RU2806751C2

RU2806751C2 - Соединения на основе пиразолопиридинона

Info

Publication number: RU2806751C2
Application number: RU2020120784A
Authority: RU
Inventors: Хайбин Го; Чжао-Куй ВАНЬ; Лохэн ЦИНЬ; Цянь Лю; Винг Шун ЧЭУН
Original assignee: Янссен Фармацевтика Нв
Priority date: 2017-11-24
Filing date: 2018-11-23
Publication date: 2023-11-07

Abstract

Изобретение относится к новым соединениям формулы (I) на основе пиразолопиридинона и фармацевтическим композициям, содержащим указанные соединения. Технический результат: получены новые соединения, которые обладают ингибирующей активностью в отношении FGFR (рецептора фактора роста фибробластов). 2 н. и 22 з.п. ф-лы, 2 табл., 15 пр.

Description

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ

Настоящее изобретение относится к новым соединениям на основе пиразолопиридинона, к фармацевтическим композициям, содержащим указанные соединения, к способам получения указанных соединений и к применению указанных соединений в качестве ингибиторов FGFR (рецептора фактора роста фибробластов) и к их применению в лечении заболеваний, например рака.

ПРЕДПОСЫЛКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Было продемонстрировано, что сигнальные пути фактора роста фибробластов (FGF) играют критическую роль в процессах, начиная с эмбриогенеза и заживления ран, а также обнаружена их сильная связь с несколькими признаками рака. Генетические изменения в представителях семейства FGFR связывают с ростом опухоли, метастазированием, ангиогенезом и выживанием. Разнообразные ингибиторы FGFR проходят клинические испытания, и они показали клинический ответ у пациентов с аберрациями FGFR. Однако сообщалось, что мутации, затрагивающие аминокислоты в FGFR, например, FGFR1, 2 или 3, могут вызывать устойчивость к ингибиторам FGFR или снижать чувствительность к ингибиторам FGFR. Развитие вторичных мутаций киназного домена FGFR при лечении ингибиторами FGFR является важным механизмом приобретенной устойчивости к ингибированию FGFR. При видах рака также происходят de novo эквивалентные точковые мутации FGFR. Сообщалось, что мутации гена-привратника представляют собой один из основных механизмов, приводящих к устойчивости к ингибиторам тирозинкиназы. Мутации гена-привратника включают FGFR3 V555L/V555M, FGFR1 V561M, FGFR2 V564F/V564I/V564M и FGFR4 V550L. Сообщалось об обуславливающих устойчивость мутациях FGFR в клинических испытаниях и в клеточных системах in vitro. Следовательно, новые (второго поколения) ингибиторы FGFR необходимы для более длительного воздействия при видах рака, характеризующихся изменением сигнального пути FGFR, для преодоления клинической приобретенной устойчивости к терапии с помощью ингибитора FGFR первого поколения. Ингибиторы FGFR второго поколения необходимы для преодоления снижения активности, наблюдаемого в случае ингибиторов FGFR первого поколения, направленной в отношении FGFR, несущих вышеуказанные мутации гена-привратника, и, следовательно, для поддержания ингибирующей активности в отношении FGFR.

Было обнаружено, что соединения по настоящему изобретению проявляют активность в отношении мутированных FGFR, в частности, в отношении FGFR, несущих мутации гена-привратника, или в отношении мутированного FGFR1, или мутированного FGFR2, или мутированного FGFR3, в частности, в отношении FGFR3 V555L, FGFR3 V555M, FGFR1 V561M и FGFR2 V564I, особенно в отношении FGFR3 V555L и FGFR3 V555M.

В каждой из заявок WO2002/022598, WO2003/087095, WO2004/018419, WO2004/043389, WO2005/046589 раскрыт ряд производных хинолинона.

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

В настоящем изобретении представлены соединения формулы (I):

(I),

в том числе их любая таутомерная и стереохимически изомерная форма, где

каждый из A₁, A₂ и A₃ независимо представляет собой CH, CR^a или N, при условии, что не более двух из A₁, A₂ и A₃ могут представлять собой CR^a;

C1 представляет собой водород или C_1-4алкил;

C2 представляет собой водород, C_1-4алкил, гидроксил или C_1-4алкокси;

или C1 и C2 взяты вместе с образованием C_3-6циклоалкила вместе с атомом углерода, к которому они присоединены;

Y представляет собой прямую связь, -O-, C(=O), NR^y, S(=O)₂ или C_1-4алкил;

R^y представляет собой водород или C_1-4алкил;

каждый R^a независимо представляет собой C_1-6алкил, галогенC_1-6алкил, галоген, C_1-6алкокси, карбоксил, C_1-6алкилоксикарбонил, C_2-6алкенил, C_2-6алкинил, циано, цианоC_1-6алкил, гидроксиC_1-6алкил, -C(=O)-NH₂,

-C(=O)-NH(C_1-4алкил), -C(=O)-N(C_1-4алкил)₂ или 3-6-членный моноциклический насыщенный гетероциклил, содержащий по меньшей мере один гетероатом, выбранный из N, O или S;

R^b представляет собой водород, C_1-6алкил, галогенC_1-6алкил, C_1-6алкокси, C_1-6алкилоксикарбонил, C_2-6алкенил, C_2-6алкинил, цианоC_1-6алкил, гидроксиC_1-6алкил, -C(=O)-NH₂, -C(=O)-NH(C_1-4алкил),

-C(=O)-N(C_1-4алкил)₂, C_3-6циклоалкил, фенил, 3-6-членный моноциклический гетероциклил, содержащий по меньшей мере один гетероатом, выбранный из N, O или S, или C_1-6алкил, замещенный C_3-6циклоалкилом, или фенилом, или 3-6-членным моноциклическим гетероциклилом, содержащим по меньшей мере один гетероатом, выбранный из N, O или S;

D представляет собой 3-12-членный гетероциклил, содержащий по меньшей мере один гетероатом, выбранный из N, O или S, где указанный гетероциклил необязательно замещен 1-5 заместителями R^c;

каждый R^c независимо представляет собой оксо, галоген, C_1-6алкил, C_1-6алкилокси, гидроксиC_1-6алкил, галогенC_1-6алкил, галогенC_1-6алкилокси, карбоксил, HOOC-C_1-6алкил-, C_1-6алкил, замещенный -C(=O)-O-C_1-6алкилом, C_1-6алкил-O-C(=O)-, циано, цианоC_1-6алкил, C_1-6алкил-C(=O)-, -SO₂-C_1-6алкил, C_3-6циклоалкил, фенил, 3-6-членный моноциклический насыщенный гетероциклил, содержащий по меньшей мере один гетероатом, выбранный из N, O или S, или 5- или 6-членный моноциклический ароматический гетероциклил, содержащий по меньшей мере один гетероатом, выбранный из N, O или S;

B представляет собой 3-12-членный карбоциклил или 3-12-членный гетероциклил, содержащий по меньшей мере один гетероатом, выбранный из N, O или S, где каждый из указанных карбоциклила и гетероциклила необязательно замещен 1-5 заместителями R;

каждый R независимо представляет собой C_1-6алкил, циано, галоген, C_1-6алкокси, галогенC_1-6алкокси, гидроксил, гидроксиC_1-6алкил, галогенC_1-6алкил, оксо, -SO₂-NH₂, -SO₂-NH(C_1-4алкил), -SO₂-N(C_1-4алкил)₂,

-NH-C(=O)-C_2-6алкенил, -C(=O)-C_1-6алкил, -C(=O)-C_2-6алкенил, C_1-6алкил-O-C(=O)-, C_3-6циклоалкил, фенил или 3-6-членный моноциклический гетероциклил, содержащий по меньшей мере один гетероатом, выбранный из N, O или S;

или их фармацевтически приемлемые соли, или их сольваты.

В другом аспекте представлен способ профилактики или лечения болезни или расстройства, опосредованных киназой FGFR, который включает введение субъекту, нуждающемуся в этом, соединения формулы (I), определенного в данном документе, или его фармацевтически приемлемой соли, или его сольвата.

В дополнительном аспекте представлено соединение формулы (I), определенное в данном документе, или его фармацевтически приемлемая соль, или его сольват для применения в профилактике или лечении болезни или расстройства, опосредованных киназой FGFR.

В еще одном дополнительном аспекте представлено применение соединения формулы (I), определенного в данном документе, или его фармацевтически приемлемой соли, или его сольвата для получения лекарственного средства, предназначенного для профилактики или лечения болезни или расстройства, опосредованных киназой FGFR.

В другом аспекте представлен способ профилактики или лечения рака, который включает введение субъекту, нуждающемуся в этом, соединения формулы (I), определенного в данном документе, или его фармацевтически приемлемой соли, или его сольвата. В частности, рак представляет собой рак, опосредованный киназой FGFR.

В дополнительном аспекте представлено соединение формулы (I), определенное в данном документе, или его фармацевтически приемлемая соль, или его сольват для применения в профилактике или лечении рака. В частности, рак представляет собой рак, опосредованный киназой FGFR.

В еще одном дополнительном аспекте представлено применение соединения формулы (I), определенного в данном документе, или его фармацевтически приемлемой соли, или его сольвата для получения лекарственного средства, предназначенного для профилактики или лечения рака. В частности, рак представляет собой рак, опосредованный киназой FGFR.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Если в контексте не указано иное, упоминания формулы (I) во всех разделах данного документа (в том числе пути применения, способы и других аспекты настоящего изобретения) включают упоминания всех других подформул (например, (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C), (I-C-a), (I-D) или (I-D-a)), подгрупп, ссылок, вариантов осуществления и примеров, определенных в данном документе.

Приставка "C_x-y" (где x и y представляют собой целые числа), используемая в данном документе, относится к числу атомов углерода в данной группе. Таким образом, C_1-6алкильная группа содержит от 1 до 6 атомов углерода, C_3-6циклоалкильная группа содержит от 3 до 6 атомов углерода, C_1-4алкоксигруппа содержит от 1 до 4 атомов углерода и т. д.

Термин "галоген" или "галогенид", используемые в данном документе, относится к атому фтора, хлора, брома или йода.

Термин "C_1-4алкил" или "C_1-6алкил", используемый в данном документе в качестве группы или части группы, относится к линейной или разветвленной насыщенной углеводородной группе, содержащей от 1 до 4 или от 1 до 6 атомов углерода. Примеры таких групп включают метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, изобутил, втор-бутил, трет-бутил, н-пентил, изопентил, неопентил или гексил и т. п.

Термин "C_2-4алкенил" или "C_2-6алкенил", используемый в данном документе в качестве группы или части группы, относится к линейной или разветвленной углеводородной группе, содержащей от 2 до 4 или от 2 до 6 атомов углерода и содержащей углерод-углеродную двойную связь.

Термин "C_2-4алкинил" или "C_2-6алкинил", используемый в данном документе в качестве группы или части группы, относится к линейной или разветвленной углеводородной группе, содержащей от 2 до 4 или от 2 до 6 атомов углерода и содержащей углерод-углеродную тройную связь.

Термин "C_1-4алкокси" или "C_1-6алкокси", используемый в данном документе в качестве группы или части группы, относится к -O-C_1-4алкильной группе или -O-C_1-6алкильной группе, где C_1-4алкил и C_1-6алкил определены в данном документе. Примеры таких групп включают метокси, этокси, пропокси, бутокси и т. п.

Термин "C_3-6циклоалкил", используемый в данном документе, относится к насыщенному моноциклическому углеводородному кольцу из 3-6 атомов углерода. Примеры таких групп включают циклопропил, циклобутил, циклопентил или циклогексил.

Термин "гидроксиC_1-4алкил" или "гидроксиC_1-6алкил", используемый в данном документе в качестве группы или части группы, относится к C_1-4алкильной или C_1-6алкильной группе, определенной в данном документе, где один или более чем один атом водорода заменены гидроксильной группой. Следовательно, термины "гидроксиC_1-4алкил" или "гидроксиC_1-6алкил" включают моногидроксиC_1-4алкил, моногидроксиC_1-6алкил, а также полигидроксиC_1-4алкил и полигидроксиC_1-6алкил. Гидроксильной группой могут быть заменены один, два, три или более атомов водорода, таким образом, гидроксиC_1-4алкил или гидроксиC_1-6алкил могут содержать одну, две, три или более гидроксильных групп. Примеры таких групп включают гидроксиметил, гидроксиэтил, гидроксипропил и т. п.

Термин "галогенC_1-4алкил" или "галогенC_1-6алкил", используемый в данном документе в качестве группы или части группы, относится к C_1-4алкильной или C_1-6алкильной группе, определенной в данном документе, где один или более чем один атом водорода заменены галогеном. Следовательно, термин "галогенC_1-4алкил" или "галогенC_1-6алкил" включает моногалогенC_1-4алкил, моногалогенC_1-6алкил, а также полигалогенC_1-4алкил и полигалогенC_1-6алкил. Галогеном могут быть заменены один, два, три или более атомов водорода, таким образом, галогенC_1-4алкил или галогенC_1-6алкил могут содержать один, два, три или более атомов галогена. Примеры таких групп включают фторэтил, фторметил, трифторметил или трифторэтил и т. п.

Термин "галогенC_1-4алкокси" или "галогенC_1-6алкокси", используемый в данном документе в качестве группы или части группы, относится к -O-C_1-4алкильной группе или -O-C_1-6алкильной группе, определенной в данном документе, где один или более чем один атом водорода заменены галогеном. Следовательно, термины "галогенC_1-4алкокси" или "галогенC_1-6алкокси" включают моногалогенC_1-4алкокси, моногалогенC_1-6алкокси, а также полигалогенC_1-4алкокси и полигалогенC_1-6алкокси. Галогеном могут быть заменены один, два, три или более атомов водорода, таким образом, галогенC_1-4алкокси или галогенC_1-6алкокси могут содержать один, два, три или более атомов галогена. Примеры таких групп включают фторэтилокси, дифторметокси или трифторметокси и т. п.

Термин цианоC_1-4алкил или цианоC_1-6алкил, используемый в данном документе, относится к C_1-4алкильной или C_1-6алкильной группе, определенной в данном документе, которая замещена одной или двумя цианогруппами, в частности одной цианогруппой.

Если в контексте не указано иное, термин "гетероциклил", используемый в данном документе, включает как ароматические, так и неароматические кольцевые системы. Таким образом, например, термин "гетероциклил" включает в свой объем ароматические, неароматические, ненасыщенные, частично насыщенные и полностью насыщенные гетероциклильные кольцевые системы. В целом, если в контексте не указано иное, такие кольцевые системы могут быть моноциклическими, или бициклическими, или мостиковыми и могут содержать, например, 3-12 членов кольца или 4-10 членов кольца, или, как правило, 5-10 членов кольца. Упоминание 4-7-членных колец включает 4, 5, 6 или 7 атомов в кольце, упоминание 3-6-членных колец включает 3, 4, 5 или 6 атомов в кольце, и упоминание 4-6-членных колец включает 4, 5 или 6 атомов в кольце. Примеры моноциклических гетероциклильных кольцевых систем представляют собой кольцевые системы, содержащие 3, 4, 5, 6, 7 или 8 членов кольца, как правило, 3-7 и предпочтительно 4, 5, 6 или 7 членов кольца, более предпочтительно 5 или 6 членов кольца. Примеры бициклических гетероциклильных кольцевых систем представляют собой системы, которые содержат 8, 9, 10, 11 или 12 членов кольца, и, как правило, 9 или 10 членов кольца. Гетероциклильные кольцевые системы содержат по меньшей мере один гетероатом, как правило, выбранный из азота, кислорода или серы, в частности, содержат не более 5, не более 4, не более 3, не более 2 или один гетероатом. Когда в данном документе встречается упоминание гетероциклильной кольцевой системы, гетероциклильное кольцо, если в контексте не указано иное, может быть необязательно замещено (т. е. быть незамещенным или замещенным) одним или несколькими заместителями, указанными в данном документе.

Гетероциклильные кольцевые системы могут представлять собой гетероарильные кольцевые системы, содержащие от 5 до 12 членов кольца, как правило, от 5 до 10 членов кольца. Термин "гетероарил" используется в данном документе для обозначения гетероциклильной кольцевой системы, имеющей ароматические свойства. Термин "гетероарил" охватывает полициклические (например бициклические) кольцевые системы, где одно или несколько колец являются неароматическими, при условии, что по меньшей мере одно кольцо является ароматическим. В таких полициклических системах кольцевая система может быть присоединена к остальной части соединения посредством ароматического кольца или посредством неароматического кольца.

Примеры гетероарильных групп представляют собой моноциклические и бициклические группы, содержащие от пяти до двенадцати членов кольца, и, как правило, от пяти до десяти членов кольца. Гетероарильная группа может представлять собой, например, пятичленное или шестичленное моноциклическое кольцо или бициклическую структуру, образованную из конденсированных пяти- и шестичленных колец, или двух конденсированных шестичленных колец, или двух конденсированных пятичленных колец. Гетероарильная кольцевая система может содержать не более приблизительно пяти гетероатомов, как правило, выбранных из азота, кислорода и серы. Как правило, гетероарильное кольцо будет содержать не более 4 гетероатомов, более типично, не более 3 гетероатомов, как правило, не более 2, например один гетероатом. В одном варианте осуществления гетероарильное кольцо содержит по меньшей мере один атом азота в кольце. Атомы азота в гетероарильных кольцах могут быть основными, как в случае имидазола или пиридина, или, по сути, неосновными, как в случае азота индола или пиррола. В целом, число основных атомов азота, присутствующих в гетероарильной группе, включая любые заместители, включающие аминогруппу, в кольце, будет не менее пяти.

Примеры пятичленных гетероарильных групп включают без ограничения группы, представляющие собой пирролил, фуранил, тиенил, имидазолил, оксазолил, оксадиазолил, оксатриазол, изоксазолил, тиазолил, тиадиазолил, изотиазолил, пиразолил, триазолил и тетразолил. В частности, примеры пятичленных гетероарильных групп включают без ограничения группы, представляющие собой пирролил, фуранил, тиенил, имидазолил, оксазолил, оксадиазолил, изоксазолил, тиазолил, тиадиазолил, изотиазолил, пиразолил и триазолил.

Примеры шестичленных гетероарильных групп включают без ограничения пиридил, пиразинил, пиридазинил, пиримидинил и триазинил.

Бициклическая гетероарильная группа, например, может представлять собой группу, выбранную из

a) бензольного кольца, конденсированного с 5- или 6-членным кольцом, содержащим 1, 2 или 3 гетероатома в кольце;

b) пиридинового кольца, конденсированного с 5- или 6-членным кольцом, содержащим 0, 1, 2 или 3 гетероатома в кольце;

c) пиримидинового кольца, конденсированного с 5- или 6-членным кольцом, содержащим 0, 1 или 2 гетероатома в кольце;

d) пиррольного кольца, конденсированного с 5- или 6-членным кольцом, содержащим 0, 1, 2 или 3 гетероатома в кольце;

e) пиразольного кольца, конденсированного с 5- или 6-членным кольцом, содержащим 0, 1 или 2 гетероатома в кольце;

f) имидазольного кольца, конденсированного с 5- или 6-членным кольцом, содержащим 0, 1 или 2 гетероатома в кольце;

g) оксазольного кольца, конденсированного с 5- или 6-членным кольцом, содержащим 0, 1 или 2 гетероатома в кольце;

h) изоксазольного кольца, конденсированного с 5- или 6-членным кольцом, содержащим 0, 1 или 2 гетероатома в кольце;

i) тиазольного кольца, конденсированного с 5- или 6-членным кольцом, содержащим 0, 1 или 2 гетероатома в кольце;

j) изотиазольного кольца, конденсированного с 5- или 6-членным кольцом, содержащим 0, 1 или 2 гетероатома в кольце;

k) тиофенового кольца, конденсированного с 5- или 6-членным кольцом, содержащим 0, 1, 2 или 3 гетероатома в кольце;

l) фуранового кольца, конденсированного с 5- или 6-членным кольцом, содержащим 0, 1, 2 или 3 гетероатома в кольце;

m) циклогексильного кольца, конденсированного с 5- или 6-членным ароматическим кольцом, содержащим 1, 2 или 3 гетероатома в кольце; и

n) циклопентильного кольца, конденсированного с 5- или 6-членным ароматическим кольцом, содержащим 1, 2 или 3 гетероатома в кольце.

Конкретные примеры бициклических гетероарильных групп, содержащих пятичленное кольцо, конденсированное с другим пятичленным кольцом, включают без ограничения имидазотиазолил (например, имидазо[2,1-b]тиазол) и имидазоимидазолил (например, имидазо[1,2-a]имидазол).

Конкретные примеры бициклических гетероарильных групп, содержащих шестичленное кольцо, конденсированное с пятичленным кольцом, включают без ограничения группы, представляющие собой бензофуранил, бензoтиофенил, бензимидазолил, бензоксазолил, изобензоксазолил, бензизоксазолил, бензтиазолил, бензизотиазолил, изобензoфуранил, индолил, изоиндолил, индолизинил, индолинил, изоиндолинил, пуринил, индазолил, пиразолoпиримидинил (например, пиразолo[1,5-a]пиримидин), триазолопиримидинил (например, [1,2,4]триазоло[1,5-a]пиримидин), бензoдиоксолил, имидазопиразинил, имидазопиридазинил, имидазопиридинил и пиразолoпиридинил (например, пиразолo[1,5-a]пиридин).

Конкретные примеры бициклических гетероарильных групп, содержащих шестичленное кольцо, конденсированное с пятичленным кольцом, включают без ограничения группы, представляющие собой бензофуранил, бензoтиофенил, бензимидазолил, бензоксазолил, бензизоксазолил, бензтиазолил, бензизотиазолил, индолил, изоиндолил, индолизинил, индолинил, изоиндолинил, индазолил, пиразолoпиримидинил (например, пиразолo[1,5-a]пиримидин), триазолопиримидинил (например, [1,2,4]триазоло[1,5-a]пиримидин), имидазопиразинил, имидазопиридазинил, имидазопиридинил и пиразолoпиридинил (например, пиразолo[1,5-a]пиридин).

Конкретные примеры бициклических гетероарильных групп, содержащих шестичленное кольцо, конденсированное с пятичленным кольцом, включают без ограничения группы, представляющие собой бензофуранил, бензoтиофенил, бензимидазолил, бензтиазолил, индолил, изоиндолил, индолизинил, индолинил.

Конкретные примеры бициклических гетероарильных групп, содержащих два конденсированных шестичленных кольца, включают без ограничения группы, представляющие собой хинолизинил, хинолинил, изохинолинил, циннолинил, хроманил, изохроманил, тиохроманил, бензопиранил, бензoдиоксанил, бензоксазинил, пиридопиридинил, хиноксалинил, хиназолинил, фталазинил, нафтиридинил и птеридинил.

Конкретные примеры бициклических гетероарильных групп, содержащих два конденсированных шестичленных кольца, включают без ограничения группы, представляющие собой хинолизинил, хинолинил, изохинолинил, бензопиранил, бензoдиоксанил, бензоксазинил, пиридопиридинил, хиноксалинил, хиназолинил, фталазинил, нафтиридинил и птеридинил.

Конкретные примеры бициклических гетероарильных групп, содержащих два конденсированных шестичленных кольца, включают без ограничения группы, представляющие собой хинолизинил, хинолинил, изохинолинил, хиноксалинил, хиназолинил, фталазинил, нафтиридинил и птеридинил.

Примеры полициклических гетероарильных групп, содержащих ароматическое кольцо и неароматическое кольцо, включают тетрагидроизохинолинил, тетрагидрохинолинил, дигидробензотиенил, дигидробензoфуранил, 2,3-дигидробензо[1,4]диоксинил, бензо[1,3]диоксолил, 4,5,6,7-тетрагидробензoфуранил, тетрагидротриазолопиразинил (например, 5,6,7,8-тетрагидро-[1,2,4]триазоло[4,3-a]пиразинил) и индолинил.

Азотсодержащее гетероарильное кольцо должно содержать по меньшей мере один атом азота в кольце. Кроме того, каждое кольцо может содержать не более приблизительно четырех других гетероатомов, как правило, выбранных из азота, серы и кислорода. Как правило, гетероарильное кольцо будет содержать не более 3 гетероатомов, например 1, 2 или 3, как правило, не более 2 атомов азота, например один атом азота. Атомы азота в гетероарильных кольцах могут быть основными, как в случае имидазола или пиридина, или, по сути, неосновными, как в случае азота индола или пиррола. В целом, число основных атомов азота, присутствующих в гетероарильной группе, включая любые заместители, включающие аминогруппу, в кольце, будет не менее пяти.

Примеры азотсодержащих гетероарильных групп включают без ограничения пиридил, пирролил, имидазолил, оксазолил, оксадиазолил, тиадиазолил, оксатриазолил, изоксазолил, тиазолил, изотиазолил, пиразолил, пиразинил, пиримидинил, пиридазинил, триазинил, триазолил (например, 1,2,3-триазолил, 1,2,4-триазолил), тетразолил, хинолинил, изохинолинил, бензимидазолил, бензоксазолил, бензизоксазолил, бензтиазолил и бензизотиазол, индолил, 3H-индолил, изоиндолил, индолизинил, изоиндолинил, пуринил, индазолил, хинолизинил, бензоксазинил, пиридопиридинил, хиноксалинил, хиназолинил, циннолинил, фталазинил, нафтиридинил и птеридинил.

Примеры азотсодержащих полициклических гетероарильных групп, содержащих ароматическое кольцо и неароматическое кольцо, включают тетрагидроизохинолинил, тетрагидрохинолинил и индолинил.

Термин "неароматическая группа" охватывает, если в контексте не указано иное, ненасыщенные кольцевые системы без ароматических свойств, частично насыщенные и полностью насыщенные гетероциклильные кольцевые системы. Термины "ненасыщенный" и "частично насыщенный" относятся к кольцам, в которых кольцевая(кольцевые) структура(структуры) содержит(содержат) атомы, которые имеют более чем одну общую валентную связь, т. е. кольцо содержит по меньшей мере одну кратную связь, например связь C=C, C≡C или N=C. Термин "полностью насыщенный" относится к кольцам, в которых кратные связи между атомами кольца отсутствуют. Насыщенные гетероциклильные группы включают пиперидин, морфолин, тиоморфолин, пиперазин. Частично насыщенные гетероциклильные группы включают пиразолины, например 2-пиразолин и 3-пиразолин.

Примеры неароматических гетероциклильных групп представляют собой группы, имеющие 3-12 членов кольца, как правило, 5-10 членов кольца. Такие группы могут быть, например, моноциклическими или бициклическими, и, как правило, содержат 1-5 членов кольца, представляющих собой гетероатом (как правило, 1, 2, 3 или 4 членов кольца, представляющих собой гетероатом), обычно выбранных из азота, кислорода и серы. Гетероциклильные группы могут содержать, например, циклические эфирные фрагменты (например, как в тетрагидрофуране и диоксане), циклические тиоэфирные фрагменты (например, как в тетрагидротиофене и дитиане), циклические аминные фрагменты (например, как в пирролидинe) и их комбинации (например, тиоморфолин).

Конкретные примеры включают морфолинил, тиоморфолинил, пиперидинил (например, 1-пиперидинил, 2-пиперидинил, 3-пиперидинил и 4-пиперидинил), пирролидинил (например, 1-пирролидинил, 2-пирролидинил и 3-пирролидинил), азетидинил, пиранил (2H-пиранил или 4H-пиранил), дигидротиофенил, дигидропиранил, дигидрофуранил, дигидротиазолил, тетрагидрофуранил, тетрагидротиофенил, диоксанил, диоксоланил, тетрагидропиранил, имидазолинил, оксазолинил, оксазолидинил, оксетанил, тиазолинил, 2-пиразолинил, пиразолидинил и пиперазинил. В целом, предпочтительные неароматические гетероциклильные группы включают насыщенные группы, такие как пиперидинил, пирролидинил, азетидинил, морфолинил и пиперазинил.

Конкретные примеры включают морфолинил, тиоморфолинил, пиперидинил (например, 1-пиперидинил, 2-пиперидинил, 3-пиперидинил и 4-пиперидинил), пирролидинил (например, 1-пирролидинил, 2-пирролидинил и 3-пирролидинил), пиранил (2H-пиранил или 4H-пиранил), дигидротиофенил, дигидропиранил, дигидрофуранил, дигидротиазолил, тетрагидрофуранил, тетрагидротиофенил, диоксанил, тетрагидропиранил, имидазолинил, оксазолинил, оксазолидинил, 2-пиразолинил, пиразолидинил и пиперазинил. В целом, предпочтительные неароматические гетероциклильные группы включают насыщенные группы, такие как пиперидинил, пирролидинил, азетидинил, морфолинил и пиперазинил.

В азотсодержащем неароматическом гетероциклильном кольце кольцо должно содержать по меньшей мере один атом азота в кольце.

Конкретные примеры азотсодержащих неароматических гетероциклильных групп включают азиридинил, морфолинил, тиоморфолинил, пиперидинил (например, 1-пиперидинил, 2-пиперидинил, 3-пиперидинил и 4-пиперидинил), пирролидинил (например, 1-пирролидинил, 2-пирролидинил и 3-пирролидинил), дигидротиазолил, имидазолинил, оксазолинил, тиазолинил, 2-пиразолинил, 3-пиразолинил, пиразолидинил и пиперазинил.

Конкретные примеры 3-6-членных моноциклических насыщенных гетероциклилов включают кольцевые системы, представляющие собой морфолинил, тиоморфолинил, диоксанил, пиперидинил (например, 1-пиперидинил, 2-пиперидинил, 3-пиперидинил и 4-пиперидинил), пиперазинил, пирролидинил (например, 1-пирролидинил, 2-пирролидинил и 3-пирролидинил), имидазолидинил, пиразолидинил, оксазолидинил, изоксазолидинил, тиазолидинил, изотиазолидинил, диоксоланил, дитиоланил, тетрагидрофуранил, тетрагидротиофенил, тетрагидропиранил (например, 4-тетрагидропиранил), дитианил, триоксанил, тритианил, азиридинил, оксиранил, тииранил, диазиридинил, диоксаринил, оксетанил, азетидинил, тиетанил, диоксетанил.

Конкретные примеры 3-6-членных моноциклических насыщенных гетероциклилов включают кольцевые системы, представляющие собой морфолинил, тиоморфолинил, диоксанил, пиперидинил (например, 1-пиперидинил, 2-пиперидинил, 3-пиперидинил и 4-пиперидинил), пиперазинил, пирролидинил (например, 1-пирролидинил, 2-пирролидинил и 3-пирролидинил), имидазолидинил, пиразолидинил, оксазолидинил, изоксазолидинил, тиазолидинил, изотиазолидинил, диоксоланил, тетрагидрофуранил, тетрагидротиофенил, тетрагидропиранил (например, 4-тетрагидропиранил), оксиранил, азетидинил.

Конкретные примеры 3-6-членных моноциклических насыщенных гетероциклилов включают кольцевые системы, представляющие собой морфолинил, тиоморфолинил, диоксанил, пиперидинил (например, 1-пиперидинил, 2-пиперидинил, 3-пиперидинил и 4-пиперидинил), пиперазинил, пирролидинил (например, 1-пирролидинил, 2-пирролидинил и 3-пирролидинил), имидазолидинил, пиразолидинил, диоксоланил, тетрагидрофуранил, тетрагидротиофенил, тетрагидропиранил (например, 4-тетрагидропиранил).

Конкретные примеры 3-6-членных моноциклических гетероциклилов включают кольцевые системы, представляющие собой морфолинил, тиоморфолинил, пиперидинил (например, 1-пиперидинил, 2-пиперидинил, 3-пиперидинил и 4-пиперидинил), пирролидинил (например, 1-пирролидинил, 2-пирролидинил и 3-пирролидинил), имидазолидинил, пиразолидинил, оксазолидинил, изоксазолидинил, тиазолидинил, изотиазолидинил, диоксоланил, дитиоланил, пиперазинил, тетрагидрофуранил, тетрагидротиофенил, диоксанил, тетрагидропиранил (например, 4-тетрагидропиранил), дитианил, триоксанил, тритианил, азиридинил, оксиранил, тииранил, диазиридинил, диоксаринил, оксетанил, азетидинил, тиетанил, диоксетанил, азиринил, азетил, 1,2-дитиэтил, пирролил, фуранил, тиофенил, имидазолил, пиразолил, оксазолил, тиазолил, изотиазолил, триазолил, оксадиазолил, тиадиазолил, дитиазолил, пиридинил, пиранил, тиопиранил, пиримидинил, тиазинил, оксазинил, триазинил.

Конкретные примеры 3-6-членных моноциклический гетероциклилов включают кольцевые системы, представляющие собой морфолинил, тиоморфолинил, пиперидинил (например, 1-пиперидинил, 2-пиперидинил, 3-пиперидинил и 4-пиперидинил), пирролидинил (например, 1-пирролидинил, 2-пирролидинил и 3-пирролидинил), имидазолидинил, пиразолидинил, оксазолидинил, изоксазолидинил, тиазолидинил, изотиазолидинил, диоксоланил, дитиоланил, пиперазинил, тетрагидрофуранил, тетрагидротиофенил, диоксанил, тетрагидропиранил (например, 4-тетрагидропиранил), оксиранил, оксетанил, азетидинил, пирролил, фуранил, тиофенил, имидазолил, пиразолил, оксазолил, тиазолил, изотиазолил, триазолил, оксадиазолил, тиадиазолил, дитиазолил, пиридинил, пиранил, тиопиранил, пиримидинил, тиазинил, оксазинил, триазинил.

Конкретные примеры 3-12 членных гетероциклов включают кольцевые системы, представляющие собой морфолинил, тиоморфолинил, пиперидинил (например, 1-пиперидинил, 2-пиперидинил, 3-пиперидинил и 4-пиперидинил), пирролидинил (например, 1-пирролидинил, 2-пирролидинил и 3-пирролидинил), имидазолидинил, пиразолидинил, оксазолидинил, изоксазолидинил, тиазолидинил, изотиазолидинил, диоксоланил, дитиоланил, пиперазинил, тетрагидрофуранил, тетрагидротиофенил, диоксанил, тетрагидропиранил (например, 4-тетрагидропиранил), дитианил, триоксанил, тритианил, азиридинил, оксиранил, тииранил, диазиридинил, диоксаринил, оксетанил, азетидинил, тиетанил, диоксетанил, азиринил, азетил, 1,2-дитиэтил, пирролил, фуранил, тиофенил, имидазолил, пиразолил, оксазолил, тиазолил, изотиазолил, триазолил, оксадиазолил, тиадиазолил, дитиазолил, пиридинил, пиранил, тиопиранил, пиримидинил, тиазинил, оксазинил, триазинил, азепанил, оксепанил, тиепанил, 1,2-диазепанил, 1,4-диазепанил, диазепанил, тиазепинил, азоканил, азоцинил, имидазотиазолил (например, имидазо[2,1-b]тиазолил), имидазоимидазолил (например, имидазо[1,2-a]имидазолил), бензофуранил, бензoтиофенил, бензимидазолил, бензоксазолил, изобензоксазолил, бензизоксазолил, бензтиазолил, бензизотиазолил, изобензoфуранил, индолил, изоиндолил, индолизинил, индолинил, изоиндолинил, пуринил, индазолил, пиразолoпиримидинил (например, пиразолo[1,5-a]пиримидинил), триазолопиримидинил (например, [1,2,4]триазоло[1,5-a]пиримидинил), бензодиоксолил, имидазопиридинил и пиразолoпиридинил (например, пиразолo[1,5-a]пиридинил), хинолинил, изохинолинил, хроманил, тиохроманил, изохроманил, бензoдиоксанил, хинолизинил, бензоксазинил, пиридопиридинил, хиноксалинил, хиназолинил, циннолинил, фталазинил, нафтиридинил, птеридинил, тетрагидроизохинолинил, тетрагидрохинолинил, дигидробензтиенил, дигидробензфуранил, 2,3-дигидробензо[1,4]диоксинил, бензо[1,3]диоксолил, 4,5,6,7-тетрагидробензoфуранил, тетрагидротриазолопиразинил (например, 5,6,7,8-тетрагидро-[1,2,4]триазоло[4,3-a]пиразинил), 8-окса-3-азабицикло[3.2.1]октанил, 2-окса-5-азабицикло[2.2.1]гептанил, 3-окса-8-азабицикло[3.2.1]октанил, 3,6-диазабицикло[3.1.1]гептанил.

Конкретные примеры 3-12-членных гетероциклов включают кольцевые системы, представляющие собой морфолинил, тиоморфолинил, пиперидинил (например, 1-пиперидинил, 2-пиперидинил, 3-пиперидинил и 4-пиперидинил), пирролидинил (например, 1-пирролидинил, 2-пирролидинил и 3-пирролидинил), имидазолидинил, пиразолидинил, оксазолидинил, изоксазолидинил, тиазолидинил, изотиазолидинил, диоксоланил, пиперазинил, тетрагидрофуранил, тетрагидротиофенил, диоксанил, тетрагидропиранил (например, 4-тетрагидропиранил), оксиранил, оксетанил, азетидинил, пирролил, фуранил, тиофенил, имидазолил, пиразолил, оксазолил, тиазолил, изотиазолил, триазолил, оксадиазолил, тиадиазолил, дитиазолил, пиридинил, пиранил, тиопиранил, пиримидинил, тиазинил, оксазинил, триазинил, имидазотиазолил (например, имидазо[2,1-b]тиазолил), имидазоимидазолил (например, имидазо[1,2-a]имидазолил), бензофуранил, бензoтиофенил, бензимидазолил, бензоксазолил, изобензоксазолил, бензизоксазолил, бензтиазолил, бензизотиазолил, изобензoфуранил, индолил, изоиндолил, индолизинил, индолинил, изоиндолинил, индазолил, пиразолoпиримидинил (например, пиразолo[1,5-a]пиримидинил), триазолопиримидинил (например, [1,2,4]триазоло[1,5-a]пиримидинил), бензoдиоксолил, имидазопиридинил и пиразолoпиридинил (например, пиразолo[1,5-a]пиридинил), хинолинил, изохинолинил, бензoдиоксанил, хинолизинил, бензоксазинил, пиридопиридинил, хиноксалинил, хиназолинил, циннолинил, фталазинил, нафтиридинил, птеридинил, тетрагидроизохинолинил, тетрагидрохинолинил, дигидробензтиенил, дигидробензфуранил, 2,3-дигидробензо[1,4]диоксинил, бензо[1,3]диоксолил, 4,5,6,7-тетрагидробензoфуранил, тетрагидротриазолопиразинил (например, 5,6,7,8-тетрагидро-[1,2,4]триазоло[4,3-a]пиразинил).

Конкретные примеры 5-6-членных ароматических гетероциклов включают без ограничения кольцевые системы, представляющие собой пирролил, фуранил, тиофенил, имидазолил, фуразанил, оксазолил, оксадиазолил, оксатриазолил, изоксазолил, тиазолил, тиадиазолил, изотиазолил, пиразолил, триазолил, тетразолил, пиридинил, пиразинил, пиридазинил, пиримидинил и триазинил.

Гетероциклильные и карбоциклильные кольца, представляющие собой заместитель B или D, включают мостиковые кольцевые системы, такие как, например, мостиковые циклоалканы, такие как, например, норборнан (1,4-эндометиленциклогексан), адамантан, оксаадамантан; мостиковые морфолиновые кольца, такие как, например, 8-окса-3-азабицикло[3.2.1]октан, 2-окса-5-азабицикло[2.2.1]гептан, 3-окса-8-азабицикло[3.2.1]октан; мостиковые пиперазиновые кольца, такие как, например, 3,6-диазабицикло[3.1.1]гептан; мостиковые пиперидиновые кольца, такие как, например, 1,4-этиленпиперидин. Объяснение различия между конденсированными и мостиковыми кольцевыми системами см. Advanced Organic Chemistry, by Jerry March, 4^th Edition, Wiley Interscience, pages 131-133, 1992.

Если в контексте не указано иное, термин "карбоциклил", используемый в данном документе, включает как ароматические, так и неароматические углеродные кольцевые системы. Таким образом, например, термин "карбоциклил" включает в свой объем ароматические, неароматические, ненасыщенные, частично насыщенные и полностью насыщенные карбоциклические кольцевые системы. В целом, если в контексте не указано иное, такие кольцевые системы могут быть моноциклическими, или бициклическими, или мостиковыми и могут содержать, например, 3-12 членов кольца или 4-10 членов кольца, или, как правило, 5-10 членов кольца. Упоминание 4-7-членных колец включает 4, 5, 6 или 7 атомов в кольце, и упоминание 4-6-членных колец включает 4, 5, или 6 атомов в кольце. Примеры моноциклических карбоциклильных кольцевых систем представляют собой кольцевые системы, содержащие 3, 4, 5, 6, 7 и 8 членов кольца, как правило, 3-7 и предпочтительно 4, 5, 6 или 7 членов кольца, более предпочтительно 5 или 6 членов кольца. Примеры бициклических карбоциклильных кольцевых систем представляют собой системы, которые содержат 8, 9, 10, 11 и 12 членов кольца, и, как правило, 9 или 10 членов кольца. Когда в данном документе встречается упоминание карбоциклильной кольцевой системы, карбоциклильное кольцо может, если в контексте не указано иное, быть необязательно замещено (т. е. быть незамещенным или замещенным) одним или несколькими заместителями, указанными в данном документе.

Карбоциклильные кольцевые системы могут представлять собой арильные кольцевые системы. Термин "арил", используемый в данном документе, относится к карбоциклильным ароматическим группам и охватывает полициклические (например, бициклические) кольцевые системы, где одно или несколько колец являются неароматическими, при условии, что по меньшей мере одно кольцо является ароматическим. В таких полициклических системах кольцевая система может быть присоединена к остальной части соединения посредством ароматического кольца или посредством неароматического кольца. Термин "арил" включает группы, представляющие собой фенил, нафтил, инденил и тетрагидронафтил.

Конкретные примеры 3-12-членных карбоциклов включают кольцевые системы, представляющие собой циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклогептил, циклооктил, фенил, нафтил, инденил, тетрагидронафтил, азуленил, норборнан (1,4-эндо-метиленциклогексан), адамантан.

Линии, проведенные к кольцевым системам, указывают на то, что связь может быть присоединена к любому из подходящих и доступных атомов кольца.

В одном варианте осуществления, где рассматриваются два или более гетероатомов, такие гетероатомы могут быть одинаковыми или часть или все из двух или более гетероатомов могут быть различными.

Термин "необязательный" или "необязательно" означает, что событие, описанное него, может происходить или не происходить. Данный термин охватывает случаи, когда событие может произойти или может не произойти.

Используемое в данном документе выражение "один или несколько" относится к по меньшей мере одному, например одному, двум, трем, четырем, пяти или более, когда это возможно и в зависимости от контекста.

В соединениях формулы (I) атом углерода, обозначенный "*" в приведенной ниже формуле, представляет собой хиральный центр. В настоящем изобретении представлены соединения формулы (I), где указанный хиральный центр имеет определенную стереохимическую конфигурацию (S или R), в частности, соединения формулы (I), где указанный хиральный центр имеет S-стереохимическую конфигурацию. Соединения формулы (I) или любой ее подгруппы, имеющие S-стереохимическую конфигурацию при хиральном центре *, проявляют высокую ингибирующую активность в отношении FGFR.

Таким образом, в настоящем изобретении представлены соединения формулы (I-a):

(I-a),

C1 представляет собой водород или C_1-4алкил;

R^y представляет собой водород или C_1-4алкил;

В настоящем изобретении представлены соединения формулы (I-A):

(I-A),

C1 представляет собой водород или C_1-4алкил;

R^y представляет собой водород или C_1-4алкил;

D₁ представляет собой пиперазин-1-ил, где указанный пиперазин-1-ил необязательно замещен 1-5 заместителями R^c;

В настоящем изобретении представлены соединения формулы (I-A), определенные в данном документе выше, имеющие S-стереоцентр, как указано в следующей формуле (I-A-a):

(I-A-a),

заместители являются такими, как определено выше для соединений формулы (I-A);

В настоящем изобретении представлены соединения формулы (I-B):

(I-B),

C1 представляет собой водород или C_1-4алкил;

R^y представляет собой водород или C_1-4алкил;

D₂ представляет собой морфолин-1-ил, где указанный морфолин-1-ил необязательно замещен 1-5 заместителями R^c;

В настоящем изобретении представлены соединения формулы (I-B), определенные в данном документе выше, имеющие S-стереоцентр как указано в следующей формуле (I-B-a):

(I-B-a),

заместители являются такими, как определено выше для соединений формулы (I-B);

В настоящем изобретении представлены соединения формулы (I-C):

(I-C),

C1 представляет собой водород или C_1-4алкил;

R^y представляет собой водород или C_1-4алкил;

D₃ представляет собой 4-, 5-, 6- или 7-членный моноциклический гетероциклил, где указанный гетероциклил необязательно замещен 1-5 заместителями R^c;

В настоящем изобретении представлены соединения формулы (I-C), определенные в данном документе выше, имеющие S-стереоцентр как указано в следующей формуле (I-C-a):

(I-C-a),

заместители являются такими, как определено выше для соединений формулы (I-C);

В настоящем изобретении представлены соединения формулы (I-D):

(I-D),

C1 представляет собой водород или C_1-4алкил;

В настоящем изобретении представлены соединения формулы (I-D), определенные в данном документе выше, имеющие S-стереоцентр как указано в следующей формуле (I-D-a):

(I-D-a),

заместители являются такими, как определено выше для соединений формулы (I-D);

В одном варианте осуществления в соединениях формул (I), (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C), (I-C-a), (I-D) или (I-D-a) A₁, A₂ и A₃ представляют собой CH или CR^a.

В одном варианте осуществления в соединениях формул (I), (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C), (I-C-a), (I-D) или (I-D-a) A₁, A₂ и A₃ представляют собой CH.

В одном варианте осуществления в соединениях формул (I), (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C), (I-C-a), (I-D) или (I-D-a) один из A₁, A₂ и A₃ представляет собой CR^a.

В одном варианте осуществления в соединениях формул (I), (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C), (I-C-a), (I-D) или (I-D-a) по меньшей мере один из A₁, A₂ и A₃ представляет собой CR^a.

В одном варианте осуществления в соединениях формул (I), (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C), (I-C-a), (I-D) или (I-D-a) A₁ представляет собой CR^a, и A₂ и A₃ представляют собой CH.

В одном варианте осуществления в соединениях формул (I), (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C), (I-C-a), (I-D) или (I-D-a) A₂ представляет собой CR^a, и A₁ и A₃ представляют собой CH.

В одном варианте осуществления в соединениях формул (I), (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C), (I-C-a), (I-D) или (I-D-a) A₁, A₂ и A₃ представляют собой N или CH.

В одном варианте осуществления в соединениях формул (I), (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C), (I-C-a), (I-D) или (I-D-a) один из A₁, A₂ и A₃ представляет собой CR^a, и R^a представляет собой C_1-6алкил, в частности C_1-4алкил, например метил, галогенC_1-6алкил, например трифторметил, или галоген, например фтор.

В одном варианте осуществления в соединениях формул (I), (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C), (I-C-a), (I-D) или (I-D-a) один из A₁, A₂ и A₃ представляет собой CR^a, и R^a представляет собой C_1-6алкил, в частности C_1-4алкил, например метил, галогенC_1-6алкил, например трифторметил, галоген, например фтор, или C_1-6алкокси, в частности C_1-4алкокси, например метокси.

В одном варианте осуществления в соединениях формул (I), (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C), (I-C-a), (I-D) или (I-D-a) один из A₁, A₂ и A₃ представляет собой N, и остальные заместители A представляют собой CH или CR^a.

В одном варианте осуществления в соединениях формул (I), (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C), (I-C-a), (I-D) или (I-D-a) A₂ представляет собой N, и A₁ и A₃ представляют собой CH или CR^a, в частности, A₂ представляет собой N, и A₁ и A₃ представляют собой CH.

В одном варианте осуществления в соединениях формул (I), (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C), (I-C-a), (I-D) или (I-D-a) два из заместителей A₁, A₂ и A₃ представляют собой N, и остальной A представляет собой CH или CR^a.

В одном варианте осуществления в соединениях формул (I), (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C) или (I-C-a) Y представляет собой прямую связь.

В одном варианте осуществления в соединениях формул (I), (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C) или (I-C-a) Y представляет собой -O-, C(=O), NR^y, S(=O)₂ или C_1-4алкил.

В одном варианте осуществления в соединениях формул (I), (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C) или (I-C-a) Y представляет собой прямую связь, C(=O) или NR^y, например NCH₃.

В одном варианте осуществления в соединениях формул (I), (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C) или (I-C-a) Y представляет собой прямую связь, -O- или C(=O).

В одном варианте осуществления в соединениях формул (I), (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C) или (I-C-a) Y представляет собой -O- или C(=O).

В одном варианте осуществления в соединениях формул (I), (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C), (I-C-a), (I-D) или (I-D-a) C₁ представляет собой водород.

В одном варианте осуществления в соединениях формул (I), (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C), (I-C-a), (I-D) или (I-D-a) C₂ представляет собой водород.

В одном варианте осуществления в соединениях формул (I), (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C), (I-C-a), (I-D) или (I-D-a) C₁ представляет собой водород, и C₂ представляет собой C_1-4алкил.

В одном варианте осуществления в соединениях формул (I), (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C), (I-C-a), (I-D) или (I-D-a) C₁ и C₂ одновременно представляют собой водород.

В одном варианте осуществления в соединениях формул (I), (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C), (I-C-a), (I-D) или (I-D-a) C₁ представляет собой водород, и C₂ представляет собой гидроксил.

В одном варианте осуществления в соединениях формул (I), (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C), (I-C-a), (I-D) или (I-D-a) C₁ представляет собой водород, и C₂ представляет собой C_1-4алкокси.

В одном варианте осуществления в соединениях формул (I), (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C), (I-C-a), (I-D) или (I-D-a) C₁ и C₂ взяты вместе с образованием C_3-6циклоалкила вместе с атомом углерода, к которому они присоединены, в частности циклопропила.

В одном варианте осуществления в соединениях формул (I), (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C), (I-C-a), (I-D) или (I-D-a)

представляет собой -CH₃.

представляет собой -CH₂(C_1-4алкил), в частности -CH₂CH₃ или -CH₂CH₂CH₃.

представляет собой -CH(C_1-4алкил)₂, в частности -CH(CH₃)₂.

представляет собой -циклопропил.

В одном варианте осуществления в соединениях формул (I), (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C) или (I-C-a) R^y представляет собой водород.

В одном варианте осуществления в соединениях формул (I), (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C) или (I-C-a) R^y представляет собой C_1-4алкил, в частности метил.

В одном варианте осуществления в соединениях формул (I), (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C), (I-C-a), (I-D) или (I-D-a) R^b представляет собой водород.

В одном варианте осуществления в соединениях формул (I), (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C), (I-C-a), (I-D) или (I-D-a) R^b представляет собой C_1-6алкил, галогенC_1-6алкил, C_1-6алкокси, C_1-6алкилоксикарбонил, C_2-6алкенил, C_2-6алкинил, цианоC_1-6алкил, гидроксиC_1-6алкил, -C(=O)-NH₂,

-C(=O)-NH(C_1-4алкил), -C(=O)-N(C_1-4алкил)₂, C_3-6циклоалкил, фенил, 3-6-членный моноциклический гетероциклил, содержащий по меньшей мере один гетероатом, выбранный из N, O или S, или C_1-6алкил, замещенный C_3-6циклоалкилом, или фенилом, или 3-6-членным моноциклическим гетероциклилом, содержащим по меньшей мере один гетероатом, выбранный из N, O или S.

