RU2788874C2 - Cancer therapy by combined use of oncolytic smallpox vaccine virus and immune control point inhibitor, and pharmaceutical composition and combined drug for use in cancer therapy - Google Patents
Cancer therapy by combined use of oncolytic smallpox vaccine virus and immune control point inhibitor, and pharmaceutical composition and combined drug for use in cancer therapy Download PDFInfo
- Publication number
- RU2788874C2 RU2788874C2 RU2021111399A RU2021111399A RU2788874C2 RU 2788874 C2 RU2788874 C2 RU 2788874C2 RU 2021111399 A RU2021111399 A RU 2021111399A RU 2021111399 A RU2021111399 A RU 2021111399A RU 2788874 C2 RU2788874 C2 RU 2788874C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- vaccinia virus
- cancer
- polynucleotide encoding
- antibody
- pharmaceutical composition
- Prior art date
Links
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 title claims abstract description 146
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims abstract description 89
- 241000700605 Viruses Species 0.000 title abstract description 27
- 239000003814 drug Substances 0.000 title abstract description 17
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 title abstract description 11
- 229940079593 drugs Drugs 0.000 title abstract description 9
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 title abstract description 6
- 229940083538 Smallpox Vaccine Drugs 0.000 title abstract 9
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 title description 19
- 230000000174 oncolytic Effects 0.000 title description 10
- 229920000023 polynucleotide Polymers 0.000 claims abstract description 183
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims abstract description 183
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 claims abstract description 162
- 102000013462 Interleukin-12 Human genes 0.000 claims abstract description 162
- 108010002586 Interleukin-7 Proteins 0.000 claims abstract description 147
- 229940117681 Interleukin-12 Drugs 0.000 claims abstract description 139
- 102000000704 Interleukin-7 Human genes 0.000 claims abstract description 134
- 229940100994 Interleukin-7 Drugs 0.000 claims abstract description 132
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims abstract description 7
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 claims description 318
- 108090001123 antibodies Proteins 0.000 claims description 131
- 102000004965 antibodies Human genes 0.000 claims description 131
- 239000012274 immune-checkpoint protein inhibitor Substances 0.000 claims description 95
- 229940121650 immune-checkpoint protein inhibitors Drugs 0.000 claims description 94
- 229940000425 combination drugs Drugs 0.000 claims description 42
- 230000002950 deficient Effects 0.000 claims description 41
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 37
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 17
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 12
- 102000038129 antigens Human genes 0.000 claims description 12
- 108091007172 antigens Proteins 0.000 claims description 12
- 200000000023 metastatic cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 claims description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 abstract description 76
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 abstract description 29
- 230000000259 anti-tumor Effects 0.000 abstract description 10
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 6
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 abstract description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 210000004027 cells Anatomy 0.000 description 77
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 53
- 102100019764 PDCD1 Human genes 0.000 description 44
- 108060007796 SPATA2 Proteins 0.000 description 43
- 108010021064 CTLA-4 Antigen Proteins 0.000 description 31
- 102000008203 CTLA-4 Antigen Human genes 0.000 description 31
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 26
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 26
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 26
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 19
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 19
- 101710011976 PDCD1LG2 Proteins 0.000 description 17
- 102100007289 PDCD1LG2 Human genes 0.000 description 17
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 15
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 14
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 14
- 102100019451 CD80 Human genes 0.000 description 13
- 101700080477 CD80 Proteins 0.000 description 13
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 description 13
- 208000005017 Glioblastoma Diseases 0.000 description 13
- 206010025650 Malignant melanoma Diseases 0.000 description 13
- 206010027406 Mesothelioma Diseases 0.000 description 13
- 206010029260 Neuroblastoma Diseases 0.000 description 13
- 206010030155 Oesophageal carcinoma Diseases 0.000 description 13
- 208000008443 Pancreatic Carcinoma Diseases 0.000 description 13
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 13
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 13
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 description 13
- 208000000587 Small Cell Lung Carcinoma Diseases 0.000 description 13
- 206010041067 Small cell lung cancer Diseases 0.000 description 13
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 description 13
- 201000004101 esophageal cancer Diseases 0.000 description 13
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 description 13
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 13
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 13
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 13
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 description 12
- 206010017758 Gastric cancer Diseases 0.000 description 12
- 206010073071 Hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 12
- 206010038038 Rectal cancer Diseases 0.000 description 12
- 230000000875 corresponding Effects 0.000 description 12
- 201000010536 head and neck cancer Diseases 0.000 description 12
- 231100000844 hepatocellular carcinoma Toxicity 0.000 description 12
- 201000005249 lung adenocarcinoma Diseases 0.000 description 12
- 201000001275 rectum cancer Diseases 0.000 description 12
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 12
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 description 12
- 208000010507 Adenocarcinoma of Lung Diseases 0.000 description 11
- 210000001744 T-Lymphocytes Anatomy 0.000 description 10
- 208000007089 Vaccinia Diseases 0.000 description 10
- 206010046865 Vaccinia virus infection Diseases 0.000 description 10
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 9
- 210000001015 Abdomen Anatomy 0.000 description 8
- 102000006601 Thymidine Kinase Human genes 0.000 description 8
- 108020004440 Thymidine Kinase Proteins 0.000 description 8
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 7
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 7
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 7
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 7
- 102000018358 Immunoglobulins Human genes 0.000 description 6
- 108060003951 Immunoglobulins Proteins 0.000 description 6
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 6
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 6
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 6
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 5
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 5
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 4
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 4
- 230000002238 attenuated Effects 0.000 description 4
- 108091006028 chimera Proteins 0.000 description 4
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 4
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 4
- 102100019461 CD28 Human genes 0.000 description 3
- 101700033362 CD28 Proteins 0.000 description 3
- 102100010813 EGF Human genes 0.000 description 3
- 101700033006 EGF Proteins 0.000 description 3
- 229940116977 Epidermal Growth Factor Drugs 0.000 description 3
- 108091007472 MAP kinase family Proteins 0.000 description 3
- 108090000823 Mitogen-Activated Protein Kinases Proteins 0.000 description 3
- 102000004331 Mitogen-Activated Protein Kinases Human genes 0.000 description 3
- 101710043164 Segment-4 Proteins 0.000 description 3
- 101700038759 VP1 Proteins 0.000 description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 3
- 238000002619 cancer immunotherapy Methods 0.000 description 3
- 229920003013 deoxyribonucleic acid Polymers 0.000 description 3
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 3
- 101700005460 hemA Proteins 0.000 description 3
- 239000000185 hemagglutinin Substances 0.000 description 3
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 3
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 3
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 3
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 3
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 3
- 230000004083 survival Effects 0.000 description 3
- 229950002916 Avelumab Drugs 0.000 description 2
- 101700047069 BTLA Proteins 0.000 description 2
- 102100009333 BTLA Human genes 0.000 description 2
- 229950009791 Durvalumab Drugs 0.000 description 2
- 206010064571 Gene mutation Diseases 0.000 description 2
- 108010089187 Ipilimumab Proteins 0.000 description 2
- 210000000822 Killer Cells, Natural Anatomy 0.000 description 2
- 108060004270 LAG3 Proteins 0.000 description 2
- 102100017213 LAG3 Human genes 0.000 description 2
- 206010061289 Metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 108010019706 Nivolumab Proteins 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 108010080196 Programmed Cell Death 1 Receptor Proteins 0.000 description 2
- 101710010813 SERPINA3K Proteins 0.000 description 2
- 101710014947 SERPINI2 Proteins 0.000 description 2
- 101700063220 SPI1 Proteins 0.000 description 2
- 102100000439 SPI1 Human genes 0.000 description 2
- 101710010812 Serpina3l Proteins 0.000 description 2
- 102100006047 TIGIT Human genes 0.000 description 2
- 101700052319 TIGIT Proteins 0.000 description 2
- 230000003213 activating Effects 0.000 description 2
- 108010072668 atezolizumab Proteins 0.000 description 2
- 229960003852 atezolizumab Drugs 0.000 description 2
- 108010010826 avelumab Proteins 0.000 description 2
- 230000020411 cell activation Effects 0.000 description 2
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 2
- 230000001461 cytolytic Effects 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 2
- 108010016436 durvalumab Proteins 0.000 description 2
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 2
- -1 for example Substances 0.000 description 2
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 2
- 239000002955 immunomodulating agent Substances 0.000 description 2
- 230000001506 immunosuppresive Effects 0.000 description 2
- 229960005386 ipilimumab Drugs 0.000 description 2
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 2
- 230000001394 metastastic Effects 0.000 description 2
- 238000009126 molecular therapy Methods 0.000 description 2
- 108010045030 monoclonal antibodies Proteins 0.000 description 2
- 102000005614 monoclonal antibodies Human genes 0.000 description 2
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 2
- 229960003301 nivolumab Drugs 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 2
- 210000000056 organs Anatomy 0.000 description 2
- 108010026276 pembrolizumab Proteins 0.000 description 2
- 229960002621 pembrolizumab Drugs 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutic aid Substances 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- 238000001711 protein immunostaining Methods 0.000 description 2
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic Effects 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 210000004881 tumor cells Anatomy 0.000 description 2
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZWEHNKRNPOVVGH-UHFFFAOYSA-N 2-butanone Chemical compound CCC(C)=O ZWEHNKRNPOVVGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020005345 3' Untranslated Regions Proteins 0.000 description 1
- 208000009956 Adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 241000212977 Andira Species 0.000 description 1
- 210000000612 Antigen-Presenting Cells Anatomy 0.000 description 1
- 206010003816 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 210000003719 B-Lymphocytes Anatomy 0.000 description 1
- 101710030462 B16R Proteins 0.000 description 1
- 108010071919 Bispecific Antibodies Proteins 0.000 description 1
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 1
- 210000001072 Colon Anatomy 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N D-sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 102100010782 EGFR Human genes 0.000 description 1
- 101700039191 EGFR Proteins 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 1
- 108091007936 ERK family Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 230000035693 Fab Effects 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- 210000004907 Glands Anatomy 0.000 description 1
- 102000003839 Human Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000144 Human Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241001562081 Ikeda Species 0.000 description 1
- 210000000987 Immune System Anatomy 0.000 description 1
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 102000010782 Interleukin-7 Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010038498 Interleukin-7 Receptors Proteins 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- 210000004185 Liver Anatomy 0.000 description 1
- 210000004072 Lung Anatomy 0.000 description 1
- 210000001165 Lymph Nodes Anatomy 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 229920001850 Nucleic acid sequence Polymers 0.000 description 1
- 241000700629 Orthopoxvirus Species 0.000 description 1
- 108091000081 Phosphotransferases Proteins 0.000 description 1
- 229950010773 Pidilizumab Drugs 0.000 description 1
- 108050006987 Poxvirus Proteins 0.000 description 1
- 102000000034 Programmed Cell Death 1 Receptor Human genes 0.000 description 1
- 102000001253 Protein Kinases Human genes 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 102000000505 Ribonucleotide Reductases Human genes 0.000 description 1
- 108010041388 Ribonucleotide Reductases Proteins 0.000 description 1
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 1
- 206010041823 Squamous cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 210000002784 Stomach Anatomy 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-GDQSFJPYSA-N Sucrose Natural products O([C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1)[C@@]1(CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-GDQSFJPYSA-N 0.000 description 1
- 229920000401 Three prime untranslated region Polymers 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H Tricalcium phosphate Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 210000003932 Urinary Bladder Anatomy 0.000 description 1
- 101710005130 VACWR200 Proteins 0.000 description 1
- 102100015314 VSIR Human genes 0.000 description 1
- 101710036075 VSIR Proteins 0.000 description 1
- 108010012233 Vaccinia growth factor Proteins 0.000 description 1
- 208000001756 Virus Disease Diseases 0.000 description 1
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 230000004721 adaptive immunity Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 201000009596 autoimmune hypersensitivity disease Diseases 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 238000009566 cancer vaccine Methods 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 230000000139 costimulatory Effects 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000000432 density-gradient centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000011026 diafiltration Methods 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 239000003596 drug target Substances 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 231100000221 frame shift mutation induction Toxicity 0.000 description 1
- 230000005017 genetic modification Effects 0.000 description 1
- 235000013617 genetically modified food Nutrition 0.000 description 1
- 239000001963 growth media Substances 0.000 description 1
- 230000003394 haemopoietic Effects 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 239000000833 heterodimer Substances 0.000 description 1
- 230000003100 immobilizing Effects 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 230000004957 immunoregulator effect Effects 0.000 description 1
- 230000003308 immunostimulating Effects 0.000 description 1
- 230000001024 immunotherapeutic Effects 0.000 description 1
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000001976 improved Effects 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 238000009114 investigational therapy Methods 0.000 description 1
- NBQNWMBBSKPBAY-UHFFFAOYSA-N iodixanol Chemical compound IC=1C(C(=O)NCC(O)CO)=C(I)C(C(=O)NCC(O)CO)=C(I)C=1N(C(=O)C)CC(O)CN(C(C)=O)C1=C(I)C(C(=O)NCC(O)CO)=C(I)C(C(=O)NCC(O)CO)=C1I NBQNWMBBSKPBAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004359 iodixanol Drugs 0.000 description 1
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003902 lesions Effects 0.000 description 1
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 230000001404 mediated Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 229920001239 microRNA Polymers 0.000 description 1
- 239000002679 microRNA Substances 0.000 description 1
- 229960000060 monoclonal antibodies Drugs 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing Effects 0.000 description 1
- 210000004882 non-tumor cells Anatomy 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 238000002559 palpation Methods 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic Effects 0.000 description 1
- 244000052769 pathogens Species 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral Effects 0.000 description 1
- 108010051812 pidilizumab Proteins 0.000 description 1
- 108091008117 polyclonal antibodies Proteins 0.000 description 1
- 230000001737 promoting Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylaxis Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000000018 receptor agonist Substances 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 230000002829 reduced Effects 0.000 description 1
- 230000003248 secreting Effects 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 238000000856 sucrose gradient centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing Effects 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 230000002485 urinary Effects 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 230000003612 virological Effects 0.000 description 1
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 1
Images
Abstract
Description
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИBACKGROUND OF THE INVENTION
Область техники, к которой относится изобретениеThe technical field to which the invention belongs
[0001][0001]
Настоящее изобретение относится к терапии рака путем комбинированного применения онколитического вируса осповакцины и ингибитора иммунной контрольной точки, и фармацевтической композиции и комбинированного лекарственного средства для применения в терапии рака. The present invention relates to cancer therapy by the combined use of an oncolytic vaccinia virus and an immune checkpoint inhibitor, and a pharmaceutical composition and combination drug for use in cancer therapy.
Описание уровня техникиDescription of the prior art
[0002][0002]
В последнее время были разработаны различные технологии для применения вирусов в терапии рака. Вирус осповакцины известен как вирус для применения в терапии рака. Вирус осповакцины был исследован с целью разработки противораковой терапии в качестве онколитического вируса, пролиферирующего в раковых клетках, вызывая их уничтожение, в качестве вектора для доставки терапевтического гена в раковые клетки или в качестве противораковой вакцины, экспрессирующей раковый антиген и иммунорегуляторную молекулу (Expert Opinion on Biological Therapy, 2011, Vol. 11, p. 595-608)Recently, various technologies have been developed for the use of viruses in cancer therapy. The vaccinia virus is known as a virus for use in cancer therapy. The vaccinia virus has been investigated for the development of cancer therapy as an oncolytic virus that proliferates in cancer cells causing them to be killed, as a vector to deliver a therapeutic gene to cancer cells, or as a cancer vaccine expressing a cancer antigen and immunoregulatory molecule (Expert Opinion on Biological Therapy, 2011, Vol 11, pp 595-608)
[0003][0003]
Согласно некоторым сообщениям, генетически модифицированный вирус осповакцины, содержащий два полинуклеотида, т.е. полинуклеотид, кодирующий интерлейкин-7 (IL-7), и полинуклеотид, кодирующий интерлейкин-12 (IL-12), и смесь двух генетически модифицированных вирусов осповакцины, т.е. генетически модифицированного вируса осповакцины, содержащего полинуклеотид, кодирующий IL-7, и генетически модифицированного вируса осповакцины, содержащего полинуклеотид, кодирующий IL-12, оказывают цитолитическое действие в отношении различных типов раковых клеток человека, вызывают регрессию опухоли в модели на гуманизированных мышах-опухоленосителях, полную ремиссию в модели на мышах, несущих сингенные опухоли, а также индуцируют приобретенный иммунитет для поддержания противоопухолевого эффекта (Патентный документ 1).According to some reports, a genetically modified vaccinia virus containing two polynucleotides, i. a polynucleotide encoding interleukin-7 (IL-7) and a polynucleotide encoding interleukin-12 (IL-12) and a mixture of two genetically modified vaccinia viruses, i.e. genetically modified vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-7 and a genetically modified vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-12 have a cytolytic effect on various types of human cancer cells, cause tumor regression in a model on humanized tumor-bearing mice, complete remission in a mouse model bearing syngeneic tumors, and also induce adaptive immunity to maintain an antitumor effect (Patent Document 1).
[0004][0004]
С другой стороны, в последние годы проводили клинические исследования иммунотерапии рака, основанной на механизме противоопухолевого иммунного контроля в микроокружении раковой опухоли. С целью активации in vivo иммунного механизма путем ингибирования связывания PD-1 (белка программируемой клеточной смерти 1) с PD-L1 (лигандом 1 белка программируемой клеточной смерти 1), что позволяет живому организму распознавать раковые клетки как чужие клетки, элиминируя таким образом раковые клетки, антитело против PD-1, такое как ниволумаб и пембролизумаб, и антитело против PD-L1, такое как атезолизумаб, авелумаб и дурвалумаб, были одобрены Управлением по контролю качества продуктов питания и лекарственных препаратов США (FDA) в качестве терапевтических средств для лечения рака (Непатентный документ 1). Аналогичным образом, с целью активации механизма элиминации раковых клеток как чужих клеток иммунной системой in vivo, антитело против CTLA-4 (антигена цитотоксических T-лимфоцитов 4), т.е. ипилимумаб, было одобрено в качестве терапевтического средства для лечения рака (Непатентный документ 1). Иммунотерапевтические средства для лечения рака, содержащие указанные ингибиторы иммунных контрольных точек, применяют не только отдельно, но и в комбинации с существующим противоопухолевым средством или другим типом иммунотерапевтического средства для лечения рака (Непатентный документ 2). Сообщается, что онколитический вирус осповакцины, экспрессирующий иммуностимулирующую молекулу, может обладать возможностью быстрого выведения в результате сильного иммунного ответа ингибитора иммунного контрольной точки. Сильный иммунный ответ может быть нежелательным в некоторых случаях и предпочтительным в других случаях при терапии рака, опосредованной вирусом осповакцины (Непатентный документ 3).On the other hand, in recent years, clinical studies have been carried out on cancer immunotherapy based on the mechanism of antitumor immune control in the microenvironment of a cancerous tumor. In order to activate the immune mechanism in vivo by inhibiting the binding of PD-1 (programmed cell death protein 1) to PD-L1 (programmed
Документы предшествующего уровня техникиPrior Art Documents
Патентный документpatent document
[0005][0005]
Патентный документ 1: брошюра WO 2017/209053Patent Document 1: Brochure WO 2017/209053
[0006][0006]
Непатентный документ 1: Michael A. Postow et al., The New England Journal of Medicine, 2018, Vol. 378, p. 158-168Non-Patent Document 1: Michael A. Postow et al., The New England Journal of Medicine, 2018, Vol. 378, p. 158-168
Непатентный документ 2: Daniel S. Chen and Ira Mellman, Nature, 2017, Vol. 541, p. 321-330Non-Patent Document 2: Daniel S. Chen and Ira Mellman, Nature, 2017, Vol. 541, p. 321-330
Непатентный документ 3: Yuqiao Shen and John Nemunaitis, Molecular Therapy, 2005, Vol. 11, No. 2, p. 180-195Non-Patent Document 3: Yuqiao Shen and John Nemunaitis, Molecular Therapy, 2005, Vol. 11, no. 2, p. 180-195
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯSUMMARY OF THE INVENTION
[0007][0007]
Цель настоящего изобретения состоит в разработке терапии рака путем комбинированного применения онколитического вируса осповакцины и ингибитора иммунной контрольной точки, и фармацевтической композиции и комбинированного лекарственного средства для применения в терапии рака.An object of the present invention is to develop a cancer therapy by the combined use of an oncolytic vaccinia virus and an immune checkpoint inhibitor, and a pharmaceutical composition and combination drug for use in cancer therapy.
[0008][0008]
Авторы настоящего изобретения при разработке комбинированного применения генетически модифицированного вируса осповакцины с другим типом терапии рака неожиданно обнаружили, что в случае применения вируса осповакцины, содержащего два полинуклеотида, т.е. полинуклеотид, кодирующий IL-7, и полинуклеотид, кодирующий IL-12, в комбинации с ингибитором иммунной контрольной точки (например, антителом против PD-1 и антителом против CTLA-4), превосходный противоопухолевый эффект и превосходный эффект индукции полной ремиссии проявляется в отношении удаленно расположенной опухоли, в которую вирус осповакцины не вводили (Пример 1). Настоящее изобретение основано на этом результате.The inventors of the present invention, when developing the combined use of a genetically modified vaccinia virus with another type of cancer therapy, unexpectedly found that in the case of using a vaccinia virus containing two polynucleotides, i. a polynucleotide encoding IL-7 and a polynucleotide encoding IL-12, in combination with an immune checkpoint inhibitor (for example, an anti-PD-1 antibody and an anti-CTLA-4 antibody), an excellent anti-tumor effect and an excellent effect of inducing complete remission are exhibited in relation to remotely located tumor, in which the vaccinia virus was not injected (Example 1). The present invention is based on this result.
