringen av 354'- dubbelbindningen kan utföras vid- en temperatur av -40 till IZOGC, men företrädesvis vid en temperatur från rumstemperatur till lO0°C, och kan lätt fortgå vid atmosfärstryck men även vid förhöjt tryck på 5 tillvlO0 kp/cmz.

Reaktionstiden för hydreringen kan lämpligen vara 0,5 till 48 timmar.

Förfarandet enligt denförsta uppfinningsaspekten innefattar även steget (g) att avlägsna de återstående hydrokiskyddsgrupperna (X och Y), steget (h) att eliminera den återstående Iaminoskyddsgrupp (B') som gär kvar vid 6'-amino- gruppen, och steget (i) .att avlägsna 2"-O-sulfonylgruppen och även samtliga šulfonylgrupper (A) som, är kvar vid l-, 3Ä och 3"-aminogrupperna i kanamycin A- föreningen. Avlägsnandet av dessa återstående skyddsgrupper kan åstadkommas med känd skyddsgruppsavlägsningsteknik, som normalt används vid syntes av arnider. Vart och ett av dessa skyddsgruppsavlägsnande steg (g), (h) och (i) kan titföras vid en lämplig tidpunkt efter det att steg (d) för framställning av den BSW-O-sulfonylerade-kanamycin A-föreningen (VII) utförts. Den ordningsföljd, i vilken de skyddsgruppsavlägsnande stegen (g), (h) och (i) utförs efter varandra kan väljas påilärnpligt, valfritt sätt. Exempelvis kan steg (g) för eliminering av de tvåvärda hydroxiskyddsgrupperna (X och Y) från 5- och 2'-hydroxigrupperna liksomrfrån 4"- och 6"-hydroxigrupperna i kanamycin A-föreningen föregå steget (f), där BH-eno-kanamycin A-föreningen omvandlas till motsvarande 3',4'-dideoxi- kanamycin /hförcning genom katalytisk liydreriiig. 7910734-8 26 Emellertid får steget (i) för elíminering av den kvarvarande 2"-O- sulfonylgruppen FOZSRI). och de kvarvarande aminoskyddssulionylgrupperna (A) inte utföras alldeles efter sulfonyleringssteget (d), eftersom det skulle kunna avlägsna även de just införda 3'- och lfl-O-sulfonylgrupperna. Avlägsnandet av de tvåvärda hydroxiskyddsgrupperna (X och Y) i steg (g) kan utföras genom hydrolys _' under svagt sura betingelser i närvaro av. ättiksyra eller utspädd klorvätesyra. '_ Avlägsnandet av den aminoskyddande acylgruppen (B') från 6'-aminogruppen i (steg (h) kan utföras genom hydrogenolys eller genom alkalisk hydrolys, beroende på naturen hos den använda aminoskyddsgruppen. När aminoskyddsgruppen (B') är _ en aralkyloxikarbonylgrupp, såsom bensyloxikarbonyl, kan denna avlägsnas genom hydrogenolysjsamtidigt med den katalytiska hydreringen av den 3',4'-omättade bindningen i 3'-eno-kanamycin A-föreningen, .som utförs i steget (f) ovan.

Avlägsnandet i steg (i) av de återstående aminoskyddande sulfonylgrupperna (A) och den återstående sulfonylgrupp (~O2SR1) som är kvar vid 2"-hydroxigruppen i ' kanamycin A-föreningen kan lämpligtvis utföras genom behandling med en alkalimetall, särskilt metalliskt natrium eller en jordalkalimetall i flytande ammoniak på .liknande sätt som vid den desulfonyleringsmetod som beskrivs i US- i PS 4 169 939. När således de återstående aminoskyddande sulfonylgrupperna (A) och den återstående ZWO-sulfonylgruppen skall avlägsnas genom behandling med alkalimetall eller jordalkalimetall i flytande ammoniak, kan detta eliminerings- ' steg (i) utföras genom omsättning med en eller flera alkalimetaller valda bland litium, -natrium och kalium liksom jordalkalimetaller valda bland kalcium, magnesium och barium, i flytande ammoniak vid en reaktionstemperatur på -SOOC till ÜOC, och lämpligen under en tidrymd på 0,5 till 24 timmar. Mängden alkali¿ eller jordalkalimetall som används för denna reaktion kan lämpligtvis vara l-O-till 100 mol per mol kanamycín A-förening som skall deblockeras, och kan även tillsättes till reaktionsblandningen på en gång eller ismå portioner. Sedan .I reaktionen för eliminering av den återstående 2"-O-sulfonylgruppen och de återstående aminoskyddande sulfonylgrupperna (A) avslutats, kan reaktions~ I blandningen. blandas med en mängd vatten, en alkanol eller ammoniumklorid för att förbrukat den kvarvarande överskottsmängden alkalimetall eller jordalkali- metall, «följt av avdrivning av lösningsmedlet (den flytande ammoniaken), upplösning *av den återstående fasta produkten i vatten och utsättande av den erhållna lösningen för ett reningssteg, t.ex. ett kromatografiskt förfarande för reningsändamål. _ u Som_angivits ovan kan den ordningsföljd, i vilken deblockeringsstegen ' (g), (h) och (i) utförs efter varandra väljas på lämpligt sätt, och följaktligen bör det framhållas, att förfarandet enligt den första uppfinningsaspekten kan utföras 7910734-8 27 via 'någon av de olika vägarna (l),v~(2) och (3) som angivits ovan. Exempelvis kan föreliggande förfarande utföras på _sådant sätt att en eller samtliga deblocke- rings-steg föregår steget med omvandling av fV-eno-kananiycin A-föreningen till Bßlfl-dideoxikanamycin A-föreningen genom katalytisk hydrering av Bß/U-dubbel- bindningeii i Bßeno-föreningen, vilket skiljer sig från ordningsföljden i de ovan - angivna beskrivningarna av varje steg av föreliggande förfarande. Följaktligen är _ beskrivas. det vid föreliggande förfarande även möjligt att exempelvis steget (e) för omvandling av den tri-O-sulfonylerade kanamycin iii-föreningen till 3'-eno- kanamycin A-föreningen omedelbart följs av steg (g) för eliminering av både 5,2'_ O-skyddsgruppen (X) och 4",6"-O-skyddsgruppen (Y).

Förfarandet enligt den andra aspekten av uppfinningen kommer nu att Vid förfarandet av den andra uppfinningsaspekten är stegen (a) och (b) helt desamma som stegen (a) resp. (b) av förfarandet enligt den fÖfSIa uppfinningsaspekten. Efter dessa steg (a) och (b) har man infört steget (j) för att skydda 2"-hydroxigruppen med 'företräde för att förhindra den från att sulfonyleras, till skillnad från steg (d) vid förfarandet enligt den första uppfinningsaspekten. Detta steg (j) innefattar tre steg, dvs. steget (l) att omsätta den 2',5-O-skyddade kanamycin A-föreningen (IV) med acetylklorid, eller -anhydrid i pyridin för acetylering av debåda 2"» och Bfl-hydroxigrupperna; steget (2) för behandling av den erhållna 3',2"-di-O-acetylerade produkten (lV') med ammoniakalisk alkanol med 1-4 kolatomer för företrädeseliminering av 2"-O- acetylgruppen därifrån; och steget (3) för omsättning av den erhållna 3'-mono-O- acetylerade produkten med Bß-dihydro-ZH-pyran för att blockera 2"-hydroxi- gruppen med en hydroxiskyddande tetrahydropyranylgrupp, som lätt kan av- lägsnas samtidigt med avlägsnandet av de tvåvärda hydroxiskyddsgrupperna (X och Y) som införts i 5-, 2f-,- 4"- och 6"-hydroxigrupperna i kanamycin A- 'föreningem Steget (I) ovan kan utföras genom att låta en moldel av det 225-0- skyddade kanamycin A-derivatet (IV) reagera med väsentligen 2 moldelar eller mer acetylklorid eller acetylanhydrid i pyridin vid en temperatur på OOC till VSOOC, följt av utvinning av den erh-ållna 3',2"-di-O-acetylerade produkten (lV') från' reaktionsblandningen genom avdestillation av pyridinet från densamma.

Steget (2) ovan kan utföras genom att upplösa den erhållna 3',2"~di-O-acetylerade produkten (lV') i en alkanol, såsom metanol, etanol eller butanol, som innehåller 2 till l0N ammoniak, och låta lösningen stå vid en temperatur på -IOOC till +50°C under 10 till 400 minuter. Steget (3) kan utföras genom att upplösa den erhållna T-mono-O-acetylerade produkten i' ett torrt organiskt lösningsmedel, såsom diklormetan eller tetrahydrofuran, 0Ch blanda den erhållna lösningen med en -------»__-- V V f ~.... A _.. ........____._-_....._. _ __...._..._____,..__..-_...._...._.._.., .___ 7910734-8 28 _moldel eller mel* BJß-dihydroxi-ZH-pyran vid rurnsternperatlir i närvaro av en syrakatalysator såsom p-toluensulfonsyra.