-C(=O)-NH(C_1-4алкил) или -C(=O)-N(C_1-4алкил)₂.

В одном варианте осуществления в соединениях формул (I), (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C), (I-C-a), (I-D) или (I-D-a) R^b представляет собой C_1-6алкил, в частности метил или этил.

В одном варианте осуществления в соединениях формул (I), (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C), (I-C-a), (I-D) или (I-D-a) D, D₁, D₂ или D₃ являются незамещенными.

В одном варианте осуществления в соединениях формул (I), (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C), (I-C-a), (I-D) или (I-D-a) D, D₁, D₂ или D₃ замещены 1, 2, 3 или 4 заместителями R_c.

В одном варианте осуществления в соединениях формул (I), (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C), (I-C-a), (I-D) или (I-D-a) D, D₁, D₂ или D₃ замещены 2 заместителями R_c.

В одном варианте осуществления в соединениях формул (I), (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C), (I-C-a), (I-D) или (I-D-a) D, D₁, D₂ или D₃ замещены 1 или 2 заместителями R_c.

В одном варианте осуществления в соединениях формул (I), (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C), (I-C-a), (I-D) или (I-D-a) D, D₁, D₂ или D₃ замещены 1 или 2 заместителями R_c, и каждый R_c независимо выбран из оксо, галогена, например фтора, C_1-6алкила, в частности C_1-4алкила, например метила, C_1-6алкилокси, в частности C_1-4алкилокси, например метокси, галогенC_1-6алкила, например трифторметила или трифторэтила, галогенC_1-6алкилокси, например трифторметокси, HOOC-C_1-6алкил-, например -CH₂-COOH, карбоксила, C_1-6алкила, замещенного -C(=O)-O-C_1-6алкилом, например

-CH₂-C(=O)-O-CH₂-CH₃, C_1-6алкил-O-C(=O)-, например -C(=O)-O-CH₃.

В одном варианте осуществления в соединениях формул (I), (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C), (I-C-a), (I-D) или (I-D-a) D, D₁, D₂ или D₃ замещены 1 или 2 заместителями R_c, и каждый R_c независимо выбран из оксо, галогена, например фтора, C_1-6алкила, в частности C_1-4алкила, например метила, C_1-6алкилокси, в частности C_1-4алкилокси, например метокси, или галогенC_1-6алкила, например трифторметила или трифторэтила.

В одном варианте осуществления в соединениях формул (I), (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C), (I-C-a), (I-D) или (I-D-a) D, D₁, D₂ или D₃ замещены 4 заместителями R_c, и каждый заместитель R_c независимо представляет собой C_1-6алкил, в частности C_1-4алкил, например метил.

В одном варианте осуществления в соединениях формул (I), (I-a), (I-C), (I-C-a), (I-D) или (I-D-a) D или D₃ представляют собой мостиковый гетероциклил, например 8-окса-3-азабицикло[3.2.1]октан.

В одном варианте осуществления в соединениях формул (I), (I-a), (I-C), (I-C-a), (I-D) или (I-D-a) D или D₃ представляют собой мостиковый гетероциклил, где мостик представляет собой -CH₂-, -CH₂-CH₂- или -CH₂-CH₂-CH₂-, в частности -CH₂-CH₂-, такой как, например, в 8-окса-3-азабицикло[3.2.1]октане.

В одном варианте осуществления в соединениях формул (I-C) или (I-C-a) D₃ представляет собой 4-, 5-, 6- или 7-членный насыщенный моноциклический гетероциклил, содержащий по меньшей мере один гетероатом, выбранный из N, O или S, где указанный гетероциклил необязательно замещен 1-5 заместителями R^c, 1-4 заместителями R^c, 1-3 заместителями R^c, 1 или 2 заместителями R^c или 1 заместителем R^c.

В одном варианте осуществления в соединениях формул (I-C) или (I-C-a) D₃ представляет собой 4-, 5-, 6- или 7-членный насыщенный моноциклический гетероциклил, содержащий по меньшей мере один гетероатом, выбранный из N, O или S, где указанный гетероциклил является незамещенным.

В одном варианте осуществления в соединениях формул (I-C) или (I-C-a) D₃ представляет собой 5- или 6-членный моноциклический гетероциклил, содержащий по меньшей мере один гетероатом, выбранный из N, O или S, где указанный гетероциклил необязательно замещен 1-5 заместителями R^c, в частности 6-членный насыщенный моноциклический гетероциклил, содержащий по меньшей мере один гетероатом, выбранный из N, O или S, где указанный гетероциклил необязательно замещен 1-5 заместителями R^c, 1-4 заместителями R^c, 1-3 заместителями R^c, 1 или 2 заместителями R^c или 1 заместителем R^c.

В одном варианте осуществления в соединениях формул (I-C) или (I-C-a) D₃ представляет собой 5- или 6-членный насыщенный моноциклический гетероциклил, содержащий по меньшей мере один гетероатом, выбранный из N, O или S, где указанный гетероциклил необязательно замещен 1-5 заместителями R^c, 1-4 заместителями R^c, 1-3 заместителями R^c, 1 или 2 заместителями R^c или 1 заместителем R^c. В одном варианте осуществления гетероциклил является незамещенным. В одном варианте осуществления D₃ представляет собой необязательно замещенный пиперидинил, морфолинил, пиперазинил, пирролидинил или тетрагидропиранил. В одном варианте осуществления D₃ представляет собой незамещенный пиперидинил, морфолинил, пиперазинил, пирролидинил или тетрагидропиранил.

В одном варианте осуществления в соединениях формул (I-C) или (I-C-a) D₃ представляет собой 4-членный насыщенный моноциклический гетероциклил, содержащий по меньшей мере один гетероатом, выбранный из N, O или S, где указанный гетероциклил необязательно замещен 1-5 заместителями R^c, 1-4 заместителями R^c, 1-3 заместителями R^c, 1 или 2 заместителями R^c или 1 заместителем R^c. В одном варианте осуществления гетероциклил является незамещенным. В одном варианте осуществления D₃ представляет собой незамещенный азетидинил.

В одном варианте осуществления в соединениях формул (I-C) или (I-C-a) D₃ представляет собой 5- или 6-членный ароматический моноциклический гетероциклил, содержащий по меньшей мере один гетероатом, выбранный из N, O или S, где указанный гетероциклил необязательно замещен 1-5 заместителями R^c, в частности 5-членный ароматический моноциклический гетероциклил, содержащий по меньшей мере один гетероатом, выбранный из N, O или S, где указанный гетероциклил необязательно замещен 1-5 заместителями R^c, 1-4 заместителями R^c, 1-3 заместителями R^c, 1 или 2 заместителями R^c или 1 заместителем R^c, например представляет собой необязательно замещенный пиразол.

В одном варианте осуществления в соединениях формул (I), (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C), (I-C-a), (I-D) или (I-D-a) каждый R^c независимо представляет собой оксо, C_1-6алкил, гидроксиC_1-6алкил, галогенC_1-6алкил, галогенC_1-6алкилокси, карбоксил, HOOC-C_1-6алкил-, циано, цианоC_1-6алкил, C_1-6алкил-C(=O)-, -SO₂-C_1-6алкил, C_3-6циклоалкил, фенил, 3-6-членный моноциклический насыщенный гетероциклил, содержащий по меньшей мере один гетероатом, выбранный из N, O или S, или 5- или 6-членный моноциклический насыщенный гетероциклил, содержащий по меньшей мере один гетероатом, выбранный из N, O или S.

В одном варианте осуществления в соединениях формул (I), (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C), (I-C-a), (I-D) или (I-D-a) каждый R^c независимо представляет собой оксо, галоген, C_1-6алкил, C_1-6алкокси или галогенC_1-6алкил.

В одном варианте осуществления в соединениях формул (I), (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C), (I-C-a), (I-D) или (I-D-a) B представляет собой 5- или 6-членный карбоциклил или гетероциклил, содержащий по меньшей мере один гетероатом, выбранный из N, O или S, где каждый из указанных карбоциклила и гетероциклила необязательно замещен 1-5, в частности 1-4, или 1-3, или 1 или 2, или 1 заместителем R. В одном варианте осуществления B является незамещенным.

В одном варианте осуществления в соединениях формул (I), (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C), (I-C-a), (I-D) или (I-D-a) B представляет собой фенил или 5- или 6-членный ароматический гетероциклил, содержащие по меньшей мере один гетероатом, выбранный из N, O или S, где каждый из указанных фенила и гетероциклила необязательно замещен 1-5, в частности 1-4, или 1-3, или 1 или 2, или 1 заместителем R. В одном варианте осуществления B является незамещенным.

В одном варианте осуществления в соединениях формул (I), (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C), (I-C-a), (I-D) или (I-D-a) B представляет собой 3-6-членный моноциклический карбоциклил или гетероциклил, содержащий по меньшей мере один гетероатом, выбранный из N, O или S, где каждый из указанных карбоциклила и гетероциклила необязательно замещен 1-5, в частности 1-4, или 1-3, или 1 или 2, или 1 заместителем R. В одном варианте осуществления B является незамещенным.

В одном варианте осуществления в соединениях формул (I), (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C), (I-C-a), (I-D) или (I-D-a) B представляет собой 3-6-членный моноциклический неароматический карбоциклил или гетероциклил, содержащий по меньшей мере один гетероатом, выбранный из N, O или S, где каждый из указанных карбоциклила и гетероциклила необязательно замещен 1-5, в частности 1-4, или 1-3, или 1 или 2, или 1 заместителем R. В одном варианте осуществления B является незамещенным.

В одном варианте осуществления в соединениях формул (I), (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C), (I-C-a), (I-D) или (I-D-a) B представляет собой 6-членный ароматический моноциклический гетероциклил, содержащий по меньшей мере один гетероатом, выбранный из N, O или S, где указанный гетероциклил необязательно замещен 1-4, в частности 1-3, или 1 или 2, или 1 заместителем R. Например B представляет собой необязательно замещенный пиридил, пиримидинил или пиразинил, в частности, B представляет собой необязательно замещенный пиридил или пиримидинил. В одном варианте осуществления B является незамещенным. В одном варианте осуществления B замещен 1 заместителем R. В одном варианте осуществления заместитель R выбран из C_1-6алкила, C_1-6алкокси и C_3-6циклоалкила. В одном варианте осуществления заместитель R представляет собой галогенC_1-6алкил.

В одном варианте осуществления в соединениях формул (I), (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C), (I-C-a), (I-D) или (I-D-a) B представляет собой 5-членный ароматический моноциклический гетероциклил, содержащий по меньшей мере один гетероатом, выбранный из N, O или S, где указанный гетероциклил необязательно замещен 1-3, в частности, 1 или 2 или 1 заместителем R. Например, B представляет собой необязательно замещенный пиразолил, оксазолил или тиазолил, в частности, B представляет собой необязательно замещенный оксазолил или тиазолил. В одном варианте осуществления B является незамещенным. В одном варианте осуществления B замещен 1 заместителем R. В одном варианте осуществления заместитель R выбран из C_1-6алкила, C_1-6алкокси и C_3-6циклоалкила. В одном варианте осуществления заместитель R представляет собой галогенC_1-6алкил.

В одном варианте осуществления в соединениях формул (I), (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C), (I-C-a), (I-D) или (I-D-a) B представляет собой 9-12-членный бициклический карбоциклил или гетероциклил, содержащий по меньшей мере один гетероатом, выбранный из N, O или S, где каждый из указанных карбоциклила и гетероциклила необязательно замещен 1-5, в частности 1-4, или 1-3, или 1 или 2, или 1 заместителем R. В одном варианте осуществления B является незамещенным.

В одном варианте осуществления в соединениях формул (I), (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C), (I-C-a), (I-D) или (I-D-a) B представляет собой пиримидинил, необязательно замещенный 1-3, в частности 1 или 2 или 1 заместителем R, в частности, B представляет собой незамещенный пиримидинил.

В одном варианте осуществления в соединениях формул (I), (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C), (I-C-a), (I-D) или (I-D-a) каждый R независимо представляет собой C_1-6алкил, циано, галоген, C_1-6алкокси, галогенC_1-6алкокси, гидроксил, гидроксиC_1-6алкил, галогенC_1-6алкил, оксо, -SO₂-NH₂,

-SO₂-NH(C_1-4алкил), -SO₂-N(C_1-4алкил)₂, -NH-C(=O)-C_2-6алкенил, -C(=O)-C_1-6алкил,

-C(=O)-C_2-6алкенил или C_1-6алкил-O-C(=O)-.

-C(=O)-C_2-6алкенил, C_3-6циклоалкил, фенил или 3-6-членный моноциклический гетероциклил, содержащий по меньшей мере один гетероатом, выбранный из N, O или S.

В одном варианте осуществления в соединениях формул (I), (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C), (I-C-a), (I-D) или (I-D-a) присутствует 1 заместитель R, при этом указанный R представляет собой галогенC_1-6алкил.

В одном варианте осуществления в соединениях формул (I), (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C), (I-C-a), (I-D) или (I-D-a) B является незамещенным.

В одном варианте осуществления в соединениях формул (I), (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C), (I-C-a), (I-D) или (I-D-a) B замещен 1-5 заместителями R, в частности 1-4 заместителями R, или 1-3 заместителями R, или 1 или 2 заместителями R, или 1 заместителем R.

В одном варианте осуществления в соединениях формул (I), (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C), (I-C-a), (I-D) или (I-D-a) выполняются одно или несколько следующих условий, в частности, если это возможно, выполняются все следующие условия:

каждый из A₁, A₂ и A₃ представляет собой CH, или A₁ и A₃ представляют собой CH, и A₂ представляет собой N, или по меньшей мере один из A₁, A₂ и A₃ представляет собой CR^a, или A₁ представляет собой CR^a, и A₂ и A₃ представляют собой CH, или A₂ представляет собой CR^a, и A₁ и A₃ представляют собой CH;

C1 представляет собой водород или C_1-4алкил, в частности водород или метил;

C2 представляет собой водород, или C_1-4алкил, или C_1-4алкокси, в частности водород, метил или метокси;

Y представляет собой прямую связь, -O- или C(=O);

каждый R^a независимо представляет собой C_1-6алкил, например метил, галогенC_1-6алкил, например трифторметил, галоген, например фтор, или C_1-6алкокси, например метокси;

R^b представляет собой C_1-6алкил, в частности C_1-4алкил, например, метил или этил;

D представляет собой 4-, 5- или 6-членный моноциклический насыщенный гетероциклил, содержащий по меньшей мере один гетероатом, выбранный из N, O или S, где указанный гетероциклил необязательно замещен 1 или 2 заместителями R^c, в частности, D представляет собой пиперазинил, морфолинил, пиперидинил, тетрагидропиранил, пирролидинил или азетидинил, где указанные кольцевые системы необязательно замещены 1 или 2 заместителями R^c;

каждый R^c независимо представляет собой оксо, C_1-6алкил, например метил, галоген, например фтор, C_1-6алкокси, например метокси, или галогенC_1-6алкил, например трифторметил или трифторэтил;

B представляет собой 5- или 6-членный ароматический моноциклический гетероциклил, содержащий по меньшей мере один гетероатом, выбранный из N, O или S, где указанный гетероциклил необязательно замещен 1 заместителем R, в частности, B представляет собой пиридил, пиримидинил, пиразинил, пиразолил, тиазолил, оксазолил;

каждый R независимо представляет собой C_1-6алкил, например метил или изопропил, C_1-6алкокси, например метокси, или C_3-6циклоалкил, например циклопропил.

В одном варианте осуществления соединение представляет собой соединение формул (I-C), (I-C-a), (I-D) или (I-D-a), где выполняются одно или несколько следующих условий, в частности, если это возможно, выполняются все следующие условия:

C2 представляет собой водород, или C_1-4алкил, или C_1-4алкокси, например водород, метил или метокси, в частности водород или C_1-4алкил, например водород или метил;

Y представляет собой прямую связь, -O- или C(=O), в частности прямую связь или C(=O), более конкретно прямую связь;

каждый R^a независимо представляет собой C_1-6алкил, например метил, галогенC_1-6алкил, например трифторметил, галоген, например фтор, или C_1-6алкокси, например метокси, в частности водород, галоген или C_1-6алкил;

D или D₃ представляет собой 4-, 5- или 6-членный моноциклический насыщенный гетероциклил, содержащий по меньшей мере один гетероатом, выбранный из N, O или S, где указанный гетероциклил необязательно замещен 1 или 2 заместителями R^c, в частности, D представляет собой пиперазинил, морфолинил, пиперидинил, тетрагидропиранил, пирролидинил или азетидинил, где указанные кольцевые системы необязательно замещены 1 или 2 заместителями R^c, в частности, D представляет собой необязательно замещенный пиперазинил, морфолинил или пирролидинил;

каждый R^c независимо представляет собой оксо, C_1-6алкил, например метил, галоген, например фтор, C_1-6алкокси, например метокси, или галогенC_1-6алкил, например трифторметил или трифторэтил, в частности C_1-6алкил, например метил;

B представляет собой 5- или 6-членный ароматический моноциклический гетероциклил, содержащий по меньшей мере один гетероатом, выбранный из N, O или S, где указанный гетероциклил необязательно замещен 1 заместителем R, в частности, B представляет собой пиридил, пиримидинил, пиразинил, пиразолил, тиазолил, оксазолил, в частности, B представляет собой незамещенный пиримидинил;

В одном варианте осуществления соединение по настоящему изобретению выбрано из

; ;

и ;

или их фармацевтически приемлемых солей, или их сольватов.

В одном варианте осуществления соединение по настоящему изобретению представляет собой

,

или его фармацевтически приемлемую соль, или его сольват.

,

Во избежание неясности следует учитывать, что каждое общее и конкретное предпочтение, вариант осуществления и пример для одного заместителя могут быть объединены, если это возможно с химической точки зрения, с каждым общим и конкретным предпочтением, вариантом осуществления и примером для одного или нескольких, предпочтительно всех других заместителей, определенных в данном документе, и что все такие варианты осуществления охватываются настоящей заявкой.

Способы получения соединений формулы (I)

В данном разделе, как и во всех других разделах настоящей заявки, если в контексте не указано иное, упоминания формулы (I) также включают все другие подгруппы и их примеры (например, (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C), (I-C-a), (I-D) или (I-D-a)), определенные в данном документе.

В целом, соединения формулы (I) могут быть получены согласно следующей схеме реакции 1. На схеме 1 W₁ и W₂ представляют собой подходящую уходящую группу, такую как, например, галоген, например хлор, и P представляет собой подходящую защитную группу, такую как, например, 4-метоксибензил. Все другие переменные на схеме 1 определены согласно настоящему изобретению.

Схема 1

На схеме 1 применены следующие условия реакции:

1: в присутствии подходящего защитного средства H-P, такого как, например, 4-метоксибензальдегид, и подходящего восстановителя, такого как, например, NaBH₄, подходящей кислоты, такой как, например, трифторуксусная кислота, и подходящего растворителя, такого как, например, этилацетат, при подходящей температуре, такой как, например, комнатная температура;

2: a) в присутствии метилмалонилхлорида, подходящего восстановителя, такого как, например, гидрид натрия, и подходящего растворителя, такого как, например, N, N-диметилформамид, при подходящей температуре, такой как, например, комнатная температура; и

b) в присутствии метоксида натрия, при подходящей температуре, такой как, например, 110^oC;

3: в присутствии средства для введения подходящей защитной группы, такого как например оксалилхлорид или фосфорилхлорид, в присутствии подходящего растворителя, такого как, например, N, N-диметилформамид и дихлорметан, при подходящей температуре, такой как, например, комнатная температура или 15^oC;

4: в присутствии подходящего восстановителя, такого как, например, диизобутилалюминия гидрид, и подходящего растворителя, такого как, например, тетрагидрофуран или дихлорметан, при подходящей температуре, такой как, например, -78^oC;

5: в присутствии фенилметанамина, подходящего основания, такого как, например, диизопропилэтиламин, и подходящего растворителя, такого как, например, ацетонитрил, при подходящей температуре, такой как, например, 70^oC;

6: в присутствии подходящего восстановителя, такого как, например, H₂, и подходящего катализатора, такого как, например, палладий на угле, в подходящем растворителе, таком как, например, спирт, например метанол, при подходящей температуре, такой как, например, 50^oC;

7: в присутствии подходящего окислителя, такого как, например, FeCl₃, и подходящего растворителя, такого как, например, 1,4-диоксан, при подходящей температуре, такой как, например, 20^oC или 25^oC;

8: в присутствии подходящего средства для снятия защитной группы, такого как, например, трифторметансульфоновая кислота, и подходящего растворителя, такого как, например, трифторуксусная кислота, при подходящей температуре, такой как, например, 20^oC, 60^oC, 80^oC или 85^oC;

9: в присутствии подходящего основания, такого как, например, диизопропилэтиламин, бикарбонат калия или бикарбонат натрия, подходящего катализатора фазового переноса, такого как, например, йодид тетрабутиламмония или 18-краун-6, и подходящего растворителя, такого как, например, дихлорметан, хлороформ, N, N-диметилацетамид или спирт, например этанол, при подходящей температуре, такой как, например, 35^oC, 40^oC, 60^oC, 85^oC или 110^oC;

На схеме 1 промежуточное соединение формулы (XII) может представлять собой конкретный стереоизомер, например S-энантиомер, что в результате приводит к образованию конкретного стереоизомера, например S-энантиомера, формулы (I) так, как показано ниже на схеме 1a для получения соединений формулы (I-a).

Схема 1a

Промежуточные соединения формулы (IX), где Y представляет собой NR^y, а указанные промежуточные соединения представлены формулой (IX-a), также могут быть получены согласно следующей схеме реакции 2. На схеме 2 W₃ представляет собой подходящую уходящую группу, такую как, например, галоген, например бром. Все другие переменные на схеме 2 определены согласно настоящему изобретению.

Схема 2

На схеме 2 применены следующие условия реакции:

1: в присутствии подходящего катализатора, такого как, например, трис(дибензилиденацетон)дипалладий(0), подходящего лиганда, такого как, например, (2-бифенил)ди-трет-бутилфосфин, подходящего основания, такого как, например, трет-бутоксид натрия, в подходящем растворителе, таком как, например, тетрагидрофуран, при подходящей температуре, такой как, например, 60^oC;

2: в присутствии подходящего восстановителя, такого как H₂, подходящего катализатора, такого как, например, никель Ренея, в подходящем растворителе, таком как, например, диоксан, при подходящей температуре, такой как, например, комнатная температура;

Промежуточные соединения формулы (XIV), где Y представляет собой -C(=O)-, а указанные промежуточные соединения представлены формулой (XIV-a), также могут быть получены согласно следующей схеме реакции 3. На схеме 3 переменные определены согласно настоящему изобретению.

Схема 3

Соединения формулы (I) также могут быть получены согласно следующей схеме реакции 4. На схеме 4 W₄ представляет собой подходящую уходящую группу, такую как, например, галоген, например бром. Все другие переменные на схеме 4 определены согласно настоящему изобретению.

Схема 4

Реакцию по схеме 4 проводят в присутствии подходящего катализатора, такого как, например, палладиевый катализатор, например Pd₂(dba)₃, подходящего лиганда, такого как, например, davephos (2-дициклогексилфосфино-2'-(N, N-диметиламино)бифенил), подходящего основания, такого как, например, LiHMDS (бис(триметилсилил)амид лития), и подходящего растворителя, такого как, например, тетрагидрофуран.

На схеме 4 промежуточное соединение формулы (XVI) может представлять собой конкретный стереоизомер, например, S-энантиомер, что в результате приводит к образованию конкретного стереоизомера, например S-энантиомера, формулы (I) так, как показано ниже на схеме 4a для получения соединений формулы (I-1-a).

Схема 4a

Соединения формулы (I), где Y представляет собой прямую связь, а указанные соединения представлены формулой (I-D), также могут быть получены согласно следующей схеме реакции 5. На схеме 5 W₄ представляет собой подходящую уходящую группу, такую как, например, галоген, например бром. Все другие переменные на схеме 5 определены согласно настоящему изобретению.

Схема 5

Реакцию по схеме 5 проводят в присутствии подходящего катализатора, такого как,

например, палладиевый катализатор, например Pd₂(dba)₃, подходящего лиганда, такого как, например, PCy₃ (трициклогексилфосфин), подходящего основания, такого как, например, K₃PO₄ (трикалия фосфат), и подходящего растворителя, такого как, например, диоксан и вода.

На схеме 5 промежуточное соединение формулы (XVI) может представлять собой конкретный стереоизомер, например S-энантиомер, что в результате приводит к образованию конкретного стереоизомера, например S-энантиомера, формулы (I-D) так, как показано ниже на схеме 5a для получения соединений формулы (I-D-a).

Схема 5a

Промежуточные соединения формулы (XVI) могут быть получены согласно следующей схеме реакции 6. На схеме 6 W₁ представляет собой подходящую уходящую группу, такую как, например, галоген, например хлор, и W₄ представляет собой подходящую уходящую группу, такую как, например, галоген, например бром. Все другие переменные на схеме 6 определены согласно настоящему изобретению.

Схема 6

На схеме 6 применены следующие условия реакции:

1: в присутствии подходящего растворителя, такого как, например спирт, например этанол, при подходящей температуре, такой как, например, 70^oC;

2: в присутствии подходящего основания, такого как, например, NaHCO₃, подходящего растворителя, такого как, например, диметилформамид, при подходящей температуре, такой как, например, 80^oC.

Соединения формулы (I) также могут быть превращены друг в друга посредством реакций, известных из уровня техники, или преобразований функциональных групп.

Например, соединения формулы (I), где R_c представляет собой C_1-6алкил, замещенный -C(=O)-O-C_1-6алкилом, или C_1-6алкил-O-C(=O)-, можно превратить в соединения формулы (I), где R_c представляет собой HOOC-C1-6алкил или карбоксил, в присутствии гидроксида лития и в присутствии подходящего растворителя, такого как, например, тетрагидрофуран или спирт, например метанол.

Соединения по настоящему изобретению, полученные в описанных ниже способах, можно синтезировать в виде смесей энантиомеров, в частности, рацемических смесей энантиомеров, которые можно отделять друг от друга, следуя известным из уровня техники процедурам разделения. Рацемические соединения формулы (I), содержащие основный атом азота, можно превращать в соответствующие формы диастереомерных солей посредством проведения реакции с подходящей хиральной кислотой. Указанные формы диастереомерных солей затем разделяют, например, с помощью селективной или фракционной кристаллизации, и энантиомеры выделяют оттуда с помощью щелочи. Альтернативный способ разделения энантиомерных форм соединений формулы (I) и их фармацевтически приемлемых солей присоединения и сольватов включает жидкостную хроматографию с применением хиральной неподвижной фазы, например с помощью сверхкритической флюидной хроматографии. Указанные чистые стереохимически изомерные формы также можно получать из соответствующих чистых стереохимически изомерных форм соответствующих исходных веществ при условии, что реакция протекает стереоспецифически. Если необходим конкретный стереоизомер, то предпочтительно указанное соединение синтезировать с помощью стереоспецифических способов получения. В данных способах преимущественно применяют энантиомерно чистые исходные вещества.

При получении соединений по настоящему изобретению может быть необходимым обеспечение защиты удаленной функциональной группы (например, первичного или вторичного амина) промежуточных соединений. Необходимость в обеспечении такой защиты изменяется в зависимости от природы удаленной функциональной группы и от условий способов получения. Подходящие защитные группы для аминогруппы (NH-PG) включают ацетил, трифторацетил, трет-бутоксикарбонил (Boc), бензилоксикарбонил (CBz) и 9-флуоренилметиленоксикарбонил (Fmoc). Необходимость в обеспечении такой защиты легко определит специалист в данной области техники. Для общего описания защитных групп и их применения см. T. W. Greene and P. G. M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 4th ed., Wiley, Hoboken, New Jersey, 2007.

Во всех этих способах получения продукты реакции можно выделить из реакционной среды и, при необходимости, дополнительно очистить в соответствии с методиками, общеизвестными в данной области техники, такими как, например, экстракция, кристаллизация, растирание и хроматография. Чистоту продуктов реакции можно определить в соответствии с методиками, общеизвестными в данной области техники, такими как, например, LC-MS, TLC, HPLC.

Дополнительный аспект настоящего изобретения относится к способу получения соединения формулы (I), определенного в данном документе, при этом способ включает:

(i) осуществление реакции промежуточного соединения формулы (XI),

где W₁ представляет собой подходящую уходящую группу, такую как, например, галоген, например хлор, с промежуточным соединением формулы (XII),

в присутствии подходящего основания, такого как, например,

N, N-диизопропилэтиламин, бикарбонат калия или бикарбонат натрия, подходящего катализатора фазового переноса, такого как, например, йодид тетрабутиламмония или 18-краун-6, и подходящего растворителя, такого как, например, дихлорметан, хлороформ, N, N-диметилацетамид или спирт, например этанол; или

(ii) осуществление реакции промежуточного соединения формулы (XVI),

где W₄ представляет собой подходящую уходящую группу, такую как,

например, галоген, например бром, с промежуточным соединением формулы,

в присутствии подходящего катализатора, такого как, например,

палладиевый катализатор, например Pd₂(dba)₃, подходящего лиганда, такого как, например, davephos (2-дициклогексилфосфино-2'-(N, N-диметиламино)бифенил), подходящего основания, такого как, например, LiHMDS (бис(триметилсилил)амид лития), и подходящего растворителя, такого как, например, тетрагидрофуран; или

(iii) осуществление реакции промежуточного соединения формулы (XVI),

где W₄ представляет собой подходящую уходящую группу, такую как, например, галоген, например бром, с промежуточным соединением формулы в присутствии подходящего катализатора, такого как, например, палладиевый катализатор, например Pd₂(dba)₃, подходящего лиганда, такого как, например, PCy₃ (трициклогексилфосфин), подходящего основания, такого как, например, K₃PO₄ (трикалия фосфат), и подходящего растворителя, такого как, например, диоксан и вода, где переменные определены в данном документе, и необязательно последующее превращение одного соединения формулы (I) в другое соединение формулы (I).

Фармацевтически приемлемые соли, их сольваты или производные

В данном разделе, как и во всех других разделах настоящей заявки, если в контексте не указано иное, упоминания формулы (I) включают упоминания всех других их подгрупп, предпочтений, вариантов осуществления и примеров, определенных в данном документе.

Если не указано иное, упоминание конкретного соединения также включает его ионные формы, соли, сольваты, изомеры, таутомеры и изотопы, например, предпочтительно соли или их изомеры или сольваты. Соединения формулы (I) могут существовать в форме солей, например солей присоединения кислоты, или в определенных случаях солей органических и неорганических оснований, таких как карбоксилатные, сульфонатные и фосфатные соли. Все такие соли находятся в пределах объема настоящего изобретения, и упоминания соединений формулы (I) включают солевые формы соединений.

Солевые формы соединений по настоящему изобретению, как правило, представляют собой фармацевтически приемлемые соли, и примеры фармацевтически приемлемых солей рассмотрены в Berge et al. (1977) "Pharmaceutically Acceptable Salts," J. Pharm. Sci., Vol. 66, pp. 1-19. Однако соли, которые не являются фармацевтически приемлемыми, также могут быть получены в качестве форм промежуточных соединений, которые затем могут быть превращены в фармацевтически приемлемые соли. Такие формы солей, не являющихся фармацевтически приемлемыми, которые могут быть применимы, например, в очистке или разделении соединений по настоящему изобретению, также составляют часть настоящего изобретения.

Соли по настоящему изобретению могут быть синтезированы из исходного соединения, которое содержит основный или кислотный фрагмент, традиционными химическими способами, такими как способы, описанные в Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use, P. Heinrich Stahl (Editor), Camille G. Wermuth (Editor), ISBN: 3-90639-026-8, Hardcover, 388 pages, August 2002. В общем, такие соли могут быть получены путем осуществления реакции свободных кислотных или основных форм таких соединений с подходящими основанием или кислотой в воде или в органическом растворителе, или в смеси этих двух, как правило, используют неводные среды, такие как эфир, этилацетат, этанол, изопропанол или ацетонитрил. Соединения по настоящему изобретению могут существовать в виде моно- или дисолей в зависимости от pKa кислоты, из которой образована соль.

Соли присоединения кислоты могут быть образованы с широким рядом как неорганических, так и органических кислот. Примеры солей присоединения кислоты включают соли, образованные с кислотой, выбранной из группы, состоящей из уксусной, 2,2-дихлоруксусной, адипиновой, альгиновой, аскорбиновой (например, L-аскорбиновой), L-аспарагиновой, бензолсульфоновой, бензойной, 4-ацетамидобензойной, бутановой, (+) камфорной, камфорсульфоновой, (+)-(1S)-камфора-10-сульфоновой, каприновой, капроновой, каприловой, коричной, лимонной, цикламовой, додецилсерной, этан-1,2-дисульфоновой, этансульфоновой, 2-гидроксиэтансульфоновой, муравьиной, фумаровой, галактаровой, гентизиновой, глюкогептоновой, D-глюконовой, глюкуроновой (например, D-глюкуроновой), глутаминовой (например, L-глутаминовой), α-оксоглутаровой, гликолевой, гиппуровой, бромистоводородной, хлористоводородной, йодистоводородной, изэтионовой, молочной (например, (+)-L-молочной, (±)-DL-молочной), лактобионовой, малеиновой, яблочной, (-)-L-яблочной, малоновой, (±)-DL-миндальной, метансульфоновой, нафталинсульфоновой (например, нафталин-2-сульфоновой), нафталин-1,5-дисульфоновой, 1-гидрокси-2-нафтойной, никотиновой, азотной, олеиновой, оротовой, щавелевой, пальмитиновой, памоевой, фосфорной, пропионовой, L-пироглутаминовой, пировиноградной, салициловой, 4-аминосалициловой, себациновой, стеариновой, янтарной, серной, дубильной, (+)-L-винной, тиоциановой, толуолсульфоновой (например п-толуолсульфоновой), ундециленовой и валериановой кислот, а также с ацилированными аминокислотами и катионообменными смолами.

Одна конкретная группа солей состоит из солей, образованных из уксусной, хлористоводородной, йодистоводородной, фосфорной, азотной, серной, лимонной, молочной, янтарной, малеиновой, яблочной, изэтионовой, фумаровой, бензолсульфоновой, толуолсульфоновой, метансульфоновой (мезилата), этансульфоновой, нафталинсульфоновой, валериановой, уксусной, пропановой, бутановой, малоновой, глюкуроновой и лактобионовой кислот. Другая группа солей присоединения кислоты включает соли, образованные из уксусной, адипиновой, аскорбиновой, аспарагиновой, лимонной, DL-молочной, фумаровой, глюконовой, глюкуроновой, гиппуровой, хлористоводородной, глутамовой, DL-яблочной, метансульфоновой, себациновой, стеариновой, янтарной и винной кислот.

Если соединение является анионным или содержит функциональную группу, которая может быть анионной (например, -COOH может представлять собой -COO^-), то можно образовывать соль с подходящим катионом. Примеры подходящих неорганических катионов включают без ограничения ионы щелочных металлов, такие как Na⁺ и K⁺, катионы щелочноземельных металлов, такие как Ca²⁺ и Mg²⁺, и другие катионы, такие как Al³⁺. Примеры подходящих органических катионов включают без ограничения ион аммония (т. е. NH₄ ⁺) и ионы замещенного аммония (например, NH₃R⁺, NH₂R₂ ⁺, NHR₃ ⁺, NR₄ ⁺).

Примерами некоторых подходящих ионов замещенного аммония являются ионы, полученные из этиламина, диэтиламина, дициклогексиламина, триэтиламина, бутиламина, этилендиамина, этаноламина, диэтаноламина, пиперазина, бензиламина, фенилбензиламина, холина, меглумина и трометамина, а также аминокислот, таких как лизин и аргинин. Примером распространенного иона четвертичного аммония является N(CH₃)₄ ⁺.

Если соединения формулы (I) содержат функциональную аминогруппу, то они могут образовывать соли четвертичного аммония, например, путем проведения реакции с алкилирующим средством согласно способам, хорошо известным специалисту в данной области техники. Такие соединения четвертичного аммония находятся в пределах объема формулы (I).

Соединения по настоящему изобретению могут образовывать сольваты, например, с водой (т. е. гидраты) или распространенными органическими растворителями. Применяемый в данном документе термин "сольват" означает физическую связь соединений по настоящему изобретению с одной или несколькими молекулами растворителя, а также их фармацевтически приемлемые соли присоединения. Эта физическая связь подразумевает различную степень образования ионной и ковалентной связи, включая образование водородной связи. В некоторых случаях сольват будет способен к выделению, например, когда одна или несколько молекул растворителя включены в кристаллическую решетку кристаллического твердого вещества. Подразумевается, что термин "сольват" охватывает как жидкофазовые, так и изолируемые сольваты. Неограничивающие примеры подходящих сольватов включают соединения по настоящему изобретению в комбинации с водой (гидраты), изопропанолом, этанолом, метанолом, DMSO, этилацетатом, уксусной кислотой или этаноламином и т. п. Соединения по настоящему изобретению могут проявлять свои биологические эффекты при нахождении в растворе.

Сольваты могут быть важны для способов получения вещества (например, в отношении его очистки), хранения вещества (например, его стабильности) и удобства осуществления манипуляций с веществом, и зачастую их образуют как часть стадий выделения или очистки при химическом синтезе. Специалист в данной области техники может определить посредством стандартных и используемых в течение большого периода времени методик, образовался ли гидрат или другой сольват при условиях выделения или условиях очистки, используемых для получения данного соединения. Примеры таких методик включают термогравиметрический анализ (TGA), дифференциальную сканирующую калориметрию (DSC), рентгеновскую кристаллографию (например, монокристаллическую рентгеновскую кристаллографию или рентгеновскую порошковую дифрактометрию) и ЯМР твердого тела (SS-NMR, также известный как ЯМР с вращением образца под магическим углом или MAS-NMR). Такие методики являются такой же частью стандартного аналитического инструментария квалифицированного химика, как ЯМР, IR, HPLC и MS. В качестве альтернативы, специалист в данной области техники может при необходимости образовывать сольват с использованием условий кристаллизации, которые предусматривают количество растворителя, необходимое для конкретного сольвата. Соответственно, стандартные способы, описанные выше, могут быть использованы для установления образования сольватов.

Кроме того, соединения по настоящему изобретению могут иметь одну или несколько полиморфных (кристаллических) или аморфных форм, и эти формы как таковые включены в объем настоящего изобретения.

Соединения формулы (I) могут существовать в ряде различных геометрических изомерных и таутомерных форм, и упоминания соединений формулы (I) включают все такие формы. Во избежание неоднозначности толкования, если соединение может существовать в одной из нескольких геометрических изомерных и таутомерных форм, и только одна конкретно описана или показана, то все остальные, тем не менее, охватываются формулой (I). Примеры таутомерных форм включают, например, кетоформу, енольную и енолятную формы, например, как в следующих таутомерных парах: кетон/енол (показано ниже), имин/енамин, амид/иминоспирт, амидин/ендиамины, нитрозосоединение/оксим, тиокетон/ентиол и нитросоединение/ацинитросоединение.

Предполагается, что такие формы, ввиду того, что они могут существовать, включены в объем настоящего изобретения. Из этого следует, что одно соединение может существовать как в стереоизомерной, так и в таутомерной форме.

Если соединения формулы (I) содержат один или несколько хиральных центров и могут существовать в форме двух или более оптических изомеров, то упоминания соединений формулы (I) включают все их оптические изомерные формы (например, энантиомеры, эпимеры и диастереоизомеры) либо как отдельные оптические изомеры, либо как смеси (например, рацемические смеси) двух или более оптических изомеров, если контекст не требует иного. Если соединение формулы (I) содержит более одного хирального центра, и об одном центре говорится, что он обладает абсолютной стереоконфигурацией, как в соединениях формул (I-a), (I-A-a), (I-B-a), (I-C-a) или (I-D-a), другой(другие) хиральный(хиральные) центр(центы) включает(включают) все формы оптических изомеров, либо как индивидуальные оптические изомеры, либо как смеси (например, рацемические смеси) двух или более его оптических изомеров, если контекст не требует иного. Оптические изомеры могут быть охарактеризованы и идентифицированы по их оптической активности (т. е. как+и - изомеры в зависимости от направления, в котором они вращают плоскость поляризации света, или как d и l изомеры), или они могут быть охарактеризованы с точки зрения их абсолютной стереохимии с использованием номенклатуры "R и S" разработанной Каном, Ингольдом и Прелогом, см. Advanced Organic Chemistry by Jerry March, 4^th Edition, John Wiley & Sons, New York, 1992, pages 109-114, и см. также Cahn, Ingold & Prelog (1966) Angew. Chem. Int. Ed. Engl., 5, 385-415. Например, выделенные энантиомеры, абсолютная конфигурация которых неизвестна, могут обозначаться как (+) или (−) в зависимости от направления, в котором они вращают плоскость поляризации света.

Оптические изомеры могут быть разделены с помощью ряда методик, в том числе хиральной хроматографии (хроматографии на хиральной подложке), и такие методики хорошо известны специалисту в данной области техники. Как альтернатива хиральной хроматографии оптические изомеры могут быть разделены путем образования диастереоизомерных солей с хиральными кислотами, такими как (+)-винная кислота, (-)-пироглутаминовая кислота, (-)-ди-толуоил-L-винная кислота, (+)-миндальная кислота, (-)-яблочная кислота и (-)-камфорсульфоновая кислота, с разделением диастереоизомеров посредством избирательной кристаллизации, а затем растворения солей с получением отдельного энантиомера свободного основания.

Если соединения формулы (I) существуют в виде двух или более изомерных форм, то одна изомерная форма, например, один энантиомер в паре энантиомеров, может проявлять преимущества над другой изомерной формой, например другим энантиомером, например, в отношении биологической активности. Таким образом, в некоторых случаях может быть желательным применение в качестве терапевтического средства только одного из пары энантиомеров или только одного из нескольких диастереоизомеров. Было обнаружено, что если соединения, в которых хиральный центр, обозначенный *, в следующей структуре имеет S-конфигурацию, то эти соединения проявляют более высокую биологическую активность, чем соответствующая R-конфигурация.

Если указан конкретный стереоизомер, это означает, что указанный стереоизомер практически не содержит других стереоизомеров, т. е. относится к содержанию менее 50%, предпочтительно менее 20%, более предпочтительно менее 10%, еще более предпочтительно менее 5%, в частности менее 2% и наиболее предпочтительно менее 1% других стереоизомеров. Таким образом, если соединение формулы (I), например, указано как (S), то это означает, что соединение практически не содержит (R)-изомера; если соединение формулы (I), например, указано как E, то это означает, что соединение практически не содержит Z-изомера; если соединение формулы (I), например, указано как цис-, то это означает, что соединение практически не содержит транс-изомера.

Любая химическая формула, используемая в данном документе, связи в которой показаны только в виде сплошных линий, а не в виде сплошных клиновидных или пунктирных клиновидных связей, или иным образом показанная в какой-либо определенной конфигурации (например, R, S) вокруг одного или нескольких атомов, предусматривает каждый возможный стереоизомер или смесь двух или более стереоизомеров.

Термины "стереоизомеры", "стереоизомерные формы" или "стереохимически изомерные формы" выше или ниже в данном документе используются взаимозаменяемо.

Энантиомеры представляют собой стереоизомеры, которые являются несовпадающими при наложении зеркальными отображениями друг друга. Смесь пары энантиомеров 1:1 представляет собой рацемат или рацемическую смесь.

Атропизомеры (или атропоизомеры) представляют собой стереоизомеры, которые имеют конкретную пространственную конфигурацию, образованную в результате ограниченного вращения вокруг одинарной связи вследствие значительного стерического затруднения. Предполагается, что все атропизомерные формы соединений формулы (I) включены в объем настоящего изобретения.

Диастереомеры (или диастереоизомеры) представляют собой стереоизомеры, которые не являются энантиомерами, т. е. они не соотносятся как зеркальные отображения. Если соединение содержит двойную связь, то заместители могут находиться в E- или Z-конфигурации. Заместители при двухвалентных циклических (частично) насыщенных радикалах могут находиться либо в цис-, либо в транс-конфигурации; например, если соединение содержит двузамещенную циклоалкильную группу, то заместители могут находиться в цис- или транс-конфигурации. Таким образом, настоящее изобретение включает энантиомеры, атропизомеры, диастереомеры, рацематы, E-изомеры, Z-изомеры, цис-изомеры, транс-изомеры и их смеси, во всех случаях, когда это возможно с химической точки зрения.

Значения всех этих терминов, т. е. энантиомеров, атропизомеров, диастереомеров, рацематов, E-изомеров, Z-изомеров, цис-изомеров, транс-изомеров и их смесей, известны специалисту в данной области техники.

Соединения по настоящему изобретению включают соединения с одним или несколькими изотопными замещениями, и упоминание конкретного элемента включает в свой объем все изотопы элемента, встречающиеся в природе или полученные синтетическим путем, либо с природным содержанием изотопов, либо в обогащенной изотопами форме. Например, упоминание водорода включает в свой объем ¹H, ²H (D) и ³H (T). Подобным образом, упоминания углерода и кислорода включают в свой объем ¹²C, ¹³C, и ¹⁴C, и ¹⁶O, и ¹⁸O соответственно. Изотопы могут быть радиоактивными или нерадиоактивными. В одном варианте осуществления настоящего изобретения соединения не содержат радиоактивные изотопы. Такие соединения являются предпочтительными для терапевтического применения. В другом варианте осуществления, однако, соединение может содержать один или несколько радиоизотопов. Соединения, содержащие такие радиоизотопы, могут быть применимы в диагностическом контексте. Меченные радиоактивным изотопом соединения формулы (I) могут содержать радиоактивный изотоп, выбранный из группы, состоящей из ²H, ³H, ¹¹C, ¹⁸F, ¹²²I, ¹²³I, ¹²⁵I, ¹³¹I, ⁷⁵Br, ⁷⁶Br, ⁷⁷Br и ⁸²Br. Предпочтительно радиоактивный изотоп выбран из группы, состоящей из ²H,³H, ¹¹C и ¹⁸F. Более предпочтительно, радиоактивный изотоп представляет собой ²H.

В частности, предполагается, что дейтерированные соединения включены в объем настоящего изобретения.

Фармакология

Протеинтирозинкиназы (PTK)

Соединения по настоящему изобретению, описываемые в данном документе, ингибируют или модулируют активность определенных тирозинкиназ, и, таким образом, соединения будут применимы в лечении или профилактике, в частности, в лечении болезненных состояний или состояний, опосредованных данными тирозинкиназами, в частности FGFR.

FGFR

Семейство факторов роста фибробластов (FGF), представляющих собой рецепторы протеинтирозинкиназы (PTK), регулирует множество различных физиологических функций, включая митогенез, заживление ран, клеточную дифференцировку и ангиогенез, и развитие. На рост как нормальных, так и опухолевых клеток, также как и на пролиферацию, влияют изменения локальной концентрации FGF, внеклеточных сигнальных молекул, которые действуют в качестве аутокринных, а также в качестве паракринных факторов. Аутокринная передача сигналов FGF может быть особенно важной при развитии видов рака, зависимых от стероидного гормона, до независимого от гормона состояния. FGF и их рецепторы экспрессируются на повышенных уровнях в нескольких тканях и клеточных линиях, и считают, что сверхэкспрессия способствует злокачественному фенотипу. Кроме того, ряд онкогенов являются гомологами генов, кодирующих рецепторы фактора роста, и существует возможность аберрантной активации FGF-зависимой передачи сигнала в случае рака поджелудочной железы у человека (Knights et al., Pharmacology and Therapeutics 2010 125:1 (105-117); Korc M. et al Current Cancer Drug Targets 2009 9:5 (639-651)).

Этими двумя прототипическими членами являются кислотный фактор роста фибробластов (aFGF или FGF1) и основный фактор роста фибробластов (bFGF или FGF2), и к настоящему времени идентифицированы по меньшей мере двадцать четко различимых членов семейства FGF. Клеточный ответ на FGF передается через четыре типа высокоаффинных трансмембранных белков относящихся к тирозинкиназам рецепторов фактора роста фибробластов (FGFR), пронумерованных от 1 до 4 (от FGFR1 до FGFR4).

Нарушение пути FGFR1 должно влиять на пролиферацию опухолевых клеток, поскольку данная киназа активирована при многих типах опухолей в дополнение к пролиферации эндотелиальных клеток. Сверхэкспрессия и активация FGFR1 в связанной с опухолью сети сосудов позволили предположить роль данных молекул в ангиогенезе при опухоли.

В недавнем исследовании была показана связь между экспрессией FGFR1 и онкогенностью при классических лобулярных карциномах (CLC). CLC составляют 10-15% от всех случаев видов рака молочной железы, и обычно они характеризуются недостатком экспрессии p53 и Her2, в то же время сохраняя экспрессию рецептора эстрогена. Амплификация гена 8p12-p11.2 была продемонстрирована в ~50% случаев CLC, и было показано, что это связано с повышенной экспрессией FGFR1. Предварительные исследования с siRNA, направленной против FGFR1, или с низкомолекулярным ингибитором рецептора показали, что клеточные линии, в которых происходит такая амплификация, являются особенно чувствительными к ингибированию данного сигнального пути. Рабдомиосаркома (RMS), самая распространенная саркома мягких тканей у детей, по-видимому, является результатом аномальной пролиферации и дифференцировки в процессе миогенеза скелета. FGFR1 сверхэкспрессируется при первичных опухолях рабдомиосаркомы, и это связано с гипометилированием 5' CpG-островка и аномальной экспрессией генов AKT1, NOG и BMP4.

Рецептор 2 фактора роста фибробластов имеет высокую аффинность к кислотным и/или основным факторам роста фибробластов, а также к лигандам фактора роста кератиноцитов. Рецептор 2 фактора роста фибробластов также репродуцирует мощные остеогенные эффекты FGF в процессе роста остеобластов и дифференцировки. Было показано, что мутации рецептора 2 фактора роста фибробластов, приводящие к комплексным функциональным изменениям, индуцируют аномальную оссификацию швов черепа (краниосиностоз), что предполагает важную роль передачи сигнала FGFR при внутримембранном остеогенезе. Например, при синдроме Аперта (AP), характеризующимся преждевременной оссификацией швов черепа, большинство случаев связаны с точечными мутациями, порождающими приобретение функции рецептора 2 фактора роста фибробластов. Кроме того, скрининг мутации у пациентов с синдромными краниосиностозами указывает, что ряд рекуррентных мутаций FGFR2 являются причиной тяжелых форм синдрома Пфейффера. Конкретные мутации FGFR2 включают W290C, D321A, Y340C, C342R, C342S, C342W, N549H, K641R в FGFR2.