[0009][0009]
Согласно настоящему изобретению предлагаются следующие изобретения.The present invention provides the following inventions.
[1] Фармацевтическая композиция, включающая вирус осповакцины в качестве активного ингредиента, для применения в лечении рака, где вирус осповакцины представляет собой:[1] A pharmaceutical composition comprising vaccinia virus as an active ingredient for use in cancer treatment, wherein the vaccinia virus is:
(1) вирус осповакцины, включающий полинуклеотид, кодирующий интерлейкин-7 (IL-7), и вирус осповакцины, включающий полинуклеотид, кодирующий интерлейкин-12 (IL-12); или(1) a vaccinia virus comprising a polynucleotide encoding interleukin-7 (IL-7) and a vaccinia virus comprising a polynucleotide encoding interleukin-12 (IL-12); or
(2) вирус осповакцины, включающий полинуклеотид, кодирующий интерлейкин-7 (IL-7), и полинуклеотид, кодирующий интерлейкин-12 (IL-12), и предназначен к применению в комбинации с ингибитором иммунной контрольной точки.(2) a vaccinia virus comprising a polynucleotide encoding interleukin-7 (IL-7) and a polynucleotide encoding interleukin-12 (IL-12) and is intended for use in combination with an immune checkpoint inhibitor.
[2] Фармацевтическая композиция согласно [1], где вирус осповакцины представляет собой вирус осповакцины, включающий полинуклеотид, кодирующий IL-7, и полинуклеотид, кодирующий IL-12.[2] The pharmaceutical composition according to [1], wherein the vaccinia virus is a vaccinia virus comprising a polynucleotide encoding IL-7 and a polynucleotide encoding IL-12.
[3] Фармацевтическая композиция согласно [1] или [2], где вирус осповакцины является дефектным по функциям факторов роста вируса осповакцины (VGF) и O1L.[3] The pharmaceutical composition according to [1] or [2], wherein the vaccinia virus is defective in the functions of vaccinia virus growth factors (VGF) and O1L.
[4] Фармацевтическая композиция согласно [3], где вирус осповакцины не имеет домена SCR (короткого консенсусного повтора) во внеклеточной области B5R.[4] The pharmaceutical composition according to [3], wherein the vaccinia virus does not have an SCR (short consensus repeat) domain in the extracellular region of B5R.
[5] Фармацевтическая композиция согласно любому из [1]-[4], где вирус осповакцины представляет собой вирус осповакцины штамма LC16mO.[5] The pharmaceutical composition according to any one of [1] to [4], wherein the vaccinia virus is vaccinia virus strain LC16mO.
[6] Фармацевтическая композиция согласно любому из [1]-[5], где ингибитор иммунной контрольной точки является антителом, выбранным из группы, состоящей из антитела против PD-1, антитела против PD-L1 и антитела против CTLA-4 или их антигенсвязывающего фрагмента.[6] The pharmaceutical composition according to any one of [1] to [5], wherein the immune checkpoint inhibitor is an antibody selected from the group consisting of an anti-PD-1 antibody, an anti-PD-L1 antibody, and an anti-CTLA-4 antibody, or an antigen-binding agent thereof. fragment.
[7] Фармацевтическая композиция согласно любому из [1]-[6], где рак представляет собой солидный рак.[7] The pharmaceutical composition according to any one of [1] to [6], wherein the cancer is a solid cancer.
[8] Фармацевтическая композиция согласно любому из [1]-[7], где рак представляет собой метастатический рак.[8] The pharmaceutical composition according to any one of [1] to [7], wherein the cancer is a metastatic cancer.
[9] Комбинированное лекарственное средство для применения в лечении рака, включающее: фармацевтическую композицию, включающую вирус осповакцины, включающий полинуклеотид, кодирующий интерлейкин-7 (IL-7); и фармацевтическую композицию, включающую вирус осповакцины, включающий полинуклеотид, кодирующий интерлейкин-12 (IL-12), и предназначенные для применения в комбинации с ингибитором иммунной контрольной точки.[9] A combination drug for use in the treatment of cancer, comprising: a pharmaceutical composition comprising a vaccinia virus comprising a polynucleotide encoding interleukin-7 (IL-7); and a pharmaceutical composition comprising a vaccinia virus comprising a polynucleotide encoding interleukin-12 (IL-12) and intended for use in combination with an immune checkpoint inhibitor.
[10] Комбинированное лекарственное средство для применения в лечении рака, включающее: фармацевтическую композицию согласно любому из [1]-[8] или комбинированное лекарственное средство согласно [9]; и фармацевтическую композицию, включающую ингибитор иммунной контрольной точки.[10] A combination drug for use in the treatment of cancer, including: a pharmaceutical composition according to any one of [1] to [8] or a combination drug according to [9]; and a pharmaceutical composition comprising an immune checkpoint inhibitor.
[11] Фармацевтическая композиция, включающая ингибитор иммунной контрольной точки для применения в лечении рака, предназначенная для применения в комбинации с фармацевтической композицией согласно любому из [1]-[8] или комбинированным лекарственным средством согласно [9].[11] A pharmaceutical composition comprising an immune checkpoint inhibitor for use in cancer treatment, for use in combination with a pharmaceutical composition according to any one of [1] to [8] or a combination drug according to [9].
[12] Способ лечения рака, включающий введение ингибитора иммунной контрольной точки и вируса осповакцины, где вирус осповакцины представляет собой:[12] A method of treating cancer, comprising administering an immune checkpoint inhibitor and vaccinia virus, wherein the vaccinia virus is:
(1) вирус осповакцины, включающий полинуклеотид, кодирующий интерлейкин-7 (IL-7), и вирус осповакцины, включающий полинуклеотид, кодирующий интерлейкин-12 (IL-12); или(1) a vaccinia virus comprising a polynucleotide encoding interleukin-7 (IL-7) and a vaccinia virus comprising a polynucleotide encoding interleukin-12 (IL-12); or
(2) вирус осповакцины, включающий полинуклеотид, кодирующий интерлейкин-7 (IL-7), и полинуклеотид, кодирующий интерлейкин-12 (IL-12).(2) an vaccinia virus comprising a polynucleotide encoding interleukin-7 (IL-7) and a polynucleotide encoding interleukin-12 (IL-12).
[13] Вирус осповакцины для применения в лечении рака, где вирус осповакцины представляет собой:[13] A vaccinia virus for use in the treatment of cancer, wherein the vaccinia virus is:
(1) вирус осповакцины, включающий полинуклеотид, кодирующий интерлейкин-7 (IL-7), и вирус осповакцины, включающий полинуклеотид, кодирующий интерлейкин-12 (IL-12); или(1) a vaccinia virus comprising a polynucleotide encoding interleukin-7 (IL-7) and a vaccinia virus comprising a polynucleotide encoding interleukin-12 (IL-12); or
(2) вирус осповакцины, включающий полинуклеотид, кодирующий интерлейкин-7 (IL-7), и полинуклеотид, кодирующий интерлейкин-12 (IL-12); и(2) an vaccinia virus comprising a polynucleotide encoding interleukin-7 (IL-7) and a polynucleotide encoding interleukin-12 (IL-12); and
предназначен для применения в комбинации с ингибитором иммунной контрольной точки.intended for use in combination with an immune checkpoint inhibitor.
[14] Применение вируса осповакцины для получения лекарственного средства для применения в лечении рака, где вирус осповакцины представляет собой:[14] The use of vaccinia virus for the preparation of a medicament for use in the treatment of cancer, wherein the vaccinia virus is:
(1) вирус осповакцины, включающий полинуклеотид, кодирующий интерлейкин-7 (IL-7), и вирус осповакцины, включающий полинуклеотид, кодирующий интерлейкин-12 (IL-12); или(1) a vaccinia virus comprising a polynucleotide encoding interleukin-7 (IL-7) and a vaccinia virus comprising a polynucleotide encoding interleukin-12 (IL-12); or
(2) вирус осповакцины, включающий полинуклеотид, кодирующий интерлейкин-7 (IL-7), и полинуклеотид, кодирующий интерлейкин-12 (IL-12); и(2) an vaccinia virus comprising a polynucleotide encoding interleukin-7 (IL-7) and a polynucleotide encoding interleukin-12 (IL-12); and
предназначен для применения в комбинации с ингибитором иммунной контрольной точки.intended for use in combination with an immune checkpoint inhibitor.
[0010][0010]
Онколитический вирус осповакцины для применения в лечении рака (в частности, онколитический вирус осповакцины, содержащий два полинуклеотида, т.е. полинуклеотид, кодирующий IL-7, и полинуклеотид, кодирующий IL-12), в случае своего применения в комбинации с ингибитором иммунной контрольной точки (например, (антителом, ингибирующим связывание PD-1 и PD-L1, или антителом против CTLA-4), может дополнительно улучшать свое противоопухолевое действие.An oncolytic vaccinia virus for use in the treatment of cancer (in particular, an oncolytic vaccinia virus containing two polynucleotides, i.e. a polynucleotide encoding IL-7 and a polynucleotide encoding IL-12), when used in combination with an immune control inhibitor point (for example, (an antibody that inhibits the binding of PD-1 and PD-L1, or an antibody against CTLA-4) can further improve its antitumor effect.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖАBRIEF DESCRIPTION OF THE DRAWING
[0011][0011]
На ФИГ. 1 показаны графики, демонстрирующие эффекты (объем опухоли и количество мышей с полной ремиссией) комбинированного применения несущего IL-12 и IL-7 вируса осповакцины и антитела против PD-1 или антитела против CTLA-4 у мышей-опухоленосителей. На каждом графике по вертикальной оси показан объем опухоли; тогда как по горизонтальной оси показано количество дней, прошедших после распределения мышей по группам в зависимости от объема массы привитых раковых клеток. На графиках условное обозначение "CR" означает полную ремиссию, а число рядом с условным обозначением означает количество (выраженное дробным отношением) мышей с полной ремиссией на 10 мышей. Кроме того, условное обозначение "IL-7/IL-12-VV" означает вирус осповакцины, несущий IL-7 и IL-12. На каждом графике линии указывают изменения объема опухоли у отдельных мышей в динамике.FIG. 1 shows graphs showing the effects (tumor volume and number of mice in complete remission) of combined application of IL-12 and IL-7-bearing vaccinia virus and anti-PD-1 antibody or anti-CTLA-4 antibody in tumor-bearing mice. On each graph, the vertical axis shows the volume of the tumor; while the horizontal axis shows the number of days that have elapsed since the distribution of mice into groups, depending on the volume of the mass of inoculated cancer cells. In the graphs, the symbol "CR" means complete remission, and the number next to the symbol means the number (expressed as a fractional ratio) of mice with complete remission per 10 mice. In addition, the symbol "IL-7/IL-12-VV" means vaccinia virus carrying IL-7 and IL-12. In each graph, the lines indicate changes in tumor volume in individual mice over time.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ПРЕДПОЧТИТЕЛЬНЫХ ВАРИАНТОВ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯDETAILED DESCRIPTION OF THE PREFERRED EMBODIMENTS
[0012][0012]
В настоящем описании "субъект" относится к млекопитающему, в частности к человеку. Субъект может быть субъектом, имеющим рак, человеком, имеющим рак, например, человеком, имеющим метастатический рак. Субъект может быть субъектом, имеющим например, солидный рак, например, метастатический солидный рак.As used herein, "subject" refers to a mammal, in particular a human. The subject may be a subject with cancer, a human with cancer, such as a human with metastatic cancer. The subject may be a subject having, for example, a solid cancer, such as a metastatic solid cancer.
[0013][0013]
В настоящем описании, таким образом, "комбинированное применение" относится к введению множества фармацевтически активных ингредиентов одновременно или отдельно одному м тому же субъекту для лечения. При комбинированном применении множество фармацевтически активных ингредиентов могут содержаться в одной и той же композиции или отдельно в разных композициях.As used herein, therefore, "combination use" refers to the administration of multiple pharmaceutically active ingredients simultaneously or separately to the same subject for treatment. When used in combination, multiple pharmaceutically active ingredients may be contained in the same composition or separately in different compositions.
[0014][0014]
В настоящем описании "фармацевтическая композиция" относится к одной композиции, содержащей один или множество фармацевтически активных ингредиентов. "Комбинированное лекарственное средство" относится к комбинации различных фармацевтических композиций, каждая из которых содержит активный фармацевтический ингредиент.As used herein, "pharmaceutical composition" refers to a single composition containing one or more pharmaceutically active ingredients. "Combination drug" refers to a combination of different pharmaceutical compositions, each containing an active pharmaceutical ingredient.
[0015][0015]
В настоящем описании значение "лечения" включает профилактику и терапию.As used herein, the meaning of "treatment" includes prophylaxis and therapy.
[0016][0016]
В настоящем описании "ингибитор иммунной контрольной точки" относится к лекарственному средству, снимающему супрессию активации иммунных клеток, вызванную молекулой иммунной контрольной точки. Примеры молекулы иммунной контрольной точки включают PD-1, CTLA-4, TIM-3 (содержащий иммуноглобулиновый домен и муциновый домен белок T-клеток 3), LAG-3 (ген активации лимфоцитов 3), TIGIT (иммунорецептор T-клеток с Ig и ITIM доменами), BTLA (B- и T-лимфоцит-ассоциированный) и VISTA (супрессор активации T-клеток, содержащий иммуноглобулиновый домен V-типа). Ингибитор иммунной контрольной точки связывается, например, с молекулой иммунной контрольной точки или ее лигандом, ингибируя иммуносупрессорный сигнал, и таким образом может ингибировать функцию иммунной контрольной точки. Например, сигнал PD-1 можно ингибировать путем ингибирования связывания PD-1 с PD-L1 или PD-L2. Кроме того, сигнал CTLA-4 можно ингибировать путем ингибирования связывания CTLA-4 с CD80 или CD86 (Matthieu Collin, Expert Opinion on Therapeutic Patents, 2016, Vol. 26, p. 555-564).As used herein, "immune checkpoint inhibitor" refers to a drug that relieves suppression of immune cell activation caused by an immune checkpoint molecule. Examples of an immune checkpoint molecule include PD-1, CTLA-4, TIM-3 (containing the immunoglobulin domain and mucin domain of T cell protein 3), LAG-3 (lymphocyte activation gene 3), TIGIT (T cell immunoreceptor with Ig and ITIM domains), BTLA (B- and T-lymphocyte-associated) and VISTA (T-cell activation suppressor containing V-type immunoglobulin domain). An immune checkpoint inhibitor binds, for example, to an immune checkpoint molecule or ligand thereof, inhibiting an immunosuppressive signal, and thus can inhibit immune checkpoint function. For example, the PD-1 signal can be inhibited by inhibiting the binding of PD-1 to PD-L1 or PD-L2. In addition, the CTLA-4 signal can be inhibited by inhibiting the binding of CTLA-4 to CD80 or CD86 (Matthieu Collin, Expert Opinion on Therapeutic Patents, 2016, Vol. 26, p. 555-564).
[0017][0017]
В настоящем описании "антитело" относится к иммуноглобулину, который является биомолекулой, содержащей две тяжелых цепи (H-цепи) и две легких цепи (L-цепи) стабилизированные дисульфидными связями. Тяжелая цепь состоит из вариабельной области тяжелой цепи (VH), константных областей тяжелой цепи (CH1, CH2, CH3) и шарнирной области, расположенной между CH1 и CH2. Легкая цепь состоит из вариабельной области легкой цепи (VL) и константной области легкой цепи (CL). Из них фрагмент вариабельной области (Fv), состоящий из VH и VL, непосредственно участвует в связывании с антигеном и является областью, придающей вариабельность антителу. Область, состоящая из шарнирной области, CH2 и CH3, называется Fc-областью.As used herein, "antibody" refers to an immunoglobulin, which is a biomolecule containing two heavy chains (H chains) and two light chains (L chains) stabilized by disulfide bonds. The heavy chain consists of the heavy chain variable region (VH), the heavy chain constant regions (CH1, CH2, CH3) and the hinge region located between CH1 and CH2. The light chain consists of a light chain variable region (VL) and a light chain constant region (CL). Of these, a variable region (Fv) fragment consisting of VH and VL is directly involved in antigen binding and is a region conferring variability on an antibody. The region consisting of the hinge region, CH2 and CH3 is called the Fc region.
[0018][0018]
В вариабельной области область, которая непосредственно контактирует с антигеном, является, в частности, областью, обладающей большой вариабельностью, и называется определяющей комплементарность областью (CDR). Область, за границами CDR, обладающая относительно низкой вариабельностью, называется каркасной областью (FR). Каждая из вариабельных областей легкой цепи и тяжелой цепи содержит по 3 CDR-области, которые называются CDR1-CDR3 тяжелой цепи и CDR1-CDR3 легкой цепи, последовательно от N-конца.In the variable region, the region that directly contacts the antigen is, in particular, a region having a large variability and is called a complementarity determining region (CDR). The region outside the CDR, which has relatively low variability, is called the framework region (FR). The light chain and heavy chain variable regions each contain 3 CDR regions, which are called heavy chain CDR1-CDR3 and light chain CDR1-CDR3, sequentially from the N-terminus.
[0019][0019]
Антитело может быть моноклональным антителом или поликлональным антителом, и в настоящем изобретении предпочтительно может применяться моноклональное антитело. Антитело может быть любого изотипа IgG, IgM, IgA, IgD или IgE. Антитело может быть получено при иммунизации животного, не относящегося к человеку, такого как мышь, крыса, хомяк, морская свинка, кролик и курица, и может быть рекомбинантным антителом, химерным антителом, гуманизированным антителом и человеческим антителом. В настоящем документе химерное антитело относится к антителу, полученному при соединении фрагментов антител, происходящих из разных биологических видов. Гуманизированное антитело относится к антителу, полученному в результате замены CDR-областей человеческого антитела соответственно соответствующими CDR-областями антитела животного, не относящегося к человеку (например, не относящегося к человеку млекопитающего). Гуманизированное антитело является антителом, имеющим CDR-области, происходящие от не относящегося к человеку животного, и другую область антитела, полученного у человека. Человеческое антитело также называется полным человеческим антителом, при этом все отдельные части человеческого антитела состоят из аминокислотных последовательностей, кодируемых генами антитела человека. В настоящем изобретении химерное антитело может применяться в одном варианте осуществления, гуманизированное антитело - в другом варианте осуществления, и человеческое антитело (полное человеческое антитело) - в еще одном варианте осуществления.The antibody may be a monoclonal antibody or a polyclonal antibody, and a monoclonal antibody may preferably be used in the present invention. The antibody may be of any IgG, IgM, IgA, IgD, or IgE isotype. The antibody can be obtained by immunizing a non-human animal such as a mouse, rat, hamster, guinea pig, rabbit, and chicken, and can be a recombinant antibody, a chimeric antibody, a humanized antibody, and a human antibody. As used herein, a chimeric antibody refers to an antibody obtained by combining antibody fragments from different species. A humanized antibody refers to an antibody obtained by replacing the CDR regions of a human antibody, respectively, with the corresponding CDR regions of a non-human animal (eg, non-human mammal) antibody. A humanized antibody is an antibody having CDR regions derived from a non-human animal and another region of an antibody derived from a human. A human antibody is also referred to as a complete human antibody, wherein all individual parts of a human antibody are composed of the amino acid sequences encoded by the genes of the human antibody. In the present invention, a chimeric antibody can be used in one embodiment, a humanized antibody in another embodiment, and a human antibody (full human antibody) in another embodiment.
[0020][0020]
В настоящем описании "антигенсвязывающий фрагмент" относится к фрагменту антитела, который может связываться с антигеном. Примеры антигенсвязывающего фрагмента включают Fab, состоящий из VL, VH, CL и CH1 областей; F(ab')2, сформированный из двух Fab-фрагментов, соединенных в шарнирной области дисульфидной связью; Fv, сформированный из VL и VH, одиноцепочечное антитело, scFv, получаемое в результате соединения VL и VH искусственным полипептидным линкером; биспецифичные антитела, такие как диатело, одиноцепочечное диатело (scDb), тандемный scFv и лейциновую молния; и антитело из тяжелой цепи, такое как VHH антитело (MAbs, 2017, Vol. 9, No. 2, p. 182-212).As used herein, "antigen-binding fragment" refers to an antibody fragment that can bind to an antigen. Examples of an antigen binding fragment include a Fab consisting of VL, VH, CL and CH1 regions; F(ab') 2 formed from two Fab fragments connected in the hinge region by a disulfide bond; Fv formed from VL and VH, single chain antibody, scFv, resulting from the connection of VL and VH with an artificial polypeptide linker; bispecific antibodies such as diabody, single chain diabody (scDb), tandem scFv, and leucine zipper; and a heavy chain antibody such as a VHH antibody (MAbs, 2017, Vol. 9, No. 2, p. 182-212).
[0021][0021]
Согласно настоящему изобретению один или множество вирусов осповакцины получают путем интеграции полинуклеотидов, кодирующих IL-7 и IL-12, для экспрессии и применения в комбинации с ингибитором иммунного чекпоинта. Таким образом, можно ожидать лечение рака согласно настоящему изобретению.According to the present invention, one or a plurality of vaccinia viruses is obtained by integrating polynucleotides encoding IL-7 and IL-12 for expression and use in combination with an immune checkpoint inhibitor. Thus, cancer treatment according to the present invention can be expected.
[0022][0022]
Далее будет описан каждый из составляющих элементов изобретений.Next, each of the constituent elements of the inventions will be described.
[0023][0023]
<Вирус осповакцины, который может применяться в настоящем изобретении><Vaccinia virus that can be used in the present invention>
Один или множество вирусов осповакцины, которые могут применяться в настоящем изобретении, могут содержать следующие (1) и (2):One or more vaccinia viruses that can be used in the present invention may contain the following (1) and (2):
(1) полинуклеотид, кодирующий IL-7, и(1) a polynucleotide encoding IL-7, and
(2) полинуклеотид, кодирующий IL-12.(2) a polynucleotide encoding IL-12.
