RU2800717C1 - Method of predicting the risk of pre-eclampsia in pregnant women with type 1 diabetes mellitus - Google Patents

Abstract

FIELD: medicine; obstetrics; gynecology.

SUBSTANCE: invention can be used to predict the risk of developing preeclampsia (PE) in pregnant women with type 1 diabetes. At a period of 11 to 13 weeks and 6 days of pregnancy, a combination of the following indicators is assessed: age, the presence of vasculopathy, the level of glycated hemoglobin HbAlc, mean arterial pressure (MAP), Doppler pulsation index of the uterine arteries (PI UA), biochemical markers in blood serum: level sFLT/PlGF, sEng level. Based on the values obtained, the risk of developing PE is calculated as a percentage according to a given formula.

EFFECT: method allows to increase the accuracy of risk assessment of preeclampsia by assessing the totality of specific biochemical markers and anamnestic risk factors for the development of the disease.

1 cl, 2 tbl, 3 ex

Description

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству, и может быть использовано для прогнозирования риска развития преэклампсии (ПЭ) у беременных с сахарным диабетом 1 типа (СД 1 типа).The invention relates to medicine, namely to obstetrics, and can be used to predict the risk of developing preeclampsia (PE) in pregnant women with type 1 diabetes (type 1 diabetes).

Преэклампсия - это мультисистемное заболевание, развивающиеся во второй половине беременности примерно в 3-8% случаев и является одной из ведущих причин материнской и перинатальной заболеваемости и смертности во всем мире [1]. Сахарный диабет 1 типа, в свою очередь, ассоциирован с трех-пятикратным увеличением риска преэклампсии. Для пациентов с сахарным диабетом 1 типа так же, как и для ПЭ, характерно наличие эндотелиальной дисфункции, развитие которой сопряжено с длительным нахождением организма беременной в условиях гипергликемии и оксидативного стресса [2]. Эндотелиальная дисфункция, развившаяся еще до беременности на фоне СД 1 типа, делает характерным для этих пациенток развитие ранней преэклампсии и тенденцию к более тяжелому ее течению. Выраженность эндотелиальной дисфункции напрямую зависит от наличия сосудистых осложнений диабета и степени нарушения углеводного обмена (специфические для СД 1 типа факторы - васкулопатия и уровень HbAlc) [3].Preeclampsia is a multisystem disease that develops in the second half of pregnancy in approximately 3-8% of cases and is one of the leading causes of maternal and perinatal morbidity and mortality worldwide [1]. Type 1 diabetes, in turn, is associated with a three to fivefold increased risk of preeclampsia. For patients with type 1 diabetes, as well as for PE, the presence of endothelial dysfunction is characteristic, the development of which is associated with a long stay of the pregnant woman's body in conditions of hyperglycemia and oxidative stress [2]. Endothelial dysfunction, which developed even before pregnancy against the background of type 1 diabetes, makes the development of early preeclampsia and a tendency to its more severe course characteristic for these patients. The severity of endothelial dysfunction directly depends on the presence of vascular complications of diabetes and the degree of carbohydrate metabolism disorders (specific factors for type 1 diabetes are vasculopathy and the level of HbAlc) [3].

Установлено, что плацентарные факторы, высвобождающиеся в ответ на оксидативный стресс, при раннем развитии преэклампсии могут быть повышены уже в первом триместре беременности, после завершения первой волны инвазии трофобласта [4]. К таким факторам относятся плацентарная растворимая fms-подобная тирозинкиназа 1 (sFlt-1), уровень которой повышен при ПЭ, а также проангиогенный плацентарный фактор роста (PIGF), концентрация которого в случае развития ПЭ снижается [5, 6]. Таким образом, соотношение sFlt-1/PlGF можно использовать для выявления пациентов с высоким риском развития преэклампсии [7]. Эндоглин (sEng) представляет собой гомодимерный мембранный гликопротеин I типа, который высоко экспрессирован в мембранах пролиферирующих эндотелиальных клеток сосудов и трофобласта [8]. На сегодняшний день доказано, что уровень sEng в сыворотке женщин с преэклампсией повышен и коррелирует со степенью тяжести преэклампсии [8, 9]. У женщин из группы высокого риска стойкое повышение резистентности маточных артерий отражается повышением пульсационного индекса (ПИ МА) в первой половине беременности и связано с высоким риском развития ранней преэклампсии [10].It has been established that placental factors released in response to oxidative stress can be increased in the early development of preeclampsia already in the first trimester of pregnancy, after the completion of the first wave of trophoblast invasion [4]. These factors include placental soluble fms-like tyrosine kinase 1 (sFlt-1), the level of which is increased in PE, as well as proangiogenic placental growth factor (PIGF), the concentration of which decreases in the case of PE [5, 6]. Thus, the sFlt-1/PlGF ratio can be used to identify patients at high risk of developing preeclampsia [7]. Endoglin (sEng) is a homodimeric type I membrane glycoprotein that is highly expressed in the membranes of proliferating vascular endothelial cells and trophoblast [8]. To date, it has been proven that the level of sEng in the serum of women with preeclampsia is elevated and correlates with the severity of preeclampsia [8, 9]. In women from the high-risk group, a persistent increase in uterine artery resistance is reflected by an increase in the pulsation index (PI MA) in the first half of pregnancy and is associated with a high risk of developing early preeclampsia [10].

Актуальность проблемы связана с высоким риском развития преэклампсии у пациенток с СД 1 типа, в результате данная группа пациенток должна находиться под строгим наблюдением и включать оценку основных параметров в первом триместре до развития клинических проявлений. Тем не менее, в настоящее время не существует надежного скринингового теста ранней диагностики развития ПЭ у пациенток с СД. Комбинация клинических, биохимических и биофизических маркеров может повысить прогностическую силу скрининговых исследований, что будет полезным в последующем выборе адекватной тактики ведения данных женщин, а также поспособствует снижению частоты неблагоприятных исходов беременности как для матери, так и для плода.The relevance of the problem is associated with a high risk of developing preeclampsia in patients with type 1 diabetes; as a result, this group of patients should be under strict supervision and include an assessment of the main parameters in the first trimester before the development of clinical manifestations. However, at present, there is no reliable screening test for the early diagnosis of the development of PE in patients with DM. The combination of clinical, biochemical and biophysical markers can increase the predictive power of screening studies, which will be useful in the subsequent choice of adequate tactics for managing these women, and will also help reduce the incidence of adverse pregnancy outcomes for both the mother and the fetus.