Ряд тяжелых нарушений при развитии скелета человека, включающих синдромы Аперта, Крузона, Джексона-Вейсса, синдром Бира-Стивенсона со складчатой пахидермией и синдром Пфайффера, связан с возникновением мутаций рецептора 2 фактора роста фибробластов. В большинстве, если не во всех случаях синдром Пфейффера (PS) также вызывается de novo мутацией гена рецептора 2 фактора роста фибробластов, и недавно было показано, что мутации рецептора 2 фактора роста фибробластов нарушают одно из основных правил регулирования лигандной специфичности. А именно, две мутантные сплайс-формы рецептора фактора роста фибробластов, FGFR2c и FGFR2b, приобрели способность связываться с атипичными FGF лигандами и активироваться с помощью атипичных FGF лигандов. Эта потеря лигандной специфичности приводит к аберрантной передаче сигналов и это предполагает, что тяжелые фенотипы этих синдромов заболевания являются результатом эктопической лиганд-зависимой активации рецептора 2 фактора роста фибробластов.

Генетические аберрации рецепторной тирозинкиназы FGFR3, такие как хромосомные транслокации или точечные мутации, приводят к появлению эктопически экспрессируемых или дерегулированных конститутивно активных рецепторов FGFR3. Такие нарушения связаны с подгруппой множественных миелом и раком мочевого пузыря, гепатоцеллюлярным раком, плоскоклеточной карциномой полости рта и карциномами шейки матки. Соответственно, ингибиторы FGFR3 могли бы применяться при лечении множественной миеломы, карцином мочевого пузыря и шейки матки. FGFR3 также сверхэкспрессируется при раке мочевого пузыря, в частности, инвазивном раке мочевого пузыря. FGFR3 часто активируется в результате мутации при уротелиальной карциноме (UC). Повышенная экспрессия была связана с мутацией (85% мутантных опухолей характеризовались высоким уровнем экспрессии), но 42% опухолей без признаков мутации также характеризовались сверхэкспрессией, в том числе многие мышечно-инвазивные опухоли.

Сверхэкспрессию FGFR4 связывают с неблагоприятным прогнозом как при карциноме предстательной железы, так и при карциноме щитовидной железы Кроме того, полиморфизм зародышевых клеток (Gly388Arg) связывают с повышенной частотой возникновения рака легкого, молочной железы, толстой кишки печени (HCC) и предстательной железы Кроме того, также было обнаружено, что усеченная форма FGFR4 (включая киназный домен) присутствует в 40% гипофизарных опухолей, но не присутствует в нормальной ткани. Сверхэкспрессия FGFR4 была обнаружена в опухолях печени, толстой кишки и легкого. FGFR4 вовлечен в рак толстой и прямой кишки и рак печени, где экспрессия его лиганда FGF19 зачастую повышена.

Фиброзные состояния представляют собой важную медицинскую проблему, являющуюся следствием аномального или избыточного отложения фиброзной ткани. Они возникают при многих заболеваниях, включая цирроз печени, гломерулонефрит, фиброз легких, системный фиброз, ревматоидный артрит, а также естественный процесс заживления ран. Механизмы патологического фиброза полностью не изучены, но считают, что фиброз является результатом действия различных цитокинов (включая фактор некроза опухолей (TNF), факторы роста фибробластов (FGF), тромбоцитарный фактор роста (PDGF) и трансформирующий фактор роста бета (TGFβ)), вовлеченных в пролиферацию фибробластов и отложение белков внеклеточного матрикса (включая коллаген и фибронектин). Это приводит к изменению структуры и функции ткани и к последующей патологии.

В ряде доклинических исследований была продемонстрирована повышающая регуляция факторов роста фибробластов в доклинических моделях фиброза легких. Сообщалось, что TGFβ1 и PDGF вовлечены в фиброгенный процесс, а в последующем опубликованном исследовании предполагается, что повышение количества FGF и последующее повышение пролиферации фибробластов может происходить в ответ на повышение количества TGFβ1. Потенциальную терапевтическую важность целенаправленного воздействия на фиброзный механизм при состояниях, таких как идиопатический фиброз легких (IPF), подтверждает сообщение о клиническом эффекте противофиброзного средства пирфенидона. Идиопатический фиброз легких (также называемый криптогенным фиброзирующим альвеолитом) является прогрессирующим состоянием, включающим рубцевание легкого. Постепенно альвеолярные мешочки легких замещаются фиброзной тканью, которая становится более толстой, вызывая необратимую потерю способности ткани переносить кислород в кровоток. Симптомы этого состояния включают одышку, хронический сухой кашель, утомляемость, боль в груди и потерю аппетита, приводящую к быстрой потере веса. Данное состояние является чрезвычайно тяжелым с приблизительно 50% смертностью через 5 лет.

Таким образом, соединения, которые ингибируют FGFR, будут применимы в обеспечении средства предотвращения роста или индуцирования апоптоза в опухолях, в частности, путем ингибирования ангиогенеза. Поэтому ожидается, что соединения будут одобрены как пригодные в лечении или предупреждении пролиферативных нарушений, таких как виды рака. В частности, опухоли с активированными мутантами рецепторных тирозинкиназ или повышающей регуляцией рецепторных тирозинкиназ могут быть особенно чувствительными к ингибиторам. Для пациентов с активированными мутантами любой из изоформ конкретных RTK, обсуждаемых в данном документе, лечение с помощью ингибиторов RTK также может быть особенно эффективным.

Как отмечается в данном документе выше, разнообразные ингибиторы FGFR проходят клинические испытания, и они показали клинический ответ у пациентов с аберрациями FGFR. Однако сообщалось, что мутации, затрагивающие аминокислоты в FGFR, например, FGFR1, 2 или 3, могут обуславливать устойчивость к ингибиторам FGFR или снижать чувствительность к ингибиторам FGFR. Развитие вторичных мутаций киназного домена FGFR при лечении ингибиторами FGFR является важным механизмом приобретенной устойчивости к ингибированию FGFR. При видах рака также происходят de novo эквивалентные точковые мутации FGFR. Сообщалось, что мутации гена-привратника представляют собой один из основных механизмов, приводящих к устойчивости к ингибиторам тирозинкиназы. Мутации гена-привратника включают FGFR3 V555L/V555M, FGFR1 V561M, FGFR2 V564F/V564I/V564M и FGFR4 V550L. Сообщалось об обуславливающих устойчивость мутациях FGFR в клинических испытаниях и в клеточных системах in vitro. Поэтому существует потребность в новых (второго поколения) ингибиторах FGFR, которые позволят преодолеть клинически приобретенную устойчивость к терапии ингибитором FGFR первого поколения и одновременно поддерживать ингибирующую активность в отношении FGFR, подавляющую активирующие мутации FGFR.

Было обнаружено, что соединения по настоящему изобретению проявляют активность в отношении FGFR дикого типа, в частности, FGFR1, 2, 3 или 4, более конкретно FGFR3, а также мутированного FGFR, в частности, в отношении FGFR, несущих мутации гена-привратника, или в отношении мутированного FGFR1, или мутированного FGFR2, или мутированного FGFR3, в частности, в отношении FGFR3 V555L, FGFR3 V555M, FGFR1 V561M и FGFR2 V564I, особенно в отношении FGFR3 V555L и FGFR3 V555M.

Биологическая активность и терапевтические пути применения

Соединения по настоящему изобретению и их подгруппы обладают ингибирующей или модулирующей активностью в отношении рецептора фактора роста фибробластов (FGFR) и будут применимы для предупреждения или лечения, в частности лечения, болезненных состояний или состояний, описанных в данном документе. Кроме того, соединения по настоящему изобретению и их подгруппы будут применимы для предупреждения или лечения, в частности, для лечения заболеваний или состояния, опосредованных киназами. Упоминания предотвращения, или профилактики, или лечения болезни или расстройства, такого как рак, включают в свой объем облегчение тяжести или снижение частоты возникновения рака.

В одном варианте осуществления соединения формулы (I) представляют собой ATP-конкурентные ингибиторы киназы FGFR.

Используемый в данном документе термин "модуляция", применительно к активности киназы, обозначает изменение уровня биологической активности протеинкиназы. Таким образом, модуляция охватывает физиологические изменения, которые приводят к повышению или снижению соответствующей активности протеинкиназы. Во втором случае модуляция может называться "ингибированием". Модуляция может возникать в результате непосредственного или косвенного воздействия, и она может быть опосредована любым механизмом и на любом физиологическом уровне, включая, например, уровень экспрессии гена (включающей, например, транскрипцию, трансляцию и/или посттрансляционную модификацию), уровень экспрессии регуляторных элементов кодирующих генов, которые непосредственно или косвенно воздействуют на уровни активности киназы. Таким образом, модуляция может предусматривать повышенную/подавленную экспрессию или избыточную или недостаточную экспрессию киназы, включая амплификацию гена (т. е. множество копий гена) и/или повышенную или сниженную экспрессию в результате транскрипционного эффекта, а также гиперактивность (или гипоактивность) и (де)активацию протеинкиназы(протеинкиназ) (включая (де)активацию) в результате мутации(мутаций). Термины "модулированный", "модуляция" и "модулировать" следует истолковывать соответствующим образом.

Используемый в данном документе термин "опосредованный", применяемый, например, в отношении описанной в данном документе киназы (и применяемый, например, к различным физиологическим процессам, заболеваниям, патологическим состояниям, состояниям, терапевтическим средствам, способам лечения или вмешательствам), используется ограничительно таким образом, что он применяется только к таким разнообразным процессам, заболеваниям, патологическим состояниям, состояниям, способам лечения и вмешательствам, в которых киназа играет биологическую роль. В случаях, когда термин применяют к болезненному состоянию или состоянию, биологическая роль, которую играет киназа, может быть непосредственной или косвенной, и может быть необходимой и/или достаточной для проявления симптомов болезни или расстройства (или их этиологии или развития). Таким образом, активность киназы (и, в частности, аберрантные уровни активности киназы, например, сверхэкспрессия киназы) не обязательно должна быть непосредственной причиной болезни или расстройства, и более того, предполагается, что опосредованные киназой заболевания, патологические состояния или состояния включают те, которые имеют мультифакториальную этиологию и комплексное развитие, и в которые соответствующая киназа вовлечена только частично. В случаях, когда термин применяют к лечению, профилактике или вмешательству, выполняемая киназой роль может быть непосредственной или косвенной, и может быть необходимой и/или достаточной для проведения лечения, профилактики или для результата вмешательства. Таким образом, болезненное состояние или состояние, опосредованные киназой, включают развитие устойчивости к любому конкретному противораковому лекарственному средству или к противораковой терапии.

Таким образом, например, соединения по настоящему изобретению могут быть применимы для облегчения тяжести или снижения частоты возникновения рака.

Более конкретно, соединения формулы (I) и их подгруппы являются ингибиторами FGFR. Например, соединения по настоящему изобретению обладают активностью в отношении FGFR1, FGFR2, FGFR3 и/или FGFR4 и, в частности, в отношении FGFR1, 2 и 3. Более конкретно, соединения по настоящему изобретению проявляют активность в отношении FGFR дикого типа и/или в отношении мутированного FGFR, в частности, FGFR с точковыми мутациями, более конкретно, в отношении мутаций гена-привратника. Мутации гена-привратника включают FGFR3 V555L/V555M, FGFR1 V561M, FGFR2 V564F/V564I/V564M и FGFR4 V550L. В частности, соединения по настоящему изобретению проявляют активность в отношении FGFR1, FGFR2 и FGFR3 с мутацией гена-привратника, в частности, в отношении FGFR3 V555L, FGFR3 V555M, FGFR1 V561M и FGFR2 V564I, в частности, в отношении FGFR3 V555L и FGFR3 V555M.

Диагностирование опухолей с мутациями может быть осуществлено с использованием методик, известных специалисту в данной области техники и описываемых в данном документе, таких как RT-PCR и FISH.

Примеры видов рака, которые можно лечить (или подавлять) включают без ограничения карциному, например карциному мочевого пузыря, рак молочной железы, рак толстой кишки (например, карциномы толстой и прямой кишки, такие как аденокарцинома толстой кишки и аденома толстой кишки), рак почки, рак уротелия, рак матки, рак эпидермиса, рак печени, рак легкого (например, мелкоклеточный рак легкого и немелкоклеточные карциномы легкого (например, аденокарциному и плоскоклеточную карциному)), рак пищевода, рак головы и шеи, рак желчного пузыря, рак яичников, рак поджелудочной железы (например, экзокринную карциному поджелудочной железы), рак желудка, гастроинтестинальный рак (также известный как рак желудочно-кишечного тракта) (например, гастроинтестинальные стромальные опухоли), рак шейки матки, рак эндометрия, рак щитовидной железы, рак предстательной железы или рак кожи (например, плоскоклеточный рак или выбухающую дерматофибросаркому); рак гипофиза, опухоль кроветворной ткани лимфоидного происхождения, например, лейкоз, острый лимфоцитарный лейкоз, хронический лимфоцитарный лейкоз, B-клеточную лимфому (например, диффузную В-крупноклеточную лимфому), T-клеточную лимфому, лимфому Ходжкина, неходжкинскую лимфому, волосатоклеточную лимфому или лимфому Беркитта; опухоль кроветворной ткани миелоидного происхождения, например, виды лейкоза, острый и хронический виды миелоидного лейкоза, хронический миеломоноцитарный лейкоз (CMML), миелопролиферативное нарушение, миелопролиферативный синдром, миелодиспластический синдром или промиелоцитарный лейкоз; множественную миелому; фолликулярный рак щитовидной железы; гепатоцеллюлярный рак, опухоль мезенхимального происхождения (например, саркому Юинга), например, фибросаркому или рабдомиосаркому; опухоль центральной или периферической нервной системы, например астроцитому, нейробластому, глиому (такую как мультиформная глиобластома) или шванному; меланому; семиному; тератокарциному; остеосаркому; пигментную ксеродерму; кератоакантому; фолликулярный рак щитовидной железы или саркому Капоши. В частности, плоскоклеточный рак легкого, рак молочной железы, рак толстой и прямой кишки, глиобластому, астроцитому, рак предстательной железы, мелкоклеточный рак легкого, меланому, рак головы и шеи, рак щитовидной железы, рак матки, рак желудочно-кишечного тракта, гепатоцеллюлярный рак, рак шейки матки, множественную миелому, рак мочевого пузыря, рак эндометрия, рак уротелия, рак толстой кишки, рабдомиосаркому, рак питуитарной железы, холангиокарциному.

Примеры видов рака, которые можно лечить (или подавлять), включают без ограничения рак мочевого пузыря, рак уротелия, метастатический рак уротелия, хирургически неоперабельный рак уротелия, рак молочной железы, глиобластому, рак легкого, немелкоклеточный рак легкого, плоскоклеточный рак легкого, аденокарциному легкого, легочную аденокарциному, мелкоклеточный рак легкого, рак яичника, рак эндометрия, рак шейки матки, саркому мягких тканей, плоскоклеточную карциному головы и шеи, рак желудочно-кишечного тракта, рак пищевода, плоскоклеточную карциному пищевода, аденокарциному пищевода, холангиокарциному, гепатоцеллюлярную карциному.

Некоторые формы рака устойчивы к лечению конкретными лекарственными средствами. Это может быть обусловлено типом опухоли или может возникать вследствие лечения с помощью соединения. В связи с этим, упоминания множественной миеломы включают чувствительную к бортезомибу множественную миелому или рефракторную множественную миелому. Подобным образом, упоминания хронического миелогенного лейкоза включают чувствительный к имитанибу хронический миелогенный лейкоз и рефракторный хронический миелогенный лейкоз. Хронический миелогенный лейкоз также известен как хронический миелолейкоз, хронический гранулоцитарный лейкоз или CML. Подобным образом, острый миелогенный лейкоз также называют острым миелобластным лейкозом, острым гранулоцитарным лейкозом, острым нелимфоидным лейкозом или AML.

Соединения по настоящему изобретению можно также применять в лечении связанных с кроветворением заболеваний, предусматривающих аномальную пролиферацию клеток, либо предраковых, либо стабильных, таких как миелопролиферативные заболевания. Миелопролиферативные заболевания ("MPD") представляют собой группу заболеваний костного мозга, при которых продуцируется избыток клеток. Они связаны с миелодиспластическим синдромом и могут быть вовлечены в него. Миелопролиферативные заболевания включают истинную полицитемию, эссенциальную тромбоцитемию и первичный миелофиброз. Дополнительное гематологическое нарушение представляет собой гиперэозинофильный синдром. T-клеточные лимфопролиферативные заболевания включают таковые, происходящие от естественных клеток-киллеров.

Кроме того, соединения по настоящему изобретению могут использоваться в лечении гастроинтестинального рака (также известного как рак желудочно-кишечного тракта), например при гастроинтестинальных стромальных опухолях. Гастроинтестинальный рак относится к злокачественным состояниям желудочно-кишечного тракта, включая пищевод, желудок, печень, желчную систему, поджелудочную железу, кишки и анус.

Таким образом, в случае фармацевтических композиций, путей применения или способов по настоящему изобретению для лечения заболевания или состояния, включающих аномальный рост клеток, заболевание или состояние, включающие аномальный рост клеток, в одном варианте осуществления представляют собой рак.

Конкретные подтипы видов рака включают множественную миелому, виды рака мочевого пузыря, шейки матки, предстательной железы, щитовидной железы, легкого, молочной железы и толстой кишки.

Дополнительный подтип видов рака включает множественную миелому, рак мочевого пузыря, гепатоцеллюлярный рак, плоскоклеточную карциному полости рта и карциномы шейки матки.

Соединения по настоящему изобретению, обладающие ингибирующей активностью в отношении FGFR, такого как FGFR1, могут быть особенно применимыми в лечении или предупреждении рака молочной железы, в частности, классических лобулярных карцином (CLC), и рака легкого с амплификацией FGFR1 или мутациями FGFR1.

Поскольку соединения по настоящему изобретению обладают активностью в отношении FGFR4, они также будут применимы в лечении видов рака предстательной железы или гипофиза или будут применяться в лечении рака молочной железы, рака легкого, рака предстательной железы, рака печени (HCC) или рака легкого.

В частности, соединения по настоящему изобретению как ингибиторы FGFR применимы в лечении множественной миеломы, миелопролиферативных нарушений, рака эндометрия, рака предстательной железы, рака мочевого пузыря, рака легкого, рака яичника, рака молочной железы, рака желудочно-кишечного тракта, рака толстой и прямой кишок и плоскоклеточной карциномы ротовой полости.

Дополнительными подтипами рака являются множественная миелома, рак эндометрия, рак мочевого пузыря, рак шейки матки, рак предстательной железы, рак легкого, рак молочной железы, рак толстой и прямой кишки и карциномы щитовидной железы.

В частности, соединения по настоящему изобретению применимы в лечении множественной миеломы (в частности, множественной миеломы с транслокацией t(4;14) или со сверхэкспрессией FGFR3), рака предстательной железы (гормонально-рефракторного рака предстательной железы), рака эндометрия (в частности, опухолей эндометрия с активирующими мутациями FGFR2) и рака молочной железы (в частности, лобулярного рака молочной железы).

В частности, соединения по настоящему изобретению применимы в лечении холангиокарциномы, в частности, холангиокарциномы с транслокациями и мутациями FGFR или амплификациями FGF19.

В частности, соединения применимы в лечении лобулярных карцином, таких как CLC (классическая лобулярная карцинома).

Поскольку соединения обладают активностью в отношении FGFR3, они будут применимы в лечении множественной миеломы и рака мочевого пузыря.

В частности, соединения обладают активностью в отношении опухолей с транслокацией FGFR3-TACC3, в частности, опухолей мочевого пузыря или головного мозга с транслокацией FGFR3-TACC3.

В частности, соединения применимы для лечения множественной миеломы с положительной транслокацией t(4;14).

В одном варианте осуществления соединения могут быть применимы для лечения саркомы. В одном варианте осуществления соединения могут быть применимы для лечения рака легкого, например, плоскоклеточной карциномы.

Поскольку соединения обладают активностью в отношении FGFR2, они будут применимы в лечении видов рака эндометрия, яичника, желудочно-кишечного тракта, гепатоцеллюлярного рака, рака матки, шейки матки и рака толстой и прямой кишки. FGFR2 также сверхэкспрессируется при эпителиальном раке яичника, поэтому соединения по настоящему изобретению могут быть особенно применимы в лечении рака яичника, такого как эпителиальный рак яичника.

В одном варианте осуществления соединения могут быть применимы в лечении рака легкого, в частности, NSCLC (немелкоклеточного рака легкого), плоскоклеточной карциномы, рака печени, рака почки, рака молочной железы, рака толстой кишки, рака толстой и прямой кишки, рака предстательной железы.

Виды рака могут представлять собой виды рака, которые чувствительны к ингибированию любого одного или нескольких FGFR, выбранных из FGFR1, FGFR2, FGFR3, FGFR4, например, одного или нескольких FGFR, выбранных из FGFR1, FGFR2 или FGFR3.

Является или не является конкретный вид рака чувствительным к ингибированию сигнального пути FGFR, можно определить с помощью анализа клеточного роста, изложенного ниже, или с помощью способа, изложенного в разделе, озаглавленном "Способы диагностирования".

Соединения по настоящему изобретению могут быть особенно применимы в лечении или профилактике видов рака такого типа, который связан с повышенными уровнями FGFR или характеризуется их наличием.

Соединения по настоящему изобретению могут быть применимы в лечении других состояний, которые являются результатом нарушений пролиферации, таких как сахарный диабет II типа или инсулиннезависимый сахарный диабет, аутоиммунные заболевания, травма головы, инсульт, эпилепсия, нейродегенеративные заболевания, такие как болезнь Альцгеймера, заболевание двигательных нейронов, прогрессирующий надъядерный паралич, кортико-базальная дегенерация и болезнь Пика, например, аутоиммунные заболевания и нейродегенеративные заболевания.

Одна подгруппа болезненных состояний и состояний, при которых могут быть применимыми соединения по настоящему изобретению, состоит из воспалительных заболеваний, сердечно-сосудистых заболеваний и заживления ран.

Также известно, что FGFR участвует в апоптозе, ангиогенезе, пролиферации, дифференцировке и транскрипции, и, таким образом, соединения по настоящему изобретению также могут быть применимы в лечении следующих заболеваний, отличных от рака: хронических воспалительных заболеваний, например, системной красной волчанки, опосредованного аутоиммунным ответом гломерулонефрита, ревматоидного артрита, псориаза, воспалительного заболевания кишечника, аутоиммунного сахарного диабета, реакций гиперчувствительности в виде экземы, астмы, COPD, ринита и заболеваний верхних дыхательных путей; сердечно-сосудистых заболеваний, например, гипертрофии сердца, рестеноза, атеросклероза; нейродегенеративных нарушений, например, болезни Альцгеймера, СПИД-ассоциированной деменции, болезни Паркинсона, бокового амиотрофического склероза, пигментного ретинита, спинальной мышечной атрофии и мозжечковой дегенерации; гломерулонефрита; миелодиспластических синдромов, инфаркта миокарда, ассоциированного с ишемическим повреждением, инсульта и реперфузионного повреждения, аритмии, атеросклероза, вызванных токсинами или связанных со злоупотреблением алкоголя заболеваний печени, заболеваний органов кроветворения, например, хронической анемии и апластической анемии; дегенеративных заболеваний опорно-двигательной системы, например, остеопороза и артрита, чувствительного к аспирину риносинусита, муковисцидоза, рассеянного склероза, заболеваний почек и ассоциированной с раком боли.

Кроме того, мутации FGFR2 связаны с рядом тяжелых нарушений развития скелета человека, и, таким образом, соединения по настоящему изобретению могли бы быть применимы в лечении нарушений развития скелета человека, включая аномальную оссификацию швов черепа (краниосиностоз), синдром Аперта (AP), синдром Крузона, синдром Джексона-Вейсса, синдром Бира-Стивенсона со складчатой пахидермией и синдром Пфайффера.

Соединение по настоящему изобретению, обладающее ингибирующей активностью в отношении FGFR, такого как FGFR2 или FGFR3, может быть особенно применимо в лечении или предупреждении заболеваний скелета. В частности, заболеваниями скелета являются ахондроплазия или танатофорная карликовость (также известная как танатофорная дисплазия).

Соединение по настоящему изобретению, обладающее ингибирующей активностью в отношении FGFR, такого как FGFR1, FGFR2 или FGFR3, может быть особенно применимо в лечении или предупреждении патологий, при которых симптомом является прогрессирующий фиброз. Фиброзные состояния, при лечении которых могут быть применимы соединения по настоящему изобретению, включают заболевания, характеризующиеся аномальным или избыточным отложением фиброзной ткани, например при циррозе печени, гломерулонефрите, фиброзе легких, системном фиброзе, ревматоидном артрите, а также при естественном процессе заживления ран. В частности, соединения по настоящему изобретению также могут быть применимы в лечении фиброза легких, в частности, идиопатического фиброза легких.

Сверхэкспрессия и активация FGFR и VEGFR в связанной с опухолью сосудистой системе позволяет предположить возможность использования соединений по настоящему изобретению в предотвращении и нарушении инициирования опухолевого ангиогенеза. В частности, соединения по настоящему изобретению могут быть применимы в лечении рака, метастазирования, видов лейкоза, таких как CLL, глазных заболеваний, таких как возрастная макулярная дистрофия, в частности, влажная форма возрастной макулярной дистрофии, ишемических пролиферативных ретинопатий, таких как ретинопатия недоношенных (ROP) и диабетическая ретинопатия, ревматоидного артрита и гемангиомы.

Активность соединений по настоящему изобретению в качестве ингибиторов FGFR1-4, в частности, FGFR3 с точковой мутацией, таких как, например, FGFR3 V555L и FGFR3 V555M, можно измерять с помощью анализов, описанных ниже в примерах, а уровень активности, проявляемой данным соединением, может быть определен по значению IC₅₀. Предпочтительными соединениями по настоящему изобретению являются соединения, характеризующиеся значением IC₅₀ менее 1 мкМ, более предпочтительно, менее 0,1 мкМ, или менее 0,01 мкМ, или менее 0,001 мкМ.

В настоящем изобретении представлены соединения, которые обладают ингибирующей или модулирующей активностью в отношении FGFR и которые могут быть применимы в предупреждении или лечении болезненных состояний или патологических состояний, опосредованных киназами FGFR.

В одном варианте осуществления представлено соединение, определенное в данном документе для применения в терапии, для применения в качестве медикамента. В дополнительном варианте осуществления представлено соединение, определенное в данном документе, для применения в профилактике или лечении, в частности в лечении, болезни или расстройства, опосредованных киназой FGFR.

Таким образом, например, соединения по настоящему изобретению могут быть применимы для облегчения тяжести или снижения частоты возникновения рака. Таким образом, в дополнительном варианте осуществления представлено соединение, определенное в данном документе, для применения в профилактике или лечении, в частности в лечении, рака. В одном варианте осуществления соединение, определенное в данном документе, предназначено для применения в профилактике или лечении, в частности в лечении, зависимого от FGFR рака. В одном варианте осуществления соединение, определенное в данном документе, предназначено для применения в профилактике или лечении, в частности в лечении, рака, опосредованного киназами FGFR.

Следовательно, в настоящем изобретении представлены, среди прочего, следующие объекты.

- Способ профилактики или лечения болезни или расстройства, опосредованных киназой FGFR, при этом способ предусматривает введение субъекту, нуждающемуся в этом, соединения формулы (I), определенного в данном документе.

- Способ профилактики или лечения болезни или расстройства, описанных в данном документе, при этом способ предусматривает введение субъекту, нуждающемуся в этом, соединения формулы (I), определенного в данном документе.

- Способ профилактики или лечения рака, при этом способ предусматривает введение субъекту, нуждающемуся в этом, соединения формулы (I), определенного в данном документе, в частности, рака, характеризующегося наличием FGFR1, FGFR2 или FGFR3 с мутациями гена-привратника, более конкретно, рака, характеризующегося наличием FGFR3 V555L, FGFR3 V555M, FGFR1 V561M или FGFR2 V564I, в частности, FGFR3 V555L или FGFR3 V555M. В одном варианте осуществления рак помимо FGFR1, FGFR2 или FGFR3 с мутациями гена-привратника характеризуется наличием одной или нескольких других аберраций FGFR, таких как, например, одна или несколько мутаций FGFR или одна или несколько транслокаций FGFR, такие как те, которые определены в данном документе.

- Способ облегчения тяжести или снижение частоты возникновения болезни или расстройства, опосредованных киназой FGFR, при этом способ предусматривает введение субъекту, нуждающемуся в этом, соединения формулы (I), определенного в данном документе.

- Способ ингибирования киназы FGFR, при этом способ предусматривает приведение киназы в контакт с ингибирующим киназу соединением формулы (I), определенным в данном документе.

- Способ модуляции клеточного процесса (например, клеточного деления) путем ингибирования активности киназы FGFR с применением соединения формулы (I), определенного в данном документе.

- Соединение формулы (I), определенное в данном документе, для применения в качестве модулятора клеточного процесса (например, клеточного деления) путем ингибирования активности киназы FGFR.

- Соединение формулы (I), определенное в данном документе, для применения в профилактике или лечении рака, в частности лечении рака, в частности, рака, характеризующегося наличием FGFR1, FGFR2 или FGFR3 с мутациями гена-привратника, более конкретно, рака, характеризующегося наличием FGFR3 V555L, FGFR3 V555M, FGFR1 V561M или FGFR2 V564I, в частности, FGFR3 V555L или FGFR3 V555M. В одном варианте осуществления рак помимо FGFR1, FGFR2 или FGFR3 с мутациями гена-привратника характеризуется наличием одной или нескольких других аберраций FGFR, таких как, например, одна или несколько мутаций FGFR или одна или несколько транслокаций FGFR, такие как те, которые определены в данном документе.

- Соединение формулы (I), определенное в данном документе, для применения в качестве модулятора (например ингибитора) FGFR.

- Применение соединения формулы (I), определенного в данном документе, для получения лекарственного средства, предназначенного для профилактики или лечения, в частности лечения, болезни или расстройства, опосредованных киназой FGFR, при этом соединение характеризуется формулой (I), определенной в данном документе.

- Применение соединения формулы (I), определенного в данном документе, для получения лекарственного средства, предназначенного для профилактики или лечения болезни или расстройства, описанных в данном документе.

- Применение соединения формулы (I), определенного в данном документе, для получения лекарственного средства, предназначенного для профилактики или лечения, в частности лечения, рака, в частности рака, характеризующегося наличием FGFR1, FGFR2 или FGFR3 с мутациями гена-привратника, более конкретно, рака, характеризующегося наличием FGFR3 V555L, FGFR3 V555M, FGFR1 V561M или FGFR2 V564I, в частности, FGFR3 V555L или FGFR3 V555M. В одном варианте осуществления рак помимо FGFR1, FGFR2 или FGFR3 с мутациями гена-привратника характеризуется наличием одной или нескольких других аберраций FGFR, таких как, например, одна или несколько мутаций FGFR или одна или несколько транслокаций FGFR, такие как те, которые определены в данном документе.

- Применение соединения формулы (I), определенного в данном документе, для получения лекарственного средства, предназначенного для модуляции (например, ингибирования) активности FGFR.

- Применение соединения формулы (I), определенного в данном документе, в изготовлении лекарственного препарата, предназначенного для модуляции клеточного процесса (например, клеточного деления) путем ингибирования активности киназы FGFR.

- Применение соединения формулы (I), определенного в данном документе, для получения лекарственного средства, предназначенного для профилактики или лечения заболевания или состояния, характеризующихся повышающей регуляцией киназы FGFR (например, FGFR1, или FGFR2, или FGFR3, или FGFR4).

- Применение соединения формулы (I), определенного в данном документе, для получения лекарственного средства, предназначенного для профилактики или лечения рака, при этом рак представляет собой рак, характеризующийся повышающей регуляцией киназы FGFR (например, FGFR1, или FGFR2, или FGFR3, или FGFR4).

- Применение соединения формулы (I), определенного в данном документе, для получения лекарственного средства, предназначенного для профилактики или лечения рака у пациента, выбранного из подгруппы населения, обладающей генными аберрациями киназы FGFR3.

- Применение соединения формулы (I), определенного в данном документе, для получения лекарственного средства, предназначенного для профилактики или лечения рака у пациента, которого диагностировали как составляющего часть подгруппы населения, обладающей генетическими аберрациями киназы FGFR3.

- Способ профилактики или лечения заболевания или состояния, характеризующихся повышающей регуляцией киназы FGFR (например, FGFR1, или FGFR2, или FGFR3, или FGFR4), при этом способ включает введение соединения формулы (I), определенного в данном документе.

- Способ облегчения тяжести или снижения частоты возникновения заболевания или состояния, характеризующихся повышающей регуляцией киназы FGFR (например, FGFR1, или FGFR2, или FGFR3, или FGFR4), при этом способ включает введение соединения формулы (I), определенного в данном документе.

- Способ профилактики или лечения (или облегчения тяжести, или снижения частоты возникновения) рака у пациента, страдающего или предположительно страдающего раком, при этом способ предусматривает (i) подвергание пациента диагностическому тесту с определением наличия у пациента генетических аберраций гена FGFR3; и (ii) если у пациента имеется указанный вариант, то после этого введение пациенту соединения формулы (I), определенного в данном документе, обладающего ингибирующей активностью в отношении киназы FGFR3.

- Способ профилактики или лечения (или облегчения тяжести, или снижения частоты возникновения) болезни или расстройства, характеризующихся повышающей регуляцией киназы FGFR (например, FGFR1, или FGFR2, или FGFR3, или FGFR4), при этом способ включает (i) подвергание пациента диагностическому тесту с выявлением маркерной характеристики повышающей регуляции киназы FGFR (например, FGFR1, или FGFR2, или FGFR3, или FGFR4), и (ii) если диагностический тест указывает на повышающую регуляцию киназы FGFR, то после этого введение пациенту соединения формулы (I), определенного в данном документе, обладающего ингибирующей активностью в отношении киназы FGFR.

В одном варианте осуществления заболевание, опосредованное киназами FGFR, представляет собой онкологическое заболевание (например, рак). В одном варианте осуществления заболевание, опосредованное киназами FGFR, представляет собой не связанное с онкологией заболевание (например, любое заболевание, раскрытое в данном документе, за исключением рака). В одном варианте осуществления заболевание, опосредованное киназами FGFR, представляет собой состояние, описанное в данном документе. В одном варианте осуществления заболевание, опосредованное киназами FGFR, представляет собой скелетное состояние, описанное в данном документе. Конкретные аномалии в развитии скелета человека включают аномальную оссификацию швов черепа (краниосиностоз), синдром Аперта (AP), синдром Крузона, синдром Джексона-Вейсса, синдром Бира-Стивенсона со складчатой пахидермией, синдром Пфайффера, ахондроплазию и танатофорную карликовость (также известную как танатофорная дисплазия).

Мутированные киназы

Как отмечается в данном документе выше, мутации киназы, приводящие к ее устойчивости к воздействию лекарственных средств, могут возникать у групп пациентов, подвергавшихся лечению ингибиторами киназы. Мутации происходят частично в областях белка, которые связываются или взаимодействуют с конкретным ингибитором, используемым в терапии. Такие мутации снижают или повышают способность ингибитора связывать и ингибировать соответствующую киназу. Это может происходить в любом из аминокислотных остатков, которые взаимодействуют с ингибитором или которые являются важными для обеспечения связывания указанного ингибитора с мишенью. На ингибитор, который связывает целевую киназу без необходимости взаимодействия с мутированным аминокислотным остатком, по-видимому, не будет влиять мутация, и он будет оставаться эффективным ингибитором фермента.

Исследование образцов от пациентов с раком желудочно-кишечного тракта показало присутствие двух мутаций в FGFR2, Ser167Pro в экзоне IIIa и мутации сайта сплайсинга 940-2A-G в экзоне IIIc. Данные мутации идентичны генеративным активирующим мутациям, которые вызывают синдромы краниосиностоза и были обнаружены в 13% исследованных тканей пациентов с первичным раком желудочно-кишечного тракта. Кроме того, активирующие мутации в FGFR3 были обнаружены у 5% тестируемых образцов от пациентов, и сверхэкспрессия FGFR коррелировала с неблагоприятным прогнозом в данной группе пациентов.

Кроме того, существуют хромосомные транслокации или точечные мутации, обнаруженные в FGFR, что обуславливает состояние с приобретением функции, состояние сверхэкспресии или конститутивно активные биологические состояния.

Таким образом, соединения по настоящему изобретению найдут конкретное применение, связанное с видами рака, при которых экспрессируется мутантная молекулярная мишень, такая как FGFR. Диагностирование опухолей с такими мутациями может быть осуществлено с использованием методик, известных специалисту в данной области техники и описанных в данном документе, таких как RT-PCR и FISH.

Было сделано предположение, что мутации консервативного остатка треонина в сайте связывания ATP FGFR могут быть причиной устойчивости к действию ингибитора. Аминокислота валин 561 была мутирована в метионин в FGFR1, что соответствует ранее описанным мутациям, обнаруженным в Abl (T315) и EGFR (T766), которые, как было показано, вызывают устойчивость к действию селективных ингибиторов. Данные анализа для V561M FGFR1 показали, что эта мутация вызывала устойчивость к действию ингибитора тирозинкиназы в отличие от дикого типа. Другими обнаруженными мутациями являются мутации гена-привратника FGFR3 V555L/V555M, FGFR1 V561M, FGFR2 V564F/V564I/V564M и FGFR4 V550L. Соединения по настоящему изобретению являются специфически активными в отношении мутаций гена-привратника, в частности, в отношении FGFR3 V555L, FGFR3 V555M, FGFR1 V561M и FGFR2 V564I, особенно в отношении FGFR3 V555L и FGFR3 V555M.

Соединения по настоящему изобретению могут быть применимы в лечении взрослой группы населения. Соединения по настоящему изобретению могут быть применимы для лечения детской группы населения.

Способы диагностирования

Перед введением соединения формулы (I) пациент может пройти скрининговое исследование, которое определяет, является ли заболевание или состояние, которым страдает или может страдать пациент, тем заболеванием, которое может быть подвергнуто лечению соединением, обладающим активностью в отношении FGFR, в частности, в отношении FGFR, несущего точковые мутации, в частности, мутации гена-привратника FGFR, такие как, например, FGFR3 V555L, FGFR3 V555M, FGFR1 V561M и FGFR2 V564I, в частности, FGFR3 V555L и FGFR3 V555M. В одном варианте осуществления рак помимо мутаций гена-привратника FGFR, в частности, мутаций гена-привратника FGFR1, FGFR2 или FGFR3, таких как например FGFR3 V555L, FGFR3 V555M, FGFR1 V561M и FGFR2 V564I, в частности FGFR3 V555L и FGFR3 V555M, характеризуется наличием одной или нескольких других аберраций FGFR, такие как, например, одна или несколько мутаций FGFR, или одна или несколько транслокаций FGFR, такие как те, которые определены в данном документе.

Например, можно проанализировать биологический образец, взятый у пациента, с целью определения, является ли состояние или заболевание, такое как рак, которым страдает или может страдать пациент, тем состоянием или заболеванием, которое характеризуется генетической аномалией или аномальной экспрессией белка, что приводит к повышающей регуляции уровней FGFR или его активности, или к сенсибилизации сигнального пути к нормальной активности FGFR, или к повышающей регуляции этих сигнальных путей фактора роста, такой как уровни лиганда фактора роста или активность лиганда фактора роста, или к повышающей регуляции активации биохимического пути после FGFR.

Примеры таких аномалий, которые приводят к активации или сенсибилизации сигнала FGFR, включают потерю или ингибирование апоптозных путей, повышающую регуляцию рецепторов или лигандов или присутствие мутантных вариантов рецепторов или лигандов, например, вариантов PTK. Опухоли с мутантами FGFR1, FGFR2, или FGFR3, или FGFR4 или с повышенной регуляцией, в частности, со сверхэкспрессией FGFR1, или мутантами FGFR2 или FGFR3 с приобретенной функцией, могут быть особенно чувствительны к ингибиторам FGFR.

Например, при ряде состояний были идентифицированы точечные мутации, приводящие к появлению приобретенной функции в FGFR2. В частности, активирующие мутации в FGFR2 были идентифицированы в 10% эндометриальных опухолей.

Кроме того, генетические аберрации рецепторной тирозинкиназы FGFR3, такие как хромосомные транслокации или точечные мутации, приводящие к эктопическим экспрессированным или дерегулированным, конститутивно активным рецепторам FGFR3, были выявлены и связаны с подгруппой множественных миелом, карцином мочевого пузыря и шейки матки. Конкретная мутация T674I рецептора PDGF была идентифицирована у пациентов, подвергавшихся лечению с помощью иматиниба. Кроме того, амплификация гена 8p12-p11.2 была выявлена в ~50% случаев лобулярного рака молочной железы (CLC), и было показано, что это связано с повышенной экспрессией FGFR1. Предварительные исследования с siRNA, направленной против FGFR1, или с низкомолекулярным ингибитором рецептора показали, что клеточные линии, в которых происходит эта амплификация, являются особенно чувствительными к ингибированию этого сигнального пути.

В качестве альтернативы, взятый у пациента биологический образец может быть подвергнут анализу в отношении потери отрицательного регулятора или супрессора FGFR. В данном контексте термин "потеря" охватывает делецию гена, кодирующего регулятор или супрессор, усечение гена (например, путем мутации), усечение продуктов транскрипции гена или инактивацию продукта транскрипции (например, в результате точечной мутации) или секвестрацию с помощью другого продукта гена.

Термин повышающая регуляция включает повышенную экспрессию или сверхэкспрессию, включающую амплификацию гена (т. е. множество копий генов) и повышенную экспрессию в результате транскрипционного эффекта, и гиперактивность и активацию, в том числе активацию в результате мутаций. Таким образом, пациент может быть подвергнут диагностическому тесту с целью обнаружения маркерной характеристики повышающей регуляции FGFR. Термин диагностирование включает скрининг. Под маркером авторы настоящего изобретения понимают генетические маркеры, включая, например, определение состава ДНК с идентификацией мутаций FGFR. Термин маркер также включает маркеры, которые являются характеристиками повышающей регуляции FGFR, включая ферментную активность, уровни фермента, состояние фермента (например, фосфорилированный или нет) и уровни mRNA упомянутых выше белков.

Диагностические тесты и скрининги обычно проводят в отношении биологического образца, выбранного из образцов биопсии опухоли, образцов крови (выделение и обогащение циркулируемых опухолевых клеток), биопсии экскрементов, мокроты, хромосомного анализа, плевральной жидкости, перитонеальной жидкости, буккальных соскобов, биопсии или мочи.

Способы идентификации и анализа мутаций и повышающей регуляции белков известны специалисту в данной области техники. Способы скрининга могут предусматривать без ограничения стандартные способы, такие как полимеразная цепная реакция с обратной транскриптазой (RT-PCR) или гибридизация in-situ, такая как флуоресцентная гибридизация in situ (FISH).

Идентификация индивидуума, имеющего мутацию в FGFR, может означать, что для пациента может быть особенно подходящим лечение с помощью ингибитора FGFR. Предпочтительно перед началом лечения проводить скрининг опухолей на выявление варианта FGFR. Процесс скрининга будет обычно предусматривать прямое секвенирование, анализ олигонуклеотида на микрочипах или специфическое в отношении мутанта антитело. Кроме того, диагностирование опухолей с такими мутациями может быть осуществлено с использованием методик, известных специалисту в данной области техники и описанных в данном документе, таких как RT-PCR и FISH.

Кроме того, мутантные формы, например, FGFR, можно идентифицировать путем прямого секвенирования, например, образцов биопсии опухолей с помощью ПЦР и способов непосредственного секвенирования продуктов ПЦР, описанных в данном документе выше. Для специалиста в данной области техники будет очевидным, что в данном случае могут быть применимы все эти хорошо известные методики выявления сверхэкспрессии, активации или мутаций упомянутых выше белков.

При скрининге с помощью RT-PCR уровень mRNA в опухоли оценивают путем создания cDNA-копии mRNA, а затем амплификации cDNA посредством ПЦР. Способы ПЦР-амплификации, выбор праймеров и условий для амплификации известны специалисту в данной области техники. Манипуляции с нуклеиновой кислотой и ПЦР проводят с помощью стандартных способов, описанных, например, в Ausubel, F.M. et al., eds. (2004) Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons Inc., или Innis, M.A. et al., eds. (1990) PCR Protocols: a guide to methods and applications, Academic Press, San Diego. Реакции и манипуляции, предусмотренные методиками, связанными с нуклеиновыми кислотами, также описываются в Sambrook et al., (2001), 3^rd Ed, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press. В качестве альтернативы, может быть использован коммерчески доступный набор для RT-PCR (например, Roche Molecular Biochemicals) или методика, описанная в патентах Соединенных Штатов Америки №№ 4666828, 4683202, 4801531, 5192659, 5272057, 5882864 и 6218529 и включенная в данный документ посредством ссылки. Примером методики гибридизации in situ для оценки экспрессии mRNA является флуоресцентная гибридизация in situ (FISH) (см. Angerer (1987) Meth. Enzymol., 152: 649).

В общем, гибридизация in situ включает следующие основные стадии: (1) фиксацию анализируемой ткани; (2) обработку образца перед гибридизацией для повышения доступности целевой нуклеиновой кислоты и для снижения неспецифического связывания; (3) гибридизацию смеси нуклеиновых кислот с нуклеиновой кислотой в биологической структуре или ткани; (4) промывку после гибридизации для удаления фрагментов нуклеиновой кислоты, не связанных при гибридизации, и (5) выявление гибридизированных фрагментов нуклеиновой кислоты. Используемые для таких путей применения зонды обычно метят, например, с помощью радиоизотопов или флуоресцентных репортеров. Предпочтительные зонды являются достаточно длинными, например, от приблизительно 50, 100 или 200 нуклеотидов до приблизительно 1000 или больше нуклеотидов, что позволяет осуществлять специфическую гибридизацию с целевой(целевыми) нуклеиновой(нуклеиновыми) кислотой(кислотами) в строгих условиях. Стандартные способы проведения FISH описаны в Ausubel, F.M. et al., eds. (2004) Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons Inc and Fluorescence In Situ Hybridization: Technical Overview by John M. S. Bartlett in Molecular Diagnosis of Cancer, Methods and Protocols, 2nd ed.; ISBN: 1-59259-760-2; March 2004, pps. 077-088; Series: Methods in Molecular Medicine.

Способы анализа экспрессии генов описаны (DePrimo et al. (2003), BMC Cancer, 3:3). В нескольких словах, протокол является следующим: двухнитевую cDNA синтезируют из общей РНК с использованием олигомера (dT)24 для инициирования синтеза первой нити cDNA, затем синтеза второй нити cDNA со случайными гексамерными праймерами. Двухнитевую cDNA используют в качестве матрицы для транскрипции cRNA in vitro с использованием биотинилированных рибонуклеотидов. cRNA химически фрагментируют в соответствии с протоколами, описанными Affymetrix (Santa Clara, Калифорния, США), а затем гибридизируют в течение ночи на матрицах генома человека.

В качестве альтернативы, белковые продукты, экспрессированные из mRNA, могут быть проанализированы путем иммуногистохимического исследования образцов опухолей, твердофазного иммунологического анализа на микротитровальных планшетах, вестерн-блоттинга, 2-мерного электрофореза в SDS-полиакриламидном геле, ELISA, проточной цитометрии и других известных в данной области способов выявления конкретных белков. Способы выявления могут предусматривать применение сайт-специфических антител. Для специалиста в данной области техники будет очевидно, что в данном случае для выявления повышенной регуляции FGFR или выявления вариантов или мутантов FGFR могут применяться все эти хорошо известные методики.

Аномальные уровни белков, таких как FGFR, можно измерять с помощью стандартных ферментных анализов, например, анализов, описанных в данном документе. Активация или сверхэкспрессия может также быть выявлена в образце ткани, например, ткани опухоли, путем измерения активности тирозинкиназы при анализе, таком как от Chemicon International. Представляющая интерес тирозинкиназа может быть иммунопреципитирована из лизата образца, а ее активность измерена.

Альтернативные способы измерения сверхэкспрессии или активации FGFR, включая их изоформы, включают измерение плотности микрососудистой сети. Она может, например, быть измерена с помощью способов, описанных Orre and Rogers (Int J Cancer (1999), 84(2) 101-8).

Следовательно, все эти методики могут также быть использованы для идентификации опухолей, в частности, подходящих для лечения с помощью соединений по настоящему изобретению.

Соединения по настоящему изобретению особенно применимы для лечения пациента с мутированным FGFR. Мутация G697C в FGFR3 наблюдается в 62% случаев плоскоклеточного рака полости рта и вызывает конститутивную активацию активности киназы. Активирующие мутации FGFR3 были также идентифицированы в случаях карциномы мочевого пузыря. Эти мутации были 6 видов с различными степенями распространенности: R248C, S249C, G372C, S373C, Y375C, K652Q. Кроме того, было обнаружено, что полиморфизм Gly388Arg в FGFR4 связан с повышенной частотой возникновения и агрессивностью рака предстательной железы, толстой кишки, легкого, печени (HCC) и молочной железы. Соединения по настоящему изобретению особенно применимы в лечении пациента с транслокацией FGFR3-TACC3.

Поэтому в дополнительном аспекте настоящее изобретение предусматривает применение соединения согласно настоящему изобретению для получения лекарственного средства, предназначенного для лечения или профилактики болезни или расстройства у пациента, которого подвергали скринингу и у которого было обнаружено заболевание или состояние или имеющего риск их возникновения, которые будут восприимчивым к лечению с помощью соединения, обладающего активностью в отношении FGFR.

Конкретные мутации, для обнаружения которых пациента подвергают скринингу, включают мутации G697C, R248C, S249C, G372C, S373C, Y373C, K652Q в FGFR3 и полиморфизм Gly388Arg в FGFR4, в частности, FGFR3 R248C, FGFR3 S249C, FGFR3 G370C или FGFR3 Y373C.

Конкретные мутации, для обнаружения которых пациента подвергают скринингу, включают, в частности, мутации гена-привратника FGFR. Мутации гена-привратника включают FGFR3 V555L/V555M, FGFR1 V561M, FGFR2 V564F/V564I/V564M и FGFR4 V550L. Конкретные мутации, для обнаружения которых пациента подвергают скринингу, включают FGFR3 V555L, FGFR3 V555M, FGFR1 V561M и FGFR2 V564I, в частности, FGFR3 V555L и FGFR3 V555M.

В другом аспекте настоящее изобретение предусматривает соединение по настоящему изобретению для применения в профилактике или лечении рака у пациента, выбранного из подгруппы, обладающей вариантом гена FGFR (например, мутацией G697C в FGFR3 и полиморфизмом Gly388Arg в FGFR4).

