SE417526B - Forfarande och medel for enzymatisk bestemning av glukos - Google Patents
Forfarande och medel for enzymatisk bestemning av glukosInfo
- Publication number
- SE417526B SE417526B SE7312284A SE7312284A SE417526B SE 417526 B SE417526 B SE 417526B SE 7312284 A SE7312284 A SE 7312284A SE 7312284 A SE7312284 A SE 7312284A SE 417526 B SE417526 B SE 417526B
- Authority
- SE
- Sweden
- Prior art keywords
- glucose
- mutarotase
- pyridine
- acid
- coenzyme
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/54—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving glucose or galactose
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Description
1-;
O
15
.'\)
\J'|
55
HO
7312284-8
plasmautdrygningsmedel på dextran-bas, då härvid grumlingar bildas
D)
i testblandningen. Dessutom när den för kondensationen erforder-
liga kokninyen med syra bestämningen besvärlig och tidsödande.
Förutom denna s.k. o-toluidin-metod är framför allttvå enzyme-
tiska förfaranden för bestämning av glukos vanliga: glukosoxidas-
-metoden och hexokinas-metoden.
Vid glukosoxidasmetoden oxideras glukos under glukosoxilas-
katalys med syre till glukonsyra, varvid väteperoxid bildas, som à
sin sida i en katalyserad följdreaktion oxiderar en färglös kreme-
gen till ett färgämne. Såsom katalysator i följdreaktionen kan
exempelvis peroxidas tjäna; en ofta använd kromogen är o-dianisidin.
Glukosoxidas är i stor utsträckning specifikt för glukos, dock störs
I kroppsvätskor
Ytterligare
följdreaktionen av ämnen, som förbrukar väteperoxid.
stör speciellt urinsyra, askorbinsyra och katalas.
nackdelar är den långa analystiden och det faktum, att kromogenen
o-dianisidin inte är medicinskt ofarlig.
Som den mest specifika glukosbestämningen betraktas den enzy-
matiska bestämningen med hexokinas/glukos-6-fosfat-dehydrogenas.
Härvid fosforyleras glukos med adenosintrifosfat/hexokinas och bil-
dat glukos-6-fosfat dehydreras med glukos-6-fosfat-dehydrogenas
till glukonat-6-fosfat, varvid vätet överföras till níkotinamid-
-adenin-dinukleotid-fosfat (NADP); det reducerade koenzymet bestäm-
mes fotometriskt. På grund av den centrala ställningen av glukos-
-6-fosfat i kolhydratämnesomsättningen är testet känsligt mot stör-
ningar genom främmande enzymer, såsom fosfoglukos-isomeras, fosfo-
glukomutas och glukonat-6-fosfat-dehydrogenas. Det rekommenderas
därför att eliminera störningsreaktionerna genom extrapolation.
(H.U. Bergmeyer, Methoden der enzymatischen Anályse, 2:a upplagan,
sid. 1166, 1970, Verlag Chemie, Weinheim). Därigenom blir dock be-
stämningsmetoden osäker, omständlig och tidsödande (ca 20 till 50
minuter för en enstaka bestämning).
Det visade sig nu, att nackdelarna hos de hittills i praktiken
använda metoderna för glukosbestämning_kan undvikas, om man använ-
der ett nytt enzymatiskt medel. *
Föreligëande uppfinning avser ett förfarande för enzymatisk
bestämning av glukos, karakteriserat därav, att man bringar ett me-
del, som består av glukosdehydrogenas med en aktivitet av minst 2
U/ml provlösning, ett pyridin-koenzym, buffertsubstanser med ett pH-
värde från 6,5 till 8,5, mutarotas, varvid enzymenheternas förhållan-
de av glukosdehydrogenas till mutarotas utgör ca 10:O,25-1, och
eventuellt inhibitorer för oxidaser för reducerande pyridinkoenzymer
s
10
20
fx!
Uï
p;
LH
#3
s 731228l+-8
och/eller alkaliklorid, att inverka på det glukoshaltiga provet,
som skall undersökas, och mäter halten av bildat reducerat pyri-
din-koenzym spektrofotometriskt eller fluorimetrisk .
Vidare omfattar föreliggande uppfinning ett medel för utföran-
de av ovanstående förfarande medelst glukosdehydrogenasïwd aiakti-
vitet av minst 2 U/ml provlösning, ett pyridin-koenzym och buffert-
substanser med pH-värde från 6,5-3,5 under bildning av glukonsyra
och reducerat pyridinkoenzym, karakteriserat av en halt av mutaro-
tas och eventuellt inhibitorer för oxidaser för reducerade pyri-
din-koenzymer och/eller alkaliklorid, varvid enzymenheternas för-
hållande av glukosdehydrogenas till mutarotas utgör ca 10:O-25-1.
Det nya medlet enligt föreliggande uppfinning utmärker sig
gentemot den förut kända glukosoxidasmetoden därigenom, att det
specifikt mäter glukoshalten och inte störs av andra oxidations-
eller reduktionsmedel. Gentemot den förut kända hexokinasmetoden
har det nya medlet den fördelen, att vid användning därav endast en
i stället för två enzymer vid
Då inte nå-
enstegsreaktion användes, varvid
hexokinasmetoden här endast ett enzym är erforderligt.
gon indikatorreaktion är nödvändig, är även en därigenom betingad
möjlig störning utesluten, vilket betyder en väsentlig fördel gent-
emot GOD- och hexokinasmetoden. I
Bestämningen behöver i en lämplig utföringsform ca 5 minuter,
varmed den redan är dubbelt så snabb som den för närvarande snab-
baste enzymatiska glukosbestämningen (hexokinasmetoden utan extra-
polation av störningsreaktioner). Omsättningstiden kan dessutom
väsentligt minskas genom höjning av enzymaktiviteterna i testet,
så att, förutom att testet är specifikt, även enkelheten och snabb-
heten hos_föreliggande test inte uppnås av någon annan glukosbestäm-
ning. '
' I praktiken har glukosdehydrogenas tillsammans med mutarota-
tionspåskyndande substanser ännu aldrig använts för bestämning av
glukos. Skälet härför torde vara att söka i de ogynnsanma egenska-
perna hos tillgängligt glukosdehydrogenas.
Från den hithörande litteraturen (Methods in Enzymology, vol.
IX, 92-lll, Acad. Press, New York, London, 1966; R.P. Metzger m.fl.,
J. sioi. Chem. 239, 1769-1772 (19611) och 2140, 2767-2771 (1965) och
N.G. Brink, Acta Chem. Scand. 7, 1081-1088 (1953)) var känt, att
glukosdehydrogenas har en rad av ogynnsamma egenskaper, som för-
hindrar en analytisk användning. Så är exempelvis ofta glukos-
dehydrogenaserna bundna vid en partikel och/eller visar sig såsom
10
20
25
UI
UI
MO
73122811-8 H
ej NAD- resp. NAD?-beroende. Vidare är känt, att glukosdehydrogenas
uppvisar en ringa aktivitet och/eller en alltför ringa stabilitet.
Michaelis-konstanterna för glukosdehydrogenas till glukos utgör
endast 0,007-2, dvs först i en 0,007 molar lösning är enzymet till
hälften mättat med substrat. Vid den vanliga blodsockeranalysen
står dock endast ca 0,000000l mol glukos till förfogande. Det
följaktligen en betydande fördom i den hithörande litteraturen mot
användningen av glukosdehydrogenas för den enzymatiska glukosbe-
fanns
stämningen.
Med föreliggande uppfinning har man lyckats, att för första
gången ställa ett medel och förfarande för enzymatisk glukosbestäm-
ning med hjälp av glukosdehydrogenas till förfogande, som med enkelt
handhavande ger snabba och tillförlitliga resultat.
I det följande beskrives föreliggande uppfinning närmare.