Sedan ZWO-skyddssteget (j) utförts; hydrolyseras 'den erhållna 2"-O- *tetrahydropyranyl-kanarnycin A-föreningen (i form av l+',6'-karbamatet)i steg (e') _av föreliggande förfarande på samma sätt som i steg (c) av förfarandet enligt den första uopfinningsaspekten, när T-O-acetylgruppen avlägsnas därifrån och sam- tidigt klyvningen av det AU, '-cykliska karbamatet äger rum, så att 3"- och ll'- hydroxigrupperna liksom 6'-aminogruppen frigörs till fritt tillstånd, vilket ger det I' ZW-O-skyddade A-derlvatet med formeln (lV"). Därefter omsätta det 2“-O- skyddade kanamycin A-derivatet (lV") med väsentligen en moldel eller mer av ett _ klorforrniat med formeln: I ' ß"c1 'där B" är en alkoxikarbonyl- eller aralkyloxigrlipp samma I som den ovan definierade gruppen B', '~ - _ ' eller' av en alkansyra eller en reaktiv ekvivalent därtill, såsom ättiksyra, ättiksyraklorid eller ättiksyraanhydrid, på samma sätt som alkoxikarbonylerings-, aralkyloxikarbonylerings- eller alkanoyleringssteget av det ovan angivna steget (c) av förfarandet enligt den första uppfinningsaspekten. ' Vid föreliggande förfarande. enligt den- andra uppfinningsaspekten följs det ovan nämnda steget (e') av steget (d'), i vilket 3'Jß-di-O-sulfonyleringen av den' 3',4'-dihydroxi-ZMO-skyddade kanamycin A-föreningen (V') utförs på samma sätt .som i steg (d) av förfarandet enligt den första uppfinningsaspekten men utan att innebära sulfonylering av den Zïhydroxigrupp som blockerats med tetrahydro- pyranylgruppen; På detta sätt framställs 3',lP-di-O-sulfonyl-kanamycin A-för- _ aningen med formeln (VIl'). I g _ Därefter omvandlas den sålunda erhållna 3'JPÄdi-O-sulfonyl-kana- mycin A-föreningen till motsvarande 3'-eno-kanamycin A-förening i steget (e') av föreliggande förfarande genom behandlingmed en alkalimetalljodid och zinkme- tallpulver enligt Tipson-Cohen-metoden eller' med natriumjodid enbart på liknande sätt som steget (e) av förfarandet enligt den första uppfinningsaspekten. l detta steg (e') har 2"-hydroxigruppen i kanainycin A-föreningen blockerats, och följaktligen kan reaktionen för omvandling av Bßlfl-di-O-sulfonyl-kanamycin A- föreningen till en 3'-eno-kanamycin-förening utföras genom behandling med en alkaliinetalljodid i närvaro av zinkmetallpulver, så att ïßenoeringen kan gynnas, när den oönskade bildningen av aziridinringen mellan 2"- och 3"-kolatomerna inte äger rum. I Vidare överförs den sålunda erhållna Bfl-cno-kanarnycin lll-föreningen till motsvarande TJP-dideoxikanamycin A-förening i steget (f') av föreliggande 7910754-8 29 förfarande genom reduktion med väte i närvaro av en känd liydreringskatalysator för att åstadkomma hydrering av den 3',l+'-olefina bindningen till en mättad bindning, på samma sätt som i steg (f) av förfarandet enligt den första _ uppfinningsaspekten.

Förfaranrlet enligt den andra iippfinxtingsaspekten innefattar även steget (g') för eliminering av de återstående hydroxiskyddsgrupperna (X, Y och Z),'steget (h') för eliminering av den återstående aminoskyddsgrupp (B") som är kvar vid óßaminogruppen, och steget (i') för eliminering av alla sulfonylgrupper (A) som är kvar vid I-, 3- och 3"-aminogrupperna i kanamycin A-föreningen.

Dessa iieblockeringssteg (g'), (h') och (i') kan utföras på samma sätt som i deblockeringsstegen (g), (h) resp. (i) av förfarandet enligt den första uppfinnings- aspekten. Även vid föreliggande förfarande kan vart och ett av dessa steg (g'), (h')' och (i') utföras vid någon lämplig tidpunkt efter steget (d'), och den ordningsföljd i vilken vart och ett av dessa deblockeringssteg (g'), (h') och (i') utförs efter varandra kan väljas på lämpligt sätt, i likhet- med förfarandet enligt den »första uppfinningsaspekten. Följaktligen kan även föreliggande förfarande utföras via vilken som helst av de olika vägar som nämnts tidigare med avseende på förfarandet enligt den första uppfinningsaspekten. Exempelvis kan föreliggan- de förfarande utföras på så sätt att steget (g') för eliminering av; de âterstlâende tvåvärda hydroxiskyddsgrupperna (X, Y och Z) föregår steget (e') för omvandling av 3',lP-di-O-sulfonyl-kanamycin A-föreningen till Bßeno-kanamycin A-för- eningen.

En metod för att införa aminoskyddsgruppen avser ett "zinkl<0yn- plex"-förfarande för framställning av aminoglykosidantibiotika med vissa av aminogrupperna selektivt skyddade. Enligt denna alternativa metod omvandlas först Bklfl-dideoxikanamycin A till ett komplex därav med zinkkatjon och _acyleras sedan till ett partiellt arninpskyddat derivat. ._ ..._ ___.-. __._..__..-.-_-.._..._.fl _ Det ovannämnda "zinkkoinplexV-förfarandet avser allmänt ett för- farande för frarnställning av ett selektivt acylerat N-skyddat derivat av ett aminogkykosidantibiotikum med en B-aminoglykosyl- ellerJ-alkylaminoglykosyl- grupp bunden til G-hydroxigruppen i en deoxistreptaminrest, varvid förfarandet innefattar stegen att man: åstadkommer ett aminoglykosidantibiotikum-zinkkatjon-komplex, omsätter kom- plexet med ett acyleringsreagens för framställning av ett N-acylerat zinkkom- plex, dvs. ett aridra komplex av zinkkatjorier med det arninoglykosidantibiotikum, som har icke-komplcxbundna aminogrupper acylerade,- och omsätter det andra l framställa ett selektivt acylerat N-skyddat derivat av aminoglykosidantibiotikumet. 7910754-s Ju Aminoglykosidantibiotikurn-zinkkatjon-kompleXet kan åstadkommas genom att låta aminoglykosidantibiotikurnet reagera med ett zinksalt i ett inert, organiskt lösningsmedel; Enligt detta "zinkkomplex"-förfarande kan man av 3',4'-dideoxi- kanamycin A, på ett enkelt och effektivt sätt framställa ett partiellt skyddat derivat av TJN-dideoxikanamycin A, t.ex. genom följande förfarande: _ ' _ ' .

Manlöser eller suspenderar Bßlfl-dideoxikanamycín A i ett lämpligt organiskt i lösningsmedel eller vattenhaltigt organiskt lösningsmedel, och till den erhållna lösningen eller suspensionen sätter man ett lämpligt zinksalt i en mängd av minst 1. moluper mol BQW-dideoicikanamycin A. Varje sedvanligt organiskt lösningsmedel kan användas för detta ändamål, så länge som det zinkkomplex som bildas efter tillsatsen av zinksaltet är åtminstone delvis lösligt detsamma. Emellertid bör användning av en större volym polärt organiskt lösningsmedel och särskilt en f _större volym *vatten företrädesvis undvikas, eftersom närvaron av polärt organiskt lösningsmedel och vatten sannolikt rminskart-stabiliteten hos det erhållna bildade aminoglykosid-zinkkatjonkomplexet, så att den efterföljande acyleringsreaktionen för införande av- aminoskyddsgruppen sannolikt ger otill- fredställande resultat. I Det är således önskvärt att använda ett organiskt lösningsmedel med hög lösningsmedelsförmåga såsom dimetylsulfoxid, som det lösningsmedel i vilket zinkkoinplexet skall bildas, men det är möjligt att använda vattenhaltig _ dimetylsulfoxid, dimetylformamid, vattenhaltig -dimetylformamicß en blandning av dimetylsulfoxid och dimetylformamid, tetrahydrofuran, vattenhaltig tetra- hydrofuran, och till och med .en lägre alkanol såsom metanol, etanol och vattenhaltig metanol.

Zinkkatjon kan tillföras i form av zinksalt till det reaktionssystem, där 'zinkkomplexet bildas. Varje- zinksalt. som bildas genom reaktion med zinkkatjon och en sedvanlig Oorganisk eller organisk syra kan användas för detta ändamål. I allmänhet är det emellertid önskvärt att använda ett zinksalt av en svag syra, såsomzinkacetat. I I _ _ _ .

Så länge som den totala molära kvantiteten zinksalt som används är åtminstone lika med den molära. kvantiteten' av aminoglykosidantibiotikumet, så _kang komplexbildningsreaktionen äga rum. Det är emellertid föredraget att använda zinksaltet i en mängd av väsentligt mer en mol per mol av aminoglykosidantibiotikumet, så att jämvikten för kompleaibildningsreaktionen förskjuts till förmån för bildning av zinkkomplexet. Gynnsamt utbyte av zinkkomplexet kan erhållas vid användning av zinksaltet i en mängd på ca 2,3-6 mol per mol av aminoglykosiden, men i praktiken är det mest föredraget att 7910734-8 51 använda zinksaltet i en mängd på 4-5 mol per mol av aminoglykosiden. 'Den tid som krävs för att fullborda komplexbildningsreaktionen efter tillsatsen av zinksaltet kan variera beroende på naturen hos det använda organiska lösnings- medlet, och den kan variera från "ögonblickligen" (vid användning av vatten- haltigt organiskt lösningsmedel) till 20 timmar. Komplexbildningsreaktionen kan normalt fortgå vid rumstemperatur, men upphettning eller kylning kan ske.

' På detta sätt framställs en lösningeller suspension, som innehåller zinkkomplexet av aminoglykosiden, till vilken man sedan sätter ett acylerings- ' reagens, som har en acylgrupp som skall införas som aminoskyddsgrupp.

Det acyleringsreagens som används i syfte att införa aminoskydds- _ grupperna kan varà ett sedvanligt aminoskyddsreagens, och detta används för att säkerställa att de ej komplexbundna 3- och Shaminogrupperna i det erhållna 354'- dideoxikanamycin A-zinkkatjonkomplexet acyleras av och blockeras med acyl- gruppen i acyleringsreagenset. Den acylgrupp som kan användas vid uppfinningen kan vara en alkoxikarbonylgrupp, en aralkyloxikarbonylgrupp, en aryloxikarbonyl- grupp eller en arylsulfonylgrupp, vilka samtliga är konventionella aminoskydds- grupper. Acyleringsreagens som kan användas för detta ändamål kan antingen vara ett klorformiat med den följande allmänna formeln RB-O-CO-Cl där Ra är väte, en alkylgrupp, särskilt en alkylgrupp med 1-6 kolatomer, en arylgrupp, särskilt fenyl, eller en aralkylgrupp, speciellt bensyl, varvid dessa grupper eventuellt är ytterligare substituerade, eller ett p-nitrofenylkarbonat med' den följande allmänna formeln: a R o-co-o-csnj-p-Noz I eller den aktiv N-hydroxisuccinimidester »med följande formel: O. '3 _ . _ R O-CO-O-N (X0) eller ett azidoformiat med följande formel: “ R3o-co-N3 där RB har den ovan angivna innebörden, eller en sulfonsyra medföljande formel: _ i R'*so3H där Ru är en arylgrupp, såsom fenyl, antingen substituerad eller osubstituerad, eller en syrahnalogenid, syraanhydrid eller aktiv ester av nämnda sulfonsyra.