Соединения по настоящему изобретению особенно применимы в лечении пациента, у которого имеется слияние или транслокация FGFR, в частности, FGFR3:TACC3 v1; FGFR3:TACC3 v3; FGFR3:TACC3 интрон; FGFR3:BAIAP2L1; FGFR2:AFF3; FGFR2:BICC1; FGFR2:CASP7; FGFR2:CCDC6 и FGFR2:OFD1. Используются следующие сокращения: FGFR (рецептор фактора роста фибробластов); FGFR3:TACC3 (слияние генов, кодирующих FGFR3 и трансформирующий кислотный белок 3, содержащий суперспираль); FGFR3:BAIAP2L1 (слияние генов, кодирующих FGFR3 и белок 1, подобный белку 2, ассоциированному со специфичным для головного мозга ингибитором 1 ангиогенеза); FGFR2:AFF3 (слияние генов, кодирующих FGFR2 и член 3 семейства AF4/FMR2); FGFR2:BICC1 (слияние генов, кодирующих FGFR2 и бикаудальный C-гомолог 1); FGFR2: CASP7 (слияние генов, кодирующих FGFR2 и каспазу 7); FGFR2:CCDC6 (слияние генов, кодирующих FGFR2 и белок 6, содержащий суперспиральный домен); FGFR2:OFD1 (слияние генов, кодирующих FGFR2 и белок 1, ассоциированный с ротопальцелицевым дизостозом).

Фармацевтические композиции и комбинации

С учетом их полезных фармакологических свойств представленные соединения можно составлять в различные фармацевтические формы для целей введения.

В одном варианте осуществления фармацевтическая композиция (например, состав) содержит по меньшей мере одно активное соединение по настоящему изобретению вместе с фармацевтически приемлемым носителем, который может предусматривать вспомогательные средства, вспомогательные вещества, разбавители, наполнители, буферы, стабилизаторы, консерванты, смазывающие средства или другие материалы, хорошо известные специалистам в данной области техники, и, необязательно, другие терапевтические или профилактические средства.

Для получения фармацевтических композиций по настоящему изобретению эффективное количество соединения по настоящему изобретению в качестве активного ингредиента объединяют в однородную смесь с фармацевтически приемлемым носителем, при этом носитель может принимать широкое разнообразие форм в зависимости от формы препарата, необходимого для введения. Фармацевтические композиции могут находиться в любой форме, подходящей для перорального, парентерального, местного, интраназального, офтальмического, ушного, ректального, интравагинального или трансдермального введения. Необходимо, чтобы данные фармацевтические композиции были представлены в единичной лекарственной форме, подходящей, в частности, для введения пероральным, ректальным, чрескожным путем или посредством парентеральной инъекции. Например, при получении композиций в виде лекарственной формы для перорального введения можно использовать любые обычные фармацевтические среды, такие как, например, вода, гликоли, масла, спирты и т. п., в случае жидких препаратов для перорального введения, таких как суспензии, сиропы, настойки и растворы; или твердые носители, такие как виды крахмала, сахара, каолин, смазывающие вещества, связующие вещества, разрыхлители и т. п., в случае порошков, пилюль, капсул и таблеток.

Вследствие простоты их введения таблетки и капсулы представляют собой наиболее преимущественную стандартную лекарственную форму для перорального введения, в случае которой, несомненно, используют твердые фармацевтические носители. В случае композиций для парентерального введения носитель, как правило, по меньшей мере в значительной степени будет содержать стерильную воду, хотя может содержать и другие ингредиенты, например, для улучшения растворимости. Например, можно получать инъекционные растворы, в которых носитель представляет собой физиологический раствор, раствор глюкозы или смесь физиологического раствора и раствора глюкозы. Также можно получать суспензии для инъекций, в случае которых можно использовать соответствующие жидкие носители, суспендирующие средства и т. п. В композициях, подходящих для чрескожного введения, носитель необязательно содержит средство, улучшающее проникновение, и/или подходящее смачивающее средство, необязательно в комбинации с подходящими добавками любой природы в минимальных пропорциях, при этом добавки не оказывают никаких существенных вредных воздействий на кожу. Указанные добавки могут облегчать введение в кожу и/или могут быть полезными для получения требуемых композиций. Данные композиции можно вводить различными путями, например, посредством трансдермального пластыря, путем точечного нанесения или в виде мази. Особенно предпочтительным является составление вышеупомянутых фармацевтических композиций в виде стандартной лекарственной формы для простоты введения и равномерности дозирования. "Стандартная лекарственная форма", как используется в данном документе, относится к физически дискретным единицам, пригодным в качестве стандартных доз, при этом каждая единица содержит предварительно определенное количество активного ингредиента, рассчитанное для получения необходимого терапевтического эффекта, совместно с требуемым фармацевтическим носителем. Примерами таких стандартных лекарственных форм являются таблетки (в том числе делимые таблетки или таблетки, покрытые оболочкой), капсулы, пилюли, пакеты с порошкообразным продуктом, пластинки, растворы или суспензии для инъекций, чайные ложки с верхом, столовые ложки с верхом и т. п., а также их отдельные кратные количества.

Соединение по настоящему изобретению вводят в количестве, достаточном для проявления его противоопухолевой активности или для проявления эффекта ингибирования FGFR.

В одном варианте осуществления соединение по настоящему изобретению или фармацевтическая композиция по настоящему изобретению предназначены для перорального введения.

Специалисты в данной области техники смогут определить эффективное количество на основе результатов испытаний, представленных в данном документе ниже. В целом, предполагается, что терапевтически эффективное количество будет составлять от 0,005 мг/кг до 100 мг/кг массы тела и, в частности, от 0,005 мг/кг до 10 мг/кг массы тела. Может оказаться целесообразным вводить необходимую дозу в виде одной, двух, трех, четырех или более частей дозы через соответствующие интервалы в течение суток. Указанные части дозы можно составлять в виде стандартных лекарственных форм, например, содержащих от 0,5 до 500 мг, в частности, от 1 мг до 500 мг, более конкретно, от 10 мг до 500 мг активного ингредиента на стандартную лекарственную форму.

В зависимости от способа введения фармацевтическая композиция будет предпочтительно содержать от 0,05 до 99% по весу, более предпочтительно от 0,1 до 70% по весу, еще более предпочтительно от 0,1 до 50% по весу соединения по настоящему изобретению и от 1 до 99,95% по весу, более предпочтительно от 30 до 99,9% по весу, еще более предпочтительно от 50 до 99,9% по весу фармацевтически приемлемого носителя, все процентные соотношения представлены в пересчете на общий вес композиции.

Было обнаружено, что некоторые ингибиторы FGFR могут быть использованы в комбинации с другими противораковыми средствами. Например, можно достичь положительного эффекта путем объединения ингибитора, который индуцирует апоптоз, с другим средством, которое действует посредством другого механизма, для регулирования клеточного роста, с воздействием таким образом на две из характерных особенностей развития рака. Примеры таких комбинаций изложены ниже.

В качестве другого аспекта настоящего изобретения предусмотрена комбинация соединения по настоящему изобретению с другим противораковым средством, в особенности для применения в качестве медикамента, более конкретно для применения в лечении рака или родственных заболеваний, в частности состояния или заболевания, опосредованных киназой FGFR.

Для лечения вышеуказанных состояний соединения по настоящему изобретению можно преимущественно применять в комбинации с одним или несколькими другими медицинскими средствами, более конкретно с другими противораковыми средствами или вспомогательными средствами в терапии рака. Примеры противораковых средств или вспомогательных средств (средств для поддерживающей терапии) включают без ограничения:

- координационные соединения платины, например, цисплатин, необязательно в комбинации с амифостином, карбоплатин или оксалиплатин;

- таксановые соединения, например, паклитаксел, частицы паклитаксела, связанные с белком (Abraxane^TM), или доцетаксел;

- ингибиторы топоизомеразы I, такие как соединения на основе камптотецина, например, иринотекан, SN-38, топотекан, топотекан-HCl;

- ингибиторы топоизомеразы II, такие как противоопухолевые производные эпиподофиллотоксинов или подофиллотоксина, например, этопозид, этопозида фосфат или тенипозид;

- противоопухолевые алкалоиды барвинка, например, винбластин, винкристин или винорелбин;

- противоопухолевые производные нуклеозидов, например, 5-фторурацил, лейковорин, гемцитабин, гемцитабин-HCl, капецитабин, кладрибин, флударабин, неларабин;

- алкилирующие средства, такие как азотистый иприт или нитрозомочевина, например, циклофосфамид, хлорамбуцил, кармустин, тиотепа, мефалан (мелфалан), ломустин, алтретамин, бусульфан, дакарбазин, эстрамустин, ифосфамид необязательно в комбинации с месной, пипоброман, прокарбазин, стрептозоцин, телозоломид, урацил;

- противоопухолевые производные антрациклина, например, даунорубицин, доксорубицин, необязательно в комбинации с дексразоксаном, доксил, идарубицин, митоксантрон, эпирубицин, эпирубицин-HCl, валрубицин;

- молекулы, которые целенаправленно воздействуют на рецептор IGF-1, например, пикроподофилин;

- производные тетракарцина, например тетрокарцин A;

- глюкокортикоиды, например преднизон;

- антитела, например, трастузумаб (антитело к HER2), ритуксимаб (антитело к CD20), гемтузумаб, гемтузумаб-озогамицин, цетуксимаб, пертузумаб, бевацизумаб, алемтузумаб, экулизумаб, ибритумомаб тиуксетан, нофетумомаб, панитумумаб, тозитумомаб, CNTO 328;

- антагонисты эстрогеновых рецепторов, или селективные модуляторы эстрогеновых рецепторов, или ингибиторы синтеза эстрогена, например, тамоксифен, фулвестрант, торемифен, дролоксифен, фазлодекс, ралоксифен или летрозол;

- ингибиторы ароматазы, такие как эксеместан, анастрозол, летразол, тестолактон и ворозол;

- способствующие дифференциации средства, такие как ретиноиды, витамин D или ретиноевая кислота, и средства, блокирующие метаболизм ретиноевой кислоты, (RAMBA), например, аккутан;

- ингибиторы ДНК-метилтрансферазы, например, азацитидин или децитабин;

- антифолаты, например преметрексед динатрия;

- антибиотики, например, антиномицин D, блеомицин, митомицин С, дактиномицин, карминомицин, дауномицин, левамизол, пликамицин, митрамицин;

- антиметаболиты, например, клофарабин, аминоптерин, цитозин-арабинозид или метотрексат, азацитидин, цитарабин, флоксуридин, пентостатин, тиогуанин;

- средства, индуцирующие апоптоз, и антиангиогенные средства, такие как ингибиторы Bcl-2, например, YC 137, BH 312, ABT 737, госсипол, HA 14-1, TW 37 или декановая кислота;

- тубулин-связывающие средства, например, комбрестатин, колхицины или нокодазол;

- ингибиторы киназы (например, ингибиторы EGFR (рецептор фактора роста эпителия), MTKI (многоцелевые ингибиторы киназы), ингибиторы mTOR, ингибиторы cmet), например, флавоперидол, иматиниба мезилат, эрлотиниб, гефитиниб, дазатиниб, лапатиниб, лапатиниба дитосилат, сорафениб, сунитиниб, сунитиниба малеат, темсиролимус, 6-{дифтор[6-(1-метил-1H-пиразол-4-ил)[1,2,4]триазоло[4,3-b]пиридазин-3-ил]метил}хинолин или его фармацевтически приемлемая соль, 6-[дифтор(6-пиридин-4-ил[1,2,4]триазоло[4,3-b]пиридазин-3-ил)метил]хинолин или его фармацевтически приемлемая соль;

- ингибиторы фарнезилтрансферазы, например, типифарниб;

- ингибиторы гистондеацетилазы (HDAC), например бутират натрия, субероиланилидгидроксамовая кислота (SAHA), депсипептид (FR 901228), NVP-LAQ824, R306465, JNJ-26481585, трихостатин А, вориностат;

- ингибиторы убиквитин-протеасомного пути, например, PS-341, MLN.41 или бортезомиб;

- йонделис;

- ингибиторы теломеразы, например теломестатин;

- ингибиторы матриксной металлопротеиназы, например, батимастат, маримастат, приностат или метастат;

- рекомбинантные интерлейкины, например, альдеслейкин, денилейкин дифтитокс, интерферон-альфа 2а, интерферон-альфа 2b, пегинтерферон-альфа 2b;

- ингибиторы MAPK;

- ретиноиды, например алитретиноин, бексаротен, третиноин;

- триоксид мышьяка;

- аспарагиназу;

- стероиды, например, дромостанолона пропионат, мегестрола ацетат, нандролон (деканоат, фенпропионат), дексаметазон;

- агонисты или антагонисты гонадотропин-высвобождающего гормона, например, абареликс, гозерелина ацетат, гистрелина ацетат, лейпролида ацетат;

- талидомид, леналидомид;

- меркаптопурин, митотан, памидронат, пегадемазу, пегаспаргазу, расбуриказу;

- миметики BH3, например, ABT-737;

- ингибиторы MEK, например, PD98059, AZD6244, CI-1040;

- аналоги колониестимулирующего фактора, например, филграстим, пэгфилграстим, сарграмостим; эритропоэтин или его аналоги (например, дарбэпоэтин-альфа); интерлейкин-11; опрелвекин; золедронат, золедроновую кислоту; фентанил; бисфосфонат; палифермин;

- стероидный ингибитор цитохрома P450 17-альфа-гидроксилазы/17,20-лиазы (CYP17), например, абиратерон, абиратерона ацетат;

- антитело, которое блокирует взаимодействие между PD-1 и PD-L1.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к комбинации соединения формулы (I), его фармацевтически приемлемой соли или его сольвата, или каких-либо его подгрупп и примеров, и 6-{дифтор[6-(1-метил-1H-пиразол-4-ил)[1,2,4]триазоло[4,3-b]пиридазин-3-ил]метил}хинолина или его фармацевтически приемлемой соли.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к комбинации соединения формулы (I), его фармацевтически приемлемой соли или его сольвата, или каких-либо его подгрупп и примеров, и 6-[дифтор(6-пиридин-4-ил[1,2,4]триазоло[4,3-b]пиридазин-3-ил)метил]хинолина или его фармацевтически приемлемой соли.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей соединение формулы (I), его фармацевтически приемлемую соль или его сольват, или какие-либо его подгруппы и примеры, и 6-{дифтор[6-(1-метил-1H-пиразол-4-ил)[1,2,4]триазоло[4,3-b]пиридазин-3-ил]метил}хинолин или его фармацевтически приемлемую соль.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей соединения формулы (I), его фармацевтически приемлемую соль или его сольват, или какие-либо его подгруппы и примеры, и 6-[дифтор(6-пиридин-4-ил[1,2,4]триазоло[4,3-b]пиридазин-3-ил)метил]хинолин или его фармацевтически приемлемую соль.

Соединения по настоящему изобретению также имеют терапевтические пути применения в повышении чувствительности опухолевых клеток к лучевой терапии и химиотерапии.

Таким образом, соединения по настоящему изобретению можно применять в качестве "радиосенсибилизатора" и/или "хемосенсибилизатора", или их можно назначать в комбинации с другим "радиосенсибилизатором" и/или "хемосенсибилизатором".

Термин "радиосенсибилизатор", используемый в данном документе, определен как молекула, предпочтительно молекула с низкой молекулярной массой, которую вводят животным в терапевтически эффективных количествах для повышения чувствительности клеток к ионизирующему излучению и/или для повышения эффективности лечения заболеваний, которые поддаются лечению с помощью ионизирующего излучения.

Термин "хемосенсибилизатор", используемый в данном документе, определен как молекула, предпочтительно молекула с низкой молекулярной массой, которую вводят животным в терапевтически эффективных количествах для повышения чувствительности клеток к химиотерапии и/или повышения эффективности лечения заболеваний, которые поддаются лечению с помощью химиотерапевтических средств.

В литературе были предложены несколько механизмов способа действия радиосенсибилизаторов, включающих: радиосенсибилизаторы, приводящие к гипоксии клеток (например, соединения на основе 2-нитроимидазола и соединения, включающие бензотриазина диоксид), имитирующие кислород или, в качестве альтернативы, ведущие себя как биовосстанавливающие средства при гипоксии; радиосенсибилизаторы, не приводящие к гипоксии клеток (например, галогенированные пиримидины), могут быть аналогами оснований ДНК и преимущественно включаются в ДНК раковых клеток и, таким образом, способствуют индуцированному облучением разрушению молекул ДНК и/или препятствуют нормальным механизмам репарации ДНК; и различные другие возможные механизмы действия были выдвинуты в качестве гипотезы для радиосенсибилизаторов в лечении заболевания.

Во многих протоколах лечения рака в настоящее время применяют радиосенсибилизаторы совместно с облучением рентгеновскими лучами. Примеры активируемых рентгеновскими лучами радиосенсибилизаторов включают без ограничения следующие: метронидазол, мизонидазол, десметилмизонидазол, пимонидазол, этанидазол, ниморазол, митомицин C, RSU 1069, SR 4233, EO9, RB 6145, никотинамид, 5-бромдезоксиуридин (BUdR), 5-йоддезоксиуридин (IUdR), бромдезоксицитидин, фтордезоксиуридин (FudR), гидроксимочевину, цисплатин и их терапевтически эффективные аналоги и производные.

При фотодинамической терапии (PDT) видов рака применяют видимый свет в качестве радиационного активатора сенсибилизирующего средства. Примеры фотодинамических радиосенсибилизаторов включают без ограничения следующие: производные гематопорфирина, фотофрин, производные бензопорфирина, этиопорфирин олова, феоборбид-a, бактериохлорофилл-a, нафталоцианины, фталоцианины, фталоцианин цинка и их терапевтически эффективные аналоги и производные.

Радиосенсибилизаторы можно вводить совместно с терапевтически эффективным количеством одного или нескольких других соединений, в том числе без ограничения соединений, которые способствуют включению радиосенсибилизаторов в целевые клетки; соединений, которые контролируют поступление терапевтических средств, питательных веществ и/или кислорода к целевым клеткам; химиотерапевтических средств, которые действуют на опухоль с помощью дополнительного облучения или без него; или других терапевтически эффективных соединений для лечения рака или других заболеваний.

Хемосенсибилизаторы можно вводить совместно с терапевтически эффективным количеством одного или нескольких других соединений, в том числе без ограничения соединений, которые обеспечивают включение хемосенсибилизаторов в целевые клетки; соединений, которые контролируют поступление терапевтических средств, питательных веществ и/или кислорода в целевые клетки; химиотерапевтических средств, которые действуют на опухоль, или других терапевтически эффективных соединений для лечения рака или другого заболевания. Было обнаружено, что антагонисты кальция, например верапамил, являются пригодными в комбинации с противоопухолевыми средствами для придания чувствительности к химиотерапии опухолевым клеткам, устойчивым к стандартным химиотерапевтическим средствам, и для усиления эффективности таких соединений в отношении чувствительных к лекарственным средствам злокачественных новообразований.

С учетом их полезных фармакологических свойств компоненты комбинации согласно настоящему изобретению, т. е. одно или несколько других медицинских средств и соединение согласно настоящему изобретению, могут быть составлены в различные фармацевтические формы для целей введения. Компоненты могут быть составлены отдельно в индивидуальные фармацевтические композиции или в единую фармацевтическую композицию, содержащую все компоненты.

Таким образом, настоящее изобретение также относится к фармацевтической композиции, содержащей одно или несколько других медицинских средств и соединение согласно настоящему изобретению вместе с фармацевтически приемлемым носителем.

Настоящее изобретение, кроме того, относится к применению комбинации согласно настоящему изобретению в изготовлении фармацевтической композиции для подавления роста опухолевых клеток.

Настоящее изобретение также относится к продукту, содержащему в качестве первого активного ингредиента соединение согласно настоящему изобретению и в качестве дополнительного активного ингредиента одно или несколько противораковых средств, в виде комбинированного препарата для одновременного, раздельного или последовательного применения в лечении пациентов, страдающих раком.

Одно или несколько других медицинских средств и соединение согласно настоящему изобретению можно вводить одновременно (например, в отдельных или единичных композициях) или последовательно в произвольном порядке. В последнем случае два или более соединений будут вводиться на протяжении периода, а также в количестве и с помощью способа, которые являются достаточными, чтобы гарантировать достижение преимущественного или синергического эффекта. Следует иметь в виду, что предпочтительный способ и порядок введения, и соответствующие величины доз и схемы для каждого компонента комбинации будут зависеть от конкретного другого медицинского средства и соединения по настоящему изобретению, подлежащих введению, их пути введения, конкретной опухоли, подлежащей лечению, и конкретного хозяина, подлежащего лечению. Оптимальный способ и порядок введения, а также величина доз и схема могут быть легко определены специалистами в данной области техники с применением стандартных способов и с учетом информации, изложенной в данном документе.

Весовое соотношение соединения согласно настоящему изобретению и одного или нескольких других противораковых средств, в случае введения в виде комбинации, может быть определено специалистом в данной области техники. Указанное соотношение и точная доза и частота введения зависят от конкретного соединения согласно настоящему изобретению и другого противоракового(противораковых) средства(средств), которые используются, конкретного состояния, подлежащего лечению, тяжести состояния, подлежащего лечению, возраста, веса, пола, диеты, времени введения и общего физического состояния конкретного пациента, способа введения, а также других медикаментов, которые индивидуум может принимать, как хорошо известно специалистам в данной области техники. Кроме того, очевидно, что эффективное суточное количество может быть снижено или увеличено в зависимости от реакции подвергаемого лечению субъекта и/или в зависимости от оценки лечащего врача, назначающего соединения по настоящему изобретению. Конкретное весовое соотношение для соединения формулы (I) по настоящему изобретению и другого противоракового средства может находиться в диапазоне от 1/10 до 10/1, более конкретно от 1/5 до 5/1, еще более конкретно от 1/3 до 3/1.

Координационное соединение платины преимущественно вводят в дозе, составляющей от 1 до 500 мг на квадратный метр (мг/м²) площади поверхности тела, например, от 50 до 400 мг/м², в частности, для цисплатина - в дозе, составляющей приблизительно 75 мг/м², и для карбоплатина - в дозе, составляющей приблизительно 300 мг/м², за курс лечения.

Соединение на основе таксана преимущественно вводят в дозе, составляющей от 50 до 400 мг на квадратный метр (мг/м²) площади поверхности тела, например, от 75 до 250 мг/м², в частности, для паклитаксела - в дозе, составляющей от приблизительно 175 до 250 мг/м², и для доцетаксела - в дозе, составляющей от приблизительно 75 до 150 мг/м², за курс лечения.

Соединение на основе камптотецина преимущественно вводят в дозе, составляющей от 0,1 до

400 мг на квадратный метр (мг/м²) площади поверхности тела, например от 1 до 300 мг/м², в частности для иринотекана - в дозе, составляющей от приблизительно 100 до 350 мг/м², и для топотекана - в дозе, составляющей от приблизительно 1 до 2 мг/м², за курс лечения.

Противоопухолевое производное подофиллотоксина преимущественно вводят в дозе, составляющей от 30 до 300 мг на квадратный метр (мг/м²) площади поверхности тела, например, от 50 до 250 мг/м², в частности, для этопозида - в дозе, составляющей от приблизительно 35 до 100 мг/м², и для тенипозида - в дозе, составляющей от приблизительно 50 до 250 мг/м², за курс лечения.

Противоопухолевый алкалоид барвинка преимущественно вводят в дозе, составляющей от 2 до 30 мг на квадратный метр (мг/м²) площади поверхности тела, в частности для винбластина - в дозе, составляющей от приблизительно 3 до 12 мг/м², для винкристина - в дозе, составляющей от приблизительно 1 до 2 мг/м², и для винорелбина - в дозе, составляющей от приблизительно 10 до 30 мг/м², за курс лечения.

Противоопухолевое нуклеозидное производное преимущественно вводят в дозе от 200 до 2500 мг на квадратный метр (мг/м²) площади поверхности тела, например, от 700 до 1500 мг/м², в частности для 5-FU - в дозе, составляющей от приблизительно 200 до 500 мг/м², для гемцитабина - в дозе, составляющей от приблизительно 800 до 1200 мг/м², и для капецитабина - в дозе, составляющей от приблизительно 1000 до 2500 мг/м², за курс лечения.

Алкилирующие средства, такие как азотистый иприт или нитрозомочевина, преимущественно вводят в дозе, составляющей от 100 до 500 мг на квадратный метр (мг/м²) площади поверхности тела, например, от 120 до 200 мг/м², в частности, для циклофосфамида - в дозе, составляющей от приблизительно 100 до 500 мг/м², для хлорамбуцила - в дозе, составляющей от приблизительно 0,1 до 0,2 мг/кг, для кармустина - в дозе, составляющей от приблизительно 150 до 200 мг/м², и для ломустина - в дозе, составляющей от приблизительно 100 до 150 мг/м², за курс лечения.

Противоопухолевое производное антрациклина преимущественно вводят в дозе от 10 до 75 мг на квадратный метр (мг/м²) площади поверхности тела, например, от 15 до 60 мг/м², в частности, для доксорубицина - в дозе, составляющей от приблизительно 40 до 75 мг/м², для даунорубицина - в дозе, составляющей от приблизительно 25 до 45 мг/м², и для идарубицина - в дозе, составляющей от приблизительно 10 до 15 мг/м², за курс лечения.

Антиэстрогенное средство преимущественно вводят в дозе, составляющей от приблизительно 1 до 100 мг в сутки, в зависимости от конкретного средства и состояния, подлежащего лечению. Тамоксифен преимущественно вводят перорально в дозе, составляющей от 5 до 50 мг, предпочтительно от 10 до 20 мг два раза в сутки, продолжая терапию в течение времени, достаточного для достижения и поддержания терапевтического эффекта. Торемифен преимущественно вводят перорально в дозе, составляющей приблизительно 60 мг, один раз в сутки, продолжая терапию в течение времени, достаточного для достижения и поддержания терапевтического эффекта. Анастрозол преимущественно вводят перорально в дозе, составляющей приблизительно 1 мг, один раз в сутки. Дролоксифен преимущественно вводят перорально в дозе, составляющей от приблизительно 20 до 100 мг, один раз в сутки. Ралоксифен преимущественно вводят перорально в дозе, составляющей приблизительно 60 мг, один раз в сутки. Эксеместан преимущественно вводят перорально в дозе, составляющей приблизительно 25 мг, один раз в сутки.

Антитела преимущественно вводят в дозе, составляющей приблизительно 1-5 мг на квадратный метр (мг/м²) площади поверхности тела, или, как известно из уровня техники, в другой дозе. Трастузумаб преимущественно вводят в дозе от 1 до 5 мг на квадратный метр (мг/м²) площади поверхности тела, в частности, от 2 до 4 мг/м², за курс лечения.

Такие дозы можно вводить, например, один раз, два раза или больше за курс лечения, который можно повторять, например, каждые 7, 14, 21 или 28 дней.

Соединения формулы (I), их фармацевтически приемлемые соли присоединения, в частности, фармацевтически приемлемые соли присоединения кислоты, и стереоизомерные формы могут обладать ценными диагностическими свойствами, в том плане, что они могут быть использованы для выявления или идентификации образования комплекса между меченым соединением и другими молекулами, пептидами, белками, ферментами или рецепторами.

В способах выявления или идентификации можно применять соединения, которые являются мечеными с помощью средств для мечения, такими как радиоизотопы, ферменты, флуоресцентные вещества, люминесцентные вещества и т. д. Примеры радиоизотопов включают ¹²⁵I, ¹³¹I, ³H и ¹⁴C. Ферменты обычно делают детектируемыми путем конъюгации с соответствующим субстратом, который, в свою очередь, катализирует детектируемую реакцию. Примеры таковых включают, например, бета-галактозидазу, бета-глюкозидазу, щелочную фосфатазу, пероксидазу и малатдегидрогеназу, предпочтительно пероксидазу хрена. Люминесцентные вещества включают, например, люминол, производные люминола, люциферин, экворин и люциферазу.

Биологические образцы могут быть определены как ткань организма или жидкости организма. Примерами жидкостей организма являются спинномозговая жидкость, кровь, плазма крови, сыворотка крови, моча, мокрота, слюна и т. п.

Экспериментальная часть

Несколько способов получения соединений по настоящему изобретению проиллюстрировано в следующих примерах. Если не указано иное, то все исходные вещества получали от коммерческих поставщиков и применяли без дополнительной очистки.

Если стереоцентр обозначается "RS", то это означает, что получали смесь стереоизомеров с указанным центром, если не указано иное. Стереохимическая конфигурация стереоцентра в некоторых соединениях обозначена "R" или "S" и/или сплошной клиновидной или пунктирной клиновидной связью, указывая на известную абсолютную стереоконфигурацию. Для некоторых соединений стереохимическая конфигурация указанного стереоцентра обозначена как "R*" или "S*" со связью, обозначенной сплошной линией, или со сплошной клиновидной или пунктирной клиновидной связью, указывая на то, что абсолютная стереохимия стереоцентра является неопределенной, несмотря на то, что она является абсолютной. Таким образом, стереоцентр, обозначенный как S*, означает, что это абсолютный стереоцентр, однако не определено, является ли он S или R.

Далее в данном документе представлены термины: "к. т." или "к. т" означает комнатную температуру; "TFA" означает трифторуксусную кислоту, "FA" означает муравьиную кислоту, "TfOH" означает трифторметансульфоновую кислоту, "DIPEA" означает этилдиизопропиламин или N-этил-N-изопропилпропан-2-амин или N, N-диизопропилэтиламин, "R_T" или "R_t" означает время удерживания, "18-краун-6" означает 1,4,7,10,13,16-гексаоксациклооктадекан, "SFC" означает хроматографию со сверхкритической подвижной фазой, "ACN" означает ацетонитрил, "DEA" означает диэтиламин, "IPA" означает изопропиловый спирт, "DIBAL-H" означает гидрид диизопропилалюминия, "PMB" означает 4-метоксибензил, "EtOAc" означает этилацетат, "DMF" означает N, N-диметилформамид, "DCM" означает дихлорметан, "DMAc" означает N, N-диметилацетамид, "THF" означает тетрагидрофуран, "Bn" означает бензил, "т. пл." или "т. пл." означает точку плавления, "HPLC" означает высокоэффективную жидкостную хроматографию, "TLC" означает тонкослойную хроматографию, "LC-MS" означает жидкостную хроматографию-масс-спектрометрию, "ee" означает энантиомерный избыток.

Пример 1

Получение соединения 1

a) Получение промежуточного соединения 1

4-(3,5-Дифтор-4-нитрофенил)морфолин

Промежуточное соединение 1 синтезировали, как описано в Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters, 2012, vol. 22, #18, 5876-5884.

Общая процедура A: ¹H ЯМР (400 МГц, ХЛОРОФОРМ-d)Varian) δ=6,43-6,39 (m, 1H), 6,39-6,34 (m, 1H), 3,93-3,74 (m, 4H), 3,41-3,22 (m, 4H)

b) Получение промежуточного соединения 2 N -бензил-3-фтор-5-морфолино-2-нитроанилин

К раствору промежуточного соединения 1 (4-(3,5-дифтор-4-нитрофенил)морфолина) (5,00 г, 20,5 ммоль) и N-этил-N-изопропилпропан-2-амина (7,94 г, 61,4 ммоль) в ацетонитриле (150 мл) по каплям добавляли фенилметанамин (2,19 г, 20,5 ммоль) при 20°C. Реакционную смесь нагревали до 70°C в течение 12 часов. Затем смесь концентрировали при пониженном давлении для удаления большей части растворителя и полученное оранжевое масло растворяли в этилацетате (1 л). Смесь промывали водой (200 мл x 3) и солевым раствором (300 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали с получением неочищенного продукта, который очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (элюирование смесью петролейный эфир:этилацетат, от 1:0 до 1:1) с получением промежуточного соединения 2 (4,80 г, выход 70,8%) в виде шафранно-желтых твердых веществ.

Общая процедура A:¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d ⁶) (Varian) 8,58-8,47 (m, 1H), 7,44-7,32 (m, 4H), 7,31-7,22 (m, 1H), 6,38-6,26 (m, 1H), 5,80 (d, J=1,5 Гц, 1H), 4,54 (d, J=5,7 Гц, 2H), 3,67-3,57 (m, 4H), 3,30-3,22 (m, 4H).

c) Получение промежуточного соединения 3

3-Фтор-5-морфолинобензол-1,2-диамин

Влажный палладий на активированном угле (642 мг, 10% на активированном углероде) добавляли к раствору, состоящему из промежуточного соединения 2 (N-бензил-3-фтор-5-морфолино-2-нитроанилина) (2,00 г, 6,04 ммоль) и метанола (60 мл), в круглодонной колбе объемом 250 мл. Суспензию дегазировали под вакуумом и продували водородом, затем перемешивали при 50°C в атмосфере водорода (15 фунтов/кв. дюйм) в течение 2 часов. Смесь фильтровали и фильтрат выпаривали под вакуумом с получением промежуточного соединения 3 (1,10 г, чистота 75,5%, выход 65,1%) в виде черных твердых веществ.

LC-MS (ESI) (общая процедура B, способ 6): R_T=1,26 минуты, масса рассч. для C₁₀H₁₄FN₃O 211,11, масса/заряд найденное значение 212,2 [M+H]⁺.

d) Получение промежуточного соединения 4

Метил-4-амино-1-метил-1H-пиразол-3-карбоксилат

Промежуточное соединение 4 синтезировали, как описано в ACS Medicinal Chemistry Letters, 2013, vol. 4, #10, 979-984.

e) Получение промежуточного соединения 5

Метил-4-((4-метоксибензил)амино)-1-метил-1 H -пиразол-3-карбоксилат

К раствору промежуточного соединения 4 (метил-4-амино-1-метил-1H-пиразол-3-карбоксилата) (7,50 г, 48,3 ммоль) в этилацетате (150 мл) добавляли 4-метоксибензальдегид (7,90 г, 58,0 ммоль) и трифторуксусную кислоту (7,2 мл, 96,7 ммоль). К смеси порциями добавляли боргидрид натрия (1,83 г, 48,3 ммоль) при поддержании температуры на уровне ниже 35°C. После добавления смесь перемешивали при 25°C в течение 30 минут. Реакционную смесь гасили водой (100 мл) и перемешивали при 25°C в течение 1 часа. Затем смесь разделяли и водный слой экстрагировали этилацетатом (50 мл x 3). Объединенные органические слои промывали солевым раствором (100 мл), высушивали над безводным Na₂SO₄ и фильтровали. Фильтрат концентрировали с получением неочищенного продукта, который очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (элюирование смесью петролейный эфир:этилацетат от 1: 0 до 5: 4) с получением промежуточного соединения 5 (7,92 г, чистота 73,9%, выход 73,2%) в виде белых твердых веществ.

LC-MS (ESI) (общая процедура C, способ 9): R_T=0,663 минуты, масса рассч. для C₁₄H₁₇N₃O₃ 275,13, масса/заряд найденное значение 275,9 [M+H]⁺.

f) Получение промежуточного соединения 6

Метил-7-гидрокси-4-(4-метоксибензил)-2-метил-5-оксо-4,5-дигидро-2 H -пиразоло[4,3- b ]пиридин-6-карбоксилат

К раствору промежуточного соединения 5 (метил-4-((4-метоксибензил)амино)-1-метил-1H-пиразол-3-карбоксилата) (13,2 г, 47,9 ммоль) в N, N-диметилформамиде (300 мл) порциями добавляли гидрид натрия (2,68 г, 67,1 ммоль). Смесь перемешивали при 20°C в течение 10 минут и охлаждали до 0°C. К смеси по каплям добавляли метилмалонилхлорид (6,54 г, 47,9 ммоль) и смесь дополнительно перемешивали при 20°C в течение 15 минут. К реакционной смеси добавляли метоксид натрия (5,18 г, 95,9 ммоль) и смесь нагревали при 110°C в течение 2 часов. Реакционную смесь концентрировали с получением остатка, который растворяли в воде (200 мл) и фильтровали. Фильтрат экстрагировали трет-бутилметиловым эфиром (100 мл). К водному слою добавляли концентрированную хлористоводородную кислоту для доведения pH до 3-4 с выпадением в осадок белых твердых веществ. Собранный осадок растворяли в дихлорметане (200 мл). Полученный органический раствор промывали солевым раствором (300 мл), высушивали над безводным Na₂SO₄ и фильтровали. Фильтрат концентрировали с получением промежуточного соединения 6 (10,0 г, неочищенное) в виде желтого масла, которое применяли непосредственно на следующей стадии.

g) Получение промежуточного соединения 7

Метил-7-хлор-4-(4-метоксибензил)-2-метил-5-оксо-4,5-дигидро-2 H -пиразоло[4,3- b ]пиридин-6-карбоксилат

К раствору промежуточного соединения 6 (метил-7-гидрокси-4-(4-метоксибензил)-2-метил-5-оксо-4,5-дигидро-2H-пиразоло[4,3-b]пиридин-6-карбоксилата) (10,0 г, 29,1 ммоль) в дихлорметане (200 мл) добавляли оксалилхлорид (4,9 мл, 58,2 ммоль) и N, N-диметилформамид (10 капель). Смесь перемешивали при 25°C в течение 16 часов. Затем смесь концентрировали с получением остатка, который растворяли в дихлорметане (200 мл). Полученный раствор промывали водой (100 мл x 2), солевым раствором (100 мл), высушивали над безводным Na₂SO₄ и фильтровали. Фильтрат концентрировали с получением остатка. Остаток очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (элюирование смесью петролейный эфир:этилацетат от 1: 0 до 5: 4) с получением промежуточного соединения 7 (10,0 г, выход 94,9%) в виде желтых твердых веществ.

Общая процедура A: ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d ⁶) (Varian) δ 8,22 (s, 1H), 7,29 (d, J=8,6 Гц, 2H), 6,88 (d, J=8,6 Гц, 2H), 5,06 (s, 2H), 4,07-4,02 (m, 3H), 3,87 (s, 3H), 3,70 (s, 3H).

h) Получение промежуточного соединения 8

7-Хлор-4-(4-метоксибензил)-2-метил-5-оксо-4,5-дигидро-2 H -пиразоло[4,3- b ]пиридин-6-карбальдегид

К раствору промежуточного соединения 7 (метил-7-хлор-4-(4-метоксибензил)-2-метил-5-оксо-4,5-дигидро-2H-пиразоло[4,3-b]пиридин-6-карбоксилата) (7,00 г, 19,3 ммоль) в тетрагидрофуране (200 мл) по каплям добавляли гидрид диизобутилалюминия в толуоле (38,7 мл, 1 M в толуоле, 38,7 ммоль) при -78°C. Смесь перемешивали при -78°C в течение 1 часа. Реакцию гасили насыщенным водным раствором хлорида аммония (50 мл) при -78°C и позволяли повышать температуру до 25°C. Смесь перемешивали в течение 1 часа. Смесь добавляли к 200 мл CHCl₃ и фильтровали. Осадок на фильтре промывали с помощью 200 мл CHCl₃ и фильтровали 3 раза. Объединенные органические слои высушивали над безводным Na₂SO₄ и фильтровали. Фильтрат концентрировали с получением остатка. Добавляли 30 мл трет-бутилметилового эфира и перемешивали при 25°C в течение 30 минут. Осадок фильтровали с получением промежуточного соединения 8 (5,00 г, выход 73,2%) в виде желтых твердых веществ.

LC-MS (ESI) (общая процедура C, способ 9): R_T=0,69 минуты, масса рассч. для C₁₆H₁₄ClN₃O₃ 331,07, масса/заряд найденное значение 331,9 [M+H]⁺.

i) Получение промежуточного соединения 9 :

7-Хлор-6-(4-фтор-6-морфолино-1 H -бензо[ d ]имидазол-2-ил)-4-(4-метоксибензил)-2-метил-2 H -пиразоло[4,3- b ]пиридин-5(4 H )-он

Раствор промежуточного соединения 8 (7-хлор-4-(4-метоксибензил)-2-метил-5-оксо-4,5-дигидро-2H-пиразоло[4,3-b]пиридин-6-карбальдегида) (400 мг, 1,21 ммоль), промежуточного соединения 3 (3-фтор-5-морфолинобензол-1,2-диамина) (255 мг, 1,21 ммоль) и трихлорида железа (391 мг, 2,41 ммоль) в 1,4-диоксане (15 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. Смесь фильтровали и фильтрат экстрагировали дихлорметаном 3 раза (всего 300 мл). Объединенный органический слой промывали насыщенным раствором бикарбоната натрия (200 мл) и водой (300 мл), высушивали над безводным Na₂SO₄ и фильтровали. Фильтрат выпаривали под вакуумом с получением промежуточного соединения 9 (360 мг, выход 36,8%, чистота 64,5%) в виде коричневых твердых веществ.

LC-MS (ESI) (общая процедура C, способ 9): R_T=0,77 минуты, масса рассч. для C₂₆H₂₄ClFN₆O₃ 522,16, масса/заряд найденное значение 523,1 [M+H]⁺.

j) Получение промежуточного соединения 10

7-Хлор-6-(4-фтор-6-морфолино-1 H -бензо[ d ]имидазол-2-ил)-2-метил-2 H -пиразоло[4,3- b ]пиридин-5(4 H )-он

К раствору промежуточного соединения 9 (7-хлор-6-(4-фтор-6-морфолино-1H-бензо[d]имидазол-2-ил)-4-(4-метоксибензил)-2-метил-2H-пиразоло[4,3-b]пиридин-5(4H)-она) (350 мг, 0,432 ммоль) в трифторуксусной кислоте (6 мл) добавляли трифторметансульфоновую кислоту (2 мл). Реакционную смесь перемешивали при 20°C в течение 1 часа. Затем смесь выпаривали для удаления большей части трифторуксусной кислоты. Остаток растворяли в дихлорметане (100 мл) и смесь подщелачивали насыщенным раствором бикарбоната натрия до pH > 7. Смесь разделяли и органический слой промывали солевым раствором (50 мл), высушивали над безводным Na₂SO₄ и фильтровали. Фильтрат выпаривали под вакуумом с получением промежуточного соединения 10 (160 мг, неочищенное) в виде коричневых твердых веществ, которое применяли непосредственно для следующей стадии.

k) Получение соединения 1

( S )-6-(4-Фтор-6-морфолино-1 H -бензо[ d ]имидазол-2-ил)-2-метил-7-((1-(пиримидин-2-ил)этил)амино)-2 H -пиразоло[4,3- b ]пиридин-5(4 H )-он

Раствор промежуточного соединения 10 (7-хлор-6-(4-фтор-6-морфолино-1H-бензо[d]имидазол-2-ил)-2-метил-2H-пиразоло[4,3-b]пиридин-5(4H)-она) (150 мг, 0,372 ммоль), промежуточного соединения 11 ((S)-1-(пиримидин-2-ил)этанамина гидрохлорида) (71,3 мг, 0,447 ммоль) и N-этил-N-изопропилпропан-2-амина (241 мг, 1,86 ммоль) в этаноле (5 мл) перемешивали при 85°C в течение 1 часа. Смесь концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного продукта, который очищали с помощью преп. HPLC (колонка: Phenomenex Gemini C18 250*50, 10 мкм, подвижная фаза A: вода (0,225% FA), подвижная фаза B: ацетонитрил, скорость потока: 22 мл/мин., при условии градиента от 28% B до 58%). Чистые фракции собирали и растворитель выпаривали под вакуумом, а затем лиофилизировали с получением соединения, которое дополнительно отделяли с помощью хроматографии со сверхкритической подвижной фазой (условие разделения: колонка AD (250 мм*30 мм, 5 мкм); подвижная фаза: A: сверхкритический CO₂, B: 0,1% NH₃H₂O MeOH, A:B =50: 50 при 55 мл/мин.; температура колонки: 38°C; давление в сопле: 100 бар; температура сопла: 60°C; температура испарителя: 20°C; температура триммера: 25°C; длина волны: 220 нм). Чистую фракцию собирали и растворитель выпаривали под вакуумом. Остаток ресуспендировали в воде (10 мл) и полученную смесь лиофилизировали с получением соединения 1 (15,5 мг, чистота 98,9%, выход 8,41%) в виде коричневого порошка.

LC-MS (ESI) (общая процедура A, способ 2): R_T=4,35 минуты, масса рассч. для C₂₄H₂₄FN₉O₂ 489,20, масса/заряд найденное значение 490,0 [M+H]⁺.

Общая процедура A: ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d ⁶) (Varian) 13,26 (d, J=2,0 Гц, 0,1H), 13,00 (d, J=2,0 Гц, 0,9H), 12,53 (d, J=7,9 Гц, 0,9H), 12,43 (d, J=7,9 Гц, 0,1H), 11,05 (s, 0,1H), 10,90 (s, 0,9H), 8,86 (d, J=4,9 Гц, 0,1H), 8,81 (d, J=4,9 Гц, 1,9H), 7,71 (s, 0,1H), 7,67 (s, 0,9H), 7,41 (t, J=4,9 Гц, 1H), 7,04 (d, J=2,0 Гц, 1H), 6,75 (dd, J=1,9, 13,8 Гц, 1H), 6,41 (квинтет, J=7,1 Гц, 1H), 3,99-3,94 (m, 3H), 3,80-3,73 (m, 4H), 3,16-3,07 (m, 4H), 1,75-1,67 (m, 3H).

SFC (способ 14): R_T=2,63 мин., площадь пика: 100%.

Пример 2

Получение соединения 2

a) Получение промежуточного соединения 12

4-Амино-2-метил-5-нитробензойная кислота

Промежуточное соединение 12 синтезировали, как описано в WO201199832A2.

Общая процедура A:¹HЯМР (400 МГц, DMSO-d ⁶) (Varian) δ=8,54 (s, 1H), 7,73 (br. s., 2H), 6,79 (s, 1H), 2,42 (s, 3H)

b) Получение промежуточного соединения 13

(4-Амино-2-метил-5-нитрофенил)(пирролидин-1-ил)метанон

1-(3-Диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимида гидрохлорид (EDCI) (835 мг, 4,36 ммоль) добавляли к раствору промежуточного соединения 12 (4-амино-2-метил-5-нитробензойной кислоты) (600 мг, чистота 95%, 2,91 ммоль), пирролидина (207 мг, 2,91 ммоль), N-этил-N-изопропилпропан-2-амина (1,13 г, 8,74 ммоль) и 1-гидроксибензотриазола (HOBT) (588 мг, 4,35 ммоль) в безводном N, N-диметилформамиде (6 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре (к. т.) в течение 8 часов. Реакционную смесь осторожно выливали в этилацетат (50 мл) и воду (40 мл). Затем органический слой отделяли. Водную фазу промывали этилацетатом (40 мл x 3). Объединенные органические слои высушивали над безводным Na₂SO₄ и фильтровали. Фильтрат концентрировали до сухого состояния при пониженном давлении с получением неочищенного продукта, который очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (смесь петролейный эфир:этилацетат от 1: 0 до 0:1) с получением промежуточного соединения 13 (700 мг, чистота 95%, выход 91,8%) в виде желтых твердых веществ.

Общая процедура A: ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d ⁶) (Varian) δ=7,77 (s, 1H), 7,47 (br. s., 2H), 6,81 (s, 1H), 3,39 (t, J=6,8 Гц, 2H), 3,13 (t, J=6,5 Гц, 2H), 2,13 (s, 3H), 1,87-1,69 (m, 4H)

c) Получение промежуточного соединения 14

(4,5-Диамино-2-метилфенил)(пирролидин-1-ил)метанон

К раствору промежуточного соединения 13 ((4-амино-2-метил-5-нитрофенил)(пирролидин-1-ил)метанона) (500 мг, чистота 95%, 1,91 ммоль) в 1,4-диоксане (10 мл) добавляли никель Ренея (200 мг) в атмосфере аргона. Суспензию дегазировали под вакуумом и продували аргоном три раза, а затем продували водородом три раза. Смесь перемешивали в атмосфере водорода (30 фунтов/кв. дюйм) при 25°C в течение 24 часов. Смесь фильтровали. Затем фильтрат применяли на следующей стадии без дополнительной обработки.

LC-MS (ESI) (общая процедура B, способ 6): R_T=0,71 минуты, масса рассч. для C₁₂H₁₇N₃O 219,14, масса/заряд найденное значение 220,2[M+H]⁺.

d) Получение промежуточного соединения 15

7-Хлор-4-(4-метоксибензил)-2-метил-6-(5-метил-6-(пирролидин-1-карбонил)-1 H -бензо[ d ]имидазол-2-ил)-2 H -пиразоло[4,3- b ]пиридин-5(4 H )-он

Якорь магнитной мешалки, промежуточное соединение 8 (7-хлор-4-(4-метоксибензил)-2-метил-5-оксо-4,5-дигидро-2H-пиразоло[4,3-b]пиридин-6-карбальдегид) (650 мг, чистота 93,1%, 1,82 ммоль) и безводный 1,4-диоксан (5 мл) помещали в круглодонную колбу объемом 100 мл. Хлорид железа (III) (592 мг, 3,65 ммоль) добавляли к смеси перед перемешиванием смеси при комнатной температуре в течение 5 минут. Промежуточное соединение 14 ((4,5-диамино-2-метилфенил)(пирролидин-1-ил)метанон) (фильтрат) добавляли по каплям к смеси. После перемешивания при комнатной температуре в течение 20 минут реакционную смесь разбавляли водой (30 мл) и обрабатывали твердым бикарбонатом натрия до pH=9. Полученную смесь экстрагировали дихлорметаном (30 мл). Органический экстракт промывали солевым раствором (20 мл x 3), высушивали над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали до сухого состояния при пониженном давлении с получением неочищенного продукта, который очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (смесь этилацетат:тетрагидрофуран от 1: 0 до 1: 1) с получением промежуточного соединения 15 (677 мг, чистота 87,9% , выход 61,4%) в виде коричневых твердых веществ.

LC-MS (ESI) (общая процедура C, способ 8): R_T=2,22 минуты, масса рассч. для C₂₈H₂₇ClN₆O₃ 530,18, масса/заряд найденное значение 531,1[M+H]⁺.

e) Получение промежуточного соединения 16

7-Хлор-2-метил-6-(5-метил-6-(пирролидин-1-карбонил)-1 H -бензо[ d ]имидазол-2-ил)-2 H -пиразоло[4,3- b ]пиридин-5(4 H )-он

Якорь магнитной мешалки, промежуточное соединение 15 (7-хлор-4-(4-метоксибензил)-2-метил-6-(5-метил-6-(пирролидин-1-карбонил)-1H-бензо[d]имидазол-2-ил)-2H-пиразоло[4,3-b]пиридин-5(4H)-он) (677 мг, чистота 87,9%, 1,12 ммоль) и 2,2,2-трифторуксусную кислоту (10 мл) помещали в круглодонную колбу объемом 100 мл. Затем к смеси добавляли трифторметансульфоновую кислоту (505 мг, 3,37 ммоль). Смесь в реакционном сосуде перемешивали при 80°C в течение 2 часов. Снова к смеси добавляли трифторметансульфоновую кислоту (505 мг, 3,37 ммоль). И смесь перемешивали в течение 1 часа. Смесь концентрировали до сухого состояния при пониженном давлении перед разбавлением водой (30 мл) и обработкой твердым бикарбонатом натрия до pH=9. Полученную смесь экстрагировали дихлорметаном (30 мл x 3). Объединенные органические экстракты высушивали над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали до сухого состояния при пониженном давлении с получением промежуточного соединения 16. Затем промежуточное соединение 16 растирали в порошок с трет-бутилметиловым эфиром (15 мл) с получением промежуточного соединения 16 (400 мг, чистота 97,9%, выход 85,1%) в виде желтых твердых веществ.

