SE433856B - Forfarande for framstellning av aminosyror genom submers jesning av mikroorganismer i ett neringsmedium innehallande ett cellulosahydrolysat - Google Patents

Description

7903190-2 Ett förfarande för framställning av L-glutaminsyra är vidæra känt. Uëtta förfarande är baserat på mikrobiologisk syntes, varvid man såsom kolkälla använder nrenade kolhydrathaltiga material, exem- pelvis hydrolysat av stärk lse, potatis eller säd, orenad sockersirap, melass av sockerbeta och sockerrör. Detta kända förfarande omfattar rening av nämnda kolkällor från överskottet av biotin på mikrobiolo- gisk väg, sterilisering av det kolhydrathaltiga materialet efter re- ning av detsamma genom jäsning, odling av en glutaminsyra produce- rande organism och isolering av slutprodukten. Det maximala utbytet av glutaminsyra är 39,2 g/l, då kolhydrathalten i näringsmediet är 10 %. Som producerande organismer användes mikroorganismerna Micro- coccus glutamicus, Bacillus subtilis och Brevibacterium lactofermen- tum. _ d Ett förfarande för framställning av L-lysin på ett närings- medium är känt, vilket näringsmedium innehåller hydrolysat av poly- sackarider såsom kolkälla. Det använda hydrolysatet av polysackari- der är icke konmetiserat, men det är känt, att poiysåckariaer ucfgti- en beståndsdel i cellväggen hos såväl vegetabiliska material som levande organismer, ekempelvis jäst och svampar (jämför exempelvis det sovjetiska uppfinnaroertiifikatet 171.727) .

Ett förfarande för framställning av L-lysin är känt, vid vil- ket förfarande man som råmaterial använder hexoshydrolysat av s,k. bomullsfrölinters eller av cellolignin från barrträ. Förloppet genom- föras med hjälp av producerande bakterier, exempelvis Micrococcus eller Brevibacterium. Lysinutbytet är 25 g per liter, då man använder 12 viktpromnt (räknat på sockerhaiten) av nyarolysat av bomulisfrö- linters. -7 Hydrolysat av bomullsfrölinters och hexoshydrolysat av oello- lignin från barrträ innehåller sexatomiga monosackarider. Fränvaron av pentosmonosackarider påverkar ogynnsamt det mikrobiologiska syntes- förloppet. i ' Detta kända förfarande har icke funnit något industriellt an- vändningsområde till följd av att bomullsfrölinters efter ringa be- handling utnyttjas som foder för boskap, under det att hexoshydroly- sat av cellolignin från barrträ icke kan användas utan ytterligare behandling, eftersom hydrolysat av vegetabiliska råmaterial förutom monosackarider innehåller föroreningsämnen, vilka inhiberar mikroor- ganismers tillväxt.

Samtliga kända förfaranden för framställning av aminosyror ' 7903190-2 3 är behäftade med en rad nackdelar: - lågt slutproduktutbyte, då man som kolkälla använder kol- väten från olja; _ användning av svåranskaffbara råmaterial, dvs. stärkelse, melass och andra material, som är användbara som foder för b0SKflD; - komplicerad processteknik för mikrobiologisk rening av kolhydratnaltigaråmaterial från biotin, då man önskar framställa L-glutaminsyra. I Ett syfte mid föreliggande uppfinning är att elimin~ra d~ssa nackdelar. Det huvudsakliga syftet med uppfinningen är att åstadkomma ett förfarande för framställning av aminosyra genom val av ett lämp- ligt näringsmedium för mikroorganismer produoerande nämnda aminosyra, vilket förfarande gör det möjligt att intensifiera förloppet för fram- ställning av aminosyra, förbättra slutproduktens kvalitet och öka slutproduktutbytet. _ _ , Detta uppnås medelst ett förfarande för framställning av ami- nosyror genom s.k. submers jäsning av aminosyraproducerande mikroor- ganismer på ett näringsmedium, som innehåller en kolkälla, en kväve- källa samt oorganiska salter, varvid man, enligt uppfinningen, såsom kolkälla använder en av hexos- och pentosmonosackarider bestående blandning, vilken består av 52-98 vikt-% hexosmonosackarider och 2-48 vikt-%-pentosmonosackarider, har erhållits genom perkolations- hydrolys av ett cellulosahaltigt vegetabiliskt råmaterial, är fri från furfurol och innehåller 1-3 vikt-% hydroximetylfurfurol och lignohuminämnen, räknat på monosackaridernas vikt.

