RU2786361C2 - Method for production of jak inhibitors and their intermediate compounds - Google Patents

Abstract

FIELD: biotechnology.

SUBSTANCE: invention relates to the production of intermediate compounds for the production of drugs. A method for the production of a compound of the formula J-15 or its salt is proposed, where X is Br; PG¹ is a protective group for carboxylic acid; PG² is an amino protective group, and PG³ is an amino protective group. The method includes: (a) interaction of a compound of the formula J-14 or its salt with hydrazine to obtain the compound of the formula J-15, and (b) optionally, formation of salt of the compound J-15. Compounds of formulas J-14, J-15 and a method for the production of a compound of the formula J-16 are also proposed.

EFFECT: obtainment of intermediate compounds for JAK inhibitors.

20 cl, 3 tbl, 13 ex

Description

Уровень техники изобретенияState of the art invention

Область техники, к которой относится изобретениеThe technical field to which the invention belongs

Изобретение относится к способу получения соединений, которые можно использовать в качестве промежуточных соединений для получения лекарственных средств. В частности, изобретение относится к получению промежуточных соединений для ингибиторов JAK. The invention relates to a method for the preparation of compounds that can be used as intermediates for the preparation of drugs. In particular, the invention relates to the preparation of intermediates for JAK inhibitors.

Существующий уровень техникиState of the Art

Семейство JAK состоит из четырех членов: JAK1, JAK2, JAK3 и тирозинкиназа 2 (TYK2). Связывание цитокина с JAK-зависимым цитокиновым рецептором вызывает димеризацию рецептора, что приводит к фосфорилированию остатков тирозина на киназе JAK, влияя на активацию JAK. Фосфорилированные JAK, в свою очередь, связывают и фосфорилируют различные белки STAT, которые димеризуются, интернализуются в ядре клетки и напрямую модулируют транскрипцию генов, приводя, среди прочего, к последующим эффектам, связанным с воспалительным заболеванием. JAK обычно ассоциируются с рецепторами цитокинов парами в виде гомодимеров или гетеродимеров. Каждый из четырех членов семейства JAK участвует в передаче сигналов по меньшей мере одного из цитокинов, связанных с воспалением. Следовательно, химический ингибитор с пан-активностью против всех членов семейства JAK может модулировать широкий спектр провоспалительных путей, которые способствуют воспалительным заболеваниям легких, таким как тяжелая астма, ХОБЛ и хроническая дисфункция аллотрансплантата легких (CLAD). Поэтому было бы желательно иметь эффективный процесс получения специфических ингибиторов JAK. The JAK family consists of four members: JAK1, JAK2, JAK3, and tyrosine kinase 2 (TYK2). Binding of the cytokine to the JAK-dependent cytokine receptor causes dimerization of the receptor, which results in phosphorylation of tyrosine residues on the JAK kinase, influencing JAK activation. Phosphorylated JAKs, in turn, bind and phosphorylate various STAT proteins, which dimerize, internalize in the cell nucleus, and directly modulate gene transcription, leading, among other things, to downstream effects associated with inflammatory disease. JAKs usually associate with cytokine receptors in pairs as homodimers or heterodimers. Each of the four members of the JAK family is involved in the signaling of at least one of the cytokines associated with inflammation. Therefore, a chemical inhibitor with pan activity against all members of the JAK family can modulate a wide range of pro-inflammatory pathways that contribute to inflammatory lung diseases such as severe asthma, COPD, and chronic lung allograft dysfunction (CLAD). Therefore, it would be desirable to have an efficient process for the production of specific JAK inhibitors.

Сущность изобретенияThe essence of the invention

Изобретение направлено на способ получения соединений, которые могут быть использованы в качестве промежуточных соединений для получения лекарственных средств, обладающих ингибирующей активностью в отношении JAK.The invention is directed to a process for the preparation of compounds that can be used as intermediates for the preparation of drugs having inhibitory activity against JAK.

Соответственно, в одном аспекте изобретение предоставляет способ получения соединения формулы J-15 или его соли:Accordingly, in one aspect, the invention provides a process for preparing a compound of formula J-15, or a salt thereof:

гдеwhere

X выбран из группы, состоящей из Br, I и Cl;X is selected from the group consisting of Br, I and Cl;

PG¹ представляет собой защитную группу для карбоновой кислоты;PG ¹ is a protecting group for a carboxylic acid;

PG² представляет собой аминозащитную группу; и PG ² is an amino protecting group; and

PG³ представляет собой аминозащитную группу;PG ³ is an amino protecting group;

способ, включающий:method including:

(a) взаимодействие соединения формулы J-14:(a) reacting a compound of formula J-14 :

или его соли с гидразином с получением соединения формулы J-15 иor its salt with hydrazine to give a compound of formula J-15 and

(b) необязательно образование соли соединения J-15.(b) optionally forming a salt of compound J-15 .

В другом аспекте изобретение относится к соединению формулы J-14:In another aspect, the invention relates to a compound of formula J-14 :

или его соли, где or its salt, where

X выбран из группы, состоящей из Br, I и Cl;X is selected from the group consisting of Br, I and Cl;

PG¹ представляет собой защитную группу для карбоновой кислоты;PG ¹ is a protecting group for a carboxylic acid;

PG² представляет собой аминозащитную группу; и PG ² is an amino protecting group; and

PG³ представляет собой аминозащитную группу.PG ³ is an amino protecting group.

В другом аспекте изобретение относится к соединению формулы J-15:In another aspect, the invention relates to a compound of formula J-15 :

или его соли, or its salt

где where

X выбран из группы, состоящей из Br, I и Cl;X is selected from the group consisting of Br, I and Cl;

PG¹ представляет собой защитную группу для карбоновой кислоты;PG ¹ is a protecting group for a carboxylic acid;

PG² представляет собой аминозащитную группу; и PG ² is an amino protecting group; and

PG³ представляет собой аминозащитную группу.PG ³ is an amino protecting group.

В другом аспекте изобретение относится к способу получения соединения формулы J-16, или его соли:In another aspect, the invention relates to a process for preparing a compound of formula J-16, or a salt thereof:

где where

PG¹ представляет собой защитную группу для карбоновой кислоты;PG ¹ is a protecting group for a carboxylic acid;

PG² представляет собой аминозащитную группу; PG ² is an amino protecting group;

PG³ представляет собой аминозащитную группу; PG ³ is an amino protecting group;

PG⁴ представляет собой гидроксилзащитную группу; иPG ⁴ is a hydroxyl protecting group; and

R представляет собой H или F;R is H or F;

включающему:including:

(a) взаимодействие соединения формулы J-13:(a) reacting a compound of formula J-13 :

где X выбран из группы, состоящей из Br, I и Cl; и Y представляет собой уходящую группу; с соединением формулы J-11:where X is selected from the group consisting of Br, I and Cl; and Y is a leaving group; with a compound of formula J-11 :

в присутствии основания, с получением соединения формулы J-14:in the presence of a base, to give a compound of formula J-14 :

и необязательно образование соли соединения J-14;and optionally forming a salt of compound J-14 ;

(b) взаимодействие соединения формулы J-14 или его соли с гидразином с получением соединения формулы J-15: (b) reacting a compound of formula J-14 or a salt thereof with hydrazine to give a compound of formula J-15:

и необязательно образование соли соединения J-15;and optionally forming a salt of compound J-15 ;

(c) взаимодействие соединения формулы J-15, или его соли, с соединением формулы J-5, J-6 или J-7:(c) reacting a compound of formula J-15 , or a salt thereof, with a compound of formula J-5 , J-6 , or J-7 :

где R^a и R^b, каждый, независимо выбраны из C_1-8 алкила, где R^a и R^b необязательно могут быть соединены с образованием 4-8-членного кольца; в присутствии основания, палладиевого катализатора и фосфинового лиганда с получением соединения формулы J-16, и необязательно образование соли соединения J-16.where R ^a and R ^b are each independently selected from C _1-8 alkyl, where R ^a and R ^b may optionally be connected to form a 4-8 membered ring; in the presence of a base, a palladium catalyst and a phosphine ligand to give a compound of formula J-16 , and optionally forming a salt of compound J-16 .

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯDETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION

В одном аспекте изобретение относится к способу получения соединения формулы J-15 или его соли:In one aspect, the invention relates to a process for preparing a compound of formula J-15 or a salt thereof:

гдеwhere

X выбран из группы, состоящей из Br, I и Cl;X is selected from the group consisting of Br, I and Cl;

PG¹ представляет собой защитную группу для карбоновой кислоты;PG ¹ is a protecting group for a carboxylic acid;

PG² представляет собой аминозащитную группу; и PG ² is an amino protecting group; and

PG³ представляет собой аминозащитную группу;PG ³ is an amino protecting group;

включающему:including:

(a) взаимодействие соединения формулы J-14:(a) reacting a compound of formula J-14 :

или его соли с гидразином с получением соединения формулы J-15 иor its salt with hydrazine to give a compound of formula J-15 and

(b) необязательно образование соли соединения J-15.(b) optionally forming a salt of compound J-15 .

В некоторых аспектах, реакцию с гидразином проводят при примерно 60°C. В некоторых аспектах, реакцию с гидразином проводят при 60°C±20°C.In some aspects, the reaction with hydrazine is carried out at about 60°C. In some aspects, the reaction with hydrazine is carried out at 60°C±20°C.

В некоторых аспектах, X выбран из группы, состоящей из Br, I и Cl; PG¹ представляет собой алкильную или бензильную группу, где бензильная группа является необязательно замещенной; PG² выбран из группы, состоящей из ацильной группы, алкоксикарбонильной группы, арилметильной группы и силильной группы; и PG³ выбран из группы, состоящей из ацильной группы, алкоксикарбонильной группы, арилметильной группы и силильной группы.In some aspects, X is selected from the group consisting of Br, I and Cl; PG ¹ is an alkyl or benzyl group, where the benzyl group is optionally substituted; PG ² is selected from the group consisting of an acyl group, an alkoxycarbonyl group, an arylmethyl group, and a silyl group; and PG ³ is selected from the group consisting of an acyl group, an alkoxycarbonyl group, an arylmethyl group, and a silyl group.

В некоторых аспектах, X представляет собой Br. В некоторых аспектах, X представляет собой Br, PG¹ представляет собой бензил, PG² представляет собой трет-бутоксикарбонил, и PG³ представляет собой бензил.In some aspects, X is Br. In some aspects, X is Br, PG ¹ is benzyl, PG ² is t-butoxycarbonyl, and PG ³ is benzyl.

В некоторых аспектах, соединение J-14 или его соль получают:In some aspects, compound J-14, or a salt thereof, is:

(a) взаимодействием соединения формулы J-13:(a) reacting a compound of formula J-13 :

где Y представляет собой уходящую группу, с соединением формулы J-11:where Y is a leaving group, with a compound of formula J-11 :

в присутствии основания, с получением J-14, и in the presence of a base, to give J-14 , and

(b) необязательно образование соли соединения J-14.(b) optionally forming a salt of compound J-14 .

В некоторых аспектах, Y представляет собой Cl.In some aspects, Y is Cl.

В другом аспекте изобретение относится к соединению формулы J-14:In another aspect, the invention relates to a compound of formula J-14 :

или его соли, где or its salt, where

X выбран из группы, состоящей из Br, I и Cl;X is selected from the group consisting of Br, I and Cl;

PG¹ представляет собой защитную группу для карбоновой кислоты;PG ¹ is a protecting group for a carboxylic acid;

PG² представляет собой аминозащитную группу; и PG ² is an amino protecting group; and

PG³ представляет собой аминозащитную группу.PG ³ is an amino protecting group.

В некоторых аспектах, X выбран из группы, состоящей из Br, I и Cl; PG¹ представляет собой алкильную или бензильную группу, где бензильная группа является необязательно замещенной; PG² выбран из группы, состоящей из ацильной группы, алкоксикарбонильной группы, арилметильной группы и силильной группы; и PG³ выбран из группы, состоящей из ацильной группы, алкоксикарбонильной группы, арилметильной группы и силильной группы.In some aspects, X is selected from the group consisting of Br, I and Cl; PG ¹ is an alkyl or benzyl group, where the benzyl group is optionally substituted; PG ² is selected from the group consisting of an acyl group, an alkoxycarbonyl group, an arylmethyl group, and a silyl group; and PG ³ is selected from the group consisting of an acyl group, an alkoxycarbonyl group, an arylmethyl group, and a silyl group.

В другом аспекте изобретение относится к соединению формулы I-14:In another aspect, the invention relates to a compound of formula I-14 :

или его соли.or its salt.

В другом аспекте изобретение относится к соединению формулы J-15:In another aspect, the invention relates to a compound of formula J-15 :

или его соли, or its salt

где where

X выбран из группы, состоящей из Br, I и Cl;X is selected from the group consisting of Br, I and Cl;

PG¹ представляет собой защитную группу для карбоновой кислоты;PG ¹ is a protecting group for a carboxylic acid;

PG² представляет собой аминозащитную группу; и PG ² is an amino protecting group; and

PG³ представляет собой аминозащитную группу.PG ³ is an amino protecting group.

В некоторых аспектах, X выбран из группы, состоящей из Br, I и Cl; PG¹ представляет собой алкильную или бензильную группу, где бензильная группа является необязательно замещенной; PG² выбран из группы, состоящей из ацильной группы, алкоксикарбонильной группы, арилметильной группы и силильной группы; и PG³ выбран из группы, состоящей из ацильной группы, алкоксикарбонильной группы, арилметильной группы и силильной группы.In some aspects, X is selected from the group consisting of Br, I and Cl; PG ¹ is an alkyl or benzyl group, where the benzyl group is optionally substituted; PG ² is selected from the group consisting of an acyl group, an alkoxycarbonyl group, an arylmethyl group, and a silyl group; and PG ³ is selected from the group consisting of an acyl group, an alkoxycarbonyl group, an arylmethyl group, and a silyl group.

В другом аспекте изобретение относится к соединению формулы I-15:In another aspect, the invention relates to a compound of formula I-15 :

или его соли.or its salt.

В другом аспекте изобретение относится к способу получения соединения формулы J-16, или его соли:In another aspect, the invention relates to a process for preparing a compound of formula J-16, or a salt thereof:

где where

PG¹ представляет собой защитную группу для карбоновой кислоты;PG ¹ is a protecting group for a carboxylic acid;

PG² представляет собой аминозащитную группу; PG ² is an amino protecting group;

PG³ представляет собой аминозащитную группу; PG ³ is an amino protecting group;

PG⁴ представляет собой гидроксилзащитную группу; иPG ⁴ is a hydroxyl protecting group; and

R представляет собой H или F;R is H or F;

включающему:including:

(a) взаимодействие соединения формулы J-13:(a) reacting a compound of formula J-13 :

где X выбран из группы, состоящей из Br, I и Cl; и Y представляет собой уходящую группу; с соединением формулы J-11:where X is selected from the group consisting of Br, I and Cl; and Y is a leaving group; with a compound of formula J-11 :

в присутствии основания, с получением соединения формулы J-14:in the presence of a base, to give a compound of formula J-14 :

и необязательно образование соли соединения J-14;and optionally forming a salt of compound J-14 ;

(b) взаимодействие соединения формулы J-14 или его соли с гидразином с получением соединения формулы J-15: (b) reacting a compound of formula J-14 or a salt thereof with hydrazine to give a compound of formula J-15:

и необязательно образование соли соединения J-15;and optionally forming a salt of compound J-15 ;

(c) взаимодействие соединения формулы J-15 или его соли с соединением формулы J-5, J-6 или J-7:(c) reacting a compound of formula J-15, or a salt thereof, with a compound of formula J-5 , J-6 , or J-7 :

где R^a и R^b, каждый, независимо выбраны из C_1-8 алкила, где R^a и R^b необязательно могут быть соединены с образованием 4-8-членного кольца; в присутствии основания, палладиевого катализатора и фосфинового лиганда с получением соединения формулы J-16, и необязательно образование соли соединения J-16.where R ^a and R ^b are each independently selected from C _1-8 alkyl, where R ^a and R ^b may optionally be connected to form a 4-8 membered ring; in the presence of a base, a palladium catalyst and a phosphine ligand to give a compound of formula J-16 , and optionally forming a salt of compound J-16 .