LC-MS (ESI) (общая процедура C, способ 9): R_T=0,53 минуты, масса рассч. для C₂₀H₁₉ClN₆O₂410,13, масса/заряд найденное значение 411,0 [M+H]⁺.

f) Получение соединения 2

( S )-2-метил-6-(5-метил-6-(пирролидин-1-карбонил)-1 H -бензо[ d ]имидазол-2-ил)-7-((1-(пиримидин-2-ил)этил)амино)-2 H -пиразоло[4,3- b ]пиридин-5(4 H )-он

Якорь магнитной мешалки, промежуточное соединение 16 (7-хлор-2-метил-6-(5-метил-6-(пирролидин-1-карбонил)-1H-бензо[d]имидазол-2-ил)-2H-пиразоло[4,3-b]пиридин-5(4H)-он) (400 мг, чистота 97,9%, 0,953 ммоль), промежуточное соединение 11 ((S)-1-(пиримидин-2-ил)этанамина гидрохлорид) (152 мг, 0,952 ммоль) и N-этил-N-изопропилпропан-2-амин (615 мг, 4,76 ммоль) в дихлорметане (10 мл) помещали в круглодонную колбу объемом 25 мл. Полученную смесь перемешивали при 40°C в течение 12 часов. Полученную смесь выливали в дихлорметан (20 мл) и промывали водой (10 мл x 3). Отделенный органический слой высушивали над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали до сухого состояния при пониженном давлении с получением неочищенного продукта, который очищали с помощью преп. HPLC (колонка: Phenomenex Gemini C18 250×50, 10 мкм, подвижная фаза A: вода (0,225% FA), подвижная фаза B: ацетонитрил, при условии градиента от 22% B до 52%, время градиентного элюирования: 11,2 мин., скорость потока: 22 мл/мин.). Чистые фракции собирали и растворитель выпаривали под вакуумом, а затем лиофилизировали с получением желтого порошка. Продукт дополнительно очищали посредством разделения с помощью хроматографии со сверхкритической подвижной фазой (условие разделения: Chiralpak AS-H (150 мм x 4,6 мм, 5 мкм); подвижная фаза: A: сверхкритический CO₂, B: этанол (0,05% DEA); градиент: удерживание 5% в течение 0,5 минут, затем от 5% до 40% B за 3,5 минуты и удерживание 40% B в течение 2,5 минут, затем 5% B в течение 1,5 минут; скорость потока: 3 мл/мин.; температура колонки: 40°C; давление в сопле: 100 бар; температура сопла: 60°C; температура испарителя: 20°C; температура триммера: 25°C; длина волны: 220 нм). Фракцию собирали и растворитель выпаривали под вакуумом, а затем лиофилизировали с получением соединения 2 (200 мг, чистота 98,8%, выход 41,6%) в виде бледно-желтого порошка.

LC-MS (ESI) (общая процедура A, способ 1): масса рассч. для C₂₆H₂₇N₉O₂497,20, масса/заряд найденное значение 498,1[M+H]⁺.

Общая процедура A: ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d ⁶) (Varian) δ=13,01 (d, J=7,3 Гц, 1H), 12,75 (d, J=8,2 Гц, 0,5H), 12,67 (d, J=8,2 Гц, 0,5H), 10,91 (s, 1H), 8,89-8,84 (m, 2H), 7,67 (s, 1H), 7,53-7,38 (m, 3H), 6,53-6,42 (m, 1H), 3,99-3,96 (m, 3H), 3,54-3,47 (m, 2H), 3,14-3,02 (m, 2H), 2,34-2,29 (m, 3H), 1,94-1,85 (m, 2H), 1,84-1,77 (m, 2H), 1,75-1,70 (m, 3H).

SFC (способ 12): R_T=4,88 мин., площадь пика: 99,9%

Пример 3

Получение соединения 3

a) Получение промежуточного соединения 17

Метил-4-амино-1-этил-1 H -пиразол-3-карбоксилат

Промежуточное соединение 17 синтезировали, как описано в WO201218909A1.

b) Получение промежуточного соединения 18

Метил-1-этил-4-((4-метоксибензил)амино)-1 H -пиразол-3-карбоксилат

В химическом стакане (3 л), оснащенном магнитной мешалкой, получали раствор промежуточного соединения 17 (метил-4-амино-1-этил-1H-пиразол-3-карбоксилата) (120 г, 709 ммоль), трифторуксусной кислоты (162 г, 1,42 моль) и 4-метоксибензальдегида (116 г, 852 ммоль) в этилацетате (1,2 л). Боргидрид натрия (21,5 г, 568 ммоль) добавляли к смеси порциями на водяной бане со льдом с поддержанием температуры ниже 30°C. Затем воду (1 л) добавляли к смеси для гашения реакции и смесь перемешивали при 25°C в течение 2 часов. Смесь разделяли и отделенный органический слой промывали водой (1 л x 3), солевым раствором (1 л), высушивали над Na₂SO₄ и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного продукта, который очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (эквивалент градиента: смесь петролейный эфир:этилацетат от 100: 0 до 1: 1) с получением промежуточного соединения 18 (180 г, неочищенное) в виде светло-желтого масла.

Общая процедура A:¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d ⁶) (Varian) δ 7,34-7,20 (m, 3H), 6,91-6,76 (m, 2H), 4,16-4,03 (m, 2H), 4,03-3,97 (m, 2H), 3,80-3,68 (m, 6H), 1,37-1,21 (m, 3H)

c) Получение промежуточного соединения 19

Метил-2-этил-7-гидрокси-4-(4-метоксибензил)-5-оксо-4,5-дигидро-2 H -пиразоло[4,3- b ]пиридин-6-карбоксилат

Раствор промежуточного соединения 18 (метил-1-этил-4-((4-метоксибензил)амино)-1H-пиразол-3-карбоксилата) (90,0 г, 121 ммоль) в сухом N, N-диметилформамиде (600 мл) добавляли в трехгорлую колбу объемом 2 л. К смеси на водяной бане со льдом порциями добавляли гидрид натрия (16,2 г, 60% дисперсия в масле, 405 ммоль). После добавления смесь перемешивали при 0°C в течение 15 минут и к смеси по каплям добавляли метилмалонилхлорид (44,6 г, 327 ммоль) при 0°C. Смесь перемешивали в течение дополнительных 15 минут, затем к смеси одной порцией добавляли метоксид натрия (33,6 г, 622 ммоль) и смесь перемешивали при 110°C в течение 3 часов. Смесь концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Затем остаток суспендировали в 300 мл воды и в этилацетате (400 мл). Отделенную водную фазу подкисляли с помощью HCl (12 M) до pH 6-7. Водную фазу экстрагировали дихлорметаном (400 мл x 4). Объединенные дихлорметановые экстракты высушивали над Na₂SO₄ и фильтровали. Фильтрат концентрировали до сухого состояния при пониженном давлении с получением неочищенного продукта, который очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (эквивалент градиента: смесь петролейный эфир:этилацетат от 10: 0 до 1: 9) с получением промежуточного соединения 19 (15,0 г, чистота 85,9%, выход 11,6%) в виде желтых клейких твердых веществ.

LC-MS (ESI) (общая процедура B, способ 4): R_T=1,76 минуты, масса рассч. для C₁₈H₁₉N₃O₅ 357,13, масса/заряд найденное значение 358,1 [M+H]⁺.

d) Получение промежуточного соединения 20

Метил-7-хлор-2-этил-4-(4-метоксибензил)-5-оксо-4,5-дигидро-2 H -пиразоло[4,3- b ]пиридин-6-карбоксилат

Якорь магнитной мешалки, промежуточное соединение 19 (метил-2-этил-7-гидрокси-4-(4-метоксибензил)-5-оксо-4,5-дигидро-2H-пиразоло[4,3-b]пиридин-6-карбоксилат) (25,0 г, 70,0 ммоль) и дихлорметан (150 мл) помещали в круглодонную колбу объемом 500 мл. Оксалилхлорид (8,9 мл, 104 ммоль) добавляли по каплям при 0°C. Затем добавляли N, N-диметилформамид (0,26 г, 3,56 ммоль) при 0°C и полученную смесь перемешивали при 15°C. Через 16 часов реакционную смесь концентрировали до сухого состояния при пониженном давлении. Остаток суспендировали в дихлорметане (300 мл) и повышали основность с помощью насыщенного раствора бикарбоната натрия до pH > 7. Смесь разделяли и отделенный органический слой высушивали над Na₂SO₄ и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением остатка, который очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (эквивалент градиента: смесь петролейный эфир:этилацетат от 1: 0 до 1: 2) с получением промежуточного соединения 20 (7,50 г, выход 25,7% ) в виде светло-желтых твердых веществ.

LC-MS (ESI) (общая процедура C, способ 7):R_T=2,93 минуты, масса рассч. для C₁₈H₁₈ClN₃O₄ 375,10, масса/заряд найденное значение 375,9 [M+H]⁺.

Общая процедура A:¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d ⁶) (Bruker) δ=8,31 (s, 1H), 7,30 (d, J=8,5 Гц, 2H), 6,88 (d, J=8,8 Гц, 2H), 5,06 (s, 2H), 4,32 (q, J=7,3 Гц, 2H), 3,89-3,82 (m, 3H), 3,73-3,70 (m, 3H), 1,44 (t, J=7,3 Гц, 3H)

e) Получение промежуточного соединения 21

7-Хлор-2-этил-4-(4-метоксибензил)-5-оксо-4,5-дигидро-2 H -пиразоло[4,3- b ]пиридин-6-карбальдегид

Якорь магнитной мешалки, промежуточное соединение 20 (метил-7-хлор-2-этил-4-(4-метоксибензил)-5-оксо-4,5-дигидро-2H-пиразоло[4,3-b]пиридин-6-карбоксилат) (7,50 г, 20,0 ммоль) и дихлорметан (150 мл) помещали в трехгорлую колбу объемом 500 мл в атмосфере азота. Затем по каплям добавляли гидрид диизобутилалюминия (29,9 мл, 1 M в толуоле, 29,9 ммоль) при -78°C и полученную смесь перемешивали при -78°C. Через 2 часа реакционную смесь гасили насыщенным водным раствором хлорида аммония (50 мл) при -78°C. Смесь перемешивали при -78°C в течение 20 минут перед добавлением дихлорметана (100 мл). Реакционную смесь фильтровали после нагревания смеси до 25°C. Осадок на фильтре промывали дихлорметаном (300 мл x 5) и объединенные органические слои высушивали над Na₂SO₄ и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного продукта, который очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (эквивалент градиента: смесь петролейный эфир:этилацетат от 1: 0 до 1: 3) с получением продукта, который дополнительно очищали с помощью преп. HPLC (колонка: Phenomenex luna C18 250*50 мм*10 мкм, подвижная фаза A: вода (0,1%TFA), подвижная фаза B: ацетонитрил, скорость потока: 120 мл/мин., при условии градиента от 20% B до 50%). Собранные чистые фракции нейтрализовывали насыщенным раствором бикарбоната натрия до pH > 7. Затем смесь экстрагировали дихлорметаном (200 мл x 3). Объединенные органические слои высушивали над Na₂SO₄ и фильтровали. Фильтрат выпаривали до сухого состояния, полученное затем ресуспендировали в воде (10 мл) и полученную смесь лиофилизировали с получением промежуточного соединения 21 (5,50 г, чистота 90,0%, выход 71,7%) в виде светло-желтых твердых веществ.

LC-MS (ESI) (общая процедура C, способ 9): R_T=0,80 минуты, масса рассч. для C₁₇H₁₆ClN₃O₃ 345,09, масса/заряд найденное значение 346,0 [M+H]⁺.

Общая процедура A:¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d ⁶) (Varian) δ=10,28 (s, 1H), 8,31 (s, 1H), 7,38-7,30 (m, 2H), 6,91-6,83 (m, 2H), 5,09 (s, 2H), 4,34 (q, J=7,3 Гц, 2H), 3,70 (s, 3H), 1,44 (t, J=7,3 Гц, 3H)

f) Получение промежуточного соединения 23

7-Хлор-2-этил-4-(4-метоксибензил)-6-(6-морфолино-1 H -бензо[ d ]имидазол-2-ил)-2 H -пиразоло[4,3- b ]пиридин-5(4 H )-он

Якорь магнитной мешалки, промежуточное соединение 21 (7-хлор-2-этил-4-(4-метоксибензил)-5-оксо-4,5-дигидро-2H-пиразоло[4,3-b]пиридин-6-карбальдегид) (800 мг, 2,31 ммоль), промежуточное соединение 22 (4-морфолинобензол-1,2-диамин) (537 мг, 2,78 ммоль) (синтезировали, как описано в Medicinal Chemistry, 2013, vol. 9, #5 p. 651-659) и сухой 1,4-диоксан (10 мл) помещали в стеклянный флакон объемом 40 мл. Затем к реакционной смеси добавляли хлорид трехвалентного железа (751 мг, 4,63 ммоль) и смесь перемешивали при 25°C в течение 1 часа. pH смеси доводили до примерно pH= 9,0 насыщенным раствором бикарбоната натрия (20 мл) и фильтровали. Фильтрат экстрагировали дихлорметаном (20 мл x 3). Объединенные органические слои высушивали над безводным Na₂SO₄ и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением продукта, который очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (эквивалент градиента: смесь дихлорметан: метанол от 1: 0 до 9: 1) с получением промежуточного соединения 23 (800 мг, выход 68,9%, выход 45,9%) в виде черного порошка.

g) Получение промежуточного соединения 24

7-Хлор-2-этил-6-(6-морфолино-1 H -бензо[ d ]имидазол-2-ил)-2 H -пиразоло[4,3- b ]пиридин-5(4 H )-он

Якорь магнитной мешалки, промежуточное соединение 23 (7-хлор-2-этил-4-(4-метоксибензил)-6-(6-морфолино-1H-бензо[d]имидазол-2-ил)-2H-пиразоло[4,3-b]пиридин-5(4H)-он) (800 мг, 1,06 ммоль) и 2,2,2-трифторуксусную кислоту (3 мл) помещали в круглодонную колбу объемом 50 мл. Затем к смеси по каплям добавляли трифторметансульфоновую кислоту (0,280 мл) и смесь перемешивали при 60°C в течение 2 часов. Смесь концентрировали при пониженном давлении. Повышали основность остатка насыщенным раствором бикарбоната натрия до pH=9. Смесь экстрагировали хлороформом (10 мл x 3). Объединенные органические слои высушивали над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением промежуточного соединения 24 (800 мг, неочищенное) в виде черного порошка, которое применяли на следующей стадии без дополнительной очистки.

h) Получение соединения 3

( S* )-2-этил-6-(6-морфолино-1 H -бензо[ d ]имидазол-2-ил)-7-((1-(пиримидин-2-ил)пропил)амино)-2 H -пиразоло[4,3- b ]пиридин-5(4 H )-он

Якорь магнитной мешалки, промежуточное соединение 24 (7-хлор-2-этил-6-(6-морфолино-1H-бензо[d]имидазол-2-ил)-2H-пиразоло[4,3-b]пиридин-5(4H)-он) (265 мг, 0,664 ммоль), промежуточное соединение 25 ((S*)-1-(пиримидин-2-ил)пропан-1-амина гидрохлорид) (173 мг, 0,996 ммоль), иодид тетрабутиламмония (TBAI) (24,5 мг, 0,066 ммоль), бикарбонат натрия (167 мг, 1,99 ммоль), хлороформ (6 мл) и воду (1 мл) помещали в круглодонную колбу объемом 100 мл. Полученную смесь перемешивали при 60°C в течение 12 часов. Затем смесь экстрагировали дихлорметаном (20 мл). Отделенный органический слой промывали водой (20 мл x 3), высушивали над безводным Na₂SO₄ и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением остатка, который очищали с помощью преп. HPLC (колонка: Phenomenex Gemini C18 250*50, 10 мкм, подвижная фаза A: вода (0,225% FA), подвижная фаза B: ацетонитрил, скорость потока: 22 мл/мин., при условии градиента от 23% B до 53%). Чистые фракции собирали и растворитель выпаривали под вакуумом. Смесь лиофилизировали до сухого состояния с получением соединения 3 (118 мг, чистота 97,3% , выход 34,7%) в виде желтых твердых веществ.

LC-MS (ESI) (общая процедура A, способ 2): R_T=4,00 минуты, масса рассч. для C₂₆H₂₉N₉O₂ 499,24, масса/заряд найденное значение 500,1 [M+H]⁺.

Общая процедура A: ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d ⁶) (Varian) δ 12,87 (d, J=5,7 Гц, 1H), 12,64 (d, J=7,9 Гц, 0,4H), 12,57 (d, J=7,9 Гц, 0,6H), 10,89-10,85 (m, 1H), 8,83-8,79 (m, 2H), 7,65 (s, 1H), 7,53 (d, J=8,6 Гц, 0,4H), 7,43 (d, J=8,8 Гц, 0,6H), 7,40-7,35 (m, 1H), 7,23-7,19 (m, 0,6H), 7,06-7,03 (m, 0,4H), 6,95-6,87 (m, 1H), 6,34-6,26 (m, 1H), 4,19 (q, J=7,3 Гц, 2H), 3,82-3,73 (m, 4H), 3,14-3,05 (m, 4H), 2,25-2,09 (m, 2H), 1,30 (t, J=7,3 Гц, 3H), 1,09-0,97 (m, 3H)

SFC (способ 12): R_T=2,26 мин., площадь пика: 99,0%.

Пример 4

Получение соединения 4, 4A и 4B

a) Получение соединения 4

( Rac )-2-этил-6-(6-морфолино-1 H -бензо[ d ]имидазол-2-ил)-7-((1-(оксазол-4-ил)этил)амино)-2 H -пиразоло[4,3- b ]пиридин-5(4 H )-он

Якорь магнитной мешалки, промежуточное соединение 24 (7-хлор-2-этил-6-(6-морфолино-1H-бензо[d]имидазол-2-ил)-2H-пиразоло[4,3-b]пиридин-5(4H)-он) (800 мг, 2,01 ммоль), промежуточное соединение 26 (rac)-1-(оксазол-4-ил)этанамина гидрохлорид (447 мг, 3,01 ммоль), N, N-диизопропилэтиламин (2,61 г, 20,2 ммоль) и N, N-диметилацетамид (10 мл) помещали в стеклянный флакон объемом 40 мл. Смесь перемешивали при 110°C в течение 1 часа. Затем смесь охлаждали до комнатной температуры, и разбавляли дихлорметаном (30 мл), и промывали водой (8 мл x 5). Отделенный органический слой высушивали над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного продукта, который очищали с помощью преп. тонкослойной хроматографии (смесь дихлорметан:метанол=10: 1) с получением соединения 4 (350 мг, чистота 95%, выход 35,0%) в виде желтого порошка.

LC-MS (ESI) (общая процедура C, способ 9): R_T=0,63 минуты, масса рассч. для C₂₄H₂₆N₈O₃ 474,21, масса/заряд найденное значение 475,1 [M+H]⁺.

b) Получение соединения 4A

( S* )-2-этил-6-(6-морфолино-1 H -бензо[ d ]имидазол-2-ил)-7-((1-(оксазол-4-ил)этил)амино)-2 H -пиразоло[4,3- b ]пиридин-5(4 H )-она

и соединения 4B

(R*)-2-этил-6-(6-морфолино-1 H -бензо[ d ]имидазол-2-ил)-7-((1-(оксазол-4-ил)этил)амино)-2 H -пиразоло[4,3- b ]пиридин-5(4 H )-она

Рацемическое соединение 4 отделяли с помощью хроматографии со сверхкритической подвижной фазой (условие разделения: AD (250 мм*30 мм, 10 мкм); подвижная фаза: A: сверхкритический CO₂, B: 0,1% NH₃H₂O EtOH, A:B=45:55 при 80 мл/мин.; температура колонки: 38°C; давление в сопле: 100 бар; температура сопла: 60°C; температура испарителя: 20°C; температура триммера: 25°C; длина волны: 220 нм). Чистые фракции собирали и летучие вещества удаляли под вакуумом. Остаток суспендировали в ацетонитриле (2 мл) и воде (10 мл). Смесь лиофилизировали до сухого состояния с получением соединения 4A (77,1 мг, чистота 97,4% , выход 21,5%) в виде желтого порошка и соединения 4B (80,1 мг, чистота 99,1%, выход 22,7%) в виде желтого порошка.

Соединение 4A:

LC-MS (ESI) (общая процедура A, способ 2): R_T=3,86 минуты, масса рассч. для C₂₄H₂₆N₈O₃ 474,21, масса/заряд найденное значение 475,0 [M+H]⁺.

Общая процедура A:¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d ⁶) (Varian) δ 12,89 (s, 0,4H), 12,87 (s, 0,6H), 12,40 (d, J=8,4 Гц, 0,4H), 12,32 (d, J=8,6 Гц, 0,6H), 10,93 (br. s., 1H), 8,36 (s, 1H), 8,02-7,99 (m, 1H), 7,74 (s, 1H), 7,52 (d, J=8,6 Гц, 0,4H), 7,38 (d, J=8,6 Гц, 0,6H), 7,20 (d, J=2,2 Гц, 0,6H), 7,03 (d, J=2,0 Гц, 0,4H), 6,93-6,86 (m, 1H), 6,44-6,32 (m, 1H), 4,38-4,26 (m, 2H), 3,80-3,72 (m, 4H), 3,12-3,03 (m, 4H), 1,71-1,66 (m, 3H), 1,48-1,41 (m, 3H)

SFC (способ 13): R_T=1,77 мин., площадь пика: 100%.

Соединение 4B:

Общая процедура A: ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d ⁶) (Varian) δ 12,89 (s, 0,4H), 12,87 (s, 0,6H), 12,40 (d, J=8,6 Гц, 0,4H), 12,32 (d, J=8,6 Гц, 0,6H), 10,93 (br. s., 1H), 8,36 (s, 1H), 8,02-7,99 (m, 1H), 7,74 (s, 1H), 7,52 (d, J=8,8 Гц, 0,4H), 7,39 (d, J=8,8 Гц, 0,6H), 7,20 (d, J=2,2 Гц, 0,6H), 7,03 (d, J=2,0 Гц, 0,4H), 6,93-6,88 (m, 1H), 6,44-6,33 (m, 1H), 4,33 (q, J=7,4 Гц, 2H), 3,80-3,73 (m, 4H), 3,12-3,05 (m, 4H), 1,72-7,65 (m, 3H), 1,48-1,42 (m, 3H)

SFC (способ 13): R_T=2,07 мин., площадь пика: 100%.

Пример 5

Получение соединения 5

a) Получение промежуточного соединения 28 4-метил-5-морфолинобензол-1,2-диамина

Смесь промежуточного соединения 27 (4-метил-5-морфолино-2-нитроанилина) (1,0 г, 4,22 ммоль) и Ni Ренея (100 мг) в диоксане (40 мл) перемешивали при комнатной температуре под давлением атмосферы с газообразного водорода в течение 4 часов. Ni Ренея отфильтровывали и фильтрат непосредственно применяли на следующей стадии без дополнительной очистки.

LC-MS (ESI) (общая процедура B-2, способ 2): R_T=0,49 минуты, масса рассч. для C₁₁H₁₇N₃O 207,1, масса/заряд найденное значение 208,2 [M+H]⁺.

b) Получение промежуточного соединения 29

7-Хлор-2-этил-4-(4-метоксибензил)-6-(5-метил-6-морфолино-1H-бензо[d]имидазол-2-ил)-2,4-дигидро-5H-пиразоло[4,3-b]пиридин-5-он

К смеси промежуточного соединения 28 (4-метил-5-морфолинобензол-1,2-диамина) в диоксане (40 мл) добавляли 4-хлор-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-3-карбальдегид (1,45 г, 4,20 ммоль) на ледяной бане. Добавляли FeCl₃ (1,36 г, 8,40 ммоль) и полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 мин. pH смеси доводили до 8 насыщенным раствором NaHCO₃. Смесь экстрагировали с помощью CH₂Cl₂ (50 мл*2). Объединенную органическую фазу промывали с помощью H₂O, солевого раствора, высушивали над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (градиент, CH₂Cl₂: EtOAc=от 6:1 до 2:1) с получением указанного в заголовке соединения (1,59 г, выход 71,0%) в виде желтых твердых веществ.

LC-MS (ESI) (общая процедура B-2, способ 4): R_T=1,15 минуты, масса рассч. для C₂₈H₂₉ClN₆O₃ 532,2, масса/заряд найденное значение 533,3 [M+H]⁺.

c) Получение промежуточного соединения 30

7-Хлор-2-этил-6-(5-метил-6-морфолино-1H-бензо[d]имидазол-2-ил)-2,4-дигидро-5H-пиразоло[4,3-b]пиридин-5-он

К раствору промежуточного соединения 29 (7-хлор-2-этил-4-(4-метоксибензил)-6-(5-метил-6-морфолино-1H-бензо[d]имидазол-2-ил)-2,4-дигидро-5H-пиразоло[4,3-b]пиридин-5-она) (1,59 г, 2,99 ммоль) в CF₃COOH (20 мл) добавляли TfOH (1,35 г, 9,00 ммоль). Смесь перемешивали при 85°C в течение 3 часов. Затем смесь концентрировали при пониженном давлении. pH остатка доводили до 8 насыщенным раствором NaHCO₃. Полученную смесь экстрагировали с помощью CH₂Cl₂ (50 мл*2). Объединенную органическую фазу промывали с помощью H₂O и солевого раствора, высушивали над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали с получением промежуточного соединения 30 (1,6 г, неочищенное, выход >100%) в виде желтых твердых веществ, которое применяли на следующей стадии без дополнительной очистки.

LC-MS (ESI) (общая процедура B-2, способ 4): R_T=0,93 минуты, масса рассч. для C₂₀H₂₁ClN₆O₂ 412,1, масса/заряд найденное значение 413,3 [M+H]⁺.

d) Получение соединения 5

(S)-2-этил-6-(5-метил-6-морфолино-1H-бензо[d]имидазол-2-ил)-7-((1-(пиримидин-2-ил)этил)амино)-2,4-дигидро-5H-пиразоло[4,3-b]пиридин-5-он

К раствору промежуточного соединения 30 (7-хлор-2-этил-6-(5-метил-6-морфолино-1H-бензо[d]имидазол-2-ил)-2,4-дигидро-5H-пиразоло[4,3-b]пиридин-5-она) (300 мг, 0,73 ммоль) в CH₂Cl₂ (10 мл) добавляли промежуточное соединение 11 ((S)-1-(пиримидин-2-ил)этан-1-амина гидрохлорид) (232 мг, 1,46 ммоль) и DIPEA (471 мг, 3,65 ммоль). Смесь перемешивали при 35°C в течение 16 часов. Затем смесь концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (градиент, CH₂Cl₂: MeOH= от 60:1 до 50:1) с получением соединения 5 (300 мг, выход 82,3%, чистота 99,4%, ee: 95,84%) в виде желтых твердых веществ.

LC-MS (ESI) (общая процедура B-2, способ 4): R_T=1,44 минуты, масса рассч. для C₂₆H₂₉N₉O₂499,57, масса/заряд найденное значение 500,4 [M+H]⁺.

Общая процедура A-2: ¹H ЯМР (400 МГц, CD₃OD) δ 8,78-8,76 (m, 2H), 7,50 (s, 1H), 7,34-7,32 (m, 3H), 6,46-6,41 (m, 1H), 4,23-4,19 (m, 2H), 3,86-3,84 (m, 4H), 2,94-2,92 (m, 4H), 2,42 (s, 3H), 1,85 (d, J=6,8 Гц, 3H), 1,39 (t, J=7,6 Гц, 3H).

Пример 6

Получение соединения 6

a) Получение промежуточного соединения 32

2-Фтор-4-морфолино-6-нитроанилин

К дегазированной суспензии промежуточного соединения 31 (4-бром-2-фтор-6-нитроанилина) (5,0 г, 21,3 ммоль), трис(дибензилиденацетон)дипалладия(0) (586 мг, 0,64 ммоль), (2-бифенил)ди-трет-бутилфосфина (JohnPhos) (379 мг, 1,27 ммоль) и t-BuONa (2,86 г, 29,78 ммоль) в THF (50 мл) добавляли морфолин (5,55 г, 63,8 ммоль). Смесь перемешивали при 60^oC в течение 18 часов. После охлаждения до комнатной температуры смесь концентрировали при пониженном давлении с получением остатка, который очищали с помощью хроматографии на силикагеле (смесь петролейный эфир: EtOAc=5: 1) с получением промежуточного соединения 32 (780 мг, выход 15,2%) в виде желтых твердых веществ.

LC-MS (ESI) (общая процедура A-2, способ 2): R_T=1,60 минуты, масса рассч. для C₁₀H₁₂FN₃O₃ 241,1, масса/заряд найденное значение 242,2 [M+H]⁺.

b) Получение промежуточного соединения 33

3-Фтор-5-морфолинобензол-1,2-диамин

Смесь промежуточного соединения 32 (2-фтор-4-морфолино-6-нитроанилина) (780 мг, 3,23 ммоль) и Ni Ренея (1 г) в диоксане (15 мл) перемешивали при комнатной температуре под давлением атмосферы газообразного водорода в течение 4 часов. Ni Ренея отфильтровывали и фильтрат непосредственно применяли на следующей стадии без дополнительной очистки.

LC-MS (ESI) (общая процедура A-2, способ 2): R_T=1,27 минуты, масса рассч. для C₁₀H₁₄FN₃O 211,1, масса/заряд найденное значение 212,2 [M+H]⁺.

c) Получение промежуточного соединения 34

7-Хлор-2-этил-6-(4-фтор-6-морфолино-1H-бензо[d]имидазол-2-ил)-4-(4-метоксибензил)-2,4-дигидро-5H-пиразоло[4,3-b]пиридин-5-он

К смеси промежуточного соединения 21 (7-хлор-4-(4-метоксибензил)-2-этил-5-оксо-4,5-дигидро-2H-пиразоло[4,3-b]пиридин-6-карбальдегида) (1,11 г, 3,23 ммоль) в диоксане (25 мл) добавляли FeCl₃ (1,04 г, 6,46 ммоль), а затем раствор промежуточного соединения 33 (3-фтор-5-морфолинобензол-1,2-диамина) в диоксане (15 мл). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 минут, затем ее выливали в насыщенный NaHCO₃ (50 мл) и экстрагировали с помощью CH₂Cl₂ (100 мл*2). Объединенную органическую фазу промывали с помощью H₂O, солевого раствора, высушивали над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (градиент, CH₂Cl₂: MeOH=от 100:0 до 60:1) с получением промежуточного соединения 35 (650 мг, выход 37,5%) в виде коричневых твердых веществ.

LC-MS (ESI) (общая процедура A-2, способ 2): R_T=1,62 минуты, масса рассч. для C₂₇H₂₆ClFN₆O₃ 536,2, масса/заряд найденное значение 537,3 [M+H]⁺.

d) Получение промежуточного соединения 35

7-Хлор-2-этил-6-(4-фтор-6-морфолино-1H-бензо[d]имидазол-2-ил)-2,4-дигидро-5H-пиразоло[4,3-b]пиридин-5-он

К раствору промежуточного соединения 34 (7-хлор-2-этил-6-(4-фтор-6-морфолино-1H-бензо[d]имидазол-2-ил)-4-(4-метоксибензил)-2,4-дигидро-5H-пиразоло[4,3-b]пиридин-5-она) (650 мг, 1,21 ммоль) в CF₃COOH (20 мл) добавляли TfOH (537 мг, 3,63 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. Затем смесь концентрировали при пониженном давлении. pH остатка доводили до 8 насыщенным раствором NaHCO₃. Полученную смесь экстрагировали с помощью CH₂Cl₂ (50 мл*2). Объединенную органическую фазу промывали с помощью H₂O и солевого раствора, высушивали над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали с получением промежуточного соединения 35 в виде желтых твердых веществ (700 мг, выход >100%), которое применяли на следующей стадии без дополнительной очистки.

LC-MS (ESI) (общая процедура A-2, способ 2): R_T=1,32 минуты, масса рассч. для C₁₉H₁₈ClFN₆O₂ 416,1, масса/заряд найденное значение 417,3 [M+H]⁺.

e) Получение соединения 6

(S)-2-этил-6-(4-фтор-6-морфолино-1H-бензо[d]имидазол-2-ил)-7-((1-(пиримидин-2-ил)этил)амино)-2,4-дигидро-5H-пиразоло[4,3-b]пиридин-5-он

К раствору промежуточного соединения 35 (7-хлор-2-этил-6-(4-фтор-6-морфолино-1H-бензо[d]имидазол-2-ил)-2,4-дигидро-5H-пиразоло[4,3-b]пиридин-5-она) (700 мг, 1,68 ммоль) в CHCl₃ (20 мл) добавляли промежуточное соединение 11 ((S)-1-(пиримидин-2-ил)этан-1-амина гидрохлорид) (402 мг, 2,52 ммоль), KHCO₃ (504 мг, 5,04 ммоль) и 18-краун-6 (665 мг, 2,52 ммоль). Смесь перемешивали при 60°C в течение 16 часов. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь экстрагировали с помощью CH₂Cl₂ (50 мл*2). Объединенную органическую фазу промывали насыщенным раствором KHCO₃ (50 мл*3), H₂O и солевым раствором, высушивали над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (CH₂Cl₂: MeOH =80:1) с получением соединения 6 (316,18 мг, выход 35,7% , чистота 97,3%, ee: 96,08%) в виде желтых твердых веществ.

LC-MS (ESI) (общая процедура A-2, способ 2): R_T=1,43 минуты, масса рассч. для C₂₅H₂₆FN₉O₂ 503,5, масса/заряд найденное значение 504,4 [M+H]⁺.

Общая процедура A-2: ¹H ЯМР (400 МГц, CD₃OD) δ 8,77 (d, J=4,0 Гц, 2H), 7,53 (s, 1H), 7,36-7,35 (m, 1H), 6,93-6,922 (m, 1H), 6,74-6,68 (m, 1H), 6,42-6,35 (m, 1H), 4,27-4,19 (m, 2H), 3,88-3,83 (m, 4H), 3,17-3,13 (m, 4H), 1,84 (d, J=6,8 Гц, 3H), 1,41 (t, J=6,8 Гц, 3H).

Следующие соединения получали в соответствии с протоколами реакций одного из вышеприведенных примеров с применением альтернативных исходных веществ при необходимости. (В таблице 1 пр. X указывает на то, что получение данного соединения описано в примере X, или что оно получено в соответствии с примером X).

Специалисту в данной области техники будет понятно, что соединения, синтезируемые с применением указанных протоколов, могут существовать в виде сольвата, например гидрата, и/или содержат остаточный растворитель или незначительные примеси. Соединения, выделенные в солевой форме, могут характеризоваться целочисленным стехиометрическим индексом, т. е. представлять собой моно- или дисоли, или промежуточным стехиометрическим индексом.

Таблица 1

ID соединения	Структура	Пример
Соединение 7		Пример 1
Соединение 8		Пример 1
Соединение 9		Пример 1
Соединение 10		Пример 1
Соединение 11		Пример 1
Соединение 12		Пример 1
Соединение 13		Пример 1
Соединение 14		Пример 1
Соединение 15		Пример 1
Соединение 16		Пример 1
Соединение 17		Пример 1
Соединение 18		Пример 1
Соединение 19		Пример 1
Соединение 20		Пример 1
Соединение 21		Пример 1
Соединение 22		Пример 1
Соединение 23		Пример 1
Соединение 24		Пример 1
Соединение 25		Пример 1
Соединение 26		Пример 1
Соединение 27		Пример 1
Соединение 28		Пример 1
Соединение 29		Пример 1
Соединение 30		Пример 1
Соединение 31		Пример 1
Соединение 32		Пример 1
Соединение 33		Пример 1
Соединение 34		Пример 1
Соединение 35		Пример 1
Соединение 1		Пример 1
Соединение 36		Пример 1
Соединение 37		Пример 1
Соединение 38		Пример 2
Соединение 39		Пример 2
Соединение 40		Пример 2
Соединение 41		Пример 2
Соединение 42		Пример 2
Соединение 2		Пример 2
Соединение 3		Пример 3
Соединение 43		Пример 3
Соединение 4A		Пример 4
Соединение 4B		Пример 4
Соединение 44		Пример 5
Соединение 45		Пример 5
Соединение 46		Пример 5
Соединение 47		Пример 5
Соединение 48		Пример 5
Соединение 49		Пример 5
Соединение 50		Пример 5
Соединение 51		Пример 5
Соединение 52		Пример 5
Соединение 53		Пример 5
Соединение 54		Пример 5
Соединение 5		Пример 5
Соединение 6		Пример 6
Соединение 55		Пример 5
Соединение 56		Пример 5

Пример 7

Получение промежуточных соединений 39 и 41, применяемых в синтезе соединений 7 и 8 в соответствии с примером 1.

a) Получение промежуточного соединения 37

(Rac)-4-(3,4-динитрофенил)-2-(трифторметил)морфолин

Смесь промежуточного соединения 36 (4-фтор-1,2-динитробензола) (800 мг, 4,30 ммоль), (rac)-2-(трифторметил)морфолина гидрохлорида (988 мг, 5,16 ммоль) и диизопропилэтиламина (2,18 г, 21,5 ммоль) в этаноле (10 мл) перемешивали при 45°C в течение 16 часов. Смесь концентрировали под вакуумом с получением остатка, который очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (элюент: смесь петролейный эфир/этилацетат от 100/0 до 85/15). Необходимые фракции собирали и растворитель концентрировали до сухого состояния под вакуумом с получением промежуточного соединения 37 (1,00 г, чистота 95%, выход 68,8%) в виде желтых твердых веществ.

Общая процедура A: ¹H ЯМР (400МГц, DMSO-d ⁶) (Varian) δ=8,08 (d, J=9,3 Гц, 1H), 7,63 (d, J=2,6 Гц, 1H), 7,29-7,19 (m, 1H), 4,44-4,29 (m, 1H), 4,20-4,02 (m, 2H), 3,99-3,88 (m, 1H), 3,78-3,65 (m, 1H), 3,19-3,07 (m, 2H).

b) Получение промежуточного соединения 38

(S*)-4-(3,4-динитрофенил)-2-(трифторметил)морфолина

и

получение промежуточного соединения 40

(R*)-4-(3,4-динитрофенил)-2-(трифторметил)морфолина

Промежуточное соединение 37 ((rac)-4-(3,4-динитрофенил)-2-(трифторметил)морфолин) отделяли с помощью хроматографии со сверхкритической подвижной фазой (условие разделения: AS (250 мм*30 мм, 10 мкм); подвижная фаза: A: сверхкритический CO₂, B: 0,1% NH₃H₂O EtOH, A:B =50:50 при 60 мл/мин.; температура колонки: 38°C; давление в сопле: 100 бар; температура сопла: 60°C; температура испарителя: 20°C; температура триммера: 25°C; длина волны: 220 нм). Чистые фракции собирали и летучие вещества удаляли под вакуумом с получением промежуточного соединения 38 (480 мг, чистота 99,5%, выход 47,8%) в виде желтых твердых веществ. SFC (способ 21): R_T=3,42 мин., площадь пика: 100%, и с получением промежуточного соединения 40, которое непосредственно применяли для синтеза промежуточного соединения 41.

c) Получение промежуточного соединения 39

(S*)-4-(2-(трифторметил)морфолино)бензол-1,2-диамин

Влажный палладий на активированном угле (100 мг, 10% на активированном угле) добавляли к раствору промежуточного соединения 38 ((S*)-4-(3,4-динитрофенил)-2-(трифторметил)морфолина) (480 мг, 1,49 ммоль) в метаноле (25 мл). Суспензию дегазировали под вакуумом и продували водородом несколько раз, а затем смесь перемешивали в атмосфере водорода (40 фунтов/кв. дюйм) при 25°C в течение 12 часов. Суспензию фильтровали через слой целита и осадок на фильтре промывали метанолом (50 мл x 2). Фильтрат концентрировали в вакууме с получением промежуточного соединения 39 (450 мг, неочищенное) в виде коричневых твердых веществ, которое применяли на следующей стадии без дополнительной очистки.

LC-MS (ESI) (общая процедура B, способ 6): R_T=1,75 минуты, масса рассч. для C₁₁H₁₄F₃N₃O 261,11, масса/заряд найденное значение 262,1 [M+H]⁺.

d) Получение промежуточного соединения 41

(R*)-4-(2-(трифторметил)морфолино)бензол-1,2-диамин

Синтез промежуточного соединения 41 осуществляли подобно синтезу промежуточного соединения 39 с получением промежуточного соединения 41 (460 мг, неочищенное) (начиная с промежуточного соединения 40) в виде коричневых твердых веществ.

Пример 8

Получение промежуточного соединения 44, применяемого в синтезе соединения 12 в соответствии с примером 1

a) Получение промежуточного соединения 43

5-((2 R ,6 R )-2,6-диметилморфолино)-2-нитроанилин

Суспензию промежуточного соединения 42 (5-фтор-2-нитроанилина) (0,904 г, 5,79 ммоль), (2R,6R)-2,6-диметилморфолина (1,00 г, 8,68 ммоль), N, N-диизопропилэтиламина (3 мл, 18,2 ммоль) и 1-бутанола (10 мл) перемешивали при 120°C в течение 12 часов. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь выливали в воду (50 мл). Затем смесь экстрагировали дихлорметаном (50 мл x 3) и объединенные органические слои промывали водой (50 мл x 3) и солевым раствором (50 мл x 3). Отделенный органический слой высушивали над безводным Na₂SO₄ и фильтровали. Фильтрат концентрировали до сухого состояния при пониженном давлении с получением неочищенного продукта, который очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (элюент: смесь петролейный эфир:этилацетат от 1:0 до 1:1) с получением промежуточного соединения 43 (0,950 г, чистота 99,7%, выход 65,1%) в виде желтых твердых веществ.

LC-MS (ESI) (общая процедура C, способ 9):R_T=0,79 минуты, масса рассч. для C₁₂H₁₇N₃O₃251,13, масса/заряд найденное значение 252,0 [M+H]⁺.

b) Получение промежуточного соединения 44

4-((2 R ,6 R )-2,6-диметилморфолино)бензол-1,2-диамин

Цинк (1,11 г, 16,9 ммоль) добавляли к раствору, состоящему из промежуточного соединения 43 (5-((2R,6R)-2,6-диметилморфолино)-2-нитроанилина) (0,850 г, 3,38 ммоль), хлорида аммония (2,71 г, 50,7 ммоль) в тетрагидрофуране (25 мл), этанола (25 мл) и воды (10 мл) при 20°C. Затем реакционную смесь перемешивали при 90°C в течение 1 часа. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и суспензию фильтровали через слой Celite®, а слой промывали водой (10 мл). Фильтрат выливали в воду (100 мл) и экстрагировали этилацетатом (100 мл x 3). Объединенные органические экстракты промывали солевым раствором, высушивали над безводным Na₂SO₄ и фильтровали. Фильтрат концентрировали до сухого состояния при пониженном давлении с получением неочищенного продукта, который очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (элюент: смесь петролейный эфир:этилацетат от 1: 0 до 0: 1) с получением промежуточного соединения 44 (0,810 г, чистота 87%, выход 94%) в виде бледно-желтого твердого вещества.

LC-MS (ESI) (общая процедура B, способ 5): R_T=0,32 минуты, масса рассч. для C₁₂H₁₉N₃O221,15, масса/заряд найденное значение 222,0 [M+H]⁺.

Пример 9

Получение промежуточного соединения 47, применяемого в синтезе соединения 13 в соответствии с примером 1

a) Получение промежуточного соединения 45

4-Бром-3-фтор-2-нитроанилин

Промежуточное соединение 45 синтезировали из 3-фтор-2-нитроанилина, как описано в WO2012/83170A1.

b) Получение промежуточного соединения 46

4-(3,6-Дигидро-2 H -пиран-4-ил)-3-фтор-2-нитроанилин

Промежуточное соединение 45 (4-бром-3-фтор-2-нитроанилин) (2,00 г, 8,51 ммоль), 2-(3,6-дигидро-2H-пиран-4-ил)-4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан (1,97 г, 9,36 ммоль), карбонат натрия (0,902 г, 8,51 ммоль), 1,4-диоксан (48 мл) и воду (12 мл) добавляли в круглодонную колбу. Смесь барботировали азотом в течение 5 минут и затем обрабатывали [1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладием (II) (1,24 г, 1,70 ммоль). Смесь барботировали азотом в течение дополнительных 5 минут и затем нагревали при 100^oC в течение 16 часов. Смесь фильтровали и фильтрат концентрировали до сухого состояния при пониженном давлении с получением неочищенного продукта. Остаток экстрагировали дихлорметаном (100 мл x 3). Объединенные органические экстракты высушивали над Na₂SO₄(s) и фильтровали. Фильтрат концентрировали до сухого состояния при пониженном давлении с получением неочищенного продукта, который очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (элюент: смесь петролейный эфир:этилацетат=3: 1) с получением промежуточного соединения 46 в виде желтых твердых веществ (1,60 г, чистота 95%, выход 74,98%).

Общая процедура A: ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d ⁶) (Varian) δ 7,30 (t, J=8,6 Гц, 1H), 6,87 (br. s., 2H), 6,73 (dd, J=0,9, 9,0 Гц, 1H), 5,95 (s, 1H), 4,25-4,12 (m, 2H), 3,76 (t, J=5,4 Гц, 2H), 2,34 (s, 2H).

c) Получение промежуточного соединения 47

3-Фтор-4-(тетрагидро-2 H -пиран-4-ил)бензол-1,2-диамин

Влажный палладий на активированном угле (0,5 г, 10% на активированном угле) добавляли к раствору, состоящему из промежуточного соединения 46 (4-(3,6-дигидро-2H-пиран-4-ил)-3-фтор-2-нитроанилина) (1,00 г, 4,20 ммоль) и метанола (30 мл). Смесь барботировали водородом в течение 5 минут и затем перемешивали при 50°C в атмосфере водорода (40 фунтов/кв. дюйм) в течение 12 часов. Суспензию фильтровали через слой Celite^® и слой промывали метанолом (10 мл). Фильтрат концентрировали до сухого состояния при пониженном давлении с получением промежуточного соединения 47 (0,85 г, чистота 90%, определенная с помощью TLC, выход 86,7%) в виде коричневого масла.

Пример 10

Получение промежуточного соединения 50, применяемого для получения соединений 15 и 16 в соответствии с примером 1

a) Получение промежуточного соединения 49

2-Фтор-6-нитро-3-(пиперидин-1-ил)анилин

Раствор промежуточного соединения 48 (2,3-дифтор-6-нитроанилина) (5,00 г, 28,7 ммоль), пиперидина (3,67 г, 43,1 ммоль) и N, N-диизопропилэтиламина (15 мл, 85,9 ммоль) в н-бутиловом спирте (30 мл) перемешивали при 80°C в течение 12 часов. Полученную смесь выливали в этилацетат (15 мл) и промывали водой (30 мл x 3). Отделенный органический слой высушивали над безводным Na₂SO₄ и фильтровали. Фильтрат концентрировали до сухого состояния при пониженном давлении с получением неочищенного промежуточного соединения 49 (7,060 г, неочищенное) в виде желтых твердых веществ.

LC-MS (ESI) (общая процедура C, способ 9): R_T=0,91 минуты, масса рассч. для C₁₁H₁₄FN₃O₂ 239,11, масса/заряд найденное значение 239,9 [M+H]⁺.

Общая процедура A: ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) (Varian) 7,85 (dd, J=1,8, 9,7 Гц, 1H), 6,27 (dd, J=8,8, 9,5 Гц, 1H), 6,10 (s, 2H), 3,32-3,25 (m, 4H), 1,75-1,63 (m, 6H)

b) Получение промежуточного соединения 50

3-Фтор-4-(пиперидин-1-ил)бензол-1,2-диамин

Раствор, состоящий из промежуточного соединения 49 (2-фтор-6-нитро-3-(пиперидин-1-ил)анилина) (1,02 г, 4,28 ммоль), цинка (1,40 г, 21,4 ммоль), хлорида аммония (3,40 г, 63,6 ммоль), THF (20 мл), этанола (20 мл) и воды (5 мл), перемешивали при 95°C в течение 1 часа. Реакционную смесь охлаждали до 25°C и фильтровали через слой Celite^®. Фильтрат выливали в воду (5 мл) и экстрагировали этилацетатом (10 мл x 3). Объединенные органические экстракты промывали солевым раствором, высушивали над безводным Na₂SO₄ и фильтровали. Фильтрат концентрировали до сухого состояния при пониженном давлении с получением промежуточного соединения 50 (875 г, неочищенное) в виде желтого твердого вещества, которое применяли непосредственно на следующей стадии.

LC-MS (ESI) (общая процедура C, способ 9): R_T=0,151 минуты, масса рассч. для C₁₁H₁₆FN₃ 209,13, масса/заряд найденное значение 209,8

Общая процедура A: [M+H]⁺. ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) (Varian) 6,43-6,39 (m, 1H), 6,37-6,31 (m, 1H), 2,91-2,90 (m, 4H), 1,76-1,68 (m, 4H), 1,57-1,50 (m, 2H)

Пример 11

Получение промежуточного соединения 54, применяемого в синтезе соединения 17 в соответствии с примером 1

a) Получение промежуточного соединения 52

2,3,5-Трифтор-6-нитроанилин

Смесь, состоящую из промежуточного соединения 51 (2,3,4,6-тетрафторнитробензола) (2,00 г, 10,3 ммоль) и аммиака в диоксане (51 мл), барботировали азотом в течение 5 минут. Затем реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов. Полученную смесь выливали в этилацетат (50 мл) и промывали водой (30 мл x 3). Объединенные органические экстракты высушивали над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали до сухого состояния при пониженном давлении с получением неочищенного промежуточного соединения 52, которое очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (элюент: смесь петролейный эфир:этилацетат=от 8:1 до 4:1) с получением промежуточного соединения 52 (1,12 г, выход 53,9%) в виде желтого твердого вещества.

Общая процедура A:¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) (Varian) 6,40-6,25 (m, 1H), 5,91 (br. s., 2H).

b) Получение промежуточного соединения 53

2,5-Дифтор-3-морфолино-6-нитроанилин

Раствор промежуточного соединения 52 (2,3,5-трифтор-6-нитроанилина) (100 мг, 0,495 ммоль), морфолина (47,0 мг, 0,539 ммоль) и N, N-диизопропилэтиламина (192 мг, 1,49 ммоль) в н-бутиловом спирте (1 мл) перемешивали при 80°C в течение 12 часов. Полученную смесь концентрировали до сухого состояния при пониженном давлении с получением неочищенного продукта. Полученную смесь выливали в этилацетат (20 мл) и промывали водой (10 мл x 3). Отделенный органический слой высушивали над безводным Na₂SO₄ и фильтровали. Фильтрат концентрировали до сухого состояния при пониженном давлении с получением неочищенного продукта, который очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (элюент: смесь петролейный эфир:этилацетат=от 8:1 до 4:1) с получением промежуточного соединения 53 (45,0 мг, выход 31,6%) в виде желтого твердого вещества.

