SA515361121B1 - تركيبات تخطي للأكسون خاصة بمعالجة الحَثَل العَضَلِيّ - Google Patents

تركيبات تخطي للأكسون خاصة بمعالجة الحَثَل العَضَلِيّ Download PDF

Info

Publication number
SA515361121B1
SA515361121B1 SA515361121A SA515361121A SA515361121B1 SA 515361121 B1 SA515361121 B1 SA 515361121B1 SA 515361121 A SA515361121 A SA 515361121A SA 515361121 A SA515361121 A SA 515361121A SA 515361121 B1 SA515361121 B1 SA 515361121B1
Authority
SA
Saudi Arabia
Prior art keywords
teva
dystrophin
exon
sequence
oligomer
Prior art date
Application number
SA515361121A
Other languages
English (en)
Inventor
الزابيث فرانك دياني
كيه. بيستويك ريتشارد
Original Assignee
ساريبتا ثيرابيوتكس، انك
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by ساريبتا ثيرابيوتكس، انك filed Critical ساريبتا ثيرابيوتكس، انك
Publication of SA515361121B1 publication Critical patent/SA515361121B1/ar

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A61P21/04—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system for myasthenia gravis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/111—General methods applicable to biologically active non-coding nucleic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/11—Antisense
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
    • C12N2310/323—Chemical structure of the sugar modified ring structure
    • C12N2310/3233—Morpholino-type ring
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/35—Nature of the modification
    • C12N2310/351—Conjugate
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/35—Nature of the modification
    • C12N2310/351—Conjugate
    • C12N2310/3513—Protein; Peptide
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/35—Nature of the modification
    • C12N2310/353—Nature of the modification linked to the nucleic acid via an atom other than carbon
    • C12N2310/3535—Nitrogen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2320/00—Applications; Uses
    • C12N2320/30—Special therapeutic applications
    • C12N2320/33—Alteration of splicing

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

يتعلق الاختراع بمركبات مضادة لاتجاه النسخ جديدة وتركيبات مناسبة لتسهيل تخطي الأكسون في جين ديستروفين بشري حيث يكون أوليجومر عكس اتجاه النسخ بطول 20-50 نيوكليوتيد قادر على ربط مستهدف يمكن اختياره لحث تخطي الأكسون في جين ديستروفين بشري، حيث أن الأوليجومر في عكس اتجاه النسخ المذكور يشتمل على متوالية من القواعد التي يتم تهجينها بشكل خصا بالنسبة لمنطقة أكسون 55 مستهدف من المجموعة المكونة من H53A(+36+60) ، H53A(+30+57) ، H53A (+30+56) ، H53A(+30+55)و H53A(+33+57) ، وحيث أن القواعد الخاصة بالأوليجومر المذكور يتم ربطها مع بنيات حلقية من المورفولينو وحيث أن بنيات حلقة المورفولينو المذكورة يتم ربطها من خلال روابط وحدة داخلية تشتمل على فسفور يتم ربطها من نيتروجين مورفولينو من بنية حلقة مع 5 ' كربون حلقي خارجي من بنية حلقة مجاورة. شكل1ب.