В некоторых аспектах, стадию (c) проводят в присутствии диборонового реагента. В некоторых аспектах, стадию (c) проводят в присутствии тетрагидроксидиборона или сложного эфира дибороновой кислоты. В некоторых вариантах осуществления катализатор представляет собой продукт реакции бис(пинаколато)диборона с гидрофторидом фторида калия. В некоторых вариантах осуществления катализатор получают взаимодействием бис(пинаколато)диборона в пропан-2-оле с гидрофторидом фторида калия в воде с последующей фильтрацией и сушкой полученных твердых веществ. In some aspects, step (c) is carried out in the presence of a diboronic reagent. In some aspects, step (c) is carried out in the presence of tetrahydroxydiborone or a diboronic acid ester. In some embodiments, the catalyst is the reaction product of bis(pinacolato)diborone with potassium fluoride hydrofluoride. In some embodiments, the catalyst is prepared by reacting bis(pinacolato)diborone in propan-2-ol with potassium fluoride hydrofluoride in water, followed by filtration and drying of the resulting solids.

В некоторых аспектах, взаимодействие с гидразином на стадии (b) проводят при 60°C±20°C.In some aspects, the interaction with hydrazine in stage (b) is carried out at 60°C±20°C.

В некоторых аспектах, X выбран из группы, состоящей из Br, I и Cl;In some aspects, X is selected from the group consisting of Br, I and Cl;

PG¹ представляет собой алкильную или бензильную группу, где бензильная группа является необязательно замещенной; PG² выбран из группы, состоящей из ацильной группы, алкоксикарбонильной группы, арилметильной группы и силильной группы; PG³ выбран из группы, состоящей из ацильной группы, алкоксикарбонильной группы, арилметильной группы и силильной группы; PG⁴ выбран из группы, состоящей из силильной группы, ацильной группы и арилметильной группы. В некоторых аспектах, X представляет собой Br. В некоторых аспектах, X представляет собой Br, PG¹ представляет собой бензил, PG² представляет собой трет-бутоксикарбонил, PG³ представляет собой бензил, и PG⁴ представляет собой бензил.PG ¹ is an alkyl or benzyl group, where the benzyl group is optionally substituted; PG ² is selected from the group consisting of an acyl group, an alkoxycarbonyl group, an arylmethyl group, and a silyl group; PG ³ is selected from the group consisting of an acyl group, an alkoxycarbonyl group, an arylmethyl group, and a silyl group; PG ⁴ is selected from the group consisting of a silyl group, an acyl group and an arylmethyl group. In some aspects, X is Br. In some aspects, X is Br, PG ¹ is benzyl, PG ² is t-butoxycarbonyl, PG ³ is benzyl, and PG ⁴ is benzyl.

В некоторых аспектах, Y представляет собой Cl.In some aspects, Y is Cl.

В некоторых аспектах, палладиевый катализатор и фосфиновый лиганд стадии (c) представляют собой бис(ди-трет-бутил(4-диметиламинофенил)фосфин)дихлорпалладий(II).In some aspects, the palladium catalyst and the phosphine ligand of step (c) are bis(di-tert-butyl(4-dimethylaminophenyl)phosphine)dichloropalladium(II).

В настоящем способе соединение J-13:In the present method, the J-13 compound:

взаимодействует с соединением формулы J-11:interacts with a compound of formula J-11 :

в присутствии основания, с получением соединения формулы J-14:in the presence of a base, to give a compound of formula J-14 :

Обычно реакцию проводят в растворителе, таком как ацетонитрил, в присутствии избытка (например, от 3 до 7 эквивалентов) основания, такого как триметиламин. Обычно используется от одного до двух эквивалентов J-13.Typically, the reaction is carried out in a solvent such as acetonitrile in the presence of an excess (eg 3 to 7 equivalents) of a base such as trimethylamine. Usually one to two J-13 equivalents are used.

В настоящем способе соединение J-14 или его соль взаимодействует с гидразином с получением соединения формулы J-15: In the present method, compound J-14 or a salt thereof is reacted with hydrazine to give a compound of formula J-15:

Обычно реакцию проводят в растворителе, таком как THF, и используют избыток гидразина, например от 2 до 10 эквивалентов. Реакцию нагревают при примерно 60°C до завершения, обычно от 0,5 до 6 часов.Typically, the reaction is carried out in a solvent such as THF and an excess of hydrazine is used, for example 2 to 10 equivalents. The reaction is heated at about 60° C. to completion, typically 0.5 to 6 hours.

В настоящем способе соединение J-15 или его соль взаимодействует с соединением формулы J-5, J-6 или J-7:In the present method, compound J-15, or a salt thereof, is reacted with a compound of formula J-5 , J-6 , or J-7 :

в присутствии основания, палладиевого катализатора и фосфинового лиганда с получением соединения формулы J-16:in the presence of a base, a palladium catalyst and a phosphine ligand to give a compound of formula J-16 :

Реакцию обычно проводят путем приведения в контакт J-16 с от примерно 1 до примерно 1,5 эквивалентов J-5, J-6 или J-7 в присутствии каталитического количества палладиевого катализатора и фосфинового лиганда (между примерно 0,005 и примерно 0,1 эквивалентов) и от примерно 2 до примерно 6 эквивалентов основания. Проведение реакции в присутствии дополнительного катализатора увеличивает выход продукта J-16. Дополнительным катализатором может быть дибороновый реагент. Дополнительным катализатором может быть тетрагидроксидиборон, сложный эфир дибороновой кислоты или продукт реакции бис(пинаколато)диборона с гидрофторидом фторида калия, как показано в получении 4.The reaction is typically carried out by contacting J-16 with about 1 to about 1.5 equivalents of J-5, J-6, or J-7 in the presence of a catalytic amount of a palladium catalyst and a phosphine ligand (between about 0.005 and about 0.1 equivalents ) and from about 2 to about 6 base equivalents. Carrying out the reaction in the presence of an additional catalyst increases the yield of product J-16. The additional catalyst may be a diboronic reagent. The additional catalyst may be tetrahydroxydiborone, a diboronic acid ester, or the reaction product of bis(pinacolato)diborone with potassium fluoride hydrofluoride as shown in Preparation 4.

Подходящие палладиевые катализаторы включают бис(ди-трет-бутил(4-диметиламинофенил)фосфин)дихлорпалладий(II), трис (дибензилиденацетон)дипалладий(0) (Pd₂dba₃), ацетат палладия (II) (Pd(OAc)₂), дихлор(1,1’-бис(дифенилфосфино)ферроцен)дипалладий(II) (Pd(dppf)Cl₂), дихлор бис(трифенилфосфин)-палладий(II) (Pd(PPh₃)₂Cl₂), и тому подобное, где в скобках даны общепринятые сокращения. Фосфиновые лиганды, используемые в настоящей реакции, включают трициклогексилфосфин (PCy₃), трициклогексилфосфинтетрафторборат (PCy₃HBF₄), 1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен (dppf), 1,1'-бис(ди-трет-бутилфосфино)ферроцен, три(2-фурил)фосфин, 1,3-бис(дифенилфосфино)пропан (dppp), 1,5-бис(дифенилфосфино)пентан (dpppe), три-трет-бутилфосфин (P(t-Bu)₃), и 99,9-диметил-4,5-бис(дифенилфосфино)ксантен (ксантфос).Suitable palladium catalysts include bis(di-tert-butyl(4-dimethylaminophenyl)phosphine)dichloropalladium(II), tris(dibenzylideneacetone)dipalladium(0) (Pd ₂ dba ₃ ), palladium(II) acetate (Pd(OAc) ₂ ) , dichloro(1,1'-bis(diphenylphosphino)ferrocene)dipalladium(II) (Pd(dppf)Cl ₂ ), dichlorobis(triphenylphosphine)-palladium(II) (Pd(PPh ₃ ) ₂ Cl ₂ ), etc. similar, where generally accepted abbreviations are given in brackets. Phosphine ligands used in the present reaction include tricyclohexylphosphine (PCy ₃ ), tricyclohexylphosphinetetrafluoroborate (PCy ₃ HBF ₄ ), 1,1'-bis(diphenylphosphino)ferrocene (dppf), 1,1'-bis(di-tert-butylphosphino) ferrocene, tri(2-furyl)phosphine, 1,3-bis(diphenylphosphino)propane (dppp), 1,5-bis(diphenylphosphino)pentane (dpppe), tri-tert-butylphosphine (P( t -Bu) ₃ ) , and 99,9-dimethyl-4,5-bis(diphenylphosphino)xanthene (xanthos).

Конкретные основания для реакции сочетания включают фторид калия, карбонат цезия и фторид цезия. Альтернативно, в качестве основания можно использовать карбонат натрия, карбонат калия, ацетат натрия, трет-бутоксид калия, 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундец-7-ен (DBU) или 1,4-диазабицикло[2.2.2]октан (DABCO). Реакцию обычно проводят в инертном растворителе, таком как тетрагидрофуран, N,N-диметилформамид, N,N-диметилацетамид или N-метилпирролидон. Подходящие системы смешанных растворителей включают тетрагидрофуран и воду, тетрагидрофуран и N,N-диметилформамид, тетрагидрофуран и N-метилпирролидон, ацетон и воду, этанол и воду и изопропанол и воду. Реакцию обычно проводят при температуре от приблизительно 40 до приблизительно 120°С в течение от приблизительно 1 до приблизительно 20 часов или до тех пор, пока реакция по существу не завершится. Продукт J-16 выделяют в виде твердого вещества общепринятыми способами.Specific coupling bases include potassium fluoride, cesium carbonate and cesium fluoride. Alternatively, sodium carbonate, potassium carbonate, sodium acetate, potassium tert-butoxide, 1,8-diazabicyclo[5.4.0]undec-7-ene (DBU) or 1,4-diazabicyclo[2.2.2] can be used as the base. octane (DABCO). The reaction is usually carried out in an inert solvent such as tetrahydrofuran, N,N-dimethylformamide, N,N-dimethylacetamide or N-methylpyrrolidone. Suitable mixed solvent systems include tetrahydrofuran and water, tetrahydrofuran and N,N-dimethylformamide, tetrahydrofuran and N-methylpyrrolidone, acetone and water, ethanol and water, and isopropanol and water. The reaction is usually carried out at a temperature of from about 40 to about 120°C for from about 1 to about 20 hours, or until the reaction is essentially complete. Product J-16 is isolated as a solid by conventional means.

ОпределенияDefinitions

При описании настоящего изобретения, включая его различные аспекты и варианты осуществления, следующие термины имеют следующие значения, если не указано иное.In describing the present invention, including its various aspects and embodiments, the following terms have the following meanings, unless otherwise indicated.

Термин «алкил» означает одновалентную насыщенную углеводородную группу, которая может быть линейной или разветвленной, или их комбинациями. Если не указано иное, такие алкильные группы обычно содержат от 1 до 10 атомов углерода. Типичные алкильные группы включают, например, метил (Me), этил (Et), н-пропил (n-Pr) или (nPr), изопропил (i-Pr) или (iPr), н-бутил (n-Bu) или (nBu), втор-бутил, изобутил, трет-бутил (t-Bu) или (tBu), н-пентил, н-гексил, 2,2-диметилпропил, 2-метилбутил, 3-метилбутил, 2-этилбутил, 2,2-диметилпентил, 2-пропилпентил и тому подобное.The term "alkyl" means a monovalent saturated hydrocarbon group, which may be linear or branched, or combinations thereof. Unless otherwise indicated, such alkyl groups typically contain from 1 to 10 carbon atoms. Representative alkyl groups include, for example, methyl (Me), ethyl (Et), n-propyl (n-Pr) or (nPr), isopropyl (i-Pr) or (iPr), n-butyl (n-Bu) or (nBu), sec-butyl, isobutyl, tert-butyl (t-Bu) or (tBu), n-pentyl, n-hexyl, 2,2-dimethylpropyl, 2-methylbutyl, 3-methylbutyl, 2-ethylbutyl, 2 ,2-dimethylpentyl, 2-propylpentyl and the like.

Когда определенное количество атомов углерода предназначено для определенного термина, количество атомов углерода указано перед термином. Например, термин «C_1-3 алкил» означает алкильную группу, имеющую от 1 до 3 атомов углерода, где атомы углерода находятся в любой химически приемлемой конфигурации, включая линейные или разветвленные конфигурации.When a certain number of carbon atoms is for a certain term, the number of carbon atoms is indicated before the term. For example, the term "C _1-3 alkyl" means an alkyl group having 1 to 3 carbon atoms, where the carbon atoms are in any chemically acceptable configuration, including linear or branched configurations.

Термин «циклоалкил» означает одновалентную насыщенную карбоциклическую группу, которая может быть моноциклической или полициклической. Если не указано иное, такие циклоалкильные группы обычно содержат от 3 до 10 атомов углерода. Типичные циклоалкильные группы включают, например, циклопропил (cPr), циклобутил (cBu), циклопентил, циклогексил, циклогептил, циклооктил, адамантил и тому подобное.The term "cycloalkyl" means a monovalent saturated carbocyclic group, which may be monocyclic or polycyclic. Unless otherwise indicated, such cycloalkyl groups typically contain from 3 to 10 carbon atoms. Representative cycloalkyl groups include, for example, cyclopropyl (cPr), cyclobutyl (cBu), cyclopentyl, cyclohexyl, cycloheptyl, cyclooctyl, adamantyl, and the like.

Термин «цпропил» означает циклопропил.The term "cpropyl" means cyclopropyl.

Термин «гетероциклил», «гетероцикл», «гетероциклический» или «гетероциклическое кольцо» означает одновалентную насыщенную или частично ненасыщенную циклическую неароматическую группу, имеющую от 3 до 10 общих кольцевых атомов, где кольцо содержит от 2 до 9 кольцевых атомов углерода и от 1 до 4 кольцевых гетероатомов, выбранных из азота, кислорода и серы. Гетероциклические группы могут быть моноциклическими или полициклическими (т.е. конденсированными или соединенными мостиковой связью). Типичные гетероциклильные группы включают, например, пирролидинил, пиперидинил, пиперазинил, имидазолидинил, морфолинил, тиоморфолил, индолин-3-ил, 2-имидазолинил, тетрагидропиранил, 1,2,3,4-тетрагидроизохинхолин-2-ил, 7-азанорборнанил, нортропанил и т.п., где точка присоединения находится у любого доступного кольцевого атома углерода или азота. Если из контекста точка присоединения гетероциклической группы очевидна, такие группы могут альтернативно называться невалентными видами, то есть пирролидином, пиперидином, пиперазином, имидазолом, тетрагидропираном и т.п. The term "heterocyclyl", "heterocycle", "heterocyclic", or "heterocyclic ring" means a monovalent saturated or partially unsaturated cyclic non-aromatic group having 3 to 10 ring atoms in common, where the ring contains 2 to 9 ring carbon atoms and 1 to 4 ring heteroatoms selected from nitrogen, oxygen and sulfur. Heterocyclic groups may be monocyclic or polycyclic (ie, fused or bridged). Typical heterocyclyl groups include, for example, pyrrolidinyl, piperidinyl, piperazinyl, imidazolidinyl, morpholinyl, thiomorpholyl, indolin-3-yl, 2-imidazolinyl, tetrahydropyranyl, 1,2,3,4-tetrahydroisoquincholin-2-yl, 7-azanorbornanyl, northropanyl and the like, where the point of attachment is at any available ring carbon or nitrogen atom. Where the point of attachment of a heterocyclic group is clear from the context, such groups may alternatively be referred to as non-valent species, ie, pyrrolidine, piperidine, piperazine, imidazole, tetrahydropyran, and the like.