Общая процедура A: ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d ⁶) (Varian) 6,52 (dd, J=6,8, 12,3 Гц, 1H), 6,30 (s, 2H), 3,62-3,54 (m, 4H), 2,85-2,74 (m, 4H).

c) Получение промежуточного соединения 54

3,6-Дифтор-4-морфолинобензол-1,2-диамин

Влажный палладий на активированном угле (50 мг) добавляли к раствору, состоящему из промежуточного соединения 53 (2,5-дифтор-3-морфолино-6-нитроанилина) (45,0 мг, 0,156 ммоль) и метанола (10 мл), в круглодонной колбе объемом 50 мл. Смесь барботировали водородом (15 фунтов/кв. дюйм) в течение 5 минут и затем перемешивали при 45°C в течение 4 часов. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и фильтровали через слой Celite^®. Фильтрат концентрировали до сухого состояния при пониженном давлении с получением промежуточного соединения 54 (34,4 мг, чистота 53%, выход 50,9%) в виде пурпурного твердого вещества.

Общая процедура A: ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d ⁶) (Varian) 6,36-6,21 (m, 1H), 4,80 (s, 2H), 4,33 (s, 2H), 3,71-3,66 (m, 4H), 2,69-2,63 (m, 4H).

Пример 12

Получение промежуточного соединения 58, применяемого для синтеза соединения 25 в соответствии с примером 1

a) Получение промежуточного соединения 55

4-Бензил-2,2-дифторморфолин

Промежуточное соединение 55 синтезировали как описано в US2016176896A1.

b) Получение промежуточного соединения 56

2,2-Дифторморфолина трифторацетат

Влажный палладий на активированном угле (90 мг, 10% на активированном угле) добавляли к раствору промежуточного соединения 55 (4-бензил-2,2-дифторморфолина) (930 мг, 4,36 ммоль) и метанола (10 мл) в круглодонной колбе объемом 100 мл. Смесь барботировали водородом в течение 5 минут и затем перемешивали при 45°C в атмосфере водорода (15 фунтов/кв. дюйм) в течение 16 часов. Суспензию фильтровали через слой Celite^® и слой промывали этилацетатом (10 мл). pH фильтрата доводили до 4-6 трифторуксусной кислотой и концентрировали до сухого состояния при пониженном давлении с получением промежуточного соединения 56 (1,0 г, неочищенное) в виде белых твердых веществ, которое применяли на следующей стадии без дополнительной очистки.

c) Получение промежуточного соединения 57

4-(3,4-Динитрофенил)-2,2-дифторморфолин

Раствор, состоящий из 4-фтор-1,2-динитробензола (777 мг, 4,18 ммоль), промежуточного соединения 56 (2,2-дифторморфолина трифторацетата) (900 мг, неочищенное) и N, N-диизопропилэтиламина (1,47 г, 11,4 ммоль) в н-бутаноле (20 мл), перемешивали при 80°C в течение 15 часов перед охлаждением до комнатной температуры. Реакционную смесь концентрировали до сухого состояния при пониженном давлении с получением неочищенного продукта, который очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (элюент: смесь петролейный эфир:этилацетат от 10:1 до 0:1) с получением промежуточного соединения 57 (700 мг, чистота 95%) в виде желтых твердых веществ.

Общая процедура A: ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d ⁶) (Varian) δ 8,12 (d, J=9,3 Гц, 1H), 7,60 (d, J=2,9 Гц, 1H), 7,24 (dd, J=2,9, 9,5 Гц, 1H), 4,20 (t, J=5,1 Гц, 2H), 4,10 (t, J=8,6 Гц, 2H), 3,68 (t, J=4,9 Гц, 2H)

d) Получение промежуточного соединения 58

4-(2,2-Дифторморфолино)бензол-1,2-диамин

Влажный палладий на активированном угле (50 мг, 10% на активированном угле) добавляли к раствору, состоящему из промежуточного соединения 57 (4-(3,4-динитрофенил)-2,2-дифторморфолина) (500 мг, 1,73 ммоль) и метанола (10 мл), в круглодонной колбе объемом 100 мл. Смесь барботировали водородом в течение 5 минут, затем перемешивали при 45°C в атмосфере водорода (15 фунтов/кв. дюйм) в течение 16 часов перед охлаждением до комнатной температуры. Суспензию фильтровали через слой Celite^® и слой промывали этилацетатом (10 мл). Фильтрат концентрировали до сухого состояния при пониженном давлении с получением промежуточного соединения 58 (390 мг, чистота 95%, выход 93%) в виде коричневых твердых веществ.

Общая процедура A: ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d ⁶) (Varian) δ 6,39 (d, J=8,2 Гц, 1H), 6,22 (d, J=2,6 Гц, 1H), 6,04 (dd, J=2,6, 8,4 Гц, 1H), 4,41 (s, 2H), 4,12-4,03 (m, 4H), 3,18 (t, J=8,0 Гц, 2H), 2,98 (t, J=4,5 Гц, 2H).

Пример 13

Получение промежуточного соединения 61, применяемого для синтеза соединения 26, в соответствии с примером 1

a) Получение промежуточного соединения 60

2-Нитро-5-(4-(2,2,2-трифторэтил)пиперазин-1-ил)анилин

Раствор 1-(2,2,2-трифторэтил)пиперазина гидрохлорида (1,00 г, 4,15 ммоль), промежуточного соединения 59 (5-фтор-2-нитроанилина) (0,432 г, 2,77 ммоль) и N, N-диизопропилэтиламина (2,4 мл, 14 ммоль) в н-бутаноле (5 мл) перемешивали при 80°C в течение 18 часов. Полученную смесь выливали в этилацетат (20 мл). Отделенный органический слой промывали водой (10 мл x 3), высушивали над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали до сухого состояния при пониженном давлении с получением промежуточного соединения 60 (836,5 мг, неочищенное) в виде желтого твердого вещества, которое применяли непосредственно на следующей стадии.

b) Получение промежуточного соединения 61

4-(4-(2,2,2-Трифторэтил)пиперазин-1-ил)бензол-1,2-диамин

Раствор, состоящий из промежуточного соединения 60 (2-нитро-5-(4-(2,2,2-трифторэтил)пиперазин-1-ил)анилина) (1,00 г, 3,29 ммоль), цинка (1,08 г, 16,4 ммоль), хлорида аммония (2,64 г, 49,3 ммоль), THF (20 мл), этанола (20 мл) и воды (10 мл), перемешивали при 95°C в течение 3 часов. Реакционную смесь охлаждали до 25°C и фильтровали. Фильтрат выливали в воду (50 мл) и экстрагировали этилацетатом (70 мл x 3). Объединенные органические экстракты высушивали над безводным Na₂SO₄ и фильтровали. Фильтрат концентрировали до сухого состояния при пониженном давлении с получением неочищенного продукта, который очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (элюент: смесь этилацетат:петролейный эфир от 0:1 до 1:1) с получением промежуточного соединения 61 (390 мг, чистота 86,3%, выход 37,3%) в виде коричневых твердых веществ.

LC-MS (ESI)（ процедура B, способ 6）: R_T=1,55 минуты, масса рассч. для C₁₂H₁₇F₃N₄274,14, масса/заряд найденное значение 275,1 [M+H]⁺.

Пример 14

Получение промежуточного соединения 67, применяемого для получения соединения 27, в соответствии с примером 1

a) Получение промежуточного соединения 63

2-Фтор-6-нитро-3-(пиперидин-1-ил)анилин

Раствор промежуточного соединения 62 (2,3-дифтор-6-нитроанилина) (10,0 г, 57,4 ммоль), пиперидина (7,34 г, 86,2 ммоль) и N, N-диизопропилэтиламина (7,42 г, 57,4 ммоль) в н-бутаноле (400 мл) перемешивали при 80°C в течение 18 часов. Полученную смесь концентрировали до сухого состояния при пониженном давлении с получением неочищенного продукта, который растворяли в этилацетате (800 мл). Органический слой промывали водой (400 мл x 3), высушивали над безводным Na₂SO₄ и фильтровали. Фильтрат концентрировали до сухого состояния при пониженном давлении с получением промежуточного соединения 63 (10,02 г, чистота 96,3%, выход 70,2%) в виде желтых твердых веществ.

Общая процедура A: ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d ⁶) (Varian) 7,74 (dd, J=1,3, 9,7 Гц, 1H), 7,09 (br. s., 2H), 6,38 (t, J=9,2 Гц, 1H), 3,26-3,24 (m, 4H), 1,60-1,58 (m, 6H)

b) Получение промежуточного соединения 64

Трет-бутил-(2-фтор-6-нитро-3-(пиперидин-1-ил)фенил)карбамат

Раствор промежуточного соединения 63 (2-фтор-6-нитро-3-(пиперидин-1-ил)анилина) (2,00 г, 8,36 ммоль), ди-трет-бутилдикарбоната ((Boc)₂O) (3,65 г, 16,7 ммоль) и 4-диметиламинопиридина (DMAP) (204 мг, 1,67 ммоль) в ацетонитриле (50 мл) перемешивали при 80°C в течение 2 часов. Реакционную смесь выливали в дихлорметан (100 мл). Органический слой промывали водой (300 мл), высушивали над безводным Na₂SO₄ ифильтровали. Фильтрат выпаривали с получением неочищенного продукта, который очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (элюент: смесь этилацетат:петролейный эфир от 0:1 до 1:3) с получением промежуточного соединения 64 (2,2 г, выход 57,8%, чистота 96,5%) в виде желтых твердых веществ.

Общая процедура A: ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d ⁶) (Varian) 8,02-7,95 (m, 1H), 7,16 (t, J=9,2 Гц, 1H), 3,26-3,24 (m, 4H), 1,62-1,60 (m , 6H), 1,33 (s, 18H)

c) Получение промежуточного соединения 65

Трет-бутил-(2-фтор-6-нитро-3-(2-оксопиперидин-1-ил)фенил)карбамат

На воздухе к смеси оксида рутения(IV) (115 мг, 0,865 ммоль) в воде (30 мл) при 23°C добавляли периодат натрия (3,70 г, 17,3 ммоль). После перемешивания в течение 3 минут при 23°C добавляли этилацетат (30 мл) и промежуточное соединение 64 (трет-бутил-(2-фтор-6-нитро-3-(пиперидин-1-ил)фенил)карбамат) (1,90 г, 4,32 ммоль). Смесь перемешивали в течение 2 часов при 23°C. Реакционную смесь фильтровали через слой Celite^® и фильтрат экстрагировали этилацетатом (100 мл x 3). Объединенные органические слои промывали солевым раствором (200 мл), высушивали над Na₂SO₄ и фильтровали. Фильтрат концентрировали с получением промежуточного соединения 65 (1,7 г, выход 86,7%) в виде коричневого твердого вещества.

Общая процедура A: ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d ⁶) (Varian) 8,16-8,03 (m, 1H), 7,80-7,65 (m, 1H), 3,71-3,56 (m, 2H), 2,47-2,41 (m, 2H), 1,90-1,89 (m, 4H), 1,47-1,26 (m, 18H)

d) Получение промежуточного соединения 66

1-(3-Амино-2-фтор-4-нитрофенил)пиперидин-2-он

К раствору промежуточного соединения 65 (трет-бутил-(2-фтор-6-нитро-3-(2-оксопиперидин-1-ил)фенил)карбамата) (1,70 г, 3,75 ммоль) в дихлорметане (10 мл) медленно добавляли трифторуксусную кислоту (5 мл) при 20°C. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 12 часов. Полученную смесь концентрировали до сухого состояния при пониженном давлении с получением неочищенного продукта, который суспендировали в этилацетате (500 мл) и воде (200 мл), и pH доводили до примерно 8 посредством добавления насыщенного раствора бикарбоната натрия. Отделенный органический слой высушивали над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали до сухого состояния при пониженном давлении с получением промежуточного соединения 66 (1,05 г, чистота 84,5%, выход 93,5%) в виде желтых твердых веществ.

Общая процедура A: ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d ⁶) (Varian) 7,92-7,81 (m, 1H), 7,43-7,29 (m, 2H), 6,64 (dd, J=7,1, 9,3 Гц, 1H), 3,55 (t, J=5,4 Гц, 2H), 2,41 (t, J=6,3 Гц, 2H), 1,94-1,77 (m, 4H).

e) Получение промежуточного соединения 67

1-(3,4-Диамино-2-фторфенил)пиперидин-2-он

Раствор промежуточного соединения 66 (1-(3-амино-2-фтор-4-нитрофенил)пиперидин-2-она) (1,05 г, 4,15 ммоль) и влажный палладий на активированном угле (100 мг, 10% на активированном угле) в метаноле (50 мл) перемешивали при 35°C в атмосфере водорода (15 фунтов/кв. дюйм) в течение 2 часов. Реакционную смесь охлаждали до 25°C и фильтровали. Фильтрат концентрировали до сухого состояния при пониженном давлении с получением промежуточного соединения 67 (900 мг, чистота 75,5%, выход 73,4%) в виде коричневых твердых веществ.

LC-MS (ESI) (общая процедура B, способ 6): R_T=0,69 минуты, масса рассч. для C₁₁H₁₄FN₃O 223,11, масса/заряд найденное значение 224,1 [M+H]⁺.

Пример 15

Получение промежуточного соединения 70, применяемого для синтеза соединения 28 в соответствии с примером 1

a) Получение промежуточного соединения 68

3-Фтор-2-метил-6-нитроанилин

Промежуточное соединение 68 синтезировали, как описано в WO2007115947A1.

Общая процедура A: ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d ⁶) (Varian) 7,98 (dd, J=9,6 Гц, 1H), 7,40 (br. s., 2H), 6,54 (t, J=9,0 Гц, 1H), 2,09-2,07 (m, 3H)

b) Получение промежуточного соединения 69

2-Метил-3-морфолино-6-нитроанилин

К раствору промежуточного соединения 68 (3-фтор-2-метил-6-нитроанилина) (1,50 г, 8,82 ммоль) и карбоната калия (2,44 г, 17,6 ммоль) в диметилсульфоксиде (80 мл) добавляли морфолин (1,16 мл, 13,2 ммоль) и смесь перемешивали при 100°C в течение 15 часов. Смесь выливали в воду (200 мл). Смесь экстрагировали этилацетатом (150 мл x 2). Объединенные органические слои высушивали над Na₂SO₄ и фильтровали. Фильтрат выпаривали с получением неочищенного продукта, который очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (элюент: смесь этилацетат:петролейный эфир=от 0:1 до 1:1)с получением промежуточного соединения 69 (1,33 г, чистота 97,7%, выход 62,1%) в виде желтых твердых веществ.

LC-MS (ESI) (общая процедура B, способ 6): R_T=2,13 минуты, масса рассч. для C₁₁H₁₅N₃O₃ 237,11, масса/заряд найденное значение 238,1 [M+H]⁺.

c) Получение промежуточного соединения 70

3-Метил-4-морфолинобензол-1,2-диамин

Раствор, состоящий из промежуточного соединения 69 (2-метил-3-морфолино-6-нитроанилина) (1,00 г, 4,22 ммоль), цинка (1,38 г, 21,1 ммоль), хлорида аммония (3,38 г, 63,2 ммоль), THF (8 мл), этанола (8 мл) и воды (4 мл) перемешивали при 95°C в течение 2 часов. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и фильтровали. Фильтрат выливали в воду (50 мл) и экстрагировали этилацетатом (100 мл x 3). Объединенные органические экстракты высушивали над безводным Na₂SO₄ и фильтровали. Фильтрат концентрировали до сухого состояния при пониженном давлении с получением промежуточного соединения 70 (870 мг, чистота 96,7%, выход 96,3%) в виде коричневого твердого вещества.

LC-MS (ESI) (общая процедура B, способ 6): R_T=1,34 минуты, масса рассч. для C₁₁H₁₇N₃O 207,14, масса/заряд найденное значение 208,2 [M+H]⁺.

Способ очистки, LC MS, SFC и ЯМР для соединений, полученных в соответствии с процедурами, указанными в таблице 1

Соединение 7

2-Метил-7-((( S* )-1-(пиримидин-2-ил)этил)амино)-6-(6-(( R* )-2-(трифторметил)морфолино)-1 H -бензо[ d ]имидазол-2-ил)-2 H -пиразоло[4,3- b ]пиридин-5(4 H )-он

После завершения реакции смесь концентрировали в вакууме с получением остатка, который очищали посредством преп. HPLC (колонка: Phenomenex Gemini C18 250*50, 10 мкм, подвижная фаза A: вода (0,225% FA), подвижная фаза B: ацетонитрил, скорость потока: 22 мл/мин., при условии градиента от 42% B до 72%). Чистые фракции собирали и растворитель выпаривали под вакуумом с получением соединения 7 (104 мг, чистота 98,6%, выход 24,6%) в виде желтых твердых веществ.

LC-MS (ESI) (общая процедура A, способ 2): R_T=4,72 минуты, масса рассч. для C₂₅H₂₄F₃N₉O₂ 539,20, масса/заряд найденное значение 540,0 [M+H]⁺.

Общая процедура A:¹H ЯМР (400МГц, DMSO-d ⁶) (Bruker): δ=12,95-12,90 (m, 1H), 12,72-12,62 (m, 1H), 10,88 (br. s., 1H), 8,88-8,82 (m, 2H), 7,68-7,64 (m, 1H), 7,56 (d, J=8,5 Гц, 0,4H), 7,49 (d, J=8,5 Гц, 0,6H), 7,44-7,39 (m, 1H), 7,33-7,29 (m, 0,6H), 7,20-7,16 (m, 0,4H), 7,00-6,95 (m, 1H), 6,53-6,42 (m, 1H), 4,45-4,33 (m, 1H), 4,15-4,07 (m, 1H), 4,02-3,92 (m, 3H), 3,90-3,78 (m, 1H), 3,72-3,62 (m, 1H), 3,55-3,47 (m, 1H), 2,89-2,71 (m, 2H), 1,79-1,69 (m, 3H).

SFC (способ 13): R_T=1,32 мин., площадь пика: 97,6%.

Соединение 8

2-Метил-7-((( S* )-1-(пиримидин-2-ил)этил)амино)-6-(6-(( S* )-2-(трифторметил)морфолино)-1 H -бензо[ d ]имидазол-2-ил)-2 H -пиразоло[4,3- b ]пиридин-5(4 H )-он

После завершения реакции смесь концентрировали в вакууме с получением остатка, который очищали посредством преп. HPLC (колонка: Phenomenex Gemini C18 250*50, 10 мкм, подвижная фаза A: вода (0,225% FA), подвижная фаза B: ацетонитрил, скорость потока: 22 мл/мин., при условии градиента от 42% B до 72%). Чистые фракции собирали и растворитель выпаривали под вакуумом с получением соединения 8 (32,0 мг, чистота 99,1%, выход 8,31%) в виде желтых твердых веществ.

LC-MS (ESI) (общая процедура A, способ 2):R_T=4,77 минуты, масса рассч. для C₂₅H₂₄F₃N₉O₂ 539,20, масса/заряд найденное значение 540,0 [M+H]⁺.

Общая процедура A:¹H ЯМР (400МГц, DMSO-d ₆) (Bruker) δ=12,96-12,89 (m, 1H), 12,71-12,62 (m, 1H), 10,87 (br. s., 1H), 8,89-8,81 (m, 2H), 7,69-7,64 (m, 1H), 7,56 (d, J=8,8 Гц, 0,4H), 7,49 (d, J=8,5 Гц, 0,6H), 7,45-7,39 (m, 1H), 7,33-7,29 (m, 0,6H), 7,20-7,16 (m, 0,4H), 7,01-6,94 (m, 1H), 6,53-6,42 (m, 1H), 4,46-4,33 (m, 1H), 4,16-4,07 (m, 1H), 4,01-3,92 (m, 3H), 3,89-3,79 (m, 1H), 3,71-3,62 (m, 1H), 3,55-3,46 (m, 1H), 2,88-2,72 (m, 2H), 1,79-1,70 (m, 3H).

SFC (способ 10): R_T=1,02 мин., площадь пика: 98,7%.

Соединение 9

( S* )-6-(5-фтор-6-морфолино-1 H -бензо[ d ]имидазол-2-ил)-2-метил-7-((1-(пиримидин-2-ил)этил)амино)-2 H -пиразоло[4,3- b ]пиридин-5(4 H )-он

После завершения реакции смесь концентрировали в вакууме с получением остатка, который очищали посредством преп. HPLC (колонка: Phenomenex Gemini C18 250*50, 10 мкм, подвижная фаза A: вода (0,225% FA), подвижная фаза B: ацетонитрил, скорость потока: 22 мл/мин., при условии градиента от 30% B до 60%). Чистые фракции собирали и растворитель выпаривали под вакуумом с получением соединения 9 (16,9 мг, чистота 94,0%, выход 8,71%) в виде желтых твердых веществ.

LC-MS (ESI) (общая процедура A, способ 1): R_T=4,49 минуты, масса рассч. для C₂₄H₂₄FN₉O₂ 489,20, масса/заряд найденное значение 490,0 [M+H]⁺.

Общая процедура A:¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d ⁶) (Varian) δ=12,97 (br. s., 1H), 12,60-12,50 (m, 1H), 10,90-10,83 (m, 1H), 8,89-8,78 (m, 2H), 7,63 (d, J=4,6 Гц, 1H), 7,48-7,30 (m, 2,5H), 7,18 (d, J=7,7 Гц, 0,5H), 6,48-6,36 (m, 1H), 3,93 (d, J=6,4 Гц, 3H), 3,78-3,71 (m, 4H), 3,01-2,92 (m, 4H), 1,74-1,63 (m, 3H).

SFC (способ 14): R_T=2,73 мин., площадь пика: 98,2%.

Соединение 10

( S *)-2-метил-6-(6-морфолино-5-(трифторметил)-1 H -бензо[ d ]имидазол-2-ил)-7-((1-(оксазол-4-ил)этил)амино)-2 H -пиразоло[4,3- b ]пиридин-5(4 H )-он

После завершения реакции смесь очищали с помощью преп. HPLC (колонка: P Agela Durashell C18 150*25, 5 мкм, подвижная фаза A: вода (0,225% FA), подвижная фаза B: ацетонитрил, скорость потока: 22 мл/мин., при условии градиента от 55% B до 85%). Собранные чистые фракции выпаривали под вакуумом для удаления большей части растворителя и затем лиофилизировали до сухого состояния. Остаток дополнительно отделяли с помощью хроматографии со сверхкритической подвижной фазой (условие разделения: колонка: AD (250 мм*30 мм, 5 мкм); подвижная фаза: A: сверхкритический CO₂, B: 0,1% NH₃H₂O EtOH, A:B =60:40 при 60 мл/мин.; температура колонки: 38°C; давление в сопле: 100 бар; температура сопла: 60°C; температура испарителя: 20°C; температура триммера: 25°C; длина волны: 220 нм). Чистую фракцию собирали и растворитель выпаривали под вакуумом до сухого состояния. Остаток ресуспендировали в воде (10 мл) и полученные смеси лиофилизировали до сухого состояния с получением соединения 10 (61,8 мг, чистота 100%, выход 5,30%) в виде светло-желтых твердых веществ.

LC-MS (ESI) (общая процедура A, способ 2): R_T=5,67 минуты, масса рассч. для C₂₄H₂₃F₃N₈O₃ 528,18, масса/заряд найденное значение 529,0 [M+H]⁺.

Общая процедура A:¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d ⁶) Varian) δ=13,31 (s, 1H), 12,28 (d, J=8,6 Гц, 0,5H), 12,20 (d, J=8,6 Гц, 0,5H), 11,02 (s, 1H), 8,38 (d, J=4,9 Гц, 1H), 8,09-8,02 (m, 1,5H), 7,91 (s, 0,5H), 7,80 (s, 0,5H), 7,74 (d, J=1,8 Гц, 1H), 7,72 (s, 0,5H), 6,44 (qd, J=6,7, 13,8 Гц, 1H), 4,06 (s, 3H), 3,79-3,65 (m, 4H), 2,97-2,79 (m, 4H), 1,70 (t, J=6,6 Гц, 3H).

SFC (способ 18): R_T=5,07 мин., площадь пика: 100,0%.

Соединение 11

( R *)-2-метил-6-(6-морфолино-5-(трифторметил)-1 H -бензо[ d ]имидазол-2-ил)-7-((1-(оксазол-4-ил)этил)амино)-2 H -пиразоло[4,3- b ]пиридин-5(4 H )-он

Смесь очищали с помощью преп. HPLC (колонка: P Agela Durashell C18 150*25, 5 мкм, подвижная фаза A: вода (0,225% FA), подвижная фаза B: ацетонитрил, скорость потока: 22 мл/мин., при условии градиента от 55% B до 85%). Чистые фракции собирали и растворитель выпаривали под вакуумом для удаления большей части растворителя и затем лиофилизировали до сухого состояния. Остаток дополнительно отделяли с помощью хроматографии со сверхкритической подвижной фазой (условие разделения: колонка: AD (250 мм*30 мм, 5 мкм); подвижная фаза: A: сверхкритический CO₂, B: 0,1% NH₃H₂O EtOH, A:B =60:40 при 60 мл/мин.; температура колонки: 38°C; давление в сопле: 100 бар; температура сопла: 60°C; температура испарителя: 20°C; температура триммера: 25°C; длина волны: 220 нм). Чистую фракцию собирали и растворитель выпаривали под вакуумом до сухого состояния. Остаток ресуспендировали в воде (10 мл) и полученные смеси лиофилизировали до сухого состояния с получением соединения 11 (57,6 мг, чистота 99,5%, выход 4,91%) в виде светло-желтых твердых веществ.

LC-MS (ESI) (общая процедура A, способ 2): R_T=5,66 минуты, масса рассч. для C₂₄H₂₃F₃N₈O₃ 528,18, масса/заряд найденное значение 529,0 [M+H]⁺.

Общая процедура A:¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d ⁶) (Varian) δ=13,31 (s, 1H), 12,29 (d, J=8,4 Гц, 0,5H), 12,20 (d, J=8,6 Гц, 0,5H), 11,02 (s, 1H), 8,39 (d, J=4,6 Гц, 1H), 8,08-8,03 (m, 1,5H), 7,91 (s, 0,5H), 7,80 (s, 0,5H), 7,74 (d, J=1,8 Гц, 1H), 7,72 (s, 0,5H), 6,50-6,38 (m, 1H), 4,07 (s, 3H), 3,77-3,66 (m, 4H), 2,96-2,81 (m, 4H), 1,76-1,63 (m, 3H).

SFC (способ 18): R_T=5,63 мин., площадь пика: 97,6%.

Соединение 12

6-(6-((2 R ,6 R )-2,6-диметилморфолино)-1 H -бензо[d]имидазол-2-ил)-2-метил-7-((( S* )-1-(пиримидин-2-ил)этил)амино)-2 H -пиразоло[4,3- b ]пиридин-5(4 H )-он

После завершения реакции полученную смесь концентрировали до сухого состояния при пониженном давлении с получением остатка, который очищали с помощью преп. HPLC (колонка: Phenomenex Gemini C18 250*50, 10 мкм, подвижная фаза A: вода (0,225% FA), подвижная фаза B: ацетонитрил, скорость потока: 22 мл/мин., при условии градиента от 22% B до 52%). Чистые фракции собирали и выпаривали до сухого состояния. Затем остаток ресуспендировали в воде (20 мл) и лиофилизировали до сухого состояния с получением продукта в виде красных твердых веществ. Соединение дополнительно очищали с помощью хроматографии со сверхкритической подвижной фазой (условие разделения: AD (250 мм*30 мм, 10 мкм)); подвижная фаза: A: сверхкритический CO₂, B: 0,1% NH₃H₂O IPA, A:B =45:55 при 80 мл/мин.). Фракции собирали и растворитель выпаривали под вакуумом. Остаток ресуспендировали в воде (10 мл) и полученные смеси лиофилизировали до сухого состояния с получением соединения 12 (6,5 мг, чистота 99,1%, выход 7,08%) в виде желтых твердых веществ.

LC-MS (ESI) (общая процедура A, способ 2):R_T=4,17 минуты, масса рассч. для C₂₆H₂₉N₉O₂499,24, масса/заряд найденное значение 500,1 [M+H]⁺.

Общая процедура A:¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d ⁶) (Bruker) δ 12,87 (s, 0,5H), 12,85 (s, 0,5H), 12,69 (d, J=8,3 Гц, 0,5H), 12,64 (d, J=8,3 Гц, 0,5H), 10,87 (br. s., 0,5H), 10,87 (s, 0,5H), 8,89-8,80 (m, 2H), 7,65 (d, J=3,8 Гц, 1H), 7,51 (d, J=8,8 Гц, 0,5H), 7,45 (d, J=8,5 Гц, 0,5H), 7,41 (t, J=4,8 Гц, 1H), 7,18 (d, J=2,0 Гц, 0,5H), 7,06 (s, 0,5H), 6,89 (d, J=8,8 Гц, 1H), 6,52-6,40 (m, 1H), 4,15-4,04 (m, 2H), 3,98-3,90 (m, 3H), 3,20-3,06 (m, 2H), 2,82 (dd, J=5,8, 11,8 Гц, 2H), 1,77-1,69 (m, 3H), 1,27-1,23 (m, 6H).

SFC (способ 10): R_T=1,05 мин., площадь пика: 99,5%.

Соединение 13

( S )-6-(7-фтор-6-(тетрагидро-2 H -пиран-4-ил)-1 H -бензо[d]имидазол-2-ил)-2-метил-7-((1-(пиримидин-2-ил)этил)амино)-2 H -пиразоло[4,3- b ]пиридин-5(4 H )-он

После завершения реакции полученную смесь концентрировали до сухого состояния при пониженном давлении с получением остатка, который очищали с помощью преп. HPLC (колонка: Gemini 150*25, 5 мкм, подвижная фаза A: вода (10 мМ NH₄HCO₃), подвижная фаза B: ацетонитрил, скорость потока: 30 мл/мин., при условии градиента от 45% B до 70%). Чистые фракции собирали и летучие вещества удаляли под вакуумом. Остаток ресуспендировали в воде (20 мл) и полученную смесь лиофилизировали до сухого состояния с получением соединения 13 (20,5 мг, чистота 98,9%, выход 18,6%) в виде бледно-желтых твердых веществ.

LC-MS (ESI) (общая процедура A, способ 1):R_T=5,05 минуты, масса рассч. для C₂₅H₂₅FN₈O₂488,21, масса/заряд найденное значение 489,0 [M+H]⁺.

Общая процедура A:¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d ⁶) (Varian) δ 13,39 (s, 0,1H), 13,11 (s, 0,9H), 12,68 (d, J=7,9 Гц, 0,9H), 12,43 (d, J=8,8 Гц, 0,1H), 11,07 (s, 0,1H), 10,94 (s, 0,9H), 8,87 (d, J=4,9 Гц, 0,3H), 8,83 (d, J=4,9 Гц, 1,7H), 7,72 (s, 0,1H), 7,68 (s, 0,9H), 7,49-7,40 (m, 2H), 7,15 (d, J=6,6 Гц, 0,1H), 7,11-7,04 (m, 0,9H), 6,51-6,37 (m, 1H), 4,02-3,95 (m, 5H), 3,50 (t, J=10,8 Гц, 2H), 3,21 (t, J=12,0 Гц, 1H), 1,90-1,77 (m, 2H), 1,76-1,64 (m, 5H).

SFC (способ 13): R_T=1,19 мин., площадь пика: 100%.

Соединение 14

( S* )-6-(7-фтор-6-морфолино-1 H -бензо[d]имидазол-2-ил)-2-метил-7-((1-(пиримидин-2-ил)этил)амино)-2 H -пиразоло[4,3- b ]пиридин-5(4 H )-он

После завершения реакции смесь концентрировали в вакууме с получением остатка, который очищали посредством преп. HPLC (колонка: Xtimate C18 150*25 мм*5 мкм, подвижная фаза A: вода (0,225% FA), подвижная фаза B: ацетонитрил, скорость потока: 25 мл/мин., при условии градиента от 27% B до 57%). Чистые фракции собирали и летучие вещества удаляли под вакуумом. Остаток ресуспендировали в воде (20 мл) и полученную смесь лиофилизировали до сухого состояния с получением соединения 14 (20,0 мг, чистота 98,6%, выход 16,1%) в виде бледно-желтых твердых веществ.

LC-MS (ESI) (общая процедура A, способ 1): R_T=4,51 минуты, масса рассч. для C₂₄H₂₄FN₉O₂489,20, масса/заряд найденное значение 490,0 [M+H]⁺.

Общая процедура A: ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d ⁶) (Varian) δ 13,32 (s, 0,2H), 13,05 (s, 0,8H), 12,68 (d, J=7,9 Гц, 0,8H), 12,41 (d, J=8,2 Гц, 0,2H), 11,06 (br. s., 0,2H), 10,92 (s, 0,8H), 8,86 (d, J=4,9 Гц, 0,5H), 8,82 (d, J=4,9 Гц, 1,5H), 7,72 (s, 0,2H), 7,67 (s, 0,8H), 7,46-7,36 (m, 2H), 7,00-6,89 (m, 1H), 6,51-6,37 (m, 1H), 4,01-3,93 (m, 3H), 3,78 (t, J=4,5 Гц, 4H), 3,09-2,95 (m, 4H), 1,75-1,68 (m, 3H).

SFC (способ 13): R_T =1,15 мин., площадь пика: 100%.

Соединение 15

( S* )-6-(7-фтор-6-(пиперидин-1-ил)-1 H -бензо[ d ]имидазол-2-ил)-2-метил-7-((1-(пиримидин-2-ил)этил)амино)-2 H -пиразоло[4,3- b ]пиридин-5(4 H )-он

и

и соединение 16

( R* )-6-(7-фтор-6-(пиперидин-1-ил)-1 H -бензо[ d ]имидазол-2-ил)-2-метил-7-((1-(пиримидин-2-ил)этил)амино)-2 H -пиразоло[4,3- b ]пиридин-5(4 H )-он

После завершения реакции смесь концентрировали в вакууме с получением остатка, который очищали посредством преп. HPLC (колонка: Xtimate C18 150×25 мм x 5 мкм, подвижная фаза A: вода (0,225% FA), подвижная фаза B: ацетонитрил, скорость потока: 22 мл/мин., при условии градиента от 22% B до 52%). Чистые фракции собирали и летучие вещества удаляли под вакуумом. Остаток ресуспендировали в воде (10 мл) и полученную смесь лиофилизировали до сухого состояния с получением рацемического продукта. Рацемический продукт отделяли с помощью хроматографии со сверхкритической подвижной фазой (условие разделения: C2 (250 мм 30 мм, 10 мкм); подвижная фаза: A: сверхкритический CO₂, B: 0,1% NH₃H₂O MeOH, A: B =60: 40 при 55 мл/мин.; температура колонки: 38°C; давление в сопле: 100 бар; температура сопла: 60°C; температура испарителя: 20°C; температура триммера: 25°C; длина волны: 220 нм). Фракции собирали и растворитель выпаривали под вакуумом. Остаток ресуспендировали в воде (10 мл) и полученные смеси лиофилизировали с получением соединения 15 (10,0 мг, чистота 100%, выход 1,18%) в виде желтого твердого вещества, и соединения 16 (9,3 мг, чистота 95,4%, выход 1,04%) в виде желтого твердого вещества.

Соединение 15

LC-MS (ESI) (общая процедура A, способ 2): R_T=3,79 минуты, масса рассч. для C₂₅H₂₆FN₉O 487,22, масса/заряд найденное значение 488,0 [M+H]⁺.

Общая процедура A:¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d ⁶) (Varian) 13,25(br. s., 0,2H), 13,00 (br. s., 0,8H), 12,66 (d, J=7,9 Гц, 0,8H), 12,40 (d, J=7,7 Гц, 0,2H), 11,05 (br. s.,0,2H), 10,92 (br. s., 0,8H), 8,84 (d, J=4,9 Гц, 0,4H), 8,80 (d, J=4,9 Гц, 1,6H), 7,70 (s, 0,2H), 7,65 (s, 0,8H), 7,41 (t, J=4,9 Гц, 1H), 7,35 (d, J=8,6 Гц, 1H), 6,97-6,87 (m, 1H), 6,47-6,35 (m, 1H), 3,99-3,89 (m, 3H), 3,02-2,87 (m, 4H), 1,78-1,59 (m, 7H), 1,58-1,45 (m, 2H).

SFC (способ 21): RT=8,17 мин., пик: 100%.

Соединение 16

LC-MS (ESI) (общая процедура A, способ 2): R_T=3,78 минуты, масса рассч. для C₂₅H₂₆FN₉O 487,22, масса/заряд найденное значение 488,0 [M+H]⁺.

Общая процедура A:¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d⁶) (Varian) 13,34-13,26 (br. s., 0,2H), 13,01 (br. s., 0,8H), 12,66 (d, J=7,9 Гц, 0,8H), 12,39 (d, J=8,2 Гц, 0,2H), 10,93 (br. s., 1H), 8,84 (d, J=4,9 Гц, 0,4H), 8,80 (d, J=4,9 Гц, 1,6H), 7,70 (s, 0,2H), 7,65 (s, 0,8H), 7,41 (t, J=4,9 Гц, 1H), 7,34 (d, J=8,4 Гц, 1H), 6,96-6,88 (m, 1H), 6,45-6,36 (m, 1H), 3,97-3,92 (m, 3H), 3,00-2,90 (m, 4H), 1,73-1,63 (m, 7H), 1,56-1,47 (m, 2H).

SFC (способ 21): R_T=10,4 мин., пик: 99,5%.

Соединение 17

( S* )-6-(4,7-дифтор-6-морфолино-1 H -бензо[ d ]имидазол-2-ил)-2-метил-7-((1-(пиримидин-2-ил)этил)амино)-2 H -пиразоло[4,3- b ]пиридин-5(4 H )-он

После завершения реакции полученную смесь экстрагировали этилацетатом (20 мл). Отделенный органический слой промывали водой (10 мл x 3), высушивали над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали до сухого состояния при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью преп. HPLC (колонка: Phenomenex Gemini C18 250*50, 10 мкм, подвижная фаза A: вода (0,225% FA), подвижная фаза B: ацетонитрил, скорость потока: 22 мл/мин., при условии градиента от 46% B до 76%). Чистые фракции собирали и летучие вещества удаляли под вакуумом. Остаток ресуспендировали в воде (10 мл) и полученную смесь лиофилизировали до сухого состояния с получением соединения 17 (5,0 мг, чистота 98,3%, выход 10,3%) в виде пурпурного твердого вещества.

LC-MS (ESI) (общая процедура A, способ 1):R_T=4,92 минуты, масса рассч. для C₂₄H₂₃F₂N₉O₂ 507,19, масса/заряд найденное значение 508,0 [M+H]⁺.

Общая процедура A:¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d ⁶) (Varian) 13,72 (s, 1H), 11,76 (s, 1H), 11,10 (s, 1H), 8,86-8,71 (m, 2H), 7,73 (s, 1H), 7,39 (s, 1H), 6,89-6,41 (m, 2H), 3,97 (s, 3H), 3,77 (s, 4H), 3,32-2,92 (m, 4H), 1,72 (d, J=6,8 Гц, 3H).

SFC (способ 16): R_T=4,87 мин., пик: 98,9%.

Соединение 18

( S )-2-метил-6-(6-(4-метилпиперазин-1-ил)-1 H -бензо[ d ]имидазол-2-ил)-7-((1-фенилэтил)амино)-2 H -пиразоло[4,3- b ]пиридин-5(4 H )-он

После завершения реакции смесь фильтровали и фильтрат концентрировали до сухого состояния при пониженном давлении. Остаток экстрагировали дихлорметаном (30 мл x 3). Объединенные органические слои высушивали над Na₂SO₄ (твердое вещество), фильтровали и фильтрат концентрировали до сухого состояния при пониженном давлении с получением остатка, который очищали с помощью преп. HPLC (колонка: Phenomenex Gemini C18 250*50, 10 мкм, подвижная фаза A: вода (0,05% гидроксида аммония об./об.), подвижная фаза B: ацетонитрил, скорость потока: 22 мл/мин., при условии градиента от 48% B до 78%). Чистые фракции собирали и растворитель выпаривали под вакуумом. Остаток ресуспендировали в воде (10 мл) и лиофилизировали до сухого состояния с получением соединения 18 (1,8 мг, чистота 98,6%, выход 0,98%) в виде желтых твердых веществ.

LC-MS (ESI) (общая процедура A, способ 2): R_T=4,35 минуты, масса рассч. для C₂₇H₃₀N₈O 482,25, масса/заряд найденное значение 483,1 [M+H]⁺.

Общая процедура A:¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d ⁶) (Varian) δ=12,88 (br. s., 0,4H), 12,86 (br. s., 0,6H), 12,63 (d, J=9,3 Гц, 0,4H), 12,54 (d, J=8,6 Гц, 0,6H), 10,87 (br. s., 1H), 7,67-7,64 (m, 1H), 7,51 (d, J=8,8 Гц, 0,4H), 7,48 (d, J=8,8 Гц, 0,6H), 7,47-7,45 (m, 1,6H), 7,43 (s, 0,4H), 7,34 (dt, J=4,0, 7,6 Гц, 2H), 7,24-7,18 (m, 1,6H), 7,10 (s, 0,4H), 6,95-6,88 (m, 1H), 6,45-6,34 (m, 1H), 4,01 (s, 3H), 3,17-3,09 (m, 4H), 2,60-2,53 (m, 4H), 2,31-2,24 (m, 3H), 1,72-1,64 (m, 3H).

SFC (способ 10): R_T=2,71 мин., площадь пика: 100%.

Соединение 19

( Rac )-2-метил-6-(6-морфолино-5-(трифторметил)-1 H -бензо[ d ]имидазол-2-ил)-7-((1-(пиримидин-2-ил)этил)амино)-2 H -пиразоло[4,3- b ]пиридин-5(4 H )-он

После завершения реакции смесь концентрировали в вакууме с получением остатка, который очищали посредством преп. HPLC (колонка: Phenomenex Gemini C18 250*50, 10 мкм, подвижная фаза A: вода (0,225% FA), подвижная фаза B: ацетонитрил, скорость потока: 22 мл/мин., при условии градиента от 40% B до 70%). Чистые фракции собирали и летучие вещества удаляли под вакуумом. Остаток суспендировали в воде (15 мл) и лиофилизировали с получением соединения 19 (10,0 мг, выход 5,90%, чистота 98,1%) в виде бледно-желтых твердых веществ.

LC-MS (ESI) (общая процедура A, способ 2):R_T=5,66 минуты, масса рассч. для C₂₅H₂₄F₃N₉O₂ 539,20, масса/заряд найденное значение 540,0 [M+H]⁺.

Общая процедура A:¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d ⁶) (Bruker) δ 13,30 (s, 0,5H), 13,28 (s, 0,5H), 12,65 (d, J=8,0 Гц, 0,5H), 12,53 (d, J=8,3 Гц, 0,5H), 10,96 (br. s., 0,5H), 10,96 (br. s., 0,5H), 8,89 (d, J=4,8 Гц, 1H), 8,85 (d, J=4,8 Гц, 1H), 8,05 (s, 0,5H), 7,92 (s, 0,5H), 7,83 (s, 0,5H), 7,74 (s, 0,5H), 7,69 (s, 1H), 7,47-7,39 (m, 1H), 6,53-6,44 (m, 1H), 4,00-3,94 (m, 3H), 3,80-3,66 (m, 4H), 2,97-2,90 (m, 2H), 2,89-2,83 (m, 2H), 1,74 (dd, J=3,5, 6,8 Гц, 3H).

SFC (способ 16): R_T=1,99 мин., площадь пика: 50,8%; R_T=2,15 мин., площадь пика: 49,2%.

Соединение 20

( S *)2-метил-6-(6-морфолино-5-(трифторметил)-1 H -бензо[ d ]имидазол-2-ил)-7-((1-(пиримидин-2-ил)этил)амино)-2 H -пиразоло[4,3- b ]пиридин-5(4 H )-он

и

Соединение 21

( R *)-2-метил-6-(6-морфолино-5-(трифторметил)-1 H -бензо[ d ]имидазол-2-ил)-7-((1-(пиримидин-2-ил)этил)амино)-2 H -пиразоло[4,3- b ]пиридин-5(4 H )-он

Соединение 19 отделяли с помощью хроматографии со сверхкритической подвижной фазой (условие разделения: AD (250 мм*30 мм, 10 мкм); подвижная фаза: A: сверхкритический CO₂, B: 0,1% NH₃H₂O EtOH, A:B =55:45 при 80 мл/мин.; температура колонки: 38°C; давление в сопле: 100 бар; температура сопла: 60°C; температура испарителя: 20°C; температура триммера: 25°C; длина волны: 220 нм). Чистые фракции собирали и растворитель выпаривали под вакуумом. Остаток ресуспендировали в воде (10 мл) и полученные смеси лиофилизировали до сухого состояния с получением соединения 20 (7,9 мг, чистота 99,2%, выход 4,71%) в виде бледно-желтых твердых веществ и соединения 21 (4,5 мг, чистота 99,6%, выход 2,69%) в виде бледно-желтых твердых веществ.

Соединение 20

LC-MS (ESI) (общая процедура A, способ 2):R_T=5,53 минуты, масса рассч. для C₂₅H₂₄F₃N₉O₂ 539,20, масса/заряд найденное значение 540,0 [M+H]⁺.

Общая процедура A:¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d⁶) (Varian) δ 13,30 (br. s., 0,5H), 13,28 (s, 0,5H), 12,65 (d, J=8,2 Гц, 0,5H), 12,53 (d, J=8,4 Гц, 0,5H), 10,97 (br. s., 1H), 8,89 (d, J=4,9 Гц, 1H), 8,85 (d, J=4,9 Гц, 1H), 8,05 (s, 0,5H), 7,92 (s, 0,5H), 7,83 (s, 0,5H), 7,74 (s, 0,5H), 7,69 (s, 1H), 7,49-7,37 (m, 1H), 6,49 (квинтет, J=7,1 Гц, 1H), 3,98 (s, 3H), 3,81-3,62 (m, 4H), 3,03-2,77 (m, 4H), 1,80-1,68 (m, 3H).

SFC (способ 16): R_T=5,34 мин., площадь пика: 100%.

Соединение 21

LC-MS (ESI) (общая процедура A, способ 2):R_T=5,50 минуты, масса рассч. для C₂₅H₂₄F₃N₉O₂ 539,20, масса/заряд найденное значение 540,0 [M+H]⁺.

Общая процедура A: ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d ⁶) (Varian) δ 13,31 (br. s., 0,5H), 13,29 (br. s., 0,5H), 12,65 (d, J=8,2 Гц, 0,5H), 12,52 (d, J=8,4 Гц, 0,5H), 10,97 (br. s., 1H), 8,89 (d, J=4,9 Гц, 1H), 8,85 (d, J=4,9 Гц, 1H), 8,05 (s, 0,5H), 7,92 (s, 0,5H), 7,83 (s, 0,5H), 7,74 (s, 0,5H), 7,69 (s, 1H), 7,48-7,39 (m, 1H), 6,49 (квинтет, J=7,1 Гц, 1H), 3,98 (s, 3H), 3,86-3,60 (m, 4H), 3,02-2,77 (m, 4H), 1,80-1,67 (m, 3H).

SFC (способ 16): R_T=5,82 мин., площадь пика: 99,8%.

Соединение 22

( S* )-2-метил-7-((1-(пиримидин-2-ил)этил)амино)-6-(6-(тетрагидро-2 H -пиран-4-ил)-1H-бензо[d]имидазол-2-ил)-2 H -пиразоло[4,3- b ]пиридин-5(4 H )-он

После завершения реакции смесь концентрировали в вакууме с получением остатка, который очищали посредством преп. HPLC (колонка: Phenomenex Gemini 150*25 мм*10 мкм, подвижная фаза A: вода (0,05% гидроксида аммония об./об.), подвижная фаза B: ацетонитрил, скорость потока: 22 мл/мин., при условии градиента от 30% B до 60%). Чистые фракции собирали и растворитель выпаривали под вакуумом с получением соединения 22 (32,9 мг, чистота 96,3%, выход 9,57%) в виде белых твердых веществ.

LC-MS (ESI) (общая процедура A, способ 2): R_T=4,22 минуты, масса рассч. для C₂₅H₂₆N₈O₂ 470,22, масса/заряд найденное значение 471,0 [M+H]⁺.

Общая процедура A:¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d ₆) (Varian) δ 12,97-12,92 (m, 1H), 12,79-12,71 (m, 1H), 10,89 (d, J=5,50 Гц, 1H), 8,86 (t, J=5,20 Гц, 2H), 7,67 (s, 1H), 7,59-7,50 (m, 1,5H), 7,45-7,40 (m, 1,5H), 7,07 (d, J=8,20 Гц, 1H), 6,52-6,43 (m, 1H), 4,01-3,94 (m, 5H), 3,49-3,41 (m, 2H), 2,93-2,81 (m, 1H), 1,80-1,69 (m, 7H)

SFC (способ 10): R_T=1,38 мин., площадь пика: 95,8%.

Соединение 23

( S* )-2-метил-7-((2-метил-1-(пиримидин-2-ил)пропил)амино)-6-(6-(4-метилпиперазин-1-ил)-1 H -имидазо[4,5- c ]пиридин-2-ил)-2 H -пиразоло[4,3- b ]пиридин-5(4 H )-он

После завершения реакции смесь экстрагировали с помощью дихлорметана (20 мл). Отделенный органический слой промывали водой (10 мл x 5), высушивали над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного продукта, который очищали посредством преп. тонкослойной хроматографии (дихлорметан:метанол=10: 1). Затем продукт дополнительно очищали посредством преп. HPLC (колонка: Gemini 150*25, 5 мкм, подвижная фаза A: вода (0,05% гидроксид аммония об./об.), подвижная фаза B: ацетонитрил, скорость потока: 22 мл/мин., при условии градиента от 25% B до 55%). Чистые фракции собирали и летучие вещества удаляли под вакуумом. Остаток ресуспендировали в ацетонитриле (2 мл) и воде (10 мл). Смесь лиофилизировали до сухого состояния с получением соединения 23 (10,1 мг, чистота 97,6%, выход 4,64%) в виде белого порошка.

LC-MS (ESI) (общая процедура A, способ 1): R_T=4,21 минуты, масса рассч. для C₂₆H₃₁N₁₁O 513,27, масса/заряд найденное значение 514,1 [M+H]⁺.

Общая процедура A:¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d ⁶) Varian) δ 13,03 (s, 0,3H), 12,98 (s, 0,7H), 12,57 (d, J=9,0 Гц, 0,3H), 12,42 (d, J=9,0 Гц, 0,7H), 10,89 (br. s., 1H), 8,80 (d, J=5,1 Гц, 2H), 8,55-8,40 (m, 1H), 7,63 (s, 1H), 7,37 (t, J=4,9 Гц, 1H), 6,99 (s, 0,7H), 6,78 (s, 0,3H), 6,47-6,40 (m, 1H), 3,92-3,89 (m, 3H), 3,44-3,38 (m, 4H), 2,65-2,57 (m, 1H), 2,48-2,42 (m, 4H), 2,23 (s, 3H), 1,08-1,00 (m, 6H)

SFC (способ 12): R_T=2,11 мин., площадь пика: 100%.