Fördelen med användning av en monosackaridblandning, som fram- ställts genom perkolationshydrolys av ett cellulosahaltigt vegetabi- liskt råmaterial, består i att närvaro av pentosmonosackarider bidrar till att stimulera mikroorganismers tillväxt och producerande förmåga.

Avlägsnandet av furfurol, hydroximetylfurfurol och lignohumin- ämnen gör det mikrobiologiska syntesförloppet för aminosyra intensi- VETE.

För att man mer fullständigt skall kunna avlägsna nämnda föroreningsämnen är det lämpligt att man renar blandningen av hexos- och pentosmonosackarider genom dels filtrering vid ett pH-värde av 130,7, dels vakuumindunstning vid en temperatur av 6o-8o°0 till ' en monosackaridhalt av 6-ll viktprooent, dels oxidering med en syre- naltig gas i närvaro av ett adsorberingsmedel eller alkali och dels sterilisering.

För att kunna öka slutproduktutbytet och förbättra slutpro- 7903190-2 4 ger man att använda en blandning av hexose auktKv-liiteten föredra som erhålles genom perkolationshydrolys och pentosmonosackarider, av trä från lövträd och barrträdl _ Det enligt uppfinningen föreslagna förfarandet för frflmställ- ning av aminosyra genomföras på följande sätt. Å aserat på att man som kolkälla använder en som»erhållits Förfarandet är b renad blandning av hexos- och pentosmonosackarider, genom perkolationshydrolys av ett oellulosahaltigt vegetabiliskt råmaterial.

I Sovjetunionen behandlas vegetabiliska råmaterial genom perkolationsnydrolys medelst utspädd svavelsyra. Perkolationshydro- att behandla cellulosahaltiga vege- lysförfarandet gör det möjligt exempelvis jordbruksavfallspro- tabiliska råmaterial av alla slag, dukter (ris- och bomullsfröskal, majsstrån, solrosskal, etc.), avfall från träbearbetning och sâgavfall (exempelvis sågbak; lister, såg- spån), ved oberoende av träslag.

Vid tvåstegshydrolys av exempelvis lövträ genomföres förlopp- et under det första steget under bildning av huvudsakligen pentosmono- sackarider för efterföljande framställning av furfurol. Under det andra prooessteget erhålles en lösning av en monosackaridblandning, r ett föredraget inbördes monosackaridblandningsförhållande för dvs. 90-95 % hexosmonosackarider som ha mikrobiologisk syntes av aminosyra, och 5-10 % pentosmonosackarider.

Då barrträ behandlas, innehåller hydrolysatet från det första processteget en blandning av hexosmonosackarider (70-80 %) och pentos- Denna monosaokaridblandning användes för monosackarider (20-30 %). tet från det andra hydrolys- framställning av äggvitejäst. Hydrolysa steget innehåller 95-93 % nexosmonosackarider och 2-5 viktprocent pentosmonosackarider.

Industriella hydrolysat från perkolationshydrolys av cellu- vegetabiliska råmaterial innehåller en blandning av d av 2-5 viktprocent. Genom losahaltiga hexos- och pentosmonosackarider i en mäng att ändra perkolationshydrolysförhållandena och slaget av utgångs- råmaterial kan man erhålla lösningar av sådana monosackaridblandningar, *som anges i nedanstående tabell.