Известен способ прогнозирования ранней преэклампсии на сроке 11-13 недель (RU 2732489 С2, Телицын Д.П. и соавт.19.12.2018). Способ включает в себя измерение биохимических показателей PlGF и sVEGF R1. При значениях PlGF более 60 пг/мл в сочетании с sVEGF R1 более 2000 пг/мл прогнозируют увеличение риска развития ранней преэклампсии.There is a known method for predicting early preeclampsia at a period of 11-13 weeks (RU 2732489 C2, Telitsyn D.P. et al. 12/19/2018). The method includes measuring the biochemical parameters of PlGF and sVEGF R1. PlGF values greater than 60 pg/ml in combination with sVEGF R1 greater than 2000 pg/ml are predicted to increase the risk of developing early preeclampsia.

Недостатком данного способа является специфичность данных маркеров в отношении плацентарной недостаточности и задержки роста плода (ЗРП), наличие которых могут затруднять диагностику преэклампсии, а также отсутствие материнских показателей, которые определяют базовый риск развития ПЭ.The disadvantage of this method is the specificity of these markers for placental insufficiency and fetal growth retardation (FGR), the presence of which may complicate the diagnosis of preeclampsia, as well as the absence of maternal indicators that determine the basic risk of developing PE.

Известен способ прогнозирования риска развития преэклампсии на основе комбинаций генов матриксных металлопротеиназ (RU 2 646 448 С1, Чурносов М.И. и соавт., 2018-03-05). При выявлении сочетания аллелей А ММР-7 (rs11568818) и Т ММР-8 (rs11225395) диагностируется высокий риск развития ПЭ, тогда как сочетание аллеля С ММР-8 (rs11225395) и генотипа GG MMP-7(rs11568818) позволяют отнести пациентку к группе низкого риска развития ПЭ.A known method for predicting the risk of developing preeclampsia based on combinations of matrix metalloproteinase genes (RU 2 646 448 C1, Churnosov M.I. et al., 2018-03-05). When a combination of alleles A MMP-7 (rs11568818) and T MMP-8 (rs11225395) is detected, a high risk of developing PE is diagnosed, while a combination of the C MMP-8 allele (rs11225395) and the GG MMP-7 genotype (rs11568818) allows the patient to be assigned to the group low risk of developing PE.

Недостатком данного способа является его трудоемкость и высокая стоимость, в результате чего использование его в широкой практике может быть затруднено.The disadvantage of this method is its complexity and high cost, as a result of which its use in wide practice can be difficult.

Известен способ прогнозирования преэклампсии тяжелой степени (RU 2 739 694, Кудрявцева Е.В. и соавт., 07.03.2020). Способ включает в себя сбор анамнестических параметров и исследование крови. Сбор анамнеза проводится в первом триместре беременности, определяют наличие наследственности, отягощенной по сердечно-сосудистой патологии, наличие анемии, оценивают уровень креатинина, ACT, РАРР-А, АЧТВ и MHO. Далее вычисляют прогностический индекс Р1пэ. При значении индекса >0 прогнозируют низкий риск развития тяжелой преэклампсии, а при РI_ПЭ≤0 делают заключение о высоком риске развития тяжелой преэклампсии.There is a known method for predicting severe preeclampsia (RU 2 739 694, Kudryavtseva E.V. et al., 03/07/2020). The method includes the collection of anamnestic parameters and a blood test. History taking is carried out in the first trimester of pregnancy, the presence of heredity burdened by cardiovascular pathology, the presence of anemia are determined, the level of creatinine, ACT, PAPP-A, APTT and MHO are assessed. Next, the prognostic index P1pe is calculated. If the index value is >0, a low risk of developing severe preeclampsia is predicted, and if PI _PE ≤0, a conclusion is made about a high risk of developing severe preeclampsia.

Недостатком данного способа, является тот факт, что каждый из перечисленных в способе параметров может быть повышен при наличии различных патологических состояний, не связанных с беременностью и развитием преэклампсии, что может снижать специфичность данного способа.The disadvantage of this method is the fact that each of the parameters listed in the method can be increased in the presence of various pathological conditions not associated with pregnancy and the development of preeclampsia, which can reduce the specificity of this method.

Известен способ раннего прогнозирования развития преэклампсии (RU 2 648 872 С1, Сюндюкова Е.Г. и соавт., 18.10.2016), сущность которого состоит в том, что для прогнозирования развития ПЭ на сроке 11-14 недель проводят сбор анамнестических данных, выполняют гематологический и биохимический анализ крови. Проводят иммунологическое обследование, оценку маточно-плацентарной гемодинамики. Далее при помощи математической модели с получением предельных величин коэффициента прогноза определяют риск развития преэклампсии (оцениваются 28 параметров). Этот способ является ближайшим аналогом по техническому решению по отношению к заявляемому способу и выбран в качестве прототипа.A known method for early prediction of the development of preeclampsia (RU 2 648 872 C1, Syundyukova E.G. et al., 10/18/2016), the essence of which is that in order to predict the development of PE at a period of 11-14 weeks, anamnestic data are collected, hematological and biochemical blood tests. Conduct immunological examination, assessment of uteroplacental hemodynamics. Further, with the help of a mathematical model, with the receipt of the limiting values of the predictive coefficient, the risk of developing preeclampsia is determined (28 parameters are evaluated). This method is the closest analogue to the technical solution in relation to the proposed method and is selected as a prototype.

Недостатком данного способа является его трудоемкость, заключающаяся в определении достаточно большого количества показателей как анамнестических, так и лабораторных, которые, в большинстве своем, не являются специфичными в отношении развития ПЭ, что затрудняет интерпретацию полученных результатов и использование способа в качестве рутинного метода.The disadvantage of this method is its complexity, which consists in determining a sufficiently large number of indicators, both anamnestic and laboratory, which, for the most part, are not specific for the development of PE, which makes it difficult to interpret the results and use the method as a routine method.

Техническим результатом изобретения является расширение арсенала средств определения риска развития преэклампсии у беременных с сопутствующим сахарным диабетом 1 типа на сроке от 11 недель до 13 недель 6 дней беременности, повышение специфичности способа, снижение его трудоемкости.The technical result of the invention is to expand the arsenal of means for determining the risk of developing preeclampsia in pregnant women with concomitant type 1 diabetes mellitus for a period of 11 weeks to 13 weeks 6 days of pregnancy, increasing the specificity of the method, reducing its labor intensity.