Speciella exempel på det användbara acyleringsreagenset innefattar p- "7910734-8 i 3-2 nitrofenylformiat, p-nitrofenolester av trifluorättiksyra, trifluorättiksyraester, N-bensyloxikarbonyloxisuccirlimid (en representativ aktiv ester), N-bensyloxi- karbonyloxiftalimid, bensyloxikarbonylklorid, p-'metoxibensyloxikarbonyloxi-p- I nitrofenyl; t-butoxikarbonylazid, fenoxikarbonylklorid, tosylklorid, mesylklorid, etc. . g Acyleringsreagehset, antingen som sådant eller som len lösning i ett lösningsmedel såsom tetrahydrofuran och dimetylsulfoxideller i en blandning av dessa lösningsmedel, kan sättas till lösningen eller suspensionen, som innehåller .aminoglykosid-zinkkomplexet. Den molära kvantiteten av det tillsatta acy- Åleringsreagenset kan vanligtvis vara lika med eller något överstiga antalet ej komplexbundna aminogrupper med vilka acyleringsreagenset skall reagera. I vissa fall kan emellertid den molära mängden tillsatt acyleringsmedel vara upp till en molär .mängd som är ca 3 gånger större än antalet ej komplexbundna aminogrupper.. Acyleringsreagenset kan tillsättes antingen på en gång eller långsamti portioner under en tidrymd på 2-3 timmar; även om den vanligtvis kan tillsättas under en tid på 30 minuter till l timme. Acyleringenkan utföras vid en temperatur av -209 till IOOOC, men_kan normalt utföras vid en temperatur mellan OOC och rumstemperatur. I vissa fall kan reaktionstemperaturen hållas låg vid tidpunkten för tillsatsen av acyleringsreagenset och kan sedan höjas gradvis allteftersom reaktionen fortskrider. Normalt kan eacyleringsreaktionen utföras in situ i det organiska lösningsmedel i vilket aminoglykosidantibiotikum-zinkkatjon- kornplexet bildades. Denna acyllering av zinkkomplexet bildar ett N-acylerat zinkkomplex (ovannämnda andra komplex), dvs. ett komplex mellan zinkkatjoner och det selektivt N-acylerade aminoglykosidantibiotikumderivatet.

Enligt det ovan angivna "zinkkomplex"-förfarandet följs steget för acylering av aminoglykosid-zinkkatjonkomplexet av ett steg för eliminering av zinkkatjon från' det andra komplexet,. dvs. det N-acylerade zinkkomplexet (dvs. nedbrytning av zinkkomplexet), så att man får ett selektivt skyddat N-acylerat derivat av aminoglykosiden som är fritt från zinkkatjoner.

För att avlägsna zinkkatjon från det andra komplexet, dvs. det N- acylerade zinkkomplexet, är det nödvändigt att behandla det N-acylerade zinkkomplexet med ett lämpligt reagens, som avlägsnar zinkkatjon från det N- acylerade zinkkomplexet. För detta ändamål finns många användbara metoder. _ Den första metoden är att omsätta med ett zinkutfällande medel, som har förmåga att omvandla zinkkatjon till en _vattenolöslig zinkförening, såsom zinksulfid, zinkhydroxid eller zinkkarbonat, medan det N-acylerade zinkkom- plexet fortfarande är kvar -löst i den acyleringsreaktionsblandning där amino- glykosidantibiotikum-zinkkatjon-komplexet acylerats, eller sedan det överförts i 7910734-8 53 en ny lösning i en färsk volym av ett organiskt lösningsmedel från acylerings- reaktionsblandningen.

Zink-utfällande medel som kan användas vid den första metoden innefattar vätesulfid, en alkalimetallsulfid, såsom natriumsulfid, ammonium- sulfid, en jordalkalimetallsulfid, såsom kalciumsulfid, och ett alkalimetallkar- bonat, såsom natriumkarbonat, eller ammoniumhydroxid. En andra metod är att den ovannämnda acyleringsreaktionsblandningen eller den nya lösningen av det N- acylerade zinkkomplexet överfört-i en färsk volym av det organiska lösnings- medlet_ (i) koncentreras eller koncentreras till torrhet genom avdunstning av lösningsmedlet eller (ii) späds med ettvätskeformigt spädningsmedel, så att man får en oljig eller fast avsättning, koncentrat eller återstod, följt av utvinning av det önskade N-acylerade aminoglykosidantibiotikumderivatet från avsättningen, koncentratet eller återstodenpå något godtyckligt sätt. Det vätskeutspädnings- medel som kan användas 'vid denna andra' metod är vatten eller en sådan organisk vätska, i vilken det N-acylerade zinkkomplexet som helhet eller den N- acylerade aminoglykosidantibiotikum-derivatresten av det N-acylerade zink- komplexet har ingen eller obetydlig löslighet.

Det andra komplexet mellan zinkkatjoner och det selektivt N-acylerade aminoglykosidantibiotikumderivatet kan, när det separerats, blandas med vatten eller ett polärt organiskt lösningsmedel, antingen vattenfritt eller vattenhaltigt, som tjänstgör som zinkkatjon-eliminerande reagens. Detta polära organiska lösningsmedel är antingen ett sådant, i vilket zinksaltet» är lösligt men i vilket det N-acylerade aminoglykosidantibiotikumderivatet är olösligt, eller ett sådant i 'vilket zinksaltet är olösligt men i vilket det N-adylerade aminoglykosidantibío- tikum-derivatet är lösligt. g Det andra komplexet mellan zinkkatjoner och det N-acylerade amino- glykosiclantibiotikumderívatet kan,_ sedan det separerats, åter lösas helt i ett organiskt lösningsmedel, som innehåller en andel vatten, och den erhållna lösningen underkastas ett kromatografiförfarande med användning av ett katjon- bytarharts, anjonbytarharts, kelatbytarharts eller en vattenolöslig polymer som innehåller funktionella grupper med förmåga att kombineras med en metall, som tjänstgör som zinkkatjoneliminerande reagens.

Acyleringsreaktionsblandningen kan direkt ledas genom en kolonn av ett katjonbytarharts, anjonbytarharts, kelatbytarharts eller en vattenlöslig polymer, som innehåller metall-kombinerande funktioner, för adsorption av det andra komplexet mellan zinkkatjoner och det N-acylerade aminoglykosidantibiotikum- derivatet, och kolonnen elueras sedan med ett vattenhaltigt organiskt lösnings- medel som innehåller eller inte innehåller en mängd syra eller bas, och eluatet 7910734-s 34 uppsalnlas i fraktioner, följt av utvinning av de fraktioner som innehåller det önskade selektivt N~acylerade l21minOglykosidantibiotikumderivatet men inte innehåller några zinkkatjoner. _ När det önskade Naacyleradeiaminoglykosidantibiotikumderivatet är olösligt eller väsentligen olösligt i vatten, så kan acyleringsreaktionsblandningen omedelbart blandas med vatten, så att derivatet utfälls skilt från zinksaltet som förblir_löst i vattnet. ' I I l det zinkkomplex som bildas vid det ovannämnda "zinkkomplex"- 'förfarandet kornplexbinds zinkkatjonerna huvudsakligen med l-amino- och 3"- aminogrupperna i aminoglykosidantibiotikumet, och följaktligen ger N-acyle- ' ringen av aminoglykosidantibiotikum-zinkkatjonkomplexet följt av eliminering av zinkkatjoner därifrån normalt ett N-acylerat aminoglykosidantibiotikumderivat, i i vilket aminogrupperna utom l~amino- och 3"--aminogrupperna är skyddade med acylgrupper. ' i _ Det kan tilläggas att det ovannämnda "zinkkomplex“-förfarandet kan tillämpas på framställning av det skyddade derivat av kanamycin A med formeln I (II)'som skall användas som utgângsmaterial vid förfarandetenligt den andra eller tredje aspekten av denna uppfinning. Dessutom kan det partiellt skyddade derivat av kanamycin A-eller -Bßlfl-dideoxikanamycin A som skall användas som utgångs- material vid förfarandena enligt uppfinningen även framställas genom användning av den metod enligt Nagabhushan et al som anges i US-PS 4 1.36 254. ' Föreningarna med formeln (l) enligt den första uppfinnings- aspekten, och särskilt Bßlfl-dideoxikanamycin A, l-N-(Z-hydroxi-B-aminopro- pionyl)-3'Jß-dideoxikanarnycin A och l-N-(Lahydroxi-lt-aminobutyryD-3'JP-di- deoxikanamycin A liksom syraadditionssalter därav har mycket låg toxicitet och är användbara som antibakteriella medel såsom angivits ovan. F öre- ningarna enligt upfinningen och deras farmaceutisktgodtagbara syraadditions- salter kan administreras oralt, intraperitonealt, intravenöst, subkutant eller intramuskulärt med användningavvarje farmaceutisk form som är känd på området för sådan administrering och, på liknande sätt som de kända kana- mycinerna. Exempelvis kan föreningarna enligt uppfinningen administreras oralt med användning av varje farmaceutisk form som är känd pâ området för oral administrering. Exempel på farmaceutiska former för oral administrering är pulver, kapslar, tabletter, siraper och liknande. En lämplig dos av de nya föreningarha enligt uppfinningen för verksam behandling av bakterieinfektioner ligger iomrâdet 0,5 till lig per person och dag, när den ges oralt. Det är föredraget att dosen administreras oralt i tre elleríyra lika stora deldoser per dag. Föreningarna enligt uppfinningen kan även administreras genom 7910734-8 35 i intramuskulär injektion i en dos av 200 till 2000 mg per person två till fyra gånger per dag. Dessutom kan föreningarna enligt uppfinningen beredas till en salva förfutvärtes applicering, somi innehåller den aktiva föreningen i en ~ koncentration av 0,5-5 vikt-96 i blandning med en känd sal-vbas såsom polyetylen- glykol. Vidare kan de 'nya föreningarna enligt' uppfinningen användas för sterilisering av' kirurgiska instrument. I förfarandï: dïrïpfšëöltrsïa/ frumställningenflï awudideoxikanamycjn A enligt . eller andra uppfinningsaspekten bildas olika mellan- Pmdlfkfef: 50"* är nya och användbara [för omvandling nu agli--dxdenxikann- 'UYVCïH Å i enlighet med förfarandena enligt föreliggande uppfinning. Som mellanprodukt avses en förening med- formem. o-»z ' där varje A representerar en alkylsulfonylgrupp innehållande l till 4 kolatomer, en arylsulíonylgrupp, särskilt tosyl, eller en* aralkylsulfonylgrupp, särskilt en bensylsulfonylgrupp, B" representerar en alkoxikarbonylgrupp innehållande 2 till 5 kolatomer, en aralkyloxikarbonylgrupp, särskilt bensyloxikarbonyl, eller en aryloxikarbonylgrupp, X representerar en isopropyliden_-, cyklohexyliden, bensy- liden- eller tetrahydro-lI--pyranylidengrupp, Y representerar en alkylidengrupp innehållande l till 6 kolatomer, särskilt en isopropyliden-, cyklohexyliden-, bensyliden- eller tetrahydro-ll-pyranylidengrupp, och Z' är en väteatom eller en tetrahydropyranylgrupp. Mellanproduktsföreningen med formeln (Va) innefattar 791-0734-8 36 särskilt G-N-bensyloxikarbonyl-l ,3,3"-tri-N-tosyl-5, ZLO-isopropyliden-lß", 6"-O- _ cyklohekylidemkanamycin A och G-N-bensyloxikarbonyl-l,3,3"-trl-N-tosyl-5,2'- Q-isopropyliden-lf", 6"-O-cyklohexyliden-2"-O-tetrahydropyranyl-kanamycin A. i 'Uppfinningen beskrivs nu med hänvisning till Exempel l,'som är belysande för förfarandet enligt den andra uppfinningsaspekten, Exempel 2 och 3 som är belysande för förfarandet enligt den tredje uppfinningsaspekten, och .Exempel 14 och 5 som är Belysande för förfarandet enligt den fjärde uppfinnings- aspekten.