Sammansättning av mono L- Taoell 7903190-2 sackarider i hydrolysat, som erhållit: ltigt vegetati- genom perkolationshydrolys av ett cellulosana 'liskt råmaterial.

C“1l91°Sfl- Relativ monosaokaridnalt, % 4 H drolysat “altlgt Vege' Y ' tebiliskt -lukos nannos 4ga1ak- X los arabi- råmaterial g ' tos Y nos 1 2» 3 4l .I 5 6 7 :wmvs 70,94 117,41 m9 i 7,34 1,15 Lövfirä 6l,9§ 2,78 1,61 32,56 l,}l Hydrolysat Blandning av löv- o från en- och barrträ 66,57 10,17 2,03 19,77 1,45 ïäzïâäêäšäï solrosskai 55,15 ,,5,11 1,94 32,62 5,44 rolys Majsstrån 49,49 - 2,72 45,45 4,79 Bomullsfröskal 61,22 1,46 l,§O 56,42 1,50 Bavrträ t 92,66 5,06 _ 2,08 - _ Hydrolvsat Lövträ 92,87 1,84 - 5,29 _ från det Blandning av barr- . andra steget och lövträ 92,75 5,62 - 5,62 - av tvåstegs- _ '_ 0 perkolations-Blfnffiång :V fqš" hydrolys X rossct oc ma; - stran 90,30 = 1:95 ' 7,77 ~ Bomullsfröskal 92,82 2,59 - 4,79 - \ X' Hydrolysaten från det första hydrolyssteget användes för framställning av furfurol, Hydroly socker även föroreningsämnen, som ut vilka har olika egenskaper oc ysat förekommande föroreningsämnen kan upp beståndsdelar. De mnena utgör 1-3 % av monosaokarid- flyktiga inhiberande föroreninga- av föreningar mängder. I hydrol nämligen flyktiga och icke flyktiga tvâ grupper, flyktiga inhiberande föroreningsä blandningens vikt, medan de io ämnena förekommer i utgängshydrolysatet J ke sat av vegetabiliska råmater göres av en sammansatt blandning xylit eller foderjäst. ial innehåller förutom h förekommer i olika delas i i en mängd av 5-6 viktpro- cent, räknat på monosackaridblandningens vikt.

Förekomsten av 0,03-0,007 viktpro atet av det cellulosahaltiga vegetabil förgiftning av mikroorganis komsten av hydroximetylfurfur mernas fermentsystem, ol i hydrolysmediet fördröj cent furfurol i hydrolys- iska ràmaterialet medför en under det att före- er mikroor- 7903190-2 e msar deras producerande förmåga. I hydro- ganism~rnas tillväxt och bro n sorberas i mikroorga- lysat förekommande lignohumin- och färgämne nismernas c+llväggar, vilket försvårar tillförseln av näringsämnen till cfillen .

Eftasom perkolationsh tabíliska råmateríalet genomföras i närvaro av svavelsyra, som funge- ydrolysen av_det callulosahaltiga vege- rar som processkatalysator, neutraliserar man först och främst den erhållna blandningen av monosackarider.

Det sura hydrolysatet neutraliseras me niakvatten till ett pH-värde av företrädesvis 3,5-3,7 och filtreras d" kalkmjölk eller ammo: från suspenderade ämnen. _ Filtratet vakuumindunstas vid en te monosaekar-ldrlalten blivit lika. med 6-11 vikt optimal för den mikrobiologiska syntesen av aminosyra.

Iakttagande av nämnda indunstningsparametrar gör det möjligt att begränsa sockersönderdelning och helt.avlägsna flyktiga inhibe- rande föroreningsämnen, dvs. furfurol och metylfurfurol.

Hydrolysatets icke flyktiga organiska föroreningsämnen, exem- pelvis hydrokimetylfurfurol, lignohumin- och färgämnen, oxideras.