Glukosdehydrogenas, som medlet enligt föreliggande uppfinning
innehåller, måste vara så rent som möjligt. De i testet använda
aktiviteterna hos glukosdehydrogenas rättar sig framför allt efter
tiden, inom vilken reaktionens slutpunkt skall vara uppnådd. En-
zymaktiviteten kan därvid lämpligen varieras inom ett område från
ca 2 till 200 U/ml provlösning. Företrädesvis använder man H-20
U/ml provlösning tillsammans med enzymet'nutarotas.
Framställningen av använd glukosdehydrogenas sker ur mikro-
organismer, företrädesvis ur mikroorganismer av släktet Baoillus,
varvid den mikrobiella utgångsprodukten innehåller en glukosdehydro-
genas-aktivitet av minst 5 U/ml råextrakt. Den vidare reningen
sker exempelvis analogt med den i The Spores III, 97 (1965) beskriv-
na metoden. På detta sätt är lyofilíserade glukosdehydrogenas-
preparat erhållbara, som innehåller mer än 2 U/eg torrsubstans och
vars goda löslíghet tillåter framställning av lösningar med mer än
'20ö U/ml; den störande NADH2-oxidasaktivíteten utgör mindre än
1 °/oo av glukos-dehydrogenasaktiviteten. Först den i jämförelse med
tidigare beskrivna preparat i storleksordníng bättre kvaliteten hos
enzymet möjliggjorde användning därav i den enzymatiska glukosbe-
stämningen.
Pyridin-koenzymerna, som medlen enligt föreliggande uppfinning
innehåller, är företrädesvis nikotinamid-adenin-dinukleotid (NAD)
eller nikotinamid-adenin-dinukleotid-fosfat (NADP), speciellt NAD.
Koenzymkoncentrationen kan varieras inom gränserna från 2,0 mM till
5 mM, utan att reaktionshastigheten påverkas. I en lämplig utfö-
ringsform utgör slutkoncentrationen i testet ca 2,8 mM NAD. I
v".
10
15
F.)
U]
30
55
H0
_ 1 minut.
s 7312284-8
stället för NAD och NADP kan även andra NAD-aktiva substanser, så-
som tio-NAD eller tio-NADP användas.
Då glukosdehydrogenas är specifik för @-glukos, måste den i
jämvikt alltid föreliggande CK-glukosen först mutarotera, innan den
cmsättes av glukosdehydrogenas, dvs vid hög glukosdehydrogenasakti-
vitet reagerar i reaktionsblandníngen närvarande É-glukos snabbt,
vilket visar sig i den branta extinktionsstigningen i början av
reaktionen. Den långsamma mutarotationen av 0(-glukos till ß-glu-
kos framträder i den fördröjda NADH2-bildningen, som är avslutad
först efter mer än 30 minuter. Medlet enligt föreliggande uppfin-
ning innehåller därför mutarotationspåskyndande substanser, speci-
ellt mutarotas. Påskyndandet av mutarotationen genom enzymet muta-
rotas är visserligen känt för glukosbestämning med glukosoxidas
(J. Okuda, I. Miwa, Anal. Biochem. H3, 312 (1971)), det var dock
inte nära till hands liggande, att vid tillsats av mutarotas till
glukosdehydrogenas/NAD-systemet likaledes ett mycket effektivt på-
skyndande inträder. En mutarotasmängd av numerärt 8 2 av glukos-
dehydrogenasaktiviteten är redan tillräcklig för optimalt reaktions-
påskyndande; mutarotasandelen kan dock godtyckligt höjas, utan att
ett negativt inflytande på testsystemet blir märkbart.
I en lämplig utföringsform av glukosbestämningen utgör förhål-
landet av glukosdehydrogenasaktiviteten till mutarotasaktiviteten
ca l0:0,25-021-Ett kvantitativt reaktionsförlopp inom loppet av 5
minuter (vilket motsvarar en mer än sexfaldig acceleration gentemot
det analoga testsystemet utan mutarotas) uppnår man exempelvis med
aktiviteter från H U glukosdehydrogenas och 0,U enheter mutarotas
per ml mätsats. Vid 20 U glukosdehydrogenas och 2 enheter mutaro-
tas per ml provlösning utgör omsättningstiden ekempelvis mindre än
Vid tillsats av mer än 100 U glukosdehydrogenas och 10
enheter mutarotas per ml provlösning kan omsättningstider i stor-
leksordningen från l0 sekunder uppnås. Visserligen måste i detta
fall enzymerna vara höggradigt renade eller de störande biaktivi-
teterna måste undertryokas.
Mutarotas kan även ersättas av substanser, som utövar en mu-
tarotationspåskyndande verkan på Öêglukos. Om man exempelvis an-
vänder en fosfatbuffert i en koncentration av 200 mM, så utnyttjar
man den mutarotationspåskyndande verkan hos fosfatet fullständigt
och kan därigenom inspara mer än 60 % av mutarotasaktiviteten. Så-
som ytterligare mutarotationspåskyndande substanser ifrågakommer
t.ex. histidin, imidazol, glutaminsyra, asparaginsyra e1ler1X-hydr-
10
15
h)
(D
|\J
\J'l
50
\N
UI
#0
7312284-e 6
oxipvridin. De användes företrädesvis i en koncentration från 20
till 100 NM i testet och påverkar inom detta koncentrationsområde
inte väsentligt aktiviteten hos glukosdehydrogenas. Lämpligen an-
vändes dock mutarotas.
För uppnående av en snabb och kvantitativ glukosomsättning, för
undanröjande resp. undertryckande av störande biaktiviteter och för'
stabilisering av glukosdehydrogenas innehåller medlet enligt förelig-
gande uppfinning likaledes dessutom ytterligare beståndsdelar såsom
, inhibitorer för oxidaser för reducerade pyridin-koenzymer och/eller
alkaliklorid.
För att hålla pH-värdet hos satsen, som skall analyseras, inom
ett område mellan ca 6,5 och 8,5, företrädesvis 7 till 8, innehåller
medlet en buffert. Bufferten användes företrädesvis i en koncentra-
tion från ca 50 till zoo mn.
principiellt inte, såvida lösligheten hos de olika beståndsdelarna
Lägre eller högre koncentrationer stör
inte minskas och buffertkapaciteten är tillräcklig för att upprätt-
hålla det angivna pH-området, dvs det optimala området för enzym-
aktiviteten i mätsatsen. Såsom buffert ifrågakommer de vanligen
använda föreningarna, som håller blandningen på angivet pH från ca
6,5-8,5, såsom fosfat, trishydroximetylaminometan, dietanolamin,
trietanolamin, kollidin, borat, osv, företrädesvis fosfat- och tris-
buffert. _
För mätningar med höga fordringar på noggrannhet, såsom be-
stämning av glukos i kroppsvätskor, gör sig även inflytandet av en
ringa andel av oxidaser för reducerade pyridin-koenzymer märkbar.
De medför att bildat reducerat pyridin-koenzym åter oxideras. Sen
såsom mätstorlek tjänande extinktionen förblir därför inte kons-
tant, utan minskar åter efter uppnående av ett maximalvärde. Här-
_till kommer, att den mätta maximala extinktionen är mindre än det
med t.ex. NADH2 som underlag för extinktionskoefficienten beräknade
värdet (ca 3-5% for lågt vid 1 °¿° NAnH¿-øxidas). Av detta skal
är det fördelaktigt, om medlet enligt föreliggande uppfinning even-
tuellt innehåller inhibitorer för oxidaser för reducerade pyridin-
koenzymer. '
Då den preparativa sänkningen av de i glukos-dehydrogenas än-
nu närvarande resterna av NADH2-oxidas visat sig såsom alltför
dyr, är det lämpligt att undertrycka den störande effekten genom
användning av specifika inhibitorer. Man påträffar nu överraskan-
de en rad inhibitorer, som i redan relativt små koncentrationer
fverksamt hämmar det störande enzymet, utan att väsentligt påverka_
f»
10
30
H0
7 731228Å'8
aktiviteterna av plukosdehydrogenas eller mutarotas. Det är där-
vid framför allt fråga om pyridin-, purin- och hydroxibensoesyra-
derivat.