Exempgl 1 Syntes av Bßlrfl-dideoxikanamycin A i (l) Framställning av 6'-N-bensyloxikarbonyl-l,3,3"-tri-N-tosylkanamycin A G-N-Bensyloxikarbonylkanamycin A (fri bas) (1,79 g) (se ovannämnda "Journal of Antibiotics" Vol. 25, 695-708 (1972)) och vattenfritt natriumkarbonat (1,1 g) löstes i 50 ml av en blandning av vatten och dioxan (l:3 i volym), och till den erhållna lösningen sattes 2,0 g p-toluensulfonylklorid under omrörning. Man fortsatte röra om den sålunda erhållna blandningen vid rumstemperatur över natten (för tri-N-tosyleringen) och koncentrerade sedan till en mindre volym.

» Den koncentrerade lösningen blandades med en volym vatten, och den sålunda 'avsatta fällninngen avlägsnades genom filtrering, tvättades med etyleter och torkades så att man fick den ovan angivna titelprodukten som' en fast substans. utbyte 3,14 g (9s9a)./[u)â5=+1o° (c = 11,4, acemn).

Elementaranalys i runner: c 52,10, H 5,5e,-N s,12,(s 2,68% (för cq7H6ON,,o19s)= g C 52,21, I-l 5,59, N 5,18, S 8,90% (2) Framställning av G-N-bensyloxikarbonyl-lf",6"-O-cyklohexyliden-l,3,3"-tri-N- Beräknat tosylkanamycin A _ _ Den vid förfarande (1) erhållna substansen (l,29 g) upptogs i 4 ml dimetylformamid,_och den erhållna lösningen blandades med 45 mg toluensulíon- syra och 0,86 ml .Llr-dlmetoxicyklohexan. Den sålunda erhållna 'blandningen fick stå vid rumstemperatur i 6 timmar (för 4",6"-O-cyklohexylidenering). Reaktions- . blandningen hälldes sedan i en stor volym 'av en lösning av natriumvätekarbonat i g vatten, och den sålunda avsatta fällningen avlägsnades genom centrifugering, tvättadesvài medgvatten och torkades sedan. Utbyte 1,35 g (9896). [a)â5=+0° _(c = 0,5, aceton). 7910734-8 37 Elemen taranalX. s Funnet: _ C 54,89; H 6,10, N 4,63, S 8,52% Beräknat, i (för c'¿3H68N,¿o1953)= C 54,81, H 15,90, N 4,32, S 8,28% (3) Framställning av #",6"-O-cyklohexyliden-l,3,3"-tri-N-tosyl-4'-0:6'-N- karbonyl-kanamycin A Hm c i NHTs (Ts = tosyl) Den vid förfarandet _(2) ovan erhållna substansen (911 mg) löstes i* 18 ml dimetylformamid, och tilluden erhållna lösningen sattes 337 mg 5096 natrium- hydrid i olja. Blandningen omrördes över natten vid rumstemperatur och blandades sedan med 3,5 ml HN ättiksyra och vidare med 50 ml toluen. Hela blandningen destillerades för att avlägsna lösningsmedlen, och den sålunda erhållna tjocka sirapen blandades med en stor volym vatten. Den härvid avsatta fällningen uppsamlades genom filtrering, tvättades med etyleter och -torkades, varvid man fick en färglös fast substans, innehållande den ovan angivna ' titelföreningen. Utbyte 685 mg (8596). i (fi) 4",6"-O-cyklohexyliden-lF-O:G-N-karbonyl-S, T-O-isopropyliden- l ,3,3"~tri-N- tosylkanamycin A -7910734-8 fsa (Ts = tosyl) Den vid förfarandet (3)_ ovan erhållna substansen (100 mg) suspenderades _ _i en blandning av liml diklorrnetan och 2,5 ml tetrahydrofuran, och till den erhållna suspensionen sattes Zml Zfladimetoxipropan. Den sålunda erhållna blandningen blandades vidare med 6ml av en lösning av 0,035N klorväte i diklormetan, följt _av' upphettning i l7 minuter under återflöde (för 5,2'-O- isopropylideneringfl Denna reaktion utfördes i ett reaktionskärl. försett med en återloppskolonn i reaktionskärlets överdel, varvid en kolonn innehållande 5 ml "Molecular Sieves 5A" (en zeolitprodukt framställd av Union Carbide Co., USA) infördes mellan återloppskolonnens unclerdel och en utloppsöppning i reaktor- _ kärlets överdel på sådant sätt att den ånga som destillerade från reaktions- lösningen i kärlet kunde stiga upp genom ett sidorör; som var direkt anslutet mellan reaktionskärlet och återloppskolonnens botten, så att den kondenserade, metanolhaltiga ångan som föll ned i återloppskolonnen sedan kunde passera via molekylsiktkolonnenoch så att endast metanol kunde avlägsnas genom adsorption av molekylsiktarna. Således kunde kondenserat lösningsmedel befriat från metanol återgå 'till reaktionskärlet. Om den ovannämnda reaktionslösningen _ upphettades enbart under återflöde utan att avlägsna metanolångan med hjälp av njolekylsiktkolonnen, erhölls det oönskade 2',3'-O-isopropylidenderivatet som biprodukt i mycket större, andel än det önskade 5,2'-O-isopropylidenderivatet, så 7910734-8 39 att den senare, önskade produkten bildades med mycket dåligt utbyte och inte kunde utvinnas med något väsentligt utbyte.

Reaktionsblandningen från reaktionen ovan kyldes genom iskylning och hälldes sedan_i en stor volym av en blandning av dioxaii och IN vattenhaltig ammoniak, och den erhållna blandningen koncentrerades. Den sålunda erhållna koncentrerade lösningen späddes med en volym etyleter för att fälla ut en färglös fast substans. Denna fasta substans uppsamlades genom filtrering, tvättades med vatten och torkades till 85 mg av en fast substans. Denna fasta substans upptogs i _ 3 ml kloroform, och den erhållna lösningen kromatograferades i en kolonn av 5 ml kiselgel eluerad med kloroform/etanol (lO:l i volym) som elueringsmedel i reningssyfte. Utflödet som rann ut ur kiselgelkolonnen koncentrerades till torrhet i i vakuum, vilket gav 6l mg av en fast substansr Denna fasta substans upptogs åter i 5 ml kloroform, och lösningen upphettades. Ällteftersom upphettningen fortsatteutföll det oönskade 2',3'-O-isopropylidenderivatet. Hela lösningen fick stå vid rumstemperatur över natten, följt av filtrering. Det sålunda erhållna tiltratet koncentrerades till torrhet, vilket gav 32 mg av den ovan rubricerade önskade produkten. [u )â5=+2O° (c = 0,5, aceton).

Elementaranalys runner: c 53,61, H 5,81, N 4,23, s 2,57% (för CwHóqNuOlsSah (I 53,83, H 5,90, N 5,13, S 8,80% (5) Framställning av 6'-N-bensyloxikarbonyl-1,3,3"-tri-N-tosyl-5,2'-O-isopro- pyliden-4",6"~O-cyklohexyliden-kanamycin A I _ Den vid förfarandet (4) ovan erhållna substansen (48 mg) löstes i 2 ml vatten/dioxan ('l:3 i volym), och den sålunda erhållna lösningen blandades med 30 mg vattenfritt riatriumkarbonat, följt av upphettning vid 50°C i l timme för att utföra hydrolys av substansen, vilket åstadkom klyvning av det 4',6'-cykliska karbamatet och avlägsnande av lP-O:6'-N-karbonylgruppen. Den erhållna reak- tionslösningen blandades sedan omedelbart med 80 mg bensyloxikarbonylklorid, ßeräknat 'varefter den fick stå i 2 timmar vid rumstemperatur (för 6'-N-bensyloxikar- bonylering). Reaktionsblandningen neutraliserades sedan så att den blev svagt -alkalisk genom tillsats av ättiksyra, och den koncentrerades därefter till en inindre volym i vakuiim. Den koncentrerade lösningen blandades med en stor volym vatten, och den utfällda fasta substansen avlägsnades genom filtrering, tvättades väl med vatten och sedan med etyleter och torkades, vilket gav den ovan rubricerade produkten som en fast substans. Utbyte 42 mg (82%). (u]|2)5=+9° (c = 1, kloroform). 7910734-s 40 ' Elementagatxíys Funnet: (3 55,75, H 6,07, N 14,48, S 7,82% Beräknat (för'C_56H72N¿¿O19S'3): ._ C 55,99, H 6,Q¿ß, N 4,66, S 8,01% . (6) Framstâllning av 6'-N-bensyloxikarbonyl-l,3,3“-tri-N-tosyl-5,2'-O-isopropyli- den-IW,Gl-O-cyklohexyliden-3',4!,2"-tri-O4bensylsulfonyl-kallamycin A Bzo2cHNH2o 5. _ Nuts (Ts = tosyl Bz bêflfiyl) SOzBz 6'-N-Bensyloxikarbonyl-l',3,3"-tri-N-tosyl-5,T-O-isopropyliden-4",6"-O- cyklohexyliden-kanamycin A (611 mg) erhållet vid förfarandet (5) ovan löstes i 12 ml pyridin, och den erhållna lösningen blandades efter iskylning med 320 mg bensylsulfonylklorid och fick sedan stå i 2 timmar under iskylning (för BSLP-di-O- bensylsulfonylerlng åtföljt av ZWO-'bensylsulíonylering). Den flytande reaktions- blandningen blandades med 0,2 ml vatten och koncentrerades till en liten volym i vakuum. Deniâterstående fasta substansen blandades med en volym vatten, och - den olösliga fasta substansen avlägsnades genom filtrering, tvättades väl med vatten och torkades, vilket gav den ovan angivna titelprodukten som en fast I substans. utbyte 795 mg (94%). (tt]É5=+7o° (e: 1, kiotofottn).