Det indunstande filtratet, dvs. monosaokaridblandningen, oxi~ deras med syrehaltig gas i närvaro av ett adsorberingsmedel, exempel- vis aktiverat kol, eller alkali. Luftningen genomföras lämpligen vid en temperatur av 45°C under 60 min.

-Förutom att oxidera de icke flyktiga föroreningsämnena accele- rerar man vid luftningen koaguleringen av de lignohuminämnen, som förekommer i kolloidfas i hydrolysatet.

Nämnda processoperationer gör det möjligt att minska halten l och lignohuminämnen till 1-3 viktprocent, räknat mperatur av 60-8000 tills procent, vilken halt är hydroximetylfurfuro på vikten av monosackariderna i lösningen.

Den enligt uppfinningen föreslagna reningen befrämjar en intensivare mikrobiologisk aminosyrasyntes genom att de flyktiga och icke flyktiga inhiberande föroreningsämnena avlägsnas från hydro- lysatet.

Den renade lösningen av monosac med en kvävekälla (en kvävehaltig fören varefter steriliseringen genomföras. å beredda näringsmediet med en kultur 24 timmar och genomför jäsningen karidblandningen försättes ing) och oorganiska salter, Man ympar sedan det s av mikroorganismen med en ålder av under aeroba förhållanden. 7 l 7903190-2 Sedan jäsningen avslutats, isoleras slutprodukten i form av aminosyra pà i och för sig känt sätt.

Uppfinningen gör det möjligt att intensifiera förloppet, förbättra den framställda aminosyrans kvalitet och öka aminosyraut- bytet genom att man såsom kolkälla använder en blandning av hexos- och pentosmonosackarider, som framställts genom_perkolationshydrolys av ett cellulosahaltigt vegetabiliskt råmaterial, vilket är före- fintligt i obegränsad mängd.

Den andra fördelen med föreliggande uppfinning är att kol- källan är lättåtkomlig och billig, eft=rsom tillverkningskostnaden för den monosackaridblandning, som framställts genom perkolations- hydrolys av ett cellulosahaltigt vegetabiliskt rámateria1,exempelvis trä, är 50 % lägre än kostnaden för den i stor omfattning hittills använda kolkällan för framställning av aminosyra, dvs. melass.

Genom att man såsom kolkälla använder en monosackaridbland- ning kan man dessutom minska antalet prooessoperationer Jämfört med det genom den amerikanska patentskriften 5.451.891 kända förfarandet, som kräver en komplicerad mikrobiologisk rening av kolkällan, dvs. melass, från överskottsbiotin. I Ännu en fördel med det enligt uppfinningen föreslagna förfa- randet är att den såsom kolkälla-använda lösningen av monosackarid_ blandning även innehåller en tillräcklig (optánal) mängd medel som stimulerar mikroorganismers tillväxt, eftersom cellulosahaltiga mute~ rial har en vegetabilisk naturbasbestàndsdel.

En ytterligare fördel med föreliggande uppfinning är att man genom användningen av den nya kolkällan vid syntes av aminosyra, exempelvis L-lysin, kan framställa en icke hygroskopisk produkt, som under lagring icke bildar klumpar.

Uppfinningen belyses närmare nedan medelst följande utför- ingsexempel på det föreslagna förfarandet för framställning av amino- syror.

Den i exemplen 1-3 använda mikroorganismen är Brevibacterium sp. 22 (depositionsnummer 28 hos Museum of cultures of microorganisms of the August Kirkhenstein Institute of Microbiologyf ACEÖGNY Of Sciences of Latvian Soviet Socialist Republic).

Exemgel 1, Ett hydrolysat, som framställts under det andra steget av en perkolationshydrolys av en blandning av barr- och lovtra och som innehåller 2,51 viktprocent hexosmonosackarider och 0,09 Vikt' procent pentosmonosackarider, neutraliseras till ett pH-värde av 3,3 och filtreras. Filtratet vakuumindunstas vid en temperatur av 60°C tills monosaokaridkonoentrationen blivit lika med 6 viktprocent. Man oxiderar sedan den indunstade monosackaridblandningen med luftsyre under en tid av 60 min vid en temperatur av 4500, 1 fläPVaP° av aktï' 7903190-2 verat kol,och filtrerar densamma.