Указанный технический результат достигается в способе определения риска развития преэклампсии (ПЭ) у беременных с сахарным диабетом 1 типа, включающем оценку анамнестических, биохимических, инструментальных показателей на сроке от 11 недель до 13 недель 6 дней беременности, отличающийся тем, что оценивают совокупность следующих показателей: возраст, наличие васкулопатий в виде установленной диабетической ретинопатии или диабетической нефропатии, полинейропатии, уровень гликированного гемоглобина HbAlc, среднее артериальное давление (САД), среднее значение допплерометрического пульсационного индекса маточных артерий (ПИ МА), биохимические маркеры в сыворотке крови: значение sFLT/PlGF, уровень растворимого эндоглина sEng, далее рассчитывают риск развития ПЭ в процентах по следующей формуле:The specified technical result is achieved in a method for determining the risk of developing preeclampsia (PE) in pregnant women with type 1 diabetes mellitus, including the assessment of anamnestic, biochemical, instrumental indicators for a period of 11 weeks to 13 weeks 6 days of pregnancy, characterized in that the totality of the following indicators is evaluated: age, the presence of vasculopathy in the form of established diabetic retinopathy or diabetic nephropathy, polyneuropathy, the level of glycated hemoglobin HbAlc, mean arterial pressure (MAP), mean Doppler pulsation index of the uterine arteries (PI MA), biochemical markers in blood serum: sFLT/PlGF value, the level of soluble endoglin sEng, then calculate the risk of developing PE as a percentage using the following formula:

Р=1/(1+e^-2),P \u003d 1 / (1 + e ^-2 ),

где Р - риск развития ПЭ (%);where P is the risk of developing PE (%);

е - основание натуральных логарифмов;e is the base of natural logarithms;

Z - уравнение регрессии;Z - regression equation;

Z=-152,189+1,016 × X₁+0,268 × Х₂+0,095 х Х₃+0,088 × Х₄+4,284 × Х₅+Z=-152.189+1.016 × X ₁ +0.268 × X ₂ +0.095 × X ₃ +0.088 × X ₄ +4.284 × X ₅ +

24,769 × Х₆+12,558 × Х₇,24.769 × X ₆ +12.558 × X ₇ ,

где X₁ - возраст беременной, полных лет; Х₂ - значение sFLT/PlGF; X₃ - уровень sEng, нг/мл; Х₄ - уровень САД, мм рт.ст.; Х₅ - уровень HbAlc; Х₆ - наличие васкулопатий: наличие одного или нескольких сосудистых осложнений расценивают как 1, отсутствие - 0; Х₇ - значение ПИ МА.where X ₁ - the age of the pregnant woman, full years; X ₂ - the value of sFLT/PlGF; X ₃ - sEng level, ng/ml; X ₄ - the level of GARDEN, mm Hg; X ₅ - the level of HbAlc; X ₆ - the presence of vasculopathy: the presence of one or more vascular complications is regarded as 1, the absence is 0; X ₇ - the value of PI MA.

Впервые в качестве ранних предикторов используются биохимические специфические маркеры преэклампсии (sFLT, PlGF, sEng) в совокупности с материнскими характеристиками и результатами инструментальных исследований.For the first time, biochemical specific markers of preeclampsia (sFLT, PlGF, sEng) are used as early predictors in combination with maternal characteristics and the results of instrumental studies.

Изобретение основано на результатах исследования, включающего 74 пациента с сахарным диабетом 1 типа. Основными критериями включения являлось наличие СД 1 типа, одноплодная беременность и подписанное информированное добровольное согласие на участие в исследовании. Средний возраст в исследуемой группе составил 28,7 лет (95% ДИ 26,5-30,8). Средний уровень гликированного гемоглобина составил 7,8% (95%ДИ 7,1-8,5). Диабетическая васкулопатия была зарегистрирована у 70% пациентов (52 пациентов).The invention is based on the results of a study including 74 patients with type 1 diabetes mellitus. The main inclusion criteria were the presence of type 1 diabetes, singleton pregnancy and signed informed voluntary consent to participate in the study. The mean age in the study group was 28.7 years (95% CI 26.5-30.8). The mean glycated hemoglobin was 7.8% (95% CI 7.1-8.5). Diabetic vasculopathy was reported in 70% of patients (52 patients).

Разработанная нами многофакторная прогностическая модель была подтверждена проведением ROC-анализа и показала высокие прогностические показатели для прогнозирования ПЭ у пациентов с СД 1 типа (табл. 1).The multivariate prognostic model we developed was confirmed by ROC analysis and showed high prognostic indicators for predicting PE in patients with type 1 DM (Table 1).

Способ осуществляют следующим образом.The method is carried out as follows.

У беременных с сахарным диабетом 1 типа, на сроке от 11 недель до 13 недель 6 дней беременности оценивают совокупность следующих показателей: возраст, наличие васкулопатий в виде установленной диабетической ретинопатии или диабетической нефропатии, полинейропатии, уровень гликированного гемоглобина HbA1c, среднее артериальное давление (САД), среднее значение допплерометрического пульсационного индекса правой и левой маточных артерий (ПИ МА), биохимический маркеры в сыворотке крови: значение sFlt-1/PIGF, уровень растворимого эндоглина sEng.In pregnant women with type 1 diabetes, for a period of 11 weeks to 13 weeks 6 days of pregnancy, a combination of the following indicators is assessed: age, the presence of vasculopathy in the form of established diabetic retinopathy or diabetic nephropathy, polyneuropathy, the level of glycated hemoglobin HbA1c, mean arterial pressure (MAP) , mean Doppler pulsation index of the right and left uterine arteries (PI MA), biochemical markers in blood serum: sFlt-1/PIGF value, level of soluble endoglin sEng.

Сосудистые осложнения сахарного диабета (васкулопатии)Vascular complications of diabetes mellitus (vasculopathy)

Являются специфическим параметром для пациентов с СД 1 типа и включают в себя: диабетическую нефропатию, ретинопатию, полинейропатию. При наличии одного или нескольких сосудистых осложнений, подтвержденных консультативным заключением соответствующего специалиста, значение параметра Х₆ для пациентов с СД 1 типа, расценивают как 1, отсутствие васкулопатий - 0.They are a specific parameter for patients with type 1 diabetes and include: diabetic nephropathy, retinopathy, polyneuropathy. In the presence of one or more vascular complications, confirmed by the advisory opinion of the relevant specialist, the value of the parameter X ₆ for patients with type 1 diabetes is regarded as 1, the absence of vasculopathy is 0.