Elementaranalvs Funnet; c 55,23, H 5,40, N 3,19 Beräknat (för c77H9ON,+o25s6)= <1 55,58, H 5,45, N 3,37% 7910134-8 y 41 (7) Framställning av Q-N-bensyloxikarbonyl-1,3,3"~tri-N-tosyl-5,2'~O-isopropyli- den-ll",6"-O-cyklohexyliden-ZWO-bensylsulfonyl- 3',¿ß'-dideoxi-T-eno-kanafnycln A Bzogcnnnzc NÉTS l~- A _ ar-"\ NHTS _\_e I a -Heb ll tosyl, bensyl) ll _ v ~ _ 0 _ y ß Hzc _ ' _ 0 // \ éljs I, (Ts \ O BZ 1 šsozßz Det vid förfarandet (6) -ov-an erhållna 3',å",2'Ltri-O-bensylsulfonyl- kanamycin A derivatet (560 mgllöstes i 1-2 ml dimetylformamid, och den erhållna lösningen blandades med 6g natriumjodid, följt av upphettning till l00°C i _ 5,5 timmar (för 3';4'-omättn1ng). Reaktionsblandningen blandades med en stor volym kloroforrn följt av centrifugering. Den, sålunda erhållna överstàende lösningen koncentrerades till en mindre volym och späddes med en volym vatten, och den utfällda .fasta substansen tvättades väl med vatten varefter den torkades. Denerhållna fasta substansen upptogs i 10 ml kloroform och renades sedan genom kromatografi 'på en kiselgelkolonn, som eluerades med kloro- forma/metanol (20:l) som elueringsrnedel. Koncentrering av utflödet från kisel~ .gelkolonnen- till torrheLgav den ovan angivna titelföreningen som en fast substans. Utbyte 218 mg (49%)l [cz]25=+ll° (c = j, kloroforrn).

Elementaranalys a - _ Funnet: C 57,11, H 5,66, N 14,09, S 9,43% l(wrcün%N¿ypg= C 57,25, H 5,80, N (524, S 9,70% Beräknat .791n7s4¿s. azi ' (s) Ffalnstzililiing av suv-dideoxiksnrilnyczn A Det vid förfarandet (7) ovan erhållna T-eno-kanamycin A-derivatet (ll-Éïmg) löstes ml 80%-ig vattenhaltig ättiksyra, följt av upphettning till 80°Ciii l timme'(för att avlägsna 5,2'-O-isopropyliden- och 4",6"-O-cyklohexyli- dengrupperna). Reaktionslösningen koncentrerades till en mindre volym, och den koncentrerade lösningen blandades med vatten för utfällning av en fast substans som sedan tvättades med vatten och därefter torkades. Den sålunda erhållna fasta substansen innehöll deit de-isopnopylidenerade och de-cyklohexylidenerade _i kanamycin A-derivatet, dvs. 6'-N-bensyloxikarbonylÄl-J,3"-tri-N-tosyl-2"-O-ben- isylfsulfonyl-3',¿+'-dideoxi~T-eno-kanamycin A. _1413 mg av denna fasta produkt _ upptogs í 4 ml díoxan, och den erhållna lösningen skakades i vätgasatmosfär vid 3 atm., ii 2,5 timme vid rumstemperatur i närvaro av 40 mg tillsatt platïnaoxid. _ Reaktionslösningen filtrerades för eliininering av ikatalysatorn, och íiltratet koncentrerades till torrhet i vakuum, varvid man fick 412 mg av en fast substans. _ i i Syftet med denna behandling med väte var att hydrera den 324'- 'ornättade bindningen med väte till en mättad bindning och att samtidigt avlägsna SHN-biensyloxikarbonylgruppen. Den erhållna fasta substansen identifierades att innehålla l,3,3"-tri-N-tosyl-ZWO-bensylsulfonyl-TJP-dideoxikanamycin A. Den erhållna 'fasta substansen löstes i ca l5O m_l flytande ammoniak vid -iOoCz följt - .av tillsats av 400 :ng bitar av metalliskt natrium och av omrörning vid samma temperatur som ovan i 1,5 timme (för att avlägsna N-tosylgrupperna 'och 2"-O- i bensyilsulfonylgruppen). Därefter sattes en volym etanol till reaktionslösningen i 'flytande ammoniak, och blandningen bringades långsamt till rumstemperatur med avdunstning av ammoniak ochiuts-attesisedan för reducerat tryck för att avdríva den återstående spârmängden av ammoniak därifrån. Den sålunda erhållna fasta i. substansen löstes i vatten, och den erhållna vattenlösningen neutraliserades 'genom tillsatsiav en-mängd av ett kraftigt siurt katjonbytarharts, "Dowex 50Wx2" (Hii-form) (en produkt från Dow Chemical Co., USA). Detta harts avlägsnades från fvattenlösningen' genom filtrering och packades sedan i en i kolonn, följt av eluering medlN-vattenhalitig ammoniak. Eluatet uppsamlades i fraktioner, och de fraktioner som innehöll substans som var, positiv vid ninhydrinreaktion slogs samman och koncentrerades till torrhet, vilket gav en råproidukt av Bßlfl-dideoxikanamycin A. För rening löstes den fasta råprodukten i vatten, och den erhållna vattenlösningen satsades i en kolonn av CM~Sephade C-25 (en produkt från Pharmacia Fine Co, Sverige), följt av gradienteluering med ON ~-:~0,l_2°N vattienhaltig ammoniak. Eluatetiinnehållande den önskade produkten i uppsamlades och koncentrerades till torrhet i vakuum, vilket gav en ren produkt av Bßllfl-dideoxikanamycin A-karbonat som en färglös fast isubstans. Utbyte 7910734-8 43 115 fng(sa%)¿ (a]š5=+11e°(c = 1, varven). šlsffleüflíeeëy: Funnet: C #1+,22, H 7,34, N lf),45% Beräkna: (för c18H36N4o9. 1,1H2co3) _ C 43,90, H 7,4l, N l0,72% Exemgeií ' I i _ I Syntes av Bßlß-dideoxikanamycin A f (l) Framstäilning av 3',Zfidi-Q-acetyl-li",6"-O-cyklohexyliden-lP-O:G-bl-karbonyl- ZZKO-isopropyliden-l ,3,Tßtri-N-tbsylkanamycin A HNHZC ¶ NHTS / . . NHTS ll u (Te Ac tosyl, acetyl) Ac Det i Exempel lovan, förfarande (Li), erhållnakanamycin A-derivatet, dvs. 4",6"-O-cyklohevyliden-llfl-Ozë-N-karbonyl-5,2'-O-isopropyliden- l ,3,3"-tri-N- tosyl-kanamycin A (210 mg) löstes i 14,2 ml pyridin, och den erhållna lösningen i pyridin blandades med 0,11 ml ättiksyraanhydrid, varefter det hela fick stå vid rumstemperatur över natten (för 3',W-di-O-acetylering). Reaktionslösningen koncentrerades till en liten volym och späddes sedan med vatten för u-tfäilning av en íällning som sedan avlägsnades genom filtrering- tvättades väl med vatten och torkadesl Man- fick titelföreningen ovan sam en färglös fast substans. Utbyte 217 mg (9696). [om )25=_+76° (c = 0,4, aceton).

Elementaranalxs i U runner; i c 54,00, H 5,96, N-mss, s 7,72% Beräkna: , (förcßnégwqozosy: C 54,07, H 5,82, N 4,76, S 8,17% I te791o734~si _ 44 lNlvlRésgiektrLiiri (i d<~utero~pyridin): Å 5,37 (triplott, J=9,5 Hz, H-3'); 5, S7 (dubbel rripieu, J=9,§ a; 3 Hz, H-2"); _s,a5 (damen, J=3 Hz, H-m; 6,65 (dubieu, J=3 Hz, H-1"L ' - W H (å) Framställning av T-O-acetyl-ll",6"-O-cyklohexyliden-lL'-O:6'-N-karbonyl-5,2'- O-isopropiyliden-l-,3,3"-tri-N-tosyl-kan~amycin A I _ _ I Det 'vid förfarandet (l) erhållna kanamycin A-derivatet (29,6 mg) löstes i 2.,5 ml av en 'lösningkav SN ammoniak i etanol, ooh den erhållna lösningen fick _ stå i 40 ininu-ter víd-rumsternoeratut för att åstadkomma partiell hydrolys för att eliminera ZWO-acetylgruppen. Reaktionslösningen koncentrerades omedelbart till _en nfindre volynr i vakuunp och den återstående koncentrerade_lösningen blandades :ned en volvm vatten .för att avsätta en fällning, " som sedan avlägsnades genoniufütreñng, tvattades rned-vatten och torkades.|)en ovan _ angivna titelprodukten er_h_öllš som en fast substans i ett utbyte på 28,5 mg i (19096). ' - ' ' _ ' NMR-spektrum (i deutero-pyridinh' 5 5,40 (trízpletfl 1:10 Hz, H-3'). (3) Framställning av G-N-bensyloxikarbonyl-4",6"-O-eyklohexyliden-5,2'-O-iso- propyliden-ZWQ-te ttahydropyranyl- l , 3,_§"-tri-N-tosyl-kanarnycin A NHTs H5c6H2coocHNH2c . '- _ o QULO Ho " ' i L* 45 _ Det vid förfarandet (2) ovan erhållna 3'-O-acetyl-l vatet (50,5 mg) upptogs 1 0,7 ml diklormetan, och den erhållna lösningen blandadesmed 0,86 mg toluensulfonsyra och' sedan rned 0,1 ml 3,4-dihydro-2-H- pyranjvareíter det hela fick stå i 3 timmarvid rumstemperatur (för 2"-O~ tetrahydropyranylering). Reaktionslösningen blandades sedan 'med 0,02 ml '_ trietylamin och koncentrerades till torrhet, och återstoden löstes i en volym 'kloroform. Den sålunda erhållna lösningen tvättades med en vattenlösning av natriumvätelcarbonat och torkades över vattenfritt natriumsulfat. Lösningen i kloroform filtrerades för att avlägsna natriumsulfatet, och filtratlösningen koncentrerades till torrhet. Den återstående fasta substansen innehållande 2"-O- tetrahydropyranylprodukten upptogs i 2 ml vatten/dioxan (l:3), och den erhållna lösningen upphettades vid 50°C i' l timme efter tillsats av 30 mg vattenfritt natriumkarbonat. Denna behandling medförde hydrólytisk eliminering av 3'-O- acetylgruppen och eliminering av lP-O:Q-N-karbonylgruppen, vilket innebar u klyvning av den lv, '-cykliska-karbamatringen. Reaktionslösningen blandades sedan med 9,0 mg bensyloxikarbonylklorid, varefter det hela fick ståi 2 timmar vid rumstemperatur (för Ff-N-bensyloxikarboriylering). Den sålunda erhållna ' realttionsblandnirigen neutraliserades så att den blev svagt alkalisk genom tillsats av ättiksyra, och den koncentrerades sedan till en mindre volym._ Den koncentrerade lösningen blandades med' en stor volym vatten, och den sålunda utfällda fasta substansen tvättades väl med vatten och sedan med etyleter samt torkades, vilket gav 142,3 mg (utbyte 7496) av titelföreningen ovan som en fast substans. (o: ]|2)5=+28O (c = 0,5, kloroforrn). I Elementararialxs Funnet: C 56,65, H 6,27, N (517, S 7,25% Beräknat _ (för CólHsoNgOzoây: .