(В настоящем описании вирус осповакцины в дальнейшем будет также указан как "вирус осповакцины для применения в настоящем изобретении").(In the present specification, vaccinia virus will hereinafter also be referred to as "vaccinia virus for use in the present invention").
В настоящем изобретении полинуклеотиды (1) и (2) могут содержаться в одном вирусе осповакцины или отдельно во множестве вирусов осповакцины.In the present invention, polynucleotides (1) and (2) may be contained in a single vaccinia virus or separately in a plurality of vaccinia viruses.
[0024][0024]
В варианте осуществления вирус осповакцины для применения в настоящем изобретении содержит полинуклеотид, кодирующий IL-7, и полинуклеотид, кодирующий IL-12.In an embodiment, the vaccinia virus for use in the present invention comprises a polynucleotide encoding IL-7 and a polynucleotide encoding IL-12.
[0025][0025]
В варианте осуществления вирус осповакцины для применения в настоящем изобретении представляет собой вирус осповакцины, содержащий полинуклеотид, кодирующий IL-7, и вирус осповакцины, содержащий полинуклеотид, кодирующий IL-12.In an embodiment, the vaccinia virus for use in the present invention is a vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-7 and a vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-12.
[0026][0026]
Когда полинуклеотид, кодирующий IL-7, и полинуклеотид, кодирующий IL-12, содержатся отдельно во множестве вирусов осповакцины, множество вирусов осповакцины могут содержаться в одной фармацевтической композиции или могут быть в форме комбинированного лекарственного средства, в котором вирусы осповакцины содержатся отдельно в разных фармацевтических композициях.When a polynucleotide encoding IL-7 and a polynucleotide encoding IL-12 are contained separately in a plurality of vaccinia viruses, the plurality of vaccinia viruses may be contained in a single pharmaceutical composition or may be in the form of a combination drug in which the vaccinia viruses are contained separately in different pharmaceutical formulations. compositions.
[0027][0027]
В варианте осуществления вирус осповакцины для применения в настоящем изобретении представляет собой вирус осповакцины, содержащий полинуклеотид, кодирующий IL-7, который предназначен для применения в комбинации с вирусом осповакцины, содержащим полинуклеотид, кодирующий IL-12. В варианте осуществления вирус осповакцины для применения в настоящем изобретении также является вирусом осповакцины, содержащим полинуклеотид, кодирующий IL-12, который предназначен для применения в комбинации с вирусом осповакцины, содержащим полинуклеотид, кодирующий IL-7.In an embodiment, the vaccinia virus for use in the present invention is a vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-7, which is intended for use in combination with a vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-12. In an embodiment, the vaccinia virus for use in the present invention is also a vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-12, which is intended for use in combination with a vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-7.
[0028][0028]
Вирус осповакцины для применения в настоящем изобретении является вирусом, принадлежащим к роду ортопоксвирусов семейства поксвирусов. Примеры штамма вируса осповакцины для применения в настоящем изобретении включают, без ограничения, штамм Lister, штамм Департамента здравоохранения Нью-Йорка (NYBH), штамм Wyeth, штамм Копенгаген, штамм Western Reserve (WR), штамм EM63, штамм Ikeda, штамм Dairen и штамм Tian Tan. Штамм Lister доступен в Американской коллекции типовых культур (ATCC VR-1549). Кроме того, в качестве вируса осповакцины для применения в настоящем изобретении, могут использоваться стабильные штаммы вируса осповакцины, полученные из этих штаммов. Например, в качестве вируса осповакцины для применения в настоящем изобретении может использоваться штамм LC16, штамм LC16m8 и штамм LC16mO, полученные на основе штамма Lister. Штамм LC16mO представляет собой штамм, полученный при использовании штамма LC16, который получают при субкультивировании штамма Lister, используемого в качестве исходного штамма, при низкой температуре. Штамм LC16m8 - штамм, получаемый при дальнейшем субкультивировании штамма LC16mO при низкой температуре, и представляет собой аттенуированный штамм, так как в гене B5R, кодирующем вирусный мембранный белок, присутствует мутация со сдвигом рамки считывания, в результате чего белок не экспрессируется и теряет свою функцию (Protein, Nucleic acid and Enzyme, 2003, Vol. 48, p. 1693-1700). В качестве полногеномных последовательностей штамма Lister, штамма LC16m8 и штамма LC16mO, например, соответственно известны рег. номер AY678276.1, рег. номер AY678275.1 и рег. номер AY678277.1. Таким образом, штамм LC16m8 и штамм LC16mO могут быть получены из штамма Lister в результате гомологичной рекомбинации и сайт-направленного мутагенеза, известных в уровне техники.The vaccinia virus for use in the present invention is a virus belonging to the orthopoxvirus genus of the poxvirus family. Examples of the vaccinia virus strain for use in the present invention include, without limitation, the Lister strain, the New York City Department of Health (NYBH) strain, the Wyeth strain, the Copenhagen strain, the Western Reserve (WR) strain, the EM63 strain, the Ikeda strain, the Dairen strain, and the Tian Tan. The Lister strain is available from the American Type Culture Collection (ATCC VR-1549). In addition, as the vaccinia virus for use in the present invention, stable strains of vaccinia virus obtained from these strains can be used. For example, as the vaccinia virus for use in the present invention, the LC16 strain, the LC16m8 strain, and the LC16mO strain derived from the Lister strain can be used. The LC16mO strain is a strain obtained by using the LC16 strain, which is obtained by subculturing the Lister strain used as the starting strain at a low temperature. The LC16m8 strain is a strain obtained by further subcultivation of the LC16mO strain at a low temperature, and is an attenuated strain, since the B5R gene encoding the viral membrane protein contains a frameshift mutation, as a result of which the protein is not expressed and loses its function ( Protein, Nucleic acid and Enzyme, 2003, Vol 48, pp 1693-1700). Reg. number AY678276.1, reg. number AY678275.1 and reg. number AY678277.1. Thus, strain LC16m8 and strain LC16mO can be obtained from strain Lister by homologous recombination and site-directed mutagenesis known in the art.
[0029][0029]
В варианте осуществления вирус осповакцины для применения в настоящем изобретении является вирусом осповакцины штамма LC16mO.In an embodiment, the vaccinia virus for use in the present invention is vaccinia virus strain LC16mO.
[0030][0030]
В качестве вируса осповакцины для применения в настоящем изобретении можно использовать аттенуированный и/или опухолесективный вирус осповакцины. В настоящем описании "аттенуированный" означает, что токсичность (например, цитолитические свойства) в отношении нормальных клеток (например, неопухолевых клеток) является низкой. В настоящем описании "опухолеселективность" означает, что токсичность (например, онколитическая способность) в отношении опухолевых клеток выше, чем в отношении нормальных клеток. В качестве вируса осповакцины для применения в настоящем изобретении может использоваться генетически модифицированный вирус осповакцины, дефектный по функции заданного белка и с супрессией экспрессии заданного гена или белка (Expert Opinion on Biological Therapy, 2011, Vol. 11, p. 595-608). Например, вирус осповакцины, дефектный по функции тимидинкиназы (TK) (Cancer Gene Therapy, 1999, Vol. 6, p. 409-422), который модифицирован для повышения опухолеселективности вируса осповакцины; вирус осповакцины, дефектный по функции фактора роста вируса осповакцины (VGF) (Cancer Research, 2001, Vol. 61, p. 8751-8757); вирус осповакцины, содержащий модифицированный ген TK, модифицированный ген гемагглютинина (HA) и модифицированный ген F3 или прерванный локус F3 (WO 2005/047458); вирус осповакцины, дефектный по функциям VGF и O1L (WO 2015/076422); вирус осповакцины, полученный путем вставки последовательности-мишени микроРНК со сниженной экспрессией в раковых клетках в 3'-нетранслируемой области гена B5R (WO 2011/125469); вирус осповакцины, дефектный по функциям VGF и TK (Cancer Research, 2001, Vol. 61, p. 8751-8757); вирус осповакцины, дефектный по функциям TK, HA и F14.5L (Cancer Research, 2007, Vol. 67, p. 10038-10046); вирус осповакцины, дефектный по функциям TK и B18R (PLoS Medicine, 2007, Vol. 4, p. e353); вирус осповакцины, дефектный по функциям TK и рибонуклеотидредуктазы (PLoS Pathogens, 2010, Vol. 6, p. e1000984); вирус осповакцины, дефектный по функциям SPI-1 и SPI-2 (Cancer Research, 2005, Vol. 65, p. 9991-9998); вирус осповакцины, дефектный по функциям SPI-1, SPI-2 и TK (Gene Therapy, 2007, Vol. 14, p. 638-647); или вирус осповакцины с мутациями в областях E3L и K3L (WO 2005/007824). Также может использоваться вирус осповакцины с дефектной функцией O1L (Journal of Virology, 2012, Vol. 86, p. 2323-2336). Кроме того, может использоваться вирус осповакцины с мутацией во внеклеточной области B5R (Virology, 2004, Vol. 325, p. 425-431) или вирус осповакцины с мутацией в области A34R (Molecular Therapy, 2013, Vol. 21, p. 1024-1033), полученные для того, чтобы элиминация вируса in vivo в результате нейтрализующего действия антител против вируса осповакцины была ожидаемо ослаблена. Также может использоваться вирус осповакцины, дефектный по рецептору интерлейкина-1b (IL-1b), полученный для ожидаемой активации иммунных клеток вирусом осповакцины (WO 2005/030971). Вставка этих чужеродных генов, делеция и мутация генов могут быть выполнены, например, путем гомологичной рекомбинации и сайт-направленного мутагенеза, известных в уровне техники. В настоящем изобретении может использоваться вирус осповакцины, имеющий такие генетические модификации в комбинации. В настоящем описании "дефектный" означает, что область гена, обозначенная данным термином, является нефункциональной, включая случай, когда область гена удалена. Например, "дефектный" означает, что делеция может происходить в области, состоящей из указанной области гена, или в периферической области гена, включая указанную область гена.As the vaccinia virus for use in the present invention, an attenuated and/or tumor-selective vaccinia virus can be used. As used herein, "attenuated" means that toxicity (eg, cytolytic properties) to normal cells (eg, non-tumor cells) is low. As used herein, "tumor selectivity" means that the toxicity (eg, oncolytic capacity) for tumor cells is higher than for normal cells. As a vaccinia virus for use in the present invention, a genetically modified vaccinia virus defective in the function of a given protein and with suppression of the expression of a given gene or protein can be used (Expert Opinion on Biological Therapy, 2011, Vol. 11, p. 595-608). For example, vaccinia virus defective in thymidine kinase (TK) function (Cancer Gene Therapy, 1999, Vol. 6, p. 409-422), which is modified to increase the tumor selectivity of vaccinia virus; vaccinia virus deficient in vaccinia growth factor (VGF) function (Cancer Research, 2001, Vol. 61, p. 8751-8757); vaccinia virus containing a modified TK gene, a modified hemagglutinin (HA) gene, and a modified F3 gene or an interrupted F3 locus (WO 2005/047458); vaccinia virus defective in VGF and O1L functions (WO 2015/076422); vaccinia virus obtained by inserting a microRNA target sequence with reduced expression in cancer cells in the 3'-untranslated region of the B5R gene (WO 2011/125469); vaccinia virus defective in VGF and TK functions (Cancer Research, 2001, Vol. 61, p. 8751-8757); vaccinia virus defective in TK, HA and F14.5L functions (Cancer Research, 2007, Vol. 67, p. 10038-10046); vaccinia virus defective in TK and B18R functions (PLoS Medicine, 2007, Vol. 4, p. e353); vaccinia virus defective in TK and ribonucleotide reductase functions (PLoS Pathogens, 2010, Vol. 6, p. e1000984); vaccinia virus defective in SPI-1 and SPI-2 functions (Cancer Research, 2005, Vol. 65, p. 9991-9998); vaccinia virus defective in SPI-1, SPI-2 and TK functions (Gene Therapy, 2007, Vol. 14, p. 638-647); or vaccinia virus with mutations in the E3L and K3L regions (WO 2005/007824). Vaccinia virus with defective O1L function can also be used (Journal of Virology, 2012, Vol. 86, p. 2323-2336). In addition, a vaccinia virus with a mutation in the B5R extracellular region (Virology, 2004, Vol. 325, p. 425-431) or a vaccinia virus with a mutation in the A34R region (Molecular Therapy, 2013, Vol. 21, p. 1024- 1033) obtained so that the elimination of the virus in vivo as a result of the neutralizing effect of antibodies against the vaccinia virus was expectedly attenuated. A vaccinia virus deficient in the interleukin-1b (IL-1b) receptor, prepared for the expected activation of immune cells by vaccinia virus, can also be used (WO 2005/030971). Insertion of these foreign genes, deletion and mutation of genes can be performed, for example, by homologous recombination and site-directed mutagenesis known in the art. In the present invention, vaccinia virus having such genetic modifications in combination can be used. As used herein, "defective" means that the gene region designated by the term is non-functional, including the case where the gene region is deleted. For example, "defective" means that the deletion may occur in a region consisting of the specified region of the gene, or in the peripheral region of the gene, including the specified region of the gene.
[0031][0031]
В варианте осуществления вирус осповакцины для применения в настоящем изобретении является дефектным по функции VGF. В варианте осуществления вирус осповакцины для применения в настоящем изобретении является дефектным по функции O1L. В варианте осуществления вирус осповакцины для применения в настоящем изобретении является дефектным по функциям VGF и O1L. Функции VGF и/или O1L могут быть удалены из вируса осповакцины на основе описания WO 2015/076422.In an embodiment, the vaccinia virus for use in the present invention is defective in VGF function. In an embodiment, the vaccinia virus for use in the present invention is defective in O1L function. In an embodiment, the vaccinia virus for use in the present invention is defective in VGF and O1L functions. The VGF and/or O1L functions can be removed from the vaccinia virus based on the description of WO 2015/076422.
[0032][0032]
VGF является белком, обладающим высокой гомологией с аминокислотной последовательностью эпидермального фактора роста (EGF), и связывается с рецептором эпидермального фактора роста аналогично EGF и активирует сигнальный каскад, начиная с Ras, Raf, митоген-активируемой протеинкиназы (MAPK)/киназы регулируемой внеклеточными сигналами киназы (ERK) (MAPK/ERK киназы, MEK), и продолжается до ERK, способствуя делению клеток.VGF is a protein with high homology to the epidermal growth factor (EGF) amino acid sequence and binds to the epidermal growth factor receptor in a manner similar to EGF and activates a signaling cascade starting from Ras, Raf, mitogen-activated protein kinase (MAPK)/extracellular signal-regulated kinase kinase (ERK) (MAPK/ERK kinase, MEK), and continues to ERK, promoting cell division.
[0033][0033]
O1L поддерживает активацию ERK и способствует делению клеток, вместе с VGF.O1L supports ERK activation and promotes cell division, along with VGF.
[0034][0034]
Дефектный по функции VGF и/или O1L вирус осповакцины означает, что не экспрессируется ни ген, кодирующий VGF, ни ген, кодирующий O1L, или не экспрессируется один из них, или что, даже если гены экспрессируются, экспрессированные белки не имеют нормальной функции(й) VGF и/или O1L. Чтобы сделать вирус осповакцины дефектным по функции(ям) VGF и/или O1L, целый ген или часть гена, кодирующего VGF, и/или гена, кодирующего O1L, можно удалить. В альтернативе можно заменить, удалить, вставить или добавить нуклеотид(ы), чтобы вызвать мутацию гена, в результате которой перестанет экспрессироваться нормальный VGF и/или O1L. В альтернативе в ген(ы), кодирующий VGF, и/или ген, кодирующий O1L, может быть вставлен чужеродный ген. В настоящем изобретении, если нормальный продукт гена не экспрессируется из-за мутации гена в результате, например, замены, делеции, вставки или добавления, считается, что такой ген является дефектным.A vaccinia virus that is defective in VGF and/or O1L function means that neither the gene encoding VGF nor the gene encoding O1L is expressed, or one of them is expressed, or that, even if the genes are expressed, the expressed proteins do not have normal function(s). ) VGF and/or O1L. In order to render the vaccinia virus defective in VGF and/or O1L function(s), all or part of the gene encoding VGF and/or the gene encoding O1L can be deleted. Alternatively, nucleotide(s) can be replaced, removed, inserted, or added to cause a gene mutation such that normal VGF and/or O1L will no longer be expressed. Alternatively, a foreign gene may be inserted into the gene(s) encoding VGF and/or the gene encoding O1L. In the present invention, if a normal gene product is not expressed due to a gene mutation resulting from, for example, a substitution, deletion, insertion, or addition, such gene is considered to be defective.
[0035][0035]
Является ли функция VGF и/или O1L дефектной, или нет, в вирусе осповакцины для применения в настоящем изобретении можно определить с помощью метода, известного в уровне техники; например, функциональная оценка VGF и/или O1L, подтверждение присутствия VGF или O1L иммунохимическим методом с использованием антитела против VGF или антитела против O1L и определение присутствия гена, кодирующего VGF, и гена, кодирующего O1L, с помощью полимеразной цепной реакцией (ПЦР) (Cancer Research, 2001, Vol. 61, p. 8751-8757).Whether or not VGF and/or O1L function is defective in vaccinia virus for use in the present invention can be determined by a method known in the art; e.g., functional assessment of VGF and/or O1L, confirmation of the presence of VGF or O1L by immunoassay using an anti-VGF antibody or an anti-O1L antibody, and determination of the presence of a gene encoding VGF and a gene encoding O1L by polymerase chain reaction (PCR) (Cancer Research, 2001, Vol 61, pp 8751-8757).
[0036][0036]
В варианте осуществления вирус осповакцины для применения в настоящем изобретении является вирусом осповакцины штамма LC16mO, дефектным по функциям VGF и O1L.In an embodiment, the vaccinia virus for use in the present invention is vaccinia virus strain LC16mO deficient in VGF and O1L functions.
[0037][0037]
B5R (номер доступа AAA48316.1) представляет собой мембранный белок 1-го типа, присутствующий в оболочке вируса осповакцины, и имеет функцию повышения эффективности инфицирования вирусом, когда вирус инфицирует или передается в соседние клетки или другие участки в организме хозяина. Во внеклеточной области B5R присутствуют 4 структуры, называемые SCR (короткий консенсусный повтор) доменами (Journal of Virology, 1998, Vol. 72, p. 294-302). В одном варианте осуществления в вирусе осповакцины для применения в настоящем изобретении SCR домен(ы) внеклеточной области B5R удален(ы).B5R (accession number AAA48316.1) is a
[0038][0038]
Делеция домена SCR во внеклеточной области B5R вируса осповакцины включает делецию всех или части 4 SCR доменов во внеклеточной области B5R, и означает, что область гена, кодирующая часть или все 4 SCR домена во внеклеточной области B5R, не экспрессируется, или экспрессируемый белок B5R не имеет части или всех 4 SCR доменов во внеклеточной области. В варианте осуществления, в вирусе осповакцины для применения в настоящем изобретении, удалены 4 SCR домена B5R. В варианте осуществления 4 SCR домена, удаленные в вирусе осповакцины для применения в настоящем изобретении, являются областью во внеклеточной области B5R, соответствующей аминокислотам 22-237 в аминокислотной последовательности, представленной под рег. номером AAA48316.1.A deletion of an SCR domain in the extracellular region of B5R of vaccinia virus includes a deletion of all or part of the 4 SCR domains in the extracellular region of B5R, and means that the region of the gene encoding part or all of the 4 SCR domains in the extracellular region of B5R is not expressed, or the expressed B5R protein does not have part or all of the 4 SCR domains in the extracellular region. In an embodiment, 4 SCRs of the B5R domain have been removed from the vaccinia virus for use in the present invention. In an embodiment, the 4 SCR domains deleted in the vaccinia virus for use in the present invention are the region in the extracellular region of B5R corresponding to amino acids 22-237 in the amino acid sequence shown under Reg. number AAA48316.1.
[0039][0039]
Удален ли SCR домен(ы) внеклеточной области B5R или нет в вирусе осповакцины для применения в настоящем изобретении можно определить способом, известным в уровне техники, например, путем подтверждения присутствия SCR домена(ов) с помощью иммунохимического метода при использовании антитела против SCR домена и определения присутствия гена, кодирующего SCR домен(ы), или его размера с помощью ПЦР.Whether or not the SCR domain(s) of the B5R extracellular region has been removed or not in the vaccinia virus for use in the present invention can be determined by a method known in the art, for example, by confirming the presence of the SCR domain(s) by an immunoassay using an antibody against the SCR domain and determining the presence of the gene encoding the SCR domain(s), or its size using PCR.
[0040][0040]
В варианте осуществления вирус осповакцины для применения в настоящем изобретении является вирусом осповакцины, дефектным по функциям VGF и O1L, и не имеющим SCR домена(ов) внеклеточной области B5R.In an embodiment, the vaccinia virus for use in the present invention is a vaccinia virus that is defective in VGF and O1L function and lacks the B5R extracellular region SCR domain(s).
[0041][0041]
В варианте осуществления вирус осповакцины для применения в настоящем изобретении является вирусом осповакцины штамма LC16mO, дефектным по функциям VGF и O1L и не имеющим SCR домена(ов) внеклеточной области B5R.In an embodiment, the vaccinia virus for use in the present invention is an LC16mO vaccinia virus that is defective in VGF and O1L functions and lacks the B5R extracellular region SCR domain(s).
[0042][0042]
В варианте осуществления вирус осповакцины для применения в настоящем изобретении является вирусом осповакцины, содержащим полинуклеотид, кодирующий IL-7, и полинуклеотид, кодирующий IL-12, и дефектным по функциям VGF и O1L.In an embodiment, the vaccinia virus for use in the present invention is a vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-7 and a polynucleotide encoding IL-12 and defective in VGF and O1L functions.