Термин «галоген» означает фтор, хлор, бром или йод.The term "halogen" means fluorine, chlorine, bromine or iodine.

Термин «терапевтически эффективное количество» означает количество, достаточное для эффективного лечения при введении пациенту, нуждающемуся в лечении.The term "therapeutically effective amount" means an amount sufficient to effectively treat when administered to a patient in need of treatment.

Термин «лечение» или «терапия» означает предупреждение, улучшение или подавление медицинского состояния, заболевания или расстройства, подлежащего лечению (например, респираторного заболевания) у пациента (в частности, человека); или облегчение симптомов состояния здоровья, заболевания или расстройства.The term "treatment" or "therapy" means the prevention, improvement, or suppression of a medical condition, disease, or disorder being treated (eg, a respiratory disease) in a patient (in particular, a human); or relieving symptoms of a health condition, disease, or disorder.

Термин «фармацевтически приемлемая соль» означает соль, приемлемую для введения пациенту или млекопитающему, например человеку (например, соли, имеющие приемлемую безопасность для млекопитающих для данного режима дозирования). Типичные фармацевтически приемлемые соли включают соли уксусной, аскорбиновой, бензолсульфоновой, бензойной, камфорсульфоновой, лимонной, этансульфоновой, эдисиловой, фумаровой, гентизиновой, глюконовой, глюкуроновой, глутаминовой, гиппуровой, бромистоводородной, хлористоводородной, изэтионовой, молочной, лактобионовой, малеиновой, яблочной, миндальной, метансульфоновой, слизевой, нафталинсульфоновой, нафталин-1,5-дисульфоновой, нафталин-2,6-дисульфоновой, никотиновой, азотной, оротовой, памоиновой, пантотеновой, фосфорной, янтарной, серной, винной, п-толуолсульфоновой и ксинафоевой кислоты и тому подобное.The term "pharmaceutically acceptable salt" means a salt that is acceptable for administration to a patient or a mammal, such as a human (eg, salts that have acceptable mammalian safety for a given dosage regimen). Typical pharmaceutically acceptable salts include acetic, ascorbic, benzenesulfonic, benzoic, camphorsulfonic, citric, ethanesulfonic, edisyl, fumaric, gentisic, gluconic, glucuronic, glutamic, hippuric, hydrobromic, hydrochloric, isethionic, lactic, lactobionic, maleic, malic, almond, methanesulfonic, mucus, naphthalenesulfonic, naphthalene-1,5-disulfonic, naphthalene-2,6-disulfonic, nicotinic, nitric, orotic, pamoic, pantothenic, phosphoric, succinic, sulfuric, tartaric, p-toluenesulfonic and xinafoic acids and the like.

Термин «его соль» означает соединение, образующееся, когда водород кислоты заменен катионом, таким как катион металла или органический катион и тому подобное. Например, катион может быть протонированной формой соединения, то есть формой, в которой одна или несколько аминогрупп были протонированы кислотой. Обычно соль представляет собой фармацевтически приемлемую соль, хотя это не требуется для солей промежуточных соединений, которые не предназначены для введения пациенту.The term "salt thereof" means a compound formed when the hydrogen of an acid is replaced by a cation such as a metal cation or an organic cation and the like. For example, the cation may be the protonated form of the compound, that is, the form in which one or more amino groups have been protonated with an acid. Typically, the salt is a pharmaceutically acceptable salt, although this is not required for salts of intermediates that are not intended to be administered to a patient.

Термин «аминозащитная группа» означает защитную группу, подходящую для предотвращения нежелательных реакций азота аминогруппы. Типичные аминозащитные группы включают, но не ограничиваются ими, формил; ацильные группы, например алканоильные группы, такие как ацетил и трифторацетил; алкоксикарбонильные группы, такие как трет-бутоксикарбонил (Boc); арилметоксикарбонильные группы, такие как бензилоксикарбонил (Cbz), 9-флуоренилметоксикарбонил (Fmoc), п-нитробензилоксикарбонил (PNZ), 2,4-дихлорбензилоксикарбонил и 5-бензизоксазолилметоксикарбонил; арилметильные группы, такие как бензил (Bn), 4-метоксибензил, тритил (Tr) и 1,1-ди-(4’-метоксифенил)метил; силильные группы, такие как триметилсилил (TMS), трет-бутилдиметилсилил (TBDMS), [2-(триметилсилил)этокси]метил (SEM); и тому подобное. The term "amino protecting group" means a protecting group suitable for preventing undesired reactions of the nitrogen of the amino group. Exemplary amino protecting groups include, but are not limited to, formyl; acyl groups, for example alkanoyl groups such as acetyl and trifluoroacetyl; alkoxycarbonyl groups such as t-butoxycarbonyl (Boc); arylmethoxycarbonyl groups such as benzyloxycarbonyl (Cbz), 9-fluorenylmethoxycarbonyl (Fmoc), p-nitrobenzyloxycarbonyl (PNZ), 2,4-dichlorobenzyloxycarbonyl and 5-benzisoxazolylmethoxycarbonyl; arylmethyl groups such as benzyl (Bn), 4-methoxybenzyl, trityl (Tr) and 1,1-di-(4'-methoxyphenyl)methyl; silyl groups such as trimethylsilyl (TMS), t-butyldimethylsilyl (TBDMS), [2-(trimethylsilyl)ethoxy]methyl (SEM); etc.

Термин «защитная группа карбоновой кислоты» означает защитную группу, подходящую для предотвращения нежелательных реакций с карбоновой кислотой. Типичные защитные группы карбоновой кислоты включают, но не ограничиваются ими, сложные эфиры, такие как метил, этил, трет-бутил, бензил (Bn), п-метоксибензил (PMB), 9-флуоренилметил (Fm), триметилсилил (TMS), трет-бутилдиметилсилил (TBS, TBDMS), дифенилметил (бензгидрил, DPM) и тому подобное.The term "carboxylic acid protecting group" means a protecting group suitable for preventing unwanted reactions with a carboxylic acid. Exemplary carboxylic acid protecting groups include, but are not limited to, esters such as methyl, ethyl, t-butyl, benzyl (Bn), p-methoxybenzyl (PMB), 9-fluorenylmethyl (Fm), trimethylsilyl (TMS), t -butyldimethylsilyl (TBS, TBDMS), diphenylmethyl (benzhydryl, DPM) and the like.

Термин «гидроксильная защитная группа» означает защитную группу, подходящую для предотвращения нежелательных реакций на гидроксильной группе. Типичные гидроксильные защитные группы включают, но не ограничиваются ими, силильные группы, включая три(C_1-6 алкил) силильные группы, такие как триметилсилил (TMS), триэтилсилил (TES), трет-бутилдиметилсилил (TBS) и тому подобное; сложные эфиры (ацильные группы), включая C_1-6 алканоильные группы, такие как формил, ацетил и тому подобное; арилметильные группы, такие как бензил (Bn), п-метоксибензил (PMB), 9-флуоренилметил (Fm), дифенилметил (бензгидрил, DPM) и тому подобное. The term "hydroxyl protecting group" means a protecting group suitable for preventing undesired reactions on a hydroxyl group. Exemplary hydroxyl protecting groups include, but are not limited to, silyl groups, including tri(C _1-6 alkyl) silyl groups such as trimethylsilyl (TMS), triethylsilyl (TES), t-butyldimethylsilyl (TBS), and the like; esters (acyl groups) including C _1-6 alkanoyl groups such as formyl, acetyl and the like; arylmethyl groups such as benzyl (Bn), p-methoxybenzyl (PMB), 9-fluorenylmethyl (Fm), diphenylmethyl (benzhydryl, DPM) and the like.

Многочисленные защитные группы, а также их введение и удаление описаны в T. W. Greene and P.G.M. Wuts, Protecting Groups in Organic Synthesis, Third Edition, Wiley, New YorkNumerous protecting groups and their introduction and removal are described in TW Greene and PGM Wuts, Protecting Groups in Organic Synthesis , Third Edition, Wiley, New York

ПримерыExamples

Следующие примеры синтеза предоставлены для иллюстрации изобретения и не должны истолковываться никоим образом как ограничение объема изобретения. Ниже в примерах следующие аббревиатуры имеют следующие значения, если не оговорено особо. Аббревиатуры, не указанные ниже, имеют их обычно используемые значения.The following synthetic examples are provided to illustrate the invention and should not be construed in any way as limiting the scope of the invention. In the examples below, the following abbreviations have the following meanings, unless otherwise noted. Abbreviations not listed below have their commonly used meanings.

ACN=ацетонитрилACN=acetonitrile

DMF=N, N-диметилформамидDMF= N, N -dimethylformamide

EtOAc=этилацетатEtOAc=ethyl acetate

EtOH=этанолEtOH=ethanol

NaHMDS=бис(триметилсилил)амид натрия NaHMDS=sodium bis(trimethylsilyl)amide

MeTHF=2-метилтетрагидрофуранMeTHF=2-methyltetrahydrofuran

MTBE=трет-бутилметиловый эфирMTBE=tert-butyl methyl ether

фунт/кв. дюйм=фунты на квадратный дюймpsi inch=pounds per square inch

Rt=время удерживанияR t =retention time

Реагенты и растворители покупали у коммерческих поставщиков (Aldrich, Strem Chemicals, Inc., etc.) и использовали без дополнительной очистки. Наблюдение за протеканием реакции проводили с помощью аналитической высокоэффективной жидкостной хроматографии и масс-спектрометрии. Эндо/экзо отношения продуктов определяли анализом ВЭЖХ с применением описанных ниже протоколов. Реакционные смеси обрабатывали, как описано конкретно в каждой реакции; обычно их очищали экстракцией и другими способами очистки, такими как кристаллизация, в зависимости от температуры и растворителя, и осаждение. Характеризацию продуктов реакции общепринятым образом проводили с помощью масс- и ¹Н-ЯМР-спектрометрии. Для ЯМР измерения образцы растворяли в дейтерированном растворителе (DMSO-d ₆ или CDCl₃) и ¹Н-ЯМР-спектры регистрировали с помощью оборудования Varian Gemini 2000 (400 МГц) в стандартных условиях измерения. Масс-спектрометрическую идентификацию соединений проводили с использованием оборудования Agilent (Palo Alto, CA) model 1100 LC/MSD.Reagents and solvents were purchased from commercial suppliers (Aldrich, Strem Chemicals, Inc., etc.) and used without further purification. The progress of the reaction was monitored by analytical high performance liquid chromatography and mass spectrometry. Endo/exo product ratios were determined by HPLC analysis using the protocols described below. The reaction mixtures were worked up as described specifically for each reaction; usually they were purified by extraction and other purification methods such as crystallization, depending on temperature and solvent, and precipitation. Characterization of the reaction products in the conventional manner was carried out using mass and ¹ H-NMR spectrometry. For NMR measurements, samples were dissolved in a deuterated solvent (DMSO- d ₆ or CDCl ₃ ) and ¹ H-NMR spectra were recorded using Varian Gemini 2000 (400 MHz) equipment under standard measurement conditions. Mass spectrometric identification of compounds was performed using Agilent (Palo Alto, CA) model 1100 LC/MSD equipment.

Общие условия ВЭЖХGeneral HPLC conditions

Колонка: Zorbax SB-Aq, 5 мкм. 4,6×250 ммColumn: Zorbax SB-Aq, 5 µm. 4.6×250 mm

Температура колонки: 40ºCColumn temperature: 40ºC

Скорость потока: 1,0 мл/мин Flow rate: 1.0 ml/min

Подвижные фазы: A=вода/ACN (98:2) + 0,1% TFAMobile phases: A=water/ACN (98:2) + 0.1% TFA

B=вода/ACN (10:90) + 0,1% TFA, B=water/ACN (10:90) + 0.1% TFA,

Объем впрыскивания: 10 мклInjection volume: 10 µl

Длина волны детектора: 214 нмDetector wavelength: 214 nm

Способ ВЭЖХ 1HPLC Method 1

Неочищенные соединения растворяли в смеси вода/ACN (50:50) в количестве приблизительно 1 мг/мл и анализировали с использованием следующего градиента в течение 20 мин (время (мин)/% В): 0/10, 2.5/20, 9/75, 15/90, 17/90, 18/10, 20/10.The crude compounds were dissolved in a mixture of water/ACN (50:50) in an amount of approximately 1 mg/ml and analyzed using the following gradient over 20 min (time (min)/% B): 0/10, 2.5/20, 9/ 75, 15/90, 17/90, 18/10, 20/10.

Способ ВЭЖХ 2HPLC method 2

Соединения растворяли в смеси вода/ACN (90:10) в количестве приблизительно 1 мг/мл и анализировали с использованием следующего градиента в течение 30 мин (время (мин)/% B): 0/10, 13/10, 23/65, 28/90, 29/90, 30/10. Compounds were dissolved in water/ACN (90:10) at approximately 1 mg/mL and analyzed using the following gradient over 30 min (time (min)/% B): 0/10, 13/10, 23/65 , 28/90, 29/90, 30/10.

Способ ВЭЖХ 3HPLC Method 3

Соединения растворяли в смеси вода/ACN (90:10) в количестве приблизительно 1 мг/мл и анализировали с использованием следующего градиента в течение 55 мин (время (мин)/% B): 0/10, 10/20, 46/75, 47/90, 50/10, 55/10. Compounds were dissolved in water/ACN (90:10) at approximately 1 mg/mL and analyzed using the following gradient over 55 min (time (min)/% B): 0/10, 10/20, 46/75 , 47/90, 50/10, 55/10.