' C 56,99, H 6,27, N 4,36, S 7,48% (4) Framställning av G-N-bensyloxikarbonyl-l,3,3"-tri-N-tosyl-5,2'-O-isopropyli- den-4",6"-O-cyklohexyliden-2"-O-tetrahydropyranyl-3',l+'-di-O-bensylsulfonyl-ka- namycin A _ lirotlukteci från förfarandet (3) ovan, clvfsf Cf-Ndjcnsyloxikarbonyl-4",6"- O-cyklohexyliden-fi,T-O-isopropyliden-2"-O-tetrahydropyranyl~l,3,3"-tri-N-tosyl- i -kanamycin A (519 mg) .i 10 ml' pyridin kyldes med is, och den iskylda lösningen blandades med 164 mg bensylsulfonylklorid. Man fortsatte att iskyla den erhållna blandningen i l timme för 3',l+'-di-O-bensylsulfonylering. Reaktionslösningen blandades med 0,1 ml vatten och koncentrerades sedan, och den koncentrerade lösningen blandades vidare med en volym vatten för utlällning av en fast substans. Denna fasta substans avlägsnades genom filtrering, tvättades väl med 'tetrahydropyranylerade produkten, -791073448 46 vatten och torkadcs, vilket gav' 618 mg (96%) av den ovan angivna titelföreningen »som en färglös fast substans. [u ]É5=_+39° (<3 = l.,l<10r0f0rfn)_ ' Elementarahalys c 56,21, H 5,83, N 3,38, s 9,30% (för cßfláznuonsjl; c 56,52, H 5,82, N 3,sz,'_s 10,063 Funnet: Beräkna: -(5)_Framstä1lning av* GHN-'bensyloxikarbonyl-l,3,3"-tri-N-tosyl-BFJIJ-dideoxi-3'~ eno-kanamycin A i ' _ _ Det vid förfarandet (4) ovan erhållna kanarnycin A-derívatet (618 mg) uppvâirmdes i 10 m1_8096-ig vattenhaltig ättiksyra i l timme vid 80°C för att 'avlägsna hydroxiskyddsgruppernay isopropylidengruppen, cyklohexylidengruppen och tetrahydropyranylgruppen därifrån. Reaktionsblandningen koncentrerades sedan till en mindre volym, följt av tillsats av vatten till den erhållna koncentrerade lösningen fönutfällning av en fast substans. Denna fasta substans avlägsnades genom filtrering; tvättades med vatten ochtorkades, vilket gav 7541 mg' (10096) av den del-isopropylidenerade, de-cyklohéxylidenerade och de- dvs. G-N-bensyloxikarbonyl-l,3,3"-tri-N- tosyl-3',lP-di-O-bensylsulfonyl-kanamycin A i form av en färglös fast substans.

Denna substans (339 mg) upptogs i' 7ml dimetylformamid, och den erhållna lösningen blandades med 3,5 gnatríumjodid och 1,8 g zinkmetallpulver, följt av upphettning till IOOOC i l timme under omrörning för att åstadkomma reaktion I för bildning avißeno-kanamycin A-derivatet. Reaktionsblandningen blandades med en stor volym kloroform för att utfälla överskottsmängden natriumjodid.

Blandningen centrifugerades för att avlägsna natriumjodidfällningen, och den sålunda 'erhållna organiska lösningsmedelslösningen (supernatanten) koncentrera- des till torrhet i vakuum. Den fasta återstoden-löstes i 15 ml kloroform, och . lösningen kromatograferades för rening av kanamycin A-derivatet genom passage - genom en kiselgelkolonn och eluering av kolonnen med kloroform/metanol (8:l) som elueringsrnedel. Eluatet innehållande den önskade föreningen, dvs. 6'-N- - bensyloxikarbonyl-l,3,3"-tri-N-tosyl-3'Jlfl-dideoxi-Bßenoakanamycin A , koncen- treradestill torrhet i vakuum, vilket gav den ovan angivna titelprodukten som en färglösfast substans. Utbyte 203'mg (8Ö96). [oflšjwlfio (c = 1, kloroform).

Elcmentaraiialys ' runner: c 52,92, H 5,42, N 5,13, s 3,37% i (för c47H58N,Lo”s3.H2o)= C 52,99, H 5,68, N 5,26, S 9,03% Beräknat 7910734-8 47- (6) Frarnställning av Bßlfl-dideoxikanarnycin A Det vid .förfarandet (5) ovan erhållna kanamycin A-derivatet (203 mg) löstes i 2 ml dioxan, följt av behandling med väte på samma sätt som i Exempel l - (8) ovan i närvaro av tillsatt platinaoxid (20 mg) för att åstadkomma hydrering av den 3',4'-olefinisl gruppen. En råprodukt av l,3,3"-tri-N-tosyl-Bßlfl-dideoxikanarnycin A erhölls med ett utbyte på 204 mg (10096).

Denna tri-N-tosyl-B'JH-dideoxikanaxnycin A-förening 'löstes i ca 100 ml flytande ammoniak vid -50°C, till vilken man sedan satte 300 mg natriummetall- kbitar.. Blandningen underkastades. reaktion för el-iminering av tri-N-tosyl- grupperna på samma sätt som i Exempel l (8) ovan, följt av reningsförfarandet på samma sätt som i Exempel l (S) ovan. En renad. produkt av Bßlfl-dideoxikana- 'mycin A erhölls med ett utbyte på 67,9 mg (6796).

Exemgérs e Syntes av Bßlß-dideoxikanamycin A (1) Framställning av 6'-N-bensyloxikarbonyl-l,3,3'!-tri-N-tosyl-5,2'-O-isopropy- liden-4",6"-O-cykIohexyliden-2"-O-tetrahydropyranyl-3',lV-di-O-metansulfonylka- namycin A. I _ Det i Exempel 2 (3) ovan erhållna skyddade kanamycin A-derivatet, dvs. 6'-N-bensyloxikarbonyl-li",6"-O~cyklohexyliden-5,2'-O-isopropyliden-TH-O-te-tra- hydropyranyl-l,3,3"-tri-N-tosyl-kanamycín A (640 mg) upptogs i 10 ml pyridin, och den erhållna lösningen blandades efter iskylning med 135 mg metansulfonyl- klorid, följt av omrörning i l timme under iskylning för att åstadkomma 3',f+'~di- O-metansulfonylering. Reaktionsblandningen koncentrerades till en mindre volym efter tillsats av 0,l ml vatten och späddes sedan med vatten för utfällning av en 7 fast substans, som sedan avlägsnades genom filtrering, tvättades väl med vatten och torkades. Den ovan angivna titelföreningen erhålls som en färglös fast substans med ett utbyte på 680 mg (95%). (o: ]{2)5=+l+3° (C = l, kloroform). _' Elementaranalys . runner; ' c 52,41, H 5,63, N 3,67, s io,ss% i Beräknat (för CsaHguNgOznSjh c 52,1+s,_H 5,87, N 3,29, s i_1,12% (2) Framställning av 6'-N-bensyloxíkarbonyl-l,3,3"~tri-N-tosyl-3',1+'-dideoxi-3'- ene-kanamycin A Det vidförfarandet (2) ovan erhållna 3',lP-di-O-metansulfonyl-kanamy- ' cin A-derivatet (563 mg) uppvärmdes i 10 ml 8096-ig vattenhaltig ättiksyra till 80°C i_ l timme för eliminering av hydroxiskyddsgrupperna, isopropylidengruppen, cyklohexylidengruppen .och tetrahydropyranylgruppen därifrån. Reaktionsbland- 7910734-s -48 i ningen' koncentrerades till en liten volym, och den koncentrerade lösningen blandades med en' volym vatten för gutfällning av en fast substans. Denna fasta substans uppsamlades genom filtrering, tvättades med vatten och torkades, vilket u gav i 5_lO mg av ett partiellt deblockerat kanamycin A-derivat, dvs. 6'-N- bensyloxikarbonyl-l,3,3"-tri-N-tosyl-3',4hdi-O-metansulfonyl-kanamycin A. Denna substans löstesli 7 ml dimetylformamid, och den' erhållna lösningen blandades med 3,5-g natriurnjodid och 1,8 g zinkmetallpulver, följt av upphettning i l timme I 'till IOOOC för 'att åstadkomma reaktionen för bildning av T-eno-kanamycin A- derivatet. Den erhållna reaktionsblandningen blandades med en stor volym lkloroform,¿och den därvid utfällda natriumjodiden avlägsnades från den organiska vätskefasen genom cenutrifugering. Den organiska vätskefasen koncentrerades till -torrhet i vakuum, och 'clenåterstâende fasta substansen renades genom att en lösning av densamma i kloroform kromatograferades på kiselgelkolonn eluerad med kloroform/metanol (Szl). Den ovan angivna titelföreningen erhölls som en färglös fast substans med ett utbyte på 317 mg (7696). (a]2-5=+l5° (c= l, kloroform). _ « Elementaranalvs Funnet: C 52,92, H 5,48, N 5,18, S 8,87% Beräknat (för cWx-i58N4o17s3.i-12_o)= '- ' _ C 52,99, H 5,68, N 5,26, S 9,03% (3)'Fra'rnställning av TJP-dideoxikanamycin A i - Det vid förfarandet (2) ovan erhållna skyddade Bßeno-kanamycin A- derivatet underkastades katalvtisk hydrering med väte och även behandling med natriummetall i flytande ammoniak på. samma sätt som beskrivits i Exempel 2 (6) ovan, vilket gav Bßlß-dideoxikanamycín A. Utbvte 101 mg (6596).