[0043][0043]
В варианте осуществления вирус осповакцины для применения в настоящем изобретении является вирусом осповакцины штамма LC16mO, содержащим полинуклеотид, кодирующий IL-7, и полинуклеотид, кодирующий IL-12, и дефектным по функциям VGF и O1L.In an embodiment, the vaccinia virus for use in the present invention is an LC16mO vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-7 and a polynucleotide encoding IL-12 and defective in VGF and O1L functions.
[0044][0044]
В варианте осуществления вирус осповакцины для применения в настоящем изобретении является вирусом осповакцины, содержащим полинуклеотид, кодирующий IL-7, и полинуклеотид, кодирующий IL-12, дефектным по функциям VGF и O1L и не имеющим SCR домена(ов) внеклеточной области B5R.In an embodiment, the vaccinia virus for use in the present invention is a vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-7 and a polynucleotide encoding IL-12, defective in VGF and O1L function, and lacking SCR domain(s) of the B5R extracellular region.
[0045][0045]
В варианте осуществления вирус осповакцины для применения в настоящем изобретении является вирусом осповакцины штамма LC16mO, содержащим полинуклеотид, кодирующий IL-7, и полинуклеотид, кодирующий IL-12, дефектным по функциям VGF и O1L и не имеющим SCR домена(ов) внеклеточной области B5R.In an embodiment, the vaccinia virus for use in the present invention is an LC16mO vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-7 and a polynucleotide encoding IL-12, defective in VGF and O1L functions, and lacking the B5R extracellular region SCR domain(s).
[0046][0046]
В варианте осуществления вирус осповакцины для применения в настоящем изобретении является вирусом осповакцины, содержащим полинуклеотид, кодирующий IL-7, и дефектным по функциям VGF и O1L, и предназначен для применения в комбинации с вирусом осповакцины, содержащим полинуклеотид, кодирующий IL-12. В варианте осуществления вирус осповакцины для применения в настоящем изобретении является вирусом осповакцины, содержащим полинуклеотид, кодирующий IL-12, и дефектным по функциям VGF и O1L, и предназначен для применения в комбинации с вирусом осповакцины, содержащим полинуклеотид, кодирующий IL-7.In an embodiment, the vaccinia virus for use in the present invention is a vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-7 and defective in VGF and O1L functions, and is intended for use in combination with a vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-12. In an embodiment, the vaccinia virus for use in the present invention is a vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-12 and defective in VGF and O1L functions, and is intended for use in combination with a vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-7.
[0047][0047]
В варианте осуществления вирус осповакцины для применения в настоящем изобретении является вирусом осповакцины штамма LC16mO, содержащим полинуклеотид, кодирующий IL-7, и дефектным по функциям VGF и O1L, и предназначен для применения в комбинации с вирусом осповакцины, содержащим полинуклеотид, кодирующий IL-12. В варианте осуществления вирус осповакцины для применения в настоящем изобретении является вирусом осповакцины штамма LC16mO, содержащим полинуклеотид, кодирующий IL-12, и дефектным по функциям VGF и O1L, и предназначен для применения в комбинации с вирусом осповакцины, содержащим полинуклеотид, кодирующий IL-7.In an embodiment, the vaccinia virus for use in the present invention is an LC16mO vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-7 and defective in VGF and O1L functions, and is intended for use in combination with a vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-12. In an embodiment, the vaccinia virus for use in the present invention is a vaccinia virus strain LC16mO containing a polynucleotide encoding IL-12 and defective in VGF and O1L functions, and is intended for use in combination with a vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-7.
[0048][0048]
В варианте осуществления вирус осповакцины для применения в настоящем изобретении является вирусом осповакцины, содержащим полинуклеотид, кодирующий IL-7, дефектным по функциям VGF и O1L, не имеющим SCR домена(ов) внеклеточной области B5R, и предназначенным для применения в комбинации с вирусом осповакцины, содержащим полинуклеотид, кодирующий IL-12. В варианте осуществления вирус осповакцины для применения в настоящем изобретении является вирусом осповакцины, содержащим полинуклеотид, кодирующий IL-12, дефектным по функциям VGF и O1L, не имеющим SCR домена(ов) внеклеточной области B5R и предназначенным для применения в комбинации с вирусом осповакцины, содержащим полинуклеотид, кодирующий IL-7.In an embodiment, the vaccinia virus for use in the present invention is a vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-7, defective in VGF and O1L functions, lacking B5R extracellular region SCR domain(s), and intended for use in combination with vaccinia virus, containing a polynucleotide encoding IL-12. In an embodiment, the vaccinia virus for use in the present invention is a vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-12, defective in VGF and O1L functions, lacking B5R extracellular region SCR domain(s), and intended for use in combination with a vaccinia virus containing polynucleotide encoding IL-7.
[0049][0049]
В варианте осуществления вирус осповакцины для применения в настоящем изобретении является вирусом осповакцины штамма LC16mO, содержащим полинуклеотид, кодирующий IL-7, дефектным по функциям VGF и O1L, не имеющим SCR домена(ов) внеклеточной области B5R, и предназначенным для применения в комбинации с вирусом осповакцины, содержащим полинуклеотид, кодирующий IL-12. В варианте осуществления вирус осповакцины для применения в настоящем изобретении является вирусом осповакцины штамма LC16mO, содержащим полинуклеотид, кодирующий IL-12, дефектным по функциям VGF и O1L, не имеющим SCR домена(ов) внеклеточной области B5R и предназначенным для применения в комбинации с вирусом осповакцины, содержащим полинуклеотид, кодирующий IL-7.In an embodiment, the vaccinia virus for use in the present invention is a vaccinia virus strain LC16mO containing a polynucleotide encoding IL-7, defective in VGF and O1L functions, lacking SCR domain(s) of the B5R extracellular region, and intended for use in combination with the virus vaccinia containing a polynucleotide encoding IL-12. In an embodiment, the vaccinia virus for use in the present invention is an LC16mO vaccinia virus strain containing a polynucleotide encoding IL-12, defective in VGF and O1L functions, lacking SCR domain(s) of the B5R extracellular region, and intended for use in combination with vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-7.
[0050][0050]
IL-7 - секреторный белок, служащий в качестве агониста рецептора IL-7. Согласно некоторым сообщениям, IL-7 способствует выживанию, пролиферации и дифференцировке, например, T-клеток и B-клеток (Current Drug Targets, 2006, Vol. 7, p. 1571-1582). В настоящем изобретении IL-7 включает природный IL-7 и вариант, обладающий его функцией. В одном из вариантов осуществления IL-7 является человеческим IL-7. В настоящем изобретении человеческий IL-7 включает природный человеческий IL-7 и вариант, обладающий его функцией. В одном из вариантов осуществления человеческий IL-7 выбран из группы, состоящей из следующих (1)-(3):IL-7 is a secretory protein that serves as an IL-7 receptor agonist. According to some reports, IL-7 promotes the survival, proliferation and differentiation of, for example, T cells and B cells (Current Drug Targets, 2006, Vol. 7, p. 1571-1582). In the present invention, IL-7 includes natural IL-7 and a variant having its function. In one embodiment, the IL-7 is human IL-7. In the present invention, human IL-7 includes native human IL-7 and a variant having a function thereof. In one embodiment, human IL-7 is selected from the group consisting of the following (1)-(3):
(1) полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, показанную под рег. номером NP_000871.1, и обладающий функцией человеческого IL-7,(1) a polypeptide containing the amino acid sequence shown under reg. number NP_000871.1, and having the function of human IL-7,
(2) полипептид, состоящий из аминокислотной последовательности, имеющей делецию, замену, вставку и/или добавление 1-10 аминокислот в аминокислотной последовательности, показанной под рег. номером NP_000871.1, и обладающий функцией человеческого IL-7, и(2) a polypeptide consisting of an amino acid sequence having a deletion, substitution, insertion and/or addition of 1-10 amino acids in the amino acid sequence shown under reg. number NP_000871.1, and having the function of human IL-7, and
(3) полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, обладающую идентичностью 90% или больше с аминокислотной последовательностью, показанной под рег. номером NP_000871.1, и обладающий функцией человеческого IL-7.(3) a polypeptide containing an amino acid sequence having an identity of 90% or more with the amino acid sequence shown under reg. number NP_000871.1, and having the function of human IL-7.
Функция человеческого IL-7 в настоящем документе относится к функции, ответственной за выживание, пролиферацию и дифференцировку различных иммунных клеток человека.The function of human IL-7 as used herein refers to the function responsible for the survival, proliferation and differentiation of various human immune cells.
[0051][0051]
В варианте осуществления человеческий IL-7, используемый в настоящем изобретении, является полипептидом, состоящим из аминокислотной последовательности, показанной под рег. номером NP_000871.1.In an embodiment, the human IL-7 used in the present invention is a polypeptide consisting of the amino acid sequence shown under reg. number NP_000871.1.
[0052][0052]
IL-12 представляет собой гетеродимер, состоящий из субъединицы p40 IL-12 и α-субъединицы IL-12. Сообщается, что IL-12 обладает функцией активации и индукции дифференцировки T-клеток и NK-клеток (Cancer Immunology Immunotherapy, 2014, Vol. 63, p. 419-435). В настоящем изобретении IL-12 включает природный IL-12 и вариант, обладающий его функцией. В варианте осуществления IL-12 является человеческим IL-12. В настоящем изобретении человеческий IL-12 включает природный человеческий IL-12 и вариант, обладающий его функцией. В варианте осуществления человеческий IL-12, как комбинация субъединицы p40 человеческого IL-12 и α-субъединицы человеческого IL-12, выбран из группы, состоящей из следующих (1)-(3):IL-12 is a heterodimer consisting of the p40 subunit of IL-12 and the α-subunit of IL-12. IL-12 is reported to have the function of activating and inducing differentiation of T cells and NK cells (Cancer Immunology Immunotherapy, 2014, Vol. 63, p. 419-435). In the present invention, IL-12 includes native IL-12 and a variant having its function. In an embodiment, IL-12 is human IL-12. In the present invention, human IL-12 includes native human IL-12 and a variant having a function thereof. In an embodiment, human IL-12, as a combination of the p40 subunit of human IL-12 and the α-subunit of human IL-12, is selected from the group consisting of the following (1)-(3):
(1)(1)
(i-1) полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, показанную под рег. номером NP_002178.2, (i-2) полипептид, состоящий из аминокислотной последовательности, имеющей делецию, замену, вставку и/или добавление 1-10 аминокислот в аминокислотной последовательности, показанной под рег. номером NP_002178.2, или (i-3) полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, обладающую идентичностью 90% или больше с аминокислотной последовательностью, показанной под рег. номером NP_002178.2, и(i-1) a polypeptide containing the amino acid sequence shown under reg. number NP_002178.2, (i-2) a polypeptide consisting of an amino acid sequence having a deletion, substitution, insertion and/or addition of 1-10 amino acids in the amino acid sequence shown under reg. number NP_002178.2, or (i-3) a polypeptide containing an amino acid sequence having an identity of 90% or more with the amino acid sequence shown under reg. number NP_002178.2, and
(ii-1) полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, показанную под рег. номером NP_000873.2, (ii-2) полипептид, состоящий из аминокислотной последовательности, имеющей делецию, замену, вставку и/или добавление 1-10 аминокислот в аминокислотной последовательности, показанной под рег. номером NP_000873.2, или (ii-3) полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, обладающую идентичностью 90% или больше с аминокислотной последовательностью, показанной под рег. номером NP_000873.2, и(ii-1) a polypeptide containing the amino acid sequence shown under reg. number NP_000873.2, (ii-2) a polypeptide consisting of an amino acid sequence having a deletion, substitution, insertion and/or addition of 1-10 amino acids in the amino acid sequence shown under reg. number NP_000873.2, or (ii-3) a polypeptide containing an amino acid sequence having an identity of 90% or more with the amino acid sequence shown under reg. number NP_000873.2, and
обладающий функцией человеческого IL-12,having the function of human IL-12,
(2)(2)
(i-1) полипептид, состоящий из аминокислотной последовательности, показанной под рег. номером NP_002178.2,(i-1) a polypeptide consisting of the amino acid sequence shown under reg. number NP_002178.2,
(ii-1) полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, показанную под рег. номером NP_000873.2,(ii-1) a polypeptide containing the amino acid sequence shown under reg. number NP_000873.2,
(ii-2) полипептид, состоящий из аминокислотной последовательности, имеющей делецию, замену, вставку и/или добавление 1-10 аминокислот в аминокислотной последовательности, показанной под рег. номером NP_000873.2, или(ii-2) a polypeptide consisting of an amino acid sequence having a deletion, substitution, insertion and/or addition of 1-10 amino acids in the amino acid sequence shown under Reg. number NP_000873.2, or
(ii-3) полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, обладающую идентичностью 90% или больше с аминокислотной последовательностью, показанной под рег. номером NP_000873.2, и(ii-3) a polypeptide containing an amino acid sequence having an identity of 90% or more with the amino acid sequence shown under reg. number NP_000873.2, and
обладающий функцией человеческого IL-12, и,having the function of human IL-12, and,
(3)(3)
(i-1) полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, показанную под рег. номером NP_002178.2, (i-2) полипептид, состоящий из аминокислотной последовательности, имеющей делецию, замену, вставку и/или добавление 1-10 аминокислот в аминокислотной последовательности, показанной под рег. номером NP_002178, или (i-3) полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, обладающую идентичностью 90% или больше с аминокислотной последовательностью, показанной под рег. номером NP_002178.2, и(i-1) a polypeptide containing the amino acid sequence shown under reg. number NP_002178.2, (i-2) a polypeptide consisting of an amino acid sequence having a deletion, substitution, insertion and/or addition of 1-10 amino acids in the amino acid sequence shown under reg. number NP_002178, or (i-3) a polypeptide containing an amino acid sequence having an identity of 90% or more with the amino acid sequence shown under reg. number NP_002178.2, and
(ii-1) полипептид, состоящий из аминокислотной последовательности, показанной под рег. номером NP_000873.2, и(ii-1) a polypeptide consisting of the amino acid sequence shown under reg. number NP_000873.2, and
обладающий функцией человеческого IL-12.having the function of human IL-12.
Функция человеческого IL-12 в настоящем документе относится к функции активации и/или индукции дифференцировки T-клеток и NK-клеток. Субъединица p40 IL-12 и α-субъединица IL-12 могут быть непосредственно связаны друг с другом с образованием IL-12. В альтернативе субъединица p40 IL-12 и α-субъединица IL-12 могут быть связаны через линкер.The function of human IL-12 as used herein refers to the function of activating and/or inducing differentiation of T cells and NK cells. The p40 subunit of IL-12 and the α-subunit of IL-12 can be directly linked to each other to form IL-12. Alternatively, the p40 subunit of IL-12 and the α-subunit of IL-12 can be linked via a linker.
[0053][0053]
В варианте осуществления человеческий IL-12 для применения в настоящем изобретении является полипептидом, включающим полипептид(ы), состоящий из аминокислотной последовательности, показанной под рег. номером NP_002178.2, и полипептид, состоящий из аминокислотной последовательности, показанной под рег. номером NP_000873.2.In an embodiment, human IL-12 for use in the present invention is a polypeptide comprising a polypeptide(s) consisting of the amino acid sequence shown under Reg. number NP_002178.2, and a polypeptide consisting of the amino acid sequence shown under reg. number NP_000873.2.
[0054][0054]
В настоящем описании "идентичность" относится к показателю идентичности, полученному в соответствии с EMBOSS Needle (Nucleic Acids Res., 2015, Vol. 43, p. W580-W584) при использовании параметров, установленных по умолчанию. Параметры являются следующими:As used herein, "identity" refers to an identity score obtained according to the EMBOSS Needle (Nucleic Acids Res., 2015, Vol. 43, p. W580-W584) using default parameters. The options are as follows:
Штраф за введение пропуска=10Pass Penalty=10
Штраф за продление пропуска=0,5Pass extension penalty=0.5
Матрица=EBLOSUM62Matrix=EBLOSUM62
Штраф за окончание пропуска=нет.Penalty for the end of the pass = no.
[0055][0055]
Вирус осповакцины для применения в настоящем изобретении обладает онколитической активностью. Способ оценки того, обладает ли тестируемый вирус онколитической активностью или не обладает, включает способ оценки снижения выживаемости раковых клеток при добавлении вируса. Примеры раковых клеток, используемых для оценки, включают клетки злокачественной меланомы RPMI-7951 (например, ATCC HTB-66), клетки аденокарциномы легкого HCC4006 (например, ATCC CRL-2871), клетки рака легкого A549 (например, ATCC CCL-185), клетки мелкоклеточного рака легкого DMS 53 (например, ATCC CRL-2062), клетки плоскоклеточного рака легкого NCI-H226 (например, ATCC CRL-5826), клетки рака почки Caki-1 (например, ATCC HTB-46), клетки рака мочевого пузыря 647-V (например, DSMZ ACC 414), клетки рака головы и шеи Detroit 562 (например, ATCC CCL-138), клетки рака молочной железы JIMT-1 (например, DSMZ ACC 589), клетки рака молочной железы MDA-MB-231 (например, ATCC HTB-26), клетки рака пищевода OE33 (например, ECACC 96070808), глиобластому U-87MG (например, ECACC 89081402), нейробластому GOTO (например, JCRB JCRB0612), миелому RPMI 8226 (например, ATCC CCL-155), клетки рака яичника SK-OV-3 (например, ATCC HTB-77), клетки рака яичника OVMANA (например, JCRB JCRB1045), клетки рака толстой кишки RKO (например, ATCC CRL-2577), клетки рака толстой кишки HCT 116 (например, ATCC CCL-247), клетки рака поджелудочной железы BxPC-3 (например, ATCC CRL-1687), клетки рака предстательной железы LNCaP клон FGC (например, ATCC CRL-1740), клетки рака печени JHH-4 (например, JCRB JCRB0435), мезотелиому NCI-H28 (например, ATCC CRL-5820), клетки рака шейки матки SiHa (например, ATCC HTB-35) и клетки рака желудка Kato III (например, RIKEN BRC RCB2088).The vaccinia virus for use in the present invention has oncolytic activity. The method for assessing whether a test virus has or does not have oncolytic activity includes a method for assessing a decrease in cancer cell survival when a virus is added. Examples of cancer cells used for evaluation include RPMI-7951 malignant melanoma cells (e.g. ATCC HTB-66), HCC4006 lung adenocarcinoma cells (e.g. ATCC CRL-2871), A549 lung cancer cells (e.g. ATCC CCL-185), DMS 53 small cell lung cancer cells (eg, ATCC CRL-2062), NCI-H226 squamous cell lung cancer cells (eg, ATCC CRL-5826), Caki-1 kidney cancer cells (eg, ATCC HTB-46), bladder cancer cells 647-V (eg, DSMZ ACC 414), Detroit 562 head and neck cancer cells (eg, ATCC CCL-138), JIMT-1 breast cancer cells (eg, DSMZ ACC 589), MDA-MB- breast cancer cells 231 (eg, ATCC HTB-26), OE33 esophageal cancer cells (eg, ECACC 96070808), U-87MG glioblastoma (eg, ECACC 89081402), GOTO neuroblastoma (eg, JCRB JCRB0612), RPMI 8226 myeloma (eg, ATCC CCL- 155), SK-OV-3 ovarian cancer cells (eg ATCC HTB-77), OVMANA ovarian cancer cells (eg JCRB JCRB1045), colon cancer cells colon RKO cells (eg ATCC CRL-2577), colon cancer cells HCT 116 (eg ATCC CCL-247), pancreatic cancer cells BxPC-3 (eg ATCC CRL-1687), prostate cancer cells LNCaP clone FGC ( e.g. ATCC CRL-1740), JHH-4 liver cancer cells (e.g. JCRB JCRB0435), NCI-H28 mesothelioma cells (e.g. ATCC CRL-5820), SiHa cervical cancer cells (e.g. ATCC HTB-35), and cancer cells stomach Kato III (for example, RIKEN BRC RCB2088).
[0056][0056]
Вирус осповакцины для применения в настоящем изобретении продуцирует полипептиды IL-7 и/или IL-12 в инфицированной клетке. При использовании вируса осповакцины для применения в настоящем изобретении продуцируются полипептиды IL-7 и IL-12. В результате такой продукции заметно улучшается противоопухолевый эффект. Продукция IL-7 и IL-12 может быть подтверждена с помощью метода, известного в данной области, например, путем культивирования вируса осповакцины, содержащего полинуклеотиды, каждый из которых кодирует полипептид IL-7 и IL-12, введенные в него, вместе с раковыми клетками, с последующим измерением концентраций IL-7 и IL-12 в супернатанте культуры, проведением иммуноокрашивания клеток или Вестерн-блоттинга клеточного лизата или измерением концентраций IL-7 и IL-2 в клеточном лизате. Концентрации IL-7 и IL-12 могут быть определены, например, при использовании набора для ИФА IL-7 человека (Ray Biotech, Inc.) и ИФА IL-12 человека p70 DuoSet (R&D Systems, Inc.), соответственно. Иммуноокрашивание клеток или Вестерн-блоттинг лизата клеток на IL-7 и IL-12 можно проводить с использованием имеющихся в продаже антитела против IL-7 и антитела против IL-12, соответственно.The vaccinia virus for use in the present invention produces IL-7 and/or IL-12 polypeptides in an infected cell. When using vaccinia virus for use in the present invention, IL-7 and IL-12 polypeptides are produced. As a result of such products, the antitumor effect is noticeably improved. The production of IL-7 and IL-12 can be confirmed using a method known in the art, for example, by culturing vaccinia virus containing polynucleotides, each of which encodes a polypeptide of IL-7 and IL-12, introduced into it, together with cancer cells, followed by measuring the concentrations of IL-7 and IL-12 in the culture supernatant, conducting immunostaining of cells or Western blotting of the cell lysate, or measuring the concentrations of IL-7 and IL-2 in the cell lysate. IL-7 and IL-12 concentrations can be determined, for example, using a human IL-7 ELISA kit (Ray Biotech, Inc.) and a p70 human IL-12 ELISA p70 DuoSet (R&D Systems, Inc.), respectively. Immunostaining of cells or Western blotting of cell lysates for IL-7 and IL-12 can be performed using commercially available anti-IL-7 antibodies and anti-IL-12 antibodies, respectively.