Lämpliga'är pyridinderivat, som i 2- och/eller 3- och/eller
U-ställning är substituerade med lågalkyl, fenyl, hydroxilågalkyl,
halogenlågalkyl, karboxi, lågacyl, bensoyl, karbonamid och amino,
varvid i 5,6-ställning en bensenkärna kan vara ankondenserad, så-
som nikotinsyra, nikotinsyraamid, 2-amino-Ä-metYl~pyridin, 2~metyl-
-3-(ß-hydroxietyl)-pyridin, 3-hydroximetyl~pyridin, 2-hydroximetyl-
pyridin, 2-bensoyl-pyridin, kinolinsyrasåëmetylester, 3-acetylkíno-
lin, kinaldinsyra, kinolyl-2-klorometan, kinaldin, 2-fenyl-kinolin~
syraamid och/eller atofan. Företrädesvis använder man 3~acetyl~
kínolin, nikotinsyra, kinolyl-2-klorometan, kinaldinsyra och/eller
nikotinsyraamid, speciellt 3-acetylkinolin.
Lämpliga purinderivat är t.ex. urinsyra, koffein, teofyllin,
eller puriner, som i 2- och/eller 6-ställning bär hydroxi- och/eller
aminogrupper och i 7-ställning här en ribos- eller desoxiribosgrupp,
såsom xantosin, 2-desoxi-guanosin, inosin, osv. Speciellt lämpliga
ur denna grupp är xantosin och/eller urinsyra.
Lämpliga nydroxibensoesyraderivat är sådana, som i 2- eller
3-ställning bär en fri eller acylerad hydroxigrupp och som dessutom
kan vara substituerad med en sulfonsyragrupp, varvid karboxylgrup-
pen även kan föreligga såsom amid, såsom m-hydroxibensoesyra, sali-
cylsyra, acetylsalicylsyra, salicylamid och/eller sulfosalicylsyra,
företrädesvis 3-acetylkinolin och sulfosalícylsyra. Såsom väl läm-
pade visar sin även 1-(p-klorofenylsulfonyl)-5-propylkarbamíd. Spe-
ciellt är användningen av sulfosalïcylsyra lämolig på grund av den
starka NADH2-oxídas-hämningen, den goda lösligheten, den relativt
_ ringa påverkan av glukosdehydrogenas och mutarotas, den lätta till-
gängligheten och det oproblematiska handhavandet.
Halten av NADH2-oxidas-hämmare i testsystemet är variabel,
den rättar sig från fall till fall efter den föreliggande aktivite-
ten av det störande enzymet i GDH-preparationen. Inhibitorerna
tillsättes fördelaktigt i en koncentration från ca 0,1 till 100 mM
(slutkoncentration i mëtsatsen), speciellt från ca 10 till 50 mM,
Eventuellt kan medlet enligt föreliggande uppfinning dessutom
innehålla alkaliklorid, såsom litium-, natrium- och/eller kalium-
klorid, speciellt natriumkloríd. Det är känt, att värmestabilite~
ten av löst glukosdehydrogenas kan höjas genom natriumkloridtill-
sats. Glukosdehydrogenaslösningar med en natriumkloridhalt från _
10
h)
UI
u:
*JA
F40
7312284-8
3 M är hållbara i månader vid kylskåpslagring. Då enzymet vid pH
8,2, provsatsens pH-värde för aktivitetsbestämningen, vid natrium-
kloridkoncentrationer É>0,8 M hämmas genom saltet, måste lagrade
lösningar, som innehåller 3 M natriumklorid, spädas i aktivitets-
bestëmningen. Härvid visade sig den överraskande effekten, att pre-
parationerna, vars aktivitet redan hade starkt sjunkit, genom saltet
åter reaktiverades. I det extrema fallet kunde en aktivitetsförlust
av 86,H % åter upphävas. För reaktiverinpen av enzymet är det er-
- forderligt, att hålla natriumkloridkoncentrationen i enzymlësningen
i minst en timmes tid på 3 mol/l och därefter späda. För att uppnå
maximal reaktivering av glukosdehydrogenas, inställer man koncentra-
tionen lämpligen mellan 0,05 och 0,1 M natriumklorid. Företrädes-
vis använder man ett glukosdehydrogenaskoncentrat, som är 2-5, spe-
ciellt 3_molärt med avseende på natriumklorid. För glukosbestämning-
en späder man koncentratet så, att koncentrationen av natriumklorid
i mätsatsen är 0,05-0,1 molar. På detta sätt uppnås såväl den op-
timala stabiliteten av enzymet vid lagring såsom även den optimala
aktiviteten i provsatsen.
Medlet enligt föreliggande uppfinning kan dessutom innehålla
ytterligare beståndsdelar, som vanligen användes för ett diagnos-
tiskt reagens. För förhindrande av bildning av störande små luft-
blåsor i mätkyvetten eller för den snabba lösningen-av de fasta
substanserna lämpar sig exempelvis tillsatsen av en detergent i
en koncentration mellan 0,01 och 0,1 viktprocent.
ter ifrågakommer t.ex. etoxylerad glycerol-monooleat eller lågked-
Såsom detergen-
jiga polyglykoletrar.
Stabiliteten hos de använda enzymerna och reagensen tillåter
att man gör preparat av testsystemet, varvid nikotinamid-adenin-di-
. nukleotid lämpligen frystorkas och enzymerna glukosdehydrogenas och
mutarotas antingen frystorkas eller kan föreligga i lösning. Enzy-
merna kan vara förblandade eller åtskilda, testförpackningen kan
innehålla bufferten såsom lösning med NADH2-oxidasinhibitor och de-
tergent. I denna form är testsystemet'vid kylskåpslagring hållbart
i minst ett år.
För genomförande av testet bringas de i torr form föreliggande
beståndsdelarna lämpligen först kort föreanvändningen genom tillsats
av motsvarande mängd lösningsmedel åter i lösning. Förfarandet en-
ligt föreliggande uppfinning genomföras, i det att man låter det
ovan angivna beskrivna medlet inverka på det glukoshaltiga provet,
som skall undersökas, och spektrofotometriskt eller flucrimetriskt
mäter halten av bildat reducerat pyridin-koenzymu Därför blandas
10
h x
C.)
30
55
HO
7312284-8
O
/
buffertlösnínren, enzymblandninpen av glukosdehydrogenas och muta-
rotas samt provet i en kyvett och extinktionen El resp.
_ Eutlina)
någon extinktionsändring ej längre uppträder.
Blindprovet innehåller i stället för provlösningen destillerat
vatten.
avläses, så snart
ërefter startas reaktionen genom tillsats av koenzymlös-
ningen. Då extinktionen har blivit konstant, avlëses E2 resp.
E2(blínd) och ur de erhållna mätvärdena beräknas glukoshalten hos
provet enligt Büchner (Eoppe-Sevler/Thierfelder, Handbuch der physio-
logisch- und pathologisch-chemischen Analyse, 10:e upplagan,
Springer-Verlag Eerlin/Göttingen/Heidelberg/New York, sid. 292 ff).
Mättemperaturen är inte kritisk. Det är lämpligt, att genom-
föra bestämningen vid ca 20-U0°C, företrädesvis vid rumstemperatur.
Extinktionsmätninrarna sker i UV-området mellan 300 och H00 nm, fö-
reträdesvis vid 366 nml I stället för extinktionsnëtningen i UV-om-
rådet kan NADH2-koncentrationen även bestämmas fluorimetriskt. Här-
för ges en impuls vid 366 nm eller vid 313 och 366 nm och fluores-
cens-emissionen ovanför U20 nn nätes; kalibreringen sker med glukos-
lösningar med känd halt.
Vid bestämningen av glukos i kroppsvätskor, såsom blod, serum
eller plasma eller i andra äggvitehaltíga prov är ett föregående
avlägsnande av äggvitan med de vanliga medlen för avlägsnande av
äggvita lämpligt, såsom trikloroëttiksyra, perklorsyra eller uranyl-
acetat/natriumklorid. Ett avlägsnande av äggvita från serum eller
plasma är dock inte absolut erforderligt.