Определение среднего артериального давления (САД).Determination of mean arterial pressure (MAP).

Измерение АД проводят по методу Короткова. В состоянии покоя (после ≥5 мин отдыха) в положении сидя с опорой спины и лежа, манжетка на уровне сердца (нижний край на 2 см выше локтевого сгиба). Нагнетание воздуха в манжетку быстро до уровня, превышающего исчезновение тонов Короткова примерно на 20 мм рт.ст. Скорость снижения давления в манжетке - не более 2 мм рт.ст. в сек. Измерения не менее 2 раз с интервалом не менее 1 мин на каждой руке. САД рассчитывают по формуле (САД)=1/3 ×систолическое АД +2/3 ×диастолическое АД. При разнице САД на двух руках более 10 мм рт.ст. следует ориентироваться на результаты измерения на руке с более высокими значениями АД. Оценивают среднее значение всех измерений. Диагностировать АГ во время беременности следует на основании среднего значения, по крайней мере, двух значений АД в результате измерений, проведенных на одной руке через 15 минут.Measurement of blood pressure is carried out according to the Korotkov method. At rest (after ≥5 minutes of rest) in a sitting position with back support and lying down, the cuff is at heart level (the lower edge is 2 cm above the elbow). Inflation of air into the cuff quickly to a level exceeding the disappearance of Korotkoff sounds by about 20 mm Hg. The rate of pressure reduction in the cuff is no more than 2 mm Hg. in sec. Measurements at least 2 times with an interval of at least 1 min on each arm. SBP is calculated by the formula (SBP)=1/3 × systolic blood pressure +2/3 × diastolic blood pressure. With a difference in SBP on two arms of more than 10 mm Hg. should be guided by the results of measurements on the arm with higher blood pressure values. Estimate the average value of all measurements. Diagnosis of hypertension during pregnancy should be based on the average of at least two blood pressure values measured on one arm 15 minutes later.

Оценка пульсационного индекса маточных артерий (ПИ МА)Evaluation of the pulsation index of the uterine arteries (PI MA)

При проведении ультразвуковой допплерографии: определяют сагиттальный срез матки с визуализацией шеечного канала и внутреннего зева. С использованием цветового картирования идентифицируется маточная артерия (МА), проходящая по боковой поверхности шейки и матки на уровне внутреннего зева. Для оценки кривых скоростей кровотока (КСК) используется импульсный допплер с контрольным объемом 2 мм, который позволяет исследовать всю ширину сосуда, угол инсонации должен быть менее 30°. При получении трех одинаковых КСК МА, измеряется пульсационный индекс и рассчитывается среднестатистический индекс левой и правой артерий.When conducting ultrasound dopplerography: a sagittal section of the uterus is determined with visualization of the cervical canal and internal pharynx. Using color mapping, the uterine artery (UA) is identified, passing along the lateral surface of the cervix and uterus at the level of the internal os. To evaluate the curves of blood flow velocities (BSC), a pulsed Doppler with a control volume of 2 mm is used, which allows examining the entire width of the vessel, the insonation angle should be less than 30°. Upon receipt of three identical MA CSCs, the pulsation index is measured and the average statistical index of the left and right arteries is calculated.

Определение уровня гликированного гемоглобина (HbAlc)Determination of the level of glycated hemoglobin (HbAlc)

Уровень гликированного гемоглобина определяют при помощи анализатора Bio-Rad D-10 (США). В основе работы анализатора для определения гликированного гемоглобина D10 лежит референсный метод -жидкостная ионообменная хроматография высокого давления (ВЭЖХ). Коэффициент вариации (CV)<4%. Анализатор представляет собой автоматизированную систему, штатив которой рассчитан на максимальную загрузку 10 образцов.Время одного анализа - 3 мин.Прибор создает градиент концентрации за счет изменения скорости подачи буферов на хроматографическую колонку, благодаря чему происходит разделение различных фракций гемоглобина (A1c, A1a, A1b, LA1c/CHb, А2, F) на ионообменной смоле колонки, затем происходит регистрация путем фотометрии при длине волны 415 нм. Результаты исследований представляются в виде распечатки с хроматограммой и сообщением, идентифицирующим все обнаруженные пики и относительный процент каждого пика. Анализатор прошел процедуру Международной (NGSP, ISO) и российской сертификации.The level of glycated hemoglobin is determined using the analyzer Bio-Rad D-10 (USA). The analyzer for the determination of glycated hemoglobin D10 is based on the reference method - high pressure liquid ion exchange chromatography (HPLC). Coefficient of variation (CV)<4%. The analyzer is an automated system, the stand of which is designed for a maximum load of 10 samples. The time of one analysis is 3 minutes. The device creates a concentration gradient by changing the buffer feed rate to the chromatographic column, due to which the separation of various hemoglobin fractions (A1c, A1a, A1b, LA1c/CHb, A2, F) on the ion exchange resin of the column, then registration by photometry at a wavelength of 415 nm. The test results are presented as a printout with a chromatogram and a message identifying all detected peaks and the relative percentage of each peak. The analyzer has passed the procedure of International (NGSP, ISO) and Russian certification.

Определение sFlt-1 (растворимая fms-подобная тирозинкиназа-1).Determination of sFlt-1 (soluble fms-like tyrosine kinase-1).