Description

_ \ —_ ‏العَضَلِيَ‎ Bal ‏تركيبات تخطى للأكسون خاصة بمعالجة‎
Exon skipping compositions for treating muscular dystrophy ‏الوصف الكامل‎ خلفية الاختراع يتعلق الاختراع الحالي بمركبات مضادة لاتجاه النسخ جديدة وتركيبات مناسبة لتسهيل تخطي الإكسون في جين ديستروفين بشري. تم أيضاً توفير طرق لحث تخطي الإكسون باستخدام التركيبات في عكس اتجاه النسخ الجديدة. 5 .تم تطوير تقنيات عكس اتجاه النسخ باستخدام مدى من التقنيات الكيميائية للتأثير على التعبير الجيني عند مستويات متعددة مختلفة ( الانتساخ؛ التضفيرء الثبات؛ الترجمة ). تم تطوير العديد من البحوث لكي تركز على استخدام مركبات في عكس اتجاه النسخ لتصحيح والتعوبض عن جينات مرتبطة بالمرض أو غير طبيعية في مدى واسع من المؤشرات. تكون جزيئات مضادة لعكس اتجاه النسخ قادرة على تثبيط التعبير الجيني باستخدام خاصية وبسبب أن هذال والعديد من 0 جود الحث التي تتعلق بالأوليجونيوكليوتيدات في شكل معدلات من التعبير الجيني قد تركز على تثبيط التعبير عن الجينات المستهدفة الخاصة بالوظيفة من عناصر مؤثر على سيس. تكون الأوليجونيوكليوتيدات في عكس اتجاه النسخ قد تم توجيهها في مضادة ‎RNA‏ إما في نفس الجديلة (على سبيل المثال» ‎(MRNA‏ أو جديلة ناقصة فى حالة بعض مستهدفات ‎RNA‏ . لكي يتم تحقيق التأثير المطلوب الخاص بنقص متحكم فيه أوليجوء وأوليجونيوكليوتيد يكون بصفة عامة عن أي من التحسين الخاص بالتحلل الخاص ب ‎MRNA‏ مستهدف؛ وإعاقة انتقال ‎MRNA‏ أو إعاقة وظيفة عناصر ‎RNA‏ خاصة بالتأثير على سيس وبالتالي التأثير على المنع بشكل فعال لأي من التخليق الجديد الخاص ببروتين مستهدف أو انتساخ ‎RNA‏ فيروسى . ‎og‏ الرغم من ذلك فإن تلك لالتقنيات لا تكون مفيدة حيث أن الخاضع يكون عبارة عن إنتاج بزيادة متحكم فيها من بروتين أساسي أو يتم التعويض عنه فميا يتعلق بتطفيرات والتي تحث 0 الإنهاء الناضج القبلي الخاص بالترجمة ‎Jie‏ التطفيرات الخاصة بإزاحة الإطار أو غير المهمة. في تلك الحالات؛ فإن ناتج الانتساخ الجيني الفعال يجب أن يتم تعريضه غلى تحلل مستهدف أو
TEVA
ا تثبيط ستيريك بحيث يكون هناك خصائص كيميائية خاصة بالأوليجونيوكليوتيد تحسن من تحلل ‎MRNA‏ مستهدف أو إعاقة الترجمة. في العديد من الأمراض الجينية؛ فإن التأثيرات الخاصة بالتطفيرات على التعبير ‎(Sled‏ من الجين يمكن أن يتم تعديلها من خلال عملية تخطي إكسون مستهدفة أثناء عملية الجدل. تم توجيه عملية الربط بشكل مباشر من خلال تعقيقد آلية متعددة المكونات التي تكون عبارة عن روابط إكسون - إنترون في ‎MRNA‏ أولي وفي ارتباط على نحو قريب وبإنشاء الانشطار الخاص بروابط فوسفو داي إستر عند أطراف الإنترونات مع إعادة التشكيل التالي بين الإكسونات والتي يتم ‎Leda‏ معاً. يتم التسبب في العملية المعقدة وعالية الدقة بواسطة وحدات متكررة متوالية في ‎MRNA‏ أول والذي يكون قصيراً بشكل نسبي ؛ وأجزاء ‎RNA‏ شبه محافظة والتي ترتبط بها العديد من عوامل الريط 0 النووي المتعددة ‎Ally‏ تم تضمينها في تفاعلات الربط. وعن طريق تغيير آلية طريقة الربط التي تقرأ أو تتعرف على محددات تم تضمينها في معالجة ل ‎MRNA‏ أمامية؛ ويمكن أن تكون ممكنة لإنشاء جزيئات ‎MRNA‏ مرتبطة على نحو تمايزي. تم الآن التعرف على العديد من الجينات البشرية والتي تكون مرتبطة على نحو بديل أثناء التعبير عن الجيني الطبيعي؛ وعلى الرغم من ذلك فإن تلك الآليات التي تم تضمينها لم يتم تحدديها. وصف ‎Bennett et al.‏ (البراءة الأمريكية 5 رقم ‎)17٠08957‏ تعديل مضاد في عكس اتجاه النسخ الخاص بمعالجة ‎MRNA‏ خلوي من النوع غير المعالج باستخدام نظائر أوليجونيوكليوتيد في عكس تجاه النسخ والي لا تحث الانشطار الذي يتوسطه ‎RNAse H‏ من ‎RNA‏ مستهدف. يمكن الوصول لاستخدام والذي يكون قابلاً لإنشاء ‎MRNAS‏ مرتبط على نحو بديل والذي يفتر لإكسونات (على سبيل المثال» كما تم وصفه بواسطة ‎Lud (Sazani, Kole, et al. 2007)‏ يتعلق بإنشاء مستقبلات عائلة عليا من ‎TNF‏ قابلة ‎(Gls 20‏ التي تفتقر لنطاقات تمديد غشاء مشفرة للإكسونات. في الحالات التي يكون فيها البروتين الوظيفي الطبيعي قد تم إنهاؤه بشكل ثابت بسبب التطفيرات المذكورة ‎(Lia‏ فإن هناك وسائل خاصة باستعادة بعض إنتاج البروتين الوظيفي خلال تقنية في عكس اتجاه النسخ ‎Ally‏ تم توضيحها بحيث تكون ممكنة خلال التدخل أثناء عمليات الريط ويالتالي إذا إكسونارتبطت الإكسونات مع التطفيرات المسبب للمرض فيمكن أن يتم حذفها على 5 نحو خاص من بعض الجينات ومنتج بروتين قصير يمكن في بعض الوقت إنتاجه الذي له ‎TEVA‏
له خصائص بيولوجية مشابهة من البروتين الأصلي أو له نشاط بيولوجي فعال لتخفيف إكسونمرض يتم التسبب فيه عن طريق الإكسون (انظرء على سبيل ‎Sierakowska, Sambade (Jal‏ ,. ‎et al. 1996; Wilton, Lloyd et al. 1999; van Deutekom, Bremmer—Bout et‏ ‎Kole al. 2001; Lu, Mann et al. 2003; Aartsma-Rus, Janson et al. 2004)‏ . ‎(et al. (U.S. Patent Nos. 5,627,274; 5,916,808; 5976879; and 5665593 5‏ التي تكشف عن طرق خاصة بمكافحة الربط غير الطبيعي باستخدام نظائر أوليجونيوكليوتيد معدلة ونظائر التي لا تحسن من التحلل الخاص ب ‎MRNA‏ أولي . وصف ‎Bennett et al‏ (البراءة الأمريكية رقم ‎17٠٠١897‏ ) تعديل في عكس اتجاه النسخ من معالجة ‎MRNA‏ من النوع الخلوي غير المعالج والذي يستخدم أيضاً نظائر أوليجونيوكليوتيد في عكس اتجاه النسخ والذي لا يحث 0 الانشطار الذي يتوسطه ‎RNAse H‏ من ‎RNA‏ مستهدف. تستهدف العملية تخطي الإكسون والذي يكون مفيداً بشكل خاص في الجينات الطويلة حيث أن هناك العديد من الإكسونات والإنترونات حيث يكون هناك تكراراً كثيراً في التكوين الجيني الخاص بالإكسونات أو حيث يكون البروتين قادراً على التأثير بدون واحد أو أكثر من الإكسونات. تكون التأثيرات الخاصة بإعادة توجيه المعالجة لاجينية الخاصة بمعالجة أمراض جينية مرتبطة مع الانقطاعات التي تسببها تطفيرات في العديد من الجينات التي تركز على استخدام أوليجوالأوليجو نيوكليوتيدات والتي تكون إما: ‎)١(‏ تتراكب بشكل كلي أو جزئي مع عناصر تم تضمينها في عملية الريط؛ أو ‎)١(‏ ترتبط مع ‎MRNA‏ أولي عند موضع قريب على نحو كافي لعنصر خاص بإتلاف ارتباط ووظيفة العوامل الخاصة بالربط والتي يمكن أن تتسبب بشكل طبيعي في تفاعل ربط معين والذي يحدث عند ذلك العنصر. 0 _يتسبب الحثل العضلي لدوشين ‎(DMD)‏ في التأثير في التعبير الخاص بديستروفين بروتين. يشتمل الجين طبقاً للبروتين على ‎VA‏ إكسون تم انتشارها من أكثر من ¥ مليون نيوكليوتيد من ‎DNA‏ . وأي تطفيراتإكسون التي تعمل تغييرات في قراءة إطار الإكسون؛ وإدخال كودون إيقاف أو تتميز بإزالة إكسون إطاري أو إسكونات أو إزدواج واحد او أكثر من الإكسونات التي لها احتمالية إتلاف الإنتاج من خلال الدسيتورفين والتي ينتج عنها ‎DMD‏
TEVA
هن تكون هناك صورة أقل شدة ن الحثل العضلي ؛ والحثل العضلي لبيكر ‎(BMD)‏ موجودة في طور النشأة؛ والتي تحذف بشكل نمطي واحدة أو أكثر من الإكسونات ‎lly‏ نتج عنها قراءة صحيحة للإطار بطول ناتج انتساخ ديستورفين» مثل الترجمة الخاصة ب ‎MRNA‏ في البروتين والذي لا ينتهي بشكل أولي. وإذا تم ربطهما فميا يتعلق بالإكسونات السفلية في معالجة ديستورفين متطفر من ‎MRNA‏ أولي والذي يحافظ على الإطار الصحيح الخاص بالقراءة من الجين؛ تكون النتيجة عبارة عن تشفير ‎MRNA‏ خاصة بالبروتين مع حذف داخلي قصير والتي تحتفظ ببعض النشاط والتي ينتج عنها النمط الظاهري من بيكر. للعديد من السنوات؛ تمت معرفة أن أنواع الحذف الخاصة بالإكسون أو الإكسونات التي لا تغير إطار القراءة من الديستروفين سوف تزيد من النوع الظاهري ‎BMD‏ ؛ حيث أن حذف الإكسون 0 الذي يسبب ‎dah)‏ خاصة بالإطار والذي يزيد من ‎Monaco, Bertelson et al. ( DMD‏ 1988( بصفة عامة فإن تطفيرات ديستروفين تشتمل على تطفيرات نقطية وحذف إكسونات والذي يغير الإطار الخاص بالقراءة ويالتالي يتقاطع مع ترجمة بروتين مناسب متقاطع ينتج عنه ‎DMD‏ ‏يجب أيضاً ملاحظة أن هناك بعض مرضى ‎BMD‏ و ‎DMD‏ لهم حذوفان إكسون يغطي الإكسونات المتعددة. 5 "تم تقرير تعديل ديستوفين متطفر خاص بريط ‎MRNA‏ أولي مع أوليجوربيو نيوكليوتيد الذي تم تقريره في كل من المعمل والكائن ‎(all‏ (انظرء على سبيل ‎Matsuo, Masumura et «Juul‏ ‎al. 1991; Takeshima, Nishio et al. 1995; Pramono, Takeshima et al.‏ ‎Dunckley, Eperon et al. 1997; Dunckley, Manoharan et al. 1998;‏ ;1996 ‎(Errington, Mann et al. 2003‏ يكون المثال الأول الخاص بتخطي الإكسون القابل لإعادة الإنتاج في نموذج فئران ‎MAX‏ تم تقريره بواسطة )1999 ‎Wilton et al. (Wilton, Lloyd et al.‏ وعن طريق توجيه جزيء عكس اتجاه النسخ موضع اترياط مانح» فإن ذلك يتم تكونيه بشكل فعال ‎Lad‏ يتعلق بتخطي الإكسون ‎VV‏ ‏والذي يتم حثفه في دستروفين ‎MRNA‏ في مدى ‎١‏ ساعات من المعالجة الخاصة بالخلايا المزروعة. يصف ‎Wilton ©] al.‏ أيضاً استهداف منطقة مستقبل من ‎MRNA‏ أولي من 5 «ديستروفين فاري مع الأوليجونيوكليوتيدات المضادة في عكس اتجاه النسخ. وعلى الرغم من أن
TEVA
-؟- الأوليجونيوكليوتيد في عكس اتجاه النسخ يتم توجيهه عند موضع ريط ‎mile‏ الإنترون ‎YY‏ ‏إكسونالذي يتكون من التخطي في أرومات عضلية؛ تم الوصول للمركب المذكور بحيث يكون أقل فعالية في مزراعة خلية مثبتة تم التعبير عنها في مستويات أعلى من ديستروفين. وعلى الرغم من ذلك؛ ومع الاستهداف الذي تم تحسينه وتصميم الأوليجونيوكليوتيد في عكس اتجاه النسخ؛ فإن الفعالي الخاصة بإزالة الإكسون تتزايد على نحو كبير ومع الترتيب الخاص بالزيادة ( ‎Mann,‏ ‎.(Honeyman et al. 2002‏ بدأت الدراسات الحالية في تناول التحدي الخاص تحقيق تعبير ديستروفين تم الحفاظ عليه يتم تحقيقه من خلال التأثيرات العكسية عند الحد الأدنى لها في الأنسجة التي تم التأثير عليها بواسطة غياب الديستروفين. ينتج عن الحقن بداخل العضلات من أوليجونيوكليوتيد مستهدف خاص 0 بالإكسون ‎(PROOST) ©١‏ في العضلة الداخلية من العصب الظنبوبي في العضلة في أربعة من المرضى مصابين ب 01/10 ينتج عنه تخطي الإكسون ‎0١‏ بدون أي تأثيرات عكسية جانبية إكلينيكية واضحة ) ‎Mann, Honeyman et al. 2002; van Deutekom, Janson et al.‏ 07)) إن الدراسات التي تبحث عند التوصيل المتزامن الخاص بمضاد الانتساخ من فوسفورو داي أميدات مورفولوينة من أوليجومر مترافق مع ببتيد اختراق خلية ‎(PPMO)‏ مستهدف لإكسون 5 ؟؟ في فئران ‎mdx‏ يعمل على إنتاج بروتيني ديستورفين عال ويتم الحفاظ عليه في العضلات الهيكلية والعضلات القلبية بدون السمية القابلة للاكتشاف ‎Jearawiriyapaisarn, Moulton et)‏ ‎.(al. 2008; Wu, Moulton et al. 2008; Yin, Moulton et al. 2008‏ تكون التجارب الإكلينيكية الحديثة الخاصة بالأمان والفعالية الخاصة بأوليجو نيوكليوتيدات (5505) الخاصة بمعالجة ‎DMD‏ التي تكون معتمدة على تقنية ‎SSO‏ لحث الارتباط البديل 0 الخاص ب ‎MRNAs‏ من خلال إعاقة فراغية من سبلايسوم ( ‎Cirak et al., 2011: Goemans‏ ‎.(et al., 2011; Kinali et al., 2009; van Deutekom et al., 2007‏ وعلى الرغم من تلك النجاحات؛ ظلت الحاجة موجودة لتحسين أوليجومرات في عكس اتجاه النسخ والتي تم استهدافها فيما يتعلق بإكسونات ديستروفين متعددة وتركيبات توصيل محسنة وطرق خاصة بتطبيقات علاجية ل ‎DMD‏ . ‎TEVA‏
ل الوصف العام للاختراع في واحدة من السمات؛ يوفر الاختراع أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ من ‎٠-7٠7١‏ نيوكليوتيد في الطول قادر على ربط مستهدف مختار لحث تخطي الإكسون في جين ديستروفين بشري؛ حيث يشتمل الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ على متوالية من قواعد التي تهجن بشكل خاص منطقة مستهدفة لإكسون ‎oF‏ مختارة من المجموعة المكونة من ‎H53A(+36+60)‏ «¢ (30+57+)1538 «)30+56+( 538لا « ‎H53A(+33+57) 5 H53A(+30+55)‏ ؛ حيث يتم ريط القواعد الخاصة بالأوليجومر مع بنيات حلقية من مورفولينو» وحيث يتم ربط البنيات الحلقية من مورفولينو بواسطة روابط وحدة فرعية تشتمل على فسفور تربط نيتروجين مورفولينو من من بنية حلقية مع © ” كربون إكسو سيكليك من بنية حلقية مجاورة. في أحد النماذج؛ فإن 0 الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ يكون حوالي ‎٠١0‏ إلى ‎٠‏ ؟ أوليجو نيوكليوتيد في الطول ومن حوالي ©؟ إلى ‎YA‏ نيوكليوتيد في الطول. في نموذج ‎Hal‏ تكون المتوالية لها ‎Yo‏ نيوكليوتيد وتتكون من المتواليات المختارة من ‎.5-١‏ في أحد النماذج ؛ يوفر الاختراع أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ الذي لا ينشط ‎RNase H‏ في سمة أخرى؛ يوفر الاختراع أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ المرتبط بشكل كيميائي مع مع واحد 5 أو أكثر من الأجزاء أو المترافقات التي تحسن نشاط ¢ التوزيع الخلوي ؛ أو الامتصاص الخلوي لأوليجومر في عكس اتجاه النسخ ؛ مثل ؛ على سبيل المثال» جزيء بولي إيثيلين جليكول . في نماذج أخرى ؛ يكون الأوليجومر في عكس اتجاه النسخ مترافقاً مع ببتيد غني بأرجينين مثل متوالية تم اختيارها من المتوالية رقم:؛ ‎FY‏ ‏في سمة ‎gal‏ يوفر الاختراع أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ من ‎٠٠-7١‏ نيوكليوتيد في الطول 0 .قادر على ريط مستهدف مختار لحث تخطي الإكسون في جين ديستروفين بشري؛ حيث يشتمل الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ على متوالية من قواعد التي تم تهجينها بشكل خاص منطقة مستهدفة لإكسون ‎OF‏ مختارة من المجموعة المكونة من ‎H53A(+36+60)‏ ¢ ‎H53A(+30+57)‏ «)30+56+( 538ل « (30+55+)1538 5 ‎(H53A(+33+57)‏ حيث يتم ربط القواعد الخاصة بالأوليجومر مع بنيات حلقية من مورفولينو؛ و حيث يتم ربط البنيات 5 الحلقية من مورفولينو بواسطة روابط بداخل الوحدة مشتملة على فسفور غير مشحون إلى حد كبير ‎TEVA‏
‎A —‏ — تريط نيتروجين مورفولينو من بنية حلقية مع © كربون إكسو سيكليك من بنية حلقية مجاورة. في أحد النماذج ؛ بشكل موجب شحن 9675-9658 من الروابط من الأوليجومر في عكس اتجاه النسخ يتم. في نموذج آخر ؛ تكون الروابط بداخل الوحدة من الأوليجومر في عكس اتجاه النسخ غير مشحونة و وبتم تقاطعها مع روابط التي يتم بشكل موجب شحنها عند رقم هيدروجيني فسيولوجي ؛ حيث يكون العدد الكلي من الروابط المشحونة بشكل موجب بين ؟ و ولا يكون العدد الكلي أكثر من نصف الروابط. في بعض النماذج؛ يشتمل الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ على بنيات حلقية من مورفولينو و روابط حلقية بداخل الوحدات من فوسفورو داي أميدات . في بعض النماذج؛ يكون الأوليجومر في عكس اتجاه النسخ قد تم تعديله باستخدام مجموعة كاتيونية معلقة. في سمة أخرى» يوفر الاختراع أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ ‎Aus‏ يكون للأوليجومر بنية مختارة من 0 المجموعة المكونة من *' إلى ؟' ): مل مج مم ‎Ao oe pl a‏ احم ‎Chan Fis ar‏ ب ب ‎٠ hy oF Su‏ ا ‎Ee ar ea‏ ‎DAT A ER‏ 4 0 قن ‎NY he; hog‏ اا ‎ab ES iE oS‏ - > بر - ‎Lt i, > H‏ ‎Leo Le BS AE‏ ‎hy a MsNT ١ a‏ الح 1 ‎Rosy FER Ea)‏ ‎of‏ ا ‎Re‏ مرا ‎J HE‏ ‎rd NY 0 Cr‏ ‎A 0‏ طق 3 ; ‎A te [OR ; y Ny Mad‏ ب ‎iN‏ مب عي ~ تي : بأ + م ‎pes‏ ‏م ‎I.
A St H - : Ny‏ ‎x “ p Id 7‏ | « صل ‎re‏ ا بح تيد ] 3 ٍْ تلن ار جم .1 , ‎b= Re‏ ‎EN an ~ eh ry‏ ‎J‏ مب 7 ‎Lr he‏ ل ب 1 ‎KY‏ | : ب 1 ‎tie”‏ ا أل ِ كمي ‎oy 0‏ 7 ‎Seach ©‏ 8 شد ال ‎H53A(+36+60)‏ ‎TEVA‏
ا عدم < ‎A Freak 8 Beds‏ مجع ‎a LSE, HEC PNM :‏ اص تاي ا 4 مد متاك ‎ha‏ 5 دا ا ات الست اه ‎ie‏ ‏ا ‎HN Ey Ea‏ 8 { يا “ليو ‎N h‏ 3 الأ ‎a . + “‏ 1 "م 1 رما ‎NE‏ دما هما ا 0 ‎HN N 9 i N‏ ًِ ‎i‏ اي 8 اي ‎bbe 8 TH 3 0‏ 8 : : نا أي م > ‎SX ral‏ لٍِ ل ا جا جد بيس با ‎Ma‏ امي ‎{ol‏ حرا ‎Er ERE ER‏ ‎a 4 J :‏ مي خلا ‎ng i. vs‏ 1 ‎i Ld ]‏ ا ‎nN ve ny‏ - ‎ala +‏ ‎a 1 oO‏ و وب ممم ‎or‏ ير ‎[EEN tals Eo‏ تح يمي و جريب ب كوم 2 2 1 ب" ‎NPY i»‏ ‎J‏ بي = بر ‎A‏ = ا التي يا بك « ‎Sy‏ ‎a LA LA. 0‏ ‎NT‏ ف > ‎As‏ ‎a en i do‏ نا ‎Hedi‏ الت ‎NO‏ ارم 1 الي ار اج با ‎ANE [SE [Ee‏ فيا اقب > ‎TY‏ ‎i of i Ni A - 4‏ ‎ham |e : {‏ ‎a pn HI‏ م م ‎Moa ei‏ الي .1 ‎sett”‏ ‏جين : ‎LT‏ ‏1 : ل ِ- ال 0 5 ‎Sve‏ ‎A A 1‏ > اا 1 لاقي ‎(J ig CT‏ ‎Tg “or [I‏ "8 و ‎ol 1 i‏ 1 ‎“a oe FN :‏ ‎ps La‏ تيل بك أي ار وخ أكون ‎BN‏ 1 نا ‎Man‏ ب 5 5 ِ 2 . ‎HE. 0 H a 0 1 0‏ — بح ‎LT, AS 5 :‏ الجن ‎H A‏ * تا صب ‎N Bi rl ~Y‏ ‎ue ww" Lod‏ } ‎Le bo 2 N‏ ‎AQ‏ يق ‎[AEE A Seay‏ ‎pan Made‏ ل ليمير م ‎oa‏ ‏حي اح ا ‎p ru‏ تار ‎RAE Woo‏ مالاب مح ‎A‏ انان ؟ ‎NT A 4 Lod‏ م 1 ‎N°‏ 1 : 1 5 معد ا © هوج اك لدت ‎SEEN‏ ‏لمم تا مام ‎{ne‏ و تان دس ا ‎RN‏ اص ات شاك نا أن ا 3 0 ب ‎EN‏ ‏1 | 1 الحم ‎ry‏ ا ا تار ارا يس لي ب 7 بك اا ‎Ld i‏ ‎Rw Nt‏ يب ‎I‏ ‎Ldn § 7 "0‏ تاي لما قم اا ‎Me NTR‏ نح يمي 9 حيدم ا ‎a 1 =‏ أ : م ‎eS vo‏ ‎Noy‏ رم ‎Ny Nor‏ ‎LN Td TY 07‏ را مي م 8 ين 4 ‎i‏ ًْ ‎1a‏ ل مل قيلي ‎den‏ ل ‎ate BE A‏ كرويوين م حمسا + يوي الاي ‎x‏ ل ترا ا مر ‎A NOY‏ ~ 5 ‎oh H 1‏ ‎Ly Lg‏ 3 . { ‎da 1 :‏ 410 ا اح ب ‎Sah TC Rey PRE in‏ ‎H . 3 2 iE 1 fa” OQ‏ 2 ‎Lol’‏ مرت تلج م صن كم ب و ® ‎Ld Ld‏ و ‎ot‏ ‎Ld‏ عي يا 0 ‎Ad 1 1 0‏ ‎ar oda 30 oda‏ ‎RE img a web” © fr‏ ل | 1 + 1 6 ‎a A yr) -‏ 2 ‎SNE‏ 41 حاب 1 65 ا ‎J‏ » ‎A “pe‏ 7 ‎ne Af hl‏ ل + ‎Sot A‏ ماين ‎Raa‏ الا 1 "© ‎Spt yr Lom‏ ‎Lx ee ANE Loe we‏ ب ‎Pd { i‏ أي تآ 0 0 ‎bo H |‏ تلد ‎[EEX od ud » add‏ > يبيو ‎De figs” 7 ied”‏ ‎H‏ ب 0 ‎Fah H‏ مرا ريا رايا 2 ‎tod Lod id‏ ون ‎i Sd‏ حيرا ‎N‏ ‎H‏ ا : 1 ‎deo‏ ‎Baek Prd‏ لمع م لمم
-١١-
Brash 6 Brosh B ‏يت‎ ‎C= 1 | ‏ا و‎ CMs ‏ا ا وج‎ Pe ‏اب‎ = ge es ‏دب‎ = ® G7 Ny 9 ‏جا 9 جد‎ ‏حم‎ ry Loar ‏ه!.ه‎ َْ +
Lod HE Nor NY Nye 8 5 H H 1 oe ge Lo oho : A ‏وح 2ه‎ Ao he Ada i Mage TY [LEN] Maght™
LEY . H 5 1 0 1 0 1 a ye PB 1 7 ~ ‏ص « = هي‎ Ny 0 ‏مي‎ ‎gs 1 id [a ne ‏لاي ريح‎ ‏قل‎ Lo io Je
Saab” A $F he
Seal” 0 te Mog” Ma ‏حك‎ ‎Nd | 5 7 4". : ‏و الاب حاب‎ RS
NA 1 ‏؟‎ 07 0 ‏أنه كي‎ ~ wr a do ‏قل‎ slo
Mo ‏ب‎ wn PO ‏و‎ Ma ‏م‎ ‎2 0: : T 1 - 8 N a A oF ‏أ‎ . : ‏إّ‎ > 5 A 7 ‏لح حب ب‎ 2 ‏ل‎ 8 id IE >< 1 ye ‏فيا‎ ‏ا أي ل ا‎ i a ‏ا و‎ io seas” 7 [Ee Mai” ‏ل 0 جد‎ = 1 - . 3 9 H SERN oy
LN ‏جام - "م‎ = ‏مرا دارا “أي الي نب ب‎ a Vs
Ld 0 0 : 3 ‏ما‎ 0
Le 3 0 ‏سا‎ ‎ss ‏مما ف‎ ‏مل مخ يلي جك ليسي‎
H Magi" a MN NY
RNP MENT i oh al oT 2
T 1 ‏ب ما‎ ANP 5 Lara
LW 1 17 0 7 ‏ب‎ ‎i \ Nok H 1 2 > Ti oh Ja ls 8
MNT 0 a ne - Mage TC ‏ب [ يوي‎
GN Loo Le So o ¥ 0 8 + Kad ‏ب‎ ‏بي‎ / Y Y YY ! » ‏يك ال‎ ~ ‏لمجو‎ i ‏ب 8 “ لمع‎ 153)+33+57( ‏لمعيه‎ A ‏لوبط‎ Brom 1 8 1 i 2 9 H 0 ‏لاني . بد خا ال ار نص مرجي‎ ge pr Nes, 4 ‏ب‎ Oh eka RY of “a ‏لج‎ > 2 ~ 6 BN i 1 ‏ب‎ ‎i, HEE ] RN REN Fg 0 0"
RR A So. {be H 8 9 a oF ‏ب‎ ad <3 ed Pal 3 ‏مل‎ ‎= PN ct ‏مي‎ CR ‏ريدي أ‎ Me 0 ‏نا ليميج‎
LEN rs 8 2 5 1 ‏ا‎ A o 8 ‏كل ام م‎ 0 ‏اتنا‎ Noy A ry | Pod HE bi gaat Saga 4 i 8 ‏كيج ل‎ ‏ا لال‎ H 1 ‏ب‎ ‎sags #2 AR ١ Je ** MeN 3 Meg” TQ Ma” aN 0 1 - 7 3 H . - ~ ye ENN EA SEN ae id id Ld 0 ‏حي‎ ~~ Sag” a N : ‏مين‎ 0 Ei ‏صل ل‎ 0 8 1 ‏ص‎ ‎mh kK Red” ‏ا‎ hl So” 0 a. uC en aT ji ; a 0 + ‏ا عا‎ EN Ad a 2 ‏ا‎ ‎- 1 ‏هي الل 2 5 اب‎ ‏اا‎ id ¥ 1 eg py ‏رج‎ ‎o 0 : 7 ‏صل مل ا‎ i wr set op dat
Alea Mish 0 ‏الاح‎ 0 FU ; 8 a A 8 i faa” ©
RoR 5 OM o Ay 8
EES AEE A 5 Ge 1 J 1 ‏ب‎ ~ Y St “a” | LA H 1 7 ‏نا‎ nN ‏ني‎ ‎aia i 8 8 ‏م أ يه‎ ain 8
MeN ‏نام تك‎ pi
RICO ¥) Mi ‏وح‎ 3 ‏ب 58 ناس لان‎ 1 N wd 1 ‏تر اا مير ار‎ . 1 7 LJ Ud 1 ‏ل‎ hil wh 1 I
Mea #0 we
Po a Mah TB Men” © 0 og . i - ~~ NEN NE
I Voi ia Ld 4 ‏م“ بك‎ ra “hy ‏لب‎ ‎3 1 i
Sees & Break 3 Broa ‏ت‎
حيث:
Nia X ‎NH NM x NH : A N N Ps‏ ب ‎T=m®U= { G= (LL C=( I, A=CT ‎NTO NTT NH, ‘NTO NS ‎١ ¢ ¢ /‏ ¢ و ¢ و ‏حيث ‎=A‏ الخصائص الكيميائية الفراغية الخاصة بمركز فسفور لم يتم تحديده. بشكل اختياري؛ يمكن أن يتم استبدال اليوراسيل ‎Lad‏ يتعلق بقواعد ثيميدين. ‏5 في واحدة من السمات؛ فإن المركب في عكس اتجاه النسخ يتم تكوينه من روابط وحدة فرعية داخلية تشتمل على فسفور يتم ‎Leda)‏ مع نيتروجين مورفولينو من وحدة فرعية خاصة ب #' كريون حلقي خارجي من وحدة فرعية مجاورة؛ حيث أن الروابط تكون عبارة عن روابط فسفورو داي اميدات طبقاً للبنية التالية: ‏ ‎z=‏ ‏1 ‏و7 ‎N‏ ‏ ‏0 حيث تكون 71-0 « ‎Ble Pj Z=0‏ عن بيورين أو جزيء مزدوج معتمد على البيريميدين فعال في الارتباط من خلال رابط هيدروجين ‎ald‏ بقاعدة مع قاعدة في بولي نيوكليوتيد وبكون ‎X‏ عبارة عن ألكيل ألكوكسي ¢ ثيو ألكوكسي أو ألكيل أمينوء حيث ‎X=NR2‏ حيث تكون كل ‎R‏ يشكل مستقل عبارة عن هيدروجين أو ميثيل. تكون الروابط الداخلية العليا ‎lly‏ تكون غير مشحونة قد تم تقاطعها مع روابطة التي تم شحنها بشكل موجب عند رقم فسيولوجي؛ حيث أن العدد الكلي من الروباط المشونة بشكل موجب يكون بين ‎١‏ وعند كل العدد الكلى من الروابط بداخل الوحدات. في نموذج توضيح آخر؛ يشتمل المركب على رابطة بداخل الوحدات وتعديلات طرفية كما تم وصفه في الطلب الأمريكي المؤقت رقم ‎١3/118794‏ الذي تم تضمينه هنا كمرجع. ‎TEVA‏ yy
وطبقاً لواحدة م السمات»؛ يوفر الاختراع جزيئات في عكس اتجاه النسخ قادرة على الرابتاط مع مستهدف تم اختياره في ديستروفين بشري من ‎MRNA‏ أولي لحث تخطي الإكسون. في سمة ‎coal‏ يوفر الاختراع اثنين أو أكثر من الأوليجونيوكليوتيدات في عكس اتجاه النسخ والتي يتم استخدامها معاً لحث تخطي منفردٍ أو مزدوج. على سبيل المثال؛ تخطي الإكسون من إكسونات منفردة أو متعددة والذي يمكن تحقيقه من خلال الارتباط مع ‎cpl‏ أو أكثر من جزيئات
أوليجونيوكليوتيد في عكس اتجاه النسخ. في نموذج آخرء يتعلق الاختراع بأوليجونيوكليوتيد في عكس اتجاه النسخ معزول من ‎٠١‏ إلى ‎ov‏ ‏نيوكليوتيد في الطول؛ بما في ذلك على الأقل ‎Yo AY Ve OY ٠١‏ أو ‎Yo‏ من النيوكليوتيدات المتممة المتعاقبة إلى منطقة مستهدفة لإكسون ‎OF‏ تم تحديده من جين ديستروفين في شكل
0 موضع تلدين مختار من المجموعة المكونة من:(36+60+)153 ‎H53A(+30+57)¢‏ ¢ ‎H53A(+30+55) « H53A (+30+56)‏ و(33+57+)1538 حيث يتم أوليجوهجين الأوليجو نيوكليوتيدات بشكل خاص مع موضع التلدين الذي ‎aay‏ تخطي إكسون ‎oF‏ . في أحد النماذج ؛ يكون الأوليجونيوكليوتيد في عكس اتجاه النسخ من ‎٠١0‏ إلى ‎To‏ أو من ‎YA AYO‏ نيوكليوتيد في الطول.
5 في ‎(al daw‏ يتعلق الاختراع أوليجوأوليجونيوكليوتيد في عكس اتجاه النسخ معزول من ‎٠١0‏ إلى ‎٠‏ نيوكليوتيد في الطول؛ بما في ذلك على الأقل ‎٠0 AY Ne OY 0٠١‏ أو ‎YO‏ من النيوكليوتيدات من متوالية نيوكليوتيد مختارة من المجموعة المكونة من: المتوالية رقم: )07 حيث يتم تهجين الأوليجونيوكليوتيد بشكل خاص بمنطقة مستهدفة لإكسون ‎OF‏ من جين ديستروفين و حث تخطي إكسون ‎OF‏ . في أحد النماذج » يكون أوليجوالألويجيو نيوكلوتيد له ‎٠١‏ إلى ‎٠١‏ أو
‎Yo 20‏ إلى ‎YA‏ نيولكيوتيد في الطول. في نموذج آخرء يكون لقواعد الثيميدين في المتوالية رقم ‎5-١‏ ‏به بشكل اختياري يوراسيل ثيميدين. تكون أمثلة متواليات عكس اتجاه النسخ التوضيحية من إكسون ‎OF‏ ؛ مثل تلك التي تم توضيحها فيما يلي:
‎TEVA
— \ _ ‎H53A(+36+60): 5’ ~GTTGCCTCCGGTTCTGAAGGTGTTC-3’‏ (المتوالية رقم )( ‎H53A(+30+57): 5°~-GCCTCCGGTTCTGAAGGTGTTCTTGTAC-3’‏ (المتوالية رقم ؟) ‎H53A(+30+56): 5 -CCTCCGGTTCTGAAGGTGTTCTTGTAC-3" 5‏ (المتوالية رقم ؟) ‎H53A(+30+55): 5’~CTCCGGTTCTGAAGGTGTTCTTGTAC-3’‏ (المتوالية رقم (¢ ‏(المتوالية رقم‎ H53A(+33+57): 5°~GCCTCCGGTTCTGAAGGTGTTCTTG-3’ 0 ¢( في أحد النماذج؛ يهجن الأوليجومر في عكس اتجاه النسخ بشكل خاص موضع تلدين ‎(H53A(+30+56)‏ مثل متوالية رقم :3. في نموذج آخرء يهجن الأوليجومر في عكس اتجاه النسخ يبشكل خاص موضع تلدين (30+57+)153 مثل متوالية رقم : ‎A‏ في نموذج آخر يهجن الأوليجومر في عكس اتجاه النسخ بشكل خاص موضع تلدين ‎(H53A(+30+55)‏ مثل متوالية رقم : 5. في نموذ ‎z‏ آأخرء يهجن ‎١‏ لأوليجومر في عكس اتجاه النسخ يشكل خاص موضع تلدين ‎Jie (H53A(+33+57)‏ متوالية رقم : ©. في نموذج آخرء يهجن الأوليجومر في عكس اتجاه النسخ بشكل خاص موضع تلدين ‎H53A(+36+60)‏ مثل متوالية رقم : ‎.١‏ ‏في بعض ‎oz Sail‏ يحتوي أوليجونيوكليوتيد عكس اتجاه النسخ من الاختراع واحد أو أكثر من التعديلات لتقليل أو منع الانشطار ‎RNase Haale‏ في بعض النماذج؛ لا ينشط أوليجونيوكليوتيد عكس اتجاه النسخ من ا لاختراع ‎.RNase H‏ فى بعض النماذ ‎Jad ‘z‏ أوليجونيوكليوتيد عكس اتجاه النسخ على أصل غير طبيعي. في بعض النماذج؛ فإن ‎shal‏ السكر من الجزء الأصلي من الأوليجونيوكليوتيد يتم استبدالها باستخدام أجزاء غير طبيعية ‎Jie‏ مركبات مروفولينو. في بعض النماذج ؛ فإن أوليجونيوكليوتيدات في عكس اتجاه النسخ بها روابط أوليجونيوكليوتيد داخلية من الصورة الأصلية من أوليجونيوكليوتيد يتم استبدالهاب استخدام روابط
TEVA vg ‏نيوكليوتيد داخلية غير طبيعية مثل فوسفاتاز معدل. تشتمل مركبات فوسفاتاز المعدلة التوضيحية‎ ‏على مركبات ميثيل فوسفونات؛ مويثيل فسفورو ثيوات؛ وفسفورو مروفوليدات وفوسفوفر بيبرازيدات‎ ‏وفوسفسورو أميدات. في بعض النماذج, فإن الأوليجونيوكليوتيد في عكس اتجاه النسخ تكون عبارة‎ ‏عن ؟"”- © - ميثيل -أوليجو ربيونيولكيوتيد أو حمض ببتيد نووي.‎ في بعض النماذج؛ يحتوي أوليجونيوكليوتيد عكس ‎slat)‏ النسخ تعديلات قاعدية أو استبدالات. على سبيل ‎(JU)‏ فإن قواعد نيوكليوتيد معينة يمن اختيارها لزيادة ألفة الارتباط الخاصة بأوليجونيوكليوتيدات في عكس اتجاه النسخ متم وصفها هنا. تشتمل تلك على مركبات بيريميدين بها استبدال عند -9؛ مركبات 1 أزابيريميدين ¢ ‎N=2‏ ؛ ‎N-6‏ و 0-6 تم استبداله باستخدام مركبات بيروين بها استبدال والتي تشتمل على 7- أمينو بروبيل أدينين» = بروبينيل يوراسيل»؛ * 0 - بروبينيل سيتوسين و 7 7- >أي أمينو بيورين. تم توضيح أن استبدالت *- ميثيل سيتوسين توضح أن هناك زيادة في ثبات معقد حمض نووي بمقدار 0,71 -7, م؛ ويمكن أن يتم أوليجوتضمينها في داخل الأوليجو نيوكليوتيدات في عكس اتجاه النسخ هنا. في واحدة من النماذج؛ فإن قاعدة البيريميدية من أوليجوا لأوليجونيولكيوتيد تشتمل على قاعدة بيريميدين =0 بها استبدال حيث يتم اختيار قاعدة بيميدين من مجموعة تتكون من سيتوسين وثيميدين ويوراسيل. في واحدة من النماذج فإن قاعدة البيريميدة التي بها استبدال ل -© يوراسيل تكون عبارة عن ©*- ميثيل سيتوسين. في نموذج ‎SAT‏ يكون هناك قاعدة بيورين واحدة على الأقل من أوليجونيوكليوتيد تشتمل على ‎N-2‏ و ‎N=6‏ من قاعدة بيوري نبها استبدال. في احد النماذج يكون ب ‎N-2‏ و ‎N-6‏ ‏استبدال من قاعدة لابيورين وتكون عبارة عن ‎١7‏ 76- داي أمينو بيورين. في أحد النماذج» يشتمل الأوليجونيوكليوتيد في عكس اتجاه النسخ على واحدة أو أكثر من 0 استبدالات ©- ميثيل سيتوسين بمفردها أو في توليفة مع تعديل ‎AT‏ مثل تعديلات سكر ؟- - ميثيوكسي إيثيل. في نموذج آخرء فإن الأوليجونيوكليوتيد في عكس اتجاه النسخيشتمل على واحد أو أكثر من استبدالات ‎oY‏ = أمينو بيورين لمفردها أو في توليفة مع تعديل ‎AT‏ ‏في بعض النماذج؛ فإن الأوليجونيوكليوتيد في مضاد اتجاه النسخ يتم ربطه مع واحدة أو أكثر من الأجزاء مثل جزيء بولي إيثيلين جليكول أو مترافقات مثل ببتيد مخترق لخلية غنية بأرجينين (على سبيل ‎(PVT JU)‏ والتي تحسن من النشاط والتوزيع الخلوي أو الامتصاص الخلوي من
TEVA
اج \ _ أوليجونيوكليوتيد في عكس اتجاه النسخ. في أحد النماذج التوضيحية؛ فإن بولي ببتيد غني بأرجينين يتم ربطه على نحو تساهمي عند الوحدة البنائية من الطرف ‎N‏ أو الطرف ‎C‏ بالنسبة للطرف ؟ ' أو 0 ' من المركب في عكس اتجاه النسخ. بالإضافة إلى ذلك وفي نموذج توضيح فإن المركب في عكس اتجاه النسخ يتكون من وحدات فرعية من مورفولينو وروابط وحدة فرعية تشتمل على فسفور يتم ربطه مع نيتروجين مورفولينو من الوحدة الفرعية الخاصة بكريون *' إكسو سيكليلك من الوحدة الفرعية المجاورة. في سمة ‎«yal‏ يوفر الاختراع نواقل تعبير التي تتضمن أوليجونيوكليوتيد عكس اتجاه النسخ تم وصفه أعلاه ؛ على سبيل ‎(JU)‏ ¢ أوليجونيوكليوتيد عكس اتجاه النسخ من المتوالية رقم: ‎5-١‏ . في بعض النماذج؛ تم تعديل ناقل التعبير من خلال فيروس تقهقري أو ناقل فيروس غير تقهقري 0 مثل ناقل فيروسي يرتبط بالغدة. في سمة ‎(Al‏ فإن الاختراع يوفر تركيبات صيدلانية التي تشتمل على أوليجونيوكليوتيدات عكس اتجاه النسخ تم وصفها أعلاه ومحلول ملحي والذي يشتلم على محلول منظم من الفوسفات. فى سمة أخرى ؛ يوفر الاختراع جزيئات مضادة لعكس اتجاه النسخ تم اختيارها وتمت تهئتها للمساعدة فى معالجة وقائية أو علاجية من اضطراب جينى يشتمل على جزيء مضاد لعكس اتجاه 5 1 النسخ في صورة مناسبة خاصة بالتوصيل إلى ‎a all‏ . في سمة أخرى؛ فإن الاختراع يوفر طريقة لمعالجة مربيض من مرض جيني حيث أن ه هنا تطفير في التشفير الجيني لبروتين معين وتؤثر في التطفير الذي يتم نشره من خلال تخطي الإكسون ويشتمل على الخطوات التالية: (أ) اختيار جزيء في عكس اتجاه النسخ طبقاً لطرق تم وصفها هنا؛ (ب) إعطاء جزيء لمريض في حاجة للمعالجة. يتناول الاختراع أيضاً استخدام أوليجو نيكليوتيد ات في عكس اتجاه النسخ معزولة من ‎f‏ لاختراع الخاصة بتصنيع دواء خاص بالمعالجة من مرض جيني. لدوشين أو ضصمور عضلي ‎Sul‏ والتي ‎Jat‏ على إعطاء المربض كمية فعالة من أوليجونيوكليوتيد تم تصميمه بشكل مناسب من الاختراع المرتبط مع آفة جينية معينة في المريض
TEVA
_ أ \ _ المذكور. بالإضافة على ذلك؛ فإن الاختراع يوفر طريقة للمعالجة الوقائية لمريض لمنع أو تقليل ضمور عضلي ضمور عضلي لدوشين أو ضمور عضلي لبيكر والتي تشتمل على إعطاء المريض كمية فعالة من أوليجو نيوكليوتيدات في عكس اتجاه النسخ أو تركيبة صيدلانية تشتمل على واحدة أو أكثر من جزيئات بيولوجية. أوليجوأوليجونيوكليوتيد في عكس اتجاه النسخ من الاختراع الحالي؛ يتم التغليف في حاوية مناسبة وتعليمات خاصة بالاستخدام . سوف تكون تلك الأهداف وسمات أخرى مفهومة بشكل كامل عند قراءة الوصف التفصيلى التالى من الاختراع في ارتباط مع الأشكال. شرح مختصر للرسومات 0 الشكل رقم ١أ:‏ يوضح بنية أوليجومر مروفولينو مع رابطة فوسفورو داي أميدات. الشكل رقم ١ب:‏ يوضح الترافق الخاص ببتيد غني بأرجينين وأوليجو مضاد عكس اتجاه النسخ؛ طبقاً لنموذج من الاختراع. الشكل رقم ١ج:‏ يوضح الترافق في الشكل رقم ١ب‏ حيث أن الروابط الأساسية تشتمل على واحدة أو أكثر من المجموعات المشحونة يبشكل موجب. 5 الأشكال ١د-ز:‏ توضح ‎sha‏ وحدة فرعية متكررة من أوليجو نيوكليوتيدات مورفولينو توضيحية تم عليها إطلاق د حتى ز . الشكلان ‎@¥-IY‏ يوضحان مخطط التفاعل الخاص بتحضير رابطة من تخليق طور صلب ومادة حاملة صلبة خاصة بتخلى أوليجومر. الشكل رقم : يوضح مخطط يوضع الأنشطة ذات الصلة الخاصة بأوليجومرات خاصة بتخطي 0 الإكسون الموضح 57 في أرومات عضلية أساسية مزروعة. تم عزل ‎RNA‏ من المعالجات ‎dag‏ العضلية التي تمت معلاجتها ‎La‏ يتعلق بأوليجومرات موضحة التي تم تعريضها لإكسون ‎—o¥‏ خاص بتضخيم ‎RT-PCR‏ ؛ يلى ذلك الاستشراد الكهربي للهلام والحسام الكمى للكثافة.
TEVA
تم تخطيط البيانات فى شكل النسبة المئوية لتخطى الإكسون التي تم اختبارها بواسطة ‎PCR‏ ؛ أي؛ شدة النطاق الخاصة ببنية تخطي الإكسون بالنسبة لمنتج ‎PCR‏ بالطول الكامل. الشكل رقم ؛: يوضح مخطط يوضح الأنشطة ذات الصلة من أوليجومرات مضادة للانتساخ توضيحية خاصة بحث تخطي إكسون 57 في المزرعة التي تم زراعها من ‎WIA‏ عضلية مخططة. تم عزل ‎RNA‏ من خلايا عضلة مخططة وتمت لمعلاجة باستخدام أوليجومرات موضحة وتم تعريضها غلى إكسون = ‎oF‏ الخاص بتضخيم ‎RT-PCR‏ المذكور ‎bg‏ ذلك الاستشراد الكهربي للجل وحساب شدة النطاق . تم تخطيط البيانات ي شكل تخطي الإكسون 96 كما تم اختبار ذلك بواسطة ‎PCR‏ ؛ أي؛ شدة النطاق من منتج تخطي الإكسون بالنسبة للطول الكامل من منتج ‎PCR‏ ‏0 الشكلان ‎fo‏ : يوضحات مخطات توضح الأنشطة ذات الصلة من أوليجومرات في عكس اتجاه النسخ من تخطي الإكسون ‎oF‏ في أرومات عضلية أساسية. تم عزل ‎RNA‏ الأساسية من أرومات عضلية تمت معالجتها بااستخدام أوليجومارت ‎lly‏ تم تعريضها إلى إكسون ‎oF‏ خاص بتضخيم ‎RT-PCR‏ شبكي معين؛ يلى ذلك الاستشراد الكهربي وكثافة شدة النطاق . تم تخطيط البيانات في شكل تخطي ‎J‏ لإكسون % كما تم قياس ذلك بواسطة 5 008 « أين شدة النطاق من منتج تخطي الإكسون بالنسبة لمنتج ‎PCR‏ كامل الطول. الوصف التفصيلى: تتعلق نماذج الاختراع الحالي بتحسين مركبات في عكس اتجاه النسط وطرق لاستخدامها والتي تم تحديدها بصفة خاصة لحث تخطي الإكسون في جين ديستروفين بشري. يلعب الديستروفين دوراً مهماً في وظيفة لاعضلة والعديد من الأمراض المرتبطة بالعضلة المتعددة والتي تم تميزها بواسطة صور متطفرة من الجين المذكور . وبالتالى وفى نماذج معينة فإن المركبات فى عكس اتجاه النسخ المحسنة التي تم وصفها هنا تحث تخطي ا لإكسون من الصور المتطفرة من جين ديستروفين بشري ‎Jie‏ جينات ديستروفين الموجودة في الضمور العضلي لدوشين ‎(D M D)‏ والضمور العضلي لبيكر . ‎TEVA‏
VA
نتيجة حالات انشطار ‎MRNA‏ ظاهرة تم التسبب فيها بواسطة تطفيرات في جينات ديستروفين إما تم التعبير عنها من بروتين ديستروفين معيب أو تم التعبير عنها في ديستروفين غير قابل للقياس إطلاقاً أو حالة التي تؤدي إلى صور متغيرة من الضمور العضلي. لكي يتم معالجة تلك الحالة؛ فإن المركبات في عكس اتجاه النسخ من الاختراع الحالي يتم تهجينها لكي يتم اختيار مناطق من غلم معالجة بشكل أولي من جين ديستروفين بشري متطفر والذي يحث تخطي الإكسون والريط التمايزي في ‎MRNA‏ من ديستروفين مرتبط ‎Allg‏ السماح لخلايا العضلة أن تنمو في ناتج انتساخ ‎MRNA‏ الذي يشفر بروتين ديستروفين وظيفي. في نماذج معينة؛ فإن بروتين ديستروفين لاناتج لا يكون بالضرورة من الصورة "غير ‎Malla)‏ من ديستروفين؛ ولكين يمكن أن يتم قطعه أو يكون من صورة وظيفية أو شبه وظيفية من ديستروفين. 0 وعن طريق زيادة مستويات بروتين ديستروفين وظيفي في الخلايا العضلية؛ فإن تلك النماذج ونماذج مرتبطة بها يمكن أن تكو مفيدة في الوقاية من ومعالجة الضمور العضلي وعلى نحو خاص تلك التي من صور خاصة بالضمور العضلي مثل ‎DMD‏ و ‎BMD‏ والتي يتم تمييزها بواسطة التعبير عن بروتينات ديستروفين فعالة ‎dam‏ ارتباط ‎MRNA‏ غير مرتبط. توفر أوليجومرات خاصة هنا لتوفير استهداف محسن أو استهداف خاص بالديستروفين بالمقارنة 5 بأوليجومرات في الاستخدام وبالتالي تعرض ‎Whe‏ هامة ومزايا مفيدة بالمقارنة بطرق بديلة من صور معالجة ذات صلة بالضمور العضلي. وبالتالي؛ يتعلق الاختراع بأوليجومر في عكس اتجاه النسخ ‎٠-7١‏ من النيوكليوتيدات في الطول التي تكون قادرة على الارتباط مع مستهدف تم اختياره لحث تخطي الإكسون في جين ديستورفين حيث يشتمل أوليجومر في عكس اتجاه النسخ من لقواعد التي تتم تهجينها بشكل خاص مع إكسون ‎FV 20‏ من من منطقة مستهدفة تم اختيارها من مجموعة تتكون من: ‎H53A(+36+60)‏ «¢ ‎H53A(+33+57) 5 HS3A(+30+55) « H53A (+30+56)« H53A(+30+57)‏ حيث أن القواد من الأوليجومر تكون مرتبطة مع بنيات حلقية من مورفولينيو وحيث أن البنيات الحلقية من مورفولينو يتم ‎ley)‏ من خلال روابط وحدة فرعية داخلية مشتملة على الفسفور تريط نيتروجين فسفورولينو من بنية حلقة مع كريون خارج الحلقة © ” من بنية حلقة مجاورة. في أحد النماذج ‏5 فإن الأوليجومر في عكس اتجاه النسخ يشتمل على متوالية من القواعد التي تم تحديدها في شكل ‎TEVA
‎q —_‏ \ _ المتواليات من ‎.-١‏ في نموذج آخرء فإن الأوليجومر في عكس اتجاه النسخ يكون من حوالي ‎٠١‏ ‏إلى حوالي ‎٠١‏ نيوكليوتيد في الطول أو حوالي 75 إلى ‎YA‏ نيوكليوتيد في الطول. في نموذج آخر أيضاً فإن المتوالية تكون عبارة عن ‎YO‏ نيوكليوتيد وتتكون من متوالية تم اختياراه من المتوالية رقم إ-ه,
‏5 يتعلق الاختراع أيضاً بأوليجونيوكليوتيدات من ‎٠١‏ إلى ‎٠٠‏ نيوكليوتيد في الطول وتشتمل على الأقل على ‎٠١‏ و5١‏ و7١‏ و١٠‏ أو أكثر من النيوكليوتيدات المحافظة المتممة لمنطقة مستهدفة من إكسون ‎OF‏ من جين ديستروفين الذي تم تحديده في شكل موضع تلدين تم اختياره من مجموعة تتكون من ‎H53(+36+60)‏ و(153830+57 30+56 53لا و
‎H53A(+33+57) H53A(+30+55)‏ . تكون أوليجونيوكليوتيدات أخرى في عكس اتجاه 0 النسخ من الاختراع الحالي عبارة عن ‎٠١0‏ إلى ‎٠٠‏ نيوكليوتيد في الطول ويشتمل على الأقل على ‎٠0 IY Ve VY ٠‏ أو أكثر من الأوليجونيوكليوتيدات المترابطة من المتوالية رقم ‎.5-١‏ في بعض النماذج؛ فإن قواعد الثيميدين في المتواليات ‎5-١‏ تكون بشكل اختياري عبارة عن يوراسيل. تم وضع الأوليجومرات في عكس اتجاه النسخ التوضيحية هنا فيما يلي: ‎H53A(+36+60):‏ ‎5°-GTTGCCTCCGGTTCTGAAGGTGTTC-3’‏ (لمتوالية رقم ‎)١‏ ‎H53A(+30+57): ~~ 5-60061006611061686616116116186- 15‏ (المتوالية رقم ؟) ‎H53A(+30+56): 5’-CCTCCGGTTCTGAAGGTGTTCTTGTAC-3’‏ (المتوالية رقم ؟) ‎H53A(+30+55): 5-CTCCGGTTCTGAAGGTGTTCTTGTAC-3’‏ (المتوالية 0 03 ¢( ‎H53A(+33+57): 5'-GCCTCCGGTTCTGAAGGTGTTCTTG-3‏ (المتوالية رقم °( ‎TEVA‏
Cy. ‏وما لم يتم تحديد خلاف ذلك؛ فإن كل التقنينات والمصطلحات التقنية التي تم استخدامها هنا يكون‎ ‏لها نفس المعاني المفهومة لذوي المهارة العادية في المجال الذي يتعلق به الاختراع الحالي. على‎ ‏الرغم أن أي من الطرق والمواد المشابهة أو المكافئة لتكل التي ت وصها هنا يمكن استخدامها في‎ ‏الممارسة أو الاختبار للاختراع الحالي؛ فإن الطرق المفضلة والمواد قد تم وصفها هنا. لأغراض‎ ‏الاختراع الحالي؛ فإن المصطلحات التالية تم تعريفها كما يلي.‎ 5 يشير مصطلح "حوالي" إلى كمية ؛ مستوي؛ قيمة أو عدد تكرار ونسبة مئوية أو ‎cana cand‏ مقدار » وزن أو طول الذي يتنوع والذي يكون من ١ت‏ مت ‎Ya‏ مت يدف كي اكتف ىك " أو 961 إلى الكمية؛ المستوي؛ القيمة؛ العدد ؛ التكرار؛ النسبة لامئوية؛ البعد الجم؛ والكمية والوزن أو الطول المرجعي. 0 تشير المصطلحات ‎Jai‏ و "على نحو مكتمل" إلى بولي نيوكليوتيدات (أي؛ متوالية من النيوكليوتيد) التي ترتبط من خلال إزدواج القاعدة. على سبيل المثال؛ فإن المتوالية ' ‎T-G-A‏ ‏(:57-3)" تكون متممة للمتوالية ' )57-37( 8/-1-0". يمكن أن يكون المتمم "جزئي" فيه بعض الأحماض النووية والقواعد التي تم تطابقها طبقاً لقواعد متزاوجة أساسية. أو يمكن أن تكون "كاملة' أو 'إجمالية" متممة بين الأحماض النووية. تكون درجة التتميم بين جدائل الحمض النووي لها تأثيرات كبيرة على الفعالية والمقاومة الخاصة بالتجنين بين جدائل الحمض النووي. بينما يكون هناك تتميم في الغالب مطلوباً ويكن أن تشتمل بعض النماذج على واحدة أو اكثر ويفضل 1 © ‎ct‏ ؛ ١ء‏ أو ‎١‏ من عدم التطابق بالنسبة لبعض النماذج التي يمكن أن يتم تضمينها مع واحدة أو أكثر ولكن يفضل 7 0 4؛ ‎oF oF‏ أو ‎١‏ من صور عدم التطابق بالنسبة ل مستهدف ‎RNA‏ ‏تكون الصور المتنوعة عند أي موضع في مدى الأوليجومر قد تم تضمينها. في نماذج معينة تكون 0 الصور المتنوعة من المتوالية قريبة من الأطراف أوليجوالخاصتب الأوليجومر والذي ييفضل بصفة ‎dale‏ أن تكون تغييرات في الجزءِ السفلي؛ وإذا كان ذلك موجوداً فتكون بشكل نمطي في حوالي 6؛ ‎(YF of co‏ أو ‎١‏ نيوكليوتيد من الطرف *' و/أو “. يتم استخدام ‎any‏ اختراق الخلية" و ‎Ally" CPP"‏ يتم استخدامها على نحو تبادلي وتشير على ببتيدات اختراق خلية كاتيونية وايضاً يطلق عليها بببتيدات نقالة أو ببتيدات حاملة أو نطاقات 5 إرسال ببتيد. يكون للببتيدات التي تم توضيحها هنا قدرة خاصة بحث اختراق الخلية بنسبة ‎961٠٠٠0‏