Vid hydrolysatreningen avlägsnas helt furfurol, vilket kons- tateras genom gaskromatografisk analys. Efter avslutad rening utgör _ halten hydroximetylfurfurol och lignohuminämnen 2,5 viktprocent, räk- nat på monosackaridernas vikt._Förekomsten av hydreximetylfurfurol och lignohuminämnen bestämmes genom spektrofotometri av hydrolysatet före och efter reningen. ' ' 1000 ml renad monosackaridlösning försättes med 15 g (NH4)2S04; 0,5 g KQHPO4; 0,5 g KH2P0¿; 0,2 g Mg§04#7H20; 2,5 g magsextrakt och 0,4 g homoserin. Mediets pH-värde bringas till 7,0 genom alkalitill- sats. 50 ml medium hälles i 750 ml skakkolvar. I varje kolv införas 0,5 g krita, varefter kolven steriliseras under ett tryck av 0,8 atö under en tid av 30 min. I varje kolv införes sedan 2,5 ml av en kultur av Brevibaoterium 22 med en ålder av 24_timmar. Denna kultur beredes på ett ympmedium, som i viktprocent innehåller: 2 % glukos, 2 % majs- extrakt ooh 0,3 % NaCl. Mediets pH är 7,0. Man steriliserar ympmediet, ympar detsamma med en stamkultur med en ålder av 24 timmar och odlar kulturen under en.tid av 24 timmar vid en temperatur av 28-32°C på en skakapparat (vagga). 2 Såsom producent av L-lysin användes den homoserinaccepterande stammen Brevibaoterium 22. _ Jäsningen sker vid en temperatur av 28-32°C på en skakapparat vid ett varvtal av 200 varv/min under en tid av 60 timmar. L-lysin- koncentrationen är 18 mg/ml, medan aminosyrautbytet utgör 30 viktpro- cent, räknat på vikten av monosaokaridblandningen i näringsmediet.

Odlingsvätskan avskiljes från bakteriebiomassan, surgöres till ett pH av 4-5 och stabiliseras genom tillsats av 0,2 viktprocent nat- riummetabisulfit. Den stabiliserade vätskan får strömma genom kolonner fyllda med jonbytarharts. Det erhållna eluatet indunstas tills L-lysin- halten blivit lika med 40 viktprocent, varefter lösningen surgöres ' till ett pH av ungefär 5,o, kyies till 12-1190 och kristaiiiseras.