Содержание sFlt-1 в сыворотке периферической крови определяют методом электрохемилюминисцентного анализа с использованием коммерческих тест-систем Elecsys sFlt-1 фирмы Roche Diagnostics GmbH (Германия) на автоматическом иммунохимическом анализаторе Cobas е411 (Япония). К 20 мкл образца сыворотки крови пациента добавляют одновременно биотинилированное моноклональное антитело, специфичное к sFlt-1 и специфичное к sFlt-1 моноклональное антитело, меченное рутениевым комплексом. После инкубации в течение 9 минут при +37°С добавляют микрочастицы, покрытые стрептавидином. Образовавшиеся в результате первой инкубации комплексы связываются с микрочастицами посредством взаимодействия биотина и стрептавидина. Далее реакционную смесь забирают в измерительную ячейку, где микрочастицы оседают на поверхность электрода в результате магнитного взаимодействия. Затем с помощью промывающих растворов удаляют не связавшиеся вещества. Далее приложенное к электроду напряжение вызывает хемилюминесцентную эмиссию, которая измеряется фотоумножителем. Результаты исследования оценивают количественным способом с помощью 2-точечной калибровочной кривой и референсной калибровочной кривой, данные которой предоставлены производителем в штрихкоде к реагенту.The content of sFlt-1 in peripheral blood serum is determined by electrochemiluminescence analysis using commercial test systems Elecsys sFlt-1 from Roche Diagnostics GmbH (Germany) on an automatic immunochemical analyzer Cobas e411 (Japan). To 20 μl of a patient's serum sample, a biotinylated monoclonal antibody specific for sFlt-1 and a monoclonal antibody specific for sFlt-1 labeled with a ruthenium complex are added simultaneously. After incubation for 9 minutes at +37°C, microparticles coated with streptavidin are added. The complexes formed as a result of the first incubation bind to microparticles through the interaction of biotin and streptavidin. Next, the reaction mixture is taken into the measuring cell, where the microparticles are deposited on the electrode surface as a result of magnetic interaction. Then, with the help of washing solutions, unbound substances are removed. Further, a voltage applied to the electrode causes chemiluminescent emission, which is measured by a photomultiplier. The results of the study are quantified using a 2-point calibration curve and a reference calibration curve, the data of which are provided by the manufacturer in the barcode for the reagent.

Определение PIGF (плацентарный фактор роста)Determination of PIGF (placental growth factor)

Содержание PIGF в сыворотке периферической крови определяют методом электрохемилюминисцентного анализа с использованием коммерческих тест-систем Elecsys PIGF фирмы Roche Diagnostics GmbH (Германия) на автоматическом иммунохимическом анализаторе Cobas е411 (Япония). К 20 мкл образца сыворотки крови пациента добавляют одновременно биотинилированное моноклональное антитело, специфичное к PIGF, и специфичное к PIGF моноклональное антитело, меченное рутениевым комплексом. После инкубации в течение 9 минут при +37°С добавляют микрочастицы, покрытые стрептавидином. Образовавшиеся в результате первой инкубации комплексы связываются с микрочастицами посредством взаимодействия биотина и стрептавидина. Далее реакционную смесь забирают в измерительную ячейку, где микрочастицы оседают на поверхность электрода в результате магнитного взаимодействия. Затем с помощью промывающих растворов удаляют не связавшиеся вещества. Далее приложенное к электроду напряжение вызывает хемилюминесцентную эмиссию, которая измеряется фотоумножителем. Результаты исследования оценивают количественным способом с помощью 2-точечной калибровочной кривой и референсной калибровочной кривой, данные которой предоставлены производителем в штрихкоде к реагенту.The content of PIGF in peripheral blood serum is determined by electrochemiluminescence analysis using commercial Elecsys PIGF test systems from Roche Diagnostics GmbH (Germany) on an automatic immunochemical analyzer Cobas e411 (Japan). A biotinylated PIGF-specific monoclonal antibody and a ruthenium complex-labeled PIGF-specific monoclonal antibody are added simultaneously to 20 μl of a patient's serum sample. After incubation for 9 minutes at +37°C, microparticles coated with streptavidin are added. The complexes formed as a result of the first incubation bind to microparticles through the interaction of biotin and streptavidin. Next, the reaction mixture is taken into the measuring cell, where the microparticles are deposited on the electrode surface as a result of magnetic interaction. Then, with the help of washing solutions, unbound substances are removed. Further, a voltage applied to the electrode causes chemiluminescent emission, which is measured by a photomultiplier. The results of the study are quantified using a 2-point calibration curve and a reference calibration curve, the data of which are provided by the manufacturer in the barcode for the reagent.

На основании полученных значений измерения sFLT и P1GF, рассчитывают соотношение sFLT/PlGF, которое в дальнейшем используют в формуле расчета вероятности развития преэклампсии.Based on the obtained measurement values of sFLT and P1GF, the sFLT/PlGF ratio is calculated, which is then used in the formula for calculating the probability of developing preeclampsia.

Определение sEng (растворимой формы эндоглина)Determination of sEng (soluble form of endoglin)

В образцах в сыворотке крови пациенток определяют с помощью системы двуцентрового иммуноферментного анализа (ИФА), разработанной в лаборатории гибридомной технологии ФГБУ «РНЦРХТ им. акад. A.M. Гранова» [11]. Моноклональное антитело (МКАТ) к эндоглину человека 4Е4 (10 мкг/мл, ФСР) адсорбировали на твердую фазу в течение 1,5-2 ч при +37°С. Образцы сыворотки крови инкубируют в течение 1 ч при +37°С. Связанный антиген выявляют посредством конъюгированного с пероксидазой хрена МКАТ 4С9 в течение 45 мин при +37°С. В качестве калибратора был использован рекомбинантный эндоглин человека (R&DSystems, Minneapolis, MN; cat. 1097-EN-025). Инкубации и отмывки проводят в трис-буфере (рН 7,4), содержавшем 0,05% твин-20. Все образцы тестированы дважды, средние значения концентраций sEng были использованы при статистической обработке данных.In samples in the blood serum of patients, they are determined using a two-center enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) system developed in the laboratory of hybridoma technology of the Federal State Budgetary Institution “RNTsRHT them. acad. A.M. Granov” [11]. Monoclonal antibody (MAB) to human endoglin 4E4 (10 μg/ml, FSR) was adsorbed on the solid phase for 1.5-2 hours at +37°C. Blood serum samples are incubated for 1 hour at +37°C. The bound antigen is detected by horseradish peroxidase-conjugated MKAT 4C9 for 45 min at +37°C. Recombinant human endoglin (R&DSystems, Minneapolis, MN; cat. 1097-EN-025) was used as a calibrator. Incubations and washings are carried out in Tris buffer (pH 7.4) containing 0.05% tween-20. All samples were tested twice, the average values of sEng concentrations were used in statistical data processing.

Полученные анамнестические данные и результаты инструментальных и биохимических измерений подставляют в описанную выше формулу:The obtained anamnestic data and the results of instrumental and biochemical measurements are substituted into the formula described above:

Р=1/(1+e^-z),P \u003d 1 / (1 + e ^-z ),

Определяют риск развития ПЭ в процентах.Determine the risk of developing PE in percent.

Способ подтверждается следующими клиническими примерами.The method is confirmed by the following clinical examples.