Соединение 24

6-(6-(( Цис )-2,6-диметилморфолино)-1 H -бензо[ d ]имидазол-2-ил)-2-метил-7-((( S )-1-(пиримидин-2-ил)этил)амино)-2 H -пиразоло[4,3- b ]пиридин-5(4 H )-он

После завершения реакции смесь экстрагировали с помощью дихлорметана (30 мл x 3). Объединенные органические слои промывали водой (30 мл x 3) и солевым раствором (30 мл), высушивали над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного продукта, который очищали посредством преп. HPLC (колонка: Phenomenex Gemini C18 250*50, 10 мкм, подвижная фаза A: вода (0,225% FA), подвижная фаза B: ацетонитрил, скорость потока: 22 мл/мин., при условии градиента от 20% B до 50%). Чистые фракции собирали и растворитель выпаривали под вакуумом. Затем остаток лиофилизировали до сухого состояния с получением желаемого соединения в виде желтых твердых веществ. Продукт дополнительно очищали посредством хроматографии со сверхкритической подвижной фазой (условие разделения: AD (250 мм*30 мм, 10 мкм); подвижная фаза: A: сверхкритический CO₂, B: 0,1% NH₃H₂O IPA, A:B=55:45 при 50 мл/мин.; температура колонки: 38°C; давление в сопле: 100 бар; температура сопла: 60°C; температура испарителя: 20°C; температура триммера: 25°C; длина волны: 220 нм) с получением соединения 24 (3,20 мг, 98,0% чистота, 3,05% выход) в виде желтых твердых веществ.

LC-MS (ESI) (общая процедура A, способ 2):R_T=3,93 минуты, масса рассч. для C₂₆H₂₉N₉O₂ 499,24, масса/заряд найденное значение 500,1 [M+H]⁺.

Общая процедура A:¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d ⁶) (Varian) δ 12,87 (br. s., 0,4H), 12,85 (br. s., 0,6H), 12,68 (d, J=8,4 Гц, 0,4H), 12,64 (d, J=8,2 Гц, 0,6H), 10,87 (br. s., 1H), 8,84 (dd, J=5,0, 6,3 Гц, 2H), 7,65 (d, J=4,9 Гц, 1H), 7,51 (d, J=8,6 Гц, 0,4H), 7,45 (d, J=8,8 Гц, 0,6H), 7,43-7,38 (m, 1H), 7,20 (d, J=2,0 Гц, 0,6H), 7,06 (s, 0,4H), 6,92 (d, J=8,8 Гц, 1H), 6,54-6,41 (m, 1H), 3,95 (d, J=7,3 Гц, 3H), 3,84-3,68 (m, 2H), 3,61-3,45 (m, 2H), 2,36-2,21 (m, 2H), 1,79-1,66 (m, 3H), 1,17 (d, J=6,2 Гц, 6H)

SFC (способ 10): R_T=1,02 мин., площадь пика: 100%.

Соединение 25

( S )-6-(6-(2,2-дифторморфолино)-1 H -бензо[d]имидазол-2-ил)-2-метил-7-((1-(пиримидин-2-ил)этил)амино)-2 H -пиразоло[4,3- b ]пиридин-5(4 H )-он

После завершения реакции смесь экстрагировали с помощью дихлорметана (10 мл x 3). Объединенные органические слои промывали солевым раствором (10 мл), высушивали над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали до сухого состояния при пониженном давлении с получением неочищенного продукта, который очищали с помощью преп. HPLC (колонка: Kromasil 150×25 мм x 10 мкм, подвижная фаза A: вода (0,05% гидроксида аммония), подвижная фаза B: ацетонитрил, скорость потока: 22 мл/мин., при условии градиента от 32% B до 62%). Чистые фракции собирали и летучие вещества удаляли под вакуумом. Остаток ресуспендировали в воде (10 мл) и полученную смесь лиофилизировали с получением соединения 25 (5,00 мг, чистота 95,1%, выход 4,7%) в виде белого порошка.

LCMS (ESI) (общая процедура A, способ 2): R_T=4,49 минуты, масса рассч. для C₂₄H₂₃F₂N₉O₂ 507,19 масса/заряд, найденное значение 508,0 [M+1]⁺.

Общая процедура A:¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d ⁶) (Bruker) δ 12,94-12,93 (m, 1H), 12,70 (d, J=8,4, 0,5 H), 12,64 (d, J=8,4, 0,5 H), 10,89 (s, 1H), 8,86 (d, J=4,5 Гц, 2H), 7,66 (d, J=3,8 Гц, 1H), 7,56 (d, J=8,5 Гц, 0,5H), 7,50 (d, J=8,5 Гц, 0,5H), 7,42 (t, J=4,9 Гц, 1H), 7,28 (d, J=2,0 Гц, 0,5H), 7,16 (d, J=1,2 Гц, 0,5H), 7,00-6,93 (m, 1H), 6,55-6,41 (m, 1H), 4,25-4,17 (m, 2H), 3,96 (d, J=4,0 Гц, 3H), 3,60-3,47 (m, 2H), 3,32-3,27 (m, 2H), 1,73 (t, J=6,8 Гц, 3H).

SFC (способ 19): R_T=5,06 мин., площадь пика: 99,1%.

Соединение 26

( S* )-2-метил-7-((1-(пиримидин-2-ил)этил)амино)-6-(6-(4-(2,2,2-трифторэтил)пиперазин-1-ил)-1 H -бензо[ d ]имидазол-2-ил)-2 H -пиразоло[4,3- b ]пиридин-5(4 H )-он

После завершения реакции смесь концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного продукта, который очищали с помощью преп. HPLC (колонка: Xtimate C18 150*25 мм*5 мкм, подвижная фаза A: вода (0,225% FA), подвижная фаза B: ацетонитрил, скорость потока: 22 мл/мин., при условии градиента от 27% B до 37%). Чистые фракции собирали и растворитель выпаривали под вакуумом. Остаток суспендировали в воде (50 мл) и лиофилизировали до сухого состояния с получением неочищенного соединения. Неочищенное соединение отделяли посредством хроматографии со сверхкритической подвижной фазой (условие разделения: OJ (250 мм*30 мм, 10 мкм); подвижная фаза: A: сверхкритический CO₂, B: 0,1% NH₃H₂O MeOH, A:B=65:35 при 50 мл/мин.; температура колонки: 38°C; давление в сопле: 100 бар; температура сопла: 60°C; температура испарителя: 20°C; температура триммера: 25°C; длина волны: 220 нм). Чистые фракции собирали и растворитель выпаривали под вакуумом. Остаток ресуспендировали в воде (50 мл) и полученные смеси лиофилизировали до сухого состояния с получением соединения 26 (1,5 мг, чистота 99,85%, выход 1,684%) в виде желтых твердых веществ.

LC-MS (ESI) (общая процедура A, способ 2):R_T=4,10 минуты, масса рассч. для C₂₆H₂₇F₃N₁₀O 552,23 масса/заряд найденное значение 553,1 [M+H]⁺.

Общая процедура A:¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d ⁶) (Varian) ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d⁶) 12,85 (br. s, 1H), 12,73 (d, J=7,9 Гц, 0,4H), 12,64 (d, J=8,2 Гц, 0,6H), 10,86 (br. s, 1H), 8,85 (d, J=3,1 Гц, 1H), 8,84 (d, J=3,1 Гц, 1H), 7,65 (s, 1H), 7,50 (d, J=8,6 Гц, 0,4H), 7,44 (d, J=9,3 Гц, 0,6H), 7,42-7,37 (m, 1H), 7,21-7,17 (m, 0,6H), 7,09-7,05 (m, 0,4H), 6,93-6,86 (m, 1H), 6,51-6,41 (m, 1H), 3,96 (s, 3H), 3,26-3,21 (m, 2H), 3,16-3,09 (m, 4H), 2,85-2,77 (m, 4H), 1,72 (t, J=6,2 Гц, 3H)

SFC (способ 12): R_T=2,05 мин., площадь пика: 100%.

Соединение 27

( S )-6-(7-фтор-6-(2-оксопиперидин-1-ил)-1 H -бензо[ d ]имидазол-2-ил)-2-метил-7-((1-(пиримидин-2-ил)этил)амино)-2 H -пиразоло[4,3- b ]пиридин-5(4 H )-он

После завершения реакции смесь экстрагировали с помощью EtOAc (200 мл). Отделенный органический слой промывали водой (100 мл), высушивали над Na₂SO₄ и концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного продукта, который очищали посредством преп. HPLC (колонка: Phenomenex Gemini 150*25 мм*10 мкм, подвижная фаза A: вода (0,05% гидроксида аммония об./об.), подвижная фаза B: ацетонитрил, скорость потока: 22 мл/мин., при условии градиента от 24% B до 54%). Чистые фракции собирали и растворитель выпаривали под вакуумом. Остаток лиофилизировали до сухого состояния с получением соединения 27 (19,3 мг, чистота 99,1%, выход 7,91%) в виде белых твердых веществ.

LC-MS (ESI) (общая процедура A, способ 1): R_T=4,25 минуты, масса рассч. для C₂₅H₂₄FN₉O₂ 501,20, масса/заряд найденное значение 502,0 [M+H]⁺.

Общая процедура A:¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d ⁶) (Varian) 13,22 (br. s., 1H), 12,65-12,59 (m, 1H), 8,84-8,78 (m, 2H), 7,69 (s, 1H), 7,52-7,46 (m, 1H), 7,43 (t, J=4,9 Гц, 1H), 7,07-6,98 (m, 1H), 6,45 (квинтет, J=7,1 Гц, 1H), 3,98 (s, 3H), 3,66-3,53 (m, 2H), 2,45-2,37 (m, 2H), 1,96-1,83 (m, 4H), 1,70 (d, J=6,8 Гц, 3H)

SFC (способ 13): R_T=0,75 мин., площадь пика: 100%.

Соединение 28

( S* )-2-метил-6-(7-метил-6-морфолино-1 H -бензо[ d ]имидазол-2-ил)-7-((1-(пиримидин-2-ил)этил)амино)-2 H -пиразоло[4,3- b ]пиридин-5(4 H )-он

После завершения реакции смесь концентрировали в вакууме с получением остатка, который очищали посредством преп. HPLC (колонка: Phenomenex Gemini C18 250*50, 10 мкм, подвижная фаза A: вода (0,225% FA), подвижная фаза B: ацетонитрил, скорость потока: 22 мл/мин., при условии градиента от 30% B до 60%). Чистые фракции собирали и растворитель выпаривали под вакуумом. Остаток ресуспендировали в воде (50 мл) и полученные смеси лиофилизировали до сухого состояния и разделяли посредством хроматографии со сверхкритической подвижной фазой (условие разделения: AD (250 мм*30 мм, 5 мкм); подвижная фаза: A: сверхкритический CO₂, B: 0,1% NH₃H₂O EtOH, A:B =50:50 при 50 мл/мин.; температура колонки: 38°C; давление в сопле: 100 бар; температура сопла: 60°C; температура испарителя: 20°C; температура триммера: 25°C; длина волны: 220 нм). Чистые фракции собирали и растворитель выпаривали под вакуумом. Остаток ресуспендировали в воде (50 мл) и полученную смесь лиофилизировали до сухого состояния с получением соединения 28 (26,2 мг, чистота 97,7%, выход 10,5%) в виде желтых твердых веществ.

LC-MS (ESI) (общая процедура A, способ 1):R_T=4,71 минуты, масса рассч. для C₂₅H₂₇N₉O₂ 485,23, масса/заряд найденное значение 486,0 [M+H]⁺.

Общая процедура A:¹H ЯМР (400МГц, DMSO-d ⁶) (Varian) 13,04-12,90 (m, 1H), 12,87 (br s, 1H), 10,92 (s, 1H), 8,86 (s, 1H), 8,85 (s, 1H), 7,69 (s, 1H), 7,48-7,44 (m, 1H), 7,44-7,40 (m, 1H), 7,03-6,93 (m, 1H), 6,51 (t, J=6,7 Гц, 1H), 4,00 (s, 3H), 3,84-3,72 (m, 4H), 2,96-2,81 (m, 4H), 2,71-2,58 (m, 3H), 1,70 (d, J=6,8 Гц, 3H)

SFC (способ 13): R_T=2,47 мин., площадь пика: 100%.

Соединение 29

( S *)-6-(4-фтор-6-морфолино-1H-бензо[d]имидазол-2-ил)-7-((2-метокси-1-(пиримидин-2-ил)этил)амино)-2-метил-2H-пиразоло[4,3-b]пиридин-5(4H)-он

и

Соединение 30

( R *)-6-(4-фтор-6-морфолино-1 H -бензо[ d ]имидазол-2-ил)-7-((2-метокси-1-(пиримидин-2-ил)этил)амино)-2-метил-2 H -пиразоло[4,3- b ]пиридин-5(4 H )-он

После завершения реакции смесь экстрагировали с помощью дихлорметана (100 мл). Отделенный органический слой промывали водой (50 мл х 3), высушивали над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного продукта, который очищали посредством преп. HPLC (колонка: Phenomenex Gemini C18 250*50, 10 мкм, подвижная фаза A: вода (0,225% FA), подвижная фаза B: ацетонитрил, скорость потока: 22 мл/мин., при условии градиента от 30% B до 60%). Чистые фракции собирали и растворитель выпаривали под вакуумом. Остаток лиофилизировали до сухого состояния с получением рацемического продукта, который разделяли посредством хроматографии со сверхкритической подвижной фазой (условие разделения: AD (250 мм*30 мм, 5 мкм); подвижная фаза: A: сверхкритический CO₂, B: 0,1% NH₃H₂O IPA, A: B =60: 40 при 50 мл/мин.; температура колонки: 38°C; давление в сопле: 100 бар; температура сопла: 60°C; температура испарителя: 20°C; температура триммера: 25°C; длина волны: 220 нм). Чистые фракции собирали и растворитель выпаривали под вакуумом. Остаток ресуспендировали в воде (50 мл) и полученные смеси лиофилизировали до сухого состояния с получением соединения 29 (26,3 мг, чистота 96,4%, выход 12,8%) в виде белых твердых веществ и соединения 30 (21,9 мг, чистота 100%, выход 11,1%) в виде белых твердых веществ.

Соединение 29

LC-MS (ESI) (общая процедура A, способ 2):R_T=4,07 минуты, масса рассч. для C₂₅H₂₆FN₉O₃ 519,21, масса/заряд найденное значение 520,0 [M+H]⁺.

Общая процедура A:¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d ⁶) (Varian) 13,24-13,21 (m, 0,1H), 13,01-12,95 (m, 0,9H), 12,52-12,46 (m, 0,9H), 12,46-12,42 (m, 0,1H), 11,06 (s, 0,1H), 10,91 (s, 0,9H), 8,83 (d, J=4,9 Гц, 0,2H), 8,77 (d, J=4,9 Гц, 1,8H), 7,69 (s, 0,1H), 7,64 (s, 0,9H), 7,43-7,41 (m, 0,1H), 7,40-7,36 (m, 0,9H), 7,06-7,02 (m, 0,9H), 6,89-6,87 (m, 0,1H), 6,87-6,82 (m, 0,1H), 6,78-6,71 (m, 0,9H), 6,64-6,59 (m, 0,1H), 6,56-6,49 (m, 0,9H), 4,16-4,09 (m, 1H), 4,03-3,96 (m, 1H), 3,92 (s, 0,3H), 3,89 (s, 2,7H), 3,80-3,72 (m, 4H), 3,33-3,30 (m, 3H), 3,15-3,06 (m, 4H)

SFC (способ 20): R_T=7,83 мин., площадь пика: 100%.

Соединение 30

Общая процедура A:¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d ⁶) (Varian) 13,24-13,22 (m, 0,1H), 13,02-12,95 (m, 0,9H), 12,52-12,47 (m, 0,9H), 12,46-12,43 (m, 0,1H), 11,06 (s, 0,1H), 10,91 (s, 0,9H), 8,83 (d, J=4,9 Гц, 0,2H), 8,77 (d, J=4,9 Гц, 1,8H), 7,69 (s, 0,1H), 7,64 (s, 0,9H), 7,43-7,40 (m, 0,1H), 7,40-7,35 (m, 0,9H), 7,07-7,02 (m, 0,9H), 6,89-6,88 (m, 0,1H), 6,87-6,82 (m, 0,1H), 6,78-6,71 (m, 0,9H), 6,64-6,58 (m, 0,1H), 6,55-6,49 (m, 0,9H), 4,16-4,10 (m, 1H), 4,03-3,96 (m, 1H), 3,92 (s, 0,3H), 3,89 (s, 2,7H), 3,80-3,71 (m, 4H), 3,33-3,31 (m, 3H), 3,15-3,06 (m, 4H)

SFC (способ 20): R_T=11,76 мин., площадь пика: 100%.

Соединение 31

( S *)-2-метил-6-(6-(4-метилпиперазин-1-ил)-1 H -бензо[ d ]имидазол-2-ил)-7-((1-(3-(трифторметил)пиридин-2-ил)этил)амино)-2 H -пиразоло[4,3- b ]пиридин-5(4 H )-он 0,3 формиат

После завершения реакции смесь концентрировали в вакууме с получением остатка, который экстрагировали с помощью дихлорметана (10 мл х 2). Объединенные органические слои высушивали над Na₂SO₄ и фильтровали. Фильтрат концентрировали с получением неочищенного продукта, который очищали посредством преп. HPLC (колонка: Phenomenex Gemini C18 250*50, 10 мкм, подвижная фаза A: вода (0,225% FA), подвижная фаза B: ацетонитрил, скорость потока: 22 мл/мин., при условии градиента от 2,5% B до 16%). Чистые фракции собирали и растворитель выпаривали под вакуумом. Остаток ресуспендировали в воде (30 мл) и полученные смеси лиофилизировали до сухого состояния с получением соединения 31 (2,2 мг, чистота 97,6%, выход 4,07% ).

LC-MS (ESI) (общая процедура A, способ 2): R_T=4,49 минуты, масса рассч. для C₂₇H₂₈F₃N₉O 551,24, масса/заряд найденное значение 552,0 [M+H]⁺.

Общая процедура A:¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d ⁶) (Varian) 12,86-12,82 (m, 0,4H), 12,78-12,76 (m, 0,6H), 12,76-12,73 (m, 1H), 10,88 (br. s, 0,4H), 10,87 (br. s, 0,6H), 9,13-9,07 (m, 1H), 8,37 (br. s, 0,3H), 8,21 (d, J=7,3 Гц, 1H), 7,70 (s, 0,6H), 7,69 (s, 0,4H), 7,65-7,58 (m, 1H), 7,47 (d, J=8,8 Гц, 0,4H), 7,44 (d, J=8,8 Гц, 0,6H), 7,17 (d, J=2,0 Гц, 0,6H), 7,05 (d, J=1,0 Гц, 0,4H), 6,95-6,85 (m, 2H), 4,06-3,99 (m, 3H), 3,15-3,07 (m, 4H), 2,57-2,52 (m, 4H), 2,28-2,20 (m, 3H), 1,69-1,61 (m, 3H)

SFC (способ 17): R_T=2,92 мин., площадь пика: 100%.

Соединение 32

( R *)-2-метил-6-(6-(4-метилпиперазин-1-ил)-1H-бензо[d]имидазол-2-ил)-7-((1-(3-(трифторметил)пиридин-2-ил)этил)амино)-2H-пиразоло[4,3-b]пиридин-5(4H)-он 0,2 формиат

После завершения реакции смесь концентрировали для удаления растворителя, который экстрагировали с помощью дихлорметана (10 мл х 2). Объединенные органические слои высушивали над Na₂SO₄ и фильтровали. Фильтрат концентрировали с получением неочищенного продукта, который очищали посредством преп. HPLC (колонка: Phenomenex Gemini C18 250*50, 10 мкм, подвижная фаза A: вода (0,225% FA), подвижная фаза B: ацетонитрил, скорость потока: 22 мл/мин., при условии градиента от 2,5% B до 16%). Продукт суспендировали в воде (30 мл) и лиофилизировали до сухого состояния с получением соединения 32 (4,2 мг, чистота 97,4%, выход 7,82%).

LC-MS (ESI) (общая процедура A, способ 2): R_T=4,35 минуты, масса рассч. для C₂₇H₂₈F₃N₉O 551,24, масса/заряд найденное значение 552,0 [M+H]⁺.

Общая процедура A:¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d ⁶) (Varian) 12,87-12,73 (m, 2H), 10,89 (br. s, 0,4H), 10,88 (s, 0,6H), 9,14-9,08 (m, 1H), 8,22 (br. d, J=8,2 Гц, 1H), 8,14 (s, 0,2 H), 7,71 (s, 0,5H), 7,70 (s, 0,5H), 7,65-7,58 (m, 1H), 7,50 (d, J=8,6 Гц, 0,4H), 7,46 (d, J=8,8 Гц, 0,6H), 7,20 (d, J=1,0 Гц, 0,6H), 7,09 (d, J=1,0 Гц, 0,4H), 6,95-6,87 (m, 2H), 4,06-3,99 (m, J=3,5 Гц, 3H), 3,24-3,18 (m, 3H), 2,95-2,69 (m, 4H), 2,46-2,37 (m, 4H), 1,70-1,62 (m, 3H)

SFC (способ 17): R_T=3,98 мин., площадь пика: 98,3%.

Соединение 33

( S )-2-метил-6-(6-(пиперидин-1-ил)-1 H -бензо[ d ]имидазол-2-ил)-7-((1-(пиридин-2-ил)этил)амино)-2 H -пиразоло[4,3- b ]пиридин-5(4 H )-он

После завершения реакции смесь концентрировали в вакууме с получением остатка, который экстрагировали с помощью смеси дихлорметан:метанол (20 мл, об./об. = 10:1). Органический слой отделяли и собирали под вакуумом. Неочищенный продукт очищали посредством колоночной флэш-хроматографии (дихлорметан:метанол от 100:0 до 90:10) с получением продукта в виде желтых твердых веществ, который дополнительно очищали посредством преп. HPLC (колонка: Phenomenex Gemini 150 мм*25 мм, 10 мкм, подвижная фаза A: вода (0,05% гидроксида аммиака), подвижная фаза B: ацетонитрил, скорость потока: 25 мл/мин., при условии градиента от 15% B до 45%). Чистые фракции собирали и растворитель выпаривали под вакуумом, а затем лиофилизировали с получением соединения 33 (3,5 мг, чистота 95,1%, выход 5,93%) в виде белого порошка.

LC-MS (ESI) (общая процедура A, способ 2): R_T= 3,62 минуты, масса рассч. для C₂₆H₂₈N₈O 468,24, масса/заряд найденное значение 469,1 [M+H]⁺.

Общая процедура A: ¹H ЯМР (400МГц, DMSO-d⁶) (Varian) 12,86 (s, 0,4H), 12,82 (s, 0,6H), 12,64 (d, J=8,8 Гц, 0,4H), 12,56 (d, J=8,6 Гц, 0,6H), 10,86 (br s, 1H), 8,66-8,56 (m, 1H), 8,41 (br s, 0,2H), 7,81-7,72 (m, 1H), 7,66 (s, 1H), 7,48 (dd, J=3,4, 8,3 Гц, 1,4H), 7,41 (d, J=8,8 Гц, 0,6H), 7,27 (dd, J=4,7, 7,2 Гц, 1H), 7,19 (d, J=2,0 Гц, 0,6H), 7,06 (d, J=2,2 Гц, 0,4H), 6,95-6,84 (m, 1H), 6,49-6,37 (m, 1H), 4,00 (d, J=2,2 Гц, 3H), 3,08 (q, J=5,1 Гц, 4H), 1,75-1,59 (m, 7H), 1,54 (d, J=3,5 Гц, 2H).

SFC (способ 10): R_T=1,69 мин., площадь пика: 100%.

Соединение 34

( S* )-2-метил-6-(6-(пиперидин-1-ил)-1 H -бензо[ d ]имидазол-2-ил)-7-((1-(пиримидин-2-ил)этил)амино)-2 H -пиразоло[4,3- b ]пиридин-5(4 H )-он

и

Соединение 35

(R*)-2-метил-6-(6-(пиперидин-1-ил)-1H-бензо[d]имидазол-2-ил)-7-((1-(пиримидин-2-ил)этил)амино)-2H-пиразоло[4,3-b]пиридин-5(4H)-он

После завершения реакции смесь экстрагировали с помощью смеси дихлорметан:метанол (10: 1, 20 мл). Отделенный органический слой выпаривали до сухого состояния. Неочищенный продукт очищали посредством колоночной флэш-хроматографии (дихлорметан:метанол от 100: 0 до 90: 10) в виде желтых твердых веществ, которые дополнительно разделяли посредством хроматографии со сверхкритической подвижной фазой (условие разделения: OD (250 мм x 30 мм, 5 мкм)); подвижная фаза: A: сверхкритический CO₂, B: 0,1% NH₃H₂O EtOH, A:B=55:45 при 50 мл/мин.; температура колонки: 38°C; давление в сопле: 100 бар; температура сопла: 60°C; температура испарителя: 20°C; температура триммера: 25°C; длина волны: 220 нм). Чистые фракции собирали и растворитель выпаривали под вакуумом. Остаток ресуспендировали в воде (10 мл) и полученные смеси лиофилизировали до сухого состояния с получением соединения 34 (2,6 мг, чистота 97,5%, выход 14,9%) в виде желтых твердых веществ и соединения 35 (2,3 мг, чистота 97,7%, выход 13,2%) в виде желтых твердых веществ.

Соединение 34

LC-MS (ESI) (общая процедура A, способ 2): R_T=3,74 минуты, масса рассч. для C₂₅H₂₇N₉O 469,2, масса/заряд найденное значение 470,1 [M+H]⁺

Общая процедура A: ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d⁶) (Varian) 12,83 (s, 0,4H), 12,80 (s, 0,6H), 12,73 (br d, J=8,2 Гц, 0,4H), 12,66 (br. d., J=8,2 Гц, 0,6H), 10,90-10,81 (m, 1H), 8,84 (dd, J=2,4, 4,9 Гц, 2H), 7,66 (s, 1H), 7,48 (d, J=8,6 Гц, 0,4H), 7,45-7,36 (m, 1,6H), 7,19 (d, J=1,8 Гц, 0,6H), 7,06 (s, 0,4H), 6,93-6,84 (m, 1H), 6,54-6,39 (m, 1H), 3,96 (d, J=3,7 Гц, 3H), 3,14-3,04 (m, 4H), 1,78-1,62 (m, 7H), 1,54 (br. d., J=5,1 Гц, 2H)

SFC (способ 17): R_T=5,19 мин., площадь пика: 99,2%.

Соединение 35

LC-MS (ESI) (общая процедура A, способ 2): R_T=3,76 минуты, масса рассч. для C₂₅H₂₇N₉O 469,23, масса/заряд найденное значение 470,1 [M+H]⁺

Общая процедура A:¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d⁶) (Bruker) 12,83 (s, 0,4H), 12,80 (s, 0,6H), 12,73 (br. d., J=8,2 Гц, 0,4H), 12,66 (br. d., J=7,9 Гц, 0,6H), 10,91-10,82 (m, 1H), 8,84 (dd, J=2,4, 4,9 Гц, 2H), 7,66 (s, 1H), 7,48 (d, J=8,6 Гц, 0,4H), 7,45-7,37 (m, 1,6H), 7,19 (d, J=2,0 Гц, 0,6H), 7,06 (s, 0,4H), 6,93-6,84 (m, 1H), 6,52-6,39 (m, 1H), 3,96 (d, J=3,7 Гц, 3H), 3,16-3,01 (m, 4H), 1,75-1,63 (m, 7H), 1,54 (br. d., J=5,3 Гц, 2H)

SFC (способ 17): R_T=6,64 мин., площадь пика: 96,8%.

Соединение 36

(S*)-2-метил-7-((1-(оксазол-4-ил)этил)амино)-6-(6-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)окси)-1H-бензо[d]имидазол-2-ил)-2H-пиразоло[4,3-b]пиридин-5(4H)-он

и

Соединение 37

(R*)-2-метил-7-((1-(оксазол-4-ил)этил)амино)-6-(6-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)окси)-1H-бензо[d]имидазол-2-ил)-2H-пиразоло[4,3-b]пиридин-5(4H)-он

После завершения реакции смесь концентрировали под вакуумом с получением остатка, который очищали посредством колоночной флэш-хроматографии (дихлорметан:метанол от 100:0 до 90:10) с получением продукта, который дополнительно очищали посредством преп. HPLC (колонка: Phenomenex Gemini C18 250*50, 10 мкм, подвижная фаза A: вода (0,05% гидроксида аммония об./об.), подвижная фаза B: ацетонитрил, скорость потока: 22 мл/мин., при условии градиента от 48% B до 78%). Чистые фракции собирали и растворитель выпаривали под вакуумом. Остаток ресуспендировали в воде (10 мл) и лиофилизировали до сухого состояния с получением соединения 36 (2,1 мг, чистота 98,5%, выход 2,32%) в виде белых твердых веществ и соединения 37 (1,0 мг, чистота 96,0%, выход 1,08%) в виде белых твердых веществ.

Соединение 36

LC-MS (ESI) (общая процедура C, способ 8):R_T=3,20 минуты, масса рассч. для C₂₄H₂₅N₇O₅ 475,20, масса/заряд найденное значение 476,1 [M+H]⁺.

Общая процедура A:¹H ЯМР (400 МГц, МЕТАНОЛ-d ⁴) (Bruker) 8,20 (d, J=2,5 Гц, 1H), 7,89 (s, 1H), 7,59 (s, 1H), 7,47 (d, J=8,8 Гц, 0,6H), 7,41 (d, J=8,8 Гц, 0,4H), 7,20 (d, J=2,0 Гц, 0,4H), 7,15 (d, J=2,0 Гц, 0,6H), 6,86 (dt, J=2,3, 8,0 Гц, 1H), 6,61-6,44 (m, 1H), 4,56 (td, J=3,9, 8,0 Гц, 1H), 4,07 (s, 3H), 4,02-3,95 (m, 2H), 3,66-3,51 (m, 2H), 2,12-1,99 (m, 2H), 1,80-1,76 (m, 3H), 1,76-1,70 (m, 2H).

SFC (способ 13): R_T=1,66 мин., площадь пика: 100%.

Соединение 37

LC-MS (ESI) (общая процедура C, способ 8): R_T= 3,17 минуты, масса рассч. для C₂₄H₂₅N₇O₄ 475,20, масса/заряд найденное значение 476,1 [M+H]⁺.

Общая процедура A:¹H ЯМР (400МГц, МЕТАНОЛ-d⁴) (Bruker) 8,20 (d, J=2,5 Гц, 1H), 7,89 (s, 1H), 7,59 (s, 1H), 7,47 (d, J=8,8 Гц, 0,6H), 7,41 (d, J=8,8 Гц, 0,4H), 7,20 (d, J=2,0 Гц, 0,4H), 7,15 (d, J=2,0 Гц, 0,6H), 6,86 (dt, J=2,3, 8,0 Гц, 1H), 6,61-6,44 (m, 1H), 4,56 (td, J=3,9, 8,0 Гц, 1H), 4,07 (s, 3H), 4,02-3,95 (m, 2H), 3,66-3,51 (m, 2H), 2,12-1,99 (m, 2H), 1,80-1,76 (m, 3H), 1,76-1,70 (m, 2H).

SFC (способ 13): R_T=2,55 мин., площадь пика: 99,4%.

Соединение 38

( S )-2-метил-6-(6-морфолино-1 H -имидазо[4,5-c]пиридин-2-ил)-7-((1-(пиримидин-2-ил)этил)амино)-2H-пиразоло[4,3- b ]пиридин-5(4 H )-он 0,8 формиат

После завершения реакции смесь экстрагировали с помощью дихлорметана (20 мл x 3). Объединенные органические слои промывали солевым раствором (20 мл х 3), высушивали над безводным Na₂SO₄ и фильтровали. Фильтрат концентрировали до сухого состояния при пониженном давлении с получением неочищенного продукта, который очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (смесь дихлорметан:тетрагидрофуран от 1: 0 до 2: 3) с получением продукта, который растирали в порошок с трет-бутилметиловым эфиром (10 мл) с получением неочищенного продукта. Неочищенный продукт дополнительно очищали посредством преп. HPLC (колонка: Phenomenex Gemini C18 250×50, 10 мкм, подвижная фаза A: вода (0,225% FA), подвижная фаза B: ацетонитрил, при условии градиента от 8% B до 38%). Чистые фракции собирали и растворитель выпаривали под вакуумом, а затем лиофилизировали с получением соединения 38 (213 мг, чистота 97,7%, выход 44,6%) в виде желтого порошка.

LC-MS (ESI) (общая процедура A, способ 1):R_T=3,87 минуты, масса рассч. для C₂₃H₂₄N₁₀O₂472,21, масса/заряд найденное значение 473,0 [M+H]⁺.

Общая процедура A:¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d ⁶) (Varian) δ=13,09-12,98 (m, 1H), 12,74 (d, J=8,2 Гц, 0,3H), 12,60 (d, J=7,9 Гц, 0,7H), 11,01-10,92 (m, 1H), 8,92-8,83 (m, 2H), 8,57 (s, 0,3H), 8,54 (s, 0,7H), 8,20 (br. s., 0,8H), 7,70 (s, 1H), 7,46-7,39 (m, 1H), 7,00 (s, 0,7H), 6,91 (s, 0,3H), 6,58-6,36 (m, 1H), 4,02-3,94 (m, 3H), 3,82-3,69 (m, 4H), 3,45-3,30 (m, 4H), 1,78-1,69 (m, 3H)

SFC (способ 14): R_T=3,46 мин., площадь пика: 97,3%.

Соединение 39

( S* )-2-метил-6-(6-морфолино-1 H -бензо[ d ]имидазол-2-ил)-7-((1-(пиримидин-2-ил)пропил)амино)-2 H -пиразоло[4,3- b ]пиридин-5(4 H )-он

и

Соединение 40

( R* )-2-метил-6-(6-морфолино-1 H -бензо[ d ]имидазол-2-ил)-7-((1-(пиримидин-2-ил)пропил)амино)-2 H -пиразоло[4,3- b ]пиридин-5(4 H )-он

После завершения реакции смесь концентрировали до сухого состояния при пониженном давлении, затем ее очищали посредством преп. HPLC (колонка: Phenomenex Gemini C18 250*50 мм*10 мкм, подвижная фаза A: вода (0,05% гидроксида аммония), подвижная фаза B: ацетонитрил, скорость потока: 22 мл/мин., при условии градиента от 30% B до 60%). Чистые фракции собирали и летучие вещества удаляли под вакуумом. Остаток ресуспендировали в воде (10 мл) и полученную смесь лиофилизировали до сухого состояния с получением продукта в виде коричневых твердых веществ. Продукт разделяли посредством хроматографии со сверхкритической подвижной фазой (условие разделения: AD (250 мм x 30 мм, 10 мкм); подвижная фаза: A: сверхкритический CO₂, B: 0,1% NH₃H₂O EtOH, A:B =55:45 при 50 мл/мин.; температура колонки: 38°C; давление в сопле: 100 бар; температура сопла: 60°C; температура испарителя: 20°C; температура триммера: 25°C; длина волны: 220 нм). Чистые фракции собирали и летучие вещества удаляли при пониженном давлении. Остаток ресуспендировали в воде (10 мл) и затем лиофилизировали до сухого состояния с получением соединения 39 (43,1 мг, чистота 99,8%, выход 17,0%) в виде коричневых твердых веществ и соединения 40 (17,3 мг, чистота 97,3%, выход 6,67%) в виде коричневых твердых веществ.

Соединение 39

LC-MS (ESI) (общая процедура A, способ 2): R_T=3,64 минуты, масса рассч. для C₂₅H₂₇N₉O₂485,23, масса/заряд найденное значение 486,1 [M+H]⁺.

Общая процедура A:¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d ₆) (Bruker) δ 12,91-12,82 (m, 1H), 12,72-12,58 (m, 1H), 10,87 (br. s., 1H), 8,88-8,79 (m, 2H), 7,64 (s, 1H), 7,56-7,36 (m, 2H), 7,24-7,01 (m, 1H), 6,95-6,86 (m, 1H), 6,46-6,32 (m, 1H), 3,94 (s, 3H), 3,83-3,73 (m, 4H), 3,16-3,05 (m, 4H), 2,22-2,08 (m, 2H), 1,05-0,93 (m, 3H)

SFC (способ 13): R_T=2,26 мин., площадь пика: 99,7%.

Соединение 40

LC-MS (ESI) (общая процедура A, способ 2):R_T=3,65 минуты, масса рассч. для C₂₅H₂₇N₉O₂485,23, масса/заряд найденное значение 486,0 [M+H]⁺.

Общая процедура A:¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d ₆)(Bruker) δ 12,96-12,83 (m, 1H), 12,72-12,57 (m, 1H), 10,87 (br s, 1H), 8,87-8,79 (m, 2H), 7,64 (s, 1H), 7,56-7,36 (m, 2H), 7,24-7,02 (m, 1H), 6,95-6,87 (m, 1H), 6,44-6,33 (m, 1H), 3,94 (s, 3H), 3,83-3,73 (m, 4H), 3,14-3,03 (m, 4H), 2,23-2,08 (m, 2H), 1,09-0,94 (m, 3H)

SFC (способ 13): R_T=1,64 мин., площадь пика: 100%.

Соединение 41

( S* )-2-метил-6-(6-морфолино-1 H -бензо[ d ]имидазол-2-ил)-7-((1-(тиазол-4-ил)этил)амино)-2 H -пиразоло[4,3- b ]пиридин-5(4 H )-он

и

Соединение 42

( R* )-2-метил-6-(6-морфолино-1 H -бензо[ d ]имидазол-2-ил)-7-((1-(тиазол-4-ил)этил)амино)-2 H -пиразоло[4,3- b ]пиридин-5(4 H )-он

После завершения реакции смесь концентрировали до сухого состояния при пониженном давлении, затем ее очищали посредством преп. HPLC (колонка: Phenomenex Gemini C18 250*50 мм*10 мкм, подвижная фаза A: вода (0,05% гидроксида аммония), подвижная фаза B: ацетонитрил, скорость потока: 22 мл/мин., при условии градиента от 40% B до 50%). Чистые фракции собирали и летучие вещества удаляли под вакуумом. Остаток ресуспендировали в воде (10 мл) и полученную смесь лиофилизировали до сухого состояния с получением рацемического продукта в виде коричневых твердых веществ, которые разделяли посредством хроматографии со сверхкритической подвижной фазой (условие разделения: AD (250 мм*30 мм, 10 мкм); подвижная фаза: A: сверхкритический CO₂, B: 0,1% NH₃H₂O IPA, A:B=50:50 при 50 мл/мин.; температура колонки: 38°C; давление в сопле: 100 бар; температура сопла: 60°C; температура испарителя: 20°C; температура триммера: 25°C; длина волны: 220 нм) с получением соединения 41 (6,5 мг, чистота 99,4%, выход 8,08%) в виде желтых твердых веществ и соединения 42 (12,4 мг, чистота 99,8%, выход 15,5%) в виде желтых твердых веществ.

Соединение 41

LC-MS (ESI) (общая процедура A, способ 2):R_T=3,78 минуты, масса рассч. для C₂₃H₂₄N₈O₂S 476,17, масса/заряд найденное значение 477,0 [M+H]⁺.

Общая процедура A: ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d ⁶) (Varian)δ 12,92-12,85 (m, 1H), 12,57 (d, J=9,0 Гц, 0,4H), 12,49 (d, J=8,8 Гц, 0,6H), 10,96-10,88 (m, 1H), 9,11 (d, J=2,0 Гц, 1H), 7,74-7,67 (m, 1H), 7,60-7,49 (m, 1,4H), 7,44-7,39 (m, 0,6H), 7,22-7,18 (m, 0,6H), 7,07-7,02 (m, 0,4H), 6,94-6,87 (m, 1H), 6,69-6,57 (m, 1H), 4,08-4,00 (m, 3H), 3,81-3,73 (m, 4H), 3,13-3,04 (m, 4H), 1,79-1,70 (m, 3H)

SFC (способ 10): R_T=2,16 мин., площадь пика: 99,4%.

Соединение 42

LC-MS (ESI) (общая процедура A, способ 2):R_T=3,77 минуты, масса рассч. для C₂₃H₂₄N₈O₂S 476,2, масса/заряд найденное значение 477,0 [M+H]⁺.

Общая процедура A:¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d ⁶) (Varian)δ 12,91-12,85 (m, 1H), 12,56 (d, J=8,8 Гц, 0,4H), 12,48 (d, J=8,8 Гц, 0,6H), 10,93-10,89 (m, 1H), 9,11 (d, J=2,0 Гц, 1H), 7,72-7,68 (m, 1H), 7,59-7,49 (m, 1,4H), 7,42 (d, J=8,8 Гц, 0,6H), 7,22-7,18 (m, 0,6H), 7,06-7,03 (m, 0,4H), 6,94-6,88 (m, 1H), 6,67-6,58 (m, 1H), 4,06-4,01 (m, 3H), 3,80-3,73 (m, 4H), 3,12-3,05 (m, 4H), 1,78-1,70 (m, 3H)

SFC (способ 10): R_T=2,79 мин., площадь пика: 98,1%.

Соединение 43

( S )-2-этил-6-(6-морфолино-1 H -имидазо[4,5- c ]пиридин-2-ил)-7-((1-(пиримидин-2-ил)этил)амино)-2 H -пиразоло[4,3- b ]пиридин-5(4 H )-он

После завершения реакции смесь экстрагировали с помощью дихлорметана (10 мл x 3). Объединенные органические экстракты промывали солевым раствором, высушивали над безводным Na₂SO₄ и фильтровали. Фильтрат концентрировали до сухого состояния при пониженном давлении с получением неочищенного продукта, который очищали с помощью преп. HPLC (колонка: Phenomenex Gemini 150*25 мм*10 мкм, подвижная фаза A: вода (0,05% гидроксида аммония об./об.), подвижная фаза B: ацетонитрил, скорость потока: 25 мл/мин., при условии градиента от 26% B до 56%). Чистые фракции собирали и растворитель выпаривали под вакуумом. Остаток ресуспендировали в воде (10 мл) и полученные смеси лиофилизировали досуха с получением соединения 43 (116 мг, чистота 95,8%, выход 18,3%) в виде белых твердых веществ.

LC-MS (ESI) (общая процедура A, способ 1): R_T=4,04 минуты, масса рассч. для C₂₄H₂₆N₁₀O₂ 486,22, масса/заряд найденное значение 487,0 [M+H]+.

Общая процедура A:¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d ⁶) (Varian) δ 13,05-12,97 (m, 1H), 12,66 (d, J=7,9 Гц, 0,3H), 12,51 (d, J=7,9 Гц, 0,7H), 10,98-10,92 (m, 1H), 8,88-8,80 (m, 2H), 8,56 (s, 0,3H), 8,52 (s, 0,7H), 7,69 (s, 1H), 7,44-7,36 (m, 1H), 7,00 (s, 0,7H), 6,89 (s, 0,3H), 6,47-6,31 (m, 1H), 4,39-4,10 (m, 2H), 3,81-3,70 (m, 4H), 3,43-3,36 (m, 4H), 1,82-1,67 (m, 3H), 1,39-1,26 (m, 3H)

SFC (способ 14): R_T=2,46 мин., площадь пика: 99,2%.

Соединение 44

(R*)-2-метил-7-((2-метил-1-(пиридин-2-ил)пропил)амино)-6-(6-(4-метилпиперазин-1-ил)-1H-бензо[d]имидазол-2-ил)-2H-пиразоло[4,3-b]пиридин-5(4H)-он

Соединение очищали посредством общей процедуры E для HPLC, способ 3.

LC-MS (ESI) (общая процедура A-2, способ 2): R_T=0,95 минуты, масса рассч. для C₂₈H₃₃N₉O, 511,28, масса/заряд найденное значение 512,5 [M+H]⁺.

Общая процедура A-2: ¹H ЯМР (400 МГц, CD₃OD) δ8,53 (d, J=4,0 Гц, 1H), 7,71 (d, J=6,8 Гц, 1H), 7,52-7,44 (m, 3H), 7,24-7,18(m, 2H), 7,03-7,00 (m, 1H), 6,42-6,41 (m, 1H), 3,95 (s, 3H), 3,25-3,22 (m, 4H), 2,70-2,68 (m, 4H), 2,58-2,56(m, 1H), 2,39 (s, 3H), 1,16 (t, J=6,4 Гц, 6H).

Соединение 45

(S*)-2-метил-7-((2-метил-1-(пиридин-2-ил)пропил)амино)-6-(6-(4-метилпиперазин-1-ил)-1H-бензо[d]имидазол-2-ил)-2H-пиразоло[4,3-b]пиридин-5(4H)-он

Общая процедура A-2: ¹H ЯМР (400 МГц, CD₃OD) δ 8,53 (d, J=4,0 Гц, 1H), 7,71 (d, J=6,8 Гц, 1H), 7,52-7,44 (m, 3H), 7,24-7,18(m, 2H), 7,03-7,00 (m, 1H), 6,42-6,41 (m, 1H), 3,95 (s, 3H), 3,25-3,22 (m, 4H), 2,70-2,68 (m, 4H), 2,58-2,56(m, 1H), 2,39 (s, 3H), 1,16 (t, J=6,4 Гц, 6H).

Соединение 46

(S)-2-этил-6-(6-морфолино-1H-бензо[d]имидазол-2-ил)-7-((1-(пиримидин-2-ил)этил)амино)-2H-пиразоло[4,3-b]пиридин-5(4H)-он

Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (градиент, CH₂Cl₂: MeOH= от 150:1 до 50:1) с получением неочищенного продукта (600 мг, выход 44,8%) в виде желтых твердых веществ. Неочищенное соединение дополнительно очищали с помощью преп. SFC (условие разделения: прибор: SFC80 (Waters); колонка: OD 2,5*25 см, 10 мкм; подвижная фаза A: сверхкритический CO₂, подвижная фаза B: IPA/ACN/DEA=60/40/0,2, A:B=50/50 при 80 мл/мин., температура колонки: 25°C, обратное давление:100 бар) с получением соединения 46 (262,95 мг, выход 43,8%, чистота 99,3%, ee: >99%) в виде желтых твердых веществ.

LC-MS (ESI) (общая процедура A-2, способ 2): R_T=1,20 минуты, масса рассч. для C₂₅H₂₇N₉O₂ 485,54, масса/заряд найденное значение 486,4 [M+H]⁺.

Общая процедура A-2:¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d ₆) δ 12,86 (d, J=2,4 Гц, 1H), 12,63-12,58 (m, 1H), 10,86 (s, 1H), 8,82 (d, J=4,8 Гц, 2H), 7,65 (d, J=1,6 Гц, 1H), 7,54-7,36 (m, 2H), 7,23-7,07 (m, 1H), 6,94-6,87 (m, 1H), 6,40-6,38 (m, 1H), 4,24-4,19 (m, 2H), 3,78-3,76 (m, 4H), 3,11-3,10 (m, 4H), 1,75 (t, J=6,4 Гц, 3H), 1,35-1,30 (m, 3H).

Соединение 47

(S)-2-этил-6-(6-морфолино-1H-имидазо[4,5-c]пиридин-2-ил)-7-((1-(пиридин-2-ил)этил)амино)-2,4-дигидро-5H-пиразоло[4,3-b]пиридин-5-он

Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (CH₂Cl₂:MeOH=100:1) с получением соединения 47 (139,8 мг, выход 28,8%, чистота 97,8%, ee: >99%) в виде желтых твердых веществ.

LC-MS (ESI) (общая процедура C-2, способ 2): R_T=1,309 минуты, масса рассч. для C₂₅H₂₇N₉O₂ 485,5, масса/заряд найденное значение 486,3 [M+H]⁺.

Общая процедура A-2: ¹H ЯМР (400 МГц, CD₃OD) δ 8,57-8,45 (m, 2H), 7,78-7,71 (m, 1H), 7,55-7,46 (m, 2H), 7,26-7,25 (m, 1H), 6,99-6,90 (m, 1H), 6,46-6,40 (m, 1H), 4,27-4,20 (m, 2H), 3,89-3,82 (m, 4H), 3,41-3,37 (m, 4H), 1,82 (d, J=6,8 Гц, 3H), 1,39 (t, J=7,2 Гц, 3H).

Соединение 48

(S)-2-этил-6-(4-фтор-6-(4-метилпиперазин-1-ил)-1H-бензо[d]имидазол-2-ил)-7-((1-(пиримидин-2-ил)этил)амино)-2H-пиразоло[4,3-b]пиридин-5(4H)-он

Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (градиент, CH₂Cl₂: MeOH=от 50:1 до 20:1) с получением неочищенного соединения (149 мг, 50% выход) в виде желтых твердых веществ. Неочищенное соединение дополнительно очищали с помощью преп. SFC (условие разделения: прибор: SFC80 (Waters); колонка: OD 2,5*25 см, 10 мкм; подвижная фаза A: сверхкритический CO₂, подвижная фаза B: IPA/ACN/DEA=60/40/0,2, A:B=60/40 при 70 мл/мин., температура колонки: 25°C, обратное давление: 100 бар) с получением соединения 48 (95,9 мг, 32,0% выход, чистота 98,4%, ee: >99%) в виде желтых твердых веществ.

LC-MS (ESI) (общая процедура B-2, способ 4): R_T=0,95 минуты, масса рассч. для C₂₆H₂₉FN₁₀O 516,57, масса/заряд найденное значение 517,4 [M+H]⁺.

Общая процедура A-2: ¹H ЯМР (400 МГц, CD₃OD) δ 8,78-8,77 (m, 2H), 7,53 (s, 1H), 7,36-7,33 (m, 1H), 6,95 (s, 1H), 6,74-6,71 (m, 1H), 6,40-6,38 (m, 1H), 4,25-4,20 (m, 2H), 3,30-3,28 (m, 4H), 2,88 (m, 4H), 2,54 (s, 3H), 1,83 (d, J=6,8 Гц, 3H), 1,40 (t, J=7,2 Гц, 3H).

Соединение 49

(S)-2-этил-6-(4-фтор-6-(3-метоксиазетидин-1-ил)-1H-бензо[d]имидазол-2-ил)-7-((1-(пиримидин-2-ил)этил)амино)-2H-пиразоло[4,3-b]пиридин-5(4H)-он

Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (градиент, CH₂Cl₂: MeOH=от 100:1 до 50:1) с получением неочищенного соединения (200 мг, выход 83,0%, чистота 90,6%). Соединение дополнительно очищали с помощью преп. SFC (условие разделения: прибор: SFC80 (Waters); колонка: OD 2,5*25 см, 10 мкм; подвижная фаза A: сверхкритический CO₂, подвижная фаза B: MeOH/DEA=100/0,2, A:B=70/30 при 70 мл/мин., температура колонки: 25°C, обратное давление:100 бар) с получением соединения 49 (106,7 мг, выход 44,0%, чистота 99,4%, ee: >99%) в виде желтых твердых веществ.

LC-MS (ESI) (общая процедура B-2, способ 4): R_T=1,56 минуты, масса рассч. для C₂₅H₂₆FN₉O₂ 503,53, масса/заряд найденное значение 504,4 [M+H]⁺.