Exemgel 2. Ett hydrolysat, som framställts vid det andra steget av en perkolationshydrolys av barrträ och som innehåller 2,73 viktprocent hexosmonosaokarider och 0,07 viktprooent pentosmonosacka- rider, neutraliseras till ett pH av 3,5 och filtr^ras. Det erhållna filtratet vakuumindunstas vid 70°C tills monosackaridkonoentrationen blivit lika med ll viktprooent. Den indunstade lösningen av monosacka- ridblandningen oxideras med luftsyre i närvaro av aktiverat kol under en tid av 30 min vid en temperatur av 4500. Lösningen filtreras. 7903190-2 9 Efter avslutad rening är lösningen av monosackaridblandningen fri från furfurol, vilket bestämmas genom gas-vätske-kromatografi. Halt- en hydroximetylfurfurol och lignohuminämnen i den renade lösningen är 1 viktprocent, räknat på monosackaridernas vikt. Förekomsten av dessa ämnen_bestämmes genom spektrofotometrisk analys före och efter reningen. Man inför-sedan i 9,6 liter ren lösning av monosackarid- blandningen 225 g (NH3)2SO4; 7,5 g KQHPO4; 7,5 g KH2P0u; 3 g MgS0¿- 7H20; 600 g majsextrakt och 150 g foderjäst, varefter vatten till-- sättes upp till 15 liter. Mediet inmatas i ett 50 liter jäsningskärl och sterilieras under ett tryck av 1 atö under 30 min. Efter avslutad sterilisering bringas pH-värdet till 7 genom tillsats av ammoniak- aliskt vatten. Man inför sedan 750 ml av en kultur av Brevibacterium 22 med en àlder av 24 timmar, som beretts på det i exempel 1 beskriv- na sättet. Jäsningen genomföras vid en.temperatur av 28-5000 under genomblàsning av luft i en mängd av l m5 per m3 av mediet vid en om- rörningshastighet av 400-500 varv/min. Under jäsningsförloppet hàlles mediets pH-värde konstant genom tillsats av ammoniakvatten eller svavelsyra. Jäsningstiden är 60 timmar. L-lysinkoncentrationen är 22,4 g/liter, medan aminosyrautbytet är 32 viktprocent, räknat på monosackaridblandningens vikt. ' _ Efter avslutad jäsning avskiljes odlingsvätskan från biomass- an, varefter den surgöres till ett pH av 4-5 och göres stabil genom tillsats av 0,2 viktprocent natriummetabisulfit. Den stabila odlings- vätskan torkas i en spruttorkanordning. Den färdiga produkten är icke hygroskopisk och utsattes icke för klumpbildning under lagringstiden.

Exemgel 2. Ett hydrolysat, som framställts vid det andra steget av en perkolationshydrolys av lövträ och innehåller en bland- ning av 2,26 viktprocent hexosmonosackaridar och 0,14 viktprocent pentosmonosackarider, neutraliseras till ett pH av 3,7 och filtre- ras. Filtratet vakuumindunstas vid en temperatur av 80°C tills mono- sackaridkoncentrationen blivit lika med 9 viktprocent. Den indunsta- de lösningen av monosackaridblandningen oxideras med luftsyre under 60 min vid en temperatur:u h5°C i närvaro av aktiverat kol och filtre- TGS.

Vid rening av hydrolysatet avlägsnas furfurol helt, vilket konstateras genom gas-vätske-kromatografi, Halten hydroximetylfurfur- ol och lignohuminämnen i den renade lösningen av monosaokaridbland- ningen utgör 1,8 viktprocent av monosackaridernas vikt. Förekomsten av dessa föreningar bestämmas genom spektrofotomatrisk analys av lös- 10 ningen före och efter reningen. 660 ml ren lösning av monosackaridblandningen försattes med en kvävekälla, oorganiska salter och tillväxtstimulerande medel på t.som beskríves i exempel l. Näringsmediets volym bringas Jäsningen genomföras i kolvar på -lysinkoncentrationen är 21,1 samma sät till l liter gen0m'vattent1llsats. samma sätt som beskrives i exempel l. L mg/ml, medan eminosyrautbytet är 28 viktprocent, räknat på monosacka- ridblandningens vikt.

Exempel 4. Ett hydrolysat, som framställts genom enstegshydro- lys av barrträ och innehåller 2,55 viktprocent hexosmonosackarider och 0,25 viktprocent pentosmonosackarider, neutraliseras till ett pH av 5,4 och filtreras. Flltraten vakuumlnaunsuas vid en temperatur av 75°@ tills koncentrationen av monosackarider blivit lika med 10 viktprocent.