Пример 1. Беременная с СД 1 типа 19 лет, с непролиферативной диабетической ретинопатией, по данным обследования при сроке 11 недель и 5 дней установлено:Example 1. A pregnant woman with type 1 diabetes, 19 years old, with non-proliferative diabetic retinopathy, according to the examination at a period of 11 weeks and 5 days, it was established:

• уровень sFLT/PlGF - 90,3• sFLT/PlGF level - 90.3

• уровень sEng - 375,9 нг/мл• sEng level - 375.9 ng/ml

• уровень среднего АД - 90 мм рт.ст.• the level of average blood pressure - 90 mm Hg.

• уровень HbAlc в первом триместре - 6,7%• HbAlc level in the first trimester - 6.7%

• значение ПИ МА - 1,28• PI MA value - 1.28

Рассчитаем значение Z:Calculate the Z value:

Z=-152,189+1,016 × 19+0,268 × 90,3+0,095 × 375,9+0,088 × 90+4,284 × 6,7+24,769 × 1+12,558 × 1,28=4,4919.Z=-152.189+1.016×19+0.268×90.3+0.095×375.9+0.088×90+4.284×6.7+24.769×1+12.558×1.28=4.4919.

Рассчитаем значение e^-z=0,0112.Let's calculate the value of e ^-z =0.0112.

Рассчитаем вероятность развития ПЭ в течение данной беременности Р=1/(1+^e-z)=98,89%Calculate the probability of developing PE during this pregnancy Р=1/(1+ ^ez )=98.89%

У пациентки развилась умеренная ПЭ при сроке 34 недели, пациентка была родоразрешена при сроке 37 недель путем операции кесарева сечения в плановом порядке в связи с длительным стажем СД 1 типа, родился здоровый доношенный новорожденный с оценкой по Апгар 7/7 баллов.The patient developed moderate PE at 34 weeks' gestation, the patient was delivered at 37 weeks' gestation by elective caesarean section due to a long history of type 1 diabetes, and a healthy full-term newborn was born with an Apgar score of 7/7.

Пример 2. Беременная с СД 1 типа 26 лет, имеют место диабетические васкулопатии в виде диабетической сенсорной нейропатии. По данным обследования при сроке 11 недель и 6 дней установлено:Example 2. A pregnant woman with type 1 diabetes, 26 years old, has diabetic vasculopathy in the form of diabetic sensory neuropathy. According to the examination at a period of 11 weeks and 6 days, it was established:

• уровень sFLT/PlGF - 66,8• sFLT/PlGF level - 66.8

• уровень sEng - 348,0 нг/мл• sEng level - 348.0 ng/ml

• уровень среднего АД - 93 мм рт.ст.• the level of average blood pressure - 93 mm Hg.

• уровень HbAlc в первом триместре - 7,3%• HbAlc level in the first trimester - 7.3%

• значение ПИ МА -1,0• PI MA value -1.0

Рассчитаем значение Z:Calculate the Z value:

Z=-152,189+1,016 × 26+0,268 × 66,8+0,095 × 348+0,088 × 93+4,284 × 7,3+24,769 × 1+12,558 × 1,0=1,9401.Z=-152.189+1.016×26+0.268×66.8+0.095×348+0.088×93+4.284×7.3+24.769×1+12.558×1.0=1.9401.

Рассчитаем значение e^-z=0,1437.Let's calculate the value of e ^-z = 0.1437.

Рассчитаем вероятность развития ПЭ в течение данной беременности Р=1/(1+e^-z)=87,44%Calculate the probability of developing PE during this pregnancy Р=1/(1+e ^-z )=87.44%

У пациентки развилась умеренная ПЭ при сроке 35 недель, потребовавшая родоразрешения при сроке 37 недель путем операции кесарева сечения в экстренном порядке, Апгар 7/7 баллов.The patient developed moderate PE at 35 weeks' gestation, requiring delivery at 37 weeks' gestation by emergency caesarean section, Apgar score 7/7.

Пример 3. Беременная с СД 1 типа 27 лет, имеют место диабетические васкулопатии в виде диабетической непролиферативной ретинопатии и сенсорной нейропатии. По данным обследования при сроке 11 недель и 3 дней установлено:Example 3. A 27-year-old pregnant woman with type 1 diabetes has diabetic vasculopathy in the form of diabetic non-proliferative retinopathy and sensory neuropathy. According to the examination at a period of 11 weeks and 3 days, it was established:

• уровень sFLT/PlGF -25,1• sFLT/PlGF level -25.1

• уровень sEng - 421,0 нг/мл• sEng level - 421.0 ng/ml

• уровень среднего АД - 73 мм рт.ст.• the level of average blood pressure - 73 mm Hg.

• уровень HbAlc в первом триместре - 7,5%• HbAlc level in the first trimester - 7.5%

• значение ПИ МА - 1,09• PI MA value - 1.09

Рассчитаем значение Z:Calculate the Z value:

Z=-152,189+1,016 × 27+0,268 × 25,1+0,095 × 421+0,088 × 73+4,284 × 7,5+24,769 × 1+12,558 × 1,09=-0,9947.Z=-152.189+1.016×27+0.268×25.1+0.095×421+0.088×73+4.284×7.5+24.769×1+12.558×1.09=-0.9947.

Рассчитаем значение e^-z=2,7038.Calculate the value of e ^-z = 2.7038.

Рассчитаем вероятность развития ПЭ в течение данной беременности Р=1/(1+e^-z)=27,00%Calculate the probability of developing PE during this pregnancy Р=1/(1+e ^-z )=27.00%

У пациентки беременность протекала без гипертензивных осложнений, беременность завершилась родоразрешением при сроке 38 недель путем операции кесарева сечения в плановом порядке в связи с диабетической фетопатией, Апгар 7/7 баллов.The patient's pregnancy proceeded without hypertensive complications, the pregnancy ended in delivery at a period of 38 weeks by caesarean section in a planned manner due to diabetic fetopathy, Apgar 7/7 points.