Получение 1: 4-(бензилокси)-2-этилфенил)трифтор-λ⁴-боран, калиевая соль I-5Receipt 1: 4-(benzyloxy)-2-ethylphenyl)trifluoro-λ⁴-borane, potassium salt I-5

(а) 1-(бензилокси)-3-этилбензол (I-2)(a) 1-(benzyloxy)-3-ethylbenzene (I-2)

К перемешиваемому раствору 3-этилфенола (I-1) (25,0 г, 204,0 ммоль) в ACN (250 мл, 10 об.) добавляли карбонат калия (42,0 г, 306 ммоль) при комнатной температуре. Полученную реакционную массу перемешивали при комнатной температуре в течение 15 минут, с последующим добавлением по каплям бензилбромида (24,0 мл, 204 ммоль). Полученную реакционную смесь перемешивали в течение 6 часов при комнатной температуре. После завершения реакции (мониторинг ТСХ), полученную реакционную массу выливали в воду (1,0 л) с последующей экстракцией соединения EtOAc (2×2 л). Объединенные органические слои промывали холодной водой, насыщенным солевым раствором и сушили над сульфатом натрия, фильтровали и выпаривали при пониженном давлении. Затем неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией на силикагеле (100-200 М) с использованием элюентов 2% EtOAc в гексане с получением желаемого продукта (I-2) в виде светло-желтого маслянистого соединения (35,0 г, 81%). ¹H ЯМР (400 МГц, хлороформ-d) δ 7,46-7,44 (м, 2H), 7,39 (т, J=7,6 Гц, 2H), 7,34-7,31 (м, 1H), 7,21 (т, J=7,6 Гц), 6,86-6,80 (м, 3H), 5,07 (с, 2H), 2,64 (кв, J=7,6 Гц, 2H), 1,24 (т, J=7,6 Гц, 3H).To a stirred solution of 3-ethylphenol (I-1) (25.0 g, 204.0 mmol) in ACN (250 ml, 10 vol) was added potassium carbonate (42.0 g, 306 mmol) at room temperature. The resulting reaction mass was stirred at room temperature for 15 minutes, followed by the dropwise addition of benzyl bromide (24.0 ml, 204 mmol). The resulting reaction mixture was stirred for 6 hours at room temperature. After completion of the reaction (TLC monitoring), the resulting reaction mass was poured into water (1.0 L) followed by extraction of the compound with EtOAc (2×2 L). The combined organic layers were washed with cold water, brine and dried over sodium sulfate, filtered and evaporated under reduced pressure. The crude product was then purified by silica gel column chromatography (100-200 M) using 2% EtOAc in hexane as eluents to give the desired product (I-2) as a light yellow oily compound (35.0 g, 81%). ¹ H NMR (400 MHz, chloroform-d) δ 7.46-7.44 (m, 2H), 7.39 (t, J=7.6 Hz, 2H), 7.34-7.31 (m , 1H), 7.21 (t, J=7.6 Hz), 6.86-6.80 (m, 3H), 5.07 (s, 2H), 2.64 (q, J=7, 6 Hz, 2H), 1.24 (t, J=7.6 Hz, 3H).

(b) 4-(бензилокси)-1-бром-2-этилбензол (I-3) (b) 4-(benzyloxy)-1-bromo-2-ethylbenzene (I-3)

К охлажденному льдом перемешиваемому раствору 1-(бензилокси)-3-этилбензола (I-2) (35,0 г, 164 ммоль) в ACN (525 мл, 15 об.) добавляли N-бромсукцинимид (32,0 г 181 ммоль) порциями в течение 15 минут. Полученную реакционную смесь перемешивали в течение 1 часа при комнатной температуре. После завершения реакции (мониторинг ТСХ), полученную реакционную массу выливали в ледяную воду (1,50 л) с последующей экстракцией соединения EtOAc (2×1 л). Объединенные органические слои промывали водой и сушили над сульфатом натрия, фильтровали и выпаривали при пониженном давлении с получением неочищенного продукта. К неочищенному веществу добавляли н-гексан (250 мл), получая суспензию, с последующей фильтрацией через фильтр Шотта. Маточный раствор выпаривали при пониженном давлении с получением желаемого продукта I-3 в виде светло-желтого маслянистого соединения (42,0 г, 87%). ¹H ЯМР (400 МГц, хлороформ-d) δ 7,52-7,29 (м, 7H), 6,88 (с, 1H), 6,68 (д, J=6,0 Гц, 1H), 5,04 (с, 2H), 2,69 (кв, J=7,6 Гц, 2H), 1,20 (т, J=7,5 Гц, 3H).To an ice-cold stirred solution of 1-(benzyloxy)-3-ethylbenzene (I-2) (35.0 g, 164 mmol) in ACN (525 ml, 15 vol) was added N-bromosuccinimide (32.0 g, 181 mmol) portions over 15 minutes. The resulting reaction mixture was stirred for 1 hour at room temperature. After completion of the reaction (TLC monitoring), the resulting reaction mass was poured into ice water (1.50 L) followed by extraction of the compound with EtOAc (2×1 L). The combined organic layers were washed with water and dried over sodium sulfate, filtered and evaporated under reduced pressure to give the crude product. n-hexane (250 ml) was added to the crude material to form a suspension, followed by filtration through a Schott filter. The mother liquor was evaporated under reduced pressure to give the desired product I-3 as a light yellow oily compound (42.0 g, 87%). ¹ H NMR (400 MHz, chloroform-d) δ 7.52-7.29 (m, 7H), 6.88 (s, 1H), 6.68 (d, J=6.0 Hz, 1H), 5.04 (s, 2H), 2.69 (kv, J=7.6 Hz, 2H), 1.20 (t, J=7.5 Hz, 3H).

(с) 2-(4-(бензилокси)-2-этилфенил)-4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан (I-4) (c) 2-(4-(benzyloxy)-2-ethylphenyl)-4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolane (I-4)

Перемешиваемый раствор 4-(бензилокси)-1-бром-2-этилбензола (I-3) (42,0 г, 144 ммоль), бис(пинаколато) диборона (44,0 г, 173 ммоль), и ацетата калия (28 г, 288 ммоль) в диоксане (440 мл) дегазировали продувкой N₂ (г) в течение 15 мин с последующим добавлением PdCl₂(dppf).DCM комплекса (11,0 г, 15 ммоль). Полученную реакционную смесь нагревали до 80°C в течение 16 ч. После завершения реакции (мониторинг ТСХ), реакционную массу фильтровали через слой целита и маточный раствор выпаривали при пониженном давлении с получением неочищенного продукта. Неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией на силикагеле (100-200M) с использованием элюентов 1% EtOAc в гексане с получением желаемого продукта (I-4) в виде светло-желтого маслянистого соединения (32,0 г, 66%). ¹H ЯМР (400 МГц, хлороформ-d) δ 7,74 (д, J=8,4 Гц, 1H), 7,45-7,36 (м, 5H), 6,84-6,78 (м, 2H), 5,08 (с, 2H), 2,91 (кв, J=7,6 Гц), 1,33 (с, 12H), 1,19 (т, J=7,6 Гц, 3H).A stirred solution of 4-(benzyloxy)-1-bromo-2-ethylbenzene (I-3) (42.0 g, 144 mmol), bis(pinacolato) diborone (44.0 g, 173 mmol), and potassium acetate (28 g, 288 mmol) in dioxane (440 ml) was degassed by purging N ₂ (g) for 15 min followed by the addition of PdCl ₂ (dppf).DCM complex (11.0 g, 15 mmol). The resulting reaction mixture was heated to 80° C. for 16 hours. After completion of the reaction (TLC monitoring), the reaction mass was filtered through a pad of celite and the mother liquor was evaporated under reduced pressure to obtain a crude product. The crude product was purified by silica gel column chromatography (100-200M) using 1% EtOAc in hexanes as eluents to give the desired product (I-4) as a light yellow oily compound (32.0 g, 66%). ¹ H NMR (400 MHz, chloroform-d) δ 7.74 (d, J=8.4 Hz, 1H), 7.45-7.36 (m, 5H), 6.84-6.78 (m , 2H), 5.08 (s, 2H), 2.91 (q, J=7.6 Hz), 1.33 (s, 12H), 1.19 (t, J=7.6 Hz, 3H ).

(d) (4-(бензилокси)-2-этилфенил)трифтор-λ⁴-боран, калиевая соль (I-5) (d) (4-(benzyloxy)-2-ethylphenyl)trifluoro-λ ⁴ -borane, potassium salt (I-5)

К перемешиваемому раствору соединения 2-(4-(бензилокси)-2-этилфенил)-4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолана (I-4) (20 г, 59,0 ммоль), в ацетоне:метаноле (200 мл, 1:1 отношение, 10 об.), добавляли 3М раствор фтороводорода калия (23,0 г, 295 ммоль, растворенный в 98,0 мл воды). Полученную реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 часов. После завершения реакции (мониторинг ТСХ), полученную реакционную массу выпаривали при пониженном давлении. Полученное таким образом твердое вещество помещали в воду (100 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. Полученную реакционную массу фильтровали через фильтр Шотта воронку, промывали н-гексаном и сушили при пониженном давлении с получением желаемого продукта (I-5) в виде белого твердого вещества (14,0 г, 74%). ¹H ЯМР (400 МГц, хлороформ-d) δ 7,43 (д, J=7,2 Гц, 2H), 7,37 (т, J=7,5 Гц, 2H), 7,30 (т, J=7,1 Гц, 1H), 7,22 (д, J=8,0 Гц), 6,58 (с, 1H), 6,53 (д, J=7,9 Гц, 1H), 5,00 (с, 2H), 2,65 (кв, J=7,5 Гц, 2H), 1,07 (т, J=7,4 Гц, 3H).To a stirred solution of 2-(4-(benzyloxy)-2-ethylphenyl)-4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolane (I-4) (20 g, 59.0 mmol), in acetone:methanol (200 ml, 1:1 ratio, 10 vol.), 3M potassium hydrogen fluoride solution (23.0 g, 295 mmol, dissolved in 98.0 ml water) was added. The resulting reaction mixture was stirred at room temperature for 16 hours. After completion of the reaction (TLC monitoring), the resulting reaction mass was evaporated under reduced pressure. The solid thus obtained was taken up in water (100 ml) and stirred at room temperature for 30 minutes. The resulting reaction mass was filtered through a Schott funnel, washed with n-hexane and dried under reduced pressure to give the desired product (I-5) as a white solid (14.0 g, 74%). ¹ H NMR (400 MHz, chloroform-d) δ 7.43 (d, J=7.2 Hz, 2H), 7.37 (t, J=7.5 Hz, 2H), 7.30 (t, J=7.1Hz, 1H), 7.22(d, J=8.0Hz), 6.58(s, 1H), 6.53(d, J=7.9Hz, 1H), 5 .00 (s, 2H), 2.65 (kv, J=7.5 Hz, 2H), 1.07 (t, J=7.4 Hz, 3H).

Получение 2: 6-бензил 5-(трет-бутил) (S)-3-бензил-3,4,6,7-тетрагидро-5H-имидазо[4,5-c]пиридин-5,6-дикарбоксилат (I-11)Receipt 2: 6-benzyl 5-(tert-butyl) (S)-3-benzyl-3,4,6,7-tetrahydro-5H-imidazo[4,5-c]pyridine-5,6-dicarboxylate (I- eleven)

(а) (S)-4,5,6,7-тетрагидро-3H-имидазо[4,5-c]пиридин-6-карбоновая кислота, хлористоводородная соль (I-7) (a) (S)-4,5,6,7-tetrahydro-3H-imidazo[4,5-c]pyridine-6-carboxylic acid, hydrochloride salt (I-7)

К охлажденной льдом перемешиваемой суспензии L-гистидина (I-6) (5,0 кг, 32,14 моль) в воде (40 л, 8 об.) добавляли концентрированную хлористоводородную кислоту (3,93 л, 33,75 моль), с последующим добавлением формальдегида (5,50 л, 67,5 моль, 37% водный раствор) по каплям. Полученный раствор перемешивали в течение 30 минут при той же температуре и затем нагревали при 80°C в течение 8 часов. За ходом реакции следили с помощью LCMS. Воду удаляли при пониженном давлении с получением неочищенного продукта, и полученный неочищенный продукт перемешивали в течение 2 часов в толуоле (20 л). Органические вещества удаляли при пониженном давлении для удаления избытка воды и соединение азеотропно сушили. Полученное вещество затем помещали в диэтиловый эфир (20 л) и перемешивали в течение 2 часов. Твердое вещество затем фильтровали и сушили воздухом с получением желаемого продукта (I-7) в виде не совсем белого твердого вещества (6,50 кг, 85%). ¹H ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,69 (с, 1H), 4,56 (д, J=15,4 Гц, 1H), 4,42 (д, J=15,5 Гц, 1H), 4,20 (дд, J=5,5, 5,2 Гц, 1H), 3,42 (дд, J=5,0, 17,0 Гц, 1H), 3,11 (дд, J=10,2, 16,8 Гц, 1H).To an ice-cold stirred suspension of L-histidine (I-6) (5.0 kg, 32.14 mol) in water (40 L, 8 vol) was added concentrated hydrochloric acid (3.93 L, 33.75 mol), followed by the addition of formaldehyde (5.50 L, 67.5 mol, 37% aqueous solution) dropwise. The resulting solution was stirred for 30 minutes at the same temperature and then heated at 80°C for 8 hours. The progress of the reaction was monitored by LCMS. Water was removed under reduced pressure to give a crude product, and the resulting crude product was stirred for 2 hours in toluene (20 L). The organics were removed under reduced pressure to remove excess water and the compound was azeotropically dried. The resulting material was then taken up in diethyl ether (20 L) and stirred for 2 hours. The solid was then filtered and air dried to give the desired product (I-7) as an off-white solid (6.50 kg, 85%). ¹ H NMR (400 MHz, D ₂ O) δ 8.69 (s, 1H), 4.56 (d, J=15.4 Hz, 1H), 4.42 (d, J=15.5 Hz, 1H), 4.20 (dd, J=5.5, 5.2 Hz, 1H), 3.42 (dd, J=5.0, 17.0 Hz, 1H), 3.11 (dd, J =10.2, 16.8 Hz, 1H).

(b) (S)-3,5-бис(трет-бутоксикарбонил)-4,5,6,7-тетрагидро-3H-имидазо[4,5-c]пиридин-6-карбоновая кислота (I-8) (b) (S)-3,5-bis(tert-butoxycarbonyl)-4,5,6,7-tetrahydro-3H-imidazo[4,5-c]pyridine-6-carboxylic acid (I-8)

К охлажденному льдом перемешиваемому раствору (S)-4,5,6,7-тетрагидро-3H-имидазо[4,5-c]пиридин-6-карбоновая кислота ди-гидрохлорида (I-7) (6,10 кг, 25,40 моль) в 1,4-диоксане (48 л, 8 об.) и воде (48 л, 8 об.) по каплям добавляли триэтиламин (12,36 л, 89 моль) с последующим добавлением ди-трет-бутилдикарбоната (18,07 л, 78,74 моль, растворенного в 1,4-диоксане) в течение 30 мин. Полученную реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 часов. После завершения реакции (мониторинг ТСХ & LCMS), желтоватую реакционную смесь разбавляли водой (10 л) и последовательно промывали диэтиловым эфиром (2×10 л) и EtOAc (2×7,50 л). Органическую фазу отбрасывали. Водный слой охлаждали и доводили до pH ~3 с помощью 6 н. Раствора HCl Водный слой охлаждали и доводили до pH ~ 3 с помощью 6 н. раствора HCl; водную фазу экстрагировали EtOAc (3×10 л). Объединенные органические слои промывали насыщенным солевым раствором, сушили над сульфатом натрия, и концентрировали при пониженном давлении. Маслянистый остаток кристаллизовали из 30% EtOAc:гексаны с получением желаемого продукта (I-8) в виде не совсем белого твердого вещества (5,1 кг, 55%). (m/z): [M+H]+ вычислено для C₁₇H₂₅N₃O₆ 368,18 найдено 368,21.To an ice-cold stirred solution of (S)-4,5,6,7-tetrahydro-3H-imidazo[4,5-c]pyridine-6-carboxylic acid di-hydrochloride (I-7) (6.10 kg, 25 .40 mol) in 1,4-dioxane (48 L, 8 vol.) and water (48 L, 8 vol.) were added dropwise triethylamine (12.36 L, 89 mol) followed by the addition of di-tert-butyl dicarbonate ( 18.07 L, 78.74 mol, dissolved in 1,4-dioxane) for 30 minutes. The resulting reaction mixture was stirred at room temperature for 16 hours. After completion of the reaction (TLC & LCMS monitoring), the yellowish reaction mixture was diluted with water (10 L) and washed successively with diethyl ether (2×10 L) and EtOAc (2×7.50 L). The organic phase was discarded. The aqueous layer was cooled and adjusted to pH ~3 with 6N HCl. HCl solution The aqueous layer was cooled and adjusted to pH ~ 3 with 6N HCl solution. HCl solution; the aqueous phase was extracted with EtOAc (3×10 L). The combined organic layers were washed with brine, dried over sodium sulfate, and concentrated under reduced pressure. The oily residue was crystallized from 30% EtOAc:hexanes to give the desired product (I-8) as an off-white solid (5.1 kg, 55%). (m/z): [M+H]+ calculated for C ₁₇ H ₂₅ N ₃ O ₆ 368.18 found 368.21.