Den indunstade lösningen oxideras med luftsyre i närvaro av kalcium- oxidhydrat under en tid av 60 min vid en temperatur av 45°C. Den bilda- de fällningen frånfiltreras. Avsaknad av furfurol i den renade mono- sackaridlösningen konstateras genom gas-vätske-kromatografi. Halten hydroximetylfurfurolcailignohuminämnen utgör 1,8 procent av monosacka- ridernas vikt. 860 ml renad monosaekaridlösning försattes med 25 g (NH¿)2SO¿; 0,5 g KHEPO4; 0,5 g KQHPO4; 0,5 g MgSO4-7H2O, varefter vatten till- sätt=s upp till 1 liter. Mediets pH-värde bringas till 7 genom till- sats av ammonlakvatten. 50 ml medium nälles 1 750 ml kolvar. I varje kolv införes 1 g krita, varefter sterilisering åstadkommas vid ett. tryck av 0,8 atö under 30 min. 2,5 ml av en kultur av Brevibaoterium (ATCC 14067) med en ålder av 24 timmar ympas sedan på mediet.

Mediet för ympmaterialet innehåller i viktprocent: 2 % glu- kol, 2 % majsexnrakt, 0,5 % Nacl. Medlets pnvärde är 7-7,2. Medlet steriliseras vid ett tryck av 0,9 atö under 40 min. Ympmaterialet odlas i skakkolvar vid en temperatur av 28-30°C under en tid av 24 Såsom producerande stam användes mikroorganismen Brevibac- flavum timmar. terium flavum (ATCC 14067).

Huvudjäsningen genomföras på en vagga vid 28-30°C vid en omrörningshastighet av 140 varv/min under en tid av 72 timmar. Kon- centrationen av bildad L-glutaminsyra är 42 mg/ml och aminosyraut- bytet är 49 viktprocent, räknat på monosackaridernas vikt.

Exempel 5. Ett hydrolysat, som framställts vid det andra ' ys av lövträ och som innehåller ch 0,17 viktprocent pentos- steget av tvåstegsperkolationshydrol 2,25 viktprooent hexosmonosackarider o 7903190-2 ll monosackarider, neutraliseras till ett pH av 5,6, filtreras och vakuum- indunstas vid en temperatur av 72°C tills koncentrationen av mono- sackarider blivit lika med 10 viktprocent. Den indunstade lösningen av monosackaridblandningen oxideras med luftsyre under 30 min vid en temperatur av 4500 i närvaro av aktivera kol och filtreras.

Frånvaro av furfurol i den renade lösningen konstateras genom gas-vätske-kromatografi. Halten hydroximetylfurfurolcdilignohuminämnen i den renade lösningen av monosackaridblandningen är 2,2 procent av monosaokaridernas vikt. Förekomsten av nämnda föreningar bestämmas genom spektrofotometrisk analys av lösningen före och efter reningen. 15 liter renad monosackaridlösning'försättes med 450 g (NH4)2S0¿; 7,5 g K2HPO4; 7,5 g KHZPOÄ och 6 g MgSOu°7H2O.

Mediet införes i ett 30 liter jäsningskärl och eteriliseras under ett tryck av l atö under 30 min. Man inför sedan 750 ml av en kultur av Brevibacterium flavum (ATCC 14067) med en ålder av 24 timmar.

Ympmaterialet beredas på samma sätt som i exempel 1.

.Huvudjäsningen genomföres vid en temperatur av 50-52°C, en omrörningshastighet av 200 varv/min och en luftförbrukning av l m3 per m3 medium. Jäsningstiden är 56 timmar. Under jäsningsförloppet hálles mediets pH-värde konstant genom tillsats av ammoniakvatten.