TEVA yy ‏من الخلايا الخاصة بمجموعة مزرعة خلية معين وتسمح بالنقل الموضعي بجزيء كبير بداخل‎ ‏المفضل عبارة عن‎ CPP ‏عند الإعطاء المجموعي. يكون نموذج‎ all ‏نسيج متعدد في الكائن‎ ‏ببتيد غني بالأرجينين كما تم وصفه على نحو إضافي فيما يلي.‎ ‏يتم استخدام المصطلحات "أوليجوأوليجوم في عكس اتجاه النسخ” و "مركب في عكس اتجاه النسخ"‎ ‏و أوليجو ببتيد "في عكس اتجاه النسخ” على نحو تبادلي هنا لكي تشير إلى متوالية من وحدات‎ 5 ‏فرعية حلقية ¢ تحمل كل منها جزيء مزدوج مع قاعدة مرتبطة من خلال روابط وحدة فرعية والتي‎ ‏تسمح بأجزاء زوج قاعدة لكي يتم التهجين إلى متوالية مستهدفة في حمض نووي (على نحو نمطي‎ ‏؛ لكي يتم تشكيل معقد : حمض نووي‎ Watson—Crick ‏بواسطة زوج قاعدة من‎ (RNA ‏:أوليجومر غير متجانس بداخل متوالية مستهدفة. تكون الوحدات الفرعية الحلقية معتمدة على‎ ‏أو في نموذج مفضل؛ مجموعة مورفولينيو (انظرء الوصف الخاص‎ HAT ‏ربوز أو سكر بنتوز‎ 0 ‏بأوليجومرات مورفولينو فيما يلي). يمكن أن يكون للأوليجومر تتتميم متوالية دقيقة أو متوالية قريبة‎ ‏لمتوالية مستهدفة؛ والتغييرات في المتوالية لاقريبة عند الطرف الخاص بالأوليجومر والتي تكون‎ ‏الداخلي.‎ all ‏مفضلة للتغييرات في‎ dale ‏بصفة‎ ‏أو يتبط‎ MRNA ‏يمكن تصميم الأوليجومر في عكس اتجاه النسخ بحي يعيق أو يثبط ترجمة‎ ‏بشكل أولي طبيعي ويمكن أن يتم 'توجيهه إلى" مستهدف في مقابل" متوالية‎ MRNA ‏معالجة ريط‎ 5 ‏يتم تهجينها. تكون المتوالية المستهدفة بشكل نمطي عبارة عن منطقة تشتمل على‎ Ally ‏مستهدفة‎ ‎MRNA ‏؛ أوليجومر كابت للترجمة؛ أو موضع ربط خاصة ب‎ MRNA ‏من‎ AUG ‏كودون بداية‎ ‏معالجة أولية وأوليجومر كابت للربط (550). يمكن أن تشتمل متوالية مستهدف من الموضع على‎ ‏زوج قاعدة أسفل من رابطة مستقبل خاصة‎ Yo ‏إلى حوالي‎ ١ ‏لها الطرف © ' من‎ MRNA ‏متوالية‎ ‏تكون المتوالية المستهدفة المفضلة عبارة عن أي منطقة‎ MRNA ‏بالرابط في معالج بشكل أولي‎ 0 ‏بشكل أولي والتي تشتمل على موضع رابط أو يتم تضمينها بشكل كامل في‎ dallas MRNA ‏من‎ ‏يكون الأوليجومر‎ mile ‏متوالية مشفرة لإكسون أو يتم تمديدها فيما يتعلق بمرسل رابط أو موضع‎ ‏مستهدف ذي صلة بيولوجي مثل البروتين؛ الفيروس؛ أو‎ "alias ‏عبارة عن 'مستهدف‎ dale ‏بصفة‎ ‏البكتريا عندما يتم استهداف في مقابل الحمض النووي من المستهدف في طريقة تم وصفها أعلاه.‎
TEVA
١ تشير المصطلحات "أوليجومر مروفولينو" أو ‎"PMO"‏ (فوسفور أميدات - أو فسفور أميدات مورفولينو أوليجومر) إلى نظير أوليجونيكليوتيد مكون من بنيات فرعية من مورفولينو؛ حيث ‎(I)‏ يتم ربط البنيات معا بواسطة روابط محتوية على الفسفور واحدة إلى ثلاث ذرات مع ويفضل أثنين من الذرات في الطول؛ يفضل وحدات غير مشحونة أو وحدات كاتيونية أو محدات نيتروجين مورفولينو من واحدة أو وحدة فرعية خاصة بكربون حلقي خارجي © ” من ‎sang‏ فرعية 5 ‎(if)‏ وكل منها عبارة عن حلقة مورفولينو تحمل بيورين أو جزيء مزدوج من بيريميدن أو جزيء فعال خاص بالارتباط بواسطة قاعدة رابطة هيدروجينية من هيدروكربون إلى قاعدة في البولي نيوكليوتيد. انظرء على سبيل المثال؛ البنية في الشكل رقم ١أ؛‏ والتي تعرض فوسفورو داي أميدات من النوع الرابط. يمكن استخدام ‎dnd‏ حلقية رابطة من مورفولينو' على نحو تبادلي باستخدام المصطلح ‎Bang‏ فرعية من 0 مورفولينو". يمكن أن يتم تحضير الصور المتغيرة الخاصة بالرابطة المذكورة بمجرد أنها لا تتفاعل في الارتباط أو النشاط. على سبيل المثال؛ فإن الأكسجين يتم ربطه مع الفسفور ويمكن أن يتم استبداله باستخدام فوسفور (ثيو فوسفور داي أميدات). يمكن استبدال © ” أكسجين باستخدام أمينو أو أمينو به استبدال من ألكيل. تكون ذرة النيتروجين المفضلة المعلقة قد تم ربطها مع الفسفور ويمكن أن لا يكون بها استبدال أو يكون بها استبدال أحادي أو يكون بها استبدال ثنائي باستخدام 5 (مستبدلة بشكل اختياري) مع ألكيل صغير.. يكون جزءٍ زوج بيورين بيريميدين بشكل نمطي عبارة عن أدينين وسيتوسين وجوانين» ويوراسيل؛ ثيميدين أو أيونوسين. تم الوصف التفصيلي للتخليق وخصائص الالترباط الخاصة بأوليجومرات مورفولين في طلبات البراءات الأمريكية أرقام مأاتلمكحتف ف تم لمارف .أ لءم, 1117م ااا الالح ‎VIET‏ ي// ا دف 2 147 1ه و 1477/17 (روابط كاتيونية)؛ تم تضمينها كلها هنا 0 كمرجع. تم الوصف التفصيلي لمجموعات رابطة معدلة بداخل الوحدات والمجموعات الطرفية في ‎PCT‏ من الطلب الأمريكي رقم 74854849/7011» ونشرة الطلب الدولي رقم ‎Vout AMY NY‏ والتي تم تضمينها هنا كمرجع بكاملها. يمكن أن يشير 'وحدة فرعية لحمض أمينو" أو 'وحدة بنائية لحمض أميني” إلى ‎Bang‏ حمض أمينية ‎(-CO-CHR-NH-) - »‏ أو 8 - أو من الوحدة البنائية للحمض الأميني (على سبيل المثال؛
TEVA
_ \ Ad —_
‎((CO-(CH2)NCHR-NH-‏ حيث تكون ‎R‏ عبارة عن سلسلة جانبية ‎Allg)‏ يمكن أن تشتمل
‏على هيدروجين) وتكون ‎٠‏ من ‎١‏ إلى ‎١‏ ويفضل من ‎١‏ إلى 4.
‏يشير المصطلح "حمض أميني يحدث بشكل طبيعي" إلى حمض أميني موجود في بروتينات
‏موجودة في الطبيعة. يشير المصطلح "أحماض أمينية غير طبيعية' إلى تلك الأحماض التي لا
‏5 تكون موجودة في البروتينات الموجودة في الطبيعة وتشتمل الأمثلة على بيتا- ألانين (8ا8/-م)؛
‏حمض ‎-١‏ أمينو هيسكانوبك ‎(AhX)‏ و +7- حمض أمينو هيكسانوبك ‎(AhX)‏ وحمض ‎-١‏ أمينو
‏بيتانويك.
‏يشير 'إكسون" إلى جزءِ محدد من جزءِ محدد من حمض نووي والذي يشفر بروتين أو متوالية
‏حمض نووي التي تم تمثلها في صورة طبيعية من جزيء ‎RNA‏ بعد أي أجزاء من ‎RNA‏ معالج 0 بشكل مسبق أو من خلال الارتباط. يمكن أن يكون جزيء ‎RNA‏ عبارة عن ‎RNA‏ مرسل
‎(m RNA)‏ أو صورة وظيفية من ‎RNA‏ غير مشفر 3 مقل ‎rRNA‏ أو ‎tRNA‏ . يكون لجين
‏ديستروفين بشري حوالي ‎VA‏ إكسون.
‏يشير "إنترون" إلى منطقة حمض نووي (بداخل الجين) والتي لا تتم ترجمتها في البروتين. يكون
‏الإنترون عبارة عن ‎oda‏ غير مشفر والذي يتم انتساخه في ناتج انتساخ ‎MRNA) MRNA‏ أوني) ويبعد ذلك الإزاحة من خلال الريط أثناء تشكيل ‎RNA‏ ناضج.
‏يشير مصطلح "كمية فعالة' أو "كمية فعالة بشكل علاجي" إلى كمية من المركب العلايج مثل
‏الأوليجومر في عكس اتجاه النسخ والذي يتم إعطاؤه لخاضع ثديي إما في شكل جرعة منفردة أو
‏جزءِ من سلسلة من الجرعات؛ والتي تكون فعالة لإنتاج التأثير العلاجي المطلوب. بالنسبة
‏لأوليجومر في عكس اتجاه النسخ؛ فإن ذلك يكون ‎Yad‏ بشكل نمطي حول تثبيط الترجمة أو 0 المعالجة الخاصة بالريط الطبيعى من متوالية مستهدفة مختارة.
‏يشير 'تخطي الإكسون" بصفة عامة إلى عملية تتم فيها إزالة الإكسون أو جزءٍ منه بالكامل من
‎RNA‏ لم تتم معالجتها بشكل أولي ويالتالي يتم استثناؤه من ‎RNA‏ الناضج مثل ‎MRNA‏ الناضج
‏والذي تتم ترجمته في البروتين. وبالتالي فإن ‎eda‏ من البروتين يتم تشفيره خلال ذلك من خلال
‏تخطي الإكسون والذي لا يكون موجوداً في صورة تم التعبير عنها من البروتين ولعى نحو نمطي
‎TEVA
١ ‏إنشاء صورة وظيفية مستمرة من البروتين. في نماذج معينة؛ فإن الإكسون يتم تخطيه ويكون عبارة‎ ‏عن إكسون غير منتظم في جين الديستروفين البشري والذي يمكن أن يشتم لعلى تطفيرات أو أي‎ ‏تغييرات أخرى في المتوالية خلاف الربط غير المنتظم. في نماذج معينة؛ فإن الإكسون يتم تخطيه‎ ‏من جين‎ OF ‏من جين الديستروفين وخلال الإكسون‎ 75-١ ‏في أي واحد أو أكثر من إكسونات‎ ‏الديستروفين البشري الذي يكون مفضلاً.‎ 5 ‏يكون "الديستروفين" عبارة عن بروتين سيتوبلازمي له شبه قضيب وجزءٍ هام من معقد البروتين‎ ‏الذي يربط الهيكل الخلوي من ألياف العضلة مع قالب خارج الخلية محيطة بها من خلال غشاء‎ ‏خلوي. يشتمل الديستروفين على نطاقات وظيفية متعددة. على سبيل المثال؛ فإن الديستروفين يشتلم‎ ‏حمض أميني ونطاق ضيب مركزي عند حوالي‎ "0-١ ‏على نطاق رابط لأكتين عند حوالي ؛‎ ‏أحماض أمينية ”40-7 0 32. يكون النطاق المركزي الأكبر قد تم تشكيله بواسطة ؛ ؟ عناصر‎ 0 ‏حمض أمينيء والتي لها تشابه عند ألفا-‎ ٠١ ‏حلزونية ثلاثية مشابهة لاسبكتيرين من حوالي‎ ‏أجزاء غير مكررة من‎ Ll ‏أكتينين وسبيكترين. يتم تقاطع تلك التكررات بشكل نمطي من خلال‎ ‏بواسطة‎ ١6و‎ ١5 ‏يطلق عليها أيضاً مناطق مفصلية. يتم فصل الوحدات المتكررة‎ Ally ‏البرولين‎ ‏حمض أميني والتي تظهر لتوفير موضع أساسي خاص بانشطار حال للبروتين من‎ VA ‏تمديد‎ ‏تشتمل واحدة من التكرارات‎ .9678-1٠١ ‏ديستروفين. تكون الهوية الين معظم الأمداء المتكررة من‎ 5 ١7 ‏بواسطة‎ Vso) ‏و ؟. يتم تشكيل كل من حلزونات ألفا‎ YO) ‏على ثلاثة من حلزونات ألفا:‎ ‏لفات حلزونية ويمكن أن يتم التفاعل في شكل أنابيب ملتفة خلال واجهة غير آلفة للماء. يكون‎ ‏لألفا- حلزوني ؟ بنية معقدة ويتم تشكيلها من خلال الأجزاء الخاصة بأريعة و ست وحدات‎ ‏حلزونية وبتم فصلها بواسطة وحدة بنائية جلايسين أو برولين. يتم تشفير كل وحدة متكررة بواسطة‎ ؛١7 ‏اثنين من الإكسونات وعلى نحو نمطي يتم تفسيرها من خلال الإنترون بين الأحماض الأمينية‎ 0 ‏تم اكتشاف الإنترون الآخر عند مواضع مختلفة من‎ Y= ‏أول من حلزون ألفا‎ sha ‏في‎ EA ‏نحو خاص يتم تشتتيه على الحلزون -3. يشتمل ديستورفين أيضاً على نطاق غني‎ leg hall ‏والتي تشتمل على جزءِ غني بالسيستين‎ (TFT 00-7٠ ‏بالسيستين عند حوالي اأحماض الأمينية‎ ‏وحدة سيسيتن في 7880 حمض أميني) يوضح التشابه الخاص بنطاق الطرف © من‎ ٠١ ‏(أي؛‎ ‎TEVA yo ‏القالب اللزج (ديكتوسيتيليوم داي سكوديوم) ألفا أكتينين. يكون النطاق الطرفي من الكريوكسي عند‎ .31085- TY ‏حوالي الأحماض الأمينية من‎ ‏يكون طرف الأمين من ديستروفين مرتبطاً مع © - أكتين طرف كريوكسي يرتبط بمعقد بروتين‎ ‏على مركبات‎ DAPC ‏عند غمد الليف الخلوي. تشتمل‎ (DAPC) ‏يرتبط بديستروفين‎ ‏ديستروجليكان» ساكروجليكان وإنترجرينات وكافيولين وتطفيرات في أي من تلك المكونات تم‎ 5 ‏غير مستقبل عندما‎ DAPC ‏التسبب بها من خلال ضمور عضلي موروث ذاتي في الجسد. يكون‎ ‏والذي ينتج عنه تقليل في مستويات بروتين عضو ويدوره يؤدي إلى تلف‎ (Lala ‏يكون الديستروفين‎ ‏الاليف المتطور والتسرب في الغشاء. في العدد من صور الضمور العضلي؛ مثل الضمور‎ ‏تنتج الخلايا العضلية وتقوم بتغيير‎ (BMD) ‏والضمور العضلي لبيكر‎ (DMD) ‏العضلي لدوشين‎ ‏الصور الناقصة الوظيفية من ديستروفين أو خلاف ديستروفين على الإطلاق والتي تكون بشكل‎ 0 ‏أساسي نتيجة تطفيرات في متوالية الجين والتي تؤدي إلى رابط غير صحيح. يفتقر التعبير المفرط‎ ‏السائد عن بروتين ديستورفين فعال أو الافتقار الكامل لديستروفين أو بروتين مشابه لديستروفين إلى‎ ‏التطور السريع أو الضمور العصبي كما تمت ملاحظته أعلاه. في هذا السياق فإن 'بروتين‎ ‏ديستروفين" يمكن تهيئته من خلال صور خاصة بديستروفين والذي يتم إنتاجه في خاضعين‎ ‏أو 81/0 كما هو معروف في المجال أو من خلال وجود ديستروفين قابل‎ DMD ‏معينين مع‎ 5 ‏للاكتشاف.‎ ‏وكما تم استخدامه هنا فإن مصطلحات 'وظيفة' و 'وظيفي" وما شابه ذلك تشير على وظيفة‎ ‏بيلووجية أو إنزيمية أو علاجية.‎ ‏يشير مصطلح بروتين ديستروفين 'وظيفي" بصفة عامة إلى بروتين ديستروفين له نشاط بيولوجي‎ ‏كاف لتقليل التحلل الخاص بتطور نسيج العضلة والتي تكون خصائص الضمور العضلي؛ نمطية‎ 0 ‏بالمقارنة مع صور متغيرة أو 'معينبة” من بروتين ديستروفين والذي يكون موجوداً في خاضعين‎ ‏أو 81/10. في نماذج معينة فإن فإن بروتين الديستروفين الوظيفي يمكن‎ DMD ‏معينين مصابين ب‎ ‏أو‎ 9640 96/6 96760 9616 Foon 9646 9676 96750 96٠0 ‏أن يكون به حوالي‎ ‏(التي تشتمل على كل الأعداد بينها) من المعول أو النشاط البيولوجي في الكائن الحي من‎ + ‏لتقنيات روتينية في المجال. وكأحد الأمثلة‎ lad ‏«ديستروفين من النوع غير المعالج؛ كما تم قياسه‎ 5
TEVA
Cy ‏فإن النشاط المرتبط بديستروفين في العضلة تتم زراته في المعمل وبمكن أن يتم قياسه طبقاً لحجم‎ ‏عدم التنظيم) ؛ النشاط المضاد‎ of) ‏الأنبوب العضلي العضلي؛ يكون تنظيم الألياف العضلي‎
Brown et al, (Judi ‏ومجموعات طارئة من مستقبلات أسيتي كولين (انظرء؛ على سبيل‎ ‏تكون نماذج الحيوانات عبارة عن‎ (Journal of Cell Science. 112:209-216, 9 ‏مصادر مفيدة خاصة بدراسة مسببات المرض وتوفير وسائل خاصة باختبار أنشطة تعتمد على‎ 5 ‏هي فئران‎ DMD ‏الديستروفين.يكون هناك اثنين من أكثر النماذج الحيوانية المستخدمة لبحوث‎ ‏والذي تكون كل منها سالبة‎ ((GRMD) ‏والضمور العضلي المرتجع لكل بالصيد الذهبي‎ 7
Collins & Morgan, Int J Exp Pathol 84: ‏بالنسبة لديستروفين (انظرء على سبيل المثالء‎ ‏يمكن استخدام تلك النماذج ونماذج أخرى لقياس الفعالية الوظيفية الخاصة‎ (165-172, 2003 ‏ببروتينات ديستروفين متعددة. تم أيضاً تضمين صور مقطوعة من ديستروفين مثل تلك لاصور‎ 0 ‏التي يتم إنتجاها من خلال بعض مركبات مضادة للنسخ خاصة بتخطي الإكسون من الاختراع‎ ‏الحالي.‎ ‏يشير مصطلح "معزول" إلى مادة تكون خالية إلى حد كبير أو بشكل أساسي من المكونات‎ ‏يمكن أن يشير "بولي نيولكيوتيد‎ JE ‏الموجودة بشكل طبيعي في الحالة الأساسية. على سبيل‎ ‏معزول" كما تم استخدامه هنا إلى بولي نيولكيوتيد الذي تمت تنقيته أو تمت إزالته من المتواليات‎ 5 ‏تمت إزالتها من‎ lly DNA ‏والتي تحيطه به في الحالة الطبيعية؛ على سبيل المثال»؛ شظية‎ ‏المتواليات التي تقوم مجاورة بشكل طبيعي إلى الشظية.‎ ‏وكما تم استخدامه هناء يشير مصطلح "طول كاف" إلى أوليجونيوكليوتيد مضاد للنسخ الذي يكون‎ ‏؛ قواعد نيكلو متجاورة في ديستروفين‎ Vo -8 ‏على لاأقل؛ وعلى نحو نمطي من‎ A ‏متمماً ل‎ ‏أولي. في بعض النماذج؛ تشتمل الصورة التي في عكس اتجاه النسخ التي‎ MRNA ‏مستهدف من‎ 20 ‏أو أكثر من قواعد‎ Ve وأ١‎ 17 AY OY Oe dh ‏لها طول مناسب على الأقل على‎ ‏أولي . في نماذج أخرى تشتمل الصورة التي‎ MRNA ‏نيكليو متجاورة في ديستروفين مستهدف من‎ ل7١ ‏انف ذف كح‎ OT ‏في عكس اتجاه النسخ التي لها طول مناسب على الأقل على‎ ‏أولي . يكون‎ MRNA ‏قواعد نيكليو متجاورة في ديستروفين مستهدف من‎ Yo ‏أو‎ (YE (YY (YY ‏لأوليجونيوكليوتيد في عكس اتجاه النسخ طول كامل على الأقل عدد عند الحد الأدنى له من‎ 5
TEVA
طلا نيوكليوتيد بحيث يكون قادراً على التهجين بشكل خاص ‎Lig)‏ إكسون ‎OF‏ يفضل أن يكون أوليجونيوكليوتيد بطول كامل من حوالي ‎٠١‏ إلى حوالي ‎on‏ نيوكليوتيد في الطول؛ بما في ذلك أوليجوأوليجية نيوكليوتيد من ب ل ‎AY‏ جف كاد مف كاك الأاض عم كك ‎YY Ye‏ كك ‎(YY‏ كك مع كك انض كك كنك كك اك كك مك كك ‎FA FA FY‏ و £0 أو أكثر من نيوكليوتيد. في أحد النماذج » يكون أوليجونيوكليوتيد بطول كامل من ‎٠١‏ إلى حوالي ‎٠‏ ؟ نيوكليوتيد في الطول. في نموذج ‎HAT‏ ؛ يكون أوليجونيوكليوتيد بطول كامل من ‎١٠‏ ‏إلى حوالي ‎Yo‏ نيوكليوتيد في الطول. في نموذج آخر أيضاً ؛ يكون أوليجونيوكليوتيد بطول كامل من ‎AY‏ 0 أو ‎٠0‏ إلى 0؛ نيوكليوتيد في الطول. في نموذج آخر أيضاً ؛ يكون أوليجونيوكليوتيد بطول كامل من ؟؟ إلى ‎YA‏ ©؟ إلى ‎Ya YE YA‏ ©" إلى ‎Fo‏ ‏0 نيوكليوتيد في الطول. يشير التعبير 'يحسن" أو 'تحسين" أو "يزيد " أو " زيادة" أو 'يحثن أو 'يحث" بصفة عامة إلى قدرة واحد أو أكثر من مركبات مضادة لاتجاه النسخ أو التركيبات في إنتاج أو التسبب في وجود استجابة فسيولوجية أكبر ‎gl)‏ تأثيرات بعدية) في خلية أو خاضع بالمقارنة مع الاستجابة الناتجة عن مركب ليس في اتجاه النسخ أو مركب عينة مقارنة. يمكن أن تشتمل استجابة فسيولوجية قابلة 5 _للقياس على التعبير المتزايد عن صورة وظيفية من بروتين ديستروفين أو نشاط بيولوجي يرتبط بديستروفين متزايد في نسج العضلة من بين استجابات أخرى واضحة من الفهم الخاص بالمجال والوصف الموجود هنا. يمكن قياس وظيفة العضلة المتزايدة؛ بما في ذلك الزيادات او التحسينات في وظيفة العضلة بمقدار حوالي ١6ك ‎Pot HY BY‏ دفق 65 ‎KY‏ حمق 61 ‎96٠١‏ ‎(PNY (Yo)‏ اكت افق داك ‎(%VT‏ لااجى ‎(YY VA TVA‏ داك ‎96٠٠٠‏ ‎Ye 20‏ نفك ‎KT Yoo (Kor Yio‏ متمق ‎Ao YA Vo HY.‏ 9656 58 أو 0+ ‎LY‏ إن النسبة المئوية الخاصة بألياف العضلة التي تعبر عن ديستروفين يمكن أن يتم قياسها بما في ذلك تعبير ديستروفين المتزايد في حوالي ‎PVT 9015 96 967 90١‏ ‎(YVAN‏ ثافك ‎Yo (NY.
Yo (HY.‏ عمق ‎Yio‏ .مك ‎Te Yoo‏ ‎Kio‏ .لامك 61/5 686 6/5 9690 9695؛ أو ‎90٠٠0‏ من الألياف العضلية على 5 سبيل المثال؛ تم توضح أن حوالي ‎964٠‏ من التحسين في وظيفة العضلة يمكن أن يحد إذا كان ‎TEVA‏
CA
DelloRusso ‏من الألياف تعبر عن ديستروفين (انظرء على سبيل المثال؛‎ %Y 0 —Yo ‏هناك م‎ ‏تكون الكمية "الزائدة”‎ . (et al, Proc Natl Acad Sci USA 99: 12979-12984, 2002
A) ‏أو 'المحسنة" بشكل نمطي 'محسنة بشكل استاتيكي” ويمكن أن تشتمل على زيادة والتي تكون‎ ‏مرة أو أكثر (على سبيل‎ 80 0 ٠ ٠١ 0 Ve ‏ىك فت لا ى ىف‎ (FY OLY ‏(على سبيل‎ )١ ‏مرة)( بما في ذلك كل الأعاد والنقاط العشرية بيها وأعلى من‎ ٠٠١ one ‏المثال»‎ 5 ‏إلخ)؛ تكون الكمية المنتجة من خلال المركب في عكس اتجاه‎ 1,8 LY 1,3 »1,5 ‏المثال»‎ ‏النسخ (غياب العامل) أو مركب عينة المقارنة.‎ ‏أو " يثبط" بصفة عامة لقدرة واحدة أو أكثر من المركبات المضادة‎ "UR ‏يمكن أن يرتبط مصطلح‎ " ‏الاستجابة الفسيولوجية ذات الصلة أو الاستجابة الخلوية‎ TLE ‏لاتجاه النسخ من الاختراع على‎ ‏مثل عرض خاص بالمرض أو الحالة التي تم وصفها هنا كما تم قياسه طبقاً لتقنيات روتينية في‎ 0 ‏المجال الذي تم توضيحه. سوف تكون الاستجابة الفسيولوجية ذات الصلة أو الاستجابات الخلوية‎ ‏(في الكائن الحي أو في المعمل) واضحة للشخص ذي المهارة في المجال ويمكن أن يشتمل على‎ ‏تقليل في أعراض الصور المرضية للحثل العضلي او تقليلات في التعبير عن الصور المُعدية من‎
DMD ‏الصور التي تغير ديستروفين والتي تم التعبير عنها بشكل منفرد باستخدام‎ Jie ‏ديستورفين‎ ‏يكون هناك 'تنقص" في الاستجابة ومهم من الناحية الإحصائية كما تمت مقارنة ذلك‎ . BMD ‏أو‎ 5 ‏بالإستجابة التي تم إنتاجها من خلال المركب في عكس اتجاه النسخ أو تركيبة عينة المقارنة والتي‎ ‏دكت حمق لاق دكت تفى .فى مق‎ Yt ‏67ت امت‎ KH) ‏على‎ Jai ‏يمكن أن‎ oY ‏دامقت .اك‎ YY FV KIA (VY (PNT ‏ناك داكت‎ YN (YY do Kae Ae YA Ve KV. ‏متمق‎ 961.2 Yoo Yo to 6 ‏أو 9600 من النقص بما في ذلك كل القيم بين تلك الأعداد.‎ 20 ‏تم أيضاً تضمين أنظمة توصيل ناقل والتي تكون قادرة على التعبير عن متواليات تستهدف‎ ‏ديستروفين أوليجومرية من الاختراع الحالي» تشتمل النواقل المذكورة التي تعبر عن متوالية البولي‎ ‏كما تم وصفه هنا. يعني مصطلح‎ ١8-9 0) ‏نيوكليوتيد على واحدة أو أكثر من المتواليات من‎ ‏مشتق؛ على سبيل‎ DNA ‏'تاقل" أو " بنية حمض نووي" جزيء بولي نيوكليوتيد ويفضل جزيء‎ ‏ملتهمة بكتيرية؛ أة خميرة أو فيروس الذي يمكن أن يتم به إدراج بولي‎ cel ‏من‎ (JUD 5
TEVA ye ‏نيوكليوتيد أو استنساخه. يفضل أن يشتمل الناقل على واحدة أو أكثر من مواضع التقييد الفريدة‎ ‏والتي تكون قادرة على الانتساخ المستقل في خلية عائلة محددة والتي تشتمل على خلية مستهدفة‎ ‏أو نسيج أو خلية سليفة أو نسيج منها أو تكون قابلة للدمج مع جينوم من عائل محدد مثل المتوالية‎ ‏التي تم انتساخها والقابلة لإعادة الإنتاج. ونتيجة لذلك فإن الناقل يمكن أن يكون عبارة عن ناقل‎ ‏انتساخ مستقل» أي» ناقل يوجد عند كيان كروموسوم زائد والذي يعمل على الانتساخ الذي يكون‎ 5 ‏بالزميد دائري أو خطي مقفل أو عنصر‎ (JU ‏مستقلاً عن انتساخ الكروموسوم؛ على سبيل‎ ‏كروموسومي زائد أو كروموسوم دقيق أو كروموسوم صناعي. يمكن أن يشتلم الناقل على أي‎ ‏وسيلة خاصة بضمان الانتساخ الذاتي. وعلى نحو بديل» فإن الناقل يمكن أن يكون واحد والذي‎ ‏باستخدام‎ Lae ‏عندما يتم إدخاله في خلية عائلة فإنه يتكامل بداخل الجينوم ويتم انتساخهما‎ ‏كروموسوم(كروموسومات) والتي تم تكاملها بينهما.‎ 0 ‏عن أي نوع من التدخل‎ Ble ‏بشري) أو خلية‎ Jie ‏يديي‎ JE ‏تكون 'معالجة" فرد (على سبيل‎ ‏يتم استخدامه في محاولة لتغيير حالة طبيعية لفرد أو خلية. تشتمل المعالجة؛ على سبيل المثال لا‎ ‏حدوث‎ end ‏أن يتم إجراؤها إما بشكل وقائي أو تالية‎ (Sarg ‏الحصر على» إعطاء تركيبة صيدلانية‎ ‏حالة مرضية أو في تلامس مع عامل ويائي. تشتمل المعالجة على أي تأثير مطلوب على‎ ‏الأعراض أو الصورة المرضية للمرض أو الحالة المرتبطة مع بروتين ديستروفين» في شكل صور‎ 5 ‏معينة من الحثل العضلية والتي يمكن أن تشتمل؛ على سبيل المثال على التغييرات عد الحد الأدنى‎ ‏لها أو التحسينات في واحد أو أكثر م المرقمات التي تم قياسها من المرض أو الحالة المراد‎ ‏معالجتها. تم أيضاً تضمين المعالجات "الوقائية” والتي يمكن أن يتم توجيهها إلى تقليل معدل‎ ‏التطور الخاص بالمرض أو الحالة المراد معالجتها؛ تأثير بداية المرض أو الحالة أو تقليل الشدة‎ ‏الخاصة ببدايته. لا تكتمل "المعالجة" أو "الوقاية" بالضرورة وتوضح الاستئصال الكامل أو الشفاء‎ 0 ‏أو الوقاية م المرض أو الحالة أو الأعراض المرتبطة بها.‎ ‏بواسطة إعطاء‎ BMD ‏و‎ DMD (Jie ‏وبالتالي؛ تم تضمين طرق خاصة بمعالجة الحثل العضلي؛‎ ‏واحد أو أكثر من أوليجومرات مضادة للانتساخ من الاختراع الحالي (على سبيل المثال؛ متوالية رقم‎ ‏من لاصيغة الصيدلانية أو‎ on ‏والصور المتغيرة منها) والتي تكون بشكل اختياري عبارة عن‎ 5-١ ‏صورة الجرعة لخاضع في حاجة لها. تم أيضاً تضمين طرق خاصة بحث تخطي الإكسون في‎ 5
TEVA
ل خاضع من خلال إعطاء واحدة أو أكثر من أوليجومرات مضادة لاتجاه النسخ والتي يكون فيها الإكسون عبارة عن إكسون ‎OF‏ من جين ديستروفين؛ ويفضل جين ديستروفين بشري. وكما تم استخدامه هناء فإن "'خاضع” كما تم استخدامه هنا يشتمل على أي حيوان والذي يعرض عرض أو يكون في خطوة من ظهور عرض والذي يمكن معالجته باستخدام مركب مضاد لاتجاه النسخ من الاختراع؛ مثل الخاضع الذي له خطورة أو يكون في خطورة من ‎DMD‏ أو ‎BMD‏ أو أي أعراض مرتبطة بها مع تلك الحالات (على سبيل المثال؛ فقط ألياف عضلية). يشتمل الخاضعين المناسبين (المرضى) على حيوانات المعمل ‎lll Jie)‏ الجرذء الأرنب والخنزير الغيني) وحيوانات المزرعة والحيوانات المنزلية أو الحيوانات الأليفة (مثل القط أو الكلب). تفضل الرئيسيات غير البشرية؛ على مرضى بشريين يتم تضمينهم. 0 يشير مصطلح "ألكيل" أو " ألكيلين" لكل من شق هيدروكريون بسلسلة مستقيمة أو متفرعة مشبعة يشتمل على ما بين ‎١‏ إلى ‎١8‏ ذرة كربون. تشتمل الأمثلة بدون حصر على ميثيل ؛ إيثيل ؛ بروبيل » أيزو - بروبيل ؛ بيوتيل ؛ أيزو - بيوتيل ؛ ‎—t‏ بيوتيل ؛ 7- بنتيل و ‎-١‏ هيكسل. يشير مصطلح ‎JI‏ صغير" على مجموعة ألكيل كما تم تحديده أعلاه والتي تشتمل علا ما بين ‎As)‏ ‏ذرات كربون. 5 يشير مصطلح '"الكنيل" إلى شق هيدروكربون بسلسلة متفرعة أو مستقيمة غير مشبعة يشتمل على ما بين ؟ إلى ‎١8‏ ذرة كريون وتشتمل على رابطة مزدوجة من ذرة كروين واحدة إلى ذرة كريون. تشتمل الأمثلة بدون حصر على إيثنيل ؛ بروبينيل ؛ أيزو - برويينيل ؛ بيوتينيل ؛ أيزو - بيوتينيل » - بيوتينيل ؛ -0 بنتينيل و ©- هيكسينيل . يشتمل المصطلح "ألكنيل صغير" على مجموعة ‎«Jif‏ كما تم تعريفه هنا بين ؟ ‎Ag‏ ذرات كربون. يشير "الكينيل" إلى سلسلة متفرعة أو سلسلة مستقيمة غير مشبعة من شق هيدروكربون بها من ؟ إلى ‎VA‏ ذرة كريون تشتمل على الأقل على رابطة ثلاثية من ذرة كريون إلى ذرة كريون. تشتمل الأمثلة بدون حصر على إيثنيل ؛ بروبينيل ؛ أيزو - بروبينيل ؛ بيوتينيل ؛ أيزو - بيوتينيل ؛ +- بيوتينيل ؛ بنتينيل و هيكسينيل. يشير المصطلح ‎Jnl‏ صغير” إلى مجموعة ألكينيل كما تم تعريفه ‎Lia‏ والتي تشتمل بين ؟ و/ ذرات ‎NUTT‏
TEVA
_— \ اذ يشير مصطلح ‎pre‏ أليكل ! إلى شق ألكيل حلقي أحادي أو متعدد. تشتمل ‎aby ١‏ بدون حصر على بدون حصر على سيكلو بيوتيل ؛ سيكلو بنتيل ؛ سيكلو هيكسل ؛ سيكلو هيبتيل و سيكلو أوكتيل. يشير "أريل" إلى جزيء هيدروكريون عطري من ‎VA‏ 53 كربون بها واحدة أو أكثر من الحلقات المقفلة. تشتمل الأمثلة بدون حصرء على فينيل» بنزيل» نافثيل» أنثراسينيل» فينانثراسينيل وباي يشير المصطلح أرلكيل” على شق من الصيغة ‎RaRb‏ حيث تكون ‎Ra‏ عبارة عن سلسلة ألكيلين كما تم تعريفه أعلاه و ‎RD‏ تكون عبارة عن واحدة أو اكثر من شقوق ‎LY)‏ كما تم تحديه أعلاه؛ على سبيل المثال؛ بنزير أو داي فينيل ميثيل وما شابه ذلك. 0 يشير مصطلح "ثيو ألكوكسي" إلى شق من الصيغة ‎—SRE‏ حيث تكون ‎Re‏ عبارة عن شق ألكيل كما تم تعريفه هنا. يشير المصطحل " ثيو ألكوكسي صغير" إلى مجموعة ألكوكسي كما تم تعريفها هنا والتي تشتمل بين ‎١‏ و/ ذرات كربون. يشير "ألكوكسي" إلى شق من الصيغة ‎—ORda‏ حيث تكون ‎RA‏ عبارة عن شق ألكيل كما تم تعريفه هنا. يشير المصطلح ‎Soll"‏ صغير" إلى مجموعة ألكوكسي؛ كما تم تعريفها هنا والتي ‎Jain 1 5‏ على ما بين ‎Ag ١‏ ذرات كريون . تشتمل ‎FEA‏ مجموعات ألكوكسي ¢ بدون حصر على ميثوكسي وإيثوكسي. يشير مصطلح "ألكوكسي ألكيل" إلى مجموعات ألكيل بها استبدال بمجموعة ألوكسي. يشير ‎"dug‏ إلى شق (0-)0 . يشير مصطلح "جوانيدينيل" إلى شق ‎H2N(C=NH2) -NH‏ 0 يشير مصطلح 'أميدينيل" إلى شق ‎H2N(C=NH2)CH‏ ‏يشير ‎J)" sual’‏ شق ‎NH2‏ ‎TEVA‏
الو يشير 'ألكيل أمينو" إلى شق من الصيغة 10180- أو 108080- حيث تكون كل ‎RA‏ « بشكل مستقيل عبارة عن شق ألكيل؛ كما تم تحديده هنا. يشير المصطلح ألكيل أمينو "منخفض” إلى مجموعة ألكيل أمينو؛ كما تم تحديده هناء والذي يشتمل على ما بين ‎١‏ و ‎A‏ ذرات كربون. يشير المصطلح ‎QS‏ غير متجانس" غلى حلقة بها من *- إلى ‎-١7‏ ذرات حلقية أحادية أو 7- إلى ‎٠١‏ ذرات ثنائية الحلقة أو حلقة غير متجانسة ‎ally‏ تكون إما عبارة عن حلقة مشبعة أو غير مشبعة أو عطرية والتي تشتمل على ما بين ‎١‏ إلى ؛ ذرات غير متجانسة يتم اختيارها بشكل مستقل من نيتروجين» أكسجين وكبريت وحيث أن النيتروجين والكبريت تكون عبارة عن ذرات غير متجانسة والتي يمكن أكسدتها بشكل اختياري وأن الذرة غير المتجانسة من الكربون يمكن أن تتم معالجتها بشكل رباعي والتي تشتمل على حلقة ثنائية والتي يكون بها أي من الحلقات غير 0 المتجانسة السابقة والتي يتم دمجها مع حلقة بنزين. يمكن أني تم ربط الحلقة غير المتجانسة من خلال ذرة غير متجانسة أو ذرة كربون. تشتمل الحلقات غير المتجانسة على مركبات أريل غير متجانسة كما تم تحديده فيما يلي. وبالتالي وبالإضافة إلى مركبات الأريل غير المتجانسة التي تم توضيحها فيما يلي تشتمل حلقات غير متجانسة أيضاً على مورفولينيل ؛ بيروليديينونيل؛ بيرو ليدينيل» وبيبريدينيل وبيبريزينيل» وهيدانتونيل وفاليرولاكتاميل» وأوكسيرانيل» وأوكسيتانيل» وتترا 5 ميدرو فيورانيل»؛ وتترا هيدرو بيرانيل؛ تترا هيدرو بيريدينيل؛ تترا هيدرو ثيو فينيل؛ تترا هيدرو ثيو ‎(duly‏ تترا هيدرو بيميدينيل؛ تتر ‎١‏ هيدرو ثيو بيرانيل؛ وما شابه ذلك. يشير المصطلح "أريل غير متجانس" على حلقة غير مجانسة عطرية بها من ©- إلى ‎٠١‏ ذرات ويها ذرة غير متجانسة واحدة على لاأقل تم اختيارها من نيتروجين» أكسجين وكبريت وتشتمل على الأقل على ذرة كربون واحدة والتي تشتمل على كل من نظام حلقي أحادي- حلقي ثنائي. تكون 0 مركبات ‎JY‏ غير المتجانسة التوضيحية عبارة عن بيريديل ؛ فيوريل ؛ بنزو فيورانيل ؛ ثيو فينيل » بنزو ثيو فينيل ؛ كينولينيل » بيرولويل ؛ إندوليل ؛ أوكسازوليل ؛ بنزو كسازوليل ؛ إيميداوليل ؛ بنز إيميداوليل » ثيازوليل ؛ بنزو ثيازوليل « أيزوكسازوليل ؛ بيرازوليل ؛ أيزو ثيازوليل ؛ بيريدازينيل » بيريميدينيل ؛ بيرازينيل ¢ ترايازينيل ؛ سينولينيل ؛ فثالازينيل ؛ و كيونازولينيل. تشير مصطلحات ‎JS‏ به استبدال اختياري"؛ ألكنيل به استبدال اختياري"؛ "ألكوكسي به استبدال ‎glial 5‏ "ثيو ألكوكسي به استبدال اختياري" ‎JSF‏ أمينو به استبدال اختياري” ‎JST‏ صغير به ‎TEVA‏ py " ‏استبدال اختياري”؛ 'ألكينيل صغير به استبدال اختياري”؛ و"ألكوكسي صغير به استبدال اختياري”‎
HS ‏و‎ lial ‏و" ألكيل أمنيو صغير به استبدال‎ "all ‏ثيو ألكوكسي صغير به استبدال‎ ‏غير متجانس به استبدال اختياري" الذي يشير إلى؛ عندما يكون به استبدال؛ إلى ذرة هيدروجين‎ ‏واحدة على الأقل يتم استبدالها باستخدام مجموعة استبدال. في حالة مجموعة استبدال من أوكسو‎ ‏واثنين م ذرات الهيدروجين يتم استبدالها. في هذا السياق؛ تشتمل مجموعات الاستبدال على‎ »)©-( 5 ‏ديوتيريوم» ألكيل به استبدال اختياري؛ وألكنيل به استبدال اختياري؛ وألكينيل به استبدال اختياري؛‎ ‏أريل به استبدال اختياري؛ سيكليل به اسبتدلا اختيار» وسيكلو ألكيل به استبدال اختياري؛ وهالوجين‎ —NRXC(=O)NRxRy (NRxSO2Ry (NRxC(=O)Ry (NRxRy —ORx CN 00 ‏حيث تكون‎ ~SOMNRXRY 3 —SOmMRXx (C(=O)NRxRy (C(=0)ORx C(=0)Rx ‏متشابه أو مختلفة وتكون بشكل مستقل عبارة عن‎ Ry ‏و‎ RX ‏وتكون‎ ¢Y ‏أو‎ ١٠ ٠١ ‏عبارة عن‎ 0 ‏هيدروجين» ألكيل به استبدال اختياري؛ ألكنيل به استبدال اختياري» وألكينيل به استبدال أختياري أو‎ ‏به استبدال اختياري؛ ووعلى نحو اختياري؛ سيكلي غير متجانس أو سيكلو ألكيل به استبدال‎ dof ‏من ألكيل به استبدال اختياري المذكور ؛ أكليني لبه استبدال أختياري؛ وأيضا‎ JS ‏اختياري؛ ويكون‎ ‏ألكيني لبه استبدال اختيار وأريل به استبدال اختياري؛ وسيكليل غير متجانس به استبدال اختياري‎ ‏وسيكلو ألكليل به استبدال أختياري والذي يمكن استبداله باستخدام واحدة أو أكثر من أوكسو؛‎ 5
NRxC(=O)RYy, NRxSO2RYy, — (NRxRy ‏ماوت‎ «CN ‏همالرجين‎ ‎- —SOmMRx C(=O)NRxRy (C(=O)ORx (C(=O)Rx NRxC(=O)NRxRy . SOMNRxRy ‏تم عرض نظام التسمية الجزيئية لمضاد اتجاه النسخ ¢ وتم نشره بحيث يتم التمييز بين جزيئات‎ .) Mann et al., (2002) J Gen Med 4, 644-654 ‏مضادة لاتجاه النسخ مختلفة (انظرء‎ 0 ‏تكون كل الأسماس المذكورة مرتبطة بشلك خاص عندما يكون هناك العديد من جزيئات في عكس‎ ‏اتجاه النسخ مختلفة وتم توجيهها كلها إلى نفس منطقة المستهدف كما هو موضح فيما يلي:‎
H#A/D(x:y) ‏من القوارض ©: من الكلاب).‎ tM egy tH (JU ‏يحدد السطر الأول الأنواع (على سبيل‎ ‏موضح شريحة مستهدف أو مانح‎ ' AD! ‏تشير # لعدد إكسون دسيتروفين مستهدف. توضح‎ _ 5
TEVA
يه عند البداية وعند نهاية الإكسون؛ على الترتيب. تمثل ‎(XY)‏ إحداثيات التدلين حي تكون ‎ST‏ ‏"+" موضحة لمتوالية إنترونية أو متوالية خارجية على الترتيب. على سبيل المثال» فإن ‎A=‏ ‏(6+18 توضح أن هناك ‎١‏ قواعد على الأقل من الإنترون تسبق الإكسون المستهدف و ال ‎١8‏ ‏قاعدة من الإكسون المستهدف. يكون موضح الحيز القريب عبارة عن مستقبل بحيث أن الإحداثيات يمكن أن يسبقها ' 8 ". سوف تكون إحداثيات التلدين الموصوفة عند موضح شريحة المانح عبارة عن (2-18+)0 حيث أن هناك على الأقل اثنين من قواعد الإكسون وال ‎VA‏ قاعدة من الإنترون مناظرة لموضع تلدين من جزيء مضاد للانتساخ. هناك إحداثيات تلدين إكسونإكسون كاملة والتي يمكن أن يتم تمثيلها من خلال (65+85+) ؛ والتي تكون عبارة عن موضع بين النيوكليوتيد ‎AC 5 To‏ من بدداية الإكسون. ‎١ 0‏ -أوليجو نيوكليوتيدات عكس اتجاه النسخ عندما يتم استهداف جزيء "جزيئات" في عكس اتجاه النسخ فيما يتعلق بمتوالية نيوكليوتيد تم تضمينها في شطر الإكسونات بداخل متواليات ‎MRNA‏ أولي؛ فإن الشطر الطبيعي للإكسون يمكن أن يتم تثبيته ويتم التسبب فيه من خلال آلية التشطير بواسطة إمرار إكسون مستهدف كامل من ‎MRNA‏ ناضج. في العديد من الجينات؛ فإن حذف الإكسون الكامل سوف يؤدي إلى إنتاج 5 بروتين غير وظيفي خلال فقد نطاقات وظيفية مهمة أو إتلاف إطار القراءة. وعلى الرغم من ذلك وفي بعض البورتينات؛ من الممكن أن يتم تقليل البروتين من خلال حذف واحد أو أكثر من الإكسونات من داخل البروتين بدون إتلاف إطار القراءة ويدون التغيير الشديد للنشاط البيولوجي للبروتين. وعلى نحو نمطي فإن تلك البروتينات يكون لها دوراً هيكلياً ‎lf‏ تشتمل نطاقات وظيفية عند أطرافها. ينتج الحثل العضلي دوشين من تطفيرات تعيق تخليق متج جين ديستروفين وظيفي؛ 0 وعلى نحو نمطي من خلال إتلاف إطار القراءة. يمكن أن تسمح أوليجوالأوليجو نيوكليوتيدات في عكس اتجاه النسخ التي تحث خروج الإكسون من المنطقة من جين ديستورفين المشتمل على تطفيرات بخلايا العضلة بأن تنتج ناتج نسخ ل ‎MRNA‏ ناضج الذي يشفر بروتين ديستروفين وظيفي. لا يكون بروتين ديستروفين الناتج بالضرورة عبارة عن صورة "من النوع غير المعالج” من ديستروفين ولكن عبارة عن ‎ia‏ مقطوع؛ وأيضاً وظيفي أو شبه وظيفي يشكل ديستروفين. يصف ‎TEVA‏
وم الاختراع الحالي جزيئات في عكس اتجاه النسخ قادرة على ربط ديستروفين محدد مع مستهدفات ‎MRNA‏ أولية في إكسون ‎OF‏ ومعالجة إعادة توجيه من الجين المذكور. بصفة خاصة ¢ يتعلق الاختراع بأوليجونيوكليوتيد معزول في عكس اتجاه النسخ من ‎٠١‏ إلى ‎ov‏ ‏نيوكليوتيد في الطول؛ ‎Le‏ في ذلك على الأقل ‎Yo 30 AY 15 OY 0٠١‏ أكثر؛ من النيوكليوتيدات المتممة المتعاقبة إلى منطقة مستهدفة لإكسون ‎OF‏ من جين ديستروفين تمت تحديدها في شكل موضع أنيدلين تم اختياره مما ‎H53A(#30+57)c H53A(+36+60): LL‏ ¢ )30+56+( 538ل ‎H53A(+33+57) 5 H53A(+30+55)‏ وأوليجونيوكليوتيدات تتهجين بشكل خاص لموضع تلدين والذي يحث تخطي ‎POF‏ ‏تكون أوليجونيوكليوتيدات في عكس اتجاه النسخ ل ‎RNA‏ مستهدفة متممة لبعضها لابعض عندما 0 يكون هناك عدد كاف من التركيبات الناظرة في كل جزيء تم شغله بواسطة نيوكليوتيدات والتي يمكن أن تكون رابطة هيدروجين مع كل منها بحيث أنه وعندما يكون هناك ربط خاص يحدث بين الأوليجونيوكليوتيد بين أوليجونيوكليوتيد والمستهدف. ويالتالي فإن ‎ALE‏ التهجين بشكل خاص” و "التتميم” تشير إلى مصطلحات والتي يتم استخدامها لتوضيح دركة كافية من التتميم أو إزدواج دقيق بحيث تكون ثابتة وتكون خاصة بربط معين يحدث بين الأوليجونيوكليوتيد والمستهدف. من المفهوم 5 في المجال أن المتوالي تكون عبارة عن جزيء مضاد لعكس اتجاه النسخ والتي لا تحتاج ل ‎9٠8‏ من التتميم الخاص بمتوالية مستهدفة التي تكون قابلة للتهجين بشكل خاص. يكون جزيء في عكس اتجاه النسخ قابل للتهجين بشكل خاص عندما يكون هناك ريط أوليجونيوكليوتيد مع جزيء مستهدف يتداخل مع وظيفة طبيعية من ‎RNA‏ مستهدف؛ ويكون ذلك بدرجة كافية للتميم بحيث يتم تجنب الارتباط غير النوعي من أوليجونيوكليوتيد في عكس اتجاه النسخ لمتواليا غير 0 مستهدفة تحت ظروف يكون الارتباط المعين مطلوباً فيهاء أي تحت الظروف الفسيولوجية في ‎dlls‏ الاختبارات في المعمل أو المعالجة العلاجية في حالة الاختبارات في ‎canal‏ تحت ظروف يتم فيها إجراء الاختبارات. يمكن أن يكون الطول والجزيء متنوع بحيث يكون طويلاً وقادراً للارتباط على نحو انتقائي مع موضع مقصود مع جزيء ‎MRNA‏ أولي. يتم تحديد طول تلك المتواليات طبقاً لإجراءات الانتقاء 5 .تم وصفها هنا. بصفة عامة؛ فإن الجزيء في عكس اتجاه النسخ يمكن أن يكون من حوالي ‎٠١‏ ‎TEVA‏
نيوكليوتيدات في الطول إلى حوالي ‎٠٠‏ نيوكليوتيد في الطول. وعلى الرغم من ذلك سوف يتم إدراك أن أي طول من النيوكليوتيدات يكون في المدى المذكور وتم استخدامه في الطريقة. يفضل أن يكون طول جزيء عكس اتجاه النسخ بين ‎٠-٠١‏ ؟ نيوكليوتيد في الطول. في أحد النماذج» تكون أوليجوالأوليجو نيوكليوتيدات من الاختراع بطول من ‎Ye‏ إلى ‎٠٠0‏ نيوكليوتيد في الطول و تشتمل على على الأقل ‎Yo OY de OY ٠١‏ أو ‎GIST‏ نيوكليوتيد من أي من المتوالية رقم: ‎.5-١‏ في بعض النماذج؛ ثيمين قواعد في المتوالية رقم: ‎5-١‏ تكون بشكل خاص عبارة عن يوراسيل. يمكن أن لا يؤدي حذف الإكسون على إزاحة إطار القراءة في ‎MRNA‏ تم انتساخه قصير. وبالتالي إذا كان هناك متوالية خطية من ثلاثة إكسونات فإن الطرف الخاص بالإكسون الأول يشفر 0 اثنين من ثلاثة في الكودون والإكسون التالي يتم حذفه وبعد ذلك فإن الإكسون الثالث في المتوالية الخطية يجب أن يبدا مع نيوكليوتيد منفرد والذي يكون قادراً على إكتمال ثلاثية نيوكليوتيد خاصة بالكودون. وإذا لم ‎Tay‏ الكودون الثالث مع نيوكليوتيد منفرد فإن هناك إزاحة خاصة بإطار القراءة التي تؤدي إلى إنشاء برتين مقطوع أو غير وظيفي. سوف يتم إدراك أن تجيهزات الكودون عند نهاية الإكسونات في بروتينات هيكلية والتي لا تتكسر 5 دائماً عند نهاية الكودودة؛ وبالتالي فيكون هناك ‎dala‏ لحذف أكثر من كودون واحد من ‎MRNA‏ ‏أولي؛ والذي يضمن القراءة في الإطار من ‎MRNA‏ في مثل تلك الحالات؛ فإن هناك مجموعة من أوليجوالأوليجو نيوكليوتيدات المضادة لاتجاه النسخ التي يمكن أن تكون في حاجة تم اختيارها من خلال طريقة الاختراع حيث أن كل منها يتم توجيهها إلى منطقة مختلفة مسئولة عن حث الريط في إكسونات وتكون قابلة للحذف. 0 في بعض النماذج؛ فإن الأوليجونيوكليوتيدات التي في عكس اتجاه النسخ يكون لها تركيبة كيميائية من جزيء حمض نووي يحدث بشكل طبيعي؛ أي أوليجونيوكليوتيدات في عكس اتجاه النسخ والتي لا تشتمل على قاعدة مت تعديلها أو قاعدة بها ‎cand‏ سكر أو روابط بين الوحدات الصغيرة. في نموذج مفضل» فإن أوليجوالأوليجو نيوكليوتيدات في عكس اتجاه النسخ من الاختراع الحالين لا تكون جزيئات حمض نووي تحدث بشكل طبيعي. على سبيل ‎(JU‏ فإن الأحماض
TEVA
الام النووية التي لا تحدث بشكل طبيعي تشتمل على واحدة أو اكثر من قواعد غير طبيعية؛ سكر و/أو رابطة في وحدة فرعية؛ على سبيل ‎(JU)‏ قاعدة؛ سكرء و/أو رابطة التي تم تعديلها أو استبدالها فيما يتعلق بما هو موجود في جزيء الحمض النووي الذي يحدث بشكل طبيعي. تم فيما يلي وصف التعديلات التوضيحية. في بعض النماذج؛ فإن الأحماض النووية التي لا تحدث بشكل طبيعي تشتمل على واحد أو أكثر من أنواع التعديلات؛ على سبيل ‎(JU‏ تعديلات سكر وتعديلات قاعدة ‎Sug‏ وتعديلات رابطة وقاعدة وتعديلات رابطة أو قاعدة؛ سكرء وتعديلات رابطة. على سبيل المثال؛ في بعض النماذج؛ فإن الأوليجو نيوكلوتيدات في عكس اتجاه النسخ تشتمل على قاعدة غير طبيعية ‎Ao)‏ سبيل ‎(JU‏ تم تعديلها أو استبدالها ب )قاعدة. في بعض النماذج؛ فإن أوليجوالأوليجونيوكليوتيد ات في عكس اتجاه النسخ تشتمل على سكر (غير طبيعي 0 (على سبيل المثال؛ معدل أو به استبدال). في بعض النماذج؛ فإن أوليجونيوكليوتيدات في عكس اتجاه النسخ تشتمل على رابطة بداخل الوحدات غير طبيعية (على سبيل المثال؛ معدلة؛ أو بها استبدال). في بعض النماذج؛ فإن الأوليجونيوكليوتيدات تشتمل على واحد أو أكثر من التعديلات أو الاستبدالات؛ على سبيل المثال؛ قاعدة غير طبيعية و/أو سطر غير طبيعي و/أو رابطة بداخل الوحدات غير طبيعية. 5 لكي يتم تجنب التحلل؛ فإن ‎MRNA‏ الأولي أثناء تشكيل المزدوج باستخدام جزيئات في عكس اتجاه النسخ؛ وجزيئات في عكس اتجاه النسخ يمكن تهيئتها لتقليل أو منع الانشطار بواسطة ‎RNase H‏ داخلي المنشاً. تكون تلك الخاصية مفضلة بشكل عال مثلما هو الحال مع المعالجة ب ‎RNA‏ وباستخدام أولجيونيوكليوتيدات غير معالجة بميثيل إما بداخل الخلايا أو في مستخلصات خام والتي تشتمل على ‎RNase H‏ التي تؤدي إلى تحلل ‎MRNA‏ أولئ: صور مزدوجة من 0 أوليجونيوكليوتيد في عكس اتجاه النسخ. يمكن استخدام أي صورة من جزيء في عكس اتجاه النسخ معدل والذي يكون قادراً على التمرير أو لا يحدث التحلل المذكور والذي يتم استخدامه في الطريقة الحالية. لا يتم انشطار مثال من جزيئات في عكس اتجاه النسخ والتي عندما تكون في صورة مزدوجة مع ‎RNA‏ لا يتم اشنطارها باستخدام ‎RNase H‏ خلوي والذي يكون عبارة عن مشتق ‎O =F"‏ -ميثيل. تكون أوليجونيوكليوتيدات ‎O -' ١‏ -ميثيل ثابتة جداً في الوسط الخلوي 5 وفي الأنسجة الحيوانية والصور المزدوجة منها مع ‎RNA‏ التي لها قيم ‎TM‏ أعلى بالمقارنة مع رببو
TEVA
م - أو صور عكسية من دي اوكسي رببو-. تكون المعالجة بالميثيل لموضع ‎Y‏ ' هيدروكسي رببوز والتضمين الخاص بفسفورو ثيوات اساسي عبارة عن استراتيجية مشتركة خاصة بجزيئات إنتاج والتي يتم إعادة تجميعها عند السطح من ‎RNA‏ ولكن يكون له مقومة أكبر فيما يتعلق بتحلل النيوكلياز.
يمكن تحضير جزبئات في عكس اتجاه النسخ لا تنشط ‎RNase H‏ طبقاً لتقنيات معروفة ‎lal)‏ ‏على سبيل المثال البراءة الأمريكية رقم ‎.)2٠69999‏ تكون جزيئات في عكس اتجاه النسخ المذكورة بعارة عن متواليات دي أوكسي رببو نيوكليوتيد أو ‎guy‏ نيوكليوتيد التي تشتمل بشكل مبطس على تعديل هيكلي والذي يتم إعاقته بشكل فراغي أو يتم منع ريطه مع ‎RNase H‏ لجزيئات مزدوجة تشتمل على نيوكليوتيدات مثل عضو منه والذي يكون له تديل هيكلي لا يعيق
0 إلى حد كبير أو يتلف التكوين المزدوج. وسبب تضمين أجزاء من الأوليجونيوكليوتيدات في التكوين المزدوج والتي تكون مختلفة إلى حد كبير عن البروتينات المذكورة في ريط ‎RNase H‏ منه فإن جزيئات في عكس النسخ من الأعصاب لا تنشط ‎RNase H‏ المتاح. على سبيل المثال؛ فإن جزيئات في عكس اتجاه النسخ يمكن أن تكون عبارة عن أوليجو نيوكليوتيدات حيث أن واحد على الأقل أو كل الوحدات البنائية من الفوسفات الرابطة لنيوكليوتيد داخلي عبارة عن فوسفات 5 معدلة؛ مثل ميثيل فسوفونات؛ وميثيل فوسفورو ثيوات؛ وفسفورو مورفو ليدات؛ وفوسفورو بيبرازيدات وفسفوراميدات. على سبيل المثال» فإن كل من الوحدات البناثية من الفوسفات الرابطة لنيوكليوتيد داخلي يمكن أن يتم تعديلها كما تم وصفه. في مثال غير حصري آخرء فإن الجزيئات في عكس اتجاه النسخ تكون عبارة عن جزيئات حيث أن هناك واحد على الأقل أو كل النيوكليوتيدات المشتملة على '؟ من أجزاء ألكيل الصغير ( على سبيل ‎(Jul)‏ 61-64 ؛ ألكيل 0 خطي أو متفرع أو مشبع أو غير مشبع مثل ميثيل» ‎od)‏ إيثينيل ؛ بروبيل» ‎-١‏ برويينيل» ؟١-‏ ‎«ing‏ وأيزو بروبيل). على سبيل المثال» فإن كل واحدة من النيوكليوتيدات يمكن أن يتم تعديلها كما تم وصفه هنا. تكون الأمثلة المعينة من أوليجو نيوكليوتيدات في عكس اتجاه النسخ مفيدة في الاختراع الحالي وتشتمل على أوليجو نيوكليوتيدات التي تشتمل على أجزاء أساسية معدلة أو روابط بداخل أجزاء 5 فرعية بداخل الوحدات غير طبيعية. يكون للأوليجو نيوكليوتيدات صور معدلة والتي تشتمل على ‎TEVA‏