[0057][0057]
Соответствующие полинуклеотиды, кодирующие IL-7 и IL-12, могут быть синтезированы в соответствии с методом синтеза полинуклеотидов, известным в уровне техники, на основе общедоступной информации о последовательности. После получения отдельных полинуклеотидов можно получить варианты, обладающие функциями отдельных полипептидов, путем введения мутации в заранее определенный сайт при использовании метода, известного специалистам в данной области, такого как сайт-направленный мутагенез (Current Protocols in Molecular Biology edition, 1987, John Wiley & Sons Section 8.1-8.5).The corresponding polynucleotides encoding IL-7 and IL-12 can be synthesized according to the method of polynucleotide synthesis known in the art, based on publicly available sequence information. Once individual polynucleotides have been produced, variants having the functions of individual polypeptides can be generated by introducing a mutation at a predetermined site using a method known to those skilled in the art such as site-directed mutagenesis (Current Protocols in Molecular Biology edition, 1987, John Wiley & Sons Section 8.1-8.5).
[0058][0058]
Соответствующие полинуклеотиды, кодирующие IL-7 и IL-12, могут быть введены в вирус осповакцины с помощью гомологичной рекомбинации и сайт-направленного мутагенеза, известных в уровне техники. Например, плазмиду (также называемую трансферной векторной плазмидной ДНК) получают путем введения полинуклеотида(ов) в нуклеотидную последовательность требуемого сайта, который необходимо ввести, и могут вводить в клетки, инфицированные вирусом осповакцины. В одном варианте осуществления область, в которую нужно ввести чужеродные гены, т.е. соответствующие полинуклеотиды, кодирующие IL-7 и IL-12, представляет собой область гена, не существенную для жизненного цикла вируса осповакцины. Например, в одном варианте осуществления область(и) IL-7 и/или IL-12, вводимая в дефектный по функции VGF вирус осповакцины, может быть указана как внутренняя часть гена VGF; область(и) в дефектном по функции O1L вирусе осповакцины может быть указана как внутренняя часть гена O1L, область(и) в вирусе осповакцины, дефектном как по функции VGF, так и по функции O1L, может быть указана как внутренняя гена VGF и/или гена O1L. Как указано выше, чужеродные гены могут быть введены таким образом, чтобы они транскрибировались в таком же или противоположном направлении относительно направления транскрипции генов VGF и O1L.The corresponding polynucleotides encoding IL-7 and IL-12 can be introduced into the vaccinia virus using homologous recombination and site-directed mutagenesis known in the art. For example, a plasmid (also referred to as transfer vector plasmid DNA) is obtained by introducing polynucleotide(s) at the nucleotide sequence of the desired site to be introduced, and can be introduced into vaccinia virus-infected cells. In one embodiment, the region into which foreign genes are to be introduced, i. the corresponding polynucleotides encoding IL-7 and IL-12 is a region of the gene that is not essential for the vaccinia virus life cycle. For example, in one embodiment, the region(s) of IL-7 and/or IL-12 introduced into the VGF-defective vaccinia virus may be specified as an internal part of the VGF gene; region(s) in an O1L defective vaccinia virus may be indicated as an internal part of the O1L gene, region(s) in a vaccinia virus defective in both VGF and O1L function may be indicated as an internal VGF gene and/or O1L gene. As indicated above, foreign genes can be introduced so that they are transcribed in the same or opposite direction relative to the direction of transcription of the VGF and O1L genes.
[0059][0059]
Примеры способа введения трансферной векторной плазмидной ДНК в клетки включают, без конкретного ограничения, кальций-фосфатный метод и метод электропорации.Examples of the method for introducing the transfer vector plasmid DNA into cells include, without particular limitation, the calcium phosphate method and the electroporation method.
[0060][0060]
При введении соответствующих полинуклеотидов, кодирующих IL-7 и IL-12, в качестве чужеродных генов подходящие промоторы могут быть функционально связаны в 5'-положении от чужеродных генов. Таким образом, в вирусе осповакцины для применения в настоящем изобретении, чужеродные гены могут быть связаны с промоторами, экспрессируемыми в опухолевых клетках. Примеры этих промоторов включают PSFJ1-10, PSFJ2-16, промотор p7.5K, промотор p11K, промотор T7.10, промотор CPX, промотор HF, промотор H6 и гибридный T7 промотор.When the respective polynucleotides encoding IL-7 and IL-12 are introduced as foreign genes, suitable promoters can be operably linked 5' from the foreign genes. Thus, in the vaccinia virus for use in the present invention, foreign genes can be associated with promoters expressed in tumor cells. Examples of these promoters include PSFJ1-10, PSFJ2-16, p7.5K promoter, p11K promoter, T7.10 promoter, CPX promoter, HF promoter, H6 promoter, and T7 hybrid promoter.
[0061][0061]
В варианте осуществления вирус осповакцины для применения в настоящем изобретении не имеет маркерного гена для отбора по чувствительности к лекарственному средству.In an embodiment, the vaccinia virus for use in the present invention does not have a marker gene for drug susceptibility selection.
[0062][0062]
Вирус осповакцины для применения в настоящем изобретении можно экспрессировать и/или пролиферировать при инфицировании клеток-хозяев вирусом осповакцины и культивировании инфицированных клеток-хозяев. Вирус осповакцины можно экспрессировать и/или пролиферировать в соответствии со способом, известным в уровне техники. Клетки-хозяева, используемые для экспрессии или пролиферации вируса осповакцины для применения в настоящем изобретении специально не ограничены при условии, что вирус осповакцины для применения в настоящем изобретении сможет экспрессироваться и пролиферировать в них. Примеры клеток-хозяев включают клетки животных, такие как BS-C-1, A549, RK13, HTK-143, Hep-2, MDCK, Vero, HeLa, CV-1, COS, BHK-21 и первичные клетки почек кролика. В варианте осуществления могут использоваться BS-C-1 (ATCC CCL-26), A549 (ATCC CCL-185), CV-1 (ATCC CCL-70) или RK13 (ATCC CCL-37). Условия культивирования клеток-хозяев, такие как температура, pH среды культивирования и время культивирования, подбирают соответствующим образом.The vaccinia virus for use in the present invention can be expressed and/or proliferated by infecting host cells with vaccinia virus and culturing the infected host cells. The vaccinia virus can be expressed and/or proliferated according to a method known in the art. The host cells used to express or proliferate the vaccinia virus for use in the present invention are not particularly limited as long as the vaccinia virus for use in the present invention can be expressed and proliferate in them. Examples of host cells include animal cells such as BS-C-1, A549, RK13, HTK-143, Hep-2, MDCK, Vero, HeLa, CV-1, COS, BHK-21, and primary rabbit kidney cells. In an embodiment, BS-C-1 (ATCC CCL-26), A549 (ATCC CCL-185), CV-1 (ATCC CCL-70), or RK13 (ATCC CCL-37) may be used. Conditions for culturing host cells, such as temperature, pH of the culture medium, and culture time, are adjusted accordingly.
[0063][0063]
В способе получения вируса осповакцины для применения в настоящем изобретении, в дополнение к этапам инфицирования клеток-хозяев вирусом осповакцины для применения в настоящем изобретении, культивирование инфицированных клеток-хозяев и экспрессия вируса осповакцины для применения в настоящем изобретении может быть дополнительно включена стадия сбора, предпочтительно очистки вируса осповакцины для применения в настоящем изобретении. В качестве способа очистки может использоваться расщепление ДНК бензоназой, центрифугирование в градиенте сахарозы, центрифугирование в градиенте плотности йодиксанола, ультрафильтрация и диафильтрация.In a method for producing vaccinia virus for use in the present invention, in addition to the steps of infecting host cells with vaccinia virus for use in the present invention, culturing infected host cells and expressing vaccinia virus for use in the present invention, the step of collecting, preferably purifying vaccinia virus for use in the present invention. As a purification method, benzonase DNA digestion, sucrose gradient centrifugation, iodixanol density gradient centrifugation, ultrafiltration and diafiltration can be used.
[0064][0064]
<Ингибитор иммунной контрольной точки, который может применяться в настоящем изобретении><An immune checkpoint inhibitor that can be used in the present invention>
В настоящем изобретении в качестве ингибитора иммунной контрольной точки могут использоваться, например, ингибиторы чекпоинтов, которые блокируют сигнал через PD-1 или ингибиторы чекпоинтов, которые блокируют сигнал через CTLA-4. В качестве ингибитора иммунной контрольной точки может быть указано антитело, которое может нейтрализовать связывание PD-1 с PD-L1 или PD-L2, и антитело, которое может нейтрализовать связывание CTLA-4 с CD80 или CD86. Антитело, нейтрализующее связывание PD-1 с PD-L1, включает антитело против PD-1 и антитело против PD-L1, которое может нейтрализовать связывание PD-1 с PD-L1. Антитело, нейтрализующее связывание PD-1 с PD-L2, включает антитело против PD-1 и антитело против PD-L2, которое может нейтрализовать связывание PD-1 с PD-L2. Антитело, которое может нейтрализовать связывание CTLA-4 с CD80 или CD86, включает антитело против CTLA-4, нейтрализующее связывание CTLA-4 с CD80 или CD86.In the present invention, as an immune checkpoint inhibitor, for example, checkpoint inhibitors that block the signal via PD-1 or checkpoint inhibitors that block the signal via CTLA-4 can be used. As an immune checkpoint inhibitor, an antibody that can neutralize the binding of PD-1 to PD-L1 or PD-L2 and an antibody that can neutralize the binding of CTLA-4 to CD80 or CD86 can be mentioned. An antibody that neutralizes PD-1 binding to PD-L1 includes an anti-PD-1 antibody and an anti-PD-L1 antibody that can neutralize PD-1 binding to PD-L1. An antibody that neutralizes PD-1 binding to PD-L2 includes an anti-PD-1 antibody and an anti-PD-L2 antibody that can neutralize PD-1 binding to PD-L2. An antibody that can neutralize the binding of CTLA-4 to CD80 or CD86 includes an anti-CTLA-4 antibody that neutralizes the binding of CTLA-4 to CD80 or CD86.
[0065][0065]
Примеры ингибиторов иммунных контрольных точек, которые могут применяться в настоящем изобретении, включают, без конкретного ограничения, антитело против PD-1, такое как ниволумаб, пембролизумаб и пидилизумаб; антитело против PD-L1, такое как атезолизумаб, дурвалумаб и авелумаб; антитело против CTLA-4, такое как ипилимумаб, антитело против TIM-3, такое как TSR-022 (WO 2016/161270) и MBG453 (WO 2015/117002); антитело против LAG-3, такое как LAG525 (US 2015/0259420A), антитело против TIGIT, такое как MAB10 (WO 2017/059095), антитело против BTLA, такое как BTLA-8.2 (The Journal of Clinical Investigation, 2010, Vol. 120: No. 1, p.157-167), и антитело против Vista, такое как JNJ-61610588 (WO 2016/207717). Примеры ингибиторов иммунных контрольных точек, которые могут применяться в настоящем изобретении, включают клетки, продуцирующие антигенсвязывающий фрагмент, связывающийся с молекулой иммунной контрольной точки или ее лигандом, вектор, экспрессирующий антигенсвязывающий фрагмент in vivo, и низкомолекулярное соединение, которое подавляет иммуносупрессорный сигнал.Examples of immune checkpoint inhibitors that can be used in the present invention include, without particular limitation, an anti-PD-1 antibody such as nivolumab, pembrolizumab, and pidilizumab; an anti-PD-L1 antibody such as atezolizumab, durvalumab and avelumab; an anti-CTLA-4 antibody such as ipilimumab, an anti-TIM-3 antibody such as TSR-022 (WO 2016/161270) and MBG453 (WO 2015/117002); an anti-LAG-3 antibody such as LAG525 (US 2015/0259420A), an anti-TIGIT antibody such as MAB10 (WO 2017/059095), an anti-BTLA antibody such as BTLA-8.2 (The Journal of Clinical Investigation, 2010, Vol. 120: No. 1, p. 157-167), and an anti-Vista antibody such as JNJ-61610588 (WO 2016/207717). Examples of immune checkpoint inhibitors that can be used in the present invention include cells producing an antigen-binding fragment that binds to an immune checkpoint molecule or its ligand, a vector that expresses the antigen-binding fragment in vivo , and a small molecule compound that suppresses an immunosuppressive signal.
[0066][0066]
В настоящем изобретении вышеуказанный ингибитор иммунной контрольной точки может применяться в комбинации с вирусом осповакцины для применения в настоящем изобретении. Кроме того, в настоящем изобретении вышеуказанный ингибитор иммунной контрольной точки может применяться в комбинации с комбинированным лекарственным препаратом вируса осповакцины для применения в настоящем изобретении.In the present invention, the above immune checkpoint inhibitor can be used in combination with vaccinia virus for use in the present invention. In addition, in the present invention, the above immune checkpoint inhibitor can be used in combination with the vaccinia virus combination drug for use in the present invention.
[0067][0067]
В варианте осуществления ингибитор иммунной контрольной точки, применяемый в настоящем изобретении, является антителом, выбранным из группы, состоящей из антитела против PD-1, антитела против PD-L1 и антитела против CTLA-4 или их антигенсвязывающего фрагмента.In an embodiment, the immune checkpoint inhibitor used in the present invention is an antibody selected from the group consisting of an anti-PD-1 antibody, an anti-PD-L1 antibody, and an anti-CTLA-4 antibody, or an antigen-binding fragment thereof.
[0068][0068]
Антитело, нейтрализующее связывание между двумя белками, может быть получено путем получения антител, связывающихся с одним из двух белков, и отбора полученных антител по способности нейтрализовывать связывание между двумя белками. Например, антитело, которое может нейтрализовывать связывание PD-1 с PD-L1, может быть получено путем получения антител, связывающихся с одним из PD-1 и PD-L1, а затем отбора полученного антитела по способности нейтрализовывать связывание PD-1 с PD-L1. Также, например, антитело, которое может нейтрализовывать связывание PD-1 с PD-L2, может быть получено путем получения антител, связывающихся с одним из PD-1 и PD-L2, а затем отбора полученного антитела по способности нейтрализовывать связывание PD-1 с PD-L2. Также, например, антитело, которое может нейтрализовать связывание CTLA-4 с CD80 или CD86, может быть получено путем получения антитела, связывающегося с CTLA-4, а затем отбора полученного антитела по способности нейтрализовывать связывание CTLA-4 с CD80 или CD86. Антитело, связывающееся с белком, может быть получено, например, способом, известным специалистам в данной области. Кроме того, способность антитела нейтрализовывать связывание между двумя белками можно проверять путем иммобилизации одного из двух белков, добавления другого белка в жидкую фазу, и затем проверки, уменьшается ли связывающее количество антитела или нет. Например, к белку, содержащемуся в жидкой фазе, присоединяют метку, и если количество метки уменьшается при добавлении антитела, можно определить, что антитело может нейтрализовывать связывание между двумя белками.An antibody that neutralizes the binding between two proteins can be made by making antibodies that bind to one of the two proteins and selecting the resulting antibodies for their ability to neutralize the binding between the two proteins. For example, an antibody that can neutralize PD-1 binding to PD-L1 can be made by making antibodies that bind to one of PD-1 and PD-L1 and then selecting the resulting antibody for its ability to neutralize PD-1 binding to PD- L1. Also, for example, an antibody that can neutralize the binding of PD-1 to PD-L2 can be obtained by obtaining antibodies that bind to one of PD-1 and PD-L2, and then selecting the resulting antibody for its ability to neutralize the binding of PD-1 to PD-L2. Also, for example, an antibody that can neutralize CTLA-4 binding to CD80 or CD86 can be obtained by preparing an antibody that binds to CTLA-4 and then selecting the resulting antibody for its ability to neutralize CTLA-4 binding to CD80 or CD86. An antibody that binds to a protein can be obtained, for example, by a method known to those skilled in the art. In addition, the ability of an antibody to neutralize binding between two proteins can be tested by immobilizing one of the two proteins, adding the other protein to the liquid phase, and then checking whether the binding amount of the antibody decreases or not. For example, a protein contained in a liquid phase is labeled, and if the amount of label decreases when an antibody is added, it can be determined that the antibody can neutralize the binding between the two proteins.
[0069][0069]
PD-1 - белок, называемый programmed cell death-1 или белок программируемой гибели клеток-1, и иногда также называемый PDCD1 или CD279. PD-1, который является мембранным белком из суперсемейства иммуноглобулинов, связывается с PD-L1 или PD-L2, подавляя активацию T-клеток. По-видимому, PD-1 препятствует развитию аутоиммунного заболевания. В раковых клетках PD-L1 экспрессируется на клеточной поверхности и негативно регулирует T-клетки. Благодаря этому раковые клетки избегают атаки T-клеток. В качестве PD-1 указан PD-1 человека (например, PD-1, имеющий аминокислотную последовательность, зарегистрированную под рег. номером NP_005009.1 в Genbank). PD-1 включает PD-1, имеющий аминокислотную последовательность, соответствующую аминокислотной последовательности, зарегистрированной под рег. номером NP_005009.1 в Genbank. В описании используется выражение "аминокислотная последовательность, соответствующая", включающее функционально эквивалентный PD-1, в том числе ортолог и природный PD-1, хотя аминокислотная последовательность не является полностью идентичной.PD-1 is a protein called programmed cell death-1 or programmed cell death-1 protein, and sometimes also called PDCD1 or CD279. PD-1, which is a membrane protein from the immunoglobulin superfamily, binds to PD-L1 or PD-L2 to inhibit T cell activation. Apparently, PD-1 prevents the development of an autoimmune disease. In cancer cells, PD-L1 is expressed on the cell surface and negatively regulates T cells. This prevents cancer cells from attacking T cells. As PD-1, human PD-1 is indicated (for example, PD-1 having the amino acid sequence registered under the registration number NP_005009.1 in Genbank). PD-1 includes PD-1 having an amino acid sequence corresponding to the amino acid sequence registered under reg. number NP_005009.1 in Genbank. The description uses the expression "amino acid sequence corresponding" to include functionally equivalent PD-1, including orthologue and natural PD-1, although the amino acid sequence is not completely identical.
[0070][0070]
PD-L1 - лиганд PD-1, иногда также называемый B7-H1 или CD274. PD-L1 включает, например, PD-L1 человека (например, PD-L1, имеющий аминокислотную последовательность, зарегистрированную под рег. номером NP_054862.1 в GenBank). PD-L1 включает PD-L1, имеющий аминокислотную последовательность, соответствующую аминокислотной последовательности, зарегистрированной под рег. номером NP_054862.1 в GenBank.PD-L1 is a PD-1 ligand, sometimes also called B7-H1 or CD274. PD-L1 includes, for example, human PD-L1 (eg, PD-L1 having the amino acid sequence registered under GenBank accession number NP_054862.1). PD-L1 includes PD-L1 having an amino acid sequence corresponding to the amino acid sequence registered under reg. number NP_054862.1 in GenBank.
[0071][0071]
PD-L2 - лиганд PD-1, иногда также называемый B7-DC или CD273. PD-L2 включает, например, PD-L2 человека (например, PD-L2, имеющий аминокислотную последовательность, зарегистрированную под рег. номером AAI13681.1 в GenBank). PD-L2 включает PD-L2, имеющий аминокислотную последовательность, соответствующую аминокислотной последовательности, зарегистрированной под рег. номером AAI13681.1.PD-L2 is a PD-1 ligand, sometimes also called B7-DC or CD273. PD-L2 includes, for example, human PD-L2 (eg, PD-L2 having the amino acid sequence registered under GenBank accession number AAI13681.1). PD-L2 includes PD-L2 having an amino acid sequence corresponding to the amino acid sequence registered under reg. number AAI13681.1.
[0072][0072]
CTLA-4 - мембранный белок из суперсемейства иммуноглобулинов, экспрессирующийся в активированных T-клетках. CTLA-4 аналогичен CD28 и связывается с CD80 и CD86 на антигенпрезентирующих клетках. Известно, что CD28 направляет костимулирующий сигнал T-клеткам; тогда как CTLA-4 передает T-клеткам ингибиторный сигнал. CTLA-4 включает, например, CTLA-4 человека (например, CTLA-4, имеющий аминокислотную последовательность, зарегистрированную под рег. номером AAH74893.1 в GenBank). CTLA-4 включает CTLA-4, имеющий аминокислотную последовательность, соответствующую аминокислотной последовательности, зарегистрированной под рег. номером AAH74893.1.CTLA-4 is a membrane protein from the immunoglobulin superfamily that is expressed in activated T cells. CTLA-4 is similar to CD28 and binds to CD80 and CD86 on antigen-presenting cells. CD28 is known to send a costimulatory signal to T cells; while CTLA-4 transmits an inhibitory signal to T cells. CTLA-4 includes, for example, human CTLA-4 (eg, CTLA-4 having the amino acid sequence registered under GenBank accession number AAH74893.1). CTLA-4 includes CTLA-4 having an amino acid sequence corresponding to the amino acid sequence registered under reg. number AAH74893.1.