Общая процедура A-2: ¹H ЯМР (400 МГц, CD₃OD) δ 8,78-8,76 (m, 2H), 7,52 (s, 1H), 7,36-7,33 (m, 1H), 6,44-6,38 (m, 2H), 6,23-6,20 (m, 1H), 4,36-4,33 (m, 1H), 4,26-4,20 (m, 2H), 4,13-4,10 (m, 2H), 3,68-3,66 (m, 2H), 3,35 (s, 3H), 1,84-1,82 (m, 3H), 1,40 (t, J=7,2 Гц, 3H).

Соединение 50 и соединение 51

Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (градиент, CH₂Cl₂: MeOH= от 20:1 до 10:1) с получением неочищенного продукта (120 мг, выход 50%) в виде желтых твердых веществ. Неочищенное соединение дополнительно очищали с помощью преп. SFC (условие разделения: прибор: SFC80 (Waters); колонка: AD 2,5*25 см, 10 мкм; подвижная фаза A: сверхкритический CO₂, подвижная фаза B: MeOH/ACN/DEA=60/40/0,2, A:B=50/50 при 80 мл/мин., температура колонки: 25°C, обратное давление: 100 бар) с получением соединения 50 (12,27 мг, выход 12,2%, чистота 95,2%, ee: >99%) и соединения 51 (43,28 мг, выход 36,1%, чистота 97,3%, ee: >99%).

Соединение 50

(R*)-6-(4-метокси-6-морфолино-1H-бензо[d]имидазол-2-ил)-2-метил-7-((1-(пиримидин-2-ил)этил)амино)-2,4-дигидро-5H-пиразоло[4,3-b]пиридин-5-он

LC-MS (ESI) (общая процедура B-2, способ 2): R_T=1,35 минуты, масса рассч. для C₂₅H₂₇N₉O₃ 501,55, масса/заряд найденное значение 502,3 [M+H]⁺.

Общая процедура A-2: ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d ₆) δ 12,99 (s, 1H), 12,83 (s, 1H), 12,50-12,48 (m, 1H), 11,00-10,84 (m, 1H), 8,87-8,80 (m, 2H), 7,68-7,64 (m, 1H), 7,41 (s, 1H), 6,80-6,43 (m, 3H), 4,13-4,12 (m, 2H), 4,07-4,03 (m, 4H), 3,95-3,88 (m, 4H), 3,32-3,05 (m, 4H), 1,72-1,69 (m, 3H).

Соединение 51

(S*)-6-(4-метокси-6-морфолино-1H-бензо[d]имидазол-2-ил)-2-метил-7-((1-(пиримидин-2-ил)этил)амино)-2,4-дигидро-5H-пиразоло[4,3-b]пиридин-5-он

Общая процедура A-2:¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d ₆) δ 13,00 (s, 1H), 12,84 (s, 1H), 12,51-12,48 (m, 1H), 11,00-10,86 (m, 1H), 8,85-8,80 (m, 2H), 7,68-7,65 (m, 1H), 7,42-7,40 (m, 1H), 6,80-6,71 (m, 1H), 6,56-6,43 (m, 2H), 4,06 (s, 2H), 3,96 (s, 4H), 3,78-3,75 (m, 4H), 3,14-3,09 (m, 4H), 1,74-1,69 (m, 3H).

Соединение 52

(S)-6-(5-метокси-6-морфолино-1H-бензо[d]имидазол-2-ил)-2-метил-7-((1-(пиримидин-2-ил)этил)амино)-2H-пиразоло[4,3-b]пиридин-5(4H)-он

Реакционную смесь очищали хроматографией на силикагеле (CH₂Cl₂: MeOH=25:1) с получением неочищенного продукта (200 мг, выход 70,0%) в виде желтого твердого вещества. Неочищенный продукт дополнительно очищали посредством преп. SFC (условие разделения: прибор: SFC80 (Waters); колонка: OD 2,5*25 см, 10 мкм; подвижная фаза A: сверхкритический CO₂, подвижная фаза B: IPA/ACN/DEA=60/40/0,2, A: B=60/40 при 80 мл/мин., температура колонки: 25°C, обратное давление:100 бар) с получением соединения 52 (88,09 мг, выход 44,0%, чистота 94,2%, ee: >99%) в виде желтого твердого вещества.

LC-MS (ESI) (общая процедура B-2, способ 2): R_T=1,29 минуты, масса рассч. для C₂₅H₂₇N₉O₃ 501,54, масса/заряд найденное значение 502,3 [M+H]⁺.

Общая процедура A-2: ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d ₆) δ 12,88-12,84 (m, 1H), 12,61-21,58 (m, 1H), 12,85-12,81 (m, 1H), 8,85-8,84 (m, 1H), 7,64 (s, 1H), 7,42-7,10 (m, 3H), 6,47-6,45 (m, 1H), 3,95 (s, 3H), 3,86 (s, 3H), 3,76-3,74 (m, 4H), 3,00-2,97 (m, 4H), 1,74-1,72 (m, 3H).

Соединение 53 и соединение 54

Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (CH₂Cl₂: MeOH= от 150:1 до 50:1) с получением неочищенного продукта (509 мг, выход 54,8%) в виде желтых твердых веществ. Неочищенный продукт дополнительно очищали посредством преп. SFC (условие разделения: прибор: SFC80 (Waters); колонка: OD 2,5*25 см, 10 мкм; подвижная фаза A: сверхкритический CO₂, подвижная фаза B: MeOH/ACN/DEA=60/40/0,2, A:B=50/50 при 80 мл/мин., температура колонки: 25°C, обратное давление: 100 бар) с получением соединения 53 (153,89 мг, выход 30,2%, чистота 99,4%, ee: >99%) и соединения 54 (162,32 мг, выход 31,9%, чистота 99,6%, ee: >99%).

Соединение 53

(S*)-2-метил-6-(5-метил-6-морфолино-1H-бензо[d]имидазол-2-ил)-7-((1-(пиримидин-2-ил)пропил)амино)-2H-пиразоло[4,3-b]пиридин-5(4H)-он

LC-MS (ESI) (общая процедура A-2, способ 2): R_T=1,44 минуты, масса рассч. для C₂₆H₂₉N₉O₂ 499,57, масса/заряд найденное значение 500,4 [M+H]⁺.

Общая процедура A-2: ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d ₆) δ 12,87 (d, J=5,2 Гц, 1H), 12,65-12,63 (m, 1H), 10,84 (d, J=3,6 Гц, 1H), 8,84-8,82 (m, 2H), 7,63 (s, 1H), 7,46-7,22 (m, 3H), 6,40-6,38 (m, 1H), 3,93 (s, 3H), 3,77-3,76 (m, 4H), 2,88-2,85 (m, 4H), 2,38 (s, 3H), 2,19-2,14 (m, 2H), 1,02-0,97 (m, 3H).

Соединение 54

(R*)-2-метил-6-(5-метил-6-морфолино-1H-бензо[d]имидазол-2-ил)-7-((1-(пиримидин-2-ил)пропил)амино)-2H-пиразоло[4,3-b]пиридин-5(4H)-он

LC-MS (ESI) (общая процедура A-2, способ 2): R_T=1,43 минуты, масса рассч. для C₂₆H₂₉N₉O₂ 499,57, масса/заряд найденное значение 500,4 [M+H]⁺.

Общая процедура A-2: ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d ₆) δ 12,87 (d, J=5,2 Гц, 1H), 12,64 (dd, J=8,4, 4,0 Гц, 1H), 10,84 (d, J=4,4 Гц, 1H), 8,83 (dd, J=8,8, 3,2 Гц, 2H), 7,64 (s, 1H), 7,47-7,22 (m, 3H), 6,40-6,39 (m, 1H), 3,93 (s, 3H), 3,79-3,75 (s, 4H), 2,89-2,84 (m, 4H), 2,38 (s, 3H), 2,17-2,14 (m, 2H), 1,00 (t, J=6,8 Гц, 3H).

Соединение 55

(S)-2-метил-6-(5-метил-6-морфолино-1H-бензо[d]имидазол-2-ил)-7-((1-(оксазол-4-ил)этил)амино)-2H-пиразоло[4,3-b]пиридин-5(4H)-он

Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (градиент, CH₂Cl₂: MeOH=от 150:1 до 50:1) с получением соединения 55 (369,51 мг, выход 48,5%, чистота 99,4%, ee: >99%) в виде желтых твердых веществ.

LC-MS (ESI) (общая процедура A-2, способ 2): R_T=1,46 минуты, масса рассч. для C₂₄H₂₆N₈O₃ 474,52, масса/заряд найденное значение 475,4 [M+H]⁺.

Общая процедура A-2: ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d ₆) δ 12,88 (d, J=4,8 Гц, 1H), 12,37-12,35 (m, 1H), 10,90 (d, J=3,6 Гц, 1H), 8,36 (s, 1H), 8,02 (s, 1H), 7,70 (s, 1H), 7,45-7,21 (m, 2H), 6,47-6,35 (m, 1H), 4,05 (s, 3H), 3,77-3,75 (m, 4H), 2,88-2,83 (m, 4H), 2,37 (s, 3H), 1,68 (t, J=6,8 Гц, 3H).

Соединение 56

(S)-2-метил-6-(6-морфолино-1H-имидазо[4,5-c]пиридин-2-ил)-7-((1-(оксазол-4-ил)этил)амино)-2,4-дигидро-5H-пиразоло[4,3-b]пиридин-5-он

Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (CH₂Cl₂:MeOH=100:1) с получением соединения 56 (37,15 мг, выход 6,89%, чистота 95,4%, ee: >99%) в виде желтых твердых веществ.

LC-MS (ESI) (общая процедура A-2, способ 2): R_T=1,14 минуты, масса рассч. для C₂₂H₂₃N₉O₃ 461,5, масса/заряд найденное значение 462,4 [M+H]⁺.

Общая процедура A-2: ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d ₆) δ 13,13-13,10 (m, 1H), 12,31-12-11 (m, 1H), 11,01-10,97 (m, 1H), 8,53-8,36 (m, 2H), 8,05 (s, 1H), 7,73 (s, 1H), 7,03-6,91 (m, 1H), 6,46-6,40 (m, 1H), 4,06 (s, 3H), 3,77-3,75 (m, 4H), 3,39-3,37 (m, 4H), 1,68 (d, J=4,0 Гц, 3H).

Аналитическая часть

LCMS

Общая процедура A

Измерение в ходе LC выполняли на системе Agilent 1200 HPLC, содержащей дегазатор, насос для двухкомпонентных смесей, автоматический пробоотборник, колоночный термостат, детектор на диодной матрице (DAD) и колонку, как указано в соответствующих способах ниже. Поток из DAD разделяли на MS-спектрометр (Agilent 6110 или 6140) и ELSD. MS-детектор был оснащен источником электрораспылительной ионизации. В качестве газа-распылителя использовали азот. Температуру сушильного газа поддерживали на уровне 350°С. Напряжение на капиллярной игле составляло 2,5 В в режиме положительной ионизации и 3,0 В в режиме отрицательной ионизации. Масс-спектры получали сканированием от 100 до 1000 с шагом, равным 0,1. Продолжительность цикла составляла 0,89 сек/цикл. Сбор данных проводили с помощью Chemstation B.04.03.

Способ 1

В дополнение к общей процедуре A. HPLC с обращенной фазой выполняли на колонке Waters XBridge Shield RP18 (50×2,1 мм, 5 мкм) со скоростью потока 0,8 мл/мин. Использовали две подвижные фазы (подвижная фаза A: вода с 0,05% NH₃⋅H₂O; подвижная фаза B: ацетонитрил). Сначала 100% A удерживали в течение 1 минуты. Затем применяли градиент до 40% A и 60% B за 4 минуты, а затем - до 5% A и 95% B за 2,5 минуты. Наконец возвращались к 100% A за 2 минуты и удерживали в течение 0,5 минуты. Перерыв составлял 0,5 минуты. Температура термостата составляла 40°C. Объем впрыска составлял 2 мкл. (Полярность МС: положительная)

Способ 2

В дополнение к общей процедуре A. HPLC с обращенной фазой выполняли на колонке Phenomenex Luna-C18 (5 мкм, 2,0×50 мм) со скоростью потока 0,8 мл/мин. Использовали две подвижные фазы (подвижная фаза A: вода с 0,1% TFA; подвижная фаза B: ацетонитрил с 0,05% TFA). 100% A удерживали 1 минуту, градиент A от 100% A до 40% A применяли за 4 минуты и уменьшение с 40% A до 15% A - за 2,5 минуты. Затем возвращались к 100% A за 2 минуты и удерживали 0,5 минуты. Перерыв составлял 0,5 мин. Температура термостата составляла 50°C. Объем впрыска составлял 2 мкл. (Полярность МС: положительная)

Общая процедура B

Измерение с помощью LCMS выполняли с использованием системы серии Agilent1200, содержащей насос для четырехкомпонентных смесей с дегазатором, автоматический пробоотборник, термостат колонки (установленный на 50°C, если не указано иное), детектор на диодной матрице (DAD) и колонку, как определено в соответствующих способах ниже. Поток из колонки разделяли для MS-спектрометра. MS-детектор был оснащен источником электрораспылительной ионизации. Масс-спектры получали сканированием от 100 до 1000 с использованием продолжительности цикла 0,52 секунды. Напряжение на капиллярной игле составляло 2,5 кВ, и температуру источника поддерживали на уровне 350°C. В качестве газа-распылителя использовали азот. Сбор данных проводили с помощью системы обработки данных LC/MSD ChemStation.

Способ 4

В дополнение к общей процедуре B. HPLC с обращенной фазой проводили на колонке Xtimate C18 (2,1*30 мм, 3 мкм) со скоростью потока 1,2 мл/мин. Для хроматографирования использовали две подвижные фазы (подвижная фаза A: вода(4 л)+TFA(1,5 мл); подвижная фаза B: ацетонитрил (4 л)+TFA(0,75 мл)) с условием градиента от 100% A до 40% A, 60% B за 0,9 минуты и удерживали такие условия в течение 0,6 минуты, до 40% A и 60% B за 0,01 минуты и повторно уравновешивали с 40% A за 0,49 минуты. Использовали объем впрыска 0,1-20 мкл. Напряжение на конусе составляло 70 В в режиме положительной ионизации.

Способ 5

В дополнение к общей процедуре B. HPLC с обращенной фазой проводили на колонке MERCK C18 (RP-18e 25-2 мм) со скоростью потока 1,2 мл/мин. Для хроматографирования использовали две подвижные фазы (подвижная фаза A: вода(4 л)+TFA(1,5 мл); подвижная фаза B: ацетонитрил (4 л)+TFA(0,75 мл)) с условием градиента от 95% A до 5% A, 95% B за 0,7 минуты и удерживали такие условия в течение 0,4 минуты, до 95% A и 5% B за 0,01 минуты и повторно уравновешивали с 95% A за 0,49 минуты. Использовали объем впрыска 0,1-20 мкл. Напряжение на конусе составляло 70 В в режиме положительной ионизации.

Способ 6

В дополнение к общей процедуре B. HPLC с обращенной фазой проводили на колонке Xbridge Shield RP-18 (5 мкм, 2,1*50 мм) со скоростью потока 1,0 мл/мин. Для хроматографирования использовали две подвижные фазы (подвижная фаза A: вода(1 л)+NH₃H₂O(0,5 мл); подвижная фаза B: ацетонитрил) с условием градиента от 90% A до 20% A, 80% B за 2 минуты и удерживали такие условия в течение 0,48 минуты, до 90% A и 10% B за 0,01 минуты и повторно уравновешивали с 90% A за 0,11 минуты. Использовали объем впрыска 0,1-20 мкл. Напряжение на конусе составляло 70 В в режиме положительной ионизации.

Общая процедура C

Измерение с помощью LCMS выполняли с использованием системы серии Shimadzu LCMS-2010 EV, содержащей насос для четырехкомпонентных смесей с дегазатором, автоматический пробоотборник, термостат колонки (установленный на 50°C, если не указано иное), детектор на диодной матрице (DAD) и колонку, как определено в соответствующих способах ниже. Поток из колонки разделяли для MS-спектрометра. MS-детектор был оснащен источником электрораспылительной ионизации. Масс-спектры получали сканированием от 100 до 1000 с использованием продолжительности цикла 0,25 секунды. Напряжение детектора составляло 1,6 кВ, и температуру источника поддерживали на уровне 250°C. В качестве газа-распылителя использовали азот. Сбор данных проводили с помощью системы обработки данных LCMS.

Способ 7

В дополнение к общей процедуре C. HPLC с обращенной фазой проводили на колонке Xtimate C18 (2,1*30 мм, 3 мкм) со скоростью потока 1,2 мл/мин. Для хроматографирования использовали две подвижные фазы (подвижная фаза A: вода(4 л)+TFA(1,5 мл); подвижная фаза B: ацетонитрил (4 л)+TFA(0,75 мл)) с условием градиента от 100% A до 40% A, 60% B за 6 минуты и удерживали такие условия в течение 0,5 минуты, до 40% A и 60% B за 0,01 минуты и повторно уравновешивали с 40% A за 0,49 минуты. Использовали объем впрыска 0,1-20 мкл. Напряжение на конусе составляло 70 В в режиме положительной ионизации.

Способ 8

В дополнение к общей процедуре C. HPLC с обращенной фазой проводили на колонке Xtimate C18 (2,1*30 мм, 3 мкм) со скоростью потока 0,8 мл/мин. Для хроматографирования использовали две подвижные фазы (подвижная фаза A: вода(4 л)+TFA(1,5 мл); подвижная фаза B: ацетонитрил (4 л)+TFA(0,75 мл)) с условием градиента от 90% A до 20% A, 80% B за 6 минут и удерживали такие условия в течение 0,5 минуты, до 90% A и 10% B за 0,01 минуты и повторно уравновешивали с 90% A за 0,49 минут. Использовали объем впрыска 0,1-20 мкл. Напряжение на конусе составляло 70 В в режиме положительной ионизации.

Способ 9

В дополнение к общей процедуре C. HPLC с обращенной фазой проводили на колонке MERCK C18 (RP-18e 25-2 мм) со скоростью потока 1,2 мл/мин. Для хроматографирования использовали две подвижные фазы (подвижная фаза A: вода(4 л)+TFA(1,5 мл); подвижная фаза B: ацетонитрил (4 л)+TFA(0,75 мл)) с условием градиента от 95% A до 5% A, 95% B за 0,7 минуты и удерживали такие условия в течение 0,4 минуты, до 95% A и 5% B за 0,01 минуты и повторно уравновешивали с 95% A за 0,49 минуты. Использовали объем впрыска 0,1-20 мкл. Напряжение на конусе составляло 70 В в режиме положительной ионизации.

Общая процедура A-2

Измерение с помощью LCMS выполняли на системе Waters UPLC-QDa, содержащей насос для четырехкомпонентных смесей, автоматический пробоотборник, термостат колонки (установленный на 50°C, если не указано иное), детектор на фотодиодной матрице (РDA) и колонку, как указано в соответствующих способах ниже. Поток из колонки разделяли для MS-спектрометра. MS-детектор представлял собой QDa-детектор и был оснащен источником электрораспылительной ионизации. Масс-спектры получали сканированием от 100 до 1000. Напряжение на капиллярной игле составляло 0,8 кВ, и температуру источника поддерживали на уровне 120°C. В качестве газа-распылителя использовали азот. Данные регистрировали с помощью системы обработки данных MassLynx-Openlynx от Waters-Micromass.

Способ 2 (90:10)

В дополнение к общей процедуре A-2. HPLC с обращенной фазой выполняли на колонке ACQUITY UPLC BEH C18 (1,7 мкм, 2,1×50 мм) со скоростью потока 0,6 мл/мин. Две подвижные фазы (подвижная фаза С: 0,1% муравьиной кислоты в воде; подвижная фаза D: 0,1% муравьиной кислоты в ацетонитриле) использовали для удерживания 90% C и 10% D в течение 1,2 минуты, затем - удерживания 5% C и 95% D в течение 0,8 минуты. Объем впрыска в размере 0,3-5 мкл зависел от концентрации образца. Напряжение на конусе составляло 15 В в режиме положительной ионизации.

Общая процедура B-2

Измерение с помощью LCMS выполняли на системе Shimadzu LC-MS2020, содержащей насос (LC-20AD) с дегазатором (DGU-20A₃), автоматический пробоотборник (SIL-20AHT), термостат колонки (CTO-20A) (установленный на 40°C, если не указано иное), детектор на фотодиодной матрице (РDA) (SPD-M20A), испарительный детектор светорассеяния (ELSD)(Alltech 3300ELSD) и колонку, как указано в соответствующих способах ниже. Поток из колонки разделяли для MS-спектрометра. MS-детектор был оснащен источником электрораспылительной ионизации. Масс-спектры получали сканированием от 80 до 1000. В качестве газа-распылителя использовали азот. Сбор данных проводили с помощью системы обработки данных Labsolution.

Способ 2

В дополнение к общей процедуре B-2. UPLC с обращенной фазой выполняли на колонке Shimadzu SunFire C18 (5 мкм, 50×4,6 мм) со скоростью потока 2,0 мл/мин. Две подвижные фазы (подвижная фаза A: 0,1% муравьиной кислоты в воде; подвижная фаза В: 0,1% муравьиной кислоты в ацетонитриле) использовали для удерживания 90% А и 10% В в течение 1,6 минуты, затем - удерживания 5% А и 95% В в течение 1,0 минуты. Объем впрыска в размере 0,3-5 мкл зависел от концентрации образца. Напряжение на конусе составляло 20 В в режимах положительной и отрицательной ионизации. Масс-спектры получали сканированием от 100 до 1000 за 0,2 секунды с использованием времени задержки между сканированиями, равного 0,1 секунды.

Способ 4

В дополнение к общей процедуре B-2. UPLC с обращенной фазой выполняли на колонке Shimadzu SunFire C18 (5 мкм, 50×4,6 мм) со скоростью потока 2,0 мл/мин. Две подвижные фазы (подвижная фаза A: 0,1% муравьиной кислоты в воде; подвижная фаза В: 0,1% муравьиной кислоты в ацетонитриле) использовали для удерживания 70% А и 30% В в течение 1,6 минуты, затем - удерживания 5% А и 95% В в течение 1,0 минуты. Объем впрыска в размере 0,3-5 мкл зависел от концентрации образца. Напряжение на конусе составляло 20 В в режимах положительной и отрицательной ионизации. Масс-спектры получали сканированием от 100 до 1000 за 0,2 секунды с использованием времени задержки между сканированиями, равного 0,1 секунды.

Общая процедура C-2

Измерение с помощью LCMS выполняли на системе AB, содержащей насос для четырехкомпонентных смесей (G1311A), автоматический пробоотборник (CTC Analytic HTS), термостат колонки (G1316A TCC, установленный на 40°C, если не указано иное), DAD (G1315B) и колонку, как указано в соответствующих способах ниже. Поток из колонки разделяли для MS-спектрометра. MS (API3000) был оснащен источником электрораспылительной ионизации. Масс-спектры получали сканированием от 80 до 1000. В качестве газа-распылителя использовали азот.

Способ 2 (90:10)

В дополнение к общей процедуре C-2. HPLC с обращенной фазой выполняли на колонке SunFire C18 (5 мкм, 50×4,6 мм) со скоростью потока 1,0 мл/мин. Две подвижные фазы (подвижная фаза С: 0,1% NH₃ H₂O в воде; подвижная фаза D: 0,1% NH₃ H₂O в ацетонитриле) использовали для удерживания 95% C и 5% D в течение 3 минут, затем - удерживания 5% C и 95% D в течение 1 минуты. Объем впрыска зависел от концентрации образца.

ЯМР

Общая процедура A

Приведенные ниже ЯМР-эксперименты проводили с использованием спектрометров Bruker Avance III 400 и Varian 400, эксплуатируемых при комнатной температуре, в которых используется внутренняя дейтериевая стабилизация и которые оснащены измерительной головкой BBO, работающей при 400 МГц, в случае Bruker Avance III 400 и измерительной головкой Varian 400 ASW PFG 4nuc(¹H, ¹³C, ¹⁹F, ³¹P) в случае Varian 400. Химические сдвиги (δ) приведены в частях на миллион (ppm).

Общая процедура A-2

Приведенные ниже ЯМР-эксперименты проводили с использованием спектрометров Bruker Avance Ⅲ400 при температуре окружающей среды, в которых используется внутренняя дейтериевая стабилизация и которые оснащены 5-мм измерительной головкой PABBO (¹H, ¹³C, ¹⁵N, ³¹P, ¹⁹F). Химические сдвиги (δ) приведены в частях на миллион (ppm).

SFC

Общая процедура D

Тест SFC-MS проводили с применением системы SFC от Berger, содержащей насос для двухкомпонентных смесей, автоматический пробоотборник, термостат для колонок, детектор на диодной матрице (DAD), клапан для переключения колонок с 6 положениями, клапан переключения растворителей и регулятор обратного давления (BPR). Как правило, температура колонки и BPR были установлены на 40°C и 100 бар соответственно. Поток из DAD разделяли на MS-спектрометр (Agilent 6110). MS-детектор был оснащен химическим источником ионизации, эксплуатируемым при атмосферном давлении. В качестве газа-распылителя использовали азот. Температуру сушильного газа поддерживали на уровне 250°С. Напряжение на капиллярной игле составляло 3000 В в режиме положительной ионизации и 3000 В в режиме отрицательной ионизации. Масс-спектры получали сканированием от 100 до 1000 с шагом, равным 0,1. Продолжительность цикла составляла 1,06 сек/цикл. Сбор данных проводили с помощью Chemstation B.04.03.

Способ 10

SFC проводили на колонке Chiralpak AD-3 50*4,6 мм I.D., 3 мкм, со скоростью потока 4 мл/мин. Две подвижные фазы (подвижная фаза: A: CO₂, B: изопропанол (0,05% DEA)). Градиент удерживали при 40%. Температура колонки составляла 40°C (MS-полярность: положительная).

Способ 12

SFC проводили на колонке Chiralcel ОD-3 50*4,6 мм I.D., 5 мкм, со скоростью потока 4 мл/мин. Две подвижные фазы (подвижная фаза: A: CO₂, B: этанол (0,05% DEA)). Градиент составлял 5%-40% B за 5 мин., и удерживание при 40% - в течение 2,5 мин, затем 5% B - в течение 2,5 мин. Температура колонки составляла 40°C (MS-полярность: положительная).

Способ 13

SFC проводили на колонке Chiralpak AD-3 50*4,6 мм I.D., 3 мкм, со скоростью потока 4 мл/мин. Две подвижные фазы (подвижная фаза: A: CO₂, B: этанол (0,05% DEA)). Градиент удерживали при 40%. Температура колонки составляла 40°C (MS-полярность: положительная).

Способ 14

SFC проводили на колонке Chiralpak AD-3 50*4,6 мм I.D., 3 мкм, со скоростью потока 4 мл/мин. Две подвижные фазы (подвижная фаза: A: CO₂, B: метанол (0,05% DEA)). Градиент удерживали при 40%. Температура колонки составляла 40°C (MS-полярность: положительная).

Общая процедура E

Тест SFC проводили с применением системы 1260 SFC от Agilent, содержащей дегазатор, насос для двухкомпонентных смесей, автоматический пробоотборник, термостат для колонок, детектор на диодной матрице (DAD), клапан для переключения колонок с 6 положениями, клапан переключения растворителей и регулятор обратного давления (BPR). Как правило, температура колонки и BPR были установлены на 40°C и 100 бар соответственно.

Способ 16

SFC проводили на колонке Chiralpak AD-3 100 × 4,6 мм I.D., 3 мкм, со скоростью потока 2,8 мл/мин. Две подвижные фазы (подвижная фаза: A: CO₂, B: этанол (0,05% DEA)). Градиент составлял 5%-40% B за 4,5 мин., и удерживание при 40% - в течение 2,5 мин, затем 5% B - в течение 1 мин. Температура колонки составляла 40°C (MS-полярность: положительная).

Способ 17

SFC проводили на колонке Chiralpak AD-3 100 × 4,6 мм I.D., 3 мкм, со скоростью потока 2,8 мл/мин. Две подвижные фазы (подвижная фаза: A: CO₂, B: этанол (0,05% DEA)). Градиент удерживали при 40% этанола (0,05% DEA) в CO₂. Температура колонки составляла 40°C (MS-полярность: положительная).

Способ 18

SFC проводили на колонке Chiralpak AD-3 100 × 4,6 мм I.D., 3 мкм, со скоростью потока 2,8 мл/мин. Две подвижные фазы (подвижная фаза: A: CO₂, B: изопропанол (0,05% DEA)). Градиент составлял 5%-40% B за 4,5 мин., и удерживание при 40% - в течение 2,5 мин, затем 5% B - в течение 1 мин. Температура колонки составляла 40°C (MS-полярность: положительная).

Способ 19

SFC проводили на колонке Chiralpak AS-3 100 × 4,6 мм I.D., 3 мкм, со скоростью потока 2,5 мл/мин. Две подвижные фазы (подвижная фаза: A: CO₂, B: этанол (0,05% DEA). Градиент составлял 5%-40% B за 4,5 мин., и удерживание при 40% - в течение 2,5 мин, затем 5% B - в течение 1 мин. Температура колонки составляла 40°C (MS-полярность: положительная).

Общая процедура F

Тест SFC проводили с применением системы UPC^2 от Waters, содержащей дегазатор, насос для двухкомпонентных смесей, автоматический пробоотборник, термостат для колонок, детектор на диодной матрице (PDA), клапан для переключения колонок с 6 положениями, клапан переключения растворителей и регулятор обратного давления (BPR). Как правило, температура колонки и BPR были установлены на 35°C и 1500 фунтов/кв. дюйм соответственно.

Способ 20

SFC проводили на колонке Chiralpak AS-3 150 × 4,6 мм I.D., 3 мкм, со скоростью потока 2,5 мл/мин. Две подвижные фазы (подвижная фаза: A: CO₂, B: изопропанол (0,05% DEA)). Градиент удерживали при 40%. Температура колонки составляла 40°C (MS-полярность: положительная).

Общая процедура G

Тест SFC проводили с применением системы SFC от Thar, содержащей насос для двухкомпонентных смесей, автоматический пробоотборник, термостат для колонок, детектор на диодной матрице (PDA), клапан для переключения колонок с 10 положениями, клапан переключения растворителей и регулятор обратного давления (BPR). Как правило, температура колонки и BPR были установлены на 35°C и 100 бар соответственно.

Способ 21

SFC проводили на колонке Pheno Lux Cellulose-2, 150 × 4,6 мм I.D., 5 мкм, со скоростью потока 2,0 мл/мин. Две подвижные фазы (подвижная фаза: A: CO₂, B: этанол (0,05% DEA)). Градиент удерживали при 50% этанола (0,05% DEA) в CO₂. Температура колонки составляла 40°C (MS-полярность: положительная).

HPLC

Общая процедура E для HPLC

Измерение с помощью HPLC выполняли с использованием системы LC-20A от SHIMADZU, содержащей насос для четырехкомпонентных смесей LC-20AD с дегазатором DGU-20A, автоматический пробоотборник SIL-20AC, термостат колонки CTO-20AC (установленный на 25°C, если не указано иное), детектор на диодной матрице (SPD-M20A) и колонку, как определено в соответствующих способах ниже.

Способ 3

В дополнение к общей процедуре Е. HPLC с обращенной фазой проводили на колонке Waters Sunfire C18, 5 мкм, 4,6-150 мм (1,7 мкм, 2,1×50 мм) со скоростью потока 1,0 мл/мин. Две подвижные фазы (подвижная фаза С: 0,03% TFA в воде, подвижная фаза D: 0,03% TFA в ацетонитриле) использовали для удерживания 95% C и 5% D в течение 13 минут, затем для удерживания 5% C и 95% D в течение 3 минут. Объем впрыска зависел от концентрации образца.

Фармакологическая часть

Биологические анализы

Анализ сдвига подвижности FGFR3 дикого типа (ферментативный анализ)

В конечном реакционном объеме, равном 25 мкл, инкубировали 0,04 нг/мкл фермента человеческого FGFR3 дикого типа (цитоплазматический домен, от Carna Biosciences) с 75 мкМ ATP, 1 мкМ субстратом FL-Peptide 30 и 250 нл тестируемого соединения (1% DMSO, конечный) в буфере для анализа (100 мМ HEPES, рН 7,4, 10 мМ MgCl₂, 0,003% Brij35, 1 мМ DTT). После инкубирования в течение 50 минут при 30°С реакцию останавливали с помощью 10 мкл 0,5 М EDTA, рН 8,0, а затем 25 мкл реакционной смеси переносили на планшет для считывания и измеряли на устройстве для считывания Caliper EZ II. Скорость превращения субстрата в продукт использовали в качестве исходных данных для нормализации, а кривую концентрация-ответ (10 точек введения доз с 4-кратным серийным разведением, начиная с 10 мкМ) наносили на график с использованием Prism для расчета IC₅₀ (M), pIC₅₀ (-logIC₅₀) и значения HillSlope.

Анализ сдвига подвижности FGFR3 V555M (ферментативный анализ)

В конечном реакционном объеме, равном 25 мкл, инкубировали 0,04 нг/мкл фермента человеческого FGFR3 V555M (цитоплазматический домен, несущий мутацию V555M, от Carna Biosciences) с 30 мкМ ATP, 1 мкМ субстратом FL-Peptide 30 и 250 нл тестируемого соединения (1% DMSO, конечный) в буфере для анализа (100 мМ HEPES, рН 7,4, 10 мМ MgCl₂, 0,003% Brij35, 1 мМ DTT). После инкубирования в течение 45 минут при 30°С реакцию останавливали с помощью 10 мкл 0,5 М EDTA, рН 8,0, а затем 25 мкл реакционной смеси переносили на планшет для считывания и измеряли на устройстве для считывания Caliper EZ II. Скорость превращения субстрата в продукт использовали в качестве исходных данных для нормализации, а кривую концентрация-ответ (10 точек введения доз с 4-кратным серийным разведением, начиная с 10 мкМ) наносили на график с использованием Prism для расчета IC₅₀ (M), pIC₅₀ (-logIC₅₀) и значения HillSlope.

Анализ сдвига подвижности FGFR3 V555L (ферментативный анализ)

В конечном реакционном объеме, равном 25 мкл, инкубировали 0,04 нг/мкл фермента человеческого FGFR3 V555L (цитоплазматический домен, несущий мутацию V555L, от Carna Biosciences) с 40 мкМ ATP, 1 мкМ субстратом FL-Peptide 30 и 250 нл тестируемого соединения (1% DMSO, конечный) в буфере для анализа (100 мМ HEPES, рН 7,4, 10 мМ MgCl₂, 0,003% Brij35, 1 мМ DTT). После инкубирования в течение 50 минут при 30°С реакцию останавливали с помощью 10 мкл 0,5 М EDTA, рН 8,0, а затем 25 мкл реакционной смеси переносили на планшет для считывания и измеряли на устройстве для считывания Caliper EZ II. Скорость превращения субстрата в продукт использовали в качестве исходных данных для нормализации, а кривую концентрация-ответ (10 точек введения доз с 4-кратным серийным разведением, начиная с 10 мкМ) наносили на график с использованием Prism для расчета IC₅₀ (M), pIC₅₀ (-logIC₅₀) и значения HillSlope.

Анализ пролиферации клеток NIH/3T3, экспрессирующих FGFR3 WT-TACC3

В день 1: 90 мкл клеточной суспензии (клетки NIH/3T3, сверхэкспрессирующие слитый белок FGFR3 WT-TACC3) (всего 30000 клеток на лунку в питательной среде (DMEM, содержащая 1% Glutamax, 10% FBS и 1% Pen/Strep)) высевали в 96-луночный планшет и затем инкубировали в течение ночи при 37°С и 5% СО₂. В день 2: к клеточным культурам добавляли 10 мкл питательной среды, содержащей разбавленный в 10 раз исходный раствор тестируемого соединения (9 точек с дозами с 4-кратным серийным разведением, начиная с 10 мкМ, 0,1% DMSO, конечный). После 72-часового инкубирования при 37°С и 5% СО₂ в день 5 объем, равный 50 мкл, реагента CellTiter Glo (CTG) вносили в 96-луночный планшет, содержащий клетки, и планшет инкубировали при комнатной температуре в течение 10 минут перед измерением RLU (относительных световых единиц) на считывающем устройстве для микропланшетов с модулем детекции люминесценции. Значение RLU нормализовали относительно % выживаемости и строили кривую зависимости концентрация-ответ, используя Prism для расчета IC₅₀ (M), pIC₅₀ (-logIC₅₀) и значения HillSlope.

Анализ пролиферации клеток NIH/3T3, экспрессирующих FGFR3 V555M-TACC3

В день 1: 90 мкл клеточной суспензии (клетки NIH/3T3, сверхэкспрессирующие слитый белок FGFR3 V555M-TACC3) (всего 30000 клеток на лунку в питательной среде (DMEM, содержащая 1% Glutamax, 10% FBS и 1% Pen/Strep)) высевали в 96-луночный планшет и затем инкубировали в течение ночи при 37°С и 5% СО₂. В день 2: к клеточным культурам добавляли 10 мкл питательной среды, содержащей разбавленный в 10 раз исходный раствор тестируемого соединения (9 точек с дозами с 4-кратным серийным разведением, начиная с 10 мкМ, 0,1% DMSO, конечный). После 72-часового инкубирования при 37°С и 5% СО₂ в день 5 объем, равный 50 мкл, реагента CellTiter Glo (CTG) вносили в 96-луночный планшет, содержащий клетки, и планшет инкубировали при комнатной температуре в течение 10 минут перед измерением RLU (относительных световых единиц) на считывающем устройстве для микропланшетов с модулем детекции люминесценции. Значение RLU нормализовали относительно % выживаемости и строили кривую зависимости концентрация-ответ, используя Prism для расчета IC₅₀ (M), pIC₅₀ (-logIC₅₀) и значения HillSlope.

Анализ пролиферации клеток NIH/3T3 с имитацией обработки (mock)

В день 1: 90 мкл клеточной суспензии (клетки NIH/3T3, трансфицированные тем же контрольным вектором, что и в двух вышеупомянутых анализах пролиферации) (всего 30000 клеток на лунку в питательной среде (DMEM, содержащая 1% Glutamax, 10% FBS и 1% Pen/Strep)) высевали в 96-луночный планшет и затем инкубировали в течение ночи при 37°С и 5% СО₂. В день 2: к клеточным культурам добавляли 10 мкл питательной среды, содержащей разбавленный в 10 раз исходный раствор тестируемого соединения (9 точек с дозами с 3-кратным серийным разведением, начиная с 30 мкМ, 0,3% DMSO, конечный). После 72-часового инкубирования при 37°С и 5% СО₂ в день 5 объем, равный 50 мкл, реагента CellTiter Glo (CTG) вносили в 96-луночный планшет, содержащий клетки, и планшет инкубировали при комнатной температуре в течение 10 минут перед измерением RLU (относительных световых единиц) на считывающем устройстве для микропланшетов с модулем детекции люминесценции. Значение RLU нормализовали относительно % выживаемости и строили кривую зависимости концентрация-ответ, используя Prism для расчета IC₅₀ (M), pIC₅₀ (-logIC₅₀) и значения HillSlope. Этот анализ служил в качестве альтернативного анализа для анализов пролиферации клеток NIH/3T3, экспрессирующих FGFR WT/VM-TACC3, для демонстрации общей токсичности тестируемых соединений, вызванной нецелевым воздействием.

Анализ клеток NIH/3T3, экспрессирующих FGFR3 WT-TACC3, в отношении фосфо-ERK (PD-анализ in vitro)

50 мкл клеточной суспензии (клетки NIH/3T3, сверхэкспрессирующие слитый белок FGFR3 WT-TACC3) (всего 10000 клеток на лунку в питательной среде (DMEM, содержащая 1% Glutamax, 10% FBS и 1% Pen/Strep)) высевали в 384-луночный планшет. После инкубирования в течение ночи при 37°C и 5% CO₂ к клеточным культурам добавляли 5,5 мкл питательной среды, содержащей 10x тестируемого соединения (10 точек с дозами с 4-кратным серийным разведением, начиная с 10 мкМ, 0,1% DMSO, конечный). После 1 часа инкубирования при 37°C и 5% CO₂ среда была истощена, и для выявления уровня фосфо-ERK применяли аналитический набор AlphaLISA SureFire Ultra p-ERK1/2 (Thr202/Tyr204) (от PerkinElmer) согласно инструкции производителя к набору. RFU (относительные единицы флуоресценции) измеряли на считывающем устройстве для микропланшетов EnVision (возб. 680 нм, исп. 615 нм) и строили кривую зависимости концентрация-ответ, используя Prism для расчета IC₅₀ (M), pIC₅₀ (-logIC₅₀) и значения HillSlope.

Анализ клеток NIH/3T3, экспрессирующих FGFR3 V555M-TACC3, в отношении фосфо-ERK (PD-анализ in vitro)

50 мкл клеточной суспензии (клетки NIH/3T3, сверхэкспрессирующие слитый белок FGFR3 V555M-TACC3) (всего 10000 клеток на лунку в питательной среде (DMEM, содержащая 1% Glutamax, 10% FBS и 1% Pen/Strep)) высевали в 384-луночный планшет. После инкубирования в течение ночи при 37°C и 5% CO₂ к клеточным культурам добавляли 5,5 мкл питательной среды, содержащей 10x тестируемого соединения (10 точек с дозами с 4-кратным серийным разведением, начиная с 10 мкМ, 0,1% DMSO, конечный). После 1 часа инкубирования при 37°C и 5% CO₂ среда была истощена, и для выявления уровня фосфо-ERK применяли аналитический набор AlphaLISA SureFire Ultra p-ERK1/2 (Thr202/Tyr204) (от PerkinElmer) согласно инструкции производителя к набору. RFU (относительные единицы флуоресценции) измеряли на считывающем устройстве для микропланшетов EnVision (возб. 680 нм, исп. 615 нм) и строили кривую зависимости концентрация-ответ, используя Prism для расчета IC₅₀ (M), pIC₅₀ (-logIC₅₀) и значения HillSlope.

Таблица 2. Фармакологические данные (IC₅₀; единичное значение нМ)

Номер соединения	FGFR3 дикого типа, Caliper	FGFR3 V555M, Caliper	FGFR3 V555L, Caliper	NIH/3T3 MOCK, CTG	NIH/3T3, экспрессирующие FGFR3 WT-TACC3, CTG	NIH/3T3, экспрессирующие FGFR3 V555M-TACC3, CTG	NIH/3T3, экспрессирующие FGFR3 WT-TACC3, уровень pERK	NIH/3T3, экспрессирующие FGFR3 V555M-TACC3, уровень pERK
7	0,3987	0,2027		1080,35	10,4715	5,77
8	0,5417	0,2354		444,45	6,783	6,9105
9	0,6182	0,4832		690,55	17,145	7,9825
10	38,9	9,142		18404	129,3	167,9
11	933,4	254,3		27886	10000	10000
12	0,8207	0,4896		454,4333	9,1045	5,244
13	1,147	0,2962		2101,467	22,14	11,231
14	1,903	0,8364		424,3	4,0635	3,8555
15	1,062933	0,484367		3695,5	16,905	6,54425
16	38,08	17,28
17	46,54	12,48
18	2,023	0,5354		680,3	74,27	88,06
19	8,166	4,631		3992,5	21,49	32,99
20	1238	667,1
21	3,706	1,699		5896	17,455	27,35
22	0,3765	0,2272		1076,05	18,1035	13,92
23	0,9789	0,3658		265,65	34,645	27,62
24	0,3731	0,40805	0,4177	1831,35	11,13575	8,38625
25	0,4953	0,316		1211,5	22,31	10,225
26	0,6367	0,4442		768,2	5,9625	6,09
27	0,6099	0,1674		1372	99,94	47,785
28	0,9388	0,3172		2074,5	10,049	8,273
29	8,561	1,659		1534	98,34	99,35
30	469,5	106,5
31	120	24,97
32	4,292	0,9774		4226,5	195,05	116,025
33	17,49	10,27		6534,5	257,75	214,45
34	1,219	0,7434		733,5	23,26	27,63
35	39,22	27,5
1	0,48	0,41	0,7269	1032,58	5,9	6,96	3,45	8,04
36	0,8387	0,293		753,35	49,57	48,175
37	71,68	27,32
38	0,4113	0,212		407,95	5,896	9,538
39	0,8807	0,2991		457,65	16,2755	23,82
40	530,6	225,7
41	23,681	12,3604	50,82	424,6	5,57	7,1065		210,7
42	18,91465	7,8466		305,2	8,843	7,736	2,73
2	0,9028	0,1616		998	21,33	27,43
3	88,3	33,52
43	1,037	0,6375		415,25	12,6235	27,505
4A	3,774	1,083		287,9	26,125	38,08
4B	656,6	231,1
44	395,1	80,88
45	1,061	0,2885		270,6	26,665	29,135
46	0,8913	0,53135		1073,275	13,249	22,14
47	2,032	0,5998		1043,25	17,39	21,12
48	0,7383	0,5278		352,4	9,0415	16,955
49	2,514	1,33		459,7	28,15	67,45
50	95,7	44,15
51	0,788	0,415		1163	44,635	54,21
52	0,7043	0,3803		389,9	4,113	6,032
53	0,9714	0,2645		1350,65	17,405	13,8655
54	140,5	38,71
5	1,78	0,5204		1047,45	19,675	27,455
6	1,162	0,4692		1280	13,767	24,275
55	810,8	277,3
56	155,6	66,39

Claims

1. Соединение формулы (I):

в том числе его стереохимически изомерная форма, где

каждый из A₁, А₂ и A₃ независимо представляет собой СН, CR^aили N при условии, что не более двух из A₁, A₂ и А₃ могут представлять собой CR^a;

C1 представляет собой водород или С_1-4алкил;

С2 представляет собой водород, С_1-4алкил или С_1-4алкокси;

Y представляет собой прямую связь, -О- или С(=O);

каждый R^a независимо представляет собой C_1-6алкил, галогенС_1-6алкил, галоген или C_1-6алкокси;

R^b представляет собой водород или C_1-6алкил;

D представляет собой 4-6-членный гетероциклил, содержащий один или два гетероатома, выбранные из N или О, где указанный гетероциклил необязательно замещен 1-2 заместителями R^c;

каждый R^c независимо представляет собой оксо, галоген, C_1-6алкил, С_1-6алкилокси или галогенC_1-6алкил;

В представляет собой фенил или 5-6-членный гетероциклил, содержащий по меньшей мере один гетероатом, выбранный из N, О или S, где каждый из указанных карбоциклила и гетероциклила необязательно замещен 1 заместителем R;

R независимо представляет собой галогенC_1-6алкил;

или его фармацевтически приемлемая соль.

2. Соединение по п. 1, характеризующееся следующей формулой (I-а),

3. Соединение по п. 1 или 2, где D представляет собой пиперазин-1-ил, где указанный пиперазин-1-ил необязательно замещен 1-2 заместителями R^c.

4. Соединение по п. 1 или 2, где D представляет собой морфолин-1-ил, где указанный морфолин-1-ил необязательно замещен 1-2 заместителями R^c.

5. Соединение по п. 1 или 2, где D представляет собой 4-, 5- или 6-членный моноциклический гетероциклил, где указанный гетероциклил необязательно замещен 1-2 заместителями R^c.

6. Соединение по любому из предыдущих пунктов, где каждый из A₁, А₂ и A₃ представляет собой СН.

7. Соединение по любому из пп. 1-5, где один из А₁, А₂ и А₃ представляет собой N, а остальные заместители А представляют собой СН или CR^a.

8. Соединение по любому из пп. 1-5, где A₁, A₂ и А₃представляют собой N или СН.

9. Соединение по любому из предыдущих пунктов, где Y представляет собой прямую связь.

10. Соединение по любому из пп. 1-8, где Y представляет собой -О- или С (=O).

11. Соединение по любому из предыдущих пунктов, где С₁ представляет собой водород, и С₂ представляет собой С_1-4алкил.

12. Соединение по любому из пп. 1-10, где C₁ и С₂ представляют собой водород.

13. Соединение по любому из предыдущих пунктов, где R^bпредставляет собой C_1-6алкил.

14. Соединение по любому из предыдущих пунктов, где D необязательно замещен 1 или 2 заместителями R_c, и каждый R_cнезависимо выбран из оксо, метила, фтора, метокси, трифторметила и трифторэтила.

15. Соединение по любому из предыдущих пунктов, где D является незамещенным.

16. Соединение по любому из предыдущих пунктов, где В представляет собой 5- или 6-членный гетероциклил, содержащий по меньшей мере один гетероатом, выбранный из N, О или S, где указанный гетероциклил необязательно замещен 1 заместителем R.

17. Соединение по п. 16, где В представляет собой ароматический гетероциклил.

18. Соединение по п. 1 или 2, где

каждый из A₁, А₂ и А₃ представляет собой СН, или А₁ и А₃представляют собой СН, и А₂ представляет собой N, или по меньшей мере один из A₁, А₂ и А₃ представляет собой CR^a, или A₁ представляет собой CR^a, и А₂ и A₃ представляют собой СН, или А₂ представляет собой CR^a, и A₁ и A₃ представляют собой СН;

С1 представляет собой водород или метил;

С2 представляет собой водород, метил или метокси, в частности водород или метил;

Y представляет собой прямую связь или С(=O), более конкретно прямую связь;

каждый R^a независимо представляет собой метил, трифторметил, фтор или метокси;

R^b представляет собой C_1-6алкил, в частности С_1-4алкил, например метил или этил;

D представляет собой 4-, 5- или 6-членный моноциклический насыщенный гетероциклил, содержащий один или два гетероатома, выбранные из N или О, где указанный гетероциклил необязательно замещен 1 или 2 заместителями R^c, в частности D представляет собой пиперазинил, морфолинил, пиперидинил, тетрагидропиранил, пирролидинил или азетидинил, где указанные кольцевые системы необязательно замещены 1 или 2 заместителями R^c, в частности D представляет собой необязательно замещенный пиперазинил, морфолинил или пирролидинил;

каждый R^c независимо представляет собой оксо, метил, фтор, метокси, трифторметил или трифторэтил;

В представляет собой 5- или 6-членный ароматический моноциклический гетероциклил, содержащий по меньшей мере один гетероатом, выбранный из N, О или S, где указанный гетероциклил необязательно замещен 1 заместителем R, в частности, В представляет собой пиридил, пиримидинил, пиразинил, пиразолил, тиазолил, оксазолил, в частности, В представляет собой незамещенный пиримидинил.

19. Соединение по п. 1, где соединение выбрано из

или его фармацевтически приемлемая соль.

20. Соединение по п. 19, представляющее собой

или его фармацевтически приемлемая соль.

21. Соединение по п. 19, представляющее собой

или его фармацевтически приемлемая соль.

22. Соединение по п. 19, представляющее собой

или его фармацевтически приемлемая соль.

23. Соединение по п. 19, представляющее собой

или его фармацевтически приемлемая соль.

24. Фармацевтическая композиция, обладающая ингибирующей активностью в отношении FGFR3, содержащая терапевтически эффективное количество соединения по любому из пп. 1-23 и фармацевтически приемлемый носитель.