_ Ad q —_
تلك التي تحتفظ بذرة فسفور في الجزء الأساسي وتلك التي لا يكون بها ذرة فسفور في الصورة الأساسية. يمكن الأخذ في الاعتبار لأوليجونيوكليوتيدات التي لا يكون بها ذرة فسفور في أي من
الجزه الأساسي الداخلي للنيوكليوتيد والذي يمن أخذه في الاعتبار بأنه أوليجو نيوكليوتيدات. في جزيئات في عكس اتجاه النسخ الأخرى» فإن كل من الروابط السكرية وروباط النيوكليوتيد الداخلي؛ ‎(gl‏ الصورة الأصلية من وحدات النيوكليوتيد يتم استبدالها باستخدام مجموعات جديدة. يتم الحفاظ على الوحدات الأساسية فيما يتلعق بالتهجين باستخدام مركب يستهدف حمض نووي مناسب. يكون واحد أو أكثر من المركب الأوليجومري المذكور عبارة عن محاكي أوليجونيوكليوتيد والذي تم توضيح أنه به خصائص تهجين جيدة ويطلق عليها حمض نووي ببتيدي ‎(PNA)‏ في أحد المركبات فإن المركبات ‎PNA‏ ؛ والصورة الأساسية من السكر من الأوليجونيوكليوتيدات يتم
0 1 استبدالها باستخدام صورة أساسية تشتمل على الميد وعلى نحو خاص صورة أساسية من أمينو ‎Ji‏ جلايسين. تكون قواعد النيوكليوتيد قد تم الحفاظ عليها مرتبطة بشكل مباشر أو بشكل غير مباشر مع ذرات نيتروجين آزا من ‎in‏ أميد من الصورة الأصلية.
يمكن أن تشتمل أوليجوالأوليجو نيوكليوتيدات على واحدة أو أكثر من الأجزاء السكرية التي بها استبدال.
5 يمكن أن تشتمل الأوليجونيوكليوتيدات على تعديلات قواعد نيوكليوتيد ‎ll)‏ يتم غليها في الغالب في المجال ببساطة ‎(ae‏ أو استبدالات. تشتمل أوليجوالأوليجو نيوكليوتيدات المشتملة على قاعدة معدلة أو قاعدة بها استبدال على أوليجو نيوكليوتيدات والتى تكون بها واحدة أو أكثر من البيورين أو قواعد البريميدين موجودة بكشل عام في أحماض نووية ‎Ally‏ يتم استبدالها على نحو أقل انتشارا أو قواعد غير طبيعية.
0 تشتمل قواعد البيورتين على حلقة بريميدين يتم دمجها مع حلقة إيميدازول كما تم وصفه من خلال اصيغة العامة التالية:
لل 58 ا ‎NA‏ ‎Na‏ الب ‎N‏ = ‎H‏ 3 ‎TEVA‏
=« _ يكون الأدينين والجوانين عبارة عن اثنين من القواعد الخاصة بنيوكليوتيد بيورين والتي تكون موجودة في الغالب في أحماض نووية. يمكن أن تكون تلك القواعد بها اسبتدلا بواسطة مركبات بيورين موجودة بشكل طبيعي والتي تشتمل على ‎dine - NE‏ أدينين ؛ 112- ميثيل جوانين؛ وهيبوكسنثين و/١- ‎Lie‏ ( جوانين . تشتمل ‎Bara yu sac ld‏ على ‎Cad yu dala‏ بها سبعة أعضاء كما تم وصفه من خلال الصيغة العامة التالية:
He os
SCE ‏ب‎ i
Leo Rey ‏بيخ كير أن‎ 0 يكون سيتوسين؛ يوراسيل وثيميدين عبارة عن قواد بيريميدين الموجودة في الغالب في الأحماض النووية. يمكن أن تكون تلك المركبات بها استبدال مع مركبات بيريميدين تحدث بشكل طبيعي أخرى ولاتي تشتمل؛ على سبي المثال وليس الحصر؛ ‎Jeo‏ سيتوسين؛ ©- هيدروكسي ‎Hise‏ ‏سيتوسين» وبوراسيل غير حقيقي و 4؛- ثيو يوراسيل. في أحد النماذج فإن أوليجوالأوليجو نيوكليوتيدات التي تم وصفها هنا تشتمل على قواعد ثيميدين في مكان اليوراسيل. تشتمل القواعد المعدلة او القواعد التى بها استبدالء؛ على سبيل المتال لا الحصر على؛ ‎y‏ 1- دأي أمينو ‎cyan‏ حمض أوروتيك؛ أماتيدين؛ لايسيدين؛ 7- ثيو بيريميدين ( على سبيل المثال؛ "- ثيو يوراسيل» ‎=F‏ ثيوثيمين)- © -كلامب والمشتقات الخاصة بها 5 0— بيريميدين بها استبدال (على سبيل المثال» ©- هالو يوراسيل» ©- بيروبينيل يوراسيل» *- بروبينيل سيتوسين» *- أمينو ميثيل يورساسيل» ‎=O‏ هيدروكسي ميثيل يوراسيل؛ *- أمينو ميثيل سيتوسين؛ ‎=O‏ هيدروكسي ‎Je 20‏ سيتوسين 1 فائق) « ‎-VY‏ دي آزا ‎١7 (Olga‏ دي ‎Bil‏ أدينين + ‎١١‏ آزاء ‎A‏ ديا أمية بيورين» 8- آزا-/١-‏ دي أزا جوانين» ‎=A‏ آزا ‎-١7-‏ دي أزا أدينين» ‎=A‏ آزا-7١-‏ دي آزا أدينين» ‎=A‏ ‎Bil‏ -لا-ددي ‎Hl‏ -7) 1- داي أمينو بيورين ‎G«‏ فائق 9 م فائق و 4ل - إيتيل سيتوسن؟؛ أو ‎TEVA ey ‏بنتيل- 7-أمينو بيورين‎ ولكيس-١12‎ ((cPent-G) ‏-سيكلو بنتيل جواني‎ N2 ‏مشتقات منها؛‎ ‏و 812- بروبيل- ؟- أمينو بيورين (02-80)؛ زبدويوراسيل أو مشتقات منها؛‎ (cPent-AP) ‏دي فلورو تولوين أو قواغ غير موجودة مثل مواضع‎ = oF Jie ‏وقواعد متحللة أو قواد أساسية‎ ‏ديو‎ -١ Oy ‏دجيا أوكسي‎ =F) guy ‏ديو أوكسي‎ -١ JU) ‏سبيل‎ Ao) ‏غير أساسية‎ ‏يكون بها أكسجين حلقيه تم‎ Ally ‏أوكسي -؟- © -ميثيل ريبوز؛ أو بيروليدين أو مشتقات منها‎ 5 ‏فائق؛ 6 فائق؛ و آ فائق في‎ A ‏استبداله باستخدام نيتروجين (آزا ريبوز)). تكون أملة مشتقات من‎ ‏والذي تم تضمينه هناك كمرجع‎ «(Epoch Biosciences) 6,683, 173 ‏البراءة الأمريكية رقم‎ ‏يقلل من التأثيرات الحاثة‎ of ‏والذي تم توضيح‎ Pr-AP ¢ cPent-AP «cPent-G «Lis,
Peacock H. et al. J. Am. Chem. Soc. ) siRNA ‏للمناعة عندما يتم تضمينه في‎ 0 9200 ,133 ,2011). يكون اليوراسيل الكاذب عبارة عن نسخة أيزومرية معالجة بشكل طبيعي من اليوراسيل مع © - جلايكوسيد خلاف ل - جليكوسيد منتظم في يوريدين. يمكن أن يكون ‎mRNA‏ التخليقي المشتمل على دوريدين كاذب له خصائص سلامة محسنة بالمقارنة مع ‎mPYNA‏ يشتمل على يريدين (الطلب الدولي رقم 00917977758 الذي تم تضمينه هنا بكامله كمرجع). تكون قواعد نيوكليوتيد معدلة أو بها استبدال معينة مفيدة بشكل خاص ‎Lad‏ يتعلق بألفة الريط المتزايدة الخاصة باوليجونيوكليوتيدات في عكس اتجاه النسخ من الاختراع. تشتمل تلك المركبات على مركبات ©-بيريميدين بها استبدال» 7- زا بيريميدين و ‎N‏ -؟ ‎Ne‏ -1؛ و 1-0 بها استبدال من مركبات بيورين والتي تشتمل على 7- أمين بروبيلي أدينين» *- بربينيل يروساسيل و ©- بروبينيل سيتوسين. تم توضيح استبدالات 0— ميثيل سيتوسين لزيادة الصورة المزدوجة النووية 0 الخاصة بالثبات بمقدار ‎٠,١ - ٠,76‏ م ‎Allg‏ تكون موجودة من استبدالات قاعدة مفضلة والتي تكون مفضلة بشكل أكبر عند دمجها مع تعديلات سكر من ؟'- © - ميثوكسي إيثيل. في بعض النماذج؛ فإن قواعد نيكلو المعدلة أو التي بها استبدال تكون مفيدة في تسهيل تنقية الأوليجونيوكليوتيدات في عكس اتجاه النسخ ‎Ally‏ تشتمل على ثلاثة أو أكثر ‎Ao)‏ سبيل ‎(Jl‏ ‎Teo cf oF‏ أو أكثر) من قواعد جوانيني أساسية. في أوليجونيوكليوتيدات في عكس اتجاه النسخ 5 معينة؛ فإن هناك حلقة من ثلاثة أو أكثر من قواعد الجوانين المتعاقبة ينتج عنها تكتل للأوليجو
TEVA
ده نيوكليوتيدات؛ وتعقيد التنقية. في أوليجونيوكليوتيدات في عكس اتجاه النسخ فإن واحد أو أكثر من مركبات الجوانين المتتابعة يمكن أن يكون به استبدال باستخدام إينوسين. إن استبدال أينوسين لواحد أو أكثر من مركبات جوانين في السلسلة من ثلاثة أو أكثر من قواعد جوانين يمكن أن تقلل الارتباط الخاص بأوليجو نيوكليوتيدات في عكس اتجاه النسخ ‎Milly‏ تسهيل التنقية. في أحد النماذج؛ يشتمل تعديل آخر من الاختراع الحالي على أوليجونيوكليوتيدات في عكس اتجاه النسخ الذي يشتمل على الارتباط الكيميائي بأوليجونيوكليوتيد مع واحد أو أكثر من الأجزاء أو المترافقات التي تحسن الفعالية؛ التوزيع الخلوي أو الامتصاص الخلوية لأوليجونيوكليوتيد. تشتمل مثل تلك الأجزاء على سبيل المثال لا الحصر على أجزاء شحم ‎Jie‏ جزءٍ ‎(Jo fad Sl)‏ حمض كوليك وثيو إيثر؛ على سبيل المثال» هيكسيل -*- تراي تيلثيول؛ ثيو كولييستيرول وسلسلة 0 أليفاتية؛ على سبيل ‎(JU)‏ دوديكان دايول أو وحدات بنائية من أنديسيل وفوسفو شحمي؛ على سبيل ‎(Jbl‏ داي -هيكا ديسيل - ‎rac‏ - جليسيررول أو تراي إيثيل أمنيومو» ‎a= ٠‏ - 0 - هيكسا ديسيل - ‎rac‏ -جليسيرول-؟- ‎١1‏ -فوسفونات؛ وبولي أمين أو سلسلة بروبيل إيثيلين جليكول أوحمض أسيتيك أدمانتان» جزيء بالميتيل؛ أو أوكتا ديسيل أمين أو ‎ohn‏ هيكسي أمينو - كربونيل- أوكسي كوليستيرول. 5 من غير الضروري لكل المواضع في مركب معين أن يتم التعديل المنتظم؛ وفي الواقع أكثر م التعديلات التي تم ذكرها أعلاه والتي يمكن أن يتم تضمينها في مركب منفرد واحد أو حتى نيوكليوتيد منفرد مع أوليجونيوكليوتيد. يشتمل الاختراع الحالي أيضاً على أوليجونيوكليوتيدات في عكس اتجاه النسخ والذي يكون عبارة عن مركبات خيمرية. تكون المركبات "الخميرية" في عكس اتجاه النسخ أو " الصور الخميرية”» في هذا السياق من الاختراع؛ عبارة عن جزيئات في عكس 0 اتجاه النسخ؛ ‎eg‏ نحو خاص أوليجونيوكليوتيدات والتي تشتمل على أثنين أو اكثر من المناطق التي تم تمييزها بشكل كيميائي يتم تحضير كل منها عند وحدة مونومر واحدة على الأقل؛ أي؛ نيوكليوتيد في حالة مركب أوليجونيوكليوتيد. تشتمل الأوليجونيوكليوتيدات بشكل نمطي على منطقة واحدة على الأقل حيث يتم تعديل الأوليجونيوكليوتيد بحيث يتم منح مقاومة زائدة لتحلل النيوكلياز والامتصاص الخلوي ومطقة الإضافة الخاصة بألفة الارتباط المتزايدة الخاصة بحمض نووي 5 مستهدف.
TEVA
اسه يمكن أن تكون الجزيئات في عكس اتجاه النسخ المستخدمة طبقاً للإختراع بشكل نمطي أو بشكل روتيني خلال تقنية معروفة بشكل جيد من تخليق الطور الصلب. يتم بيع الجهاز الخاص بهذا التخليق عند عدة مصادر بيع والتي تشتمل؛ على سبيل المثال على ‎Applied Biosystems‏ ‎(Foster City, Calif.)‏ تم وصف ‎(saa)‏ الطرق الخاصة بتخليق أوليجونيوكليوتيد على مادة صلبة معدلة في الطلب الدولي رقم 548/0375 . يمكن استخدام أي من الوسائل الخاصة بالتخليق المعروف في المجال بشكل إضافي أو على نحو بديل. سوف يكون من المعروف استخدام تقنيات مشابهة لتحضير أوليجونيوكليوتيدات ‎Hie‏ ‏فوسفورو ثيواتومشتقات معالجة بألكيل. في أحد النماذج المعالجة المذكورة فإن داي إيثيل فسوفراميدات يتم استخدامها في شكل مواد بدء ويمكن أن يتم تخليقها ما تم وصفه بواسطة ‎by‏ ‎.Beaucage, et al., (1981) Tetrahedron Letters, 22:1859-1862 0‏ يتم تخليق جزيئات في عكس اتجاه النسخ من الاختراع في المعمل ولا تشتمل على تركيبات مضادة لاتجاه النسخ من أصل بيولوجي. يمكن أن يتم خلط جزيئات الاختراع» ويمكن كبسلتها وترافقها أو ربطها مع جزيئات أخرى أو بنيات جزيئية أو خلائط من المركبات؛ ‎(die‏ على سبيل المثال؛ جسيمات أو جزيئات مستهدفة لمستقبل أو صيغ تؤخذ عن طريق الفم أو المستقيم أو بشكل 5 موضعي أو أي صور أخرى للمصاعدة في الامتصاص و/أو التوزيع والامتصاص. أ- أوليجومرات مورفولينو تتعلق نماذج توضيحية من الاختراع بأوليجومرات مورفولينو والتي لها روابط أصلية تشتمل على فسفور والتي تم توضيحها في الأشكال ١أ-١ج.‏ في أحد النماذج فإن فسفورو داي أميدات- المرتبطة مع أوليجومر مورفولينو مثلما هو موضح في الشكل رقم ‎cz)‏ والذي يتم تعديله؛ طبقاً 0 لواحدة من سمات الاختراع لكي يتم تشمين مجموعات مشحونة بشكل موجب ويفضل عند ‎-٠١‏ ‎٠‏ من الروابط الأساسية لها. تشتمل أوليجونيوكليوتيدات مورفولينو مع روابط أساسية على أوليجومرات في عكس اتجاه النسخ ‎lly‏ تم توضيح تفاصيل لها على سبيل ‎JU‏ في ‎(Summerton and Weller 1997(‏ وفي البراءات الأمريكية المملوكة بشكل مشترك أرقام مالتلأكتم ‎EY (OVIVATT‏ اذام تممعأأءم مال اتتتا فعاف لتلا درف ‎TEVA‏
وه لااارت درف ‎4,7١5 cA VTLEVT‏ 4.19 1,457,176 وقد تم التعبير على كل منها وتم تضمينها هنا كمرجع بكاملها. سوف يتم تعيدل أوليجومرات مورفولينو باستخدام روباط معدلة تشتمل على روابط مشحونة والتي توجد في ‎٠١/118797‏ (تم تضمينها بكاملها هنا كمرجع). تشتمل الخصائص الهامة من وحدات فرعية تعتمد على مورفولينو على: ‎)١‏ القدرة على الارتباط في صورة أوليجومرية من خلال روابط أساسية غير ثابتة وغير مشحونة أو روابط أساسية مشحونة بشكل موجب؛ ‎)١‏ القدرة على حمل قاعدة نيوكليوتيد (على سبيل ‎(JB‏ أدينين» سيتوسن؛ ‎(Olga‏ ‏ثيميدين» يوراسيل وأينوسين) بحيث أن البوليمر الذي تم تشكيله يمكن تهجينه باستخدام حمض نووي مستهدف لقاعدة متممة والتي تشتمل على ‎RNA‏ مستهدف؛ وقيم ‎TM‏ أعلى من حوالي £0 م في أوليجو نيوكليوتيدات قصيرة (على سبيل ‎١5-٠١ (JU‏ قاعدة)؛ ‎)٠‏ القدرة على نقل 0 الأوليجونيوكليوتيد بشكل فعال أو على نحو سلبي بداخل خلايا ثديية؛ و4 ) القدرة على وضع الأوليجونيوكليوتيد في عكس اتجاه النسخ: مزدوج ل هل]ة| لكي يتم مقاومة تحلل ‎RNAse‏ و ‎RNase H‏ « على الترتيب. تشتمل البنيات الأساسية التوضيحية الخاصة بأوليجونيوكليوتيدات من المادة المذكورة التي تمت حايتها على أنوع ‎Bang‏ فرعية من مروفولينو موضعة في الأشكال من ١د-‏ زء يتم ربط كل منها 5 من خلال رابطة غير مشحونة أو رابطة مشحونة بشكل موجب أو رابطة فرعية تشتمل على فسفور. يوضح الشكل رقم ١د؛‏ رابطة تشتمل على فسفور ‎lly‏ تشكل خمسة ذرات من وحدة أساسية متكررة حيث أن حلقات المورفولينو تم ربطها بواسطة رابطة ١-ذرة‏ من فوسفو أميد. يوضح الشكل رقم ١ه‏ الرابطة التي تنتج وحدة أساسية من 76- ذرات. في تلك ‎cdl‏ فإن الذرة الرابطة من لا وكربون مروفولينو *' لمجموعة الفسفور يمكن أن تكون عبارة عن كبريت؛ نيتروجين أو كريون 0 أو يفضل أكسجين. يمكن أن يكون ‎X gia‏ محلق من الفسفور والذي يمكن أن يكون عبارة عن فلورء ألكيل؛ أو أكليل به استبدال أو ألكوكسي أو ألكوكسي به استبدال أو ثيو ألكوكسي أو ثيو ألكوكسي به استبدال أو نيتروجين ليس به استبدال؛ أو به استبدال أحادي أو نيتروجين به استبدال ثنائي والذي يشتمل على بنيات حلقية مثل مركبات مركبات مورفولين أو مركبات بيبريدين. يفضل أن يشتمل ألكيل أو ألكوكسي وثيو ألكوكسي على ‎1-١‏ ذرات كربون. تكون ‎shal‏ 2 عبارة عن 5 كبريت أو أكسجين ويفضل أن تكون أكسجين. ‎TEVA‏
اج _ يتم تصميم الروابط المفضلة في الأشكال من ‎١‏ و ؛ ‎١‏ ز ‎Lad‏ يتعلق بتصميم ‎Bang‏ من ‎-١‏ ذرات في الطول من الصورة الأساسية. في البنية ‎١‏ و» فإن جزء ‎X‏ يكون كما هو موجود في البنية ‎١‏ ف و الجزء 7 يمكن أن يكون ميثيلي» كبريت؛ وبفضل أكسجين. في البنية ١زء‏ فإن أجزاء * و 7 تكون كما هي في البنية )58 وعلى نحو خاص فإن أوليجوالأوليجو نيوكليوتيدات المفضلة من مورفولينو تشتمل على تلك التي تم تكوينها من بنيات وحدة فرعية من المورفولينو من الصورة الموضحة فى الشكل رقم اه حيث تكون ‎H2‏ لاح ‎N (CH3)2‏ أو ‎-١‏ بيبرازين أو أي مجموعة مشحونة ‎(gal‏ ,7-0 و 7-0 . يمكن أن يتم تعديل الأوليجونيوكليوتيد غير المشحون وتعديله طبقاً لسمة من الاختراع لكي يشتلم على روابط مشحونة؛ على سبيل المثال؛ ما يصل لحوالى ‎١‏ لكل ١-ه‏ روابط غير مشحونة ‎«Jia‏ ‏0 4-ه كل ‎٠١‏ من الروابط غير المشحونة. في نماذج معينة فإن التحسينات في النشاط يمكن أن تتم رؤيته عندما يكون هناك حوالي 9672 من الروابطة الأساسية عبارة عن روابط كاتيونية. في تنماذ ‎(dure z‏ فإن التحسين يمكن أن تتم رؤدته فى عدد صغيرء على سبيل امثال ؛ من ‎٠١-٠١‏ ‏من الروابط الكاتيونية؛ أو حيث أن عدد الروابط لاكاتيمونية فى المدى من ‎Poe Jie 9680-5 ٠+‏ تم توفير أوليجومرات لها عدد من الروابط الكاتيونية والتي تشتمل على أوليجومرات مرتبطة على 5 نحو كاتيوني. على الرغم من ذلك يفضل أن تكون الأوليجومرات مشحونة بشكل جزئي والتي لها على سبيل ‎976-90٠١ JL‏ فى نماذج مفضلة ¢ حوالى ‎96٠‏ إلى ‎701٠‏ و يفضل ‎٠‏ إلى ‎9065٠‏ من الروابط التي تكون كاتيونية. في أحد النماذج فإن الروابط الكاتيونية يتم إدخالها بطول الصورة الأساسية. يفضل أن تشتمل الأوليجومرات المشحونة بشكل جزئي على الأقل على اثنين من الروابط غير المشحونة المتعاقبة ؛ 0 حيث يفضل أن لا يشتمل الأوليجومر على نمطي بديل بطول على كامل طوله. تم أيضاً الأخذ في الاعتبار لأوليجومرات التي تعيق الروابط الكاتيونية وتعيق الروابط غير المشحونة؛ على سبي لامثال؛ الإعاقة المركزية الخاصة بروابط غير مشحونة ‎Ally‏ يمكن أن تتم إحاطتها من خلال كتل خاصة بروابط كاتيونية أو العكس صحيح. في أحد النماذج فإن الطول ‎TEVA‏
التقريب المساوي ل 55 ؟” والمناطق المركزية والنسبة المئوية من الروابط الكاتيونية في منطقة مركزية والتي تكون ‎el‏ من حوالي ‎٠‏ 965 ويفضل أعلى من + ‎BY‏ ‏في نماذج معينة؛ فإن مركبات في عكس اتجاه النسخ يمكن تحضيرها م خلال تخليق بطور صلب متدرج. مع استخدام طرق تم تفصلها في المراجع المذكورة هنا أعلاه وفيما يلي بالنسبة لتخليق أوليجونيوكليوتيدات التي لها خليط أو روابط أساسية كاتيونية غير مشحونة أساسية؛. في بعض الحالات» يمكن أن يكون من المرغوب أن تتم إضافة أجزاء كيميائية غضافية خاصة بالمركب في عكس اتجاه النسخ؛ على سبيل ‎(JU‏ لتحسين الحركيات الدوائية أو لتسهيل التقاط أو اكتشاف المركب. يمكن أن يتم ربط الجزء المذكور بشكل تساهميل طبقاً لطرق تخليقية قياسية. على سبيل المثال؛ فإن إضافة جزيء بولي إيثيلين جليكول أو أي بوليمر آلف للماء؛ على سبيل المثال؛ 0 المشتمل على ‎Bang ٠٠١١-١‏ فرعية من المونومر يمكن أن تكون مفيدة لتحسين قابلية الإذابة. يمكن أن يتم ريط جزيء مسجل؛ مثل الفلوروسين أو مجموعة مرقمة بشكل إشعاعي لأغراض الاكتشاف. وعلى نحو بديل» فإن مرقم المسجل يمكن أن يتم ربطه مع أوليجومر يمكن أن يكون عبارة عن مركب ترابطي مثل مولد ضد أو بيوتين قادر على ربط جسم مضاد مرقم أو ستريتافيدين. في اختيار جزءِ خاص بالربط أو التعديل المركبات في عكس اتجاه ‎chan‏ من 5 المفضل على نحو عام أن يتم التوجيه لاختيار مركبات كيميائية من مجموعات تكون متوافقة من الناحية الحيوية ويمكن تحملاه من خلال الخاضع بدون تأثيرات جانبية غير مرغوية. تتراوح الأوليجومرات الخاصة بالاستخدام في الاستخدامات في عكس اتجاه النسخ بصفة عامة في الطول من حوالي ‎٠١‏ إلى حوالي ‎٠‏ 5 وحدة فرعية وبفضل ‎SST‏ من حوالي ‎٠١‏ إلى ‎Vo‏ وحدة فرعية وعلى نحو نمطي من ‎Yoo o‏ قاعدة. على سبيل ‎(JU)‏ فإن الأوليجومر من الاختراع 0 الحالي يكون له من ‎70-١9‏ وحدة فرعية من الطول المفيد فيما يتلعق بالمركب. يمكن أن يكون الأوليجومر بصفة مثالية له اثنين إلى ‎cide‏ على سبيل المثال أربعة على ثمانية روابط كاتيونية؛ على سبيل المثال» من أربعة على ثمانية وروابط كاتيوينة وروباط غير مشحونة متبقية. يكون أوليجويا لأوليجونيولكيوتيد من ‎Vom)‏ وحدة فرعية والتي لها من اثنين إلى سبعة؛ على سبيل المثال» من ‎oF‏ 4؛ أو © روابط كاتيونية والروابط غير المشحونة المتبقية. في نموذج مفضل فإن 5 الأوليجومرات يمكن أن يكون بها من 78-72 وحدة فرعية. ‎TEVA‏
PV
تحمل كل بنية حلقية من مورفولينو جزء زوج قاعدة لتشكيل متوالية من أجزاء زوج قاعدة والتي تم تصميمها بشكل نمطي فيما يتعلق بتهجين مستهدف مضاد للانتساخ في خلية أو في خاضع تمت معالجته. يمكن أن يكون ‎ea‏ الزوج عبارة عن بيورين أو بريميدين موجود في ‎DNA‏ اصلي أو ‎RNA‏ (على سبيل المثال» ‎Ge A‏ © ؛ 1 أو لا ) أو أي ‎gia‏ قياسي ‎ie‏ هيبوكسانثين ( مكون ‏5 القاعدة من نيوكليوتيد إينوسين) أو ‎=O‏ ميثيل سيتوسين. ‎Sy‏ تمت ملاحظته أعلاه؛ تم توجيه نماذج معينة إلى أوليجونيوكليوتدات تشتمل على روابط داخل ‏الوحدة والتي تشتمل على أوليجومرات ‎PMO-X‏ وتلك التي تشتمل على مجموات طرفية معدلة. ‏في بعض النماذج؛ فإن الأوليجومرات المذكورة يكون لها ألفة عالية ل ‎DNA‏ و ‎RNA‏ بالمقارنة مع ‏الأوليجومرات غير المعدلة المناظرة والديمونسترات من توصيل خلية محسنة » الفعالية و/أو 0 خصائص توزيع النسيج بالمقارنة مع أليجيومرات التي لها روابط داخل الوحدات. توضح السمات ‏البنائية خصائص أنواع الروابط والأوليجومرات التي تم وصفها بالتفصيل في المناقشة التالية. تم ‏وصف تخليق تلك الأوليجومرات وأوليجومرات ذات صلة في الطلب الأمريكي مشترك الملكية رقم ‎١/١185‏ ؛ والذي تم تضمينه هنا كمرجع. ‏في نماذج معينة؛ فإن الاختراع يوفر أوليجونيوكليوتيد له متوالية متممة لمتوالية مستهدفة والتي ترتبط مع مرض بشري وتشتمل على متوالية من النيوكليوتيدات التي لها الصيغة: ‎Rx ‏ماده‎ ‎ِ ‎Nu ‎0 ‎N ‏رخص ‏حيث تكون ‎NU‏ عبارة عن قاعدة نواة. ‏يكون ل 1 الصيغة التالية ‎TEVA q "\ R 7 2 ‏اله‎
‎Rs‏ ب تكون 0 ‎Ble‏ عن 00 ‎١‏ أو ؟؛ تكون ‎R2‏ مختارة من المجموعة المكونة من هيدروجين » 61-605 ألكيل « 61-65 أرالكيل ؛ و مجموعة فروماميدينيل ؛ و
‏5 تكون ‎R3‏ مختارة من المجموعة المكونة من هيدروجين « 01-010 أسيل « ‎C1-C10‏ أمينو أسيل ‏ جزيء أسيل من حمض أميني طبيعي أو غير طبيعي من ألفا أو بيتا « 01-010 أرالكيل »٠و ‎C1-C10‏ ألكيل ؛ أو تم ريط ‎R2‏ و ‎R3‏ لتشكيل حلقة بها 1-5 ذرات حيث يمكن الاستبدال الاختياري للحلقة بواسطة مجموعة استبدال مختارة من المجموعة المكونة من 61-610 ألكيل ؛ فينيل ؛ هالوجين ؛ و
‎C1-C10 0‏ أرالكيل ؛ تكون ‎RE‏ مختارة من المجموعة المكونة من زوج إليكترون « هيدروجين ؛ 01-66 ألكيل و 01-6 أرالكيل ؛ تم اختيار ‎RX‏ من المجموعة المكونة من ساكروسيناميد ؛ هيدروكسيل ؛ نيوكليوتيد ؛ جزءِ ببتيد مخترق للخلية ؛ و بيبرازينيل ؛ تم اختيار ‎Ry‏ من المجموعة المكونة من هيدروجين « ‎C1-C6‏ ألكيل ؛ نيوكليوتيد جزءٍ ببتيد 1 مخترق للخلية 3 ‎aan‏ أميني 3 مجموعة فروماميدينيل ¢ 9 ‎C 1 -C6‏ أسيل ¢ 9 ¢ تم اختيار ‎RZ‏ من المجموعة المكونة من زوج إليكترون ؛ هيدروجين ‏ 01-06 ألكيل ؛ و -1© يمكن اختيار نالآ من المجموعة المكونة من أدينين؛ جوانين؛ ثيمين؛ يوراسيل؛ سيتوسين؛ و هيبو كسانثين . يفضل أكثر أن يكون ‎Nu‏ عبارة عن ثيمين أو يوراسيل . 0 في نماذج مفضلة؛ يوفر الاختراع نيوكليوتيد به متوالية من نيوكليوتيد لها الصيغة : ‎TEVA‏
—¢ q—
I
TT
0
Nu 0
N
H
Ry \ ‏حيث تكون الا عبارة عن قاعدة نواة؛‎ ‏عبارة عن داي ميثيل‎ RI ‏تم اختيار 41 من المجموعة المكونة من 1" و 81”” حيث تكون‎ ‏أمينو و 417 له الصيغة‎ - 9 "\ R
ISN 2 ‏اه‎ ‏و ب‎ 5
RL ‏عبارة عن‎ RIGS ‏حيث واحدة على الأقل من‎ ‏بيبريدينيل؛‎ oa ‏تكون 0 عبارة عن 60 ١ء أو "؛ بشرط أن واحدة على الأقل من 1+ عبارة عن‎ «LSI 61-6065 ‏ألكيل»‎ C1-C5 ‏مختارة من المجموعة المكونة من هيدروجين»‎ R2 ‏تكون‎ ‎01-010 ‏مختارة من المجموعة المكونة من هيدروجين»‎ R3 ‏ومجموعة فروماميدينيل» و تكون‎ ‏أسيلء 01-010 أمينو أسيل؛ جزيء أسيل من حمض أميني طبيعي أو غير طبيعي من ألفا أو‎ 0 ‏أرالكيل» و 01-010 ألكيل؛ أو‎ C1-C10 ‏بيتاء‎ ‏ذرات حيث يمكن الاستبدال الاختياري للحلقة بواسطة‎ ١-٠ ‏و 43 لتشكيل حلقة بها‎ R2 ‏تم ريط‎ ©61- ‏فينيل» هالوجين» و‎ (JH 61-010 ‏مجموعة استبدال مختارة من المجموعة المكونة من‎
C1-C6 ‏مختارة من المجموعة المكونة من زوج إليكترون؛ هيدروجين»‎ RA ‏أرالكيل؛ تكون‎ 0 ‏ألكيل و أرالكيل؛‎ 5
TEVA
_ Qo =
تم اختيار ‎RX‏ من المجموعة المكونة من ساكروسيناميد؛ هيدروكسيل؛ نيوكليوتيد؛ جزء ببتيد مخترق للخلية؛ و بيبرازينيل؛ تم اختيار ‎Ry‏ من المجموعة المكونة من هيدروجين»؛ 61-66 ألكيل؛ نيوكليوتيد جزءٍ ببتيد مخترق للخلية؛ حمض أميني؛ ‎de sane‏ فروماميدينيل» و 61-06 أسيل؛ و؛ تم اختيار ‎RZ‏ من
المجموعة المكونة من زوج إليكترون 3 هيدروجين 3 ‎C 1 -C6‏ ألكيل ¢ 9 ‎C 1 -C6‏ أسيل أملاح مقبولة بشكل صيدلاني منها .يمكن اختيار نالا من المجموعة المكونة من أدينين؛ جوانين؛ ثيمين؛ يوراسيل؛ سيتوسين؛ و هيبو كسانثين . يفضل أكثر أن يكون ‎NU‏ عبارة عن ثيمين أو يوراسيل ‎Hs.‏ 9667-6 من ‎R 1 Cle gana‏ عبارة عن داي ‎Jie‏ أمينو (أي ’ 1 ‎R‏ ( . وعلى نحو أكثر ‎Suni‏ 9677 من مجموعات ‎RI‏ عبارة عن داي ميثيل أمينو.
يمكن اختيار ‎R1”‏ من مجموعة مكونة ‎Ue‏ ‎TEVA‏
_— \ جم ‎H HQ‏ ‎—On OC‏ ‎H ®‏ ‎CHa‏ ‏كك ‎-Of‏ ‎CH‏ ‏او و6 ‎H‏ لاحر و ‎N‏ مممعه ‎N=—CHj‏ معمعه ‎CH,‏ ‎CH,‏ ‎H 5‏ دقان ياهلا أي ‎wen‏ ‎H‏ 6 نر ‎H‏ ‎MH‏ و ‎N N H 2‏ ل ‎nN‏ معممده 0 = ان د يمل “» - ‎H 0 NH,‏ ‎Hy N_‏ ‎CH NH‏ ‎nN - N‏ ممممه ل ل( ‎nN‏ معممه ‎H H‏ ‎N S ne H‏ | ممعم بخن ‎J—NHz‏ 0 ‎HN‏ ‏يفضل على الأقل نيوكليوتيد واحد من الأوليجونيوكليوتيد الذي له الصيغة: ‎TEVA‏
وه ‎Rx‏ ‎+O‏ ‎Nu‏ ‏0 ‎H‏ و ‎Ry‏ ‏حيث تكون ‎RX‏ و ‎Ry‏ و ‎Rz‏ و ‎NU‏ كما تم توضيحه أعلاه. يفضل أكثر أن تكون ‎Nu‏ عبارة عن ثمين أو يوراسيل. على الرغم من ذلك يفضل أن يكون ثيمين ‎(T)‏ عبارة عن جزيء مزدوج ‎NU)‏ أو ‎(Pi‏ يشتمل على تعديلات كيميائية تم وصفها أعلاه؛ ‎(gly‏ وحدة فرعية لقاعدة معروفة للشخص الماهر في المجال والتي يمكن استخدامها في شكل ‎ein‏ مزدوج من قاعدة. ب-مرسلات الببتيد يمكن أن تشتمل أوليجوالأوليجو نيوكليوتيدات من الاختراع على جزيء أوليجو نيوكلوبتيد يتم تضمينه بداخل ‎CPP‏ ؛ يفضل جزيء ناقل ببتيد غني بالأرجينين فعال لتحسين المركب بداخل 0 الخلايا. يفضل أن يتم ربط الجزيء الناقل بالطرف الخاص بالأوليجومر كما هو موضح؛ على سبيل المثال؛ في الشكل رقم ١ب‏ و١ج.‏ يكون للببتيد قدرة حث اختراق الخلية باستخدام ‎٠‏ 967؛ ‎PA 9676-6 9650 Yor 6‏ 9696 أو ‎901٠00‏ من الخلايا لمجموعة مزرعة خلية معينة والتي تشتمل على أعداد بينها وتسمح بنقل الموضع في الجزيئات الكبيرة بداخل أنسجة متعددة في الكائن الحي عند الإعطاء الذي يشمل الجسم كله. في أحد النماذج فإن ببتيد اختراق 5 الخلية يمكن أن يكون عبارة عن ناقل ببتيد غني بالأرجينين. في نموذج آخر فإن ببتيد اختراق الخلية ‎(Sa‏ أن يكون عبارة عن اختراق أو ببتيد 188. تكون تلك الببتيدات معروفة في المجال وتم الكشف عنهاء على سبيل المثال» في نشرة البراءة الأمريكية رقم ‎70١٠0 / 11-٠015718‏ ؛ والتي تم تضمينها هنا كمرجع بكاملها. يمكن الوصول لطريقة مفضلة بشكل خاص للترافق خاص ‎TEVA‏
ارج ببتيدات مع أوليجونيوكليوتيدات في عكس اتجاه النسخ في نشرة 0071 للطلب الدولي رقم ‎١٠007‏ والذي تم تضمينه هنا كمرجع بكامله. يستخدم نموذج مفضل من ببتيد أوليونيوكليوتيد مترافق من الاختراع الحالي جلايسين في شكل رابط بين ‎CPP‏ والأوليجونيوكليوتيد في عكس اتجاه النسخ. على سبيل المثال؛ فإن الببتيد المفضل المترافق مع ‎PMO‏ يتكون من ‎.R6-G-PMO 5‏ تم توضيح أجزاء ناقل كا تم وصفها أعلاه لكي يتم التحسين الكبير لمدخل الخلية الخاصة بأوليجوميرات تم ريطها لامتصاص الأوليجومر في غياب الجزيء الناقل. يفضل أن يتم تحسين الامتصاص عند عشرة أضعاف فقط ويفضل أكثر عند اثنين وعشرين ضعفاً بالنسبة لمركب غير مترافق. 0 إن استخدام نواقل ببتيد غنية بأرجينين (أي ببتيدات اختراق الخلية) تكون مفيدة بكشل خاص في ممارسة الاختراع الحالي. تم توضيح نواقل ببتيد معينة حيث أنها فعالة بشكل عال عند توصيل مركبات في عكس اتجاه النسخ من الخلايا ‎Allg‏ تشتمل على خلايا عضلية ( ‎Marshall, Oda‏ ‎et al. 2007; Jearawiriyapaisarn, Moulton et al. 2008; Wu, Moulton et al.‏ 2008(. بالإضافة إلى ذلك وبالمقارنة مع مرسلات الببتيد المعروفة مثل بنتراتي ويبتيد ‎Tat‏ ؛ فإن النواقل التي تم وصفها هنا عندما يتم ترافقها مع ‎PMO‏ في عكس اتجاه النسخ توضح القدرة المحسنة لتغيير الشق الخاص بنواتج انتساخ الجينات المتعددة )2007 ‎.(Marshall, Oda et al.‏ تم وصف النماذج المفضلة من مترافقات ناقل مروفولينو -ببتيد في الطلب الدولي رقم ‎١1007‏ والذي تم تضمينه هنا بكامله كمرجع. تشتمل ناقل الببتيد التوضيحة ؛ باستثناء 0 الروابط فيما يلي في الجدول رقم ‎١‏ .
TEVA
مه الجدول رقم ‎١‏ نواقل الببتيد التوضيحية الاسم (التحديد) المتوالية رقم هوية المتوالية ‎NOa‏ ‎(mw‏ ‎(ew‏ ‎I Es I‏ ‎Ya RAhxRRBRRAhxRRBR (RAhXRRBR)2;‏ = ‎TEVA‏
Coon ©, 6, ‏الارتباط (على سبيل المثال»‎ gia ‏متواليات محددة برقم المتواليات والتي لا تشتمل على‎ 8 ‏و 8 تشير إلى حمض ١-أمينو هيكسانوبك و بيتا -ألانين؛‎ Ahx cus ‏؛‎ ©, Ahx, 8, 8 ‏على الترتيب).‎ ‏ج-نواقل التعبير‎ ‏فإن الاختراع يشتمل على نواقل تعبير خاصة باتلعبير عن متواليات تستهدف‎ piled ‏في أحد‎ 5 ‏ديستروفين تم وصفها هنا في الخلايا. تكون أنظمة توصيل الناقل قادرة على التعبير عن متواليات‎ ‏فإن النواقل المذكورة تعبر‎ er laid) ‏تستهدف ديستروفين أوليجومرية من الاختراع الحالي. في أحد‎ ‏نوكليوتيدات مترابطة على الأقل من واحد‎ ٠١ ‏عن متوالية بولي نيوكليوتيد تشتمل على الأقل على‎ ‏في نموذج آخرء فإن تلك النواقل تعبر عن متوالية بولي نيوكليوتيد‎ .5-١ ‏أو أكثر م متواليات‎ ‏تكون نواقل التعبير المناسبة لتوصيل الجين‎ .0-١ ‏تشتمل على واحدة أو أكثر من المتواليات‎ 0 ‏معروفة في المجال. يتم تعديل نواقل التعبير المذكورة للتعبير عن متواليات تستهدف ديستروفين تم‎
Glia ‏وصفها هنا. تشتمل نواقل التعبير التوضيحية على جزيئات بولي نيولكيوتيد؛ ويفضل‎ ‏والتي تم اشتقاقهاء على سبيل المثال؛ من بالزميد؛ ملتهمة بكتيرية أو فيروس (على سبيل‎ DNA ‏إلخ) والذي يمكن بداخله إدراج‎ co ad) ‏المثال» فيروس غدي؛ وفيروس مرتبط بالغدة؛ الفيروس‎ ‏البولي نيوكليوتيد أو انتساخه. يفضل أن يشتمل الناقل على واحد أو اكثر من مواضع التقييدات‎ 5 ‏الفريدة ولاتي تكون قادرة على الانتساخ الفردي في خلية عائل محدد والتي تشتمل على خلية‎ ‏مستهدفة أو نسيج أو خلية إنذار أو نسيج منها أو تكون قابلة للتكامل مع الجينوم من عائل محدد‎ ‏بحيث أن المتوالية المستنسخة تكون قابلة لإعادة الانتساخ. ونتيجة لذكل فإن الناقل يمكن أن يكون‎ ‏عبارة عن ناقل انتساخ مستقل» أي» ناقل يوجد في شكل كيان كروموسومي خارجي؛ يكون‎ ‏الانتساخ الخاص به مستقلاً عن انتساخ الكروموسوم؛ على سبي لامثال؛ بالزميد خطي أو بلازميد‎ 0 ‏دائري مقفل وعنصر كروموسومي زائد وكروموسوم دقيق أو كروموسوم صناعي. يمكن أن يشتمل‎ ‏الناقل على أي وسائل خاصة بتحديد الانتساخ الذاتي. وعلى نحو بديل فإن الناقل يمكن أن يكون‎
TEVA
‎h —_‏ جم أحد النواقل التي عندما يتم إدخالها في خية العائل تكون متكاملة مع الجنيوم ويتم الانتساخ معا بداخل الكروموسوم (الكروموسومات) التي تم تكاملها معها . في أحد التماذ جٍ تشتمل نواقل التعبير على معزز ‎sald‏ بنسيج؛ على سبيل المثال ؛» معزز ‎sald‏ ‏بعضلة و/أو محسن والذي يعمل على تحسين التعبير عن متواليات تستهدف ديستروفين أوليجومرية تم وصفها هنا في خلايا معينة أو نسيج محل الاهتمام (على سبيل المثال؛ في العضلة). يمكن أن تكون متواليات المعزز ونواقل التعبير مناسبة للتعبير في خلايا العضالات والتي تشتمل»؛ على تلك التي تم وصفها في الطلب الأمريكي رقم ‎١7172874/70911‏ وقد تم تضمين محتويات كاملة هنا كمرجع. تشتمل أمثلة معززات خاصة بالعضلة التوضيحية» على معزز ديسمين؛ معزز كيناز كرياتينين عضلة ‎(MOK)‏ ومعزز 013 ومعزز ألفا -أكتيني هيكلي 0 أو معزز تروبونين | تم الوصف الإضافي لمعززات خاصة بالعضلة؛ على سبيل المثال؛ في ‎Talbot et al., Molecular Therapy (2010), 18(3): 601-608; Wang et al.,‏ ‎Gene Therapy (2008), 15(22): 1489-99; and Coulon et al., Journal of‏ ‎.Biological Chemistry (2007), 282(45): 33192-33200‏ ‎Ea _ I‏ وطرق الإعطاء في نماذج معينة؛ يوفر الاختراع الحالي صيغ أو تركيبات مناسبة للتوصيل العلاجي لأوليجومرات عكس اتجاه النسخ كما تم وصفه هنا. في نماذج معينة؛ يوفر الاختراع الحالي صيغ أو تركيبات مناسبة للتوصيل العلاجي من أوليجومرات في عكس اتجاه النسخ كما تم وصفه هنا. وبالتالي وفي نماذج معينة؛ فإن الاختراع يوفر تركيبات صيدلانية التي تشتمل على كمية فعالة بشكل علاجي من واحدة او أكثر من الأوليجومرات التي تم وصفها هناء التي تمت صياغتها مع واحدة أو اكثر من 0 المواد الحاملة المناسببة (مواد الإضافة) و/أو المواد المخففة. وعلى الرغم من أنه من الممكن للأوليجومرات من الاختراع الحالي أني تم إعطاؤها بمفرده؛ من المفضل أن يتم الإعطاء للمركب في شكل صيغة صيدلانية (تركيبة). تم وصف طرق توصيل جزيئات الحمض النووي 3 على سبيل المثال 3 في : ‎TEVA‏
لاج ‎Akhtar et al., 1992, Trends Cell Bio., 2:139; and Delivery Strategies for‏ ‎Antisense Oligonucleotide Therapeutics, ed. Akhtar; Sullivan et al., PCT‏ 4/7059 ؛ يمكن استخدام تلك البروتوكولات وبروتوكولات أخرى للتوصيل الافتراضي لأي جزيء حمض نووي بما في ذلك الأوليجومرات المعزولة من الاختراع الحالي. وكما تم وصفه فيما يلي فإن التركيبات الصيدلانية من الاختراع الحالي يمكن صياغتها بشكل خاص فيما يتعلق بالإعطاء في صورة صلبة أو سائلة؛ والتي تشتمل على تلك التي تمت تهيئتها ‎Lad‏ يتعلق بما يلي: ‎)١(‏ الإعطاء عن طريق الفم؛ على سبيل ‎(JE‏ مستحضرات الشرب (محاليل مائية أو غير مائية أو معلقات)؛ أقراص؛ على سبيل المثال؛ تلك التي تستهدف الشدقيقن أو تحت الجلد أو الإعطاء الذي يعمل الجسم كله بجرعات كبيرة أو مساحيق او حبيبات أو عجائن خاصة 0 بالإعطاء للسان؛ (7) الإعطاء عن غير طريق القناة الهضمية؛ على سبيل ‎(JU)‏ تحت الجلد أو بداخل العضلات أو في الوريد أو الحقن في البشرة؛ مثل؛ على سبيل المثال؛ محاليل معقمة او معلقات أو صيغ بإطلاق مستمر؛ )7( الاستخدام الموضعي؛ على سبيل المثال؛ كريم؛ مرهم أو لاصقة بإطلاق يتم التحكم فيه أو رش يتم وضعه على الجلد؛ (4) بداخل المهبل أو بداخل المستقيم» على سبيل المثال» مثل تحميلة أو كريم أو سائل رغوي؛ )0( تحت اللسان؛ )1( تحت 5 اللسان؛ (1) في العين؛ ‎(V)‏ عبر اللسان؛ ‎(A)‏ في الأنف. يشير المصطلح "مقبول بشكل صيدلاني" والذي تم استخدامه هنا إلى تلك المركبات والمواد والتركيبات و/أو صور الجرعة لويت تكون في مجال القياس الطبي السليم والمناسب لاستخدامه في ارتباط مع الانسجة أو الأشخاص والحيوانات بدون السمية الزائدة أو الاحتكاك أو الاستجابة الخاصة بالحساسية أو أي مشكلة أو مضاعفات أو المترابطة مع الفائدة الطبيعية /نسبة الخطورة. 0 بشير المصطلح 'مادة حاملة مقبولة صيدلانياً” كما تم استخدامه هنا إلى ‎sale‏ حاملة مقبولة بشكل صيدلاني وتركيبة أو ‎sale‏ ناقلة ‎sale Jie‏ سائلة أو مادة ملء صلبة أو ‎sale‏ مخففة أو سواغ أو وسيلة مساعدة في التصنيع (على سبيل ‎sabe (JU)‏ مزلقة؛ ماغنسيوم تلك؛ كالسيوم أو سيتياارت زنك أو حمض سيتياريك) أو ‎sale‏ مكبسلة لمذيب؛ يتم تضمينها في حامل أو نقال خاص بمركب خاضع من أحد الأعضاء أو جزءِ من الجسم لكائن آخر أو ‎gia‏ من الجسم. يجب أن تكون كل
TEVA
CoA- ‏مادة حاملة 'مقبولة" في سياق أن تكون متوافقة مع المكونات الأخرى من الصيغة وغير ضارة‎ ‏على‎ (Naa ‏تشتمل بعض أمثلة المواد التي يمكن استخدامها في شكل مواد حاملة مقبولة بشكل‎ ‏البراشيم‎ (Y) ‏سكريات؛ مثل اللاكتوز؛ والجلوكوز والسكروز؛‎ )١( ‏سبيل المثال لا الحصر على:‎ ‏مثل برشامة النشا أو البطاطا؛ )7( السيليلوز» ومشتقاتها مثل كريو ميثيل سيليلوز صوديوم؛ إيثيل‎ 5 (A) ‏تلك؛‎ (V) ‏سيليلوز وأسيتات سيليلوز؛ (؛) صمغ كثيرات مسحوق؛ )0( شعير؛ )1( جيلاتين؛‎ ‏سواغات مثل زبدة الكاكاو وشموع خاصة بالتحميلة؛ (1) زيوت؛ مثل زيت الفول السوداني وزيت‎ )٠١( ‏بذرة القطن وزيت العصفر وزيت السمسم وزيت الزيتون وزيت الذرة وزيت فول الصويا؛‎ ‏مركبات بوليول مثل الجلايسين والسوربيتول‎ )١١( ‏مركبات جليكول مثل بولي بروبيلين جليكول؛‎ lal (VF) ‏إسترات مثل إيثيل أوليات وإيثيل ليورات؛‎ (VY) ‏والمانيتول وبولي إيثيلين جليكول؛‎ 0 ‏حمض ألجينيك؛‎ (V0) ‏عوامل منظمة مثل هيدروكسيد الماغنسيوم؛ هيدروكسيد ألومنيو؛‎ )٠؟(‎ (V9) ‏محلول رنجر؛‎ (VA) ‏محلول ملحي متساوي التوتر؛‎ (VV) ‏ماخالي من البروجين؛‎ (VT) ‏مركبات بوليستر؛ بولي كربونات و/أو‎ )7١( ‏محاليل منظمة للرقم الهيدروجين؛‎ )٠١( ‏كحول إيثيل؛‎ ‏ومواد متوافقة غير سمة أخرى يتم استخدامها في الصيغ الصيدلانية.‎ (YY) ‏بولي أنهيدريدات؛ و‎ ‏تشتمل الأمظة الإضافية غير الحصرية من العوامل المناسبة للصياغة مع أوليجومرات مضادة‎ 5 ‏أحماض نووية مترافقة مع‎ (PEG ‏للانتساخ من الاختراع الحالي على: أحماض نووية مترافقة مع‎ ‏شحم فوسفو» وأحماض نووية» أجزاء آلفة للشحم تشتمل على أحماض نووية؛ مركبات فوسفورو‎ ‏والتي يمكن أن تحسن من دخول‎ (Pluronic P85 ‏ثيوات؛ ومثبطات © - جليكويروتين (مثل‎ - DL) ‏العقاقير في الأنسجة المختلفة؛ وبوليميرات قابلة للتحلل الحيوي مثل كريات دقيقة بولي‎ (Emerich, D F et ‏الاكتيد- جليكوليد مشترك) فيما يتعلق بتوصيل إطلاق مستمر بعد الزراعة‎ 0 al., 1999, Cell Transplant, 8, 47-58) Alkermes, Inc. Cambridge, Mass ‏وجسيمات في حجم النانو محملة مثل تلك التي تم تحضيرها من بولي بيوتيل سيانو أكلريلات والتي‎
Prog ( ‏الدم في المخ وتغير من آليات الامتصاص العصبي‎ Sala ‏يمكن أن توصل العقاقير عبر‎ -(Neuropsychopharmacol Biol Psychiatry, 23, 941-949, 1999
TEVA
-4ه- يوضح الاختراع أيضاً سمات استخدام تركيبة تشتمل على جسيمات دهنية معدلة للسطح والتي تشتمل على شحومات بولي ((إيثيلين جليكول) ‎PEG)‏ معدل؛ ومترفعة وغير متفرعة أو توليفاتمنها أو جسيمات دوارة على المدى الطويل منها أو جسيمات شحمية قذفية). يمكن أن تشتمل الأوليجومرات الخاصة بالاختراع على جزيئات ‎PEG‏ مرتبطة بشكل تساهمي من أوزان جزيئية مختلفة. تعرض تلك الصيغ طريقة خاصة بزيادة التراكم للعقاقير في أنسجة مستهدفة. تكون تلك الفئة من المواد الحاملة للعقاقير مقاومة للطهايات ويتم القضاء عليها من خلال نظام الاتلهام أحادي نووي ‎MPS)‏ أو ‎Madly (RES‏ توفير أزمنة دورات في الدم أطول وتحسين تعرض النسيج لعقار تمت كبسلته ( :2601-2627 ,95 ,1995 ‎Lasic et al. Chem. Rev.‏ ‎(Ishiwata et al., Chem. Pharm. Bull. 1995, 43, 1005-1011‏ أوضحت الجسيمات الشحمية المذكورة أنها تتراكم بشكل انتقائي في الأورام وعلى نحو مفترض بواسطة الانصباب والإمساك في أنسجة مستهدفة وعائية جديدة ),267 ,1995 ‎Lasic et al., Science‏ ‎Oku et al., 1995, Biochim. Biophys. Acta, 1238, 86-0‏ (1275-1276). تحسن جسيمات التدوير الطويلة من الخصائص الصيدلانية والحركيات الدوائية ل ‎RNA 5 DNA‏ ؛ وعلى نحو خاص بالمقارنة مع جسيمات شحمية كاتيونية تقليدية والتي تكون معروفة لاحتوائيها 5 في الأنسجة الخاصة ب ‎Liu et al, J. Biol. Chem. 1995, 42, 24864-( MPS‏ ‎Choi et al., International PCT Publication No. WO 96/10391;‏ ;24870 ‎Ansell et al., International PCT Publication No. WO 96/10390; Holland et‏ ‎.(al., International PCT Publication No. WO 96/10392‏ تكون الجسيمات الشحمية الخاصتب التدوير محتملة أن تحمي العقاقير من التحلل النووي إلى مدى أكبر بالمقارنة مع 0 جسيمات كاتيونية بالاعتماد على قدرة تجنب التراكب في أنسجة ‎MPS‏ متراكمة ومكافحة بشكل أيضي مثل الكبد والطحال. في نموذج إضافي فإن الاختراع الحالي يشتلم على تركيبات أوليجومر تم تحضيره للتوصيل كما تم وصفه في البراءة الأمريكية رقم ‎1197491١‏ ورقم 121371458 ورقم ‎BLY OY ALY‏ هذا السياق؛ وفي أحد النماذج فإن الاختراع الحالي يوفر أوليجومر من الاختراع الحالي في تركيبة تشتمل على 5 بوليمرات خاصة باللايسين والهيستيدين ‎WS) (HK)‏ تم وصفه في البراءة الأمريكية رقم ‎VATYTA0‏
TEVA qa
PEG ‏(على سبيل المثال»؛‎ (PEG) ‏بمفردها أو في توليفة مع‎ 1,19791١1 ‏ورقم 801١لا ورقم‎ ‏وجزيء مستهدف أو اي مما‎ PEG ‏متفرغة أو غير متفرعة أو خليط من كل منها) في توليفة مع‎ ‏يوفر الاختراع الحالي أوليجومرات في‎ dima ‏سبق في توليفة مع عامل ربط تشابكي. في نماذج‎ ‏عكس اتجاه النسخ في تركيبات تشتمل على بولي هيستيدين معدل لحمض جلوكونيك أو بولي‎ ‏هيستيدن معالج بجلوكونيلات / ترانسفيرين -بولي ليسين. سوف يتعرف الماهر في المجال على‎ 5 ‏5لاا والتي يمكن أن يتم استبدالها بداخل‎ His ‏الأحماض الأمينية التي لها خصائص مشابهة ل‎ ‏التركيبة.‎ ‏يمكن أن تشتمل نماد معينة من الأوليجومرات التي تم وصفها هنا على مجموعة وظيفية أساسية؛‎ ‏وبالتالي؛ تكون قادرة على تشكيل أملاح مقبولة بشكل صيدلاني مع‎ gual ‏مثل أمينو أو ألكيل‎ ‏أحماض مقبولة بشكل صيدلاني. تشير "الأملاح المقبولة بشكل صيدلاني" في هذا السياق إلى‎ 0 ‏أملاح إضافة غير سامة؛ غير عضوية وعضوية من المركبات الخاصة بالاختراع الحالي. يمكن‎ ‏تحضير تلك الأملاح في الموضع في مادة ناقلة خاصة بالإعطاء او صورة جرعة من عملية‎ ‏التصنيع أو من خلال تفاعل منفرد لمركب نقي من الاختراع في صورة القاعدة الحرة منه مع‎ ‏حمض عضوي أ وغير عضوي مناسب وعزل الملح وبالتالي التشكيل أثناء التنقية التالية. تشتمل‎ ‏الأملاح التوضيحة؛ على هيدرويروميد» هيدروكلوريد» وكبريتات وبيكبربتات وفوسفات ونترات‎ 5 ‏وأسيتاتوفاليرات وأوليات وبالميتات وسيتيارات وليورات»؛ وبنوزات ولاكتات وفوسفات؛ وتوسيلات‎ ‏وسيترات ومالييات وفيومرات؛ وسكسينات وطرطرات ونفيلات وميسيلات وجلوكوهيبتونات‎