(с) 6-бензил 3,5-ди-трет-бутил (S)-6,7-дигидро-3H-имидазо[4,5-c]пиридин-3,5,6(4H)-трикарбоксилат (I-9) (c) 6-benzyl 3,5-di-tert-butyl (S)-6,7-dihydro-3H-imidazo[4,5-c]pyridine-3,5,6(4H)-tricarboxylate (I- nine)

К ледяному раствору (S)-3,5-бис(трет-бутоксикарбонил)-4,5,6,7-тетрагидро-3H-имидазо[4,5-c]пиридин-6-карбоновой кислоты (I-8) (5,1 кг, 13,88 моль) в DCM (51 л, 10 об.) последовательно добавляли насыщенный водный бикарбонат натрия (41,0 л, 8 об.), тетрабутиламмоний йодид (5,13 кг, 13,88 моль) и бензилбромид (2,47 л, 20,82 моль). Полученную реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 часов. После завершения реакции (мониторинг ТСХ & LCMS), двухфазный раствор разделяли. Водный слой экстрагировали DCM (3×10 л). Объединенные органические слои промывали насыщенным солевым раствором, сушили над сульфатом натрия, фильтровали, и концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного продукта, который очищали колоночной хроматографией через силикагель (100-200M) с использованием элюентов 40% EtOAc в гексане с получением желаемого продукта (I-9) в виде вязкого масла (4,50 кг, 72%). (m/z): [M+H]+ вычислено для C₂₄H₃₁N₃O₆ 458,22 найдено 458,60.To an ice-cold solution of (S)-3,5-bis(tert-butoxycarbonyl)-4,5,6,7-tetrahydro-3H-imidazo[4,5-c]pyridine-6-carboxylic acid (I-8) ( 5.1 kg, 13.88 mol) in DCM (51 L, 10 vol) were added successively saturated aqueous sodium bicarbonate (41.0 L, 8 vol), tetrabutylammonium iodide (5.13 kg, 13.88 mol) and benzyl bromide (2.47 L, 20.82 mol). The resulting reaction mixture was stirred at room temperature for 16 hours. After completion of the reaction (monitoring by TLC & LCMS), the biphasic solution was separated. The aqueous layer was extracted with DCM (3×10 L). The combined organic layers were washed with brine, dried over sodium sulfate, filtered, and concentrated under reduced pressure to give the crude product, which was purified by column chromatography through silica gel (100-200M) using 40% EtOAc in hexane eluents to give the desired product (I -9) as a viscous oil (4.50 kg, 72%). (m/z): [M+H]+ calculated for C ₂₄ H ₃₁ N ₃ O ₆ 458.22 found 458.60.

(d) 6-бензил 5-(трет-бутил) (S)-3,4,6,7-тетрагидро-5H-имидазо[4,5-c]пиридин-5,6-дикарбоксилат (I-10) (d) 6-benzyl 5-(tert-butyl) (S)-3,4,6,7-tetrahydro-5H-imidazo[4,5-c]pyridine-5,6-dicarboxylate (I-10)

К ледяному раствору 6-бензил 3,5-ди-трет-бутил (S)-6,7-дигидро-3H-имидазо[4,5-c]пиридин-3,5,6(4H)-трикарбоксилата (I-9) (4,50 кг, 9,84 моль) в IPA (45 л, 10 об.) по каплям добавляли гидроксид аммония (36 л, 8 об.). Полученную реакционную смесь дополнительно перемешивали при комнатной температуре в течение следующих 16 часов. После завершения реакции (мониторинг ТСХ & LCMS), полученную смесь разбавляли водой (25 л) с последующей экстракцией EtOAc (3×20 л). Объединенные органические слои промывали насыщенным солевым раствором, сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного продукта, который очищали колоночной хроматографией через силикагель (100-200M) с использованием элюентов 2% MeOH в DCM с получением желаемого продукта (I-10) в виде густого вязкого масла (2,70 кг, 77%). (m/z): [M+H]+ вычислено для C₁₉H₂₃N₃O₄ 358,17 найдено 358,33.To an ice-cold solution of 6-benzyl 3,5-di-tert-butyl (S)-6,7-dihydro-3H-imidazo[4,5-c]pyridine-3,5,6(4H)-tricarboxylate (I- 9) (4.50 kg, 9.84 mol) in IPA (45 L, 10 vol) ammonium hydroxide (36 L, 8 vol) was added dropwise. The resulting reaction mixture was further stirred at room temperature for the next 16 hours. After completion of the reaction (TLC & LCMS monitoring), the resulting mixture was diluted with water (25 L) followed by extraction with EtOAc (3×20 L). The combined organic layers were washed with brine, dried over sodium sulfate, filtered and concentrated under reduced pressure to give the crude product, which was purified by column chromatography through silica gel (100-200M) using 2% MeOH in DCM eluents to give the desired product (I- 10) as a thick viscous oil (2.70 kg, 77%). (m/z): [M+H]+ calculated for C ₁₉ H ₂₃ N ₃ O ₄ 358.17 found 358.33.

(е) 6-бензил 5-(трет-бутил) (S)-3-бензил-3,4,6,7-тетрагидро-5H-имидазо[4,5-c]пиридин-5,6-дикарбоксилат (I-11) (f) 6-benzyl 5-(tert-butyl) (S)-3-benzyl-3,4,6,7-tetrahydro-5H-imidazo[4,5-c]pyridine-5,6-dicarboxylate (I -eleven)

К ледяному раствору 6-бензил 5-(трет-бутил) (S)-3,4,6,7-тетрагидро-5H-имидазо[4,5-c]пиридин-5,6-дикарбоксилата (I-10) (2,70 кг, 7,55 моль) в DCM (32,4 л, 12 об.) добавляли водный 1 н. гидроксид натрия (24,3 л, 9 об.) с последующим последовательным добавлением тетрабутиламмоний йодида (2,80 кг, 7,55 моль) и бензилбромида (0,99 л, 8,31 моль). Полученную реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. После завершения реакции (мониторинг ТСХ & LCMS), двухфазный раствор разделяли. Водный слой экстрагировали DCM (3×10 л). Объединенные органические слои промывали насыщенным солевым раствором, сушили над сульфатом натрия, фильтровали, и концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного продукта, который очищали колоночной хроматографией на силикагеле (100-200M) с использованием элюентов 40% EtOAc в гексане с получением желаемого продукта (I-11) в виде вязкого масла (1,70 кг, 63%). (m/z): [M+H]+ вычислено для C₂₆H₂₉N₃O₄ 448,22 найдено 448,20.To an ice-cold solution of 6-benzyl 5-(tert-butyl) (S)-3,4,6,7-tetrahydro-5H-imidazo[4,5-c]pyridine-5,6-dicarboxylate (I-10) ( 2.70 kg, 7.55 mol) in DCM (32.4 L, 12 vol.) was added aqueous 1N. sodium hydroxide (24.3 L, 9 vol.) followed by the sequential addition of tetrabutylammonium iodide (2.80 kg, 7.55 mol) and benzyl bromide (0.99 L, 8.31 mol). The resulting reaction mixture was stirred at room temperature for 2 hours. After completion of the reaction (monitoring by TLC & LCMS), the biphasic solution was separated. The aqueous layer was extracted with DCM (3×10 L). The combined organic layers were washed with brine, dried over sodium sulfate, filtered, and concentrated under reduced pressure to give the crude product, which was purified by column chromatography on silica gel (100-200M) using 40% EtOAc in hexane eluents to give the desired product (I -11) as a viscous oil (1.70 kg, 63%). (m/z): [M+H]+ calculated for C ₂₆ H ₂₉ N ₃ O ₄ 448.22 found 448.20.

Получение 3: 6-бензил 5-(трет-бутил) (S)-3-бензил-2-(6-бром-1H-индазол-3-ил)-3,4,6,7-тетрагидро-5H-имидазо[4,5-c]пиридин-5,6-дикарбоксилат (I-15) Preparation 3: 6-benzyl 5-(tert-butyl) (S)-3-benzyl-2-(6-bromo-1H-indazol-3-yl)-3,4,6,7-tetrahydro-5H-imidazo [4,5-c]pyridine-5,6-dicarboxylate (I-15)

(а) 4-бром-2-фторбензоил хлорид (I-13) (a) 4-bromo-2-fluorobenzoyl chloride (I-13)

К охлажденному льдом перемешиваемому раствору 4-бром-2-фторбензойной кислоты (I-12) (1,25 кг, 5,71 моль) в DCM (12,5 л, 15 об.), добавляли по каплям оксалилхлорид (0,98 л, 11,42 моль). Полученную реакционную смесь перемешивали в течение 10 мин при той же температуре. Затем к реакционной смеси по каплям добавляли DMF (150 мл). Полученной реакционной массе давали нагреться до комнатной температуры и перемешивали в течение 2 часов. После завершения реакции (мониторинг ТСХ), избыток оксалилхлорида удаляли при пониженном давлении в атмосфере азота с получением неочищенного продукта (I-13) (1,08 кг, 80%), который использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.To an ice-cold stirred solution of 4-bromo-2-fluorobenzoic acid (I-12) (1.25 kg, 5.71 mol) in DCM (12.5 L, 15 vol) was added dropwise oxalyl chloride (0.98 L, 11.42 mol). The resulting reaction mixture was stirred for 10 minutes at the same temperature. Then DMF (150 ml) was added dropwise to the reaction mixture. The resulting reaction mass was allowed to warm to room temperature and stirred for 2 hours. After completion of the reaction (TLC monitoring), excess oxalyl chloride was removed under reduced pressure under nitrogen to give crude product (I-13) (1.08 kg, 80%), which was used in the next step without further purification.

(b) 6-бензил 5-(трет-бутил) (S)-3-бензил-2-(4-бром-2-фторбензоил)-3,4,6,7-тетрагидро-5H-имидазо[4,5-c]пиридин-5,6-дикарбоксилат (I-14) (b) 6-benzyl 5-(tert-butyl) (S)-3-benzyl-2-(4-bromo-2-fluorobenzoyl)-3,4,6,7-tetrahydro-5H-imidazo[4,5 -c]pyridine-5,6-dicarboxylate (I-14)

К перемешиваемому раствору 6-бензил 5-(трет-бутил) (S)-3-бензил-3,4,6,7-тетрагидро-5H-имидазо[4,5-c]пиридин-5,6-дикарбоксилата (I-11) (1,70 кг, 3,80 моль) в ACN (13,6 л, 8 об.) добавляли триэтиламин (2,11 л, 15,2 моль) с последующим добавлением 4-бром-2-фторбензоил хлорида (I-13) (1,08 кг, 4,56 моль в 3,4 л ACN, 2 об.) при комнатной температуре. После завершения добавления цвет полученной реакционной смеси стал коричневым со светло-желтого. Полученную реакционную смесь перемешивали при той же температуре в течение 30 мин, и за ходом реакции следили с помощью ТСХ. Полученную реакционную смесь гасили ледяной водой (10 л), с последующей экстракцией EtOAc (3×5 л) и объединенные органические слои промывали насыщенным солевым раствором. Органические слои сушили над сульфатом натрия, фильтровали, и концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного продукта, который очищали колоночной хроматографией на силикагеле (100-200M) с использованием элюентов 20% EtOAc в гексане с получением желаемого продукта (I-14) (1,74 кг, 71%). %). (m/z): [M+H]+ вычислено для C₃₃H₃₁BrFN₃O₅ 648,14 найдено 648,20.To a stirred solution of 6-benzyl 5-(tert-butyl) (S)-3-benzyl-3,4,6,7-tetrahydro-5H-imidazo[4,5-c]pyridine-5,6-dicarboxylate (I -11) (1.70 kg, 3.80 mol) triethylamine (2.11 L, 15.2 mol) was added to ACN (13.6 L, 8 vol) followed by 4-bromo-2-fluorobenzoyl chloride (I-13) (1.08 kg, 4.56 mol in 3.4 L ACN, 2 vol) at room temperature. After completion of the addition, the color of the resulting reaction mixture turned brown from light yellow. The resulting reaction mixture was stirred at the same temperature for 30 minutes and the progress of the reaction was monitored by TLC. The resulting reaction mixture was quenched with ice water (10 L), followed by extraction with EtOAc (3×5 L) and the combined organic layers washed with brine. The organic layers were dried over sodium sulfate, filtered, and concentrated under reduced pressure to give the crude product, which was purified by column chromatography on silica gel (100-200M) using 20% EtOAc in hexane eluents to give the desired product (I-14) (1, 74 kg, 71%). %). (m/z): [M+H]+ calculated for C ₃₃ H ₃₁ BrFN ₃ O ₅ 648.14 found 648.20.

(с) 6-бензил 5-(трет-бутил) (S)-3-бензил-2-(6-бром-1H-индазол-3-ил)-3,4,6,7-тетрагидро-5H-имидазо[4,5-c]пиридин-5,6-дикарбоксилат (I-15) (c) 6-benzyl 5-(tert-butyl) (S)-3-benzyl-2-(6-bromo-1H-indazol-3-yl)-3,4,6,7-tetrahydro-5H-imidazo [4,5-c]pyridine-5,6-dicarboxylate (I-15)

К перемешиваемому раствору 6-бензил 5-(трет-бутил) (S)-3-бензил-2-(4-бром-2-фторбензоил)-3,4,6,7-тетрагидро-5H-имидазо[4,5-c]пиридин-5,6-дикарбоксилата (I-14) (1,74 кг, 2,68 моль) в THF (26,0 л, 15 об.) добавляли гидразин-гидрат (0,705 л, 13,4 моль) при комнатной температуре. Полученную реакционную смесь нагревали при 60°C в течение 3 часов. После завершения реакции (мониторинг ТСХ), полученную реакционную массу выливали в ледяную воду (10 л) с последующей экстракцией соединения EtOAc (3×10 л). Объединенные органические слои промывали насыщенным солевым раствором и сушили над сульфатом натрия, фильтровали и выпаривали при пониженном давлении, с получением неочищенного продукта, который очищали колоночной хроматографией на силикагеле (100-200M) с использованием элюентов 20% EtOAc в гексане с получением желаемого продукта (I-15) в виде не совсем белого твердого вещества (1,12 кг, 65%). (m/z): [M+H]+ вычислено для C₃₃H₃₂BrN₅O₄ 642,16 найдено 642,21.To a stirred solution of 6-benzyl 5-(tert-butyl) (S)-3-benzyl-2-(4-bromo-2-fluorobenzoyl)-3,4,6,7-tetrahydro-5H-imidazo[4,5 -c]pyridine-5,6-dicarboxylate (I-14) (1.74 kg, 2.68 mol) in THF (26.0 L, 15 vol) was added hydrazine hydrate (0.705 L, 13.4 mol ) at room temperature. The resulting reaction mixture was heated at 60°C for 3 hours. After completion of the reaction (TLC monitoring), the resulting reaction mass was poured into ice water (10 L) followed by extraction of the compound with EtOAc (3×10 L). The combined organic layers were washed with brine and dried over sodium sulfate, filtered and evaporated under reduced pressure to give the crude product, which was purified by column chromatography on silica gel (100-200M) using 20% EtOAc in hexane eluents to give the desired product (I -15) as an off-white solid (1.12 kg, 65%). (m/z): [M+H]+ calculated for C ₃₃ H ₃₂ BrN ₅ O ₄ 642.16 found 642.21.