Claims (2)

1. ÉÉ791o734-s 49 PATENTKRAV Förfarande för framställning av Bßlß-dideoxikanamycin A m-ed formeln: kännetecknat avstegen: (a) behandling av ett skyddat derivat av kanamycin A :ned formeln: '791o734=s 50 (II) där varje A betecknar en alkylsulfqnlylgrupip innehållande l till 4 kolatomer, en arylsulíonylgrupp eller eneralkylsulíonylgrupp som aminoskyddsgrupp, B be- i. tecknar en alkoxíkarbonylgrupp innehållande 2 tille5 kolatomer, en aralkyloxí- karbonylgrupp. eller en, aryloxikarbonylgrupp, och Y betecknar en tvävärd hydroxiskyddsgrupp, 'med ett basiskt reagens- under vafteníria betingelser i ettaorganiskt lösnings- medel för :framställning av ett A#',6'-c:ykli§_kt karbamatderivat med formeln: -HNHC 'in NHA _,2. i i i där ,..-... ._.......__ _ .ç-n-øn-vfl < g791o734-s 51 A och Y har den ovan angivna innebörden: (b) omsättning av 4',6'-karbarnatföreningen med formeln (lll) med 2,2- . dimetoxipropan, lJ-dimetoxicyklohexan, bensaldehyd, dimetylacetal eller 5,6- dihydro-ll-metoxi-ZH-pyran under vattenfria betingelser i ett organiskt lösnings- medelui närv derivat med formeln: 6! aro av en syrakatalysator för. framställning av ett 2',5-O-skyddat (m där A och Yf har den-ovan 'angivna innebörden och X kan vara samma som eller skilt från Y och betecknar en .isopropylídenq cyklohexylidem, bensyliden- eller tetrahydro-li-pyranylidengrupp, följt av isolering av det ZlJ-Ö-skyddade derivatet (IV) från det som biprodukt bildade 2',3'-O-skyddade derivatet; (c) hydrolys av den 2',5-O-skyddade föreningen med formeln (IV) under alkaliska betingelser för att klyva llßéßkarbamatringen och generera den fria ll'- hydroxigruppen och den fria- G-aminogruppen, följt av' alkoxikarbonylering, _ aralkyloxikarbonylering 'eller alkanoylering av den fria 6'-aminogruppen i ring- klyvningsprodukten, så att man får ett Byífl-dihydroxiderivat med formeln: l79107s4-s f 52 W) 'där A, Y och- har den ovan angivna innebörden och B' betecknar en alkoxikarbonylgrupp innehållande 2 till 5 kolatomer, en aralkyloxikarbonylgrupp -eller en alkanoylgrupp, ' (d) sulionylering av 3',lflfldihydroxiföreningen medzformeln (V) genom omsättning med en alkylsulfonyl- ellen aralkylsulfonylklorld eller -bromid med formeln; _ - ' Rlsozcl- i (V1) _ Rlsozàf " (vr) eller en motsvarande sxilíonsyraanhydrid med formeln: ' (Rlsozlzo _ . (vw) där RI betecknar en alkylgrupp innehållande l till I; kolatomer eller en aralkylgrupp, , ' i. _ som sulforíyleringsmedel under vattenfria betingelseri ett organiskt lösnings- ' _' medel-för framställning av ett 2";3', '-tri-_O'-sulfonylderivat_med formeln: 7910734-8 (v11) I _ sal o 02 där A, B', RI, X och Y har den ovan angivna innebörden; (e)- omvandling av den erhållna 2", 3'JP-tri-O-sulfonyl-kanamycin A- föreningen til-l 3'-eno-kanamycin A-föreningen genom behandling med en alkali- metalljodid i frånvaro av zinkmetallpuiver; (f) omvandling av 3'-eno-kanamycin A-föreningen till BSLP-dideoxikana- mycin A-föreningen genom reduktion med väte i närvaro av en hydreringskataly- sator för att' mätta den Bßlfl-omättade bindningen- i Bheno-kanamycin A- föreningen; (g) avlägsnande av de hydroxiskyddsgrupper (X och Y) som är kvar i 5-4, 2'-, 1:”- och Qhställningarna kanamycin A-föreningen genom syrahydrolys på känt sätt; . i . o u (h) avlägsnande' av den aminoskyddsgrupp (B') som är kvar vid 6'- aminogruppen i kanamycin A-föreningen på känt sätt; (i) avlägsnande av 2"-O-sulfonylgruppen (-O2SR1) som är kvai-'vid 2"- hydroxigruppen och även av samtliga sulfonyigrupper (A) som är kvar vid 1-, 3- och 3"-aminogrupperna i kanamycin A-föreningen genom behandling med en alkalimetall eller jordalkalimetall i flytande ammoniak; och varvid vart och) ett av de ovannämnda stegen (g), (h) och (i) utförs i någon valfri följd av dessa steg efter varandra och vid någon godtycklig tidpunkt efter det att steget (d) för omsättning av Bßlflèdihydroxi-kanamycin A-föreningen _ 'med formeln (V) med sulfonyleringsmedlet (VI), (Vl') eller (VI") utförts. f1§91o734-s 54