Berge et al. ‏ولاكتويوانات وأملاح ليوريل سولفونات وما شابه ذلك. (انظر؛ على سبيل المثال»‎ .))1977( "Pharmaceutical Salts’, J. Pharm. Sci. 66:1-9 ‏تشتمل الأملاح المقبولة بشكل صيدلاني من أوليجومرات الاختراع على أملاح غير سامة تقليدية‎ 0 ‏من أحماض غير سامة أو أحماض‎ (JE ‏أو أملاح أمونيوم رباعية من المركبات؛ على سبيل‎ ‏تشتمل أملاح غير سامة تقليدية على تلك التي تم اشتفاقها من‎ (Jia) ‏غير عضوية. على سبيل‎ ‏هيدروكلوريد وحمض هيدرويروميك وحمض كبربتيك حمض سولفاميك‎ Jie ‏أحماض غير عضوية‎
Jie ‏وحمض فسفوريك وحمض تيتريك وما شابه ذلك؛ وأملاح تم تحضيرها من أحماض عضوية‎ ‏حمض أسيتيك وحمض بروبيونيك وحمض مكسينيك وجليكوليك» وحمض ستتياريك وحمض‎ 5
TEVA
-)١- ‏وحمض طرطريك وحمض سيتربك؛ وحمض أسكوربيك وحمض بالميتيك‎ dll ‏لاكتيك» وحمض‎ ‏وحمض ماليك؛ وهيدروكسي ماليك؛ وفينيل لاكتيك وجلوتاميك ؛ وحمض بنزويك؛ حمض‎ ‏ساليسيكليك وسولفاميليك » 7-أسيتوكسي بنزويك» فيوماريك؛ تولوين سولفونيك؛ وميثا سولفونيك؛‎ ‏وغيثا نداي سولفونيك؛ أوكساليك؛ وأيزو ثيونيك؛ وما شابه ذلك.‎ في نماذج معينة؛ فإن الأوليجومرات من الاختراع ‎Jal‏ يمكن أن تشتمل على واحدة أو أكثر من مجموعات وظيفية حمضية وبالتالي؛ تكون قابلة لتشكيل أملاح مقبولة بشكل صيدلاني مع قواعد مقبولة بشكل صيدلاني. تشير أملاح مقبولة بشكل صيدلاني" في تلك الأمثلة إلى أملاح إضافة قاعدة عضوية وغير عوضية وغير سامة إلى حد كبير من المركبات الخاصة بالاختراع الحالي. يمكن تحضير تلك الأملاح على مماثل في الموضع وفي ناقل ‎ald‏ بالإعطاء أو عملية تصنيع 0 صورة جرعة أو من خلال التفاعل على نحو منفصل لمركب منقى في صورة الحمض الحر الخاص به مع قاعدة مناسبة مثل الهيدروكسيد؛ الكريونات؛ أو البيكريونات أو كاتيون فلزي مقبول بشكل صيدلاني مع أمونيا أو مع جزءِ أساسي عضوي مقبول بشكل صيدلاني؛ أو أمين ثانوي أو أمين ثلاثي. تشتمل الأملاح الأرضي القولية أو أملاح أقلاء توضيحية على ليثيوم وصوديوم وبوتاسيوم وكالسيوم وماغنسيوم وأملاح ألومنيوم وما شابه ذلك. تكون الأمينات العضوية 5 التوضيحية المفيدة لتكوين أملاح إضافة قاعدة مشتملة على إيثيل أمين وداي إيثيل أمين وايثيلين داي أمين؛ وإيثانول أمين وداي إيثانول أمين ويبرازين وما شابه ذلك (انظرء على سبيل المثال؛ ‎.(Berge et al., supra‏ يمكن أن توجد عوامل الترطيب والمستحلبات والمزلقات مثل كبريتات لوريل صوديوم وسيتيارات ماغنسويم وعوامل مولونة وعوامل إطلاق وعوامل تغليف ومواد محلية وعوامل إعطاء نكهة وعوامل 0 تعطير ومواد حافظة ومواد مضادة للأكسدة في التركيبة. تشتمل أمثلة مضادات الأكسدة المقبولة بشكل صيدلاني على: (١)مضادات‏ الأكسدة القابلة للذويان في الماء؛ ‎Jie‏ حمض اسكوربيك وسيستين هيدروكلوريد وبيكبريتات صوديوم وميتا بيس كبربتيت وكبريتيد صوديوم وما شابه ذلك؛ (7)مضادات أكسدة قابلة للذويان في الزيت مثل بالميتات أسكوربيل وهيدروكسي أنيسول معالج بالبيوتيل (811/8)؛ هيدروكسي تولوين معالج بالبيوتيل 5 (8111)؛ وليسيثين» وبروبيل جلاات وألفا توكوفيرول وما شابه ذلك؛ و (3) عوامل خلابية فلزية؛
TEVA vy ‏وسوربيتول وحمض‎ (EDTA) ‏حمض سيتياربك وحمض تترا أسيتيك إيثيلين داي أمين‎ Jia ‏طرطريط وحمض فسفوربك وما شابه ذلك.‎ ‏تشتمل صيغ الاختراع الحالي على تلك المناسبة للإعطاء في الفم؛ الأنف؛ الإعطاء الموضعي (بما‎ ‏في ذلك في الشدقين؛ تحت اللسان) في المستقيم؛ المهبل و/أو الإعطاء في عن غير طريق القناة‎ ‏الهضمية. يمكن عرض الصيغ بشكل مناسب في صورة جرعة وحدة ويمكن أن يتم تحضيرها‎ 5 ‏باستخدام طرق معروفة في مجال الصيدلة. تتنوع كمية المكون الفعال الذي يتم دمجه في المادة‎ ‏الحاملة لإنتاج صورة جرعة منفردة بالاعتماد على العائل الذي تمت معالجته والمسار المعين‎ ‏الخاص بالإعطاء. سوف تكون كمية المكون الفعال الذي يتم دمجه مع المادة الحاملة لإنتاج صورة‎ ‏ومن‎ dale ‏في كمية من المركبات التي تنتج تأثيراً علاجياً. ويصفة‎ dale ‏جرعة منفردة بصفة‎ ‏من المائة غلى حوالي‎ 0,١ ‏النسبة المئوية التي تساوي مائة فإن مقدار المدى يكون بين حوالي‎ 0 967٠0 ‏تسعة وتسعون من المائة من المكون الفعال ويفضل أن يكون من حوالي © 96 إلى حوالي‎ . 707 ٠ ‏إلى حوالي‎ 90٠١ ‏ويفضل من حوالي‎ ‏في نماذج معينة؛ يشتمل مستحضر الاختراع الحالي على سواغ تم اختياره من مركبات سيكلو‎ ‏ديكستيرين» مركبات سيليلوز جسيمات شحمية وعوامل مشكلة للميزيلات على سبيل المثال» أملاح‎ ‏الصفاء؛ ومواد حاملة بوليميرية؛ على سبيل المثال؛ بوليسترات وبولي أنهيدريدات وأوليجومر من‎ 5 ‏الاختراع الحالي. في نماذج معينة فإن المستحضر المذكور فيما سبق يقلل الإتاحة الحيوية في الفم‎ ‏للأوليجومر الخاص بالاختراع الحالي.‎ ‏تشتمل طرق تحضير الصيغ المذكورة أو التركيبات على خطوة ربط أوليجومر الاختبار الحالي مع‎ ‏نحو اختياري واحد أو أكثر من المكونات الإضافية. بصفة عامة فإ الصيغ يتم‎ eg ‏مادة حاملة؛‎ ‏بشكل أساسي في الارتباط مع مركب الاختراع الحالي ومع المواد‎ Tang ‏تحضيرها بشكل منتظمة‎ 0 ‏الحاملة السائلة أو المواد الحاملة الصلبة المقسمة بشكل دقيق أو كل منها وبعد ذلك إذا كان ذلك‎ ‏ضرورياً تشكيل المنتج.‎ ‏يمكن أن تكون صيغ الاختراع الحالي المناسبة للإعطاء عن طريق الفم في صورة كبسولات أو‎ ‏براشيم أو حبوب أو أقراص أو أقراص معينة الشكل (باستخدام قاعدة نكهة وعلى نحو خاص‎
TEVA
ا سكروز وصمغ عربي أو صمغ كثيراء)؛ مساحيق وحبيبات أو في شكل محلول أو معلق في سائل مائي أو سائل غير مائي او في شكل مستحلب سائل زيت في ماء أو ماء في زيت أو في شكل إكسير أو شراب أو أقراص سكرية (تستخدم قاعدة خاملة ‎Jie‏ الجيلاتين أو الجيلايسين أو السكروز وصمغ عربي) و/أو في شكل غسولات للفم وما شابه ذلك وتشتمل كل منها على كمية محددة بشكل مسبق من مركب الاختراع الحالي في شكل مكون فعال. يمكن إعطاء أوليجومر الاختراع الحالي في شكل جرعة كبيرة أو في شكل معجون أو عجينة. في صور الجرعة الصلبة من الاختراع الخاصتب الإعطاء في الفم (كبسولات؛ أقراص؛ حبوب ملبسات؛ مساحيق؛ حبيبات وتحاميل وما شابه ذلك)؛ يمكن أن يكون المكون الفعال مختلطاً مع واحدة أو أكثر من المواد الحاملة المقبولة بشكل صيدلاني مثل سترات الصوديوم أو فوسفات ثنائية 0 الصوديوم و/أو أحد ما يلي: ‎)١(‏ مواد ملء أو مواد تمديد مثل أنواع النشا واللاكتوز والسكروز والجلوكوز والمانيتول و/أو حمض سيليك؛ ‎)١(‏ مواد رابطة مثل؛ على سبيل ‎Jal)‏ كربوكسي مييل سيليوز» مركبات ألجينات؛ وجيلاتين؛ ويولي فينيل بيروليدون وسسكروز و/أو صمغ عربي؛ )7( تحميلات ‎Jie‏ الجليسيرول»؛ (4؛) عوامل مشتتة ‎Jie‏ آجار- ‎lal‏ كريونات كالسيوم وبطاطس و ‎(Souls Las‏ حمض ألجينيك؛ وسيليكات معينة وكروبنات صوديوم؛ )2( عوامل إعاقة للمحلول مثل 5 البرافين؛ )1( مواد تسريع امتصاص مثل كربونات أمونيوم رباعية و/أو مواد خافضة للتوتر السطحي ‎Jie‏ بوليكسامير وكبربتات لوريل صوديوم؛ ‎(V)‏ عوامل ترطيب؛ مثل؛ على سبيل المثال؛ كحول سيتيل؛ جليسيرو مونو سيتيارات ومواد خافضة للتورت غير أيونية؛ ‎(A)‏ مواد ماصة مثل؛ كوالين وصلصال ينتونيت؛ (1) مواد مزلقة مثل التلك؛ سييتيارات كالسيوم؛ سيتيارات ماغنسيوم؛ ومركب جليكولا بولي إيثيلين صلب؛ كبربتات لوريل صوديوم» وسيتيارات زنك؛ سيتيارات صوديوم؛ 0 حمض سيياريك» وخلائط منها؛ ‎)٠١(‏ عوامل تلوين ؛ ‎)١١(‏ عوامل إطلاق متحكم فيه ‎Jie‏ ‏كروسبوفيون او سيليلوز إيثيل. في حالة الكبسولات» فإن الأقراص والحبوب والتركيبات الصيدلانية يمكن أن تشتمل أيضاً على عوامل منظمة.يمكن استخدام تركيبات صلبة من نفس النوع مثل مواد الملء في كلسولات جيلاتين صلبة الغلاف باستخدام سواغات مثل لاكتوز أو سكريات حليب وأيضاً مركبات بولي إيثلين جليكول بوزن جزيئي عال وما شابه ذلك. ‎TEVA‏ vg
‎(Sa‏ تحضير القرص بواسطة الضغط أو القولبة؛ وعلى نحو اختياري باستخدام واحد أو أكثر من المكونات الإضافية. يمكن تحضير الأقراص التي تم ضغطها باستخدام مادة رابطة (على سبيل ‎(Jal)‏ جيلاتين أو هيدروكسي بروبيل ميثيل سيليلوز)؛ مادة مزلقة مادة مخففة خاملة؛ مادة حافظة؛ مادة مشتتة (على سبيل ‎(JU)‏ جليكوليات نشا صوديوم أو كربوكسي ميثيل سيليلوز صوديوم مرتبط على نحو تشابكي)؛ عامل فعال عند السطح أو عامل تشتيت. يمكن تحضير أقراص مقولبة من خلال عملية قولبة في آلة منسابة لخليط من مركب مسحوق يتم ترطيبه بمادة
‏مخففة سائلة خاملة. يمكن وضع الأقراص وصور الجرعة الصلبة الأخرى من التركيبات الصيدلانية من الاختراع الحالي مثل الملبسات والكبسولات والحبوب والجبيبات بشكل اختياري في شكل منتج بدرجات أو يتم 0 تحضيرها مع تغليفات وغلافات؛ ‎Jie‏ تغليفات معوية وتغليفات أخرى معروفة في مجال الصياغة الصيدلانية. يمكن صياغته أيضاً بحيث يوفر إطلاق متحكم فيه بطيء من المكون الفعال هنا باستخدام هيدروكسي ‎dag‏ ميثيل سيليل في نسب متغيرة لكي يتم توفير شكل الإطلاق المطلوب؛ وقوالب بوليمرية أخرى وجسيمات شحمية و/أو كريات دقيقة. يمكن صياغتها لإطلاق سريع»؛ على سبيل المثال؛ تكون مجففة بالتجميد. يمكن أن تكون معقمة؛ على سبيل المتال؛ من خلال الترشيح 5 خلال مرشح يشتمل على بكتريا أو من خلال تضمين عوامل تعقيم في صورة تركيبات صلبة معقمة والي يمكن أن يتم تحللها في ماء معقم أو بعض الأوساط القابلة للحقن المعقم الأخرى بشكل فوري بعد الاستخدام. يمكن أن تشتمل تلك التركيبات بشكل اختياري أيضاً على عوامل ظليلية والتي يمكن أن تكون من تركيبا تطلق المكون (المكونات) الفعالة فقطا أو على نحو مفضل في جزء معينة من المسار المعدي المعوي في طريقة متأخرة. تشتمل أمثلة تركيبات داخلية والتي يمكن 0 استخدامها على مواد بوليمرية وشموع. يكون المكون الفعال في صورة كبسولات دقيقة؛ وإذا كان ذكل مناسباً مع واحد أو أكثر من السواغات المصوفة فيما سبق. تقوم صور الجرعة السائلة الخاصة بالإعطاء عن طريق الفم من المركبات الخاصتب الاختراع مشتملة على مستحلبات مقوبلة بشكل صيدلاني ومستحلبات دقيقة ومحاليل ومعلقات وأدوية شرب وإكسيرات. بالإضافة إلى المكون الفعال وصور الجرعة السائلة التي يمكن أن تشتمل على مادة مخففة خاملة والتي يتم استخدامها 5 بشكل عام في المجال ‎(ie‏ على سبيل المثال؛ الماء او المذيبات الأخرى؛ والعوامل القابلة للذويان
‎TEVA
_ h ‏اج‎ والمستحلبات مقل ‎J‏ ألكحول 3 أيزو بروبيل ألكحول وإيثيل كريونات وإيثيل أسيتات وينزيل ألكحول وبنزيل بنزوات وبروبيلين جليكول» ‎=F ١‏ بيوتيلين جليكول؛ زيوت ‎le)‏ نحو خاص بذرة القطن وزيت الفول السوداني وزيت البذور وزبت الزيتون وزيت الخروع وزيوت السمسم) وجليسيرول وتترا هيدرو فيوريل ألكحول وبولي إيثيلين جليكول وإسترات حمض شحمي من السوربيتان وخلائط منها. بالإضافة إلى المواد المخففة الخاملة؛ فإن التركيبات الفموية يمكن أن تشتمل على مواد مساعدة مثل عوامل ترطيب واستحلاب وعوامل تعليق وعوامل تحلية وعوامل إعطاء نكهة وعوامل تلوين وعوامل تعطير وعوامل حافظة. يمكن أن تشتمل المعلقات بالإضافة إلى المركبات النشطة على عوامل تعليق ‎(Jie‏ على سبيل ‎(Jil 0‏ كحولات أيزو سيتياريل معالج بالإيتوكسيل» بولو أوكسي غيثيلين سوربيتول ومإسترات سوربيتات وسيليلوز دقيق التبلر والومنيوم وميتا هيدروكسيد وينتونيت وآجرا آجار وصمغ الكثيراء وخلائط منها. يمكن تقديم صيغ خاصة بالإعطاء في المستقيم أو في المهبل مثل التحميلة والتي يتم تحضيرها من خلال خلط واحد أو أكثر من مركبات الاختراع الحالي مع واحد أو أكثر من سواغات غير 5 مستثيرة مناسبة أو مواد حاملة تشتمل؛ على سبيل المثال؛ على زيدة كاكاو؛ ويولى إيثيلين جليكول وتحميلة شمع أو ساليسيلات والذي يكون صلباً عند درجة حرارة الرغفة ولكنه سائلاً في درجة ‎Sha‏ الجسم وبالتالي ينصهر في المستقيم أو في فجوة المهبل وبطلق المركب الفعال. تشتمل صيغ أو صور الجرعة الخاصة بالإعطاء عبر الجلد الموضعي من الأوليجومر كما ت توفير هنا على مساحيق ومواد للرش ومراهم وعجائن وكريمات وغسولات وهلامات ومحاليل 0 ورقعات ومواد مستنشقة. يمكن خلط الأوليجومرات النشطة تحت ظروف تعقيم مع ‎Bale‏ حاملة مقبولة بشكل صيدلاني ومع أي مواد حافظة؛ ومحاليل منظملة ومادة دافعة والتي تكون مطلوية. تكون المراهم والعجائين والكريمات وأنواع الهلام مشتملة؛ بالإضافة غلى المركب الفعال من الاختراع الحالي» على سواغات مثل دهون حيوانية ونباتية وزيوت ومواد شمعين وبرافين ونشا
TEVA qt ‏وصمغ كثيرات ومشتقات سيليلوز ومركبات بولي إيثيلين جليكلو ومركبات سيليكون ومركبات‎ ‏بنتونيت وحمض سيليسيك وتلك وأكسيد زنك أو خلائط منها.‎ ‏يمكن أن تشتمل المساحيث ومواد الرش بالإضافة إلى ذلك؛ إلى أوليجومرات من الاختراع الحالي‎ ‏وسواغات مثل اللاكتوز والتلك وحمض سيليسيك وهيدروكسيد ألومنيوم و وسيليكات كالسيوم‎ ‏ومسحوق بول أميد أو خلائط من تلك المواد وأنواع رش يمكن أن تشتمل بشكل اختياري عى مواد‎ 5 ‏دافعة تقليدية مثل كلورو فلورو هيدروكريونات وهيدروكريونات ليس بها اسبتدا متطايرة مثل؛ بيوتان‎ ‏وبرويثان.‎ ‏تمت للملصقات عبر الجدل إضافة ميزة خاصة بتوفير توصيل متحكم فيه خاص بالأوليجومر‎ ‏الخاص بالاختراع الحالي للجسم. يمكن تحضير صور الجرعة المذكورة من خلال التحلل أو‎ ‏التشتيت الخاص بالأوليجومر في وسط مناسب. يمكن أيضاً استخدام محسنات امتصاص لزيبادة‎ 0 ‏الارتجاع الخاص بعامل عبر الجلد. يمكن التحكم في معدل الارتجاع بواسطة إما توفير معدل‎ ‏خاص بغشاء التحكم أو تشتيت عامل في قالب بوليمر أو هلام من بين طرق أخرى معروفة في‎ ‏المجال.‎ ‏يمكن أن تشتمل التركيبات الصيدلانية المناسبة لإعطاء عن غير طريق القناة الهضمية على واحد‎ ‏أو أكثر من الأوليجومرات الخاصتب الاختراع في توليفة مع واحد أو أكثر من المحاليل المعقمة‎ 5 ‏المقبولة بشكل صيدلاني متساوية التوتر أو المحاليل غير المائية أو المشتتات أو المعلقات أو‎ ‏المستحلبات أو المساحيق المعقمة والتي يمكن أن يتم إعادة تشكيلها في محاليل قابلة لحقن معقمة‎ ‏أو مشتتات قبل استخدامها والتي يمكن أن تشتمل على سكريات وكحولات ومضادات أكسدة‎ ‏ومحاليل منظمة ومضادت بكتيرية وذوابات التي تقوم بتحويل الصيغة متساوية التوتر مع الدم من‎ ‏السواغ المقصود أو عوامل تعليق أو عوامل تغليظ قوام. تكون أمثلة المواد الحاملة المناسبة المائية‎ 0 ‏وغير المائية التي يمكن استخدامها في التركيبات لاصيدلانية من الاختراع مشتملة على ماء؛‎ ‏مركبات بوليول ( مثل جليسيرول؛ بروبيليلن جليكول وبولي إيثيلين جليكلو وما شابه ذلك)‎ Joli)
Ji) ‏زبت الزبتون وإسترات عضوية غير قابلة للحقن مثل‎ Jie ‏وخلائط مناسبة منها وزيوت نباتية‎ ‏من خلال استخدام مواد حاملة‎ (JU) ‏أولييات. يمكن الحصول على ميوعة مناسبة؛ على سبيل‎
TEVA
مثل ليسيثين بواسطة الحفاظ على حجم الجسيم المطلوب في حالة التشتت ومن خلال استخدام مواد خافضة للتوتر السطحي. يمكن أن تشتمل تلك التركيبات ‎Load‏ على مواد مساعدة مثل مواد حافظة» وعوامل ترطيب وعوامل استحلاب وعوامل تشتيت. يمكن ضمان الوقاية من تأثير الكائنات الدقيقة عند الأوليجومرات من خلال ضمان التضمين لعوامل مضادة للبكتريا مختلفة وعوامل مضادة للفطريات؛ على سبيل المثال» برابين وكلورو بيوتانول وحمض سوربيك فينول وما شابه ذلك. يمكن أن يكون من المطلوب أيضاً أن يتم تضمين عوامل متساوية التوتر مثل السكريات وكلوريد الصوديوم وما شابه ذلك بداخل التركيبات. بالإضافة إلى ‎cally‏ فإن امتصاص الصورة الصيدلانية القابلة للحقن يمكن أن يكون بواسطة تضمين عوامل والتي تقوم بتأخير الامتصاص مثل مونو سيتيارات أمونيوم وجيلاتين. 0 في بعض الحالات؛ لكي تتم زيادة تأثير العقار ؛ من المرغوب أن تتم تبطئة امتصاص العقار من الحقن تحت الجلد او بداخل العضلات. يمكن تحقيق ذلك من خلال استخدام معلق سائل من مادة متبلرة أو غير متبلرة بها قابلية ذويان ضعيفة في الماء؛ من بين الطرق الأخرى المعروفة في المجال. يعتمد معدل امتصاص العقار بعد ذلك على معدل التحلل والذي يمكن بدوره أن يعتمد على حجم البللورة وصورة التبلر. وعلى نحو بديل؛ فإن تأخير الامتصاص الخاص بصورة عار يتم 5 إعطاؤه عن غير طريق القناة الهضمية يتم تحقيقها من خلال التحلل أو تعليق العقار في ‎sale‏ ناقلة ‎A)‏ ‏يمكن أن يتم تحضير صور مخزون قابل للحقن من خلال تشكيل قوالب مكبسلة لدقيقة خاصة بالأوليجومرات ذات الصلة في بوليمرات قابلة للتحلل الحيوي ‎Jie‏ بولي لاكتيد- بولي جليكوليد. وبالاعتماد على نسبة الأوليجومر إلى البوليمر» يمكن التحكم في طبيعة البوليمر المعين المستخدم 0 ومعدل إطلاق البوليمر» تشتمل أمثلة البوليمرات القابلة للتحلل الأخرى على بولي (أورثو إستر) وبولي (أنهيدريدات). يمكن تحضير الصيغ القابلة للحقن في مستودع من خلال احتجاز العقار في جسيم دهني أو مستحلبات دقيقة والتي تكون متوافقة مع أنسجة الجسم. عندما يتم إعطاء الأوليجومرات من الاختراع الحالي في شكل مواد صيدلانية إلى أحد البشر أو الحيوانات ‎(Sa‏ إعطاؤها بذاتها أو في شكل تركيبة صيدلانية تشتمل؛ على سبيل المثال؛ على ‎٠.١‏
TEVA
م -
إلى 9694 (ويفضل أكثر من ‎٠١‏ إلى 60 967) من المكون الفعال في توليفة مع ‎sale‏ حاملة مقبولة
بشكل صيدلاني.
وكما تمت ملاحظته أعلاه فإن الصيغ أو المستحضرات من الاختراع الححالي يمكن أن يتم
إعطاؤها عن طريق الفم أو عن غير طريق القناة الهضمية أو بشكل موضعي أو في المستقيم. يتم إعطاؤها بشكل نمطي في صور مناسبة لكل مسار إعطاء. على سبيل المثال؛ يتم إعطاؤها في
أقراص أو في صورة كبسولة من خلال الحقن؛ الاستنشاق وغسول العين والمراهم والتحاميل إلخ
ويتم الإعطاء عن طريق الحقن أو التسريب أو الاستنشاق والإعطاء الموضعي بواسط غسول أو
مرهم والإعطاء في المستقيم عن طريق التحاميل.
تشير العبارات "الإعطاء حقنا" و "الإعطاء عن غير طريق القناة الهضمية” كما تم استخدامه هنا
0 إلى طرق الإعطاء خلاف الإعطاء المعوي والإعطاء الموضعي وعلى نحو عادي من خلال الحقن والذي يشتمل؛ بدون حصر على الإعطاء في الوريد أو بداخل العضلات أو بداخل الشريان أو بداخل الجافية أو في الكبسولة أو بداخل الحجاج أو في القلب؛ عبر الجلد؛ في البريتون ؛ وعبر الرغام أو تحت الجلد أو تحت البشرة أو بداخل المفصل أو تحت المحفظة أو تحت العنكبوتية؛ أو بداخل العمود المخ والحقن بداخل الصدر وبالتسريب.
‎pas 5‏ المصطلحات "الإعطاء المجموعي"” "الإعطاء الذي يعم الجسم كله" "الإعطاء الطرفي” ؛ "الإعطاء المحيطي" من مركب أو عقار أو أي مادة أخرى بشكل مباشر ‎daly‏ الجهاز العصبي المركزي بحيث تدخل إلى ‎seal‏ المريض وبالتالي تخضع للأيض وعمليات مشابهة أخرى؛ على سبيل المثال؛ الإعطاء تحت الجلد. ‎eg‏ الرغم من ذلك؛ فغن مسار الإعطاء تم ايختراه ويمكن استخدام أوليجومرات الاختراع الحالي
‏0 في صورة هيدرات مناسبة و/أو تركيبات صيدلانية من الاختراع والتي يمكن أن تتم صياغتها في صورة جرعة مقبولة بشكل صيدلاني والتي يمكن أن تكون عبارة عن طرق تقليدية معروفة لذوي المهارة في المجال. يمكن أن تتنوع مستويات الجرعة الفعلية من الكونات لافعالة في تركيبات خاصة بالاختراع بحيث يتم الحصول على المقدار الخاص من المكون الفعال الذي يكون فعالاً
‎TEVA ve ‏لتحقيق الاستجابة العلاجية المطلوية لمريض معين مع تركيبة وطريقة الإعطاء بدون السمية غير‎ ‏المطلوية لمريض.‎ ‏سوف يعتمد مستوي الجرعة المناسب على العديد من العوامل التي تشتمل على النشاط الخاص‎ ‏بأوليجومر معين مستخدم من الاختراع الحالي أو إستر أو ملح أو أميد منه ومسار الإعطاء وزمن‎ ‏الإعطاء ومعدل الإفراز أو الإيض لأوليجومر معين يتم استخدامه ؛ ومعدل ومدى الامتصاص‎ 5 ‏ومدة المعالجة وعقاقير أخرى ومركبات مشتركة و/أو مواد يتم استخداما في توليفة مع أوليجومر‎ ‏مستخدم معين» وعمر وجنس ووزن والحالة والصحة العامة للمريض والتاريخ الطبي السابق الخاص‎ ‏بالمريض المراد معالجته وما شابه ذلك م عوامل معروفة بشكل جيد في المجالات الطبية.‎ ‏يمكن أن يحدد الفيزيائي أو البيطري ذي المهارة العادية في المجال وبصف الكمية الفعالة الخاصة‎ ‏بتركيبة صيدلانية مطلوية. على سبيل المثال؛ فإن الفيزيائي أو البيطري يمكن أن يبدا جرعات من‎ 0 ‏المركبات الخاصة بالاختراع المستخدمة في التركيبة الصيدلانية عند مستويات أقل من تلك‎ ‏المطلوية لكي يتم تخفيف التأثير العلاجي المطلوب وتزيد تدريجياً من الجرعة حتى تحقيق التأثير‎ ‏المطلوب. وبصفة عامة فإن الجرعة اليومية المناسبة من المركب الخاص بالاختراع تكون عبارة‎ ‏عن تلك الكمية الخاصة بالمركب والتي تكون جرعة فعالة أقل لإنتاج تأثير علاجي. تعتمد الجرعة‎ ‏الفعالة المذكورة بصفة عامة على عوامل تم وصفها أعلاه. وبصفة عامة فإن الجرعات بداخل الفم‎ 5 ‏أو بداخل الوريد أو بداخل البطين والمخ وتحت الجلد من المركبات الخاصة بالاختراع لمريض‎ ٠٠١ ‏إلى حوالي‎ 0.000٠ ‏تكون متراوحة من حوالي‎ lly ‏عندما يتم استخدامه له تأثيرات موضح‎ ‏مجم لكل كيلو جرام من وزن الجسم في اليوم.‎ ‏وإذا كان ذلك مطلوياً فإن الجرعة اليومية الفعالة من المركب الفعال يمكن أن يتم إعطاؤها عند‎ ‏جرعتين أو ثلاثة أو أربعة أو خمسة أو ست أو أكثر من الجرعات الفرعية على نحو منفصل عند‎ 0 ‏فواصل مناسبة خلال اليوم»؛ وعلى نحو اختياري في صور جرعة وحدة. في حالات معينة؛ فإن‎ ‏الجرعة يتم إعطاؤها كل يوم. في نماذج معينة؛ فإن الجرعة تكون عبارة عن واحدة أو أكثر من‎
Fo) ‏يوماً أو كل‎ VE OF VY ‏عت لا ىك نل لل‎ cf oF ‏جرعات الإعطاء كل ت‎
ARIS ‏ىك فت لاي‎ SrA ت١‎ Ep عوبسأ‎ ١١ ١ ‏لي ىك نل‎ re ‏كت كف‎ ‏طبقاً لما هو مرغوب للحصول على التعبير المطلويب من بروتين ديستروفين.‎ hes VY ١١ 25
TEVA
لل يمكن إعطاء جزيئات حمض نووي للخلايا من خلال العديد من الطرق المعروفة للأشخاص العاديين في المجال بما في ذلك؛ ليس على سبيل الحصر؛ الكبسلة في الجسيمات الشحمية من خلال الارتحال الأيوني أو من خلال التضمين بداخل نواقل أخرى ‎Jie‏ أنواع هلام مائية ومركبات سيكلو ديكستيرين وكبسولات دقيقة قابلة للتحلل البيولوجي و وكريات دقيقة لاصقة بشكل حيوي كما هو مطلوب هنا ومعروفة في المجال. في نماذج معينة؛ فإن تقنية المعالجة بمستحلب دقيق يمكن استخدامها لتحسين الإتاحة الحيوية الخاصة بعوامل صيدلانية آلفة للشحم (غير قابلة للذويان في الماء). تشتمل الأمثلة على : ‎Trimetrine (Dordunoo, 5. K., et al., Drug Development and Industrial‏ ‎Pharmacy, 17(12), 1685-1713, 1991 and REV 5901 (Sheen, P.
C., et‏ ‎al, J Pharm Sci 80(7), 712-714, 1991) 0‏ . من بين الفوائد الأخرى توف المعالجة بمستحلب دقيق إتاحة حيوية محسنة من خلال التوجيه التفاضلي للامتصاص لنظام لمفاوي ‎Yay‏ ‏من النظام الدوري وبالتالي المرور عبر البد ومنع إتلاف المركبات في التدوير في الكبد والغدة الصفراوية. في أحد سمات الاختراع» تشتمل الصيغ على ميزيلات تم توفيرها من أوليجومر كما تم توفيره هنا 5 ومادة حاملة واحدة على الأقل آلفة للدهون والماء والتي تكون فيها الميزيلات لها قطر متوسط أقل من حوالي ‎٠٠١‏ نانو متر. توفر نماذج مفضلة بشكل أخير ميزيلات لها قطر متوسط أقل من حوالي ‎٠‏ © نانو متر وحتى في نماذج أكثر تفضيلاً فإنها توفير ميزيلات لها قطر متوسط أقل من حوالي ‎Te‏ نانو متر أو حتى أقل من حوالي ‎7١‏ نانو متر. وعلى الرغم من أن المواد الحاملة الآلفة للماء والدهون المناسبة يتم استخدامها؛ تكون المواد 0 الحاملة المفضلة حالياً بصفة ‎dale‏ عبارة عن تلك التي لها حالة أمان تم التعرف عليها بشكل عام ‎lly (GRAS)‏ يمكن أن يكون لكل منها قابلية ذوبان للمركب الخاص بالاختراع الحالي والاستحلاب الدقيق له في مرحلة تالية عندما يصبح المحلول في تلامس مع طور الماء المعقد (مثل ذلك الموجود في القناة المعدية المعوية). وعلى نحو عادي؛ فإن المكونات الآلفة للماء والدهون التي تفي بالمتطلبات يكون لها قيم ‎HLB‏ (توازن ألفة للماء وألفة للشحوم) من ‎٠١-١‏ ‎TEVA‏ vy
Sle ‏إلى 0-20. تكون الأمثلة‎ C6 ‏وتشتمل البينات على شقوق أليفاتية مستقيمة في مدى من‎ ‏عن مركبات بولي إيثيلين - جليسريدات شحمية معالجة بالجليكول ومركبات جليكول بولي إيثيلين.‎ ‏تشتمل أمثلة المواد الحاملة مزدوجة الألفة للماء والشحم على جليسريدات حمض شحمي معالجة‎ ‏تلك التي تم الحصول عليها من زيوت نباتية مختلفة‎ Jie ‏ببولي إيثيلين جليكول أحادية مشبعة‎ ‏معالجة بالهيدروجين بشكل جزئي أو بشكل كامل. يمكن أن تتكون تلك الزيوت من جليسريدات‎ 5 ‏ثلاثية وثنائية وأحادية من حمض شحمي وإسترات بولي غيثيلين جليكول أحادية وثنائية من‎ ‏أحماض شحمية مناظرة مع تركيبة حمض شحمي مفضلة على نحو خاص والتي تشتمل على‎ “VE ‏؛ حمض ليوريك ٠؛-0 5 وحمض ميرستيك‎ AF ‏حمض كابريك ؛-0٠؛ حمض كابريك‎ ‏وحمض سياتريك 0— 9615. تشتمل فئة مفيدة أخري من المواد‎ ١5-4 ‏وحمض بالمتيك‎ (YO ‏مرزدوجة الألفة على مركبات سوربيتان تشتمل على مركبات سوربيتات معالجة بالغستر بشكل جزئي‎ 0 ‏أو‎ (SPAN ‏و/أو سوربيتول» مع أحماض شحمية أحادية -غير مشبعة أو مشبعة (مجموعات‎ ‏يمكن أن تكون المواد الحاملة الآلفة‎ . (TWEEN ‏تظائر معالجة بإيثوكسي مناظرة (مجموعات‎ ‏لابرافيل؛ لابراسول؛ أو‎ pasha ‏للشحوم المتاحة تجارياً مفيدة والتي تشتمل على مجموعات‎
Gattefosse Corporation, Saint Priest, ‏لاروجليكول (تم تصنيعها كلها وتوزيعها بواسطة‎ ‏أحادي -ليورات؛‎ - PEG ‏-ثنائي- أوليات و‎ PEG ‏و‎ (PEG - ‏أوليات -أحادية‎ (France 5 ‏إلخ (تم الانتاج والتوزيع بواسطة عدد من الشركات في الولايات‎ » 8٠ ‏سوريات‎ Joo ‏وليسيثين‎ ‏المتحدة وحول العالم).‎ ‏في نماذج معينة فإن التوصيل يمكن أن يتم باستخدام جسيمات شحمية؛ كبسولات في حجم النانو‎ ‏؛ جسيمات دقيقة؛ كريات دقيقة جسيمات شحمية وحويصلات وما شابه ذلك لغدخال تركيبات من‎ ‏الاختراع الحالي في خلايا عائلة مناسبة. وعلى نحو خاص فإن تركيبات الاختراع الحالي يمكن‎ 0 ‏صياغتها للتوصيل إما في شكل كبسولة أو في شكل جسيم شحم؛ في شكل جسيم دهني أو في‎ ‏شكل حويصلة او في شكل كريات في حجم النانو أو جسيم في حجم النانو أو ما شابه ذلك. يمكن‎ ‏إجراء الصياغة واستخدام نواقل التوصيل بواسطة تقنيات معروفة وتقليدية.‎ ‏تكون البوليميرات الآلفة للماء المناسبة للاستخدام في الاختراع الحالي عبارة عن لك التي تكون‎ ‏قابلة للذوبان في الماء بسهولة ويتم ريطها على نحو تساهمي مع شحم مشكل للحويصلات والتي‎ 5
TEVA
الل يتم تحملها في الكائن الحي بدون تأثيرات سامة (أي تلك المتوافقة بشكل حيوي). تشتمل البوليمرات المناسبة على بولي إيثيلين جليكول (056)؛ بولي لاكتيك (التي يطلق عليها ايضاً بولي لاكتيد) وحمض بولي جلايكوليك (يطلق عليها ايضاً مركب بولي جليكوليد)؛ بوليمر مشترك من حمض بولي لاكتيكي بولي جلاكوليك وكحول بولي فينيل. في نماذج معينة؛ يكون للبوليمرات وزن > من حوالي ‎٠٠١‏ أو ‎١٠١‏ دالتون وحتى ‎©00٠0‏ أو ‎٠٠٠٠١‏ دالتون أو من حوالي ‎٠٠‏ ؟ دالتون إلى حوالي ‎0٠0٠‏ دالتون. في نماذج ‎cal‏ فإن البوليمر يكون عبارة عن بولي إيثيلين جليكول به وزن جزيئي من حلوالي ‎٠٠١‏ إلى حوالي ‎٠0٠0١‏ دالتون أو له وزن جزبئي من حوالي ‎70١0‏ إلى حوالي دالتون. في نماذج معينة؛ يكون البوليمر عبارة عن بولي إيثيلين جليكول من ‎Vor‏ دالتون ((056)750)). يمكن أن يتم تحديد البوليمرات من خلال عدد من المونومرات بداخلها؛ يستخدم 0 النموذج المفضل للاختراع الحالي بوليميرات عند الأقل حوالي ثلاثة مونومرات ¢ مثل بوليمرات 6 تتكون من ثلاثة مونومرات (حوالي ‎١٠٠١‏ دالتون). يمكن ان يكون هنا بوليمرات آلفة للماء والتي تكون مناسبة للاستخدام في الاختراع الحالي والتي تشتمل على بولي فينيل بيروليدون» بولي مثوكسازولين» ويولي إيثيلين أوكازولين» وبولي هيدروكسي بروييل ميث أكريل أميد؛ وبولي ميثو أكريل أميد؛ وبولي داي ميثيل أكريل أميد 5 ومركبات سيليلوزن مشتقة مثل هيدروكسي ميثيل سيليلوز أو هيدروكس إيثيل سيليلوز. في نماذج معنية؛ فإن صيغة الاختراع الحالي تشتمل على بوليمر متوافق بشكل حوي تم اختياره من مجموعة مكونة من بولي أميدات؛ بولي كربونات» ‎doug‏ أكليلين وبوليميرات من إستارت أكربليك وإسترات ميث أكربليك وبوليميرات بولي فينيل» ومركبات بولي جلايكوليد ومركبات بولي سيلوكسان ومركبات بولي يوربثان ويوليمرات مشتركة منهاء مركبات سيليلوز وبولي بروبيلين 0 ومركب بولي إيثيلين وبوليستيرين وبوليمرات من حمض لاكتيك وحمض جلايكوليك وبولي أنهيدريد وإسترات (بولي أورثو)؛ وبولي (حمض بيوتيك) وبولي (حمض فالريك) ؛ وبولي (لاكتيك كابرولاكتون مشترك) ‎Jog‏ سكاريدات وبروتينات وأحماض بولي هيلورونيك؛ وبولي أسيانو أكريلات» ووتوليفات وخلائط أو بوليمرات مشتركة منها. تكون مركبات سيكلو ديكستيرين عبارة عن أوليجو سكاريدات تتكون من ‎eT‏ ا أو ‎A‏ وحدات 5 جلوكوز؛ تم تصميمها بواسطة الأحرف اللاتينية ‎Bea‏ أو 7 على الترتيب. يتم ربط وحدات ‎TEVA‏
اس الجلوكوز بواسطة 0-1 ؛ روابط 4- جلوكوسيديك. ونتيجة المعلومات المشتركة في تشاكلات كرسية من وحدات السكر ومجموعات الهيدروكسيل الثانوية ‎(Ally )0-3 « C=2)‏ تكون موجودة على جانب من الحلقة حيث أن كل مجموعات الهيدوركسيل الأولية عند 0-6 والتي تمت إحاطتها عند جانب آخر. ونتيجة لذلك؛ فإن الأوجه الخارجية تكون عبارة عن غير آلفة للماء والتي تكون عبارة سيكلو ديكسترين قابل للذوبان في الماء. وعلى العكس من ذلك؛ تكون فجوات سيكلو ديكستيران غير آلفة للماء حيث أنها تكون على خط بواسطة الهيدروجين من الذرات 06-3 و 0-5 وبواسطة مركبات أوكسجين مشابهة ‎HAY‏ تسمح تلك القوالب بالتعقيد مع صور متنوعة من مركبات غير آلفة للماء ‎ally‏ تشتمل؛ على سبيل المثال على مركبات ستيرويد مثل 170 - إستراديول (انظرء على سبيل المثالء ‎van Uden et al.
Plant Cell Tiss.
Org.
Cult.‏ 0 )1994( 38:1-3-113 ). يتم إجراء التعقيد من خلال تفاعلات ‎Van der Waals‏ ومن خلال تشكيل روابط الهيدروجين. لمراجعة عامة للخصائص الكيميائية لسيكلو ديكستيرين» انظر» ‎Wenz,‏ ‎Agnew.
Chem.
Int.
Ed.
Engl., 33:803-822 (1994)‏ . تعتمد الخصائص الكيميائية والفسيولوجية الخاصة بمشتقات سيكلو ديكستيرين بشكل قوي على نوع ودرجة الاستبدال. على سبيل المثال؛ قابلة الذويان في أمداء مائية من الجزء غير القابل للذويان 5 (على سبيل المثال» تراي أسيتيل -بيتا - سيكلو ديكستيرين) إلى ‎VEY‏ 96 من قابلية الذويان (وزن/حجم) ‎G)‏ -؟-بيتا- سيكلو ديكستيرين). بالإضافة إلى ذلك تكون تلك الصور قابلة للذويان في العديد من المذيبات العضوية. توفر خصائص سيكلو ديكستيرين قابلية التحجم في العديد من مكونات الصيغة من خلال ‎sab)‏ أو تقليل قابلية الذويان. هناك العديد من مركبات سيكلو ديكستيرين وطرق التحضير التي تم وصفها. على سبيل المثال؛ 0 المتغير ((اء ‎Let al‏ (البراءة الأمريكية رقم 457784 3) و ‎et al‏ ,6:801818. (البراءة الأمريكية رقم 409971 ؟) والتي تصف مركبات سيكلو ديكستيرات إليكترونية عصبية. تشتمل مشتقات أخرى على مركبات سيكلو ديكستيرين مع خصائص كاتيونية [ا!) ‎(Parmeter‏ « البراءة الأمريكية رقم ‎457725١‏ ؟] مركبات سيكلو ديكستيرين مرتبطة على نحم تشابكي غير قابلة للذويان 501075 (البراءة الأمريكية رقم 747097408 ) ومركبات سيكلو ديكستيين مع خصائص أنيونية | ‎Parmeter‏ ‎(II 5‏ والبراءة الأمريكية رقم ‎477101١1‏ ؟ ]. ومن بين مشتقات سيكلو ديكستيرين الأخرى؛ مع ‎TEVA‏
ولا الخصائص الأنيونية؛ فإن الأحماض الكريوكسيلية وأحماض الفسفور وأحماض فوسفينو وأحماض فوسفونيك وأحماض فسفوريك وأحماض ثيو فسفونيك واحماض ثيو سوفينيك وأحماض سولفونيك قد تم تذييلها مع مركب سيكلو ديسترين اساسي (انظر»»(ا!1) ‎Parmeter‏ ؛ أعلاه). بالإضافة إلى ذلك؛ فإن مشتقات سيكلو ديسترين إيثر سولفو ألكيل قد تم وصفها بواسطة ‎Stella, et al.‏ (البراءة الأمريكية رقم ‎417١‏ 247). تتكون الجسيمات الدهنية من غشاء ثنائي الطبقة شحمي على الأقل يشتمل على حجيرة داخلية مائية. جسيمات يمكن تهيئتها من خلال نوع الغشاء وحجمه. حويصلات أحادية الصفائح ‎(SUVS)‏ التي لها غشاء منفرد وله مدى نمطي بين 0.07 و 0,05 ميكرو متر في القطر؛ وحويصلات أحادية الصفائح كبيرة ‎(LUVS)‏ التي تكون بشكل نمطي أكبر من ‎١05‏ ميكرو 0 جرام. يكون لحويصلات كبيرة صفائحية أوليجومرية وحويصلات متعددة الصفائح التي لها في الغالب طبقات غشاء مشتركة المركز أكبر بشكل نمطي من ‎١١‏ ميكرو متر. تكون الجسيما الشحمية التي لها أغشية غير مركزية ؛ أي حويصلات أصغر متعددة موجودة بداخل حويصلات أكبر والتي يطلق عليها حويصلات متعددة. تتعلق سمة من الاختراع الحالي بصيغ تشتمل على جسيمات شحمية تشتمل على أوليجومر من 5 الاختراع ‎(Jal‏ حيث أن الغشاء الجسيمي يتم تشكيله لتوفير سيم به قدرة حمل متزايدة. وعلى نحو نمطي أو بالإضافة إلى ‎cally‏ فإن المركب الخاصة بالاختراع يمكن أن يتم تضمينه بداخل أو احتفاظه على طبقة ثنائية من جسيم شحمي من الجسيم الشحمي. وعلى نحو بديل أو بالإضافة إلى ذلك؛ فإن مركب الاختراع يمكن أن يتم تضمينه بداخل أو يتم امتصاصه على طبقة ثنائية من الجسيم الشحمي من جسيم شحمي. يمكن أن يتم تكامل أوليجومر الاختراع الحالي باستخدام مادة 0 خافضة للتوتر السطحي شحمية ويمكن حملها بداخل حيز داخلي للجسيم الشحمي؛ في تلك الحالات؛ فإن غشاء الجسيم الشحمي تتم صياغته لمقاومة التأثيرات التدميرية الخاصة بتكتل مادة خافضة لتوتر السطح فعالة. وطبقاً لأحد النماذج من الاختراع الحالي فإن الطبقة الثنائية من الشحم من الجسيم الشحمي تشتمل على شحومات تم اشتقاقها مع بولي إيثيلين جليكول ‎(PEG)‏ بحيث أن سلاسل ‎PEG‏ تمتد من ‎TEVA‏
VI
‏السطح الداخلي للطبقة الثانية من الشحم بداخل الحيز الداخلي المكبسل بواسطة جسيم شحمي‎ ‏ويمتد من الجزءِ الخارجي من الطبقة الثانية للشحم إلى لبيئة المحيطة.‎ ‏تكون العوامل النشطة الموجودة بداخل الجسيمات الشحمية من الاختراع في الصورة القابلة‎ ‏للذويان. تكون تكتلات المادة الخافضة للتوتر السطحي والعامل الفعال (مثل المستحلبات أو‎ ‏المزيلات المشتملة في عامل فعال محل الاهتمام) والذي يمكن احتجازه بداخل حيز داخلي من‎ 5 ‏الجسيمات الشحمة طبقاً للاختراع الحالي. تؤثر المادة الخافضة للتوتر السطحي في تشتتي وقابلية‎ ‏الذويان للمكون الفعال» ويمكن أن يتم اختيارها من مادة خافضة للتورت السطحي أليفاتي أو سيكول‎ ‏لا الحصر؛ على مركبات ليزو فوسفاتيديلن‎ JU ‏اليفاتية أو طريقة والتي تشتمل؛ على سبيل‎ ‏سبيل المثال» من حوالي 014 إلى حوالي‎ le) ‏من أطوال سلسلة متنوعة‎ (LPGS) ‏كولين‎ ‏التي يتم استخدامها‎ PEG ‏شحومات‎ Jie ‏يمكن أيضاً استخدام شحوم مشتقة من البوليمر‎ .)620 0 ‏من تكوين ميزيلات حيث أنها تؤثر في تثبيط اندماج الميزيلات والغشاء وتكون في شكل إضافة‎ ‏من المادة‎ CMC ‏لبوليمر بالنسبة لتناقصات من الجزيئات من المادة الخافضة للتوتر السطحي من‎ ‏الخافضة للتوتر السطح والتي تساعد في تكوين الميزيلات. تكون الصور المفضلة عبارة عن مواد‎ ‏والتي يتم‎ CMC ‏في أمداء جزيئية دقيقة؛ ومواد خافضة للتوترر من‎ CMOS ‏خافضة للتوتر مع‎ ‏استخدامها لتحضير ميزيلات يتم احتجازها بداخل الجسيمات الشحمية من الاختراع الحالي.‎ 5 ‏يمكن تحضير الجسيمات طبقاً للاختراع من خلال أي من التقنيات المتعددة المعروفة في المجال؛‎ ‏من الطلب الدولي رقم‎ PCT ‏ونشرات‎ 577579١ ‏انظر» على سبيل المثال؛ البراءة الأمريكية رقم‎
New RRC, Liposomes: A practical approach, IRL Press, ‏؛‎ 432/١
Oxford (1990), pages 33-104; Lasic DD, Liposomes from physics to ‏على سبيل‎ . applications, Elsevier Science Publishers BV, Amsterdam, 1993 0 ‏المثال» فإن الجسيمات الشحمية من الاختراع الحالي يمكن تحضيرها من خلال شحوم انتشارية تم‎ ‏باستخدام بوليمر غير آلف للماء بداخل جسيمات شحمية تم إنشاؤهاء على سبيل المثال؛‎ Lalas) ‏عن طريق تعريض الجسيمات التي تم إجرؤها مع الميزيلات المكونة من بوليمرات مطعمة بالشحم‎ ‏عند تركيزات شحم مناظرة لنسبة مئوية بالمول نهائية من شحم مشتق والذي يتم وصفه في الشحم.‎
TEVA
-١/- ‏يمكن تشكيل الجسيمات الشمحية المشتملة على بوليمر آلف للماء من خللا التجانس» ومعالجة‎ ‏بالهيدرات في مجال الشحم أو تقنيات الاستخلاص كما هو موضح في المجال.‎ ‏في إجراء صيغة توضيحة آخرء فإن المكون الفعال قد تم تشتيته أولاً من خلال المعالجة‎ ‏منخفضة آخري‎ CMC ‏بالموجات في ليزو فوسفاتيديل كولين أو أي مادة خافضة للتوتر السطحي‎ ‏(بما في ذلك شحوم مطعمة من البوليمر) والتي تكون قابلة للتحلل بسرعة وغير آلفة لماء. تكون‎ 5 ‏معلقات الميزيلات الناتجة من الكون الفعال قد تم استخدامها بعد ذلك في إعادة المعالجة بالهيدرات‎ ‏تشتمل على نسبة مئوية بالمول مناسبة من شحم مطعم بالبوليمر أو‎ Ally ‏شحم مجففة‎ Lia] ‏كوليستيرول. يكون للشحم معلق عامل فعال والذي يتم تشكيله بعد ذلك في جسيمات شحمية‎ ‏عنها جسيمات تم فصلها من محلول غير‎ aig ‏باستخدام تقنيات بثق كما هو معروف في المجال‎ ‏مكبسل من خلال فصل عمودي قياسي.‎ 0 ‏في واحدة من سمات الاختراع الحالي؛ فإن الجسيمات الشحمية يتم تحضيرها بحيث يكون لها‎ ‏أحجام متجانسة إلى حد كبير في مدى حجمي تم اختياره. تشتمل طريقة ضبط حجم مناسب على‎ ‏بثق ملق مائي من الجسيمات بداخل مجموعات من أغشية لابولي كروبنات التيها لها صورة‎ ‏منتظمة لحجم الثقب وحجم ثقب من الغشاء يكون مناظراً بشكل كبير لأحجام أكر من الجسيمات‎ ‏الشحمية التي تم إنتاجها من خلال البثق خلال الغشاء المذكور؛ انظرء على سبيل المثال؛ البراءة‎ 5 ‏في نماذج معينة؛ فإن المواد المتفاعلة مثل‎ .)٠9/88 ‏إبريل‎ VY) 5777377 ‏الأمريكية رقم‎ ‏©001601801106نا يمكن استخدامها لإنتاج بولي نيوكليوتيدات أو‎ DharmaFECT® ‏بروتينات بداخل الخلايا.‎ ‏تعتمد خصائص إطلاق الصيغة الخاصة بالاختراع الحالي على مادة كبسلة؛ تركيز عقار تمت‎ ‏فإن الإطلاق يمكن إجراؤه عند الرقم‎ (JU) ‏كبسلته؛ ووجود محددات إطلاق. على سبيل‎ 0 ‏الهيدروجيني بالاعتماد؛ على سبيل المثال؛ على استخدام تغليف حساس للرقم الهيدروجيني الذي‎ ‏يطلق فقط عند رقم هيدروجيني منخفض كما هو الحال في المعدة أو عند رقم هيدروجيني عال؛‎ ‏كما هو الحال في الأمعاء. يمكن استخدام التغليف الداخلي لمنع الإطلاق من الحدوث حتى‎ ‏المرور خلال المعدة.يمكن استخدام التغليفات المتعددة أو خلائط من السيانيد المكبسل في مواد‎ ‏ذلك الإطلاق التالي في الأمعاء. يمكن أن‎ Lg ‏مختلفة للحصول على الإطلاق الأولي في المعدة‎ 5
TEVA
الال تتم معالجة الإطلاق من خلال تضمين أملاح أو عوامل تشكيل ثقب والتي تزيد من امتصاص الماء أو إطلاق العقار من خلال التشتت من الكبسول. يمكن أيضاً استخدام السواغات التي تعدل قابلية الذوبان من لاعقار والتي يمكن استخدامها للتحكم في معدل الإطلاق. يمكن أيضاً تضمين عقاقير التي تحسن من التحلل الخاص بقالب أو الإطلاق من قالب. يمكن إضافتها إلى العقار أو إضافتها في شكل مرحلة منفصلة (أي في شكل جسيمات) أو يمكن أن يتم تحللها في طور البوليمر بالاعتماد على المركب. في معظم الحالات؛ فإن المركب يجب أن يكون بين )+ وثلاثين 6 (وزن/وزن من البوليمر). تشتمل أنواع محسنات التحلل على أملاح غير عضوية مثل كبريتات أمونيوم وكلوريد أمونيوم» أحماض عضوية مثل حمض السيتريك وحمض بنزويك وحمض أسكورييك وقواعد غير عضومية مثل كربونات صوديوم وكريونات بوتاسيوم وكربونات كالسيوم
0 وكربونات زنك وهيدروكسيد زنك وقواعد عضوية ‎Jie‏ كبريتات بروتامين»؛ سبيرمين وكوالين وإيلانول أمينن وداي إيثانول أمين وتراي إيثانول أمين ومواد خافضة للتوتر السطح ‎Tween® (ie‏ و ‎Pluronic®‏ . تقوم عوامل تشكيل الثقوب بإضافة بنيات دقيقة للقوالب (أي المركبات القابلة للذوبان في الماء مثل أملاح غير عضوية وسكريات) والتي تمت إضافتها في شكل جسيمات. يكون المدى النمطي بين واحد وثالثة وثلاثين بالمائة (وزن/ وزن من البوليمر).
‎dallas (Sa 5‏ الامتصاص من خلال تغيير زمن الوجود الخاص بالجسيمات في الأحشاء. يمكن أن يتم تحقيق ذلك؛ على سبيل ‎(JUD‏ من خلال تغليف الجسيم باستخدام أو اختيار مادة مكبسلة ؛ وبوليمر لاصق جسيمي. تشتمل الأمثلة على معظم البوليمرات التي لها مجموعات كريوكسيل ‎Jie‏ ‏شيتوسان؛ سيليلوز وعلى نحو خاص بولي أكريلات ‎LS)‏ تم استخدامها هناء تشير بولي أكريلات غلى بوليمرات تشتمل على مجموعات أكريلات ومجموعات أكريلات معدلة مثل سيانو أكريلات
‏0 وميث أكريلات). يمكن صياغة الأوليجيمر بحيث يتم تضمينه بداخل أو تتم تهيئته للإطلاق من خلال وسيلة جراحية أو طبيقة أو غريسة. في سمات معينة فإن الغريسة يمكن أن يتم تغليفها أو معالجتها باستخدام أوليجومر. على سبيل ‎(JU‏ مركبات جلات مائية؛ أو بوليمرات أخرى ‎Jie‏ بوليميرات متوافقة على نحو حيوي و/أو بوليمرات قابلة للتحلل الحيوي التي يتم استخدامها لتغليف الغريسة باستخدام
‏5 تركيبات من الاختراع الحالي (أي؛ تركيبة يمكن أن تتم تهيئتها لاستخدامها مع وسيلة طبيعة