[0073][0073]
CD80 и CD86 представляют собой мембранные белки из суперсемейства иммуноглобулинов, экспрессируемые на различных гемопоэтических клетках и взаимодействующие с CD28 и CTLA-4 на поверхности T-клеток, как описано выше. CD80 включает, например, CD80 человека (например, CD80, имеющий аминокислотную последовательность, зарегистрированную под рег. номером NP_005182.1 в Genbank). CD80 включает CD80, имеющий аминокислотную последовательность, соответствующую аминокислотной последовательности, зарегистрированной под рег. номером NP_005182.1. CD86 включает, например, CD86 человека (например, CD86, имеющий аминокислотную последовательность, зарегистрированную под рег. номером NP_787058.4 в Genbank). CD86 включает CD86 человека (например, CD86, имеющий аминокислотную последовательность, соответствующую аминокислотной последовательности, зарегистрированной под рег. номером NP_787058.4 в Genbank).CD80 and CD86 are membrane proteins from the immunoglobulin superfamily expressed on various hematopoietic cells and interact with CD28 and CTLA-4 on the surface of T cells, as described above. CD80 includes, for example, human CD80 (eg, CD80 having the amino acid sequence registered under reg. number NP_005182.1 in Genbank). CD80 includes CD80 having an amino acid sequence corresponding to the amino acid sequence registered under reg. number NP_005182.1. CD86 includes, for example, human CD86 (eg, CD86 having the amino acid sequence registered under Genbank registration number NP_787058.4). CD86 includes human CD86 (eg, CD86 having an amino acid sequence corresponding to the amino acid sequence registered under Genbank registration number NP_787058.4).
[0074][0074]
<Фармацевтическая композиция и комбинированное лекарственное средство настоящего изобретения><Pharmaceutical composition and combination drug of the present invention>
Согласно настоящему изобретению может быть предложена любая из следующих фармацевтических композиций и комбинированных лекарственных средств (в дальнейшем иногда называемых "фармацевтической композицией и комбинированным лекарственным средством настоящего изобретения").According to the present invention, any of the following pharmaceutical compositions and combination drugs (hereinafter sometimes referred to as "pharmaceutical composition and combination drug of the present invention") may be provided.
(a-1) фармацевтическая композиция для применения при лечении рака, содержащая вирус осповакцины, содержащий полинуклеотид, кодирующий IL-7, вирус осповакцины, содержащий полинуклеотид, кодирующий IL-12, и ингибитор иммунной контрольной точки;(a-1) a pharmaceutical composition for use in the treatment of cancer, comprising a vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-7, a vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-12, and an immune checkpoint inhibitor;
(a-2) фармацевтическая композиция для применения при лечении рака, содержащая вирус осповакцины, содержащий полинуклеотид, кодирующий IL-7, и полинуклеотид, кодирующий IL-12, и ингибитор иммунной контрольной точки;(a-2) a pharmaceutical composition for use in the treatment of cancer, comprising a vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-7 and a polynucleotide encoding IL-12, and an immune checkpoint inhibitor;
(b-1) фармацевтическая композиция для применения при лечении рака, содержащая вирус осповакцины, содержащий полинуклеотид, кодирующий IL-7, и предназначенная для применения в комбинации с вирусом осповакцины, содержащим полинуклеотид, кодирующий IL-12, и ингибитор иммунной контрольной точки {где, вирус осповакцины, содержащий полинуклеотид, кодирующий IL-12, и ингибитор иммунной контрольной точки, может содержаться в одной фармацевтической композиции и отдельно в разных фармацевтических композициях};(b-1) a pharmaceutical composition for use in the treatment of cancer, comprising a vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-7 and intended for use in combination with a vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-12 and an immune checkpoint inhibitor {wherein , a vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-12 and an immune checkpoint inhibitor may be contained in one pharmaceutical composition and separately in different pharmaceutical compositions};
(b-2) фармацевтическая композиция для применения при лечении рака, содержащая вирус осповакцины, содержащий полинуклеотид, кодирующий IL-12, и предназначенная для применения в комбинации с вирусом осповакцины, содержащим полинуклеотид, кодирующий IL-7, и ингибитор иммунной контрольной точки {где вирус осповакцины, содержащий полинуклеотид, кодирующий IL-7, и ингибитор иммунной контрольной точки могут содержаться в одной фармацевтической композиции и отдельно в разных фармацевтических композициях};(b-2) a pharmaceutical composition for use in the treatment of cancer, comprising a vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-12 and intended for use in combination with a vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-7 and an immune checkpoint inhibitor {wherein vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-7 and an immune checkpoint inhibitor may be contained in the same pharmaceutical composition and separately in different pharmaceutical compositions};
(b-3) фармацевтическая композиция для применения при лечении рака, содержащая вирус осповакцины, содержащий полинуклеотид, кодирующий IL-7, и полинуклеотид, кодирующий IL-12, и предназначенная для применения в комбинации с ингибитором иммунной контрольной точки;(b-3) a pharmaceutical composition for use in the treatment of cancer, comprising a vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-7 and a polynucleotide encoding IL-12, and intended for use in combination with an immune checkpoint inhibitor;
(b-4) фармацевтическая композиция для применения при лечении рака, содержащая вирус осповакцины, содержащий полинуклеотид, кодирующий IL-7, и вирус осповакцины, содержащий полинуклеотид, кодирующий IL-12, и предназначенная для применения в комбинации с ингибитором иммунной контрольной точки;(b-4) a pharmaceutical composition for use in the treatment of cancer, comprising a vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-7 and a vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-12, and intended for use in combination with an immune checkpoint inhibitor;
(b-5) фармацевтическая композиция для применения при лечении рака, содержащая вирус осповакцины, содержащий полинуклеотид, кодирующий IL-7, и ингибитор иммунной контрольной точки, и предназначенная для применения в комбинации с вирусом осповакцины, содержащим полинуклеотид, кодирующий IL-12;(b-5) a pharmaceutical composition for use in the treatment of cancer, comprising a vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-7 and an immune checkpoint inhibitor, and intended for use in combination with a vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-12;
(b-6) фармацевтическая композиция для применения при лечении рака, содержащая вирус осповакцины, содержащий полинуклеотид, кодирующий IL-12, и ингибитор иммунной контрольной точки, и предназначенная для применения в комбинации с вирусом осповакцины, содержащим полинуклеотид, кодирующий IL-7;(b-6) a pharmaceutical composition for use in the treatment of cancer, comprising a vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-12 and an immune checkpoint inhibitor, and for use in combination with a vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-7;
(b-7) фармацевтическая композиция для применения при лечении рака, содержащая ингибитор иммунной контрольной точки, и предназначенная для применения в комбинации с вирусом осповакцины, содержащим полинуклеотид, кодирующий IL-7, и полинуклеотид, кодирующий IL-12;(b-7) a pharmaceutical composition for use in the treatment of cancer, containing an immune checkpoint inhibitor, and intended for use in combination with a vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-7 and a polynucleotide encoding IL-12;
(b-8) фармацевтическая композиция для применения при лечении рака, содержащая ингибитор иммунной контрольной точки, и предназначенная для применения в комбинации с вирусом осповакцины, содержащим полинуклеотид, кодирующий IL-7, и вирусом осповакцины, содержащим полинуклеотид, кодирующий IL-12 {где вирус осповакцины, содержащий полинуклеотид, кодирующий IL-7, и вирус осповакцины, содержащий полинуклеотид, кодирующий IL-12, могут содержаться в одной фармацевтической композиции и отдельно в разных фармацевтических композициях};(b-8) a pharmaceutical composition for use in the treatment of cancer, comprising an immune checkpoint inhibitor, and intended for use in combination with a vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-7 and a vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-12 {wherein a vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-7 and a vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-12 may be contained in the same pharmaceutical composition and separately in different pharmaceutical compositions};
(c-1) комбинированное лекарственное средство для применения при лечении рака, содержащее фармацевтическую композицию, содержащую вирус осповакцины, содержащий полинуклеотид, кодирующий IL-7, фармацевтическую композицию, содержащую вирус осповакцины, содержащий полинуклеотид, кодирующий IL-12, и фармацевтическую композицию, содержащую ингибитор иммунной контрольной точки;(c-1) a combination drug for use in the treatment of cancer, comprising a pharmaceutical composition containing a vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-7, a pharmaceutical composition containing a vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-12, and a pharmaceutical composition containing immune checkpoint inhibitor;
(c-2) комбинированное лекарственное средство для применения при лечении рака, содержащее фармацевтическую композицию, содержащую вирус осповакцины, содержащий полинуклеотид, кодирующий IL-7, и вирус осповакцины, содержащий полинуклеотид, кодирующий IL-12, и фармацевтическую композицию, содержащую ингибитор иммунной контрольной точки;(c-2) a combination drug for use in the treatment of cancer, comprising a pharmaceutical composition containing a vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-7 and a vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-12, and a pharmaceutical composition containing an immune control inhibitor points;
(c-3) комбинированное лекарственное средство для применения при лечении рака, содержащее фармацевтическую композицию, содержащую вирус осповакцины, содержащий полинуклеотид, кодирующий IL-7, и полинуклеотид, кодирующий IL-12, и фармацевтическую композицию, содержащую ингибитор иммунной контрольной точки;(c-3) a combination drug for use in the treatment of cancer, comprising a pharmaceutical composition containing a vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-7 and a polynucleotide encoding IL-12, and a pharmaceutical composition containing an immune checkpoint inhibitor;
(c-4) комбинированное лекарственное средство для применения при лечении рака, содержащее фармацевтическую композицию, содержащую вирус осповакцины, содержащий полинуклеотид, кодирующий IL-7, и ингибитор иммунной контрольной точки и фармацевтическую композицию, содержащую вирус осповакцины, содержащий полинуклеотид, кодирующий IL-12;(c-4) a combination drug for use in the treatment of cancer, comprising a pharmaceutical composition containing a vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-7 and an immune checkpoint inhibitor, and a pharmaceutical composition containing a vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-12 ;
(c-5) комбинированное лекарственное средство для применения при лечении рака, содержащее фармацевтическую композицию, содержащую вирус осповакцины, содержащий полинуклеотид, кодирующий IL-12, и ингибитор иммунной контрольной точки и фармацевтическую композицию, содержащую вирус осповакцины, содержащий полинуклеотид, кодирующий IL-7;(c-5) a combination drug for use in the treatment of cancer, comprising a pharmaceutical composition containing a vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-12 and an immune checkpoint inhibitor, and a pharmaceutical composition containing a vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-7 ;
(d-1) комбинированное лекарственное средство для применения при лечении рака, содержащее фармацевтическую композицию, содержащую вирус осповакцины, содержащий полинуклеотид, кодирующий IL-7, и фармацевтическую композицию, содержащую вирус осповакцины, содержащий полинуклеотид, кодирующий IL-12, для применения в комбинации с ингибитором иммунной контрольной точки;(d-1) a combination drug for use in the treatment of cancer, comprising a pharmaceutical composition containing a vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-7 and a pharmaceutical composition containing a vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-12, for use in combination with an immune checkpoint inhibitor;
(d-2) комбинированное лекарственное средство для применения при лечении рака, содержащее фармацевтическую композицию, содержащую вирус осповакцины, содержащий полинуклеотид, кодирующий IL-7, и фармацевтическую композицию, содержащую ингибитор иммунной контрольной точки, и предназначенное для применения в комбинации с вирусом осповакцины, содержащим полинуклеотид, кодирующий IL-12;(d-2) a combination drug for use in the treatment of cancer, containing a pharmaceutical composition containing a vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-7 and a pharmaceutical composition containing an immune checkpoint inhibitor, and intended for use in combination with vaccinia virus, containing a polynucleotide encoding IL-12;
(d-3) комбинированное лекарственное средство для применения при лечении рака, содержащее фармацевтическую композицию, содержащую вирус осповакцины, содержащий полинуклеотид, кодирующий IL-12, и фармацевтическую композицию, содержащую ингибитор иммунной контрольной точки, и предназначенное для применения в комбинации с вирусом осповакцины, содержащим полинуклеотид, кодирующий IL-7.(d-3) a combined drug for use in the treatment of cancer, containing a pharmaceutical composition containing a vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-12 and a pharmaceutical composition containing an immune checkpoint inhibitor, and intended for use in combination with vaccinia virus, containing a polynucleotide encoding IL-7.
[0075][0075]
В варианте осуществления фармацевтическая композиция настоящего изобретения является фармацевтической композицией для применения при лечении рака, содержащей вирус осповакцины в качестве активного ингредиента, в которой вирус осповакцины представляет собой:In an embodiment, the pharmaceutical composition of the present invention is a pharmaceutical composition for use in the treatment of cancer containing vaccinia virus as an active ingredient, wherein the vaccinia virus is:
(1) вирус осповакцины, содержащий полинуклеотид, кодирующий IL-7, и вирус осповакцины, содержащий полинуклеотид, кодирующий IL-12; или(1) a vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-7 and a vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-12; or
(2) вирус осповакцины, содержащий полинуклеотид, кодирующий IL-7, и полинуклеотид, кодирующий IL-12, и(2) a vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-7 and a polynucleotide encoding IL-12, and
для применения в комбинации с ингибитором иммунной контрольной точки.for use in combination with an immune checkpoint inhibitor.
[0076][0076]
В варианте осуществления комбинированное лекарственное средство настоящего изобретения представляет собой комбинированное лекарственное средство для применения при лечении рака, содержащее фармацевтическую композицию, содержащую вирус осповакцины, содержащий полинуклеотид, кодирующий IL-7, и фармацевтическую композицию, содержащую вирус осповакцины, содержащий полинуклеотид, кодирующий IL-12, и предназначенное для применения в комбинации с ингибитором иммунной контрольной точки.In an embodiment, the combination drug of the present invention is a combination drug for use in the treatment of cancer, comprising a pharmaceutical composition containing a vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-7 and a pharmaceutical composition containing a vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-12 , and intended for use in combination with an immune checkpoint inhibitor.
[0077][0077]
В варианте осуществления комбинированное лекарственное средство настоящего изобретения представляет собой комбинированное лекарственное средство для применения при лечении рака, содержащее фармацевтическую композицию настоящего изобретения, содержащую вирус осповакцины для применения в настоящем изобретении или комбинированном лекарственном средстве настоящего изобретения, и фармацевтическую композицию, содержащую ингибитор иммунной контрольной точки.In an embodiment, the combination drug of the present invention is a combination drug for use in the treatment of cancer, comprising a pharmaceutical composition of the present invention containing vaccinia virus for use in the present invention or a combination drug of the present invention, and a pharmaceutical composition containing an immune checkpoint inhibitor.
[0078][0078]
В варианте осуществления фармацевтическая композиция настоящего изобретения представляет собой фармацевтическую композицию для применения при лечении рака, содержащую ингибитор иммунной контрольной точки, и предназначенную для применения в комбинации с фармацевтической композицией настоящего изобретения, содержащей вирус осповакцины для применения в настоящем изобретении или комбинированном лекарственном средстве настоящего изобретения.In an embodiment, the pharmaceutical composition of the present invention is a pharmaceutical composition for use in the treatment of cancer, containing an immune checkpoint inhibitor, and intended for use in combination with a pharmaceutical composition of the present invention containing vaccinia virus for use in the present invention or a combination drug of the present invention.
[0079][0079]
В фармацевтической композиции и комбинированном лекарственном средстве настоящего изобретения, в том случае, если субъектом является человек, в качестве IL-7 и IL-12 могут использоваться человеческий IL-7 и человеческий IL-12, соответственно. Если субъектом является человек, и антитело используется в качестве ингибитора иммунной контрольной точки, антитело предпочтительно является антителом против человеческого белка и может быть человеческим химерным антителом, гуманизированным антителом или человеческим антителом. Комбинированное лекарственное средство настоящего изобретения может поставляться в виде набора (также называемого "комбинированным набором"), состоящего из одной упаковки, содержащей компоненты, т.е. фармацевтические композиции.In the pharmaceutical composition and combination drug of the present invention, when the subject is a human, as IL-7 and IL-12, human IL-7 and human IL-12, respectively, can be used. If the subject is a human and the antibody is used as an immune checkpoint inhibitor, the antibody is preferably an antibody against a human protein and may be a human chimeric antibody, a humanized antibody, or a human antibody. The combination drug of the present invention may be supplied as a kit (also referred to as a "combination kit") consisting of a single package containing the components, i.e. pharmaceutical compositions.
[0080][0080]
Фармацевтическая композиция или комбинированное лекарственное средство настоящего изобретения могут дополнительно содержать фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество.The pharmaceutical composition or combination drug of the present invention may further contain a pharmaceutically acceptable excipient.
[0081][0081]
Фармацевтическая композиция настоящего изобретения может быть изготовлена при использовании вспомогательного вещества, обычно используемого в данной области, т.е. фармацевтически приемлемого вспомогательного вещества и фармацевтически приемлемого носителя, в соответствии с обычно используемым способом. Лекарственная форма фармацевтической композиции может включать, например, средство для парентерального применения, такое как средство для инъекций и инфузий, которое могут вводить внутривенно, подкожно или интратуморально. При изготовлении лекарственного препарата, например, вспомогательное вещество, носитель или добавки могут использоваться в соответствии с лекарственной формой и в фармацевтически приемлемом диапазоне. Фармацевтическая композиция и комбинированный набор настоящего изобретения могут быть представлены в виде лиофилизированного препарата. Лиофилизированный препарат может быть представлен вместе с водой для инъекций.The pharmaceutical composition of the present invention can be prepared using an excipient commonly used in the art, i.e. a pharmaceutically acceptable excipient; and a pharmaceutically acceptable carrier, in accordance with a commonly used method. The dosage form of the pharmaceutical composition may include, for example, an agent for parenteral use, such as an agent for injection and infusion, which can be administered intravenously, subcutaneously or intratumorally. In the manufacture of a medicinal product, for example, the excipient, carrier, or additives may be used in accordance with the dosage form and within the pharmaceutically acceptable range. The pharmaceutical composition and combination kit of the present invention may be presented as a lyophilized preparation. The lyophilized preparation may be presented together with water for injection.
[0082][0082]
Эффективная доза вируса осповакцины для применения в настоящем изобретении изменяется в зависимости от степени симптома и возраста пациента, используемой лекарственной формы препарата или титра вируса; например, в качестве эффективной дозы одного вируса, в частности, суммарной эффективной дозы двух типов вирусов, содержащихся в комбинированном наборе, или суммарной эффективной дозы двух типов вирусов, вводимых в комбинации, может использоваться бляшкообразующая единица (БОЕ) приблизительно 102-1010.The effective dose of vaccinia virus for use in the present invention varies depending on the severity of the symptom and the age of the patient, the formulation used, or the virus titer; for example, a plaque forming unit (PFU) of approximately 10 2 -10 10 can be used as the effective dose of a single virus, in particular the total effective dose of the two types of viruses contained in the combination kit, or the total effective dose of the two types of viruses administered in combination.
Отношение дозировок двух типов вирусов, которые могут использоваться в комбинированном наборе, составляют, например, приблизительно 1:10-10:1, приблизительно 1:5-5:1, приблизительно 1:3-3:1, приблизительно 1:2-2:1 или приблизительно 1:1.The dosage ratio of the two types of viruses that can be used in a combination kit is, for example, about 1:10-10:1, about 1:5-5:1, about 1:3-3:1, about 1:2-2 :1 or approximately 1:1.
[0083][0083]
<Применение в профилактике или терапии рака ><Use in Cancer Prevention or Therapy>
Фармацевтическая композиция и комбинированное лекарственное средство настоящего изобретения могут применяться для лечения рака, например, солидного рака, например, но без ограничения, рака, выбранного из группы, состоящей из злокачественной меланомы, рака легкого, аденокарциномы легкого, мелкоклеточного рака легкого, плоскоклеточного рака легкого, рака почки, рака мочевого пузыря, рака головы и шеи, рака молочной железы, рака пищевода, глиобластомы, нейробластомы, миеломы, рака яичника, рака толстой и прямой кишки, рака поджелудочной железы, рака предстательной железы, гепатоцеллюлярной карциномы, мезотелиомы, рака шейки матки и рака желудка.The pharmaceutical composition and combination drug of the present invention can be used to treat cancer, for example, solid cancer, for example, but not limited to, cancer selected from the group consisting of malignant melanoma, lung cancer, adenocarcinoma of the lung, small cell lung cancer, squamous cell lung cancer, kidney cancer, bladder cancer, head and neck cancer, breast cancer, esophageal cancer, glioblastoma, neuroblastoma, myeloma, ovarian cancer, colon and rectal cancer, pancreatic cancer, prostate cancer, hepatocellular carcinoma, mesothelioma, cervical cancer and stomach cancer.
[0084][0084]
В настоящем изобретении предложен способ лечения рака у субъекта (например, пациента), нуждающегося в этом, включающий введение субъекту фармацевтической композиции, содержащей вирус осповакцины для применения в настоящем изобретении и ингибитор иммунной контрольной точки, где рак представляет собой, например, солидный рак, например, но без ограничения, рак, выбранный из группы, состоящей из злокачественной меланомы, рака легкого, аденокарциномы легкого, мелкоклеточного рака легкого, плоскоклеточного рака легкого, рака почки, рака мочевого пузыря, рака головы и шеи, рака молочной железы, рака пищевода, глиобластомы, нейробластомы, миеломы, рака яичника, рака толстой и прямой кишки, рака поджелудочной железы, рака предстательной железы, гепатоцеллюлярной карциномы, мезотелиомы, рака шейки матки и рака желудка.The present invention provides a method of treating cancer in a subject (e.g., patient) in need thereof, comprising administering to the subject a pharmaceutical composition containing a vaccinia virus for use in the present invention and an immune checkpoint inhibitor, wherein the cancer is, for example, a solid cancer, for example , but not limited to, a cancer selected from the group consisting of malignant melanoma, lung cancer, lung adenocarcinoma, small cell lung cancer, squamous cell lung cancer, kidney cancer, bladder cancer, head and neck cancer, breast cancer, esophageal cancer, glioblastoma , neuroblastoma, myeloma, ovarian cancer, colon and rectal cancer, pancreatic cancer, prostate cancer, hepatocellular carcinoma, mesothelioma, cervical cancer and gastric cancer.