2. Föríarande enligt patentkravet 1, _ k ä n n et e c k n at av att steget (d) följs av de nedan angivna stegen i följande ebfdningsefaijd= ' i - i _ i -Ömvandling av ' 'den erhållna 2",3',lß-tri-O-sulfonyl-kanamycin A-iör- eníflåefl med fOFYHGIH (Vil) till mot-svarande 3'-eno-kanamycín A-förening med _ formeln lvmzf? _I(VIIWI) genom- behandling av föreningen _(Vll_) med 'en alkalimetalljodid ifrånvaro av 1 zinkmetallpulver; ' _ avlägsnande av de hydroxiskyddsgrupper (X och' Y) som är kvar vid 5-, 2%-, 4"- och' 6“-ställningarna i* _ Bßeno-kanamycin A-föreningen (VIII) genom syrahydrolys på känt sätt; ' ' omvandling av den sålunda partiellt deblockerade Bßeno-kanamycin A- íöreningen till motsvarande 3', ßdideoxikanamycin A-förening genom reduktion _ med väte i närvaro av en hydreringskatalysator för att mätta den Bßlfl-omättade bindningen i T-eno-kanamycin A-íöreningen; avlägsnande av- den aminoskyddsgrupp (B') som är kvarivid 6'-amino- gruppen 'i den Bßlßßdideoxikanamycin A-förening som erhålls som hydrerings- n produkt vid det just föregående steget; och 7910734-s l\ avlägsnande från den sålunda partiellt ytterligare deblockerade 324'- ss' dideoxikanamycin A-föreníngen av den återstående ZWO-sulfonylgrupp 9025121) I som är kvar vid ïf-hydrloxigruppen och även av samtliga sulfonylgrupper (A) som är kvar vid l-, 3- och 3"-aminogrupperna _i ñßül-dideoxikanamycin A-föreningen genom behandling av den senare med en alkal-imetall eller jordalkalimetall i . flytande ammoniak, varigenomman får den önskade produkten BQÅP-dideoxikana- mycin A. 4 3_. Förfarande enligt patentkravet 1, k ä n n e t e c k n a_ t av att steget (d) följs av nedanangivna steg i följande ordning: _ _ _ omvandling av 'den erhållna 2",3',lN-tri-O-sulfonyl-kanamycin A-för- eningen med formeln (VII) till motsvarande 3'-eno-kanamycin A-förening med formeln (Vlll) genom behandling av föreningen (VII) med en alkalimetalljodid i frånvaro av zinkmetallpulver; 7 omvandling av T-eno-kanamycin A-föreningen (Vlll) till motsvarande Bßlß-dideoxikanamycinA-förening genom reduktion med väte i närvaro av en hydreringskatalysator för- att mätta den 3',4'-omättade bindningen i 3'-eno- kanamycin A-föreningen; avlägsnande av den aminoskyddsgrupp (B') som är kvar vid 6'-amino- gruppen i den sålunda erhållna JQIP-dideoxikanamycin A-föreningen på känt sätt; avlägsnande från den sålunda partiellt deblockerade TJP-dideoxikana- mycin A-föreningen av de hydroxiskyddsgrupper (X och Y) som är kvar vid 5-, 2'-, 'W-och 6"-ställningarna av 3', ßdideoxíkanamycin A-föreningen genom syrahydro- llys på känt sätt; och avlägsnande från den sålundapartiellt ytterligare deblockerade 324'- dideoxikanamycin A-föreningen av den återstående ZWO-sulfonylgrupp FOZSRI) som är kvar vid 2"-hydroxigruppen och även av samtliga sulfonylgrupper (A) som är kvar vid l-,' 3- och 3"-aminogruppernai Bßlifl-dideoxikanamycin A-föreningen genom behandling av 'den senare med en alkalimetall eller jordalkalimetall i flytande ammoniak, varigenom man får den önskade produkten Bßlß-dideoxikana- mycin A. 4 . Förfarande enligt patentkravet 1, k ä n n e t e c k n a t av att steget (d) följs av de nedan angivna stegen i följande ordningsföljd: _ i omvandling av den erhållna 2",354'-tri-O-sulfonyl-kanamycin A-för- eningen med formeln (VII) till motsvarande Bßeno-kanamycin A-förening med 7910734-s 56 formeln (VIII) genom Behandling av föreningen (VII) med en alkalimetalljodid i frånvaro av zínkmetallpulver; avlägsnande' från Bßeno-kanarnyein A-»föreningen (VIII) av de hydroxi- skyddsgrupper (X och Y) som är kvar vid_5-, 2', 4"- och 6"-ställningarna i 3'-eno- i kanamycin A-föreningen genom syrahydrolys på känt sätt; i ' avlägsnande från .den sålunda partiellt deblockerade Bfl-eno-kana- mycin-A-föreningen av den återstående aminoskyddSgrUPP.(B') som är kvar vid Q- aminogruppen i T-eno-kanamycin.Åeföreningen på känt sätt; »avlägsnande från den sålunda partiellt ytterligaredeblockerade 3'-eno- kanamycin A-föreningen av den återstående ZMO-sulfonylgrupp (-O2SRl) som är kvar vid Zf-hydroxigruppen och även av samtliga sulfonylgrupper (A) som är kvar vid l-, 3- ooh 3"-aminogrupperna i Bf-eno-kanamycin A-föreningen genom _ behandling av den senare med en alkalimetall eller jordalkalimetall i flytande '_ ammoniak; och _ omvandling av den sålunda helt deblockerade T-eno-kanamycin A- ' föreningen till Bßlß-dideoxikanamycin A genom reduktion med väte i närvaro av 'en hydreringskatalysator; för att mätta den Bßlfl-omättade bindningen i 3'-eno- kanamycin A-föreningen, varigenom man- får den önskade produkten 354'- dideoxikanamycin Ä. 5-I Q Modifiering av förfarandet enligt patentkravet 1 för framställning av Zißlfli-dideoxikanamycin A, , ' ' I kännetecknat avstegen: (a) behandling av ett- skyddat derivat av kanamyein A med den ovan angivna formeln (ll) med ett basiskt reagens under vattenfria betingelser i- ett organiskt lösningsmedel för framställning av det ll-'ß-cykliska karbamatderivatet med den. ovan angivna formeln (Iil); I (b) omsättning av den ovan angivna LIQQ-karbamatföreningen med formeln (III) med LZ-dimetoxipropan, Ll-dimetoxicyklohexan, bensaldehyd, dimetylacetal eller 5,6-dihydro-ll-metoxi-ZH-pyran under vattenfria betingelser i ett organiskt lösningsmedel-i närvaro av en syrakatalysator för framställning av det ovan angivna 2',5-O'-skyddade derivatet med formeln (IV), följt av isolering av det 2',5-0-skyddade derivatet (IV) från det som biprodukt bildade 2',3'-0- skyddade derivatet;- - ' U (j) skydd av 2"-hydroxigruppen i den 2',5-O-skyddade föreningen med formeln (IV) genom (I) omsättning av denna 2',5-O-skyddade förening (IV) med acetylklorid eller acetylanhydrid i pyridin för framställning av ett 3',2"-di-O- acetylerat derivat med formeln: 7910734-8 57 (nn) där A, X och Y har den ovan angivna innebörden och varje D betecknar en acetylgrupp, (2) efterföljande behandling av 3',2"-di-O-acetylerade derivatet (IV') med en ammoniakalisk alkanol för att med företräde eliminera 2"-aceltylgruppen därifrån, så att man får motsvarande Bkmono-O-acetylerade derivat, och (3) omsättning av det Bßmono-O-acetvlerade derivatet med BA-dihydro-ZH-pyran under vattenfria betingelser-i ett organiskt lösningsmedel för omvandling av 2"- hyrlmxígruppefl till c-n 2'-'--tèl|ahydrnpyfarivlnxígrupp; (ä) hydrolys av den erhållna P-tetraliydropyranyloxi-lßßU-karbaxnat- produktenf under alkaliska betingelser för att avlägsna 3'-O-acetylgruppen därifrån och klyva lPfl-karbarnatringen, så att man får ett 2"-O-skyddat i , ringklyvningsderivat med formeln: 7919734-s. clär A, X och Y har den Ovan angivna innebörden dch' Z betecknar tetrahydropyra- nylgruppen _ ; följt av alkoxikarbonylering, aralkyloxikarbonylering eller alkanoylering av den fria Gkamíínogruppen i den THC-skyddade ringklyvningsprodukten med formeln (IV“) till etf 3',4'-dihydroxl-F-O-skyddat derivat rned formeln: B-"mvazc . ~ ' _. ß WNHA 7910734-8 »59 'där X,> Y och Z har den'ovan angivna. innebörden och-B" betecknar en alkoxikarbonylgrupp innehållande 2 till 5 kolatomerjen aralkyloxikarbonylgrupp eller en alkanoylgrupp; _(d') sulfonylering av det 3',lfl-dihydroxi-ZWO-skvddade derivatet med _ íormeln (V') genom omsättning med en alkylsulfonyl- eller aralkylsulíonylklorid eller -bromid med formeln (_Vl) eller -Ö/P) eller en sulíonsyraanhydrid med formeln (Vl") ovan under vatteníria betingelser _i ett organiskt lösningsmedel för I 'framställning av ett 3',ll'-di-O-sulfonylderivat med formeln: _13"H1~m2c ' a; a* 'in iNHA i (VIP) ' /QHZC / , Y \ _ NHA . in där A, B", RI; X, Y och Z har den ovan angivna innebörden; (e') omvandling av den erhållna 3',4ßdi-O-sulfonyl-kanamycin A-för- eningen till Bßeno-kanamycin A-íöreningen genom behandling med' en alkali- O-Z rnetalljodid i närvaro av' zinkmetallpulver eller med natriumjodid enbart; (f) omvandling av T-eno-äkanamycin 'Ik-föreningen till Bßlfl-dideoxikana- mycin A-föreningen genom reduktion med väte i närvaro av en hydreringskataly- sator för att mätta den 3',l+_'-omättade bindningen i T-eno-kanamycin A- íöreningen; ~ V - ' (g") avlägsnande av de hydroxiskyddsgrupper (X, Y och Z) som är kvar vid 5-, W2'-, "- och 6"- liksom 2"-ställn'ingarna i kanamycin A-föreningen genom syrahydrolys; (h') avlägsnande av den aminoskyddsgrupp (B") som_är kvar vid 6'- í aminogruppen i kanamycin A-:föreningen pä känt sätt; _(i')'avlägsnande av samtliga sulfony-lgruppeflA) som är kvar vid 1-, 3- _och 'Laminogrupperna i kanamycin .Ål-föreningen genom behandling med en h791o7s4-s 60 -alkalimetall eller jordalkalimetall i flytande ammoniak; och varvid vart och ett av de ovannämnda stegen (g'), (h') och (i') utförs i någon godtycklig valfri ordningsföljd av dessa steg efter varandra och vid någon ' godtycklig tidpunkt. efter det att steget (d') 'för sulfonylering av 3',4'-dihydroxi- kanamycin A-föreningen med formeln (V') med sulfonyleringsmedlet (VI), (Vl') eller (Vl") utförts. I 5- I Förfarande enligt patentkravet, 5: k ä n n_e t .e c k n' at av att steget (d')'följs av nedan angivna steg i följande _ z ordningsföljd: avlägsnande av de hydroxískvddsgrupper (X, Y och Z) som är kvar vid 5-, ' 2'-,> 11"- och 6“Ä liksom 2"-ställningarna i 3",lF-di-O-sulfonyl-kanamycin A- föreningen med formeln (Vllf) genom syrahydrolys på känt sätt; omvandling av den erhållna partiellt deblockerade Jßlfl-dí-O-sulfonyl- kanamycin A-föreningen (dvs. 6'-N-alkoxikarbonyl- eller ól-N-aralkyloxikarbonyl- l,3,3"-trI-N-sulfonyl-3'5 '-di-O-sulfonyl-kanamycin A) till motsvarande 3'-eno- i' kanamycin A-förening genom behandling med eng alkalimetalljodid i närvaro av zinkmetallpülver eller med natriumjodid enbart; - i omvandling av den erhållna T-eno-kanamycin A-föreningen till mot- svarande Bßlß-dideoxikanamycin A-förening genom reduktion med väte i närvaro _ av en hydreringskatalysator för 'att mätta den 3',l_ß'-omättade bindningen i 3'-eno- kanamycin A-föreningen; avlägsnande av den U aminoskyddsgrupp (B") som är kvar vid 6'- f aminogruppen i den Bßlfl-dideoxikanamyciin A-förening som erhålls som hyd- reringsprodukt i det föregående steget på känt sätt; och avlägsnande från den sålunda partiellt ytterligare deblockerade 354'- dideošcikanamycin A-förenïngen (dvs. I,3,3“-tri-N-sulfonyl-ZWO-sulíonyl-3%'- dideoxikanamycin A) av samtliga sulfonylgrupper (A) som är kvar vid I-, 3- och 3"~aminogrupperna i Bßlfl-dideoxikanamycin A-föreningem varigenom man får den önskadeprodukten 'BGIP-dideoxikanamycin Af ' I 7 t F örfarande enligt patentkravet Sv k ä n n e -t e c k n a t av att steget (d') följs av de nedan angivna stegen i följande ordning: _ omvandling av den erhållna Bfllfl-di-O-sulfonyl-kanamycin A-föreningen med formeln (VlI') till motsvarande BL-eno-kanamycin A-föreníng med formeln: ' 791n734fs där A, X, Y och Z har den ovan angivna innebörden, genom behandling av föreningen (Vll') med en alkalimetalljodid i närvaro av zinkmetallpulver eller med natriumjodid- enbart; A omvandling av Bßeno-kanamycin A-íöreningen till motsvarande 3',ll'- dideoxikanamycin A-íörening genom- reduktion med väte i närvaro av en hydreringskatalysator' för att mätta den 3',4'~omättade bindningen i 3'-eno- 'kanamycin A-íöreningen; avlägsnande från 'den erhållna Bßlfl-dideoxikanamycin A-íöreningen av den återstående aminoskyddsgrupp (B") som är kvar vid Gßaminogruppen i 3',l+'- dideoxikanamycin A-föreningen på känt sätt; * avlägsnande från den sålunda partiellt deblockerade 3', '-dideoxikana- mycin A-föreningen av de hydroxiskyddsgrupper (X, Y och Z) som är kvar vid 5-, 2'-, 4"- och 6"- liksom 2“-ställningarna i TJP-dideoxikanamycin A-íöreningen genom syrahydrolys på känt sätt; och _ avlägsnande :från den sålunda oartiellt ytterligare deblockerade 324'- dideoxikanamycin A-föreningen av samtliga sulfonylgrupper (A) som är kvar vid dess l-, 3- och 3"-aminogrupper, varigenom man får den önskade produkten 3541'- dideoxikanamycin A. 8 . Föríarande enligt patentkravet 5 f _ k ä n n e t e c k n a t av att steget (d') följs av de nedan angivna stegen i ' följande 'ordningsíöljdz 79_1.(.37'34-8_ . omvandling av den erhållna 33,4'-di-O-sulfonyl-kanamycln A-íöreningen ^' med formeln (Vllï) till motsvarande BLeno-kanamycin A-förening med formeln (YIIP) med» behandling av .en alkalimetalljodíd i närvaro av zinkmetallpulver eller ' med natriumjodid enbart; avlägsnande från T-eno-kanamycin A-'íöreningen av den återstående amínoskyddsgruppen (B") vid .dess ókaminogrupp på känt sätt; avlägsnande- från den sålunda nartíellt deblockeradeBßeno-kanamycin A- föreningen av de hydroxiskyddsgrupper (Xr, Y och Z) som. är kvar vid dess 5-, 2'-, 'IW-och 6"- liksom 2"-ställ'ningar genom syranydrolyspå känt sätltï. .avlägsnandeírån den sålundapartiellt ytterligare deblockerade 3'-eno- kanamycin A-föreningen av samtligasulfonylgrupper som är kvar vid 1-, 3- ' och Tßaminogrupperna i Skeno-kanamycin A-íöreningen genom behandling av den senare med .en alkalímetall eller .jordalkalimetall i flytande ammoniak; och omvandling av den sålunda helt deblockerade 3'-eno-kanamycin A- * i föreningen till âßlfl-dideoxikanamycin 'A.g_enom reduktion' med väte i närvaro av en hydreringskatalysator för att mätta den Bßlfl-omättade bindningen i 3'-_eno- .kanamycin A-föreníngen, varigenom _ man får den önskade produkten 324'- dideoxikanamyçin A.