Получение 4: 6-бензил 5-(трет-бутил) (S)-3-бензил-2-(6-(4-(бензилокси)-2-этилфенил)-1H-индазол-3-ил)-3,4,6,7-тетрагидро-5H-имидазо[4,5-c]пиридин-5,6-дикарбоксилат (I-16) Preparation 4: 6-benzyl 5-(tert-butyl) (S)-3-benzyl-2-(6-(4-(benzyloxy)-2-ethylphenyl)-1H-indazol-3-yl)-3.4 ,6,7-tetrahydro-5H-imidazo[4,5-c]pyridine-5,6-dicarboxylate (I-16)

Бис(пинаколато)диборон (250 г, 984 ммоль) загружали в трехгорлую одностенную колбу объемом 5 л, предварительно протравленную с помощью химии фторидов, вместе с пропан-2-олом (1882 мл, 2,46E+04 ммоль) и смесь перемешивали до полного растворения. Растворение было эндотермическим (-4°C). В колбе Эрленмейера объемом 4 л, предварительно протравленной с использованием химии фторидов, гидрофторид фторида калия (538 г, 6891 ммоль) растворяли в воде (2306 мл, 1,28E+05 ммоль) с образованием 3M раствора. Растворение было эндотермическим (-12°C). Затем раствор фильтровали для удаления небольшого количества нерастворимого вещества из KHF₂. После полного растворения обоих растворов содержимое колбы Эрленмейера загружали в одностенную колбу порциями в течение 15 минут. Наблюдался умеренный экзотермический эффект (+10°C). Раствор превратился в густую и светопроницаемую полупрозрачную серую суспензию во время добавления, и перемешивание увеличивали, для хорошего перемешивания содержимого. Смесь перемешивали в течение 1,5 ч, и затем фильтровали через грубую пористую стеклянную воронку (4 л, предварительно протравленная). Для завершения фильтрации требовалось 30-45 минут. Прозрачный двухфазный фильтрат отбрасывали. Белые твердые частицы сушили в течение 10 минут на фильтре (наблюдали растрескивание лепешки). Твердые частицы переносили обратно в очищенную трехгорлую одностенную колбу на 5 л и повторно суспендировали с водой (1330 мл, 7,38E+04 ммоль). Суспензию перемешивали в течение 2 ч по истечении этого времени она образовывала прозрачный гомогенный гидрогель. Раствор перемешивали в течение еще 1 ч, после чего твердые частицы/гель отфильтровывали с помощью грубой стеклянной воронки объемом 4 л (предварительно протравленная). Твердым веществам давали высохнуть на фильтре в течение 30 минут. Твердые вещества переносили обратно в очищенную трехгорлую одностенную колбу на 5 л и повторно суспендировали в ацетоне (1084 мл, 1,48E+04 ммоль). Белую/серую суспензию перемешивали в течение 1 ч и затем фильтровали через грубую стеклянную воронку 4 л (предварительно протравленная). Для завершения фильтрации требовалось 20 минут, и затем сушили на воронке в течение еще 1 ч. В течение этого времени твердые частицы время от времени перемешивали для обеспечения однородной сушки. После высыхания на фильтре остался легкий белый порошок. Твердые вещества сушили в течение 20 часов при 55°C под вакуумом с медленным выпуском азота, с получением рыхлого белого твердого вещества (собрали 200,3 г). Bis(pinacolato)diborone (250 g, 984 mmol) was charged into a 5 L three-neck single wall flask pre-etched with fluoride chemistry along with propan-2-ol (1882 mL, 2.46E+04 mmol) and the mixture was stirred until complete dissolution. Dissolution was endothermic (-4°C). In a 4 L Erlenmeyer flask pre-etched using fluoride chemistry, potassium fluoride hydrofluoride (538 g, 6891 mmol) was dissolved in water (2306 ml, 1.28E+05 mmol) to form a 3M solution. Dissolution was endothermic (-12°C). The solution was then filtered to remove a small amount of insoluble material from KHF ₂ . After complete dissolution of both solutions, the contents of the Erlenmeyer flask were loaded into a single wall flask in portions over 15 minutes. A moderate exothermic effect (+10°C) was observed. The solution turned into a thick and translucent gray slurry during the addition and the stirring was increased to mix the contents well. The mixture was stirred for 1.5 hours and then filtered through a coarse porous glass funnel (4 L, pre-etched). It took 30-45 minutes to complete the filtration. The clear biphasic filtrate was discarded. The white solids were dried for 10 minutes on the filter (cake cracking observed). The solids were transferred back to a cleaned 5 L three neck single wall flask and resuspended with water (1330 mL, 7.38E+04 mmol). The suspension was stirred for 2 h after which time it formed a transparent homogeneous hydrogel. The solution was stirred for an additional 1 hour, after which the solids/gel were filtered off with a coarse 4 L glass funnel (pre-etched). The solids were allowed to dry on the filter for 30 minutes. The solids were transferred back to a cleaned 5 L three neck single wall flask and resuspended in acetone (1084 mL, 1.48E+04 mmol). The white/grey suspension was stirred for 1 hour and then filtered through a coarse 4 L glass funnel (pre-etched). It took 20 minutes to complete the filtration, and then dried on a funnel for another 1 hour. During this time, the solid particles were stirred from time to time to ensure uniform drying. After drying, a light white powder remained on the filter. The solids were dried for 20 hours at 55° C. under vacuum with a slow release of nitrogen to give a fluffy white solid (collected 200.3 g).

К перемешиваемому раствору 6-бензил 5-(трет-бутил) (S)-3-бензил-2-(6-бром-1H-индазол-3-ил)-3,4,6,7-тетрагидро-5H-имидазо[4,5-c]пиридин-5,6-дикарбоксилата (I-15) (10,0 г, 16,0 ммоль) в 2-метилтетрагидрофуране (100 мл, 10 об.) добавляли (4-(бензилокси)-2-этилфенил)трифтор-λ⁴-боран, калиевая соль (I-5) (8,0 г, 20 ммоль) и рыхлое белое твердое вещество, полученное выше (0,20 г). Полученную реакционную смесь дегазировали азотом в течение 30 минут. К этому раствору добавляли приготовленный водный раствор карбоната цезия (20,0 г, 62,0 ммоль в 60 мл воды, 6 об.). Полученную реакционную смесь дополнительно дегазировали в течение 15 минут с последующим добавлением бис(ди-трет-бутил(4-диметиламинофенил)фосфин)дихлорпалладия(II) (0,66 г, 0,93 ммоль), и реакционную смесь откачивали под вакуумом и продували азотом. Полученную реакционную смесь нагревали при 110°C в течение 20 часов. После завершения реакции (мониторинг ТСХ & LCMS), полученную реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и фильтровали через слой целита, затем дополнительно промывали EtOAc (3×0,5 л). Объединенные органические слои промывали 1 н. раствором гидроксида натрия (3×0,5 л). Объединенные органические слои затем промывали насыщенным солевым раствором и сушили над сульфатом натрия, фильтровали, и выпаривали при пониженном давлении, с получением неочищенного продукта, который очищали колоночной хроматографией на силикагеле (100-200M) с использованием элюентов 20% EtOAc в гексане с получением желаемого продукта (I-16) (в виде смеси N-бензиловых региоизомеров) в виде светло-желтого твердого вещества (8,0 г, 66%). (m/z): [M+H]+ вычислено для C₄₈H₄₇N₅O₅ 774,36 найдено 774,59.To a stirred solution of 6-benzyl 5-(tert-butyl) (S)-3-benzyl-2-(6-bromo-1H-indazol-3-yl)-3,4,6,7-tetrahydro-5H-imidazo [4,5-c]pyridine-5,6-dicarboxylate (I-15) (10.0 g, 16.0 mmol) in 2-methyltetrahydrofuran (100 ml, 10 vol.) was added (4-(benzyloxy)- 2-ethylphenyl)trifluoro-λ ⁴ -borane, potassium salt (I-5) (8.0 g, 20 mmol) and fluffy white solid obtained above (0.20 g). The resulting reaction mixture was degassed with nitrogen for 30 minutes. To this solution was added a prepared aqueous solution of cesium carbonate (20.0 g, 62.0 mmol in 60 ml of water, 6 vol.). The resulting reaction mixture was further degassed for 15 minutes followed by the addition of bis(di-tert-butyl(4-dimethylaminophenyl)phosphine)dichloropalladium(II) (0.66 g, 0.93 mmol) and the reaction mixture was evacuated and purged nitrogen. The resulting reaction mixture was heated at 110°C for 20 hours. After completion of the reaction (TLC & LCMS monitoring), the resulting reaction mixture was cooled to room temperature and filtered through a Celite pad, then washed with EtOAc (3×0.5 L). The combined organic layers were washed with 1N. sodium hydroxide solution (3×0.5 l). The combined organic layers were then washed with brine and dried over sodium sulfate, filtered, and evaporated under reduced pressure to give the crude product, which was purified by silica gel column chromatography (100-200M) using 20% EtOAc in hexane eluents to give the desired product (I-16) (as a mixture of N-benzyl regioisomers) as a light yellow solid (8.0 g, 66%). (m/z): [M+H]+ calculated for C ₄₈ H ₄₇ N ₅ O ₅ 774.36 found 774.59.

Получение 5: (S)-2-(6-(2-этил-4-гидроксифенил)-1H-индазол-3-ил)-4,5,6,7-тетрагидро-3H-имидазо[4,5-c]пиридин-6-карбоновая кислота, гидрохлорид (I-18)Preparation 5: (S)-2-(6-(2-ethyl-4-hydroxyphenyl)-1H-indazol-3-yl)-4,5,6,7-tetrahydro-3H-imidazo[4,5-c ]pyridine-6-carboxylic acid, hydrochloride (I-18)

(а) бензил (S)-3-бензил-2-(6-(4-(бензилокси)-2-этилфенил)-1H-индазол-3-ил)-4,5,6,7-тетрагидро-3H-имидазо[4,5-c]пиридин-6-карбоксилат, гидрохлорид (I-17) (a) benzyl (S)-3-benzyl-2-(6-(4-(benzyloxy)-2-ethylphenyl)-1H-indazol-3-yl)-4,5,6,7-tetrahydro-3H- imidazo[4,5-c]pyridine-6-carboxylate, hydrochloride (I-17)

6-Бензил 5-(трет-бутил) (S)-3-бензил-2-(6-(4-(бензилокси)-2-этилфенил)-1H-индазол-3-ил)-3,4,6,7-тетрагидро-5H-имидазо[4,5-c]пиридин-5,6-дикарбоксилат (I-16) (1,0 г, 1,292 ммоль) растворяли в диоксане (8 мл) и воде (1,5 мл), затем добавляли раствор хлороводорода, 4 М в диоксане (7 мл, 28,0 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов (ход реакции контролировали с помощью LCMS). Затем реакционную смесь замораживали и лиофилизировали, и неочищенный продукт (I-17) использовали непосредственно в следующей реакции (предполагался количественный выход). (m/z): [M+H]+ вычислено для C₄₃H₃₉N₅O₃ 674,31 найдено 674,3. 6-Benzyl 5-(tert-butyl) (S)-3-benzyl-2-(6-(4-(benzyloxy)-2-ethylphenyl)-1H-indazol-3-yl)-3,4,6, 7-tetrahydro-5H-imidazo[4,5-c]pyridine-5,6-dicarboxylate (I-16) (1.0 g, 1.292 mmol) was dissolved in dioxane (8 ml) and water (1.5 ml) , then a solution of hydrogen chloride, 4 M in dioxane (7 ml, 28.0 mmol) was added and the reaction mixture was stirred at room temperature for 3 hours (reaction progress was monitored by LCMS). The reaction mixture was then frozen and lyophilized, and the crude product (I-17) was used directly in the next reaction (quantitative yield assumed). (m/z): [M+H]+ calculated for C ₄₃ H ₃₉ N ₅ O ₃ 674.31 found 674.3.

(b) (S)-2-(6-(2-этил-4-гидроксифенил)-1H-индазол-3-ил)-4,5,6,7-тетрагидро-3H-имидазо[4,5-c]пиридин-6-карбоновая кислота, гидрохлорид (I-18) (b) (S)-2-(6-(2-ethyl-4-hydroxyphenyl)-1H-indazol-3-yl)-4,5,6,7-tetrahydro-3H-imidazo[4,5-c ]pyridine-6-carboxylic acid, hydrochloride (I-18)

Бензил (S)-3-бензил-2-(6-(4-(бензилокси)-2-этилфенил)-1H-индазол-3-ил)-4,5,6,7-тетрагидро-3H-имидазо[4,5-c]пиридин-6-карбоксилат, гидрохлорид (I-17) (0,918 г, 1,292 ммоль) растворяли в 2-пропаноле (15 мл), растворе хлористого водорода, 5 M в воде (0,258 мл, 1,292 ммоль), и воде (0,25 мл) при 50°C, затем добавляли палладий, 10% мас. на угле, 50% воды (0,138 г, 0,065 ммоль). Затем реакционную колбу продували азотом, присоединяли баллон с водородом, и реакционную смесь перемешивали при 50°C в течение 4 дней, при необходимости пополняя баллон с водородом (ход реакции контролировали с помощью LCMS). Затем все твердые вещества удаляли фильтрацией и полученный раствор концентрировали. Остаток растворяли в ACN/вода 1:1, замораживали и лиофилизировали. Полученный порошок (I-18) использовали без дополнительной очистки (предполагался количественный выход). (m/z): [M+H]+ вычислено для C₂₂H₂₁N₅O₃ 404,17 найдено 404,2. Benzyl (S)-3-benzyl-2-(6-(4-(benzyloxy)-2-ethylphenyl)-1H-indazol-3-yl)-4,5,6,7-tetrahydro-3H-imidazo[4 ,5-c]pyridine-6-carboxylate, hydrochloride (I-17) (0.918 g, 1.292 mmol) was dissolved in 2-propanol (15 ml), hydrogen chloride solution, 5 M in water (0.258 ml, 1.292 mmol), and water (0.25 ml) at 50°C, then added palladium, 10% wt. on charcoal, 50% water (0.138 g, 0.065 mmol). Then the reaction flask was purged with nitrogen, a hydrogen balloon was attached, and the reaction mixture was stirred at 50°C for 4 days, replenishing the hydrogen balloon if necessary (reaction progress was monitored by LCMS). Then all solids were removed by filtration and the resulting solution was concentrated. The residue was dissolved in ACN/water 1:1, frozen and lyophilized. The resulting powder (I-18) was used without further purification (quantitative yield was assumed). (m/z): [M+H]+ calculated for C ₂₂ H ₂₁ N ₅ O ₃ 404.17 found 404.2.