[0085][0085]
В варианте осуществления настоящего изобретения предложен способ лечения рака у субъекта (например, пациента), нуждающегося в этом, включающий введение субъекту следующих (1), (2) и (3), где рак представляет собой, например, солидный рак, например, но без ограничения, рак, выбранный из группы, состоящей из злокачественной меланомы, рака легкого, аденокарциномы легкого, мелкоклеточного рака легкого, плоскоклеточного рака легкого, рака почки, рака мочевого пузыря, рака головы и шеи, рака молочной железы, рака пищевода, глиобластомы, нейробластомы, миеломы, рака яичника, рака толстой и прямой кишки, рака поджелудочной железы, рака предстательной железы, гепатоцеллюлярной карциномы, мезотелиомы, рака шейки матки и рака желудка:In an embodiment, the present invention provides a method for treating cancer in a subject (e.g., patient) in need thereof, comprising administering to the subject the following (1), (2) and (3), wherein the cancer is, for example, a solid cancer, for example, but without limitation, a cancer selected from the group consisting of malignant melanoma, lung cancer, lung adenocarcinoma, small cell lung cancer, squamous cell lung cancer, kidney cancer, bladder cancer, head and neck cancer, breast cancer, esophageal cancer, glioblastoma, neuroblastoma , myeloma, ovarian cancer, colon and rectal cancer, pancreatic cancer, prostate cancer, hepatocellular carcinoma, mesothelioma, cervical cancer and gastric cancer:
(1) вируса осповакцины, содержащего полинуклеотид, кодирующий IL-7;(1) vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-7;
(2) вируса осповакцины, содержащего полинуклеотид, кодирующий IL-12; и(2) vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-12; and
(3) ингибитора иммунной контрольной точки.(3) immune checkpoint inhibitor.
Вирусы осповакцины (1) и (2) и ингибитор иммунной контрольной точки (3) могут вводить субъекту в комбинации или отдельно. Когда вирусы осповакцины (1) и (2) и ингибитор иммунной контрольной точки (3) вводят отдельно, их могут вводить одновременно или последовательно. Когда вирусы осповакцины (1) и (2) и ингибитор иммунной контрольной точки (3) вводят последовательно, их могут вводить непрерывно или с перерывом. В варианте осуществления вводят вирусы осповакцины, а затем вводят ингибитор иммунной контрольной точки. Вирусы осповакцины могут вводить, например, интратуморально, внутривенно или внутрибрюшинно. Ингибитор иммунной контрольной точки могут вводить интратуморально, внутривенно или внутрибрюшинно.The vaccinia viruses (1) and (2) and the immune checkpoint inhibitor (3) may be administered to a subject in combination or separately. When the vaccinia viruses (1) and (2) and the immune checkpoint inhibitor (3) are administered separately, they may be administered simultaneously or sequentially. When the vaccinia viruses (1) and (2) and the immune checkpoint inhibitor (3) are administered sequentially, they may be administered continuously or intermittently. In an embodiment, vaccinia viruses are administered followed by an immune checkpoint inhibitor. Vaccinia viruses can be administered, for example, intratumorally, intravenously or intraperitoneally. The immune checkpoint inhibitor can be administered intratumorally, intravenously, or intraperitoneally.
[0086][0086]
В варианте осуществления настоящего изобретения предложен способ лечения рака у субъекта (например, пациента), нуждающегося в этом, включающий введение субъекту следующих (1) и (2), где рак представляет собой, например, солидный рак, например, но без ограничения, рак, выбранный из группы, состоящей из злокачественной меланомы, рака легкого, аденокарциномы легкого, мелкоклеточного рака легкого, плоскоклеточного рака легкого, рака почки, рака мочевого пузыря, рака головы и шеи, рака молочной железы, рака пищевода, глиобластомы, нейробластомы, миеломы, рака яичника, рака толстой и прямой кишки, рака поджелудочной железы, рака предстательной железы, гепатоцеллюлярной карциномы, мезотелиомы, рака шейки матки и рака желудка:In an embodiment, the present invention provides a method of treating cancer in a subject (e.g., patient) in need thereof, comprising administering to the subject the following (1) and (2), wherein the cancer is, for example, a solid cancer, for example, but not limited to, cancer selected from the group consisting of malignant melanoma, lung cancer, lung adenocarcinoma, small cell lung cancer, squamous cell lung cancer, kidney cancer, bladder cancer, head and neck cancer, breast cancer, esophageal cancer, glioblastoma, neuroblastoma, myeloma, cancer ovarian, colon and rectal cancer, pancreatic cancer, prostate cancer, hepatocellular carcinoma, mesothelioma, cervical cancer and gastric cancer:
(1) вируса осповакцины, содержащего полинуклеотид, кодирующий IL-7, и полинуклеотид, кодирующий IL-12; и(1) vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-7 and a polynucleotide encoding IL-12; and
(2) ингибитора иммунной контрольной точки.(2) immune checkpoint inhibitor.
Вирус осповакцины (1) и ингибитор иммунной контрольной точки (2) могут вводить субъекту в комбинации или отдельно. Когда вирус осповакцины (1) и ингибитор иммунной контрольной точки (2) вводят отдельно, их могут вводить одновременно или последовательно. Когда вирус осповакцины (1) и ингибитор иммунной контрольной точки (2) вводят последовательно, их могут вводить непрерывно или с перерывом. В варианте осуществления вводят вирус осповакцины, а затем вводят ингибитор иммунной контрольной точки.The vaccinia virus (1) and the immune checkpoint inhibitor (2) may be administered to a subject in combination or separately. When the vaccinia virus (1) and the immune checkpoint inhibitor (2) are administered separately, they may be administered simultaneously or sequentially. When the vaccinia virus (1) and the immune checkpoint inhibitor (2) are administered sequentially, they may be administered continuously or intermittently. In an embodiment, vaccinia virus is administered followed by an immune checkpoint inhibitor.
[0087][0087]
В настоящем изобретении предложен вирус осповакцины и/или ингибитор иммунной контрольной точки, применяемый в настоящем изобретении для применения при лечении рака, например, солидного рака, например, но без ограничения, рака, выбранного из группы, состоящей из злокачественной меланомы, рака легкого, аденокарциномы легкого, мелкоклеточного рака легкого, плоскоклеточного рака легкого, рака почки, рака мочевого пузыря, рака головы и шеи, рака молочной железы, рака пищевода, глиобластомы, нейробластомы, миеломы, рака яичника, рака толстой и прямой кишки, рака поджелудочной железы, рака предстательной железы, гепатоцеллюлярной карциномы, мезотелиомы, рака шейки матки и рака желудка.The present invention provides a vaccinia virus and/or an immune checkpoint inhibitor useful in the present invention for use in the treatment of cancer, e.g., solid cancer, e.g., but not limited to, cancer selected from the group consisting of malignant melanoma, lung cancer, adenocarcinoma lung, small cell lung cancer, squamous cell lung cancer, kidney cancer, bladder cancer, head and neck cancer, breast cancer, esophageal cancer, glioblastoma, neuroblastoma, myeloma, ovarian cancer, colon and rectal cancer, pancreatic cancer, prostate cancer gland, hepatocellular carcinoma, mesothelioma, cervical cancer and gastric cancer.
[0088][0088]
В варианте осуществления настоящего изобретения предложен вирус осповакцины, выбранный из следующих (1)-(4), для применения при лечении рака, например, солидного рака, например, но без ограничения, рака, выбранного из группы, состоящей из злокачественной меланомы, рака легкого, аденокарциномы легкого, мелкоклеточного рака легкого, плоскоклеточного рака легкого, рака почки, рака мочевого пузыря, рака головы и шеи, рака молочной железы, рака пищевода, глиобластомы, нейробластомы, миеломы, рака яичника, рака толстой и прямой кишки, рака поджелудочной железы, рака предстательной железы, гепатоцеллюлярной карциномы, мезотелиомы, рака шейки матки и рака желудка.In an embodiment, the present invention provides a vaccinia virus selected from the following (1)-(4) for use in the treatment of cancer, e.g., solid cancer, e.g., but not limited to, cancer selected from the group consisting of malignant melanoma, lung cancer lung adenocarcinoma, small cell lung cancer, squamous cell lung cancer, kidney cancer, bladder cancer, head and neck cancer, breast cancer, esophageal cancer, glioblastoma, neuroblastoma, myeloma, ovarian cancer, colon and rectal cancer, pancreatic cancer, prostate cancer, hepatocellular carcinoma, mesothelioma, cervical cancer and gastric cancer.
(1) вируса осповакцины, содержащего полинуклеотид, кодирующий IL-7, предназначенного для применения в комбинации с вирусом осповакцины, содержащим полинуклеотид, кодирующий IL-12, и ингибитором иммунной контрольной точки;(1) a vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-7 for use in combination with a vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-12 and an immune checkpoint inhibitor;
(2) вируса осповакцины, содержащего полинуклеотид, кодирующий IL-12, предназначенного для применения в комбинации с вирусом осповакцины, содержащим полинуклеотид, кодирующий IL-7, и ингибитором иммунной контрольной точки;(2) a vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-12 for use in combination with a vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-7 and an immune checkpoint inhibitor;
(3) вируса осповакцины, содержащего полинуклеотид, кодирующий IL-7, и полинуклеотид, кодирующий IL-12, предназначенного для применения в комбинации с ингибитором иммунной контрольной точки; и(3) a vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-7 and a polynucleotide encoding IL-12 for use in combination with an immune checkpoint inhibitor; and
(4) комбинации вируса осповакцины, содержащего полинуклеотид, кодирующий IL-7, и вируса осповакцины, содержащего полинуклеотид, кодирующий IL-12, предназначенной для применения в комбинации с ингибитором иммунной контрольной точки.(4) a combination of a vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-7 and a vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-12 for use in combination with an immune checkpoint inhibitor.
[0089][0089]
В варианте осуществления настоящего изобретения предложен ингибитор иммунной контрольной точки для применения при лечении рака, например, солидного рака, например, но без ограничения, рака, выбранного из группы, состоящей из злокачественной меланомы, рака легкого, аденокарциномы легкого, мелкоклеточного рака легкого, плоскоклеточного рака легкого, рака почки, рака мочевого пузыря, рака головы и шеи, рака молочной железы, рака пищевода, глиобластомы, нейробластомы, миеломы, рака яичника, рака толстой и прямой кишки, рака поджелудочной железы, рака предстательной железы, гепатоцеллюлярной карциномы, мезотелиомы, рака шейки матки и рака желудка, иIn an embodiment, the present invention provides an immune checkpoint inhibitor for use in the treatment of cancer, e.g., solid cancer, e.g., but not limited to, cancer selected from the group consisting of malignant melanoma, lung cancer, lung adenocarcinoma, small cell lung cancer, squamous cell carcinoma. lung cancer, kidney cancer, bladder cancer, head and neck cancer, breast cancer, esophageal cancer, glioblastoma, neuroblastoma, myeloma, ovarian cancer, colon and rectal cancer, pancreatic cancer, prostate cancer, hepatocellular carcinoma, mesothelioma, cancer cervical and stomach cancer, and
предназначенный для применения в комбинации с:intended for use in combination with:
(1) вирусом осповакцины, содержащим полинуклеотид, кодирующий IL-7, и вирусом осповакцины, содержащим полинуклеотид, кодирующий IL-12; или(1) a vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-7 and a vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-12; or
(2) вирусом осповакцины, содержащим полинуклеотид, кодирующий IL-7, и полинуклеотид, кодирующий IL-12.(2) an vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-7 and a polynucleotide encoding IL-12.
[0090][0090]
В настоящем изобретении также предложено применение вируса осповакцины, выбранного из следующих (1)-(4), для производства фармацевтической композиции или комбинированного лекарственного средства настоящего изобретения для применения при лечении рака, например, солидного рака, например, но без ограничения, рака, выбранного из группы, состоящей из злокачественной меланомы, рака легкого, аденокарциномы легкого, мелкоклеточного рака легкого, плоскоклеточного рака легкого, рака почки, рака мочевого пузыря, рака головы и шеи, рака молочной железы, рака пищевода, глиобластомы, нейробластомы, миеломы, рака яичника, рака толстой и прямой кишки, рака поджелудочной железы, рака предстательной железы, гепатоцеллюлярной карциномы, мезотелиомы, рака шейки матки и рака желудка:The present invention also provides the use of a vaccinia virus selected from the following (1) to (4) for the manufacture of a pharmaceutical composition or combination medicament of the present invention for use in the treatment of cancer, e.g., solid cancer, such as, but not limited to, cancer, selected from the group consisting of malignant melanoma, lung cancer, lung adenocarcinoma, small cell lung cancer, squamous cell lung cancer, kidney cancer, bladder cancer, head and neck cancer, breast cancer, esophageal cancer, glioblastoma, neuroblastoma, myeloma, ovarian cancer, colon and rectal cancer, pancreatic cancer, prostate cancer, hepatocellular carcinoma, mesothelioma, cervical cancer and gastric cancer:
(1) вируса осповакцины, содержащего полинуклеотид, кодирующий IL-7, предназначенного для применения в комбинации с вирусом осповакцины, содержащим полинуклеотид, кодирующий IL-12, и ингибитором иммунной контрольной точки;(1) a vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-7 for use in combination with a vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-12 and an immune checkpoint inhibitor;
(2) вируса осповакцины, содержащего полинуклеотид, кодирующий IL-12, предназначенного для применения в комбинации с вирусом осповакцины, содержащим полинуклеотид, кодирующий IL-7, и ингибитором иммунной контрольной точки;(2) a vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-12 for use in combination with a vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-7 and an immune checkpoint inhibitor;
(3) вируса осповакцины, содержащего полинуклеотид, кодирующий IL-7, и полинуклеотид, кодирующий IL-12, предназначенного для применения в комбинации с ингибитором иммунной контрольной точки; и(3) a vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-7 and a polynucleotide encoding IL-12 for use in combination with an immune checkpoint inhibitor; and
(4) комбинации вируса осповакцины, содержащего полинуклеотид, кодирующий IL-7, и вируса осповакцины, содержащего полинуклеотид, кодирующий IL-12, предназначенной для применения в комбинации с ингибитором иммунной контрольной точки.(4) a combination of a vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-7 and a vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-12 for use in combination with an immune checkpoint inhibitor.
[0091][0091]
В настоящем изобретении также предложено применение ингибитора иммунной контрольной точки для изготовления фармацевтической композиции или комбинированного лекарственного средства настоящего изобретения для применения при лечении рака, например, солидного рака, например, но без ограничения, рака, выбранного из группы, состоящей из злокачественной меланомы, рака легкого, аденокарциномы легкого, мелкоклеточного рака легкого, плоскоклеточного рака легкого, рака почки, рака мочевого пузыря, рака головы и шеи, рака молочной железы, рака пищевода, глиобластомы, нейробластомы, миеломы, рака яичника, рака толстой и прямой кишки, рака поджелудочной железы, рака предстательной железы, гепатоцеллюлярной карциномы, мезотелиомы, рака шейки матки и рака желудка, где фармацевтическая композиция или комбинированное лекарственное средство:The present invention also provides the use of an immune checkpoint inhibitor for the manufacture of a pharmaceutical composition or combination medicament of the present invention for use in the treatment of cancer, e.g., solid cancer, e.g., but not limited to, cancer selected from the group consisting of malignant melanoma, lung cancer lung adenocarcinoma, small cell lung cancer, squamous cell lung cancer, kidney cancer, bladder cancer, head and neck cancer, breast cancer, esophageal cancer, glioblastoma, neuroblastoma, myeloma, ovarian cancer, colon and rectal cancer, pancreatic cancer, prostate cancer, hepatocellular carcinoma, mesothelioma, cervical cancer and gastric cancer, where the pharmaceutical composition or combination drug:
(1) предназначены для применения в комбинации с вирусом осповакцины, содержащим полинуклеотид, кодирующий IL-7, и вирусом осповакцины, содержащим полинуклеотид, кодирующий IL-12;(1) intended for use in combination with a vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-7 and a vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-12;
(2) предназначены для применения в комбинации с вирусом осповакцины, содержащим полинуклеотид, кодирующий IL-7, и полинуклеотид, кодирующий IL-12;(2) are intended for use in combination with a vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-7 and a polynucleotide encoding IL-12;
(3) содержат вирус осповакцины, содержащий полинуклеотид, кодирующий IL-7, и предназначены для применения в комбинации с вирусом осповакцины, содержащим полинуклеотид, кодирующий IL-12; или(3) contain a vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-7, and are intended for use in combination with a vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-12; or
(4) содержат вирус осповакцины, содержащий полинуклеотид, кодирующий IL-12, и предназначены для применения в комбинации с вирусом осповакцины, содержащим полинуклеотид, кодирующий IL-7.(4) contain a vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-12, and are intended for use in combination with a vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-7.
[0092][0092]
В настоящем изобретении также предложено применение по меньшей мере одного или всех, выбранных из группы, состоящей из вируса осповакцины, содержащего полинуклеотид, кодирующий IL-7, и полинуклеотид, кодирующий IL-12, и иммунной контрольной точки, в производстве комбинированного лекарственного средства для применения при лечении рака, например, солидного рака, например, но без ограничения, рака, выбранного из группы, состоящей из злокачественной меланомы, рака легкого, аденокарциномы легкого, мелкоклеточного рака легкого, плоскоклеточного рака легкого, рака почки, рака мочевого пузыря, рака головы и шеи, рака молочной железы, рака пищевода, глиобластомы, нейробластомы, миеломы, рака яичника, рака толстой и прямой кишки, рака поджелудочной железы, рака предстательной железы, гепатоцеллюлярной карциномы, мезотелиомы, рака шейки матки и рака желудка, содержащего фармацевтическую композицию, содержащую вирус осповакцины, содержащий полинуклеотид, кодирующий IL-7, и полинуклеотид, кодирующий IL-12, и фармацевтическую композицию, содержащую ингибитор иммунной контрольной точки.The present invention also provides the use of at least one or all selected from the group consisting of a vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-7 and a polynucleotide encoding IL-12 and an immune checkpoint in the manufacture of a combination drug for use in the treatment of cancer, e.g., solid cancer, such as, but not limited to, cancer selected from the group consisting of malignant melanoma, lung cancer, lung adenocarcinoma, small cell lung cancer, squamous cell lung cancer, kidney cancer, bladder cancer, head cancer, and neck, breast cancer, esophageal cancer, glioblastoma, neuroblastoma, myeloma, ovarian cancer, colon and rectal cancer, pancreatic cancer, prostate cancer, hepatocellular carcinoma, mesothelioma, cervical cancer and gastric cancer, containing a pharmaceutical composition containing a virus vaccinia containing a polynucleotide encoding IL-7 and a polynucleotide encoding and IL-12, and a pharmaceutical composition containing an immune checkpoint inhibitor.
[0093][0093]
В настоящем изобретении также предложено применение по меньшей мере одного или всех, выбранных из группы, состоящей из вируса осповакцины, содержащего полинуклеотид, кодирующий IL-7, и вируса осповакцины, содержащего полинуклеотид, кодирующий IL-12, и ингибитора иммунной контрольной точки, для производства комбинированного лекарственного средства для применения при лечении рака, например, солидного рака, например, но без ограничения, рака, выбранного из группы, состоящей из злокачественной меланомы, рака легкого, аденокарциномы легкого, мелкоклеточного рака легкого, плоскоклеточного рака легкого, рака почки, рака мочевого пузыря, рака головы и шеи, рака молочной железы, рака пищевода, глиобластомы, нейробластомы, миеломы, рака яичника, рака толстой и прямой кишки, рака поджелудочной железы, рака предстательной железы, гепатоцеллюлярной карциномы, мезотелиомы, рака шейки матки и рака желудка, содержащего фармацевтическую композицию, содержащую вирус осповакцины, содержащий полинуклеотид, кодирующий IL-7, фармацевтическую композицию, содержащую вирус осповакцины, содержащий полинуклеотид, кодирующий IL-12, и фармацевтическую композицию, содержащую ингибитор иммунной контрольной точки.The present invention also provides the use of at least one or all selected from the group consisting of a vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-7 and a vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-12 and an immune checkpoint inhibitor, for the production a combination drug for use in the treatment of cancer, e.g., solid cancer, e.g., but not limited to, cancer selected from the group consisting of malignant melanoma, lung cancer, lung adenocarcinoma, small cell lung cancer, squamous cell lung cancer, kidney cancer, urinary cancer bladder, head and neck cancer, breast cancer, esophageal cancer, glioblastoma, neuroblastoma, myeloma, ovarian cancer, colon and rectal cancer, pancreatic cancer, prostate cancer, hepatocellular carcinoma, mesothelioma, cervical cancer, and gastric cancer containing a pharmaceutical composition containing a vaccinia virus containing a polynucleotide , encoding IL-7, a pharmaceutical composition containing a vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-12, and a pharmaceutical composition containing an immune checkpoint inhibitor.
[0094][0094]
В настоящем описании "для профилактики" используется в том же смысле, что и "для применения в профилактике", и "для лечения" используется в том же смысле, что и "для применения в лечении".In the present description, "for prevention" is used in the same sense as "for use in prevention", and "for treatment" is used in the same sense as "for use in treatment".