‎TEVA
١7م‎
باستخدام جلات مائية أو أي بوليمر آخر). تكون البوليمرات والبوليمرات المشتركة الخاصة بالتغليف خاصة بوسائل طبية مع عامل يكون معروفاً في المجال. تشتمل أمثلة المواد المزروعة ؛ على سبيل المثال لا الحصر على الدعامات ودعامات مخففة للعقار وخيوط لجراحة ورقع جراحية ‎ci Ll‏ الوعائية وقثطرات خاصة بالديازة ورقع وعائية وصمامات قلب صناعية وجهاز تنظيم ضريات القلب» وأجهزة تنظيم ضريات القلب الاليكترونية وابر ‎IV‏ وأجهزة خاصة بضبط العظم والتشكيل مثل المسامير واللوالب والأطباق ووسائل أخرى وقوالب أنسجة صناعية خاصة ‎Ally‏
الجروح. بالإضافة إلى ‎cally‏ فإن الطرق التي تم توفيرها هنا والأوليجومرات الخاصة بالاستخدام طبقاً للإاختراع يمكن صياغتها للإعطاء بأي طريقة مناسبة للاستخدام في البشر أو الأدوية البيطرية من
0 خلال التشابه مع مواد دوائية أخرى. يمكن أن يتم إعطاء أوليجومرات في عكس اتجاه النسخ بمفردها أو في توليفة مع استراتيجيات علاجية في معالجة الضمور العضلي» مثل زراعة الأرومة العضلية؛ علاجات خلية جذعية وإعطاء مضادات حيوية من أمينو جلايكوسيد ؛ مثبطات بروتياسوم وعلاجات تنظيم فائق (على سبيل المثال؛ تنظيم من يتروفين؛ وثنائي جين جسدي من ديستروفين).
5 يقصد من مسارات الإعطاء الموصوفة هنا فقط بأنها استرشادات للمتمرس الجيد في المجال بحيث يكون قادراً على التحديد بسهولة لمسار الإعطاء المناسب وأي جرعات خاصة بحيوان معين وحالة معينة. وقد تم توضيح العديد من الطرق الخاصة بإدخال مادة دينية جديدية فعالة في ‎(LOAN‏ سواء في المعمل وفي الكائن ‎(Friedmann (1989) Science, 244:1275-1280( all‏ تشتمل تلك الطرق على تكامل الجين المراد التعبير عنه في فيروسات بطيئة معدلة ( ‎Friedmann‏
‎supra; Rosenberg (1991) Cancer Research 51(18), suppl.: 0‏ )1989( ‎£(50748-5079S‏ والتكامل بداخل نواقل فيروسية غير بطيئة (على سبيل المثال؛ نواقل فيروسية مرتبطة بشكل غدي) ) ;68:143-155 ‎Rosenfeld, et al. (1992) Cell,‏ ‎¢(Rosenfeld, et al. (1991) Science, 252:431-434‏ أو توصيل جين انتقالي مرتبطة مع عنصر معزز -محسن غير متجانس من خلال جسيمات شحمية ) ,)1989( ‎Friedmann‏
‎supra; Brigham, et al. (1989) Am.
J.
Med.
Sci., 298:278-281: Nabel, et 5
‎TEVA
-١ل4-‎ al. (1990) Science, 249:1285-1288; Hazinski, et al. (1991) Am. J. Resp.
Cell Molec. Biol., 4:206-209; and Wang and Huang (1987) Proc. Natl. ‏واقتران مع نظام خاص بمركب ترابيط» أنزمة ناقل‎ ¢(Acad. Sci. (USA), 84:7851-7855 ‏أو‎ (Wu and Wu (1988) J. Biol. Chem., 263:14621-14624( ‏تعتمد على الكاتيون‎
Nabel et al. (1990), supra); Wolff et al. ) ‏مجرد؛ نواقل التعبير‎ DNA ‏استخدام‎ 5 ‏ينتج الحقن المباشر لجينات انتقالية في النسيج فقط‎ .))1990( Science, 247:1465-1468
Rosenfeld (1992) supra); Rosenfeld et al. (1991) supra; ( ‏تعبير موضعي‎
Brigham et al. (1989) supra; Nabel (1990) supra; and Hazinski et al.
The Brigham et al. group (Am. J. Med. Sci. ‏قامت مجموعة‎ . ((1991) supra ‏تقرير نقل‎ Clinical Research (1991) 39 (abstract) 5 (1989) 298:278-281 0 ‏العدوى في الكائن الحي فقط في رئات الفئران بعد أي إعطاء في الوريد أو في القصدة الهوائية‎ : ‏ينطوي مثال لمقار يراجع إجراءات العلاج الجيني البشري في‎ DNA ‏لمعقد جسيم دهني‎
Anderson, Science (1992) 256:808-3 ‎IV‏ -الأطقم _يوفر الاختراع أيضاً أطقماً خاصة بمعالجة المريض باستخام مرض جيني حيث أن الطقم يشمل على جزيء في عكس اتجاه النسخ (على سبيل المثال؛ مجموعة أوليجومر في عكس اتجاه النسخ في المتوالية رقم ‎)2-١‏ وبتم التغليف في حاوية مناسبة مع تعليمات خاصة بالاستخدام. يمكن أن تشتمل الأطقم أيضاً على مواد تفاعل طرفية مثل المحاليل المنظمة والمواد المثبتة؛ إلخ. سوف يدرك ذي المهارة العادية في المجال أن التطبيقات الخاصة بالطرق السابقة لها العديد من 0 التطبيقات الخاصة بتحديد جزيئات في عكس اتجاه النسخ مناسبة للاستخدام في معالجة العديد من ‏الأمراض. ‎Vv‏ - الأمثلة على الرغم من أن الاختراع السابق تم وصف ببعض التفاصيل للتوضح وكمثال لأغراض الوضوح والفهم؛ فسوف يكون من الواضح بسهولة لذي المهارة العادية في المجال في ضوء مبادئ الاختراع ‎TEVA
CA
‏الحالي أن هنا تغييرات معينة وتعديلات يمكن إجراؤها لعيها بدون الخروج من فحوى ومجال‎ ‏عناصر الحماية اللاحقة. تم توفير الأمثلة التالية للتوضيح فقط وليس للحصر. سوف يتعرف‎ ‏الماهرون في المجال بسهولة على العديد من المتغيرات غير الهامة التي يمكن أن يتم تغييرها أو‎ ‏تعديلها لإنتاج نتائج مشابهة بشكل أساسي.‎ ‏الطرق والمواد‎ 5 ‏الخلايا وظروف معالجة مزرعة النسيج‎ ‏في خلية‎ (ATCC, CCL-136; RD ‏تمت زراعة خلايا السركوما المخططة البشرية ( خلايا‎ ‏مل‎ YE ‏خلية/ القارورة في‎ + ٠١ x) ,0 ‏عند‎ (NUNC) TTS ‏النسيج من قواريبر تمت معالجتها‎ ‏من مصل ألبومين بقري و١961 من‎ 96٠0و‎ (HyClone) ‏جلوتامين‎ L ‏دافئ مع‎ DMEM ‏من‎ ‏ساعة؛ فإن الأوساط يتم‎ YE ‏؛ وبعد‎ (CelGro) ‏محلول مضاد حيوي من بنسيلين -سبريتوميسين‎ 0 ‏دافئ ويتم إضافة أوساط جديدة. تمت‎ PBS ‏سحب الغاز منها ويتم غسلها مرة واحدة باستخدام‎ ‏من 602 ويتم‎ 965,٠ ‏م من وسيلة حضانة عند‎ VV ‏زراعة الخلايا عند 9680 من التلافيف في‎
Chine ‏التجميع باستخدام ترببسين. يتم إعادة تعليق أوليجومرات مروفولينو فوسفورو أميدات‎ ‏مل مولار من ماء خالي من نيوكلياز؛ لكي يتم‎ 5,٠ ‏إلى‎ ٠,5 ‏عند حوالي‎ (PMOS) ‏بالتجميد‎ ‎NanoDrop ‏باستخدام مقياس طيفي ضوئي‎ PMO ‏التثبت من الاستقطاب؛ وتم قياس محاليل‎ 5 ‏باستخدام المعالجة بالتثقب‎ RD ‏إلى خلايا‎ PMOs ‏تم توصيل‎ (Thermo Scientific) 2000 ‏عند العديد من التركيزات‎ PMOs ‏(0028ا). تم اختبار‎ SG ‏النووي طبقاً لتعليمات المُصنع وطقم‎ ‏ميكرو مولار). تمت حضانة‎ Yo ‏و‎ Ve 1,5 Ve 0 (Yo ‏الموضحة (على سبيل المثال؛ ؛‎ ‏خلية لكل عين من‎ © ٠١ X TY ‏ساعة مع التثقب النووي البعدي عند حوالي‎ YE ‏الخلايا لمدة‎ ‏كما تم‎ RNA ‏؟ أو ) وبعد ذلك يتم التعريض إلى استخلاص‎ =n) Lue YE ‏أو‎ ١١ ‏طبقه به‎ 0 ‏وصفه فيما يلي.‎ ‏باستخدام تقنيات قياسية. إن‎ (PromoCell) ‏تمت زراعة أورام أرومية في أوساط نمو خلية عضلة‎
RD ‏التثقب النووي ل 00/05 عند العديد من التركيزات قد تم إجراؤه كما تم وصفه في خلايا‎ ‏عيناً في اوساط نمو‎ ١١ ‏السابقة. تم وضع الخلايا بعد ذلك في أطبقا في عيون ثلاثية بها طبق به‎
TEVA
— A \ — خلية من نوع ‎PromoCell‏ ويتم السماح لها بالحضانة قبل استخلاص ‎RNA‏ كما تم وصفه فيما
PCR ‏وتضخيم‎ RNA ‏استخلاص‎ تم استخلاص ‎RNA‏ من ‎WIA‏ معالجة ب ‎PMO‏ (خلايا ‎RD‏ ؛ أو أرومات عضلية بشربة أساسية) باستخدام طقم عزلمل»ا 47 عينا باستخدام ‎RNAspin‏ من ‎GE Healthcare‏ وبتم التعريض إلى ‎RT-PCR‏ باستخدام تقنيات قياسية مع أزواج بادئات تالية: تكون بالدائات الخارجية كما يلى: الأمامية ‎5°-CTTGGACAGAACTTACCGACTGG-3"‏ (لمتوالية رقم ‎(YY‏ العكسية 37- ‎ 5’-GTTTCTTCCAAAGCAGCCTCTCG‏ (لمتوالية رقم 77): البادئات الداخلية: الأمامية ‎GCAGGATTTGGAACAGAGGCG-3’‏ -:5 (لمتوالية رقم ‎(Yo‏ ‏0 العكسية 08111610160080166-3/م01 ام-5 (المتوالية رقم ‎(Yo‏ تم قياس تخطي الإكسون من خلال الاستشراد الكهربي للجل أو من خلال استخدام وسيلة حيوية من ‎Caliper LabChip‏ و96 من تخطي الإكسون (أي شدة النطاق الخاصة بمنتج تخطي الإكسون ‏المرتبطة مع الطول الكامل لمنتج ‎(PCR‏ الموضح كما هو في الأشكال من ‎OY‏ ‏تحضير وحدات بنائية من مورفولينو؛» ‎PMO PMO‏ مع روباط بداخل الوحدات معدلة ‎TEVA
‎A \ —‏ _ ‎B‏ ‎B 0‏ ‎NalO4, MeoH (aq) HO‏ .1 0 ‎HO 2. 0807 © 2‏ ‎Borane-triethylamine N*‏ .3 ‎Methanolic acid (p-TsOH /\‏ .4 ‎HO OH or HCI) H H‏ 2 1 ‎B‏ ‏0 ‎i 1‏ ‎PG‏ ‎X X‏ ‎Rl‏ 3 اص ‎P‏ ‏ى-- ]لا اك رصي ‎cf‏ م 7 ‎of‏ ). ‎4a 4b‏ ‎X B 2X B‏ ‎N I 0 0 \ I 0 0‏ سا سا © , ) © , ٍ باه ان ‎cl RE‏ ‎N‏ 1 ‎PG le‏ ‎5a 5b‏ المخطط ‎:١‏ مسار التخليق العام ل ‎PMO‏ ووحدات بنائية ‎PMOXaas‏ ‏وبالرجوع إلى مخطط التفاعل رقم ‎١‏ ؛» حيث يتم ‎Jal‏ 8 في شكل ‎IY‏ مزدوج من قاعدة وبمثل ‎PG‏ مجموعة حامية؛ يمكن تحضير الوحدات الفرعية من المروفولينو من رببو نيولكيوتيد مناظر ‎)١( 5‏ كما هو موضح. يمكن أن تتم حماية الوحدة الفرعية من المورفولينو (7) بشكل اختياري وتتم مايتها من خلال التفاعل مع ‎sale‏ منتجة لمجموعة حماية مناسبة على سبيل المثال» تراي إيثيل كلوريد. تتم إزالة مجموعة الحماية ؟” بصفة ‎dale‏ أثناء تخلى الأوليجومر من الحالة الصلبة كما تم وصفه بشكل تفصيلي فيما يلي . يمكن أن تتم حماية زوج ‎Ja sac all‏ مناسب فيما يتعلق بتخلى أليجيومر فى الطور الصلب. تشتمل مجموعات الحماية المناسبة على بنزويل خاص بأدينين 0 وسيتوسين وفينيل أسيتيل فيما يتعلق بجوانين وبيفا لويل أوكسي ميثيل خاص بهيوبكسانثين )1( يمكن إدخال مجموعة بيفالويل أوكسي ميثيل في موضع ‎NT‏ من قاعدة هيبوكسانثين حلقية غير متجانسة. وعلى الرغم من وجود وحدة فرعية من هيبوكثانثين يمكن استخدامها لإنتاج تفاعلات ‎TEVA‏
_ A Ad —_
تنشيط ‎Allg‏ تكون فائقة عندما يكون هنا قاعدة تتم حمايتها. تشتمل مجموعات حماية مناسبة
أخرى على تلك التى تم الكشف عنها في طلب البراءة الأمريكي رقم 0071649706 والتى تم
تضمينها هنا كمرجع بكاملها.
ينتج عن التفاعل ؟ مع مركب الفسفور المنشط 1 أو كب وجود وحدات فرعية من مروفولينيو لها
جز رابط مطلوب ‎dle)‏ أو دب). يجب أن تتم ملاحظة أن ‎RE‏ و/أو 11 يمكن أن يتم تركيبها
‎Lead‏ على حلقة 2 غير متجانسة حلقية بعد تشكيل رابطة0-0 أو حتى بعد تضمين الرابطة
‏الفرعية في الأوليجومر.
‏يمكن تحضير المركبات من البنيات ‎TE‏ أو كب باستخدا عدد من الطرق المعروفة لذوي المهارة فى
‏المجال والتي تشتمل على تلك التي تم وصفها في الأمثلة. إن الإقران باستخدام جزءِ مروفولينو 0 يسبقه بعد ذلك ما تم تلخيصه أعلاه.
‏تكون مركبات البنية ‎To‏ أو ب مستخدمة في تخليق أوليجومر من الطور الصلب ‎Led‏ يتعلض
‏بتحضير الأوليجومرات المشتملة على روابط بداخل الوحدات. تكون تلك الطرق معروفة بشكل جيد
‏في المجال. ‎eg‏ نحو مختصر فإن المركب الذي له البنية ‎To‏ أو ب يمكن أن يتم تعديله عند
‏الطرف م لكي يتم الحصول على رابط خاص بحامل صلب ‎٠‏ ويمجرد نْ يتم حمله فإن المجموعلة 5 الخاصة بالحماية من ‎To‏ أو هب (على سبيل ‎JU)‏ تراتيل عند الطرف 7 ” )) تتم إزالته ‎aig‏
‏تفاعل الأمين الحر باستخدام جزيء فوسفوري منشط من المركب الذي له البنية ‎To‏ أو #ب (أو
‏الحماية فى الطرف ‎TY‏ أو تركيها إذا كان هناك التعديل المطلوب ‎VY‏ يمكن إزالة الأوليجو من
‏المادة الصلبة الحاملة باستخدام أي عدد من الطرق أو معلاجات توضيحية مع قاعدة لكي يتم 0 تركب الرابطة الخاصة بالمادة الحاملة الصلبة.
‏تم وصف تحضير أولجيومرات مورفولينو بصفة عامة وعلى نحو خاص أوليجومرات مورفولينو من
‏الاختراع بالتفصيل في الأمثلة.
‎TEVA
‎A ¢ —‏ — المثال رقم ‎١‏ : تحضير مورفولينو من الأوليجومرات إن تحضير مركبات الاختراع يتم إجراؤه باستخدام البروتوكول التالي: تحضير تراتيل بيبرازين فينيل كربامات ‎To‏ (الشكل رقم ‎:)١‏ إلى معلق مبرد من المركب ‎١١‏ في داي كلورو ميثان ‎[de T)‏ جم ‎)١١‏ تمت إضافة محلول من كربونات بوتاسيوم (7, مكافئ) في ‎sls 5‏ )£ مل/جم من كربونات البوتاسيوم). إلى هذا الخليط ثنائي الطور؛ تم ببطء إضافة محلول من كلورو فورمات فينيل ‎٠.,07(‏ مكافئ) في داي كلورو ميثان (؟ جم/جم فينيل كلورو فورمات). تمت تدفئة خليط التفاعل إلى ‎٠١‏ م. وعند اكتمال التفاعل ) ‎١‏ ساعة)ء تم فصل الطبقات ‎٠‏ تم غسل الطبقة العضوية باستخدام ماء وتم التجفيف فوق كريونات بوتاسيوم غير مائية ‎٠‏ تم عزل المنتج ‎Yo‏ ‏بواسطة التبلر من أسيتونيتريل. 10 تحضير كحول كريونات 1: تم تعليق هيدريد صوديوم ) ا مكافئ) في ‎-١‏ ميل -؟- بيروليدين ‎TY)‏ مل/جم من هيدريد الصوديوم). إلى هذا المزاد تمت إضافة تراي إيثيلين جليكول ‎٠٠١١(‏ مكافئ) والمركب ‎٠,١( Yo‏ مكافئ). تم تسخين الملاط الناتج عند 40 م. وعند اكتمال التفاعل ‎Yo)‏ ساعة)؛ تم تبريد الخليط إلى ‎Ye‏ م. إلى هذا الخليط تمت إضافة ‎٠‏ 967 من داي كلورو ميثان/ ميثيل +-بيوتيل إيثر (حجم : حجم) وماء ‎٠‏ تم غسل الطبقة العضوية المتشملة على المنتج على نحو متكرر باستخدام ‎NaOH‏ مائي؛ وحمض مكسينيك مائي؛ كلوريد صوديوم مائي مشبع. تم عزل المنتج ‎TT‏ من خلال التبلر من داي كلورو ميثان / ميثيل +- بيوتيل إيثر/ هيبتان. تحضير حمض طرفي ‎iTV‏ على محلول من المركب ‎FT‏ في تترا هيدرو فيوران ‎[de V)‏ جم 36) تمت إضافة أنهيدريد سكسينيك )0 ‎Y,‏ مكافئ) و ‎DMAP‏ )4,0 مكافئ). تم تسخين الخليط إلى 00 م. وعند اكتمال التفاعل )0 ساعات)؛ تم تبريد الخليط عند ‎Yo‏ م وتم الضبط عند ‎Ao‏ ‏0 باستخدام ‎NaHCO3‏ مائي. تمت إضافة +-بيوتيل إيثر وتم استخلاص المنتج بداخل طبقة مائية. تمت إضافة داي كلورو ميثان؛ وتم ضبط الخليط عند الرقم الهيدروجيني ‎١‏ باستخدام حمض سيتريك مائي. تم غسل الطبقة العضوية المشتملة على المنتج باستخدام خليط من رقم هيدروجيني ‎y=‏ من محلول منظم من السترات وكلوريد صوديوم ماثي مشبع . تم استخد ام محلول د اي كلورو ميثان المذكور ‎TY‏ بدون عزل المستحضر من المركب ‎FA‏ ‎TEVA‏
Ao المستحضر 8/؟: إلى محلول من المركب رقم ‎TV‏ تمت إضافة ‎N‏ — هيدروكسي-* -نوربورونين - ‎=F oY‏ داي كربوكسيلي إيميد ‎٠.١7 ( (HONB)‏ مكافئ)؛ 4 - ‎gla‏ ميثيل أمينو بيريدين ‎YE) (DMAP)‏ ,+ مكافئ)؛ وبعد ذلك )= ‎=F)‏ داي ميثيل أمنيو بروييل) ‎N'=‏ = إيثيل كريو داي إيميد هيدروكلوريد ‎,١( (EDC)‏ مكافئ). تم تسخين الخليط عند 00 م. وعند اكتمال التفاعل؛ (؛-2) ساعات؛ تم تبريد الخليط إلى ١7م‏ وتم الغسل على نحو متتابع باستخدام ‎١.7 1:١‏ مولار من حمض سيتربك / محلول ملحي ومحلول ملحي. يخضع محلول داي كلورو ميثان لمذيب يتم تبادله مع أسيتون وبعد ذلك مع ‎NUN‏ -داي ميثيل فورماميد وتم عزل المنتج بواسط الترسيب من أسيتون/ ,ا - داي ‎dine‏ فورماميد بداخل كلوريد صوديوم مشبع مائي. تم ‎dallas sale]‏ الملاط مرة أخرى عدة مرات في الماء لإزالة ‎NON‏ - داي ميثيل فورماميد المتبقي والأملاح. 0 إن إدخال ‎"hl‏ على راتنج محمل على ركيزة يتم إجراؤه في داي ميثيل إيميدازوليدينون ‎(DMI)‏ ‏بواسطة إجراء يتم استخدامه فيما يتعلق بتضمين وحدات فرعية أثناء تخليق الطور الصلب. تحضير المادة الحاملة الصلبة الخاصة بتخليق أوليجومرات مورفولينو: تم تنفيذ الإجراء المذكور في مركب سيلانيزيد ووعاء ببتيد مغلف ‎(ChemGlass, NJ, USA)‏ باستخدام مسامية خشنة (6؛-0٠‏ ميكرو مولار) من زجاج فريت مع وسيلة تقلب علوية ووسيلة إيقاف من التيفلون ثلاثية 5 الطرق للسماح ل ‎ob N2‏ يقوم بتشكيل فقاعات خلال الفريت أو استخلاص خاص بالتبخير. تتكون خطوات معالجة الراتنج/ الغسل في الإجراء التالي من اثنين من عمليات التشغيل الأساسية: المعالجة المائعة للراتنج أو مفاعل طبقة وسيلة الترسيب واستخلاص المذيب/ المحلول. بالنسبة للطبقة المائعة من الراتنج» فإن وسيلة الإيقاف يتم تثبيتها للسماح ل ‎N2‏ بأن يتدفق لأعلى خلال الفريت ومعالجة راتنج معين/ الغسل الذي تتم إضافته إلى المفاعل والسماح بالنفاذ الكامل لترطيب 0 الراتنج. يتم بعد ذلك البدء في الخلط ويتم خلط ملاط الراتنج لفترة زمنية محددة. بالنسبة لاستخلاص المذيب/ المحلول؛ فإن الخلط و تدفق ‎N2‏ يتم إيقافهما ويتم بدء تشغيل مضخة بالتفريغ وبعد ذلك وسيلة الإيقاف التي يتم تثبيتها لتدفق ناتج تبخير معالجة الراتنج / ناتج الغسل إلى مهدور. كانت كل أحجام معلاجة الراتنج/ وأحجام الغسل هي ‎Vo‏ مل /جم من الراتنج ما لم يتم توضيح خلاف ذلك.
TEVA
إلى راتنج أمينو إيثيل بوليستيرين ‎00-٠٠١(‏ مش؛ حوالي ‎٠0١‏ مل ممول / ‎can‏ يتم التحمل بالاعتماد على استبدال نيتروجين؛ ‎Polymer Labs, UK, part #1464- {AK ١ can Vo‏ 9) ) في ببتيد مغلف بسيلازيد والذي تمت إضافته عند ‎-١‏ ميثيل -7- بيروليدينون ‎NMP)‏ ؛ ‎"٠‏ مل / جم راتنج) وتم السماح للراتنج بان ينتفخ مع الخلط لمدة ‎7-١‏ ساعة. ويعد التبخير الخاص بمذيب اتفاخ فإن الراتنج يتم غسله باستخدام داي كلورو ميثان ‎Y=) XY)‏ دقيقة)؛ 965 داي أيزو بروبيل إيثيل أمين في ©9672 من أيزو بروبانول/ داي كلورو ميثان ‎XY)‏ 4-7 دقيقة) وداي كلورو ميثان ‎XY)‏ ١-؟‏ دقيقة). وبعد تبخير ناتج الغسل النهائي؛ فإن الراتنج تتم معالجتها باستخدام محللو من مثبت كبريتيد مزدوج من 4 ؟ في ‎-١‏ ميثيل -7- بيروليديون ( ‎١1١7‏ مولار؛ ‎٠‏ مل/ جم راتنج» حوالي 7,5 مكافئ) وخليط راتنج/ ‎sale‏ تفاعل والتي تم تسخينها عند 45 م لمدة 0 ساعة. وعند اكتمال التفاعل؛ يتم إيقاف التسغيل ويتم تفريغ المحلول الأساسي ويتم غسل الراتنج باستخدام ‎-١‏ ميثيل -1- بيروليدينون ‎=F XE)‏ دقيقة) وداي كلورو ميثان ‎XT)‏ ١-؟‏ دقيقة). تمت معلاجة الراتنج باستخدام محلول من ‎961٠١‏ (حجم/حجم) من داي إيثيل داي كريونات في داي كلورو ميثان ‎VT)‏ مل/جم؛ ‎XY‏ 1-5 دقيقة) ‎aang‏ ذلك يتم الغسل باستخدام داي كلورو ميثان ‎XT)‏ ١-؟‏ دقيقة). تم تجفيف الراتنج 9 (انظر الشكل رقم ؛) تحت تيار من ‎N2‏ لمدة 5 ١-؟‏ ساعات ويعد ذلك يتم التفريغ إلى وزن ثابت (+ 967). الصحيلة : ‎Yo ٠560-٠١١١‏ من وزن الراتنج الأصلي. إن تحديد التحميل الخاص براتنج أمينو إيثيل بوليستيرين - داي كبريتيد: فإن تحميل الراتنج (عدد المواضع المتفاعلة المحتملة المتاحة) يتم تحديدها من خلال اختبار قياسي طيفي من عدد من مجموعات تراي ‎Jind‏ ميثيل (تريتيل) لكل جرام من الراتنج. 0 يكون هناك وزن معروف من راتنج مجفف ‎VO)‏ + ؟ مجم) يتم نقله إلى قارورة قياس حجمي من سيلازيد ‎Yo‏ مل و حوالي © مل من ‎BY‏ (حجم/ حجم) من حمض تراي فلورو أسيتيك في داي كلورو ميثان. يتم خلط المحتويات بواسطة التدويم الرقيق ويعد ذلك يتم السماح بالاستقرار لمدة ‎3١‏ ‏دقيقة. تم زيادة الأحجام إلى ‎Yo‏ مل باستخدام 967 إضافي (حجم/حجم) من حمض تراي فلورو أسيتيك في داي كلورو ميثان ‎gig‏ خلط المحتويات بشكل جيد. وياستخدام أنبوب استبدال موجب؛ ‎TEVA‏
الم فإن الجزء المساوي من محلول يشتمل على تريتيل ‎٠٠0‏ 8 مل) يتم نقله إلى ‎٠١‏ مل من قارورة حجمية ويتم جعل الحجم عند حوالي ‎٠١‏ مل باستخدام حمض ميثان سولفونيك. تم قياس محتوي كاتيون تربتيل في المحلول النهائي بواسطة امتصاص ‎UV‏ عند ‎EVV‏ نانو متر وتم حساب حمل الراتنج في مجموعات تريتيل لكل ‎aha‏ راتنج (ميكرو مول/جم) باستخدام أحجام مناسبة؛ وتخفيفا ومعامل كبت )£118 ميكرو مول-١‏ سم-١)‏ مع وزن الراتنج. تم إجراء الاختبار المذكور في ثلاثيات ويكون له متوسط تحميل يتم حسابه. سوف يتم توفير إجراء تحيل الراتنج مع الراتنج والتحميل عند ‎5٠8٠0 Joa‏ ميكرو مول/جم. إن تحميل ‎500-٠٠١‏ في ميكرو مول/جم يتم الحصول عليه إذا كان هناك خطوة تضمين تثبيت بكبريتيد ثنائي يتم إجراؤها لمدة ‎YE‏ ساعة عند درجة حرارة الغرفة. 0 التحميل الطرفي: وباستخدام نفس الخطوة والأحجام كما هو الحال مع مستحضر من راتنج أمينو إيثيل بوليستيرين- ثاني كبريتيد يمكن إدخال الجزء الطرفي في مادة حاملة صلبة. يتم تحميل الراتنج أولا من خلال إزالة الحماية تحت ظروف حمضي ويتم تعديل ‎sald)‏ الناتجة قبل الإقران. بالنسبة لخطوة الإقران؛ فإن محلول من ‎١7( TA‏ مولار) في ‎DME‏ يشتمل على 4 - إيثيل مورفولين ‎١4 « NEM)‏ مولار) يتم استخدامه بدلاً من محلول مثبت ثنائي الكبريتيد. وبعد ساعتين 5 عند 45 م؛ فإن الراتنج 34 يتم غسله مرتين باستخدام 965 من داي أيزو بروبيل إيثيل أمين في 8 أيزو برويانول / داي كلورو ميثان ويتم التركيز باستخدام ‎DOM‏ الراتنج تمت إضافة محلول من أنهيدريد بنزويك )08+ مولار) ‎NEM‏ )8 مولار). وبعد ‎Yo‏ دقيقة تم تغليف المفاعل وتم التبريد إلى درجة حرارة الرغفة وتم غسل الراتنج مرتين باستخدام 965 من داي أيزو بروبيل إيثيل أمين في ©9672 من أيزو برويانول/ داي كلورو ميثان وثمانية مرات باستخدام ‎DCM‏ ‏0 تم ترشيح الراتنج ‎5٠0‏ وتم التجفف تحت تفريغ عال. تم تحديد التحميل الخاص بالرتنج ‎fo‏ بحيث يكون لها تحميل من أمية ميثيل بولي سيترين أصلي- من راتنج ثاني كبربتيد ‎VA‏ يتم استخدامه في تحميل ‎gall‏ الطرفي. تخليق الطور الصلب: تم تحضير أوليجومرات مورفولين على 81/15-422 ‎Gilson‏ من وسيلة ‎alas‏ ببتيد ألية في ‎١‏ مل من أعمدة تفاعل بولي بروبيلين جليسون )3980270 # ‎(Part‏ تتدفق ‎TEVA‏
‎A A —‏ — كتلة ألومنيوم مع قنوات خاصة بتدفق الماء ويتم وضعها حول الأعمدة مثلما هو الحال مع وسيلة التخليق. تمت إضافة ‎AMS-422‏ على نحو بديل عند محاليل تفاعل/ محاليل غسل ويتم التثبيت لفترة زمنية محددة؛ وبتم التفريغ من الأعمدة باستخدام وسيلة تفريغ. بالنسبة لأوليجورمات في مدى من حوالي ‎Yo‏ وحدة فرعية في الطول» راتنج أمينو ميثيل بوليستيرين - داي كبريتيد مع التحميل بالقرب من ‎5٠٠0‏ ميكرو مول /جم من الراتنج والذي تم تفضيله. بالنسبة أوليجولأوليجومرأت أكبر» فإن راتنج داي كبريتيد أمينو ميثيل بوليستيرين مع التحميل الخاص ب 060 £00 ميكرو مول/ جم من الراتنج الذي يكون مفضلاً. إذا كان هناك جزيء باستخدام 70 - من الطرف مطلوياً» فإن الراتتج تم تحميله باستخدام طرف تم اختياره بنفس وسائل التخطيط الخاصة بالتحميل. 0 "تم تحضير محاليل متفاعلة تالية: محلول معالج بيتربتيل: ‎96٠١‏ من حمض سيانو أسيتيك (وزن/ حجم) في4: ‎١‏ داي كلورو ميثان/ أسيتو نيتريل؛ ومحلول التعادل: 965 من داي إيزو بوبيل إيثيل أمين في ؟: ‎١‏ ؛ داي كلورو ميثان / أيزو برويانول؛ محلول إقران: ‎VA‏ مولار (أو ‎YE‏ + مولار من أوليجومرات تزيد بشكل أطول من ‎Yo‏ وحدة فرعية) يتم تنشيطها ‎Lad‏ يتعلق بوحدة فرعية من مورفولينو من القاعدة المطلوية ونوع 5 رابطة و ‎١.4‏ مولار من لا إيثيل مروفولين وفي ‎=F)‏ داي ميثيل إيميدازوليدونون. تم استخدام داي كلورو ميثان ‎(DCM)‏ في شكل مادة غسل انتقالية لفصل محاليل الغسل المتفاعلة. وعلى وسيلة التخليق وباستخدام مجموعة إعاقة عند ‎$Y‏ م عند كل عمود يشتمل على ‎Vo‏ مجم من راتنج ‎gal‏ إيثيل بوليستيرين - داي كبريتيد (أو راتتج طرفي) تتم الإضافة عند "مل من ‎-١‏ ميثيل -7- بيروليدون ويتم السماح بضبط درجة حرارة الرغفة عند ‎Vo‏ دقيقة ويعد الغسل مرتين باستخدام 0 ؟ مل من داي كلور ميثان يتم إجراء دورة التخليق التالية. حجم الخطوة مع زمن تثبيت خاص بالتوصيل ‎TEVA‏
معالجة بداي | ‎٠,5‏ مل وسيلة تفريع ‎٠‏ ثانية تريتيل معالجة بداي | ‎٠,5‏ مل وسيلة تفريع ‎٠‏ ثانية تريتيل معالجة بداي | ‎٠,5‏ مل وسيلة تفريع ‎٠‏ ثانية تريتيل معالجة بداي | ‎٠,5‏ مل وسيلة تفريع ‎٠‏ ثانية تريتيل معالجة بداي | ‎٠,5‏ مل وسيلة تفريع ‎٠‏ ثانية تريتيل معالجة بداي | ‎٠,5‏ مل وسيلة تفريع ‎٠‏ ثانية تريتيل ‎TEVA‏
‎q «=‏ — ا لإقران بهار #ميكرو محفنة 12 دقيقة لتر
‏تمت برمجة متواليات الأوليجومرات الفردية في وسيلة تخليق بحيث أن كل عمود يستقبل محلول إقران مناسب ‎(LTGeCA)‏ في متوالية مناسبة. عندما يتم إكتمال تضمين الأوليجومر ‎Lad‏ يتعلق بالوحدة الفرعية النهائية منهاء فإن العمود تتم إزالته من الدائرة الخاصة بالإغلاق حتى الدائرة النهائية والتي يتم إجراؤها بشكل يدوي مع محلول الإقران ‎Lad‏ يتعلق بتضمين 4 - ميثوكسي تراي فينيل ميثيل كلوريد ( ‎TY‏ + مولار في ‎(DMI‏ التي تشتمل على على ‎AY‏ + مولار من 4- إيثيل
‏مورفولين. ‏إن الانشطار من الراتنج وإزالة القواعدة ومجموعات الحماية الرئيسية: وبعد المعالجة بميثيوكسي تراي إيثيل؛ فإن الراتنج يتم غسله ل ‎A‏ مرات مع ¥ مل من ‎-١‏ ميليل -7- يروليدينون. يتكون واحد ‎Je‏ من محلول ‎f‏ لانشطار من ‎٠ ١‏ مولار من ا ¢-— داي ثيو ثربتول ‎(DTT)‏ و ‎٠ VY‏ مولار 0 .من تراي إيثيل أمين في ‎-١‏ مليثيل -7- بيروليدون الذي تمت إضافته ‎wing‏ تغطية العمود والسماح له بأن يستقر عند درجة حرارة الغرفة لمدة ‎9١‏ دقيقة. وبعد ذلك الوقت فإن المحلول يتم تجفيفه في زجاجة سعة ‎VY‏ من نوع ‎Wheaton‏ . تم ‎Jue‏ الراتنج الذي تم انكماشه بشكل زائد باستخدام ‎To‏ ميكرو لتر من محلول الانشطار. إلى المحلول الذي تمت غضافته فإن هناك £0 مل من
‎TEVA
أمونيا مركزة (تم تخزينها عند -70 م) وتم تغطية الزجاجة على نحو دقيق (باستخدام غطاء لولبي
مبطن بالتيفلون) وتم تدويم الخليط لكي يتم خلط المحلول. تم وضع الزجاجة في 5469 م في فرن
لمدة ‎4-١7‏ ؟ ساعة لكى يتم التأثير على انشطار القاعدة ومجموعات الحماية الأساسية.
تنقية المنتج الخام: تمت إزالة محلول تحليل أمونيا من الفرن وتم السماح له بأن يبرد لدرجة حرارة
الغرفة. تم تخفيف المحلول باستخدام ‎٠١‏ مل من 960,78 من المحلول المائي من الأمونيا ويتم
التمرير خلال عمود به #, ‎٠١ X‏ سم يشتمل على راتنج من نوع | ‎Macroprep HQ‏
‎(BioRad)‏ تم استخدام تدريج ملح (أ: ‎YA‏ + 96 من الأمونيا مع ب ‎٠:‏ مولرا من كلوريد
‏صوديوم في ‎«+,YA‏ % من أ لأمونيا 4 .-..9601 من ب في ‎Te‏ دقيقة) للتصفية التتايعية باستخدام
‏ميثوكسي تريتيل عند القمة. تم تجميع الأجزاء المجمعة وتمت المعالجة بشكل غضافي بالاعتماد على ا لمنتج المطلوب.
‏معالجة بديميثوكسي ترتيل من أوليجومرات مورفولينو: لكي يتم تجميع الأجزاء من التنقية الخاصة ب
‎Macroprep‏ ؛ تمت المعالجة باستخدام ‎١‏ مولار من 13004 إلى رقم هيدروجيني أقل من
‏5,. وبعد الخلط ‎(JY)‏ فإن العينات يتم تثبيتها عند درجة حرارة الرغفة لمدة ؛ دقائق وعند هذا
‏الوقت يتم التعادل عند رقم هيدروجيني ‎١١-٠١‏ باستخدام 967,8 من أمونيا/ ماء. تمت تنقية 5 المنتجات بواسطة استخلاص الطور الصلب ‎(SPE)‏
‎Amberchrome CG-300M (Rohm and Haas; ‏وتهيئته: تمت تعبئة‎ SPE ‏تجميع عمود‎
‎BioRad Econo—-Pac ) ‏مل من أعمدة الفريت‎ ٠١ ‏فى‎ Philadelphia, PA)
‎(Chromatography Columns (732-1011)‏ وتم غسل الراتنج باستخدام ؟ مل من مما
‏يلى: ‎YA‏ ,+ % من ‎%A / NH40H‏ من أسيتونيتريل؛ بس مولار من ‎967٠٠ / NaOH‏ 0 يإيثانول؛ ماء ؛ ‎5٠‏ نانو مولار ‎[H3PO4‏ 96850 من أسيتونيتريل؛ ماء ؛ ‎١,8‏ من ‎[NaOH‏
‎.NH40OH ‏من‎ 96 ٠ ,Y A ‏من الإيثانول؛ ماء‎ 9/67٠
‏تنقية 5068: تم تحميل محلول معالج بدي ميثوكسي ترتيل على العمود وتم الغسل بالرتنج ثلاثة
‏مترات باستخدام 1-7 مل من 960,78 من الأمونيا المائية. تم وضع زجاجة ‎VY) Wheaton‏
‎TEVA
— q \ —
‎(Je‏ تحت العمود وتمت التصفية التتابعية للمنتج من خلال مرتين غسل باستخدام ‎١‏ مل من 65 من الأمونيا المائية.
‏عزل المنتج:
‏تم تجميد المحاليل في ثلج جاف وتم وضع الزجاجات في وسيلة تجفيف وتجميد لإنتاج مسحو تمت إذابة العينات في الماء وتم الترشيح خلال مرشح ‎١.77‏ ميكرون من غشاء 101/0 ‎HT‏ ) ‎Lal‏ من وحدات ‎OD‏ من الأوليجومر الوجود وأيضاً ‎die‏ مشتتة خاصة بالتحليل.يتم بعد ذلك وضع المحاليل في زجاجات ‎Lad Wheaton‏ يتعلق بالتجفيف بالتجميد.
‏0 "تم استخدام تحليل أوليجومرات مروفولينو بواسطة قياس كتلة طيفي ‎MALDI: MALDI-TOF‏ لتحديد تركيبة من الأجزاء في التنقية وأيضاً لتوفير دليل خاص بالهوية (وزن جزيئي) من الأوليجومرات. تم إجراء العينات بعد التخفيف باستخدام محلول من حمض ‎oF‏ *#- ديا ميثوكسي -؛ - هيدرو سيناميك (حمض سينابينيك)؛ ‎of oF‏ *- تراي هيدوكسي أسيتوفينون ‎(THAP)‏ أو حمض ‎Wl‏ -
‏15 سيانو -؛- هيدوكسي سيناميك ‎(HCCA)‏ في شكل قوالب. المثال ؟ باستخدام البروتوكول الموصوف في المثال ١؛‏ تم تخليق ‎PMO‏ التالي « ‎H53A(+36+60)‏ ‏متوالية رقم ‎GTTGCCTCCGGTTCTGAAGGTGTTC -3:( : ١‏ -:5) و المستخدمة فى الأمثلة:
‎TEVA
Break A Break B Break 0
Og O_O fA ‏مثالا‎ are
J 0 oH oR og 0 ‏م‎ ‎: 0 T 0 0 N ‏بح 0 ب‎ NY J ey rE a wear" G 0._,G o. SC N° T ‏ب‎ ‎Cr CY J J al O alk ron vor" MeN” 0 . oT o. JC Ne 6 ‏ب‎ ‎yr ‏حب‎ Si of
M ke I Moo ‏و‎ : * oT o_ JC ‏مب‎ A ‏ب‎ ‎Cr wow
A | 20 Aps0 . ‏ها ًْ ونه‎ ale . MeN ‏م‎ 1 MeN Cop Me,N ‏مما‎ ‎1 ‏ا‎ :
A | 58 A Al
Mo Foo veN-Foo veN-F2o o._~-° 0. JT ‏ب‎ 6 3 <> > 0: 0 c Men 0 ] ven 0 © 0 0 >< or
Break A Break B Break 0
NH; NH, 0 9 _ N x _ = N NH =m5)= NH {TY ‏باع مادا‎ , :يلاتلا‎ PMO ‏تم تخليق‎ ١ ‏رقم ؟ باستخدام البروتوكول الموصوف في المثال رقم‎ Jal
H53A(+30+57), SEQ ID NO: 2 (5°~ GCC TCC GGT TCT GAA 661 7 : ‏كما تم استخدامه في الأمثلة‎ CTT GTA C-37)
TEVA
_ q ¢ —
Oy No on sc ao ps zy 0 . 0 ‏مب‎ ert <7 CY ope Lo Wo *p20 ١ ‏ان انا يس ل‎ or ‏ا عب‎ eg ef ‏ين ب‎ ewe
Cr voy "Ler “Ny Ty Ty . ke won LS oo 7 ‏ب > > با‎ 6 we ag Nr > 7 £5 ‏كالب 0 الهم 00 اللي‎ ‏مما مرا‎ Ny ‏رح‎ ‎deca Brock 8 Break ‏م‎ bees / | / : 18 ‏المثال رقم‎ ‏_التاليء؛‎ 010/0 Galas ‏باستخدام البروتوكول الذي تم وصفه في المثءال رقم ١؛ تم‎ 5:- CCT CCG GTT 016 AAG 616 TTC ( ‏المتوالية رقم ؟‎ H53A(+30+56) ‏المستخدمة في الأمثلة‎ )116 180-3: 5
TEVA
د حيلم خم ميب ؟ ‎wy‏ ‎Yr Tr TTY‏ ‎Te Ty Ty TY‏ ‎Tw Ty TY TY‏ ‎Thy Th Ty Ty‏ ‎"er "Le "or "or‏ ا م 2 0 د 0 حم المثال رقم 10 باستخدام البروتكول الموصوف في المثال رقم )0 تم تخليق ‎PMO‏ التالي ‎H53A(+30+55)‏ المتوالية رقم ¢ ) ‎CTC CGG TTC TGA AGG TGT TCT‏ -5 ‎(TGT AC-3‏ وتم استخدامها في الأمثلة.
-؟؟- ‎Neon sh ah gr‏ رج ‎YY‏ مما مما اما ‎N | we, 1 Jo A Lo‏ ‎MeN” <0 . MeN" 0 oT‏ و ‎No MeN‏ رما ‎Seah cA‏ مع ‎A | 0 ١ 0 Lo A lo‏ ا اكت ‎MeN" 0 T‏ و ‎MeN" 0 MeN"‏ ‎of‏ امنا مب ‎or‏ ‎Jo‏ م م اه ‎Me” 0 MeN" 0 ] MeN” © os MeN” 0 :‏ ب انبا ابيب مرا ‎A lo‏ مله ‎a Yo Lo‏ \ و ‎MeN" ~0 ] MeN‏ م ‎Me” © MoN-F‏ ‎o.
JG 0‏ 0 4 د ا رع ‎Wo ٠ Lo wo‏ مله ‎MeN" 0 MeN” 0‏ و أ لاوميا 0“ ‎MeN"‏ ‎o._sC A oT 0‏ د وعد وذ مح ‎A | 0 Jeo ١‏ مله [ مر 0 ‎MeN”‏ بن © ‎MeN”‏ م 0 ‎MeN"‏ ‎rt‏ 1 ‎bron A Brod B Broke 0‏ ‎NH, NH, 0 9‏ ‎pel en (end Tee‏ \ مسح ‎NTN N NTN‏ (33+57+)1538 المتوالية رقم © ) ‎GCC TCC GGT TCT GAA GGT GTT‏ -’5 ‎(CTT G-37‏ وتم استخدامها في الأمثلة ‎TEVA‏
_ q 7 _
Break A Break B Break C ‏يه‎ 0 me oj Nes ‏سه‎ ‎58 ‏ماه م اك كه لاا‎ © <>
N o 6 ‏مب‎ A ‏مب‎ T
Pl ‏7ه ممح‎ it
SN RE Re A ‏م‎ C 0 6 0 5 ‏ب ب‎
Cy ‏بم بحب‎ 0 ‏زان‎ ‏جا‎ LC oan" . MeN” 0 . os ‏رب‎ her 7 ‏با‎ ‎7 YY
Me. ke Mono ‏م الوم‎ َ MeN” 0 : : o. LC o. ‏ب مب آعم‎ ‏ممح‎ Xr if al ‏قا‎ Ad
M Ps wea Me T ean"
LP 0 7 ‏ب مب 0 ب‎ 6
Ao YY oi MeN" Moan" . ‏ود و رمح‎ i ea Me. 8 ‏ماي‎ ‏ب 2 مي‎ c NY
N J N
Break A Break B Break C
NH. NH, 0 0 a SN a= CM ‏دراج‎ NH ‏تأت‎ oni ‏ادم‎ ‎OF ‏تخطي الإكسون‎ : ١ ‏المثال رقم‎
OF ‏تم تحديد مجموعات من أوليجومرات في عكس اتجاه النسخ التي تستهدف إكسون ديستروفين‎ ‏وتم تخليقها ما يلي‎
H53A(+36+60) | GTTGCCTCCGGTTCTGAAGGTGTTC
GCCTCCGGTTCTGAAGGTGTTCTTGTA Y
H53A(+30+57) Cc
TEVA
H53A(+30+56) | CCTCCGGTTCTGAAGGTGTTCTTGTAC
H53A(+30+55) | CTCCGGTTCTGAAGGTGTTCTTGTAC
H53A(+33+57)| GCCTCCGGTTCTGAAGGTGTTCTTG ‏في‎ ‎GTTGCCTCCGGTTCTGAAGGTGTTCTT 1
H53A(+33+60) G
H53A(+31+55)| CTCCGGTTCTGAAGGTGTTCTTGTA
H53A(+22+46) | TGAAGGTGTTCTTGTACTTCATCCC
H53A(+23+47) 3
CTGAAGGTGTTCTTGTACTTCATCC
‏تم تقييم الأوليجومرات في عكس اتجاه النسخ السابقة لفعالية تخطي الإكسون من خلال معالجة‎ ‏أرومات عضلية بشكرية عند العديد من التركيزات الموضحة. فى تلك التجارب المذكور فإن‎ ‏تم استخدامها كأولجيومرات‎ H53A(+31+55) ‏الأوليجومرات المناظرة ل (1538+33+60 و‎
H53A(+36+60) ‏مقارنة. وكما ه موضح في الشكل رقم ؟ ورقم 4 فإن الأوليجومرات من‎ ‏لها تأثير فعال عند حث تخطي الإكسون #7 في خلايا عضلية أرومية بشرية.‎ )١ ‏(لمتوالية رقم‎ 5 ‏تحث‎ (A ‏(المتوالية رقم‎ HS3A(+22+46) ‏و‎ (V ‏(المتوالية رقم‎ HS3A(+31+55) ‏تكون‎ ‏(المتوالية رقم 1( و‎ H53A(+33+60) ‏ولكن درجة أقل من‎ oF ‏أيضاً تخطي الإكسون‎ ‏رقم 38 فإن‎ Aa ‏(المتوالية رقم \ ( . وكما هو موضح في‎ H53A(+36+60) ‏على الترتيب) لها‎ ٠ ‏(لمتوالية رقم > والمتوالية رقم‎ HS3A(+36+60) 5 HS3A(+33+60) ‏فعالتي عالية في حث تخطي الإكسون في أرومات عضلية مزروعبة بالمقارنة بأوليجو‎ 0 ‏نيوكليوتيدات فعالة بشكل عال في عكس اتجاه النسخ.‎ ‏تم تقييم أوليجومرات إضافية في عكس اتجاه النسخ فيما يتعلق بفعالية تخطي الإكسون من خلال‎ ‏عند العديد من التركيزات الموضحة. في تلك لاتجارب فإن الأوليجومر في‎ RD LIA dalla
TEVA
‎q q —_‏ _ عكس اتجاه التسخ المناظر ل ‎H53A(+33+60)‏ (المتوالية رقم 1( قد تم استخدامه في شكل أوليجومر مقارن. وكما هو موضح في الشكل رقم ‎of‏ فإن الأوليجومرات ‎HS3A(+30+57),‏ ‎H53A(+30+56), H53A(+30+55) and H53A(+33+57)‏ (المتوالية رقم 5-7؛ على الترتيب) تتم مقارنتها بالفعالية الخاصة بالأوليجومر ‎H53A(+33+60)‏ (المتوالية رقم 6).
‏5 في تجارب أخرى فإن الأوليجومرات في عكس اتجاه النسخ من الاختراع يتم اختبارها فيما يتعلق تخطي الإكسون في أورمات عضلية بشرية أساسية بالمقارنة مع أوليجونيوكليوتيدات في عكس اتجاه النسخ. بالإضافة إلى ‎HS3A(+23+47)‏ (المتوالية رقم 4) التي تم وصفها أعلاه؛ فإن ‎H53A(+39+62)¢ H53A(+39+69)‏ « و ‎H53A(+45+69)‏ (لمتوالية رقم ‎٠١‏ و ‎١١‏ ‏و١١‏ ؛ على الترتيب ) من 8,232,384 5لا؛ )45+62+( 15380101 (المتوالية رقم ‎(VY‏
‏0 من02004/083446//ا ‎PMOB(+36+56) 3 PMO3(+32+56)y‏ (المتوالية رقم ‎Ve‏ ‏و١١‏ على الترتيب) من الطلب الدولي 74983/7097 0 قد تم مقارنتها مع أوليجومر توضيح من الاختراع ‎H53A(+36+60)‏ (المتوالية رقم ‎.)١‏ وكما هو موضح في الشكل رقم ‎clo‏ ودب؛ فإن الأوليجومر الموضح يكون له 5050 منخفضة وتم تحديد أنه ‎H33A(+36+60)‏ ؛ المتوالية رقم ‎.١‏ تم التثبت من ذلك من خلال تعريبض النتائج إلى تحلي النقص ‎BM‏ متغيرات فيما يتعلق ببرنامج ‎GraphPad Prism‏ لإنشاء قيم 050 كما هي موضحة في الجدول التالي ‎Ee‏ ‏6.482 المتوالية رقم ‎H53A:)‏ (57 15+7) المتوالية رقم ‎H53A‏ (+7*+47) المتوالية رقم 0153801 )714+ 1( المتوالية رقم 153/817 (+17+46) المتوالية رقم ‎153/8:1١1‏ (+4؟+17) المتوالية رقم ‎HS3ANY‏ (+19+406) ‎TEVA‏
-١ ‏ا‎ ‎)21+77+( 51403:1 4 ‏رقم‎ ald )51+776 +) ]/08:15 ‏المتوالية رقم‎ 15.81 ‏تم تضمين كل النشرات وطلبات البراءات المذكورة ي المواصفة الحالية كمرجع حيث أن كل نشرة‎ ‏أو طلب نشرة توضح بشكل خاص وعلى نحو فردي أنه تم تضمينها كمرجع هنا.‎ . ‏المراجع‎ ‎Aartsma—-Rus, A., A. A. Janson, et al. (2004). "Antisense—induced 5 multiexon skipping for Duchenne muscular dystrophy makes more sense.’
Am J Hum Genet 74(1): 83-92.
Cirak, S., V. Arechavala-Gomeza, et al. (2011). "Exon skipping and dystrophin restoration in patients with Duchenne muscular dystrophy after systemic phosphorodiamidate morpholino oligomer treatment: an open- 10 label, phase 2, dose—escalation study." Lancet 378(9791): 595-605.
Dunckley, M. G., ٠١ C. Eperon, et al. (1997). "Modulation of splicing in the
DMD gene by antisense oligoribonucleotides." Nucleosides & Nucleotides 16(7-9): 1665-1668.
Dunckley, M. G., M. Manoharan, et al. (1998). "Modification of splicing in 5 the dystrophin gene in cultured Mdx muscle cells by antisense oligoribonucleotides.” Hum Mol Genet 7(7): 1083-90.
Errington, S. J., C. J. Mann, et al. (2003). "Target selection for antisense oligonucleotide induced exon skipping in the dystrophin gene." J Gene
Med 5(6): 518-27. 20
TEVA
_ \ ٠ \ —_
Goemans, N. M., M. Tulinius, et al. (2011). "Systemic Administration of
PROQO51 in Duchenne's Muscular Dystrophy." N Engl J Med.
Jearawiriyapaisarn, N., H. M. Moulton, et al. (2008). "Sustained
Dystrophin Expression Induced by Peptide-conjugated Morpholino
Oligomers in the Muscles of mdx Mice." Mol Ther. 5
Kinali, M., V. Arechavala—Gomeza, et al. (2009). "Local restoration of dystrophin expression with the morpholino oligomer AVI-4658 in
Duchenne muscular dystrophy: a single-blind, placebo—controlled, dose— escalation, proof-of-concept study.” Lancet Neurol 8(10): 918-28.
Lu, ©. L., C. J. Mann, et al. (2003). "Functional amounts of dystrophin 10 produced by skipping the mutated exon in the mdx dystrophic mouse." Nat
Med 9(8): 1009-14.
Mann, C. J., K. Honeyman, et al. (2002). "Improved antisense oligonucleotide induced exon skipping in the mdx mouse model of muscular dystrophy.’ J Gene Med 4(6): 644-54. 5
Marshall, N. B., S. K. Oda, et al. (2007). "Arginine-rich cell-penetrating peptides facilitate delivery of antisense oligomers into murine leukocytes and alter pre-mRNA splicing." Journal of Immunological Methods 325(1- 2): 114-126.
Matsuo, M., ٠١ Masumura, et al. (1991). "Exon skipping during splicing of 0 dystrophin mRNA precursor due to an intraexon deletion in the dystrophin gene of Duchenne muscular dystrophy kobe." J Clin Invest 87(6): 2127- 31.
TEVA
-١ ٠ Y-—
Monaco, A. P., C. J. Bertelson, et al. (1988). "An explanation for the phenotypic differences between patients bearing partial deletions of the
DMD locus." Genomics 2(1): 90-5.
Pramono, Z. A., Y. Takeshima, et al. (1996). "Induction of exon skipping of the dystrophin transcript in lymphoblastoid cells by transfecting an 5 antisense oligodeoxynucleotide complementary to an exon recognition sequence.’ Biochem Biophys Res Commun 226(2): 445-9.
Sazani, P., R. Kole, et al. (2007). Splice switching oligomers for the TNF superfamily receptors and their use in treatment of disease. PCT
WO2007058894, University of North Carolina 10
Sierakowska, H., M. J. Sambade, et al. (1996). "Repair of thalassemic human beta-globin mRNA in mammalian cells by antisense oligonucleotides." Proc Natl Acad Sci ‏ل‎ 5 A 93(23): 128404.
Summerton, J. and D. Weller (1997). "Morpholino antisense oligomers: design, preparation, and properties." Antisense Nucleic Acid Drug Dev 15 7(3): 187-95.
Takeshima, Y., H. Nishio, et al. (1995). "Modulation of in vitro splicing of the upstream intron by modifying an intra—exon sequence which is deleted from the dystrophin gene in dystrophin Kobe." J Clin Invest 95(2): 515- 20. 20 van Deutekom, J. C., M. Bremmer—-Bout, et al. (2001). "Antisense— induced exon skipping restores dystrophin expression in DMD patient derived muscle cells." Hum Mol Genet 10(15): 1547-54.
TEVA
_ \ ٠ ".- van Deutekom, J. C., A. A. Janson, et al. (2007). "Local dystrophin restoration with antisense oligonucleotide 00051." N Engl J Med 357(26): 2677-86.
Wilton, S. D., A. M. Fall, et al. (2007). "Antisense oligonucleotide—- induced exon skipping across the human dystrophin gene transcript." Mol 5
Ther 15(7): 1288-96.
Wilton, S. D., F. Lloyd, et al. (1999). "Specific removal of the nonsense mutation from the mdx dystrophin mRNA using antisense oligonucleotides.” Neuromuscul Disord 9(5): 330-8.
Wu, B., H. M. Moulton, et al. (2008). "Effective rescue of dystrophin 0 improves cardiac function in dystrophin—deficient mice by a modified morpholino oligomer." Proc Natl Acad Sci ‏ل‎ 5 A 105(39): 14814-9.
Yin, H., H. M. Moulton, et al. (2008). "Cell-penetrating peptide— conjugated antisense oligonucleotides restore systemic muscle and cardiac dystrophin expression and function." Hum Mol Genet 17(24): 15 3909-18. : ‏المتوليات‎ ‏متوالية | المتوالية الوصف‎ ‏رقم‎ ‎H53A(+36+60) GTTGCCTCCGGTTCTGAAGGTGTTC
TEVA
TEVA
مج \ _ (RX)8 RXRXRXRXRXRXRXRX (RARXR)4: ‏ءالمع طفع »ممع ع »مع‎ | YY )6007( (RARXR)S; RAhXRRAhXRRAhXRRARXRRAhXR ١ YA (CP04057) (RAhXRRBR)2; RAhXxRRBRRAhXRRBR | ‏؟‎ (CP06062) (RAR)4F2 RARRARRARRARFF (RGR)4F2 RGRRGRRGRRGRFF
CTTGGACAGAACTTACCGACTGG
GTTTCTTCCAAAGCAGCCTCTCG
GCAGGATTTGGAACAGAGGCG
CATCTACATTTGTCTGCCACTGG
TEVA
-١١.-
TEVA