Всего заявляемым способом обследованы 74 беременных с сахарным диабетом 1 типа для выявления риска ПЭ на ранних сроках. У 29 женщин был установлен высокий риск развития ПЭ на основании показателя Р вероятности развития ПЭ более 50%. Впоследствии у 22 женщин был установлен диагноз преэклампсии умеренного либо тяжелого течения в сроках от 32 до 36 недель (медиана срока - 34 недель гестации), у 7 пациенток на фоне своевременного начала профилактики и грамотного ведения беременности удалось избежать развития ПЭ, несмотря на высокий процент риска. У 45 женщин был выявлен низкий риск развития преэклампсии, и у 41 из них развития данного осложнения не наблюдалось и беременность завершилась благополучно родами в срок. У 4 женщин, несмотря на установленный в первом триместре низкий риск развития ПЭ, была диагностирована преэклампсия с поздним ее началом.In total, the claimed method examined 74 pregnant women with type 1 diabetes to identify the risk of PE in the early stages. In 29 women, a high risk of developing PE was established based on the P-value of the probability of developing PE more than 50%. Subsequently, 22 women were diagnosed with preeclampsia of moderate or severe course in terms of 32 to 36 weeks (median period - 34 weeks of gestation), in 7 patients, against the background of timely initiation of prevention and competent management of pregnancy, it was possible to avoid the development of PE, despite the high percentage of risk . In 45 women, a low risk of developing preeclampsia was identified, and in 41 of them, the development of this complication was not observed and the pregnancy ended safely in term delivery. In 4 women, despite the low risk of developing PE established in the first trimester, preeclampsia with its late onset was diagnosed.

Способ расширяет арсенал средств прогнозирования риска развития ПЭ у беременных с СД 1 типа на сроке от 11 недель до 13 недель 6 дней беременности, обладает более высокой специфичностью, высокой точностью прогноза, является менее трудоемким.The method expands the arsenal of means for predicting the risk of developing PE in pregnant women with type 1 diabetes for a period of 11 weeks to 13 weeks 6 days of pregnancy, has higher specificity, high prediction accuracy, and is less laborious.

Источники информацииInformation sources

1. Vera Regitz-Zagrosek, Jolien W Roos-Hesselink, Johann Bauersachs, et al., ESC Scientific Document Group, 2018 ESC Guidelines for the management of cardiovascular diseases during pregnancy: The Task Force for the Management of Cardiovascular Diseases during Pregnancy of the European Society of Cardiology (ESC), European Heart Journal, Volume 39, Issue 34, 07 September 2018, Pages 3165-3241, https://doi.org/10.1093/eurhearti/ehv340.1. Vera Regitz-Zagrosek, Jolien W Roos-Hesselink, Johann Bauersachs, et al., ESC Scientific Document Group, 2018 ESC Guidelines for the management of cardiovascular diseases during pregnancy: The Task Force for the Management of Cardiovascular Diseases during Pregnancy of the European Society of Cardiology (ESC), European Heart Journal, Volume 39, Issue 34, 07 September 2018, Pages 3165-3241, https://doi.org/10.1093/eurhearti/ehv340.

2. Francesco Cosentino, Peter J Grant, Victor Aboyans, et al., ESC Scientific Document Group, 2019 ESC Guidelines on diabetes, pre-diabetes, and cardiovascular diseases developed in collaboration with the EASD: The Task Force for diabetes, pre-diabetes, and cardiovascular diseases of the European Society of Cardiology (ESC) and the European Association for the Study of Diabetes (EASD), European Heart Journal, Volume 41, Issue 2, 7 January 2020, Pages 255-323, https://doi.org/10.1093/eurheartj/ehz486.2. Francesco Cosentino, Peter J Grant, Victor Aboyans, et al., ESC Scientific Document Group, 2019 ESC Guidelines on diabetes, pre-diabetes, and cardiovascular diseases developed in collaboration with the EASD: The Task Force for diabetes, pre-diabetes , and cardiovascular diseases of the European Society of Cardiology (ESC) and the European Association for the Study of Diabetes (EASD), European Heart Journal, Volume 41, Issue 2, 7 January 2020, Pages 255-323, https://doi .org/10.1093/eurheartj/ehz486.

3. National Guideline Alliance (UK). Hypertension in pregnancy: diagnosis and management. London: National Institute for Health and Care Excellence (UK); 2019 Jun. (NICE Guideline, No. 133.) Available from: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK546004/.3. National Guideline Alliance (UK). Hypertension in pregnancy: diagnosis and management. London: National Institute for Health and Care Excellence (UK); 2019 Jun. (NICE Guideline, No. 133.) Available from: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK546004/.

4. Villar J, Carroli G, Wojdyla D, Abalos E, Giordano D, Ba'aqeel H, Farnot U, Bergsjo P, Bakketeig L, Lumbiganon P, Campodonico L, Al-Mazrou Y, Lindheimer M, Kramer M; World Health Organization Antenatal Care Trial Research Group.Preeclampsia, gestational hypertension and intrauterine growth restriction, related or independent conditions? Am J ObstetGynecol. 2006 Apr;194(4):921-31.doi: 10.1016/j.ajog.2005.10.813. PMID: 16580277.4. Villar J, Carroli G, Wojdyla D, Abalos E, Giordano D, Ba'aqeel H, Farnot U, Bergsjo P, Bakketeig L, Lumbiganon P, Campodonico L, Al-Mazrou Y, Lindheimer M, Kramer M; World Health Organization Antenatal Care Trial Research Group. Preeclampsia, gestational hypertension and intrauterine growth restriction, related or independent conditions? Am J ObstetGynecol. 2006 Apr;194(4):921-31.doi:10.1016/j.ajog.2005.10.813. PMID: 16580277.

5. Tsiakkas A, Mendez O, Wright A, Wright D, Nicolaides KH. Maternal serum soluble fms-like tyrosine kinase-1 at 12-, 22-, 32- and 36-weeks' gestation in screening for pre-eclampsia. UltrasoundObstetGynecol 2016; 47: 478-83.5. Tsiakkas A, Mendez O, Wright A, Wright D, Nicolaides KH. Maternal serum soluble fms-like tyrosine kinase-1 at 12-, 22-, 32- and 36-weeks' gestation in screening for pre-eclampsia. UltrasoundObstetGynecol 2016; 47:478-83.

6. Tsiakkas A, Cazacu R, Wright A, Wright D, Nicolaides KH. Maternal serum placental growth factor at 12-, 22-, 32- and 36-weeks' gestation in screening for pre-eclampsia. Ultrasound ObstetGynecol 2016; 47: 472-7.6. Tsiakkas A, Cazacu R, Wright A, Wright D, Nicolaides KH. Maternal serum placental growth factor at 12-, 22-, 32- and 36-weeks' gestation in screening for pre-eclampsia. Ultrasound ObstetGynecol 2016; 47:472-7.