[0095][0095]
Фармацевтическая композиция или комбинированное лекарственное средство настоящего изобретения могут применяться в комбинации с другими различными терапевтическими средствами, эффективными при раке, например, солидном раке, например, но без ограничения, раке, выбранном из группы, состоящей из злокачественной меланомы, рака легкого, аденокарциномы легкого, мелкоклеточного рака легкого, плоскоклеточного рака легкого, рака почки, рака мочевого пузыря, рака головы и шеи, рака молочной железы, рака пищевода, глиобластомы, нейробластомы, миеломы, рака яичника, рака толстой и прямой кишки, рака поджелудочной железы, рака предстательной железы, гепатоцеллюлярной карциномы, мезотелиомы, рака шейки матки и рака желудка. Другие различные терапевтические средства могут быть неиммунотерапевтическими лекарственными средствами. Комбинированное применение может включать одновременное введение, раздельное и непрерывное введение, раздельное введение с требуемым интервалом времени. В случае одновременного введения фармацевтическая композиция согласно настоящему изобретению может быть комбинированным препаратом или комбинацией отдельных препаратов.The pharmaceutical composition or combination drug of the present invention may be used in combination with various other therapeutic agents effective in cancer, e.g., solid cancer, for example, but not limited to, cancer selected from the group consisting of malignant melanoma, lung cancer, lung adenocarcinoma, small cell lung cancer, squamous cell lung cancer, kidney cancer, bladder cancer, head and neck cancer, breast cancer, esophageal cancer, glioblastoma, neuroblastoma, myeloma, ovarian cancer, colon and rectal cancer, pancreatic cancer, prostate cancer, hepatocellular carcinoma, mesothelioma, cervical cancer and gastric cancer. Other various therapeutic agents may be non-immunotherapeutic drugs. Combined use may include simultaneous administration, separate and continuous administration, separate administration with the required time interval. In the case of simultaneous administration, the pharmaceutical composition according to the present invention may be a combined preparation or a combination of separate preparations.
[0096][0096]
Рак, подлежащий лечению согласно настоящему изобретению, включает метастатические опухоли в органах, за исключением органа, содержащего первичный очаг, такого как лимфатический узел и печень. Таким образом, в настоящем изобретении субъект, имеющий метастатический рак, также включен в понятие субъект.The cancer to be treated according to the present invention includes metastatic tumors in organs other than the organ containing the primary lesion, such as the lymph node and liver. Thus, in the present invention, a subject having metastatic cancer is also included in the subject.
[0097][0097]
<Порядок введения вируса осповакцины и ингибитора иммунной контрольной точки><Order of administration of vaccinia virus and immune checkpoint inhibitor>
В настоящем изобретении вирус осповакцины и ингибитор иммунной контрольной точки могут вводить одновременно или непрерывно, или последовательно.In the present invention, the vaccinia virus and the immune checkpoint inhibitor may be administered simultaneously or continuously or sequentially.
[0098][0098]
В варианте осуществления начинают введение вируса осповакцины субъекту, имеющему рак, и после этого начинают введение ингибитора иммунной контрольной точки. В варианте осуществления начинают введение ингибитора иммунной контрольной точки субъекту, имеющему рак, и после этого начинают введение вируса осповакцины.In an embodiment, the administration of vaccinia virus to the subject having cancer is started, and thereafter, the administration of the immune checkpoint inhibitor is started. In an embodiment, administering an immune checkpoint inhibitor to a subject having cancer is started, followed by vaccinia virus administration.
[0099][0099]
В варианте осуществления завершают введение вируса осповакцины субъекту, имеющему рак, и после этого завершают введение ингибитора иммунной контрольной точки. В варианте осуществления завершают введение ингибитора иммунной контрольной точки субъекту, имеющему рак, и после этого завершают введение вируса осповакцины.In an embodiment, the administration of the vaccinia virus to the subject having cancer is terminated, and thereafter the administration of the immune checkpoint inhibitor is terminated. In an embodiment, the administration of the immune checkpoint inhibitor to the subject having cancer is completed, and then the administration of the vaccinia virus is completed.
[0100][0100]
В варианте осуществления вирус осповакцины и ингибитор иммунной контрольной точки могут вводить субъекту, имеющему рак, в соответствии со схемой применения, включающей курс введения доз. В одном варианте осуществления, по меньшей мере в одном курсе введения доз или во всех курсах введения доз, начинают введение вируса осповакцины субъекту, имеющему рак, и после этого могут начинать введение ингибитора иммунной контрольной точки. В одном варианте осуществления, по меньшей мере в одном курсе введения доз или во всех курсах введения доз, завершают введение вируса осповакцины субъекту, имеющему рак, и после этого могут начинать введение ингибитора иммунной контрольной точки. В одном варианте осуществления, по меньшей мере в одном курсе введения доз или во всех курсах введения доз, начинают введение ингибитора иммунной контрольной точки субъекту, имеющему рак, и после этого могут начинать введение вируса осповакцины. В одном из вариантов осуществления, по меньшей мере в одном курсе введения доз или во всех курсах введения доз, завершают введение ингибитора иммунной контрольной точки субъекту, имеющему рак, и после этого могут начинать введение вируса осповакцины.In an embodiment, the vaccinia virus and the immune checkpoint inhibitor may be administered to a subject having cancer according to a dosing schedule. In one embodiment, in at least one or all of the dosing cycles, administration of vaccinia virus to a subject having cancer is initiated, and thereafter administration of an immune checkpoint inhibitor may be initiated. In one embodiment, in at least one or all of the dosing courses, administration of vaccinia virus to the subject having cancer is completed, and administration of the immune checkpoint inhibitor can then begin. In one embodiment, in at least one or all of the dosing cycles, administration of an immune checkpoint inhibitor to a subject having cancer is started, and vaccinia virus can then be started. In one embodiment, in at least one or all of the dosing courses, administration of the immune checkpoint inhibitor to the subject having cancer is completed, and vaccinia virus administration can then begin.
[0101][0101]
В настоящем изобретении, если вирус осповакцины, содержащий полинуклеотид, кодирующий IL-7, и вирус осповакцины, содержащий полинуклеотид, кодирующий IL-12, являются разными, вирусы осповакцины могут вводить одновременно, непрерывно или последовательно. Кроме того, в этом варианте осуществления порядок введения вируса осповакцины и ингибитора иммунной контрольной точки может быть определен в соответствии с порядком введения, указанным выше.In the present invention, if a vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-7 and a vaccinia virus containing a polynucleotide encoding IL-12 are different, the vaccinia viruses may be administered simultaneously, continuously or sequentially. In addition, in this embodiment, the administration order of the vaccinia virus and the immune checkpoint inhibitor can be determined according to the administration order indicated above.
[0102][0102]
Настоящее изобретение было описано в общем виде. Для дальнейшего понимания изобретения Примеры будут описаны для справки; однако они представлены только с целью иллюстрации и не ограничивают настоящее изобретение.The present invention has been described in general terms. For further understanding of the invention, Examples will be described for reference; however, they are presented for illustrative purposes only and do not limit the present invention.
ПримерыExamples
[0103][0103]
(Пример 1: Противоопухолевое действие у опухоленесущей мыши при использовании комбинации генетически модифицированного вируса осповакцины и другой противоопухолевой терапии)(Example 1: Antitumor activity in a tumor-bearing mouse using a combination of genetically modified vaccinia virus and other antitumor therapy)
[0104][0104]
В качестве генетически модифицированного вируса осповакцины был выбран и использован вирус осповакцины (LC16mO ΔSCR VGF-SP-IL12/O1L-SP-IL7), содержащий полинуклеотиды, кодирующие IL-12 (IL12) и IL-7 (IL7) (далее именуемый "IL12 и IL7 интегрированный вирус осповакцины"), описанный в WO2017/209053 (Пример 2), чтобы полинуклеотиды могли экспрессироваться. В качестве терапии рака иммунотерапия рака, в частности иммунотерапия рака с применением ингибитора иммунного чекпоинта, была выбрана и использована в комбинации с вирусом осповакцины, указанным выше. В качестве ингибитора иммунного чекпоинта использовали антитело против мышиного PD-1 и антитело против мышиного CTLA-4.As the genetically modified vaccinia virus, vaccinia virus (LC16mO ΔSCR VGF-SP-IL12/O1L-SP-IL7) containing polynucleotides encoding IL-12 (IL12) and IL-7 (IL7) (hereinafter referred to as "IL12 and IL7 integrated vaccinia") described in WO2017/209053 (Example 2) so that the polynucleotides can be expressed. As cancer therapy, cancer immunotherapy, in particular cancer immunotherapy using an immune checkpoint inhibitor, has been selected and used in combination with the vaccinia virus mentioned above. Anti-mouse PD-1 antibody and anti-mouse CTLA-4 antibody were used as immune checkpoint inhibitors.
[0105][0105]
Эффект индукции полной ремиссии в результате комбинированного применения антитела против PD-1 или антитела против CTLA-4 оценивали при использовании мышей (мышей-опухоленосителей), которым подкожно пересаживали линию сингенных мышиных раковых клеток в левую и правую латеральную область живота.The effect of inducing complete remission as a result of the combined use of an anti-PD-1 antibody or an anti-CTLA-4 antibody was evaluated using mice (tumor-bearing mice) in which a syngeneic mouse cancer cell line was subcutaneously transplanted into the left and right lateral abdomen.
[0106][0106]
В частности, сначала в каждую левую и правую латеральную область живота мышей BALB/c (самцов возрастом 5-6 недель, Charles River Laboratories Japan, Inc.) подкожно пересаживали по 50 мкл клеток рака толстой кишки мыши CT26.WT (ATCC CRL-2638), подготовленных в PBS при плотности 1×107 клеток/мл. В день 7 после подкожной трансплантации раковых клеток диаметр опухолей измеряли штангенциркулем. Мышей делили на следующие 6 групп, чтобы средний объем опухоли (малый диаметр мм × малый диаметр мм × большой диаметр мм × 0,52) составлял от 24 до 29 мм3 на стороне введения вируса (правая латеральная область живота) и от 24 до 26 мм3 на стороне введения вируса (левая латеральная область живота: удаленно расположенная опухоль).In particular, 50 μl of CT26.WT mouse colon cancer cells (ATCC CRL-2638 ) prepared in PBS at a density of 1×10 7 cells/ml. On
[0107][0107]
Группа введения:Introduction group:
1) группа введения растворителя;1) solvent injection group;
2) группа введения одного средства с введением только антитела против PD-1;2) single agent administration group with anti-PD-1 antibody alone;
3) группа введения одного средства с введением только антитела против CTLA-4;3) single agent administration group with anti-CTLA-4 antibody alone;
4) группа введения одного средства с введением только IL12 и IL7-несущего вируса осповакцины;4) single agent administration group with IL12 and IL7-carrying vaccinia alone;
5) группа комбинированного введения с введением IL12 и IL7-несущего вируса осповакцины и антитела против PD-1; и5) group of combined administration with the introduction of IL12 and IL7-bearing vaccinia virus and antibodies against PD-1; and
6) группа комбинированного введения с введением IL12 и IL7-несущего вируса осповакцины и антитела против CTLA-4.6) group of combined administration with the introduction of IL12 and IL7-bearing vaccinia virus and antibodies against CTLA-4.
[0108][0108]
В группе введения растворителя по 30 мкл растворителя (30 мМ Трис-HCl, 10% сахарозы) вводили в опухоль в правой латеральной области живота мыши в День 1, День 3 и День 6 после распределения в группы. В группе введения одного средства с введением только IL12 и IL7-несущего вируса осповакцины, в группе комбинированного введения IL12 и IL7-несущего вируса осповакцины и антитела против PD-1 и в группе комбинированного введения IL12 и IL7-несущего вируса осповакцины и антитела против CTLA-4 по 30 мкл IL12 и IL7-несущего вируса осповакцины, разведенного растворителем до концентрации 6,7×108 БОЕ/мл, вводили (2×107 БОЕ) в опухоль в правой латеральной области живота мышей в День 1, День 3 и День 6 после распределения в группы.In the solvent injection group, 30 μl of solvent (30 mM Tris-HCl, 10% sucrose) was injected into the tumor in the right lateral abdomen of the mouse on
В группе введения одного средства с введением только антитела против PD-1, в группе введения одного средства с введением только антитела против CTLA-4, в группе комбинированного введения IL12 и IL7-несущего вируса осповакцины и антитела против PD-1 и в группе комбинированного введения IL12 и IL7-несущего вируса осповакцины и антитела против CTLA-4 вводили антитело против PD-1 (RMP1-14) (BE0146, Bio X Cell) разведенное в PBS до концентрации 1 мг/мл, или антитело против CTLA-4 (9D9) (BE0164, Bio X Cell), разведенное в PBS до концентрации 2 мг/мл, внутрибрюшинно в количестве 100 мкл, в День 6 и последующие дни после распределения в группы, два раза в неделю. Антитело против PD-1 (RMP1-14) может нейтрализовать связывание между PD-1 с PD-L1 и PD-1 с PD-L2, и может блокировать передачу сигнала через PD-1. Кроме того, антитело против CTLA-4 (9D9) может блокировать передачу сигнала через CTLA-4. В группе введения растворителя и в группе введения одного IL12 и IL7-несущего вируса осповакцины по 100 мкл PBS вводили внутрибрюшинно, два раза в неделю, в День 6 и последующие дни после распределения в группы. Диаметр опухолей, присутствующих в левой и правой боковой области живота измеряли с помощью штангенциркуля два раза в неделю для вычисления объемов опухоли. Если при последнем обследовании, в День 37 после распределения в группы, при пальпации опухоль не обнаруживали, такой случай определяли как полную ремиссию (CR), при этом подсчитывали количество случаев полной ремиссии.In the single agent administration group with anti-PD-1 antibody alone, in the single agent administration group with anti-CTLA-4 antibody alone, in the combined administration group of IL12 and IL7-bearing vaccinia virus and anti-PD-1 antibody, and in the combined administration group IL12 and IL7-carrying vaccinia virus and antibodies against CTLA-4 were injected with an antibody against PD-1 (RMP1-14) (BE0146, Bio X Cell) diluted in PBS to a concentration of 1 mg/ml, or an antibody against CTLA-4 (9D9) (BE0164, Bio X Cell) diluted in PBS to a concentration of 2 mg/ml, ip at 100 µl, on Day 6 and subsequent days after distribution to groups, twice a week. An anti-PD-1 antibody (RMP1-14) can neutralize binding between PD-1 to PD-L1 and PD-1 to PD-L2, and can block signaling through PD-1. In addition, an anti-CTLA-4 antibody (9D9) can block signal transduction through CTLA-4. In the vehicle administration group and in the IL12 and IL7-carrying vaccinia virus alone administration group, 100 μl of PBS were administered intraperitoneally, twice a week, on Day 6 and subsequent days after grouping. The diameter of tumors present in the left and right lateral abdomen was measured with calipers twice a week to calculate tumor volumes. If no tumor was found on palpation at the last examination, on Day 37 after grouping, the case was defined as complete remission (CR), and the number of cases of complete remission was counted.
[0109][0109]
В результате, как показано на верхних панелях ФИГ. 1, в отношении опухолей в правой латеральной области живота (сторона введения вируса), полная ремиссия была достигнута в 9 из 10 случаев в группе введения одного средства с введением только IL12 и IL7-несущего вируса осповакцины; в 10 из 10 случаев в группе комбинированного введения IL12 и IL7-несущего вируса осповакцины и антитела против PD-1; и в 9 из 10 случаев в группе комбинированного введения IL12 и IL7-несущего вируса осповакцины и антитела против CTLA-4. Противоопухолевое действие, по-видимому, не наблюдалось в группе введения одного антитела против PD-1 и в группе введения одного антитела против CTLA-4 по сравнению с группой введения растворителя.As a result, as shown in the top panels of FIG. 1, for tumors in the right lateral abdomen (side of injection), complete remission was achieved in 9 out of 10 cases in the single agent treatment group with IL12 and IL7-carrying vaccinia alone; in 10 out of 10 cases in the group of combined administration of IL12 and IL7-bearing vaccinia virus and antibodies against PD-1; and in 9 out of 10 cases in the group of combined administration of IL12 and IL7-bearing vaccinia virus and antibodies against CTLA-4. No antitumor effect appeared to be observed in the anti-PD-1 antibody alone administration group and in the anti-CTLA-4 antibody alone administration group compared to the solvent administration group.
[0110][0110]
В отличие от этого, как показано на нижних панелях ФИГ. 1, в отношении опухолей в левой латеральной области живота (сторона, в которую не вводили вирус), полная ремиссия была достигнута в только одном из 10 случаев в группе введения одного IL12 и IL7-несущего вируса осповакцины; в 6 из 10 случаев в группе комбинированного введения IL12 и IL7-несущего вируса осповакцины и антитела против PD-1; и в 4 из 10 случаев в группе комбинированного введения IL12 и IL7-несущего вируса осповакцины и антитела против CTLA-4.In contrast, as shown in the lower panels of FIG. 1, for tumors in the left lateral abdomen (the side that was not injected with the virus), complete remission was achieved in only one of 10 cases in the IL12 and IL7-carrying vaccinia virus alone group; in 6 out of 10 cases in the group of combined administration of IL12 and IL7-carrying vaccinia virus and antibodies against PD-1; and in 4 out of 10 cases in the group of combined administration of IL12 and IL7-bearing vaccinia virus and antibodies against CTLA-4.
[0111][0111]
На основе результатов, полученных в модели на мышах-опухоленосителях, было обнаружено, что комбинированное введение IL12 и IL7-несущего вируса осповакцины с антителом против PD-1 и комбинированное введение IL12 и IL7-несущего вируса осповакцины с антителом против CTLA-4 обладает превосходным противоопухолевым действием по сравнению с введением одного антитела против PD-1 и введением одного антитела против CTLA-4; и обладает высоким эффектом индукции полной ремиссии также на опухоли (удаленно расположенной опухоли), расположенной удаленно от участка введения вируса осповакцины, по сравнению с введением одного антитела против PD-1, одного антитела против CTLA-4 и одного IL12 и IL7-несущего вируса осповакцины.Based on the results obtained in a tumor-bearing mouse model, it was found that the combined administration of IL12 and IL7-bearing vaccinia virus with anti-PD-1 antibody and the combined administration of IL12 and IL7-bearing vaccinia virus with anti-CTLA-4 antibody had excellent antitumor activity. the action compared with the introduction of a single antibody against PD-1 and the introduction of a single antibody against CTLA-4; and has a high effect of inducing complete remission also on a tumor (remotely located tumor) located remotely from the site of injection of vaccinia virus, compared with the introduction of one antibody against PD-1, one antibody against CTLA-4 and one IL12 and IL7-carrying vaccinia virus .
[0112][0112]
Промышленная применимостьIndustrial Applicability
Ожидается, что терапия рака с применением комбинации вируса осповакцины с ингибитором иммунной контрольной точки, применяемая в настоящем изобретении, и фармацевтическая композиция и комбинированное лекарственное средство, которые будут применяться для такой терапии, можно будет применять для предотвращения или лечения различных форм рака.It is expected that the vaccinia virus-immune checkpoint inhibitor combination cancer therapy used in the present invention, and the pharmaceutical composition and combination drug to be used for such therapy, can be used to prevent or treat various forms of cancer.
Claims (21)
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2018-179632 | 2018-09-26 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2021111399A RU2021111399A (en) | 2022-10-26 |
| RU2788874C2 true RU2788874C2 (en) | 2023-01-25 |
Family
ID=
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2016205429A1 (en) * | 2015-06-15 | 2016-12-22 | New York University | Method of treatment using oncolytic viruses |
| WO2017209053A1 (en) * | 2016-05-30 | 2017-12-07 | アステラス製薬株式会社 | New genetically-modified vaccinia virus |
| WO2018111902A1 (en) * | 2016-12-12 | 2018-06-21 | Multivir Inc. | Methods and compositions comprising viral gene therapy and an immune checkpoint inhibitor for treatment and prevention of cancer and infectious diseases |
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2016205429A1 (en) * | 2015-06-15 | 2016-12-22 | New York University | Method of treatment using oncolytic viruses |
| WO2017209053A1 (en) * | 2016-05-30 | 2017-12-07 | アステラス製薬株式会社 | New genetically-modified vaccinia virus |
| WO2018111902A1 (en) * | 2016-12-12 | 2018-06-21 | Multivir Inc. | Methods and compositions comprising viral gene therapy and an immune checkpoint inhibitor for treatment and prevention of cancer and infectious diseases |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| MCCLOSKEY C. W. et al. Ovarian cancer immunotherapy: preclinical models and emerging therapeutics // Cancers. - 2018. - Vol. 10. - No. 8. - Art. 244. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP7077377B2 (en) | Oncolytic virus for expression of immune checkpoint modulator | |
| JP7146852B2 (en) | Combination of oncolytic virus and immune checkpoint modulator | |
| TW201825511A (en) | Oncolytic virus expressing immune checkpoint modulators | |
| US11638730B2 (en) | Cancer therapy by combination use of oncolytic vaccinia virus and immune checkpoint inhibitor, and pharmaceutical composition and combination medicine for use in the cancer therapy | |
| TW202108629A (en) | Antibodies for t-cell activation | |
| CN113164538A (en) | Modified oncolytic viruses, compositions and uses thereof | |
| US20220290179A1 (en) | Genetically engineered oncolytic vaccinia viruses and methods of uses thereof | |
| US20220041723A1 (en) | Novel antibodies and nucleotide sequences, and uses thereof | |
| RU2788874C2 (en) | Cancer therapy by combined use of oncolytic smallpox vaccine virus and immune control point inhibitor, and pharmaceutical composition and combined drug for use in cancer therapy | |
| TWI817159B (en) | Recombinant vaccinia virus | |
| CN106963950B (en) | Combined medicine for treating tumor | |
| WO2023274355A1 (en) | Combination of modified mesenchymal stem cells and immune effector cells for tumor treatment | |
| TW202321458A (en) | Novel combinations of antibodies and uses thereof | |
| KR20240067076A (en) | Novel combinations of antibodies and their uses |