Koneentrationen av bildad L-glutaminsyra i odlingsvätskan är 49,2 g/ liter, och aminosyrautbytet är 49,2 viktprocent, räknat pa monosaoka- ridblandningens vikt. 7 Exemgel 6. Ett hydrolysat, som framställts vid enstegshydro- lys av en blandning av barr- och lövträ och som innehåller 2,06 vikt- procent hekosmonosackarider och 0,54 viktprocent pentosmonosackarider, neutraliseras till ett pH av 3,5, filtreras och vakuumindunstas vid 65°C tills koncentrationen av monosackarider blivit lika med 9,55 viktprocent. Den indunstade monosackaridblandningen oxideras med luft- syre under 30 min vid 45°C i närvaro av natriumoxidhydrat. Den bildade fällningen avfiltreras. Efter reningen är lösningen av monosackarid- blandningen fri från furfurol, vilket påvisas genom gaskromatisk ana- lys. Halten hydroximetylfurfurol och lígnohuminämnen i den renade lös- ningen är 3 76 av monosackaridernas vikt, vilket bestämmas genom spektrofotometrisk analys före och efter reningen. 12 liter renad lös- ning av monosackaridblandningen försättes med 450 g (NH4)2S04; 7,5 g KQHPOÄ; 7,5 g KHEPO4 och 6 g MgS04-7H2O, varefter vatten tillsättes upp till 15 liter. Det så beredda mediet införes i ett 50 liter jäs- ningskärl och sterilisoras under 50 min vid ett tryck av l atö. Man

Claims (3)

7903190°2 12 inför sedan ?50 ml av en kultur av Micrococcus glutamicus med en ålder av 24 timmar. _ g . - i _ Ympmaterialet beredas på samma sätt som i exempel 4, varvid man såsom producent använder mikroorganismen Micrococcus glutamicus. Huvudjäsningen sker vid en temperatur av 28-50°C och en omrör- ningshastighet av 200 varv/min under en tid av 60 timmar vid en luft- förbrukning av 0,8 m3 per m3 medium, varvid mediets pH-värde hâlles konstant genom tillsats av ammoniakvatten. Koncentrationen av bildad L-glutaminsyra i odlingsvätskan är 32,5'g/liter, och aminosyrautbytet utgör 32,5 % av monosackaridblandningens vikt»

1. Förfarande för framställning av aminosyror genom s.k. submers jäsning av aminosyraproducerande mikroorganismer i ett näringsmedium, som innehåller en kolkälla, en kvävekålla och oorganiska salter, k ä n n e t e c k n a t av att man såsom kolkälla använder en av hexos- och pentosmonosackarider bestående blandning, vilken består av 52-98 vikt-% hexosmonosackarider och 2-48 vikt-% pentosmono- sackarider, har erhållits genom perkolationshydrolys av ett cellu- losahaltigt vegetabiliskt råmaterial; är fri från furfurol och in- nehåller 1-3 vikt-% hydroximetylfurfurol och lignohuminämnen, räknat på monosackaridernas vikt.

2. Förfarande enligt patentkravet 1; k ä n n e t e c k n a t av att blandningen av hexos- och pentosmonosackarider har renats genom dels filtrering vid ett pH av 3,3-3,7, dels vakuumindunstning vid en temperatur av 60-8O0C till en monosackaridhalt av 6-11 viktprocent, _ dels oxidering och dels sterilisering. 7 E

3. Förfarande enligt patentkravet 2, k ä n n e t e c k n a t av att oxideringen sker medelst en syrehaltig gas i närvaro av ett ad- sorberingsmedel eller alkali. H. Förfarande enligt något av patentkraven 1-5, k ä n n e t e c k- nia t av att man använder en blandning av hexos- och pentosmono- sackarider, som framställts genom perkolationshydrolys av trä från barrträd och lövträd och består av 79-96,5 vikt-% hexosmonosackari- der och 3,5-21 vikt-% pentosmonosackarider. 7903190-2 S a m m a n d r a g Uppfinningen avser ett förfarande för framställnlng av aminosyra. I Förfarandet är baserat på submers jäsning av aminosyra-pro- ducerande mikroorganismer i ett näringsmedium, som innehåller en kol- källa, en kvävekälla och oorganiàka salter. Såsom kolkälla använder man en blandning av hexos- och pentosmonosackarlder, som framštällts genom perkolationshydrolys av ett cellulosahaltigt vegetabiliskt råmaterial, renatsfràn furfurol och innehåller 1-3 viktprocent hydroximetylfurfurol och lignohumlnämnen, räknat på monosackaridernas vikt.