Получение 6: (S)-2-(6-(2-этил-4-гидроксифенил)-1H-индазол-3-ил)-5-изопропил-4,5,6,7-тетрагидро-3H-имидазо[4,5-c]пиридин-6-карбоновой кислоты (I-19)Preparation 6: (S)-2-(6-(2-ethyl-4-hydroxyphenyl)-1H-indazol-3-yl)-5-isopropyl-4,5,6,7-tetrahydro-3H-imidazo[4 ,5-c]pyridine-6-carboxylic acid (I-19)

(S)-2-(6-(2-этил-4-гидроксифенил)-1H-индазол-3-ил)-4,5,6,7-тетрагидро-3H-имидазо[4,5-c]пиридин-6-карбоновую кислоту, HCl (I-18) (0,25 г, 0,568 ммоль) суспендировали в DMF (2,5 мл) и ацетоне (2,5 мл), затем добавляли уксусную кислоту (0,098 мл, 1,705 ммоль) и цианоборгидрид натрия (0,179 г, 2,84 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 24 часов (за ходом реакции следили с помощью LCMS). Реакционную смесь концентрировали, затем неочищенный продукт очищали хроматографией с обращенной фазой (градиент 5-70% ACN/вода, колонка 50 г C18aq) с получением соли TFA указанного в заголовке соединения (149 мг, 47% выход). (m/z): [M+H]+ вычислено для C₂₅H₂₇N₅O₃ 446,21 найдено 446,3. (S)-2-(6-(2-ethyl-4-hydroxyphenyl)-1H-indazol-3-yl)-4,5,6,7-tetrahydro-3H-imidazo[4,5-c]pyridine- 6-carboxylic acid, HCl (I-18) (0.25 g, 0.568 mmol) was suspended in DMF (2.5 ml) and acetone (2.5 ml), then acetic acid (0.098 ml, 1.705 mmol) was added and sodium cyanoborohydride (0.179 g, 2.84 mmol) and the reaction mixture was stirred at room temperature for 24 hours (reaction progress was monitored by LCMS). The reaction mixture was concentrated, then the crude product was purified by reverse phase chromatography (5-70% ACN/water gradient, 50 g C18aq column) to give the TFA salt of the title compound (149 mg, 47% yield). (m/z): [M+H]+ calculated for C ₂₅ H ₂₇ N ₅ O ₃ 446.21 found 446.3.

Получение 7: (S)-2-(6-(2-этил-4-гидроксифенил)-1H-индазол-3-ил)-5-пропил-4,5,6,7-тетрагидро-3H-имидазо[4,5-c]пиридин-6-карбоновая кислота (I-20)Receipt 7: (S)-2-(6-(2-ethyl-4-hydroxyphenyl)-1H-indazol-3-yl)-5-propyl-4,5,6,7-tetrahydro-3H-imidazo[4, 5-c]pyridine-6-carboxylic acid (I-20)

(S)-2-(6-(2-этил-4-гидроксифенил)-1H-индазол-3-ил)-4,5,6,7-тетрагидро-3H-имидазо[4,5-c]пиридин-6-карбоновую кислоту, HCl (I-18) (0,160 г, 0,364 ммоль) и пропиональдегид (0,039 мл, 0,546 ммоль) растворяли в метаноле (3,0 мл), затем добавляли цианоборгидрид натрия (0,069 г, 1,091 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 24 часов (за ходом реакции следили с помощью LCMS). Реакционную смесь концентрировали и неочищенный продукт очищали хроматографией с обращенной фазой (градиент 5-70% ACN/вода, колонка 50 г C18) с получением соли TFA указанного в заголовке соединения (78 мг, 38% выход). (m/z): [M+H]+ вычислено для C₂₅H₂₇N₅O₃ 446,21 найдено 446,3. (S)-2-(6-(2-ethyl-4-hydroxyphenyl)-1H-indazol-3-yl)-4,5,6,7-tetrahydro-3H-imidazo[4,5-c]pyridine- 6-carboxylic acid, HCl (I-18) (0.160 g, 0.364 mmol) and propionaldehyde (0.039 ml, 0.546 mmol) were dissolved in methanol (3.0 ml), then sodium cyanoborohydride (0.069 g, 1.091 mmol) was added and the reaction the mixture was stirred at room temperature for 24 hours (the progress of the reaction was followed by LCMS). The reaction mixture was concentrated and the crude product was purified by reverse phase chromatography (5-70% ACN/water gradient, 50 g C18 column) to give the TFA salt of the title compound (78 mg, 38% yield). (m/z): [M+H]+ calculated for C ₂₅ H ₂₇ N ₅ O ₃ 446.21 found 446.3.

Получение 8: (S)-2-(6-(2-этил-4-гидроксифенил)-1H-индазол-3-ил)-5-метил-4,5,6,7-тетрагидро-3H-имидазо[4,5-c]пиридин-6-карбоновая кислота (I-21)Receipt eight: (S)-2-(6-(2-ethyl-4-hydroxyphenyl)-1H-indazol-3-yl)-5-methyl-4,5,6,7-tetrahydro-3H-imidazo[4,5- c]pyridine-6-carboxylic acid (I-21)

(S)-2-(6-(2-этил-4-гидроксифенил)-1H-индазол-3-ил)-4,5,6,7-тетрагидро-3H-имидазо[4,5-c]пиридин-6-карбоновую кислоту, HCl (I-18) (0,160 г, 0,364 ммоль) и раствор формальдегида, 37 масс.% в воде (0,032 мл, 0,436 ммоль) растворяли в метаноле (3,0 мл), затем добавляли цианоборгидрид натрия (0,069 г, 1,091 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 часов (за ходом реакции следили с помощью LCMS). Боргидрид натрия (14 мг, 0,364 ммоль) добавляли для гашения избытка формальдегида, затем реакционную смесь концентрировали. Неочищенный продукт очищали хроматографией с обращенной фазой (градиент 5-70% ACN/вода, колонка 50 г C18) с получением соли TFA указанного в заголовке соединения (110 мг, 57% выход). (m/z): [M+H]+ вычислено для C₂₃H₂₃N₅O₃ 418,18 найдено 418,2. (S)-2-(6-(2-ethyl-4-hydroxyphenyl)-1H-indazol-3-yl)-4,5,6,7-tetrahydro-3H-imidazo[4,5-c]pyridine- 6-carboxylic acid, HCl (I-18) (0.160 g, 0.364 mmol) and formaldehyde solution, 37 wt% in water (0.032 ml, 0.436 mmol) were dissolved in methanol (3.0 ml), then sodium cyanoborohydride ( 0.069 g, 1.091 mmol) and the reaction mixture was stirred at room temperature for 4 hours (reaction progress was monitored by LCMS). Sodium borohydride (14 mg, 0.364 mmol) was added to quench excess formaldehyde, then the reaction mixture was concentrated. The crude product was purified by reverse phase chromatography (5-70% ACN/water gradient, 50 g C18 column) to give the TFA salt of the title compound (110 mg, 57% yield). (m/z): [M+H]+ calculated for C ₂₃ H ₂₃ N ₅ O ₃ 418.18 found 418.2.

Получение 9: (R)-2-(3-метилпиперазин-1-ил)этан-1-ол, дигидрохлорид (I-24)Receipt 9: (R)-2-(3-methylpiperazin-1-yl)ethan-1-ol, dihydrochloride (I-24)

(а) трет-бутил (R)-4-(2-гидроксиэтил)-2-метилпиперазин-1-карбоксилат (I-23) (a) tert-butyl (R)-4-(2-hydroxyethyl)-2-methylpiperazine-1-carboxylate (I-23)

(R)-1-boc-2-метил-пиперазин (0,2 г, 0,999 ммоль), DIPEA (0,698 мл, 3,99 ммоль), и 2-бромэтанол (0,085 мл, 1,198 ммоль) растворяли в DMF (5 мл) и реакционную смесь перемешивали при 60°C в течение 16 часов (за ходом реакции следили с помощью LCMS). Реакционную смесь концентрировали, затем к остатку добавляли 10 мл диэтилового эфира. Раствор обрабатывали ультразвуком до исчезновения остатка геля и образования твердого вещества. Затем раствор эфира декантировали от твердого вещества. Затем твердое вещество использовали непосредственно в следующей реакции (предполагался количественный выход). (m/z): [M+H]+ вычислено для C₁₂H₂₄N₂O₃ 245,18 найдено 245,4. (R)-1-boc-2-methyl-piperazine (0.2 g, 0.999 mmol), DIPEA (0.698 ml, 3.99 mmol), and 2-bromoethanol (0.085 ml, 1.198 mmol) were dissolved in DMF (5 ml) and the reaction mixture was stirred at 60°C for 16 hours (the progress of the reaction was followed by LCMS). The reaction mixture was concentrated, then 10 ml of diethyl ether was added to the residue. The solution was sonicated until the gel residue disappeared and a solid formed. The ether solution was then decanted from the solid. The solid was then used directly in the next reaction (quantitative yield assumed). (m/z): [M+H]+ calculated for C ₁₂ H ₂₄ N ₂ O ₃ 245.18 found 245.4.

(b) (R)-2-(3-метилпиперазин-1-ил)этан-1-ол, дигидрохлорид (I-24) (b) (R)-2-(3-methylpiperazin-1-yl)ethan-1-ol, dihydrochloride (I-24)

Трет-бутил (R)-4-(2-гидроксиэтил)-2-метилпиперазин-1-карбоксилат (0,244 г, 0,999 ммоль) растворяли в диоксане (3,0 мл) и воде (0,5 мл), затем добавляли раствор хлороводорода, 4 М в диоксане (2,0 мл, 65,8 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов (за ходом реакции следили с помощью LCMS). Реакционную смесь замораживали и лиофилизировали, и полученный продукт использовали без очистки (предполагался количественный выход). (m/z): [M+H]+ вычислено для C₇H₁₆N₂O 145,13 найдено 145,4. Tert-butyl (R)-4-(2-hydroxyethyl)-2-methylpiperazine-1-carboxylate (0.244 g, 0.999 mmol) was dissolved in dioxane (3.0 ml) and water (0.5 ml), then the solution was added hydrogen chloride, 4 M in dioxane (2.0 ml, 65.8 mmol) and the reaction mixture was stirred at room temperature for 3 hours (the progress of the reaction was followed by LCMS). The reaction mixture was frozen and lyophilized and the resulting product was used without purification (quantitative yield assumed). (m/z): [M+H]+ calculated for C ₇ H ₁₆ N ₂ O 145.13 found 145.4.

Пример 1: (S)-(2-(6-(2-этил-4-гидроксифенил)-1H-индазол-3-ил)-5-пропил-4,5,6,7-тетрагидро-3H-имидазо[4,5-c]пиридин-6-ил)(4-(2-гидроксиэтил)пиперазин-1-ил)метанон Example 1: (S)-(2-(6-(2-ethyl-4-hydroxyphenyl)-1H-indazol-3-yl)-5-propyl-4,5,6,7-tetrahydro-3H-imidazo[ 4,5-c]pyridin-6-yl)(4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl)methanone

(S)-2-(6-(2-этил-4-гидроксифенил)-1H-индазол-3-ил)-5-пропил-4,5,6,7-тетрагидро-3H-имидазо[4,5-c]пиридин-6-карбоновую кислоту, TFA (I-20) (40 мг, 0,071 ммоль), n-(2-гидроксиэтил)пиперазин (0,018 мл, 0,143 ммоль) и DIPEA (0,025 мл, 0,143 ммоль) растворяли в DMF (1,5 мл), затем добавляли HATU (40,8 мг, 0,107 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов (за ходом реакции следили с помощью LCMS). Гидразин (0,011 мл, 0,357 ммоль) добавляли для расщепления нежелательных побочных продуктов, затем раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 10 минут. Затем реакционную смесь концентрировали и неочищенный продукт очищали препаративной ВЭЖХ (градиент 5-70% ACN/вода, колонка C18) с получением соли TFA указанного в заголовке соединения (31 мг, 56% выход). (m/z): [M+H]+ вычислено для C₃₁H₃₉N₇O₃ 558,31 найдено 558,3. ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) δ 13,10 (с, 1H), 12,27 (д, J=48,92 Гц, 1H), 9,40 (с, 1H), 8,28 (т, J=8,10 Гц, 1H), 7,30 (с, 1H), 7,04 (м, 2H), 6,71 (д, J=2,46 Гц, 1H), 6,64 (дд, J=2,50, 8,23 Гц, 1H), 4,44 (т, J=5,31 Гц, 1H), 4,11 (кв, J=5,26, 2H), 3,96 (м, 1H), 3,86-3,52 (м, 6H), 3,49 (кв, J=6,01 Гц, 2H), 2,95 (м, 2H), 2,48 (кв, J=7,48 Гц, 2H), 2,42-2,21 (м, 4H), 2,37 (т, J=6,20 Гц, 2H), 1,42 (м, 2H), 1,00 (т, J=7,52 Гц, 3H), 0,81 (м, 3H). (S)-2-(6-(2-ethyl-4-hydroxyphenyl)-1H-indazol-3-yl)-5-propyl-4,5,6,7-tetrahydro-3H-imidazo[4,5- c]pyridine-6-carboxylic acid, TFA (I-20) (40 mg, 0.071 mmol), n-(2-hydroxyethyl)piperazine (0.018 ml, 0.143 mmol) and DIPEA (0.025 ml, 0.143 mmol) were dissolved in DMF (1.5 ml), then HATU (40.8 mg, 0.107 mmol) was added and the reaction mixture was stirred at room temperature for 3 hours (reaction progress was monitored by LCMS). Hydrazine (0.011 ml, 0.357 mmol) was added to cleave unwanted by-products, then the solution was stirred at room temperature for 10 minutes. The reaction mixture was then concentrated and the crude product was purified by preparative HPLC (5-70% ACN/water gradient, column C18) to give the TFA salt of the title compound (31 mg, 56% yield). (m/z): [M+H]+ calculated for C ₃₁ H ₃₉ N ₇ O ₃ 558.31 found 558.3. ¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13.10 (s, 1H), 12.27 (d, J=48.92 Hz, 1H), 9.40 (s, 1H), 8.28 ( t, J=8.10 Hz, 1H), 7.30 (s, 1H), 7.04 (m, 2H), 6.71 (d, J=2.46 Hz, 1H), 6.64 ( dd, J=2.50, 8.23Hz, 1H), 4.44(t, J=5.31Hz, 1H), 4.11(q, J=5.26, 2H), 3.96 (m, 1H), 3.86-3.52 (m, 6H), 3.49 (q, J=6.01 Hz, 2H), 2.95 (m, 2H), 2.48 (q, J=7.48Hz, 2H), 2.42-2.21(m, 4H), 2.37(t, J=6.20Hz, 2H), 1.42(m, 2H), 1, 00 (t, J=7.52 Hz, 3H), 0.81 (m, 3H).