7. Zeisler H, Llurba E, Chantraine F, Vatish M, Staff AC, Sennstrom M, Olovsson M, Brennecke SP, Stepan H, Allegranza D, Dilba P, Schoedl M, Hund M, Verlohren S. Predictive value of the sFlt-l:PIGF ratio in women with suspected preeclampsia. N Engl J Med 2016;374:13-22.7. Zeisler H, Llurba E, Chantraine F, Vatish M, Staff AC, Sennstrom M, Olovsson M, Brennecke SP, Stepan H, Allegranza D, Dilba P, Schoedl M, Hund M, Verlohren S. Predictive value of the sFlt- l:PIGF ratio in women with suspected preeclampsia. N Engl J Med 2016;374:13-22.

8. Levine RJ, Lam C, Qian C, et al. Soluble endoglin and other circulating antiangiogenic factors in preeclampsia [published correction appears in N Engl J Med. 2006 Oct 26;355(17):1840]. N Engl J Med. 2006;355(10):992-1005.8 Levine RJ, Lam C, Qian C, et al. Soluble endoglin and other circulating antiangiogenic factors in preeclampsia [published correction appears in N Engl J Med. 2006 Oct 26;355(17):1840]. N Engl J Med. 2006;355(10):992-1005.

9. Kapustin RV, Kopteeva EV, Alekseenkova EN, Korenevsky AV, Smirnov IV, Arzhanova ON. Prediction of preeclampsia based on maternal serum endoglin level in women with pregestational diabetes mellitus. HypertensPregnancy. 2022 Apr 27:1-8. doi: 10.1080/10641955.2022.2068574.9. Kapustin RV, Kopteeva EV, Alekseenkova EN, Korenevsky AV, Smirnov IV, Arzhanova ON. Prediction of preeclampsia based on maternal serum endoglin level in women with pregestational diabetes mellitus. Hypertens Pregnancy. 2022 Apr 27:1-8. doi: 10.1080/10641955.2022.2068574.

10. Cnossen JS, Morris RK, ter Riet G, Mol BW, van der Post JA, Coomarasamy A, Zwinderman AH, Robson SC, Bindels PJ, Kleijnen J, Khan KS. Use of uterine artery Doppler ultrasonography to predict pre-eclampsia and intrauterine growth restriction: A systematic review and bivariable metaanalysis. CMAJ 2008;178:701-711.10. Cnossen JS, Morris RK, ter Riet G, Mol BW, van der Post JA, Coomarasamy A, Zwinderman AH, Robson SC, Bindels PJ, Kleijnen J, Khan KS. Use of uterine artery Doppler ultrasonography to predict pre-eclampsia and intrauterine growth restriction: A systematic review and bivariable metaanalysis. CMAJ 2008;178:701-711.

11. Smirnov IV, Gryazeva IV, Vasileva MY, Krutetskaia IY, Shashkova OA, Samoylovich MP, Stolbovaya AY, Solodovnikova NG, Zazerskaya IE, Sokolov DI, Selkov SA, Klimovich VB. New highly sensitive sandwich ELISA system for soluble endoglin quantification in different biological fluids. Scand J Clin Lab Invest. 2018 Oct;78(6):515-523. doi: 10.1080/00365513.2018.1516892. Epub 2018 Oct 1.11. Smirnov IV, Gryazeva IV, Vasileva MY, Krutetskaia IY, Shashkova OA, Samoylovich MP, Stolbovaya AY, Solodovnikova NG, Zazerskaya IE, Sokolov DI, Selkov SA, Klimovich VB. New highly sensitive sandwich ELISA system for soluble endoglin quantification in different biological fluids. Scand J Clinic Lab Invest. 2018 Oct;78(6):515-523. doi: 10.1080/00365513.2018.1516892. Epub 2018 Oct 1.

Claims (14)

Способ определения риска развития преэклампсии (ПЭ) у беременных с сахарным диабетом 1 типа, включающий оценку анамнестических, биохимических, инструментальных показателей в сроке от 11 до 13 недель 6 дней беременности, отличающийся тем, что оценивают совокупность следующих показателей: возраст, наличие васкулопатий в виде установленной диабетической ретинопатии или диабетической нефропатии, полинейропатии, уровень гликированного гемоглобина HbAlc, среднее артериальное давление (САД), среднее значение допплерометрического пульсационного индекса правой и левой маточных артерий (ПИ МА), биохимические маркеры в сыворотке крови: значение sFlt-1/PlGF, уровень растворимого эндоглина sEng, далее рассчитывают риск развития ПЭ в процентах по следующей формуле:A method for determining the risk of developing preeclampsia (PE) in pregnant women with type 1 diabetes mellitus, including an assessment of anamnestic, biochemical, instrumental indicators in the period from 11 to 13 weeks of 6 days of pregnancy, characterized in that the totality of the following indicators is assessed: age, the presence of vasculopathy in the form established diabetic retinopathy or diabetic nephropathy, polyneuropathy, glycated hemoglobin HbAlc, mean arterial pressure (MAP), mean Doppler pulse index of the right and left uterine arteries (PI MA), biochemical markers in blood serum: sFlt-1/PlGF value, level soluble endoglin sEng, then calculate the risk of developing PE as a percentage using the following formula: Р = l/(l+e^-z),P \u003d l / (l + e ^-z ), где Р – риск развития ПЭ (%); where P is the risk of developing PE (%); е – снование натуральных логарифмов;e is the warping of natural logarithms; Z – уравнение регрессии;Z is the regression equation; Z= - 152,189 + 1,016 × Х₁ + 0,268 × X₂ + 0,095 × Х₃ + 0,088 × Х₄ + 4,284 × Х₅ +Z= - 152.189 + 1.016 × X ₁ + 0.268 × X ₂ + 0.095 × X ₃ + 0.088 × X ₄ + 4.284 × X ₅ + 24,769 × Х₆+ 12,558 × Х₇,24.769 × X ₆ + 12.558 × X ₇ , где X₁ – возраст беременной, полных лет;where X ₁ - the age of the pregnant woman, full years; Х_{2 –} значение sFlt-1/PlGF;X _{2 –} value of sFlt-1/PlGF; Х₃ – уровень sEng, нг/мл;Х ₃ – sEng level, ng/mL; Х₄ – уровень САД, мм. рт. ст.;X ₄ - SBP level, mm. rt. Art.; Х₅ –уровень HbAlc;Х ₅ – HbAlc level; Х₆– наличие васкулопатий: наличие одного или нескольких сосудистых осложнений расценивают как 1, отсутствие - 0;X ₆ - the presence of vasculopathy: the presence of one or more vascular complications is regarded as 1, the absence - 0; Х₇ – значение среднего ПИ МА.X ₇ - the value of the average PI MA.