Claims (2)

  1. -١ V ‏عنا الحماية‎ : dal) ‏ذ كليوتيد : عكس اتجاه النسخ بحت على التركيب‎ ls - ١ ٠ ‏لود ركسي في ّّ يحدوي ب لي‎ 3 ‏م لم حت‎ ‏ن #ضة ا‎ 8 3 " H ‏؟‎ ROR ‏بطي 0 5 مستي ا ا 5 م‎ 3 5 ‏مل اير الي ا ال احا ال‎ : et SEN ‏ال 0 وي ييا بد اح مب‎ Fy CE A > 8 3 1 3 Se i. ‏ل ل يي‎ ‏عبت‎ (NEN Sey TY IE vy 1 ‏ا‎ t i H a Sy id py ne 1 Sa” «8 N 1 ‏يب‎ 8 3 Yo. . ‏لال‎ EN N fa ‏تق‎ ‏الج ل‎ EN oF SN ‏“لجيج كينب ير‎ ‏ب‎ Wea i hdd i a 3} 3 3 - x 5 1 A ‏ات‎ Loa ‏ب شي لحي لع نر‎ ‏مي ن بم‎ hy ‏تاي‎ ne > > : 7 id - Eg Bod EN Noy oF ea Ww % nN i : 1 i 3 He vo FS [RE ٠ ‏مجع‎ ‏ا‎ HAN Sa Ey BE RE Ty ‏“يمع‎ ‎EE EEE] 1 MeN | + N : IN ‏أي الا نر اجالع‎ RS Nao ‏“عي‎ Toning oy ‏يح بخ‎ TY id i 3 HS 3 i 3 4 yo ‏ف‎ Np Ny 3 8 Ex 0 : 1 i. 3 - { {eo sda = ald NP ds AE a Ea ‏الح تخ المج‎ 3 at ‏ب‎ ‎se ‏ل‎ WEY ‏ب"‎ Loe ‏ثم‎ ‎H 0 Con ‏ب‎ 8 bn, ‏بي ا حا تلع الا ا‎ = Y T 0 3 H 1 i N Lod Lo ‏م‎ ‎Np Ey 3 0 Ga NES dal ta nae SN Se ‏د‎ hE ‏اللي‎ say Me” ‏جا‎ wer” 0 RRR 0 8 8 ‏لمي ا‎ So £3 A a 2 ‏لي‎ ‎nn ‏ابي الاي الم‎ A head 0 ‏ب‎ TY i003 AA ‏يي‎ ES “i % 1 bd ! A 8 | er aoe ARE) Le As? LoD ‏ضع 5 تبي‎ SE Rag po] 0 1 1 ‏م‎ H 8 ‏م‎ doar i = > 8 = \ + 2d ERR} ‏ل أن اللي‎ WEE 3 ٍ ag : Ao 3 EN 37 Sap” > { 1 H § ‏ا‎ I~ ‏تمع قد‎ Te ‏لماخ‎ A ‏يا‎ ‎MMR ‏تاريخ‎ OY Rp 0 8 0 WENA + 3 8 ‏ا اج‎ i 83 ‏ا اا ب‎ A . ‏واي صني‎ a 3 ~; od H i NS a 8 : Bo ha Sy > 8 H § : 8 0 Hons Tadd ‏مق‎
    ‎.: Cus 5 a ‏كا ل‎ 2 2 a NH; aM 0 5 1 Ee RE ‏ري‎ Moa Xa NE 5 § TNH EAR 4 ‏د الإ‎ egy 5 1 : CF ; ; EN ‏تمن 5 § ساود‎ iL C= 1 A=¢ [ ‏سي‎ >< NTE NH - ‏وخ لم‎ FIT ot " WV =) NE 1
    0 ". R : N 0 ‏ل‎ i { § [9 3 9 x : © ‏ع‎
    ‎.
  2. 2 N J “ “- ‏.اج . كز م‎ | = A 5 ‏لم يتم تحديده أو ملح مفبول صيد نيا منه.‎ Jer ‏اغية من مرد‎ ll I) ‏ل لكيميا‎ f 7 ‏عم 5 ب 0 ب اال ب ب‎ Be Toe 7 ‏ام‎ ‏يحتوى على التركيبة‎ ١ ‏نوكليوتيد فى عكس اتجاه‎ als )١ ‏تشتمل على‎ La dea ‏تركيبة‎ ¥ oe > = 0 S ‏وب‎ 3 5 5 5 - ‏ب‎ ‏التالئة:‎
    -١ ١ ‏حم‎ ‏وا للم الع‎ ٌ ‏المع‎ ; SIR 8 ‏تت‎ ‎Hg ‏الح الت ان اي لنت‎ HEAT wT SEN, i SEEGER SE ‏جا ا‎ FRG Ra TR ea x 5 3 + SS Ln Se re ‏أي اللي‎ RES Pog” ‏تح‎ bi 11 0 8 3 { PRY Fa I aE ras N Ea SSE SE JE wea fake” 7 RA i i EN CON 5 ‏افيا ب اها الي‎ ‏بكي‎ ey 0 ‏و‎ ‎Nid I. 4 et gy ‏ان "م‎ gg 3 3 1 yo fo tes RE sled a AE ER ‏مك‎ ‏امي دا اليج حك ري‎ NE BET FEN i Me Ei ERs i “ H 03 > . Loe ‏تمن‎ Gh SWE ‏ري ايا‎ & Sogn he 0 N ke H 3 i 8 Ae Soe Nog 3 i de che Ja ‏ب"‎ ‎oh sey SX ‏تجح‎ ‎Sa > 7 8 a i co x ‏الأ ل‎ ‏مب ب ص تبي الى ال م الم ا ما‎ a H : 3 3 0 1 1 § od ‏بج‎ Lo Ng Ng Ed 0 R B H $k > i Py EF ~ 8 A al LA 2 Ea Ee Meg ‏يك‎ seat R ‏انث اج ا ا حي تا 4 ال‎ Fogo wa RENE > NY ‏تي‎ ‎id id Ld od 3 aR est rs N 8 ¥ 0 8 1 0 +3 a dad > La oe a ‏ارج‎ Ng Soe uy WETS ‏ل‎ ‎5 Ep Po ‏ىا‎ LE Fy of 3 ‏وتاي عي ييا‎ ‏سبي‎ Ne = Se i 3 { ‏تي‎ sie saa iNT 3 ‏تبي ا الي‎ 9 } on > By ‏ب ~ ب‎ ‏ضيح في ضاي‎ ye Yt 2 2 > ww 2 ‏ب‎ Se A ho wo 1 0 ne HER Mean Sef Cua - 0 2 ‏واي‎ : ‏ا ويا‎ © o i ox, 8 1 ii i STE 3 3, ‏لي ب‎ 8 Er oT a : : ‏احا ايد .ا سا ال‎ SUN TI a i 1 1 H Lop id ‏اا‎ i To Nee guy =f Fee id = & i ; ; 1 = ] i r=mtll=s 01 1 ‏اك نب‎ ii 1 1 Se A iy sd j ‏اا ل‎ ‏ل م ب تن‎ a a Ree Ter any By NT RG NTN THM, NT § H 3 H . ; . and . ‏ع‎ ‏كذ دحب‎ N J > ‏كز + الم‎ EEN = A 9 ‏صيد نيا منه‎ ) gaa ‏يتم تحديده أو‎ Jer ‏اغية من مرد‎ ll ‏و الكيمياء‎ 2 N ‏م‎ wt 5 . ‏ناقا 1 مقبول صيد نيا‎ ( Y ) - - - ‏ب م 7 ب‎ - - - ٍ ٍ
    % . w . . 5 1 + ‏ب وا مك . ب‎ Mia ‏يكون عبارة عن‎ J Jaall ‏ان‎ Cua (FF ‏لعنصر الحماية‎ lak ‏التركيبة الصبدلانية‎ 4 > ‏ب‎ 5 = > 5 - + ٍ ’ ‏نز‎ : 10 .Duchenne’s DMD ‏عضلي من نوع‎
    ‎٠ q —_‏ \ _ ‎—o‏ التركيبة الصيدلانية طبقاً لعنصر الحماية ‎oF‏ حيث أن الحثل العضلى يكون ‎Ble‏ عن حثل عضلي من نوع ‎.(Becker’s BMD)‏ ‎TEVA‏
    H ( N 1 8 0 Py 8 ‏الا ا‎ O= 1 7 N(CH,); 0 ls 7 8 0 > i ‏الشكل‎
    -١١١- 85 ‏يست اف‎ 79 3 ) ~ 0 gH © ' 2 ‏واج أ أ أ‎ i 8 ١٠ | ‏لسر‎ | A ; = ELL pr: ‏ا با‎ VAN VERN 7 = IE . ’ 0 4 T= N x ‏ص ا‎ 0 A i =X z = i Jo F Ty » ١ AN a ‏طم‎ 2 ‏الا سو ا‎ 5 ‏ال ؟‎ 0 ٠ Jeo oi wa bE TEVA
    -١١- va) ‏ا‎ ‏بس‎ 7 ‏ايا ف ل 3 تحسم لا‎ won 7 ‏ب الا سي ال‎ ‏بد حم 1 لا يل“‎ ‏ا ا الا‎ ١ = Sand NE AN 'ٍ 2 ‏ا‎ : = = © 1 0 0 ) 2 = LT —& I + ‏يلا ب دع‎ ER a cn oF «= : AR Lo 8 1 ‏ومسل‎ 75 3 5 i (° 4 El ] \ EY I= 8 { w+ Hn on LAA ‏حا‎ y= ‏وم ات‎ + TEVA
    -- t 0 0] FP lg 8) 1 P. “N TN 7am P ‏يس‎ ‎PT] ol ‏م‎ ‎X ] T د١ ‏الشكل‎ | 1 7 ه١ ‏الشكل‎ . N ’ ‏سس إلا‎ YL ) TI I== ‏ا‎ —X
    Y. | | j Ie | J 1 0 YT P ‏الشكل د‎ NT TEVA
    -١١62- © ‏ض‎ 2 ‏فينيل كلوروفورمات الجا‎ 0 6 ‏هه 7 ا احص‎ KOO ‏ل ا لحت‎ py 1 ‏ل‎ NL ‏ونا‎ ‎006. ‏مبخمح‎ ‏اا ص‎ = EE ] 1 0 ‏الا ا ا‎ LN ‏الر‎ ‎Ye ‏الاو‎ ‎0 dae ‏ثلين‎ st 8c : - LAr Pas Ji Cla 0 - ‏سكسينيك الهيدريد‎ DMAP : ge i THE AEE pd 0 ‏اده‎ ‎5 1 ‏اا‎ A Al Pa icy IN == US CaS 01 ‏ما 1 وأ‎ I a , 3 0 2 Ne HON J ‏مانا‎ ‎ٍ owe 4 0 ‏سر 8 9 متت اذو‎ ) 1 AN § 3h ‏ب‎ i 1 8 3 <7 ‏الشكل‎ ‎TEVA
    _ \ \ ‏اج‎ ‎= ‎E ‎a ‎CO ‏مده‎ ‏سيج‎ ّ ‏حت‎ - = + ( 2 ‏ا‎ ‎5 ‏يه‎ |ّ ‏سب اب‎ = YN E om ig o £ ‏يسيب اس‎ S00 ro zx BN A { PD TN Q ~ ‏مده‎ ‎5 ‏ض‎ 2 No { 3 5 = 3 = 1 . 6 4 ) 1 - =) Vo : ‏ل‎ | Fam Q ْ 1 ‏رز‎ ‎| - : : 0" Or 2 oo = ws ! ; 4 ‏آٍِ‎ ‎1 of ‏ين‎ ‏إْ ت‎ 7 0 of ) prea 1 J bd i KS J o 1 ‏ا‎ + § 2 ‏ا حل‎ 3 ES a 5 © = oF 4 3 | 5 : ‏أل \ #5 بخ‎ ‏ال‎ 2 0 6١ ؟ ‏ل‎ ‏ب بن‎ 0 TEVA
    AR aad 3 ‏اال‎ The he ‏ع 4 ب م‎ ‏جد لذ ا ام‎ - ‏ل‎ ١ ‏نحا ال اللا ا‎ ‏ل ا‎ 5 ox * ‏له ا‎ ‏ذو‎ x ‏هيد ار‎ 4+ SP REC ‏را‎ LC) ‏بذكا ذا ذا لعا‎ <> ‏زات‎ 2 1 ‏ا يرو د«‎ ْ Nag 4 ‏,أ‎ 0 4 Wx gs 3 \\ \, ‏ذو 300 اا‎ 3 % 3 ١ — W 5 8 A A) 4 i 3 1 = 4 ‏ل‎ ‏ندال اال اتح ء‎ 0+ Sh OF Cond dead da TEVA
    -١١7- 32 3 4 34 ‏لز ل اليه‎ ‏ل 4 4 ل‎ + Tox ‏او وا‎ ‏وى + + + اج‎ . ‏الها << سلا ا‎ 3 : 4 ‏ل ذا تل ل‎ : > Ton ‏حي‎ ِ ‏»ا اضر‎ 3 a <3 SP ‏»م‎ JN 00 BEE Ap BN ‏ل‎ ‏ل ل ل د‎ of ‏لي‎ 1 ‏لحب‎ EE i : \ ١ J | . 7 $e 1 ‏ء‎ 7 ‏بل‎ LA AN : >: r > = * 2 OF ‏تخطى الاكسون‎ dag TEVA
    حا - eng FIRE Pa ‏ييا‎ AE ‏لحب‎ om £0 ‏مم جا‎ Bred EEE EE ‏اللا‎ AE ١ + Toe he x » Hw ‏د‎ 8 RE] [0 Sir ee uA 3 Rk A J oa LL oo 0 F300 0 beable a SR ; lL ‏ملم للا ث3‎ © Ih A 0 34 3 3 | 3 ‏ب تدب‎ “Fu wy 0 FRI 3 EE SE TE as Sg) eg ‏ل ب ع د“‎ EH Ta Lye 3 $33 MoD ‏اله‎ Ce Te EE 4 + ‏م‎ ‏ا ان ها“‎ Coke 8 2 {3 & ” ‏م‎ I. ‏ا" الم‎ 8 ‏ال‎ > Rl 8 Cy ak ‏ض‎ iy ‏ةما‎
    ‎1 . & I 3 i i ‏ل‎ ‏لا ب‎ A ‏حص‎ ![ I 5 % k 3 BY F F bh 4 i + NN ‏ب 0 1 ,3 4 ال‎ : 6 BH k an te : 3 _ ‏اج‎ ‎% 8 ‏الي ااا‎ 1 3 a 5 ‏ب ا 8 ا 0 ب‎ ١ + FE 3 - 7 a 8 ". ' ‏ب 0 م‎ re " : ‏الح اج يع‎ Jedd Sag a4 ‏مغ‎ Od y Yo EIR 2 nN Cpe I ‏لمعي‎ ag TEVA
    مدة سريان هذه البراءة عشرون سنة من تاريخ إيداع الطلب وذلك بشرط تسديد المقابل المالي السنوي للبراءة وعدم بطلانها أو سقوطها لمخالفتها لأي من أحكام نظام براءات الاختراع والتصميمات التخطيطية للدارات المتكاملة والأصناف النباتية والنماذج الصناعية أو لائحته التنفيذية صادرة عن مدينة الملك عبدالعزيز للعلوم والتقنية ؛ مكتب البراءات السعودي ص ب ‎TAT‏ الرياض 57؟؟١١‏ ¢ المملكة العربية السعودية بريد الكتروني: ‎patents @kacst.edu.sa‏
SA515361121A 2013-03-14 2015-09-14 تركيبات تخطي للأكسون خاصة بمعالجة الحَثَل العَضَلِيّ SA515361121B1 (ar)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201361782706P 2013-03-14 2013-03-14
PCT/US2014/029766 WO2014153240A2 (en) 2013-03-14 2014-03-14 Exon skipping compositions for treating muscular dystrophy