Пример 2: ((S)-2-(6-(2-этил-4-гидроксифенил)-1H-индазол-3-ил)-5-пропил-4,5,6,7-тетрагидро-3H-имидазо[4,5-c]пиридин-6-ил)((1S,4S)-5-метил-2,5-диазабицикло[2.2.1]гептан-2-ил)метанон Example 2: ((S)-2-(6-(2-ethyl-4-hydroxyphenyl)-1H-indazol-3-yl)-5-propyl-4,5,6,7-tetrahydro-3H-imidazo[ 4,5-c]pyridin-6-yl)((1S,4S)-5-methyl-2,5-diazabicyclo[2.2.1]heptan-2-yl)methanone

(S)-2-(6-(2-этил-4-гидроксифенил)-1H-индазол-3-ил)-5-пропил-4,5,6,7-тетрагидро-3H-имидазо[4,5-c]пиридин-6-карбоновую кислоту, TFA (I-20) (40 мг, 0,071 ммоль), (1S,4S)-5-метил-2,5-диазабицикло[2.2.1]гептан дигидробромид (29,4 мг, 0,107 ммоль), и DIPEA (0,062 мл, 0,357 ммоль) растворяли в DMF (1,5 мл), затем добавляли HATU (40,8 мг, 0,107 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов (за ходом реакции следили с помощью LCMS). Гидразин (0,011 мл, 0,357 ммоль) добавляли для расщепления нежелательных побочных продуктов, затем раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 10 минут. Затем реакционную смесь концентрировали и неочищенный продукт очищали препаративной ВЭЖХ (градиент 5-70% ACN/вода, колонка C18) с получением соли TFA указанного в заголовке соединения (32 мг, 59% выход). (m/z): [M+H]+ вычислено для C₃₁H₃₇N₇O₂ 540,30 найдено 540,3. (S)-2-(6-(2-ethyl-4-hydroxyphenyl)-1H-indazol-3-yl)-5-propyl-4,5,6,7-tetrahydro-3H-imidazo[4,5- c]pyridine-6-carboxylic acid, TFA (I-20) (40 mg, 0.071 mmol), (1S,4S)-5-methyl-2,5-diazabicyclo[2.2.1]heptane dihydrobromide (29.4 mg , 0.107 mmol), and DIPEA (0.062 ml, 0.357 mmol) were dissolved in DMF (1.5 ml), then HATU (40.8 mg, 0.107 mmol) was added and the reaction mixture was stirred at room temperature for 3 hours (per stroke reactions were monitored by LCMS). Hydrazine (0.011 ml, 0.357 mmol) was added to cleave unwanted by-products, then the solution was stirred at room temperature for 10 minutes. The reaction mixture was then concentrated and the crude product was purified by preparative HPLC (5-70% ACN/water gradient, column C18) to give the TFA salt of the title compound (32 mg, 59% yield). (m/z): [M+H]+ calculated for C ₃₁ H ₃₇ N ₇ O ₂ 540.30 found 540.3.

Пример 3: ((S)-2,4-диметилпиперазин-1-ил)((S)-2-(6-(2-этил-4-гидроксифенил)-1H-индазол-3-ил)-5-метил-4,5,6,7-тетрагидро-3H-имидазо[4,5-c]пиридин-6-ил)метанон 3 Example 3: ((S)-2,4-dimethylpiperazin-1-yl)((S)-2-(6-(2-ethyl-4-hydroxyphenyl)-1H-indazol-3-yl)-5-methyl -4,5,6,7-tetrahydro-3H-imidazo[4,5-c]pyridin-6-yl)methanone 3

(а) трет-бутил (S)-4-((S)-2-(6-(2-этил-4-гидроксифенил)-1H-индазол-3-ил)-5-метил-4,5,6,7-тетрагидро-3H-имидазо[4,5-c]пиридин-6-карбонил)-3-метилпиперазин-1-карбоксилат (I-25) (a) tert-butyl (S)-4-((S)-2-(6-(2-ethyl-4-hydroxyphenyl)-1H-indazol-3-yl)-5-methyl-4,5,6 ,7-tetrahydro-3H-imidazo[4,5-c]pyridine-6-carbonyl)-3-methylpiperazine-1-carboxylate (I-25)

(S)-2-(6-(2-этил-4-гидроксифенил)-1H-индазол-3-ил)-5-метил-4,5,6,7-тетрагидро-3H-имидазо[4,5-c]пиридин-6-карбоновую кислоту, TFA (I-21) (55 мг, 0,103 ммоль), (s)-4-n-boc-2-метилпиперазин (41,5 мг, 0,207 ммоль), и DIPEA (0,036 мл, 0,207 ммоль) растворяли в DMF (1,5 мл), затем добавляли HATU (59,0 мг, 0,155 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 часов (за ходом реакции следили с помощью LCMS). Гидразин (0,016 мл, 0,517 ммоль) добавляли для расщепления нежелательных побочных продуктов, затем реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 10 минут. Затем реакционную смесь концентрировали и неочищенный продукт очищали хроматографией с обращенной фазой (градиент 5-70% ACN/вода, колонка 50 г C18) с получением соли TFA указанного в заголовке соединения (54 мг, 72% выход). (m/z): [M+H]+ вычислено для C₃₃H₄₁N₇O₄ 600,33 найдено 600,3. (S)-2-(6-(2-ethyl-4-hydroxyphenyl)-1H-indazol-3-yl)-5-methyl-4,5,6,7-tetrahydro-3H-imidazo[4,5- c]pyridine-6-carboxylic acid, TFA (I-21) (55 mg, 0.103 mmol), (s)-4-n-boc-2-methylpiperazine (41.5 mg, 0.207 mmol), and DIPEA (0.036 ml, 0.207 mmol) was dissolved in DMF (1.5 ml), then HATU (59.0 mg, 0.155 mmol) was added and the reaction mixture was stirred at room temperature for 16 hours (the reaction was followed by LCMS). Hydrazine (0.016 ml, 0.517 mmol) was added to cleave unwanted by-products, then the reaction mixture was stirred at room temperature for 10 minutes. The reaction mixture was then concentrated and the crude product was purified by reverse phase chromatography (5-70% ACN/water gradient, 50 g C18 column) to give the TFA salt of the title compound (54 mg, 72% yield). (m/z): [M+H]+ calculated for C ₃₃ H ₄₁ N ₇ O ₄ 600.33 found 600.3.

(b) ((S)-2-(6-(2-этил-4-гидроксифенил)-1H-индазол-3-ил)-5-метил-4,5,6,7-тетрагидро-3H-имидазо[4,5-c]пиридин-6-ил)((S)-2-метилпиперазин-1-ил)метанон (I-26) (b) ((S)-2-(6-(2-ethyl-4-hydroxyphenyl)-1H-indazol-3-yl)-5-methyl-4,5,6,7-tetrahydro-3H-imidazo[ 4,5-c]pyridin-6-yl)((S)-2-methylpiperazin-1-yl)methanone (I-26)

Трет-бутил (S)-4-((S)-2-(6-(2-этил-4-гидроксифенил)-1H-индазол-3-ил)-5-метил-4,5,6,7-тетрагидро-3H-имидазо[4,5-c]пиридин-6-карбонил)-3-метилпиперазин-1-карбоксилат, TFA (I-25) (0,126 г, 0,177 ммоль) растворяли в диоксане (1,5 мл) и воде (0,3 мл), затем добавляли раствор хлороводорода, 4 М в диоксане (1,5 мл, 6,00 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов (за ходом реакции следили с помощью LCMS). Реакционную смесь замораживали и лиофилизировали, и полученный порошок использовали непосредственно на следующей реакции (предполагался количественный выход). (m/z): [M+H]+ вычислено для C₂₈H₃₃N₇O₂ 500,27 найдено 500,3. Tert-butyl (S)-4-((S)-2-(6-(2-ethyl-4-hydroxyphenyl)-1H-indazol-3-yl)-5-methyl-4,5,6,7- tetrahydro-3H-imidazo[4,5-c]pyridine-6-carbonyl)-3-methylpiperazine-1-carboxylate, TFA (I-25) (0.126 g, 0.177 mmol) was dissolved in dioxane (1.5 ml) and water (0.3 ml), then a solution of hydrogen chloride, 4 M in dioxane (1.5 ml, 6.00 mmol) was added and the reaction mixture was stirred at room temperature for 2 hours (the reaction was followed by LCMS). The reaction mixture was frozen and lyophilized, and the resulting powder was used directly in the next reaction (quantitative yield was assumed). (m/z): [M+H]+ calculated for C ₂₈ H ₃₃ N ₇ O ₂ 500.27 found 500.3.

(c) ((S)-2,4-диметилпиперазин-1-ил)((S)-2-(6-(2-этил-4-гидроксифенил)-1H-индазол-3-ил)-5-метил-4,5,6,7-тетрагидро-3H-имидазо[4,5-c]пиридин-6-ил)метанон (c) ((S)-2,4-dimethylpiperazin-1-yl)((S)-2-(6-(2-ethyl-4-hydroxyphenyl)-1H-indazol-3-yl)-5-methyl -4,5,6,7-tetrahydro-3H-imidazo[4,5-c]pyridin-6-yl)methanone

((S)-2-(6-(2-этил-4-гидроксифенил)-1H-индазол-3-ил)-5-метил-4,5,6,7-тетрагидро-3H-имидазо[4,5-c]пиридин-6-ил)((S)-2-метилпиперазин-1-ил)метанон, дигидрохлорид (0,101 г, 0,176 ммоль) и раствор формальдегида, 37% масс. в воде (0,016 мл, 0,212 ммоль) растворяли в метаноле (3,0 мл), затем добавляли цианоборгидрид натрия (0,055 г, 0,882 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 часов (за ходом реакции следили с помощью LCMS). Боргидрид натрия (7 мг, 0,176 ммоль) добавляли, чтобы погасить оставшийся формальдегид. Реакционную смесь концентрировали, затем неочищенный продукт очищали препаративной ВЭЖХ (градиент 5-60% ACN/вода, колонка C18) с получением соли TFA указанного в заголовке соединения (28 мг, 21% выход). (m/z): [M+H]+ вычислено для C₂₉H₃₅N₇O₂ 514,29 найдено 514,3. ((S)-2-(6-(2-ethyl-4-hydroxyphenyl)-1H-indazol-3-yl)-5-methyl-4,5,6,7-tetrahydro-3H-imidazo[4,5 -c]pyridin-6-yl)((S)-2-methylpiperazin-1-yl)methanone, dihydrochloride (0.101 g, 0.176 mmol) and formaldehyde solution, 37% wt. in water (0.016 ml, 0.212 mmol) was dissolved in methanol (3.0 ml), then sodium cyanoborohydride (0.055 g, 0.882 mmol) was added and the reaction mixture was stirred at room temperature for 16 hours (reaction progress was monitored by LCMS) . Sodium borohydride (7 mg, 0.176 mmol) was added to quench the remaining formaldehyde. The reaction mixture was concentrated, then the crude product was purified by preparative HPLC (5-60% ACN/water gradient, column C18) to give the TFA salt of the title compound (28 mg, 21% yield). (m/z): [M+H]+ calculated for C ₂₉ H ₃₅ N ₇ O ₂ 514.29 found 514.3.

Пример 4: (S)-(2-(6-(2-этил-4-гидроксифенил)-1H-индазол-3-ил)-5-изопропил-4,5,6,7-тетрагидро-3H-имидазо[4,5-c]пиридин-6-ил)(4-метил-1,4-диазепан-1-ил)метанон Example 4: (S)-(2-(6-(2-ethyl-4-hydroxyphenyl)-1H-indazol-3-yl)-5-isopropyl-4,5,6,7-tetrahydro-3H-imidazo[ 4,5-c]pyridin-6-yl)(4-methyl-1,4-diazepan-1-yl)methanone

(S)-2-(6-(2-этил-4-гидроксифенил)-1H-индазол-3-ил)-5-изопропил-4,5,6,7-тетрагидро-3H-имидазо[4,5-c]пиридин-6-карбоновую кислоту, TFA (I-19) (50 мг, 0,089 ммоль), 1-метилгомопиперазин (0,022 мл, 0,179 ммоль), и DIPEA (0,031 мл, 0,179 ммоль) растворяли в DMF (1,5 мл), затем добавляли HATU (51,0 мг, 0,134 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов (за ходом реакции следили с помощью LCMS). Гидразин (0,014 мл, 0,447 ммоль) добавляли для расщепления нежелательных побочных продуктов, и раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 10 минут. Затем реакционную смесь концентрировали и неочищенный продукт очищали препаративной ВЭЖХ (градиент 2-70% ACN/вода, колонка C18) с получением соли TFA указанного в заголовке соединения (29 мг, 42% выход). (m/z): [M+H]+ вычислено для C₃₁H₃₉N₇O₂ 542,32 найдено 542,3. ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) δ 13,08 (с, 1H), 12,21 (д, J=29,9 Гц, 1H), 9,40 (с, 1H), 8,27 (д, J=8,33 Гц, 1H), 7,30 (с, 1H), 7,04 (т, J=8,05, 2H), 6,71 (д, J=2,53 Гц, 1H), 6,64 (дд, J=2,54, 8,23 Гц, 1H), 4,11 (м, 3H), 3,91-3,52 (м, 6H), 2,97 (м, 1H), 2,91-2,53 (м, 4H), 2,49 (кв, J=7,46, 2H), 2,23 (д, J=13,9 Гц, 3H), 1,76 (м, 2H), 1,0 (м, 9H). (S)-2-(6-(2-ethyl-4-hydroxyphenyl)-1H-indazol-3-yl)-5-isopropyl-4,5,6,7-tetrahydro-3H-imidazo[4,5- c]pyridine-6-carboxylic acid, TFA (I-19) (50 mg, 0.089 mmol), 1-methylhomopiperazine (0.022 ml, 0.179 mmol), and DIPEA (0.031 ml, 0.179 mmol) were dissolved in DMF (1.5 ml), then HATU (51.0 mg, 0.134 mmol) was added and the reaction mixture was stirred at room temperature for 3 hours (reaction progress was monitored by LCMS). Hydrazine (0.014 mL, 0.447 mmol) was added to cleave unwanted by-products and the solution was stirred at room temperature for 10 minutes. The reaction mixture was then concentrated and the crude product was purified by preparative HPLC (2-70% ACN/water gradient, column C18) to give the TFA salt of the title compound (29 mg, 42% yield). (m/z): [M+H]+ calculated for C ₃₁ H ₃₉ N ₇ O ₂ 542.32 found 542.3. ¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13.08 (s, 1H), 12.21 (d, J=29.9 Hz, 1H), 9.40 (s, 1H), 8.27 ( d, J=8.33 Hz, 1H), 7.30 (s, 1H), 7.04 (t, J=8.05, 2H), 6.71 (d, J=2.53 Hz, 1H ), 6.64 (dd, J=2.54, 8.23 Hz, 1H), 4.11 (m, 3H), 3.91-3.52 (m, 6H), 2.97 (m, 1H), 2.91-2.53 (m, 4H), 2.49 (q, J=7.46, 2H), 2.23 (d, J=13.9 Hz, 3H), 1.76 (m, 2H), 1.0 (m, 9H).

Пример 5: ((S)-2-(6-(2-этил-4-гидроксифенил)-1H-индазол-3-ил)-5-метил-4,5,6,7-тетрагидро-3H-имидазо[4,5-c]пиридин-6-ил)((R)-4-(2-гидроксиэтил)-2-метилпиперазин-1-ил)метанон Example 5: ((S)-2-(6-(2-ethyl-4-hydroxyphenyl)-1H-indazol-3-yl)-5-methyl-4,5,6,7-tetrahydro-3H-imidazo[ 4,5-c]pyridin-6-yl)((R)-4-(2-hydroxyethyl)-2-methylpiperazin-1-yl)methanone

(S)-2-(6-(2-этил-4-гидроксифенил)-1H-индазол-3-ил)-5-метил-4,5,6,7-тетрагидро-3H-имидазо[4,5-c]пиридин-6-карбоновая кислота, TFA (I-21) (55 мг, 0,103 ммоль), (R)-2-(3-метилпиперазин-1-ил)этан-1-ол, дигидрохлорид (I-24) (33,7 мг, 0,155 ммоль), и DIPEA (0,090 мл, 0,517 ммоль) растворяли в DMF (1,5 мл), затем добавляли HATU (59,0 мг, 0,155 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 часов (за ходом реакции следили с помощью LCMS). Гидразин (0,016 мл, 0,517 