Förfarandet enligt föreliggande uppfinning kan även genomföras
i analysautomater. För detta tillföres proven, som skall bestämmas,
över en provsamlare ett analyssystem,'i vilket till de enstaka pro-
ven beståndsdelarna i medlet enligt föreliggande uppfinning, sättes.
_ Efter blandning och reaktionens utgång tillföres reaktionslösningen
en spektrofotometer och mätas.
Föreliggande_medel kan även påföras på en bärare med sugförmâ-
ga. Såsom bärare med sugförmåga kan alla de användas, som vanligen
är i bruk för snabbtester. Mest utspridd är användningen av filt-
rerpapper, dock kan även andra cellulosa- eller syntetprodukter med
sugförmåga användas. Bärarna med sugförmåga, företrädesvis filtrer-
papper, impregneras på i och för sig känt sätt med en eller flera
impregneringslösningar, som innehåller glukosdehydrogenas, NAD och
ett buffertsystem; Såsom mått för
glukoshalten hos lösningen, som skall undersökas, kan man använda
UV-fluorescens hos bildad NADH2, eller man kan efteråt infoga en
från mutarotas kan man avstå.
10.
15
35
šO
Vi
UI
H0
73122844
10
Lëmpligen användes härtill hydre-
ringen av ett tetrazoliumsalt till motsvarande färgade formazan un-
NADH2-indikerande färgreaktion.
der inflytande av diaforas. Såsom lämpliga visar sig tetrazolium-
salterna 2-(p-jodofenyl)-3-(p-nitrofenyl)-5-fenyl-tetrazoliumklorid
(INT) och 3-(Ä,5-dimetyltiazolyl-l-2)-2,5-difenyl-tetrazoliumbro-
mid (MTT).
Förutom bestämningen av glukos i biologiska vätskor, såsom
blod, serum, plasma, urin, OSV, är föreliggande medel och förfaran-
de av stor betydelse även för industrin, speciellt livsmedelsindust-
rin- Glukosbestämningar är exempelvis av intresse vid analysen av
honung, frukter, marmelader, sötsaker, fruktsafter, restsötma i vin,
osv samt i sockerfabrikationen.
Föreliggande uppfinning belyses närmare genom efterföljande
ekempel.
Exempel 1. I 0,1 ml serum avlägsnas ëggvitan med 1 ml 3-procentig
trikloroättiksyralösning. 0,2 ml av överskiktet sättes i en kyvett
till 2 ml 0,1 M trisbuffert (pH 355), som innehåller 0,5 mh 5-acet-
;flkíno1ín. Därefter pipetteras därtill 0,1 ml enzymblandning, som
innehåller 120 U GDH/ml och 12 enheter mutarotas/ml i 0,05 M citrat-
buffert (pH 6,5)/BM natriumklorid. Blindprovet innehåller i stäl-
let för provlösningen 0,2 ml av medlet för avlägsnande av äggvita.
Analysprov och blindprov genomblandas och extinktionerna vid 560 nm
avläses, så snart några extinktionsändringar ej längre uppträder
(pa l-2 minuter).
Reaktionen startas sedan genom tillsats av 0,02 ml av den vat-
tenhaltiga koenzymlösningen, som innehåller 0,58 M NAD. Efter ca
5 minuter är reaktionen avslutad och extinktionerna avläsas. Ur den
mätta extinktionsdífferensen ÅÄE = 0,326 vid 366 nn beräknas en
glukoshalt av 227 mg/100 ml serum.
Samma resultat erhålles om man använder en 0,1 M trisbuffert,
som i stället för 0,05 mM 3-acetyfldnolin innehåller H5 mM nikotin-
syra, 1,6 mM nikotinsyraamid, 0,H mM kinaldinsyra eller 0,13 mM
kinolyl-2-klorometan. 0
De i testet angivna mutarotas-enheterna bestämdes på följande
sätt:
I en kyvett pipetteras 3 ml 0,1 M fosfatbuffert (pH 7), inne-
hållande 100 U peroxidas/ml buffert, 0,05 ml o-dianisidinlösning
(10 mg/ml vatten), 0,1 ml glukosoxidaslösning (600 U/ml vatten) och
0,05 ml mutarotaslösning med obekant aktivitet. Genom tillsats av
Qlmlnyberedd Qfglukoslösning (0,3 mg/ml vatten) startas reaktio-
LO
p;
\.T|
,, 7312284-s
nen.- Vid 25°C och H36 nm registreras extinktionsökningen per mi-
På samma sätt bestämmes ett blindvärde, varvid i stället för
De för blindvärdet och mätvär-
nut.
mutarotaslösningen vatten användes.
det erhållna extinktionsökningarna per minut ÄÄE resp Älšblind
insättes i följande heräkningsfornel:
ÅÄE "¿ÄEb1ina
mutarotas-enheter/ml enzymlösníng = 0.0:
ß .I
Exempel 2. 0,02 ml serum tillsättes direkt i reaktionen. Genomfö-
randet av bestämnineen sker analogt med exempel 1, varvid följande
beståndsdelar användes i den ordningsföljd de tillsättes:
2 ml 0,2 M trisbuffert (DH 7,3), innehållande 5 mM koffein,
0,02 ml serum resp. vatten vid blindprovet, 0,1 ml enzymblandning,
framställd genom lösning av ett lyofilisat i citratbuffert (pH 6,5),
så att 120 U GDH/ml och 12 enheter mutarotas/ml föreligger;
0,02 ml vattenhaltig koenzymlösning, innehållande 0,52 M NAD.
Efter reaktionens förl0PP (ca 5 minuter) uträknas ur den mätta
extinktionsdifferensen ÅÄE = 0,15U en glukoshalt av 96 mg/100 ml
serum.
Samma resultat erhålles, om man använder en buffertlösning,
som i stället för 3 mfl koffein innehåller 0,35 mM urinsyra, 21 mfl
teofyllin, 2,6 mW desoxiguanosin, 30 mM inosín eller 50 nä xantosin.
Om man i stället för ovan angivna enzymer använder en häggra-
digt renad enzymblandning med 2500 U GDH/ml och 250 enheter mutaro-
tas/ml, så är reaktionen redan avslutad efter 10 sekunder. Resul-
tatet är detsamma som ovan. _
Exempel 3. Urin spädes med dubbeldestillerat H,0 i förhållandet
1:11 och 0,2 ml av den erhållna provlösninçen användes i reaktio-
nen. Genomförandet av bestämninyen sker analogt med exempel l, var-
vid följande beståndsdelar användes i den ordningsföljd de tillsät-
tes:.
2 mi 0,1 M rosfacbuffert (pH 6.5), innehållande ho mn eniro-
salicylsyra, 0,2 ml utspädd urin resp. vatten vid blindprovet,
0,1 ml enzymblandninz, innehållande 300 U GDH/ml och 30 enheter
mutarotas/ml, löst i 0,05 M citratbuffert (pH 6,5), som är 3% med
avseende på natriumklorid, 0,02 ml vattenhaltig koenzymlösning, in-
nehâllande 0,25 M NAD.
Efter ca två minuter är reaktionen slut.
differensŧ,E = 0,305 ger som resultat en glukoshalt av 212 mg/IO0
ml urin. I
Beräknad extinktions-
10
IV
CJ
25
BO
35
Ä0,
'7312284-8 12
'Samma resultat erhålles, om man använder en buffertlösning, som
i stället för H0-mM sulfosalicylsyra innehåller l mM m-hydroxiben-'
soesyra, 0,5 mM salicylsyra, 0,7 mM acetylsalicylsyra, 10 mä sali-
cylamid eller 50 mM_l~(p-klorofenylsulfonyl)-3-propylkarbamid.
Exempel Ä. Ett prov av 5H,0 g honung löses i dubbeldestillerat vat-
-ten, kompletteras_till 100 ml och 0,2 ml härav användes för glukos-'
bestämning. Genomförandet sker analogt med exempel 1, varvid föl-
jande beståndsdelar användes i den ordningsföljd de tillsättes:
2 ml 0,2 M fosfatbuffert (pH 7,3), innehållande H0 mn sulfo-
salicylsyra, 0,2 ml.av lösningen, som skall undersökas, resp. vat-
ten vid blindprovet, 0,1 ml enzymblandning, innehållande 300 U
GDH/ml och 20 enheter mutarotas/ml, 0,02 ml vattenhaltig koenzym-
lösning, innehållande 0,32 M NAD eller motsvarande mängd NADP.
Efter reaktionens förlopp (ca 2 minuter) erhålles en extink-
tionsdifferens av ÄÄE = 0,338. Därur beräknas en halt av 2l,ü mg
g1ukos_per 100 ml undersökningslösning; honungen innehåller följ-
aktligen 39,6 5 glukos. _
Exempel 5. En testförpackníng för enzymatisk bestämning av glukos,
tillräcklig för ca 90 bestämningar och 10 blindvärden, innehåller
följande beståndsdelar: mu_
1. 110 ml av ett medel för avlägsnande av äggvita, som är fär-
digt att användas, närmare bestämt antingen en 3-procentíg lösning
av trikloro-ättiksyra eller en 2-procentig vattenhaltig lösning av
perklorsyra. '
2. 220 ml buffert färdig att användas med pH 7,5, närmare be-
stämt antingen 200 mM fosfatbuffert eller 100 mM trishydroximetyl-'
aminometan. '
3. ll ml av en lösning färdig att användas av GDH och mutarotas
i 50 mm citratbuffert (pH 6,5)/5 M natríumklorid eller en lyofili-
serad enzymblandning av GDH och mutarotas, som för förbrukningen
löses i ll ml 50 mM citratbuffert, varvid i bäda fallen 120 U
GDE1m1 och_l2 enheter mutarotas/ml är närvarande.
N. Lyofiliserad NAD eller NADP, som för användningen löses i
2,2 ml dubbeldestillerat vatten, varvid en molaritet av 330 mM blir
resultatet.
Glukosbestämningen med denna testförpackning utföres såsom be-
skrives i.de ovan angivna exemplen.
Exempel 6. För framställning av testremsor för halvkvantitativ_
glukosbestämning löses 2150 U diaforas (bestämd enligt H.U. Berg-
meyer, Methoden der enzymatischen Analyse, 2:a upplagan, sid N06,
10
15
20
25
50
HO
_ en och torkas vid 2500 i luftström.
“ minut.beddmes den bildade färgen med hjälp av en färgskala.
7312284-'8
Verlag Chemie, weinheim (1970)), 1200 U GDH, 0,13 mmol NAD, 20 mg
2-(p~jodofenyl)-3-(p-nitrofenyl)~5-fenyltetrazoliumklorid (INT)
(resp 14 mg 3-(M,5-dimetyltiazolyl-l-2)-2,5-difenyltetrazoliumbro-
mid (MTT) i 20 ml 0,01 M fosfathuffert (pH 6,5) och lösningens
Filtrerpapper
13
pH-värde justeras efteråt eventuellt till 6,5.
(âchleicher och Schüll nr lü50 CV) impregneras med reagenslösning-
På så sätt erhållet impregne-
rat filtrerpapper skëres i små kvadrater av ca'6 x 6 mm och påföres
Det är lämpligt
att redan innan impregneringen påsvetsa bäraren med sugförmåga på
på plastremsor av 6 x 60 mm vid den undre änden.
en bärarfolie.
I urinproven av olika glukoshalt neddoppas de på så sätt fram-
ställda små undersökningsstavarna i precis 5 sekunder och efter en
Under
det att vid proven utan glukos inte någon färgning uppträder, vi-
sar sig glukoskoncentrationer från 50 till 100 mgß genom svag rosa-
färgning (resp. gråblå färgning vid användning av MTT) inom omrâ-
det från 250 mg% genom intensiv rosafärgning (resp. blåfërgning)
och ovanför 500 mgñ genom röd- (resp. mörkblå-)färgning. _
Exempel 7. Ur 0,1 ml helblod avlägsnas äggvita ned 1,0 nl perklor-
syra (2,0 viktprocent i duhbeldestillerat vatten), på analogt sätt
blandas 0,1 ml av en vattenhaltig glukos-standardlösning (100 mgß)
med 1,0 ml av medlet för avlägsnande av äggvita. Med hjälp av ett
mekaniserat analyssystem företagas fdljande pipetteringar.
Vardera 2,0 ml i förväg blandad buffert-enzym-blandning, pH
7,6, innehållande 0,12 M fosfatjoner,_0,l5 M NaCl, 20 U GDH/nl och
2 enheter mutarotas/ml blandas med 0,2 ml prov, där äggvitan avlägs-
nats, (analys) resp. 0,2 ml perklorsur standardlösning (standard)
resp, 0,2 ml medel för avlägsnande av äggvita (blindprov) och reak-
tionen startas för vardera med 0,02 ml vattenhaltig NAD-lösning
(0,2? M). Efter justering av utslaget med blindprovet till 0 be-
stëmmes efter en inkubationstid av 5 minuter vid 366 nm extinktio-
nen av standarden ES och analysen EA.
De mätta extinktionsvärdena ES = 0,150 och EA = 0,ü39 uttryck-
es; på känt sätt beräknar man därur glukoskoncentrationen hos pro-
vet till 293 mgß.
Samma resultat erhåller man vid genomförandet av analysen i
anordningar, som arbetar efter flödesprincipen (continous flow)
eller med centrifugalkraft. Beräkning av glukoskoncentrationen'i
provet sker här med hjälp av en kalibreringskurva, som man framstäl-
ler genom analys av en serie standardlösningar av olika koncentra-
tion.
_...-_.._-.-_..__..-
Claims (6)
1. Förfarande för enzymatisk bestämning av glukos, k ä n n e t e c k n a t därav, att man bringar ett medel, som består av glukosdehydrogenas med èn aktivitet av minst 2 U/ml provlösning, ett pyridin-koenzym, buffertsubstanser med ett pH- värde från 6,5 till 8,5, mutarotas, varvid enzymenheternas för- I hållande av glukosdehydrogenas till mutarotas utgör ca 10:0,25-1, och eventuellt inhibitorer för oxidaser för reducerade pyridin- koenzymer och/eller alkalikloríd, att inverka på det glukoshaltiga provet, som skall-undersökas, och mäter halten av bildat reduce- rat pyridin-koenzym spektrofotometriskt eller fluorimetriskt.
2; Medel för utförande av förfarandet enligt krav 1 medelst glukosdehydrogenas med en aktivitet av minst 2 U/ml provlösning,/ ett nyridin-koenzym och buffertsubstanser med ett pH-värde från 6,5 till 8,5 under bildning av glukonsyra och reducerat pyridin- koenzym, k å n n e t e c k n a_t av en halt av mutarotas och eventuellt inhibitorer för oxidaser för reducerade pyridin-koen- zymer och/eller alkalíklorid, varvid enzymenheternas fömüälande av glukosdehydrogenas till mutarotas utgör ca 10:O,25-1.
3. Medel för enzymatisk bestämning av glukos enligt krav 2, k ä n n e t e c k n a t av att pyridin-koenzymerna är nikotina- mid-adenin-dinukleotid (NAD) eller nikotinamid-adenin-dinukleo- tid-fosfat (NADP).
4. Medel för enzymatisk bestämning av glukos enligt krav 2-3, k ä n n e t e c k n a t' av att de eventuellt ingående inhibítorerna för oxidaser för reducerade pyridin-koenzymer är pyridin-, pyrin- och/eller hydroxibensoesyraderívat.
5. Medel för enzymatisk bestämning av glukos enligt krav 2-H, k ä n n e t e c k n a t av att de eventuellt ingående inhí- bitorerna för oxidaser för reducerade pyridin-koenzymer är 3-acetyl-kinolin och/eller sulfosalicylsyra.
6..Medel för enzymatisk bestämning av glukos enligt krav 2-5, k ä n n e t e c k n a t av att den eventuellt innehållna alkalikloriden är natriumklorid. -___-..~__-__ “ ANFöRnA PuaL1| Anal. Biochem. 43 (1971) 312-15. ' cum chim. Acta 37 (1972S, 538-40.
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DE19722247608 DE2247608C3 (de) | 1972-09-28 | Mittel und Verfahren zur enzymatischen Bestimmung von Glucose |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
SE417526B true SE417526B (sv) | 1981-03-23 |
Family
ID=5857641
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SE7312284A SE417526B (sv) | 1972-09-28 | 1973-09-10 | Forfarande och medel for enzymatisk bestemning av glukos |
Country Status (13)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US3964974A (sv) |
JP (1) | JPS5615879B2 (sv) |
BE (1) | BE805326A (sv) |
CH (1) | CH581839A5 (sv) |
CS (1) | CS164231B2 (sv) |
DD (1) | DD106712A5 (sv) |
FR (1) | FR2201768A5 (sv) |
GB (1) | GB1395306A (sv) |
IL (1) | IL43054A (sv) |
IT (1) | IT1006085B (sv) |
NL (1) | NL183659C (sv) |
SE (1) | SE417526B (sv) |
ZA (1) | ZA735678B (sv) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1990012890A1 (en) * | 1989-04-25 | 1990-11-01 | Migrata Uk Ltd | Method for determination of glucose in whole blood and cuvette and photometer for carrying out said method |
WO1990012889A1 (en) * | 1989-04-25 | 1990-11-01 | Migrata Uk Ltd | Method of analysis, reagent composition and use thereof for glucose determination |
Families Citing this family (110)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4120755A (en) * | 1977-04-28 | 1978-10-17 | Beckman Instruments, Inc. | Kinetic method for determination of glucose concentrations with glucose dehydrogenase |
JPS56137899A (en) * | 1980-03-27 | 1981-10-28 | Matsushita Electric Ind Co Ltd | Determining method of glucose concentration |
JPS5886083A (ja) * | 1981-11-12 | 1983-05-23 | Wako Pure Chem Ind Ltd | グリセロ−ル−3−リン酸オキシダ−ゼの安定化剤 |
EP0094161A1 (en) * | 1982-05-07 | 1983-11-16 | Imperial Chemical Industries Plc | Method for determining glucose content of fluid |
US4394444A (en) * | 1982-06-21 | 1983-07-19 | Miles Laboratories, Inc. | Cofactor indicator compositions |
DD247808C2 (de) * | 1984-04-09 | 1989-01-11 | Dresden Arzneimittel | Teststreifen zur aufnahme von blutzuckertagesprofilen und verfahren zu seiner herstellung |
DE3432570A1 (de) * | 1984-09-05 | 1986-03-13 | Merck Patent Gmbh, 6100 Darmstadt | Verfahren zur mikrobiologischen herstellung von aldose-1-epimerase |
DE3531360A1 (de) * | 1985-09-03 | 1987-05-07 | Merck Patent Gmbh | Dna-sequenzen, rekombinante dna-molekuele und verfahren zur herstellung des enzyms mutarotase aus acinetobacter calcoaceticus |
JPH0286779A (ja) * | 1988-09-22 | 1990-03-27 | Amano Pharmaceut Co Ltd | 改良型組換えdna、それを含む形質転換体及びそれを用いた耐熱性グルコースデヒドロゲナーゼの製造法 |
US6395227B1 (en) * | 1989-08-28 | 2002-05-28 | Lifescan, Inc. | Test strip for measuring analyte concentration over a broad range of sample volume |
US5620863A (en) * | 1989-08-28 | 1997-04-15 | Lifescan, Inc. | Blood glucose strip having reduced side reactions |
JPH0673478B2 (ja) * | 1990-01-11 | 1994-09-21 | 旭化成工業株式会社 | L―カルニチンの高感度測定法および測定用組成物 |
JP2677154B2 (ja) * | 1993-03-08 | 1997-11-17 | 日東紡績株式会社 | 総ケトン体の測定方法および測定試薬 |
JP3167508B2 (ja) * | 1993-06-15 | 2001-05-21 | 富士写真フイルム株式会社 | 無機燐定量用試薬及び乾式分析要素 |
CA2127172C (en) * | 1993-08-05 | 1998-07-14 | Amy H. Chu | Analyte detection device and process |
US5567605A (en) * | 1994-11-21 | 1996-10-22 | Uop | Assay for D-allose using a NAD cofactor coupled D-allose dehydrogenase |
US7192450B2 (en) | 2003-05-21 | 2007-03-20 | Dexcom, Inc. | Porous membranes for use with implantable devices |
US6001067A (en) | 1997-03-04 | 1999-12-14 | Shults; Mark C. | Device and method for determining analyte levels |
US20050033132A1 (en) * | 1997-03-04 | 2005-02-10 | Shults Mark C. | Analyte measuring device |
US8688188B2 (en) | 1998-04-30 | 2014-04-01 | Abbott Diabetes Care Inc. | Analyte monitoring device and methods of use |
US9066695B2 (en) | 1998-04-30 | 2015-06-30 | Abbott Diabetes Care Inc. | Analyte monitoring device and methods of use |
US8974386B2 (en) | 1998-04-30 | 2015-03-10 | Abbott Diabetes Care Inc. | Analyte monitoring device and methods of use |
US8465425B2 (en) | 1998-04-30 | 2013-06-18 | Abbott Diabetes Care Inc. | Analyte monitoring device and methods of use |
US8480580B2 (en) | 1998-04-30 | 2013-07-09 | Abbott Diabetes Care Inc. | Analyte monitoring device and methods of use |
US6949816B2 (en) | 2003-04-21 | 2005-09-27 | Motorola, Inc. | Semiconductor component having first surface area for electrically coupling to a semiconductor chip and second surface area for electrically coupling to a substrate, and method of manufacturing same |
US6175752B1 (en) | 1998-04-30 | 2001-01-16 | Therasense, Inc. | Analyte monitoring device and methods of use |
US20080076997A1 (en) * | 1998-04-30 | 2008-03-27 | Abbott Diabetes Care, Inc. | Analyte monitoring device and methods of use |
US8346337B2 (en) | 1998-04-30 | 2013-01-01 | Abbott Diabetes Care Inc. | Analyte monitoring device and methods of use |
US6908770B1 (en) * | 1998-07-16 | 2005-06-21 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Fluid based analysis of multiple analytes by a sensor array |
US6656697B1 (en) | 1998-09-28 | 2003-12-02 | Lifescan, Inc. | Diagnostics based on tetrazolium compounds |
US7022517B1 (en) | 1999-07-16 | 2006-04-04 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Method and apparatus for the delivery of samples to a chemical sensor array |
AU1325201A (en) | 1999-07-16 | 2001-02-05 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Detection system based on an analyte reactive particle |
US6541216B1 (en) | 1999-12-22 | 2003-04-01 | Roche Diagnostics Corporation | Amperometric biosensor test strip |
WO2001055702A1 (en) * | 2000-01-31 | 2001-08-02 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Portable sensor array system |
US6420128B1 (en) * | 2000-09-12 | 2002-07-16 | Lifescan, Inc. | Test strips for detecting the presence of a reduced cofactor in a sample and method for using the same |
US6560471B1 (en) | 2001-01-02 | 2003-05-06 | Therasense, Inc. | Analyte monitoring device and methods of use |
WO2002061392A2 (en) * | 2001-01-31 | 2002-08-08 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Method and apparatus for the confinement of materials in a micromachined chemical sensor array |
AU2002309528A1 (en) | 2001-04-02 | 2002-10-15 | Therasense, Inc. | Blood glucose tracking apparatus and methods |
US6702857B2 (en) | 2001-07-27 | 2004-03-09 | Dexcom, Inc. | Membrane for use with implantable devices |
US20030032874A1 (en) | 2001-07-27 | 2003-02-13 | Dexcom, Inc. | Sensor head for use with implantable devices |
US10022078B2 (en) | 2004-07-13 | 2018-07-17 | Dexcom, Inc. | Analyte sensor |
US9247901B2 (en) | 2003-08-22 | 2016-02-02 | Dexcom, Inc. | Systems and methods for replacing signal artifacts in a glucose sensor data stream |
US8010174B2 (en) | 2003-08-22 | 2011-08-30 | Dexcom, Inc. | Systems and methods for replacing signal artifacts in a glucose sensor data stream |
US8260393B2 (en) | 2003-07-25 | 2012-09-04 | Dexcom, Inc. | Systems and methods for replacing signal data artifacts in a glucose sensor data stream |
US9282925B2 (en) | 2002-02-12 | 2016-03-15 | Dexcom, Inc. | Systems and methods for replacing signal artifacts in a glucose sensor data stream |
EP1502097A2 (en) * | 2002-04-26 | 2005-02-02 | Board of Regents, The University of Texas System | Method and system for the detection of cardiac risk factors |
JP4656938B2 (ja) * | 2002-05-16 | 2011-03-23 | エフ ホフマン−ラ ロッシュ アクチェン ゲゼルシャフト | 不活化酵素を用いた方法および試薬システム |
US7875293B2 (en) | 2003-05-21 | 2011-01-25 | Dexcom, Inc. | Biointerface membranes incorporating bioactive agents |
US8423113B2 (en) | 2003-07-25 | 2013-04-16 | Dexcom, Inc. | Systems and methods for processing sensor data |
US20070173710A1 (en) * | 2005-04-08 | 2007-07-26 | Petisce James R | Membranes for an analyte sensor |
US7651596B2 (en) | 2005-04-08 | 2010-01-26 | Dexcom, Inc. | Cellulosic-based interference domain for an analyte sensor |
US7761130B2 (en) | 2003-07-25 | 2010-07-20 | Dexcom, Inc. | Dual electrode system for a continuous analyte sensor |
US8676287B2 (en) | 2003-08-01 | 2014-03-18 | Dexcom, Inc. | System and methods for processing analyte sensor data |
US9135402B2 (en) | 2007-12-17 | 2015-09-15 | Dexcom, Inc. | Systems and methods for processing sensor data |
US8332008B2 (en) | 2003-08-01 | 2012-12-11 | Dexcom, Inc. | System and methods for processing analyte sensor data |
US8845536B2 (en) | 2003-08-01 | 2014-09-30 | Dexcom, Inc. | Transcutaneous analyte sensor |
US8275437B2 (en) | 2003-08-01 | 2012-09-25 | Dexcom, Inc. | Transcutaneous analyte sensor |
US8160669B2 (en) | 2003-08-01 | 2012-04-17 | Dexcom, Inc. | Transcutaneous analyte sensor |
US8761856B2 (en) | 2003-08-01 | 2014-06-24 | Dexcom, Inc. | System and methods for processing analyte sensor data |
US7774145B2 (en) | 2003-08-01 | 2010-08-10 | Dexcom, Inc. | Transcutaneous analyte sensor |
US8369919B2 (en) | 2003-08-01 | 2013-02-05 | Dexcom, Inc. | Systems and methods for processing sensor data |
US20190357827A1 (en) | 2003-08-01 | 2019-11-28 | Dexcom, Inc. | Analyte sensor |
US6931327B2 (en) | 2003-08-01 | 2005-08-16 | Dexcom, Inc. | System and methods for processing analyte sensor data |
US8886273B2 (en) | 2003-08-01 | 2014-11-11 | Dexcom, Inc. | Analyte sensor |
US7591801B2 (en) | 2004-02-26 | 2009-09-22 | Dexcom, Inc. | Integrated delivery device for continuous glucose sensor |
US20140121989A1 (en) | 2003-08-22 | 2014-05-01 | Dexcom, Inc. | Systems and methods for processing analyte sensor data |
US7920906B2 (en) | 2005-03-10 | 2011-04-05 | Dexcom, Inc. | System and methods for processing analyte sensor data for sensor calibration |
US8233959B2 (en) | 2003-08-22 | 2012-07-31 | Dexcom, Inc. | Systems and methods for processing analyte sensor data |
WO2005051170A2 (en) | 2003-11-19 | 2005-06-09 | Dexcom, Inc. | Integrated receiver for continuous analyte sensor |
US9247900B2 (en) | 2004-07-13 | 2016-02-02 | Dexcom, Inc. | Analyte sensor |
US11633133B2 (en) | 2003-12-05 | 2023-04-25 | Dexcom, Inc. | Dual electrode system for a continuous analyte sensor |
US8364231B2 (en) | 2006-10-04 | 2013-01-29 | Dexcom, Inc. | Analyte sensor |
US8774886B2 (en) | 2006-10-04 | 2014-07-08 | Dexcom, Inc. | Analyte sensor |
DE602004029092D1 (de) | 2003-12-05 | 2010-10-21 | Dexcom Inc | Kalibrationsmethoden für einen kontinuierlich arbeitenden analytsensor |
US8423114B2 (en) | 2006-10-04 | 2013-04-16 | Dexcom, Inc. | Dual electrode system for a continuous analyte sensor |
EP3263032B1 (en) | 2003-12-09 | 2024-01-24 | Dexcom, Inc. | Signal processing for continuous analyte sensor |
US8808228B2 (en) | 2004-02-26 | 2014-08-19 | Dexcom, Inc. | Integrated medicament delivery device for use with continuous analyte sensor |
US8101431B2 (en) | 2004-02-27 | 2012-01-24 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Integration of fluids and reagents into self-contained cartridges containing sensor elements and reagent delivery systems |
US8105849B2 (en) * | 2004-02-27 | 2012-01-31 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Integration of fluids and reagents into self-contained cartridges containing sensor elements |
US8886272B2 (en) | 2004-07-13 | 2014-11-11 | Dexcom, Inc. | Analyte sensor |
EP2335585B1 (en) | 2004-07-13 | 2016-09-07 | DexCom, Inc. | Transcutaneous analyte sensor |
US7783333B2 (en) | 2004-07-13 | 2010-08-24 | Dexcom, Inc. | Transcutaneous medical device with variable stiffness |
US20060016700A1 (en) | 2004-07-13 | 2006-01-26 | Dexcom, Inc. | Transcutaneous analyte sensor |
US7310544B2 (en) | 2004-07-13 | 2007-12-18 | Dexcom, Inc. | Methods and systems for inserting a transcutaneous analyte sensor |
US8744546B2 (en) | 2005-05-05 | 2014-06-03 | Dexcom, Inc. | Cellulosic-based resistance domain for an analyte sensor |
WO2006121661A2 (en) * | 2005-05-05 | 2006-11-16 | Dexcom, Inc. | Cellulosic-based resistance domain for an analyte sensor |
WO2007053186A2 (en) | 2005-05-31 | 2007-05-10 | Labnow, Inc. | Methods and compositions related to determination and use of white blood cell counts |
CA2613078A1 (en) * | 2005-06-24 | 2007-01-04 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Systems and methods including self-contained cartridges with detection systems and fluid delivery systems |
TW200718785A (en) * | 2005-11-10 | 2007-05-16 | Toyo Boseki | A process for improving the thermal stability of a composition containing a soluble coenzyme conjugated glucose dehydrogenase (GDH) |
EP3366201B1 (en) | 2006-01-17 | 2024-02-28 | DexCom, Inc. | Low oxygen in vivo analyte sensor |
EP4282332B1 (en) | 2006-02-22 | 2024-05-15 | DexCom, Inc. | Analyte sensor |
EP4218548A1 (en) | 2006-03-09 | 2023-08-02 | Dexcom, Inc. | Systems and methods for processing analyte sensor data |
US20080071157A1 (en) | 2006-06-07 | 2008-03-20 | Abbott Diabetes Care, Inc. | Analyte monitoring system and method |
WO2008154312A1 (en) | 2007-06-08 | 2008-12-18 | Dexcom, Inc. | Integrated medicament delivery device for use with continuous analyte sensor |
EP4098177A1 (en) | 2007-10-09 | 2022-12-07 | DexCom, Inc. | Integrated insulin delivery system with continuous glucose sensor |
US8417312B2 (en) | 2007-10-25 | 2013-04-09 | Dexcom, Inc. | Systems and methods for processing sensor data |
US8290559B2 (en) | 2007-12-17 | 2012-10-16 | Dexcom, Inc. | Systems and methods for processing sensor data |
US8229535B2 (en) | 2008-02-21 | 2012-07-24 | Dexcom, Inc. | Systems and methods for blood glucose monitoring and alert delivery |
EP2106784B1 (en) * | 2008-04-03 | 2015-04-22 | Rohm and Haas Company | Hair styling composition |
EP2228645B1 (en) * | 2008-05-16 | 2013-09-04 | Panasonic Corporation | Method, device and apparatus for measuring the concentration of creatinine, and method, device and apparatus for measuring the amount of salt using the same |
WO2012007446A1 (en) | 2010-07-13 | 2012-01-19 | Dsm Ip Assets B.V. | Use of a mutarotase in the production of dried powders |
WO2012007445A1 (en) | 2010-07-13 | 2012-01-19 | Dsm Ip Assets B.V. | Mutarotase in crystallization |
EP2697650B1 (en) | 2011-04-15 | 2020-09-30 | Dexcom, Inc. | Advanced analyte sensor calibration and error detection |
US9347958B2 (en) | 2014-06-27 | 2016-05-24 | Hemocue Ab | Device and method for determination of an analyte in blood |
FR3038723B1 (fr) | 2015-07-07 | 2019-06-14 | Commissariat A L'energie Atomique Et Aux Energies Alternatives | Procede d’estimation d’une quantite d’analyte dans un liquide |
FR3049062B1 (fr) | 2016-03-17 | 2023-06-02 | Commissariat Energie Atomique | Procede de caracterisation d’un echantillon liquide comportant des particules |
JP2021500162A (ja) | 2017-10-24 | 2021-01-07 | デックスコム・インコーポレーテッド | 事前接続された分析物センサ |
US11331022B2 (en) | 2017-10-24 | 2022-05-17 | Dexcom, Inc. | Pre-connected analyte sensors |
CN110715923A (zh) * | 2019-11-24 | 2020-01-21 | 天津市宝坻区人民医院 | α-D-葡萄糖检测试剂盒 |
CN112630216A (zh) * | 2020-11-27 | 2021-04-09 | 上海绅道生物科技有限公司 | 一种检测1,5-ag的试剂盒和检测方法 |
Family Cites Families (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3290228A (en) * | 1964-07-29 | 1966-12-06 | Miles Lab | Test composition and device for detecting glucose |
US3335069A (en) * | 1964-12-14 | 1967-08-08 | Miles Lab | Composition and method for determining uric acid |
US3413198A (en) * | 1966-06-30 | 1968-11-26 | Calbiochem | Reagents and method for assaying biological samples |
DE1930059C3 (de) * | 1969-06-13 | 1975-11-13 | Boehringer Mannheim Gmbh | Stabilisiertes Nicotinamid-adenindinucleotid oder bzw. und Nicotinamld-adenin-dinucleotidphosphat |
US3703591A (en) * | 1970-12-16 | 1972-11-21 | Calbiochem | Triglyceride hydrolysis and assay |
-
1973
- 1973-08-15 CS CS5761A patent/CS164231B2/cs unknown
- 1973-08-20 GB GB3928273A patent/GB1395306A/en not_active Expired
- 1973-08-20 ZA ZA735678A patent/ZA735678B/xx unknown
- 1973-08-21 NL NLAANVRAGE7311508,A patent/NL183659C/xx not_active IP Right Cessation
- 1973-08-22 IL IL43054A patent/IL43054A/en unknown
- 1973-09-06 JP JP9977473A patent/JPS5615879B2/ja not_active Expired
- 1973-09-10 DD DD173383A patent/DD106712A5/xx unknown
- 1973-09-10 US US05/395,547 patent/US3964974A/en not_active Expired - Lifetime
- 1973-09-10 SE SE7312284A patent/SE417526B/sv unknown
- 1973-09-11 CH CH1298073A patent/CH581839A5/xx not_active IP Right Cessation
- 1973-09-11 FR FR7332591A patent/FR2201768A5/fr not_active Expired
- 1973-09-12 IT IT28822/73A patent/IT1006085B/it active
- 1973-09-26 BE BE136051A patent/BE805326A/xx not_active IP Right Cessation
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1990012890A1 (en) * | 1989-04-25 | 1990-11-01 | Migrata Uk Ltd | Method for determination of glucose in whole blood and cuvette and photometer for carrying out said method |
WO1990012889A1 (en) * | 1989-04-25 | 1990-11-01 | Migrata Uk Ltd | Method of analysis, reagent composition and use thereof for glucose determination |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
IL43054A0 (en) | 1973-11-28 |
DE2247608B2 (de) | 1976-07-08 |
NL183659B (nl) | 1988-07-18 |
IL43054A (en) | 1976-08-31 |
FR2201768A5 (sv) | 1974-04-26 |
GB1395306A (en) | 1975-05-21 |
DD106712A5 (sv) | 1974-06-20 |
NL7311508A (sv) | 1974-04-01 |
JPS5615879B2 (sv) | 1981-04-13 |
JPS4973193A (sv) | 1974-07-15 |
CH581839A5 (sv) | 1976-11-15 |
DE2247608A1 (de) | 1974-04-04 |
US3964974A (en) | 1976-06-22 |
NL183659C (nl) | 1988-12-16 |
IT1006085B (it) | 1976-09-30 |
BE805326A (fr) | 1974-03-26 |
CS164231B2 (sv) | 1975-11-07 |
ZA735678B (en) | 1974-07-31 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
SE417526B (sv) | Forfarande och medel for enzymatisk bestemning av glukos | |
US4490465A (en) | Coupled enzyme systems for determination of dissolved substances | |
Kenner et al. | Measurements of electron transport activities in marine phytoplankton | |
Raabo et al. | On the enzymatic determination of blood glucose | |
US4350762A (en) | Aminopyrine improved Trinder's reagent and dosing process for hydrogen peroxide from enzymatic oxidation of metabolic substrata with the same | |
CA1152871A (en) | Process and reagent for the enzymatic determination of enzyme substrates | |
CA1120836A (en) | PROCESS AND A REAGENT FOR THE DETERMINATION OF .alpha.-AMYLASE | |
EP0240849B1 (en) | Controlled hue test device | |
JPS5948099A (ja) | アスコルビン酸塩耐性広濃度域用グルコ−ス試験組成物、試験具および試験方法 | |
JPH0577399B2 (sv) | ||
CS231174B2 (en) | Method of elimininating of disturbung effect of askorbic acid in tested system in proving oxidative-reducing reaction and diagnostic means to perform the method | |
EP0200540A2 (en) | Analytical element and method for determination of creatine kinase isoenzyme | |
Gardiner | A rapid and sensitive fluorimetric assay for adenosine, inosine, and hypoxanthine | |
JPH0555119B2 (sv) | ||
Kohlbecker et al. | Direct spectrophotometric determination of serum and urinary oxalate with oxalate oxidase | |
Watson | Enzymic determination of glucose and easily hydrolyzable glucose esters in blood | |
Dahlqvist | Disaccharidases | |
Kalckar et al. | Xanthopterin oxidase | |
JPS6279780A (ja) | 1,5―アンヒドログルシトールの定量法 | |
US3367842A (en) | Test composition and device for the detection of galactose in fluids | |
JP4022799B2 (ja) | 電解質測定用試薬組成物 | |
JPS61212300A (ja) | 保存安定性に優れたアルコ−ル検出用試験片 | |
DE2247608C3 (de) | Mittel und Verfahren zur enzymatischen Bestimmung von Glucose | |
JP4544598B2 (ja) | 液状試薬および保存方法 | |
EP0119332B1 (en) | Novel pyranose oxidase processes for the production and use thereof and test compositions for use therein |