Publications (1)

Publication Number Publication Date
SA515361121B1 true SA515361121B1 (ar) 2019-05-07

Family

ID=50694008

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SA515361121A SA515361121B1 (ar) 2013-03-14 2015-09-14 تركيبات تخطي للأكسون خاصة بمعالجة الحَثَل العَضَلِيّ

Country Status (26)

Country Link
US (5) US20160040162A1 (ar)
EP (3) EP2970964B8 (ar)
JP (3) JP2016521119A (ar)
KR (4) KR20210006516A (ar)
CN (2) CN110066793A (ar)
AU (3) AU2014236160A1 (ar)
BR (1) BR112015023038A2 (ar)
CA (1) CA2903872A1 (ar)
CY (1) CY1121876T1 (ar)
DK (1) DK2970964T3 (ar)
EA (1) EA201591694A1 (ar)
ES (1) ES2714290T3 (ar)
HK (1) HK1218138A1 (ar)
HR (1) HRP20190382T1 (ar)
HU (1) HUE042218T2 (ar)
IL (2) IL241047B (ar)
LT (1) LT2970964T (ar)
MX (2) MX366274B (ar)
NZ (1) NZ631132A (ar)
PL (1) PL2970964T3 (ar)
PT (1) PT2970964T (ar)
RS (1) RS58529B1 (ar)
SA (1) SA515361121B1 (ar)
SI (1) SI2970964T1 (ar)
TR (1) TR201903009T4 (ar)
WO (1) WO2014153240A2 (ar)

Families Citing this family (43)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2500430B1 (en) 2004-06-28 2017-03-08 The University Of Western Australia Antisense oligonucleotides for inducing exon skipping and methods of use thereof
EP3238737B1 (en) * 2007-10-26 2022-04-06 Academisch Ziekenhuis Leiden Means and methods for counteracting muscle disorders
TR201902952T4 (tr) 2008-10-24 2019-03-21 Sarepta Therapeutics Inc Dmd için ekson atlama bileşimleri.
CN105838714B (zh) 2009-11-12 2020-07-17 西澳大利亚大学 反义分子和治疗疾病的方法
TWI541024B (zh) 2010-09-01 2016-07-11 日本新藥股份有限公司 反義核酸
BR122020016865B1 (pt) 2013-03-14 2022-12-27 Sarepta Therapeutics, Inc. Oligonucleotídeo antisenso, composição farmacêutica compreendendo o mesmo e uso da dita composição para o tratamento de distrofia muscular de duchenne (dmd)
BR112015022998A2 (pt) 2013-03-15 2017-11-14 Sarepta Therapeutics Inc composições melhoradas para o tratamento de distrofia muscular
FR3044926B1 (fr) 2015-12-09 2020-01-31 Genethon Outils de therapie genique efficaces pour le saut de l'exon 53 de la dystrophine
JOP20200228A1 (ar) 2015-12-21 2017-06-16 Novartis Ag تركيبات وطرق لخفض تعبير البروتين tau
EP3463363A4 (en) * 2016-05-24 2020-02-19 Sarepta Therapeutics, Inc. METHOD FOR PRODUCING PHOSPHORODIAMIDATE MORPHOLINO OLIGOMERS
US11472824B2 (en) 2016-05-24 2022-10-18 Sarepta Therapeutics, Inc. Processes for preparing phosphorodiamidate morpholino oligomers
CA3024182A1 (en) * 2016-05-24 2017-11-30 Sarepta Therapeutics, Inc. Processes for preparing phosphorodiamidate morpholino oligomers
MA45154A (fr) * 2016-05-24 2019-04-10 Sarepta Therapeutics Inc Procédés de préparation d'oligomères
MA45362A (fr) * 2016-05-24 2019-04-10 Sarepta Therapeutics Inc Procédés de préparation d'oligomères morpholino de phosphorodiamidate
MX2018016052A (es) 2016-06-30 2019-05-02 Sarepta Therapeutics Inc Oligomeros de omision de exon para distrofia muscular.
CN109152792B (zh) * 2016-06-30 2021-09-14 萨勒普塔医疗公司 制备磷酸二酰胺吗啉代寡聚物的方法
KR102523527B1 (ko) * 2016-06-30 2023-04-20 사렙타 쎄러퓨틱스 인코퍼레이티드 포스포로디아미데이트 모르폴리노 올리고머의 제조 방법
EP3485015A4 (en) * 2016-07-15 2020-07-29 Ionis Pharmaceuticals, Inc. COMPOUNDS AND METHODS OF MODULATION OF DYSTROPHINE TRANSCRIPT
CN109937042B (zh) 2016-09-20 2023-06-27 科罗拉多州立大学董事会法人团体 使用亚磷酰胺化学法合成主链修饰的吗啉代寡核苷酸和嵌合体
EP3554552B1 (en) * 2016-12-19 2022-08-17 Sarepta Therapeutics, Inc. Exon skipping oligomer conjugates for muscular dystrophy
PL3554553T3 (pl) 2016-12-19 2022-11-07 Sarepta Therapeutics, Inc. Koniugaty oligomerów z pominięciem egzonu w dystrofii mięśniowej
EP4122497B1 (en) 2016-12-19 2024-04-10 Sarepta Therapeutics, Inc. Exon skipping oligomer conjugates for muscular dystrophy
TW201919655A (zh) * 2017-08-31 2019-06-01 美商薩羅塔治療公司 治療肌肉萎縮症的方法
EA201991450A1 (ru) 2017-09-22 2019-12-30 Сарепта Терапьютикс, Инк. Конъюгаты олигомеров для пропуска экзона при мышечной дистрофии
ES2963336T3 (es) * 2017-09-25 2024-03-26 Sarepta Therapeutics Inc Procesos para preparar oligómeros de fosforodiamidato morfolino mediante síntesis de flujo rápido
EP3687519A1 (en) 2017-09-28 2020-08-05 Sarepta Therapeutics, Inc. Combination therapies for treating muscular dystrophy
EP3765030A4 (en) * 2018-03-16 2022-01-26 Sarepta Therapeutics, Inc. CHIMERIC PEPTIDES FOR ANTISENSE ADMINISTRATION
WO2019209764A2 (en) * 2018-04-26 2019-10-31 Sarepta Therapeutics, Inc. Exon skipping oligomers and oligomer conjugates for muscular dystrophy
US10765760B2 (en) * 2018-05-29 2020-09-08 Sarepta Therapeutics, Inc. Exon skipping oligomer conjugates for muscular dystrophy
EP3810150A4 (en) * 2018-06-14 2023-01-25 Sarepta Therapeutics, Inc. EXON-SKIPPING OLIGOMERS AND OLIGOMER CONJUGATE FOR MUSCLE DYSTROPHY
CN112399849A (zh) * 2018-06-26 2021-02-23 日本新药株式会社 含有反义寡核苷酸的组合物及其在迪谢内肌营养不良症的治疗中的用途
JP2021532831A (ja) 2018-08-02 2021-12-02 ダイン セラピューティクス, インコーポレーテッドDyne Therapeutics, Inc. ジストロフィン異常症を処置するための筋標的化複合体およびそれらの使用
US11168141B2 (en) 2018-08-02 2021-11-09 Dyne Therapeutics, Inc. Muscle targeting complexes and uses thereof for treating dystrophinopathies
WO2020028864A1 (en) 2018-08-02 2020-02-06 Dyne Therapeutics, Inc. Muscle targeting complexes and uses thereof for treating facioscapulohumeral muscular dystrophy
WO2021025899A1 (en) 2019-08-02 2021-02-11 Sarepta Therapeutics, Inc. Phosphorodiamidate morpholino oligomer pharmaceutical compositions
CN116096724A (zh) * 2020-07-10 2023-05-09 常州合全药业有限公司 用于制备寡核苷酸的方法
EP4314016A1 (en) 2021-03-31 2024-02-07 Entrada Therapeutics, Inc. Cyclic cell penetrating peptides
WO2022217366A1 (en) * 2021-04-14 2022-10-20 The Royal Institution For The Advancement Of Learning/Mcgill University Modified oligonucleotides for the treatment of duchenne muscular dystrophy
EP4337264A1 (en) 2021-05-10 2024-03-20 Entrada Therapeutics, Inc. Compositions and methods for modulating tissue distribution of intracellular therapeutics
US11638761B2 (en) 2021-07-09 2023-05-02 Dyne Therapeutics, Inc. Muscle targeting complexes and uses thereof for treating Facioscapulohumeral muscular dystrophy
US11771776B2 (en) 2021-07-09 2023-10-03 Dyne Therapeutics, Inc. Muscle targeting complexes and uses thereof for treating dystrophinopathies
WO2023178230A1 (en) * 2022-03-17 2023-09-21 Sarepta Therapeutics, Inc. Phosphorodiamidate morpholino oligomer conjugates
WO2024073588A1 (en) * 2022-09-28 2024-04-04 Board Of Regents, The University Of Texas System Respiratory dry powder delivery

Family Cites Families (50)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CH445129A (fr) 1964-04-29 1967-10-15 Nestle Sa Procédé pour la préparation de composés d'inclusion à poids moléculaire élevé
US3459731A (en) 1966-12-16 1969-08-05 Corn Products Co Cyclodextrin polyethers and their production
US3426011A (en) 1967-02-13 1969-02-04 Corn Products Co Cyclodextrins with anionic properties
US3453257A (en) 1967-02-13 1969-07-01 Corn Products Co Cyclodextrin with cationic properties
US3453259A (en) 1967-03-22 1969-07-01 Corn Products Co Cyclodextrin polyol ethers and their oxidation products
US4235871A (en) 1978-02-24 1980-11-25 Papahadjopoulos Demetrios P Method of encapsulating biologically active materials in lipid vesicles
US4458066A (en) 1980-02-29 1984-07-03 University Patents, Inc. Process for preparing polynucleotides
US5521063A (en) 1985-03-15 1996-05-28 Antivirals Inc. Polynucleotide reagent containing chiral subunits and methods of use
US5185444A (en) 1985-03-15 1993-02-09 Anti-Gene Deveopment Group Uncharged morpolino-based polymers having phosphorous containing chiral intersubunit linkages
US5034506A (en) 1985-03-15 1991-07-23 Anti-Gene Development Group Uncharged morpholino-based polymers having achiral intersubunit linkages
EP0639582B1 (en) 1985-03-15 1998-09-16 Antivirals Inc. Polynucleotide assay reagent and method
US5166315A (en) 1989-12-20 1992-11-24 Anti-Gene Development Group Sequence-specific binding polymers for duplex nucleic acids
US5506337A (en) 1985-03-15 1996-04-09 Antivirals Inc. Morpholino-subunit combinatorial library and method
US5217866A (en) 1985-03-15 1993-06-08 Anti-Gene Development Group Polynucleotide assay reagent and method
US4737323A (en) 1986-02-13 1988-04-12 Liposome Technology, Inc. Liposome extrusion method
KR0166088B1 (ko) 1990-01-23 1999-01-15 . 수용해도가 증가된 시클로덱스트린 유도체 및 이의 용도
US5149797A (en) 1990-02-15 1992-09-22 The Worcester Foundation For Experimental Biology Method of site-specific alteration of rna and production of encoded polypeptides
EP1251170A3 (en) 1992-07-17 2002-10-30 Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. Method and reagent for treatment of NF-kappaB dependent animal diseases
WO1994026887A1 (en) 1993-05-11 1994-11-24 The University Of North Carolina At Chapel Hill Antisense oligonucleotides which combat aberrant splicing and methods of using the same
US5885613A (en) 1994-09-30 1999-03-23 The University Of British Columbia Bilayer stabilizing components and their use in forming programmable fusogenic liposomes
US5753613A (en) 1994-09-30 1998-05-19 Inex Pharmaceuticals Corporation Compositions for the introduction of polyanionic materials into cells
US5820873A (en) 1994-09-30 1998-10-13 The University Of British Columbia Polyethylene glycol modified ceramide lipids and liposome uses thereof
IL115849A0 (en) 1994-11-03 1996-01-31 Merz & Co Gmbh & Co Tangential filtration preparation of liposomal drugs and liposome product thereof
WO1999042091A2 (en) 1998-02-19 1999-08-26 Massachusetts Institute Of Technology Use of polycations as endosomolytic agents
US6683173B2 (en) 1998-04-03 2004-01-27 Epoch Biosciences, Inc. Tm leveling methods
US6210892B1 (en) 1998-10-07 2001-04-03 Isis Pharmaceuticals, Inc. Alteration of cellular behavior by antisense modulation of mRNA processing
AU2281201A (en) 1999-12-29 2001-07-09 A. James Mixson Histidine copolymer and methods for using same
US7070807B2 (en) 1999-12-29 2006-07-04 Mixson A James Branched histidine copolymers and methods for using same
EP2017338A1 (en) 2001-05-24 2009-01-21 Genzyme Corporation Muscle-specific expression vectors
WO2004083432A1 (en) 2003-03-21 2004-09-30 Academisch Ziekenhuis Leiden Modulation of exon recognition in pre-mrna by interfering with the secondary rna structure
EP2500430B1 (en) 2004-06-28 2017-03-08 The University Of Western Australia Antisense oligonucleotides for inducing exon skipping and methods of use thereof
US8067571B2 (en) * 2005-07-13 2011-11-29 Avi Biopharma, Inc. Antibacterial antisense oligonucleotide and method
KR101789603B1 (ko) 2005-11-10 2017-11-21 더 유니버시티 오브 노쓰 캐롤라이나 엣 채플 힐 Ｔｎｆ 수퍼패밀리 수용체에 대한 스플라이스 스위칭올리고머 및 염증성 질환 치료용 약제학적 조성물
DK2024499T3 (da) 2006-05-10 2018-01-29 Sarepta Therapeutics Inc Oligonukleotidanaloger med kationiske intersubunit-koblinger
US20070265215A1 (en) * 2006-05-11 2007-11-15 Iversen Patrick L Antisense restenosis composition and method
US20100016215A1 (en) 2007-06-29 2010-01-21 Avi Biopharma, Inc. Compound and method for treating myotonic dystrophy
US8299206B2 (en) 2007-11-15 2012-10-30 Avi Biopharma, Inc. Method of synthesis of morpholino oligomers
US8076476B2 (en) 2007-11-15 2011-12-13 Avi Biopharma, Inc. Synthesis of morpholino oligomers using doubly protected guanine morpholino subunits
WO2009127230A1 (en) 2008-04-16 2009-10-22 Curevac Gmbh MODIFIED (m)RNA FOR SUPPRESSING OR AVOIDING AN IMMUNOSTIMULATORY RESPONSE AND IMMUNOSUPPRESSIVE COMPOSITION
US8084601B2 (en) * 2008-09-11 2011-12-27 Royal Holloway And Bedford New College Royal Holloway, University Of London Oligomers
TR201902952T4 (tr) * 2008-10-24 2019-03-21 Sarepta Therapeutics Inc Dmd için ekson atlama bileşimleri.
CN105838714B (zh) * 2009-11-12 2020-07-17 西澳大利亚大学 反义分子和治疗疾病的方法
KR102095478B1 (ko) 2010-05-28 2020-04-01 사렙타 쎄러퓨틱스, 인코퍼레이티드 변형된 서브유니트간 결합 및/또는 말단 그룹을 갖는 올리고뉴클레오타이드 유사체
TWI541024B (zh) * 2010-09-01 2016-07-11 日本新藥股份有限公司 反義核酸
KR102229650B1 (ko) 2011-05-05 2021-03-19 사렙타 쎄러퓨틱스, 인코퍼레이티드 펩타이드 올리고뉴클레오타이드 접합체
US9161948B2 (en) * 2011-05-05 2015-10-20 Sarepta Therapeutics, Inc. Peptide oligonucleotide conjugates
WO2013033407A2 (en) * 2011-08-30 2013-03-07 The Regents Of The University Of California Identification of small molecules that enhance therapeutic exon skipping
EP4043039A1 (en) * 2012-01-27 2022-08-17 BioMarin Technologies B.V. Rna modulating oligonucleotides with improved characteristics for the treatment of duchenne and becker muscular dystrophy
EP2828395B1 (en) * 2012-03-20 2018-10-24 Sarepta Therapeutics, Inc. Boronic acid conjugates of oligonucleotide analogues
JP2016502858A (ja) * 2012-12-20 2016-02-01 サレプタ セラピューティクス， インコーポレイテッド 筋ジストロフィを処置するための改善されたエキソンスキッピング組成物

Also Published As

Publication number Publication date
DK2970964T3 (en) 2019-04-01
HUE042218T2 (hu) 2019-06-28
TR201903009T4 (tr) 2019-03-21
MX366274B (es) 2019-07-04
HRP20190382T1 (hr) 2019-04-19
US20140315977A1 (en) 2014-10-23
KR20210006516A (ko) 2021-01-18
AU2014236160A1 (en) 2015-10-01
IL272415A (en) 2020-03-31
LT2970964T (lt) 2019-04-25
KR20230074606A (ko) 2023-05-30
KR20150133752A (ko) 2015-11-30
EP2970964B1 (en) 2018-12-26
US20180002689A1 (en) 2018-01-04
BR112015023038A2 (pt) 2017-11-14
EP3495485A2 (en) 2019-06-12
PT2970964T (pt) 2019-03-14
US20160040162A1 (en) 2016-02-11
EA201591694A1 (ru) 2016-06-30
EP2970964A2 (en) 2016-01-20
EP3495485A3 (en) 2019-08-21
JP2022031948A (ja) 2022-02-22
EP3760720A1 (en) 2021-01-06
ES2714290T3 (es) 2019-05-28
JP2016521119A (ja) 2016-07-21
RS58529B1 (sr) 2019-04-30
AU2022252769A1 (en) 2022-11-10
EP2970964B8 (en) 2019-03-06
CN105392884B (zh) 2018-11-30
KR20220061280A (ko) 2022-05-12
US20220364093A1 (en) 2022-11-17
IL241047A0 (en) 2015-11-30
HK1218138A1 (zh) 2017-02-03
WO2014153240A2 (en) 2014-09-25
MX2019000224A (es) 2021-06-15
CA2903872A1 (en) 2014-09-25
US20200040336A1 (en) 2020-02-06
CY1121876T1 (el) 2020-10-14
MX2015012149A (es) 2016-06-02
PL2970964T3 (pl) 2019-06-28
JP2020039362A (ja) 2020-03-19
SI2970964T1 (sl) 2019-05-31
CN105392884A (zh) 2016-03-09
NZ631132A (en) 2017-06-30
AU2020203473A1 (en) 2020-06-18
IL241047B (en) 2020-02-27
WO2014153240A3 (en) 2014-12-31
CN110066793A (zh) 2019-07-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
SA515361121B1 (ar) تركيبات تخطي للأكسون خاصة بمعالجة الحَثَل العَضَلِيّ
KR102623786B1 (ko) 근위축증 및 근긴장성 이영양증을 치료하는 조성물 및 방법
SA519402226B1 (ar) مترافقات أوليجومرات تخطي الإكسون للحَثَل العَضَلِيّ
SA515361125B1 (ar) تركيبــــات تخطي للأكسون خاصة بمعالجة الحثل العضلي
SA519402154B1 (ar) مترافقات أوليجومرات تخطي الإكسون للحَثَل العَضَلِيّ
CN110337308A (zh) 用于肌肉萎缩症的外显子跳跃寡聚体缀合物
US11555190B2 (en) Compositions and methods of treating Facioscapulohumeral muscular dystrophy
WO2011084694A1 (en) Stabilized stat3 decoy oligonucleotides and uses therefor
KR20240055874A (ko) 안면견갑상완 근이영양증을 치료하는 조성물 및 방법
TW202020153A (zh) 用於肌肉萎縮症之外顯子跳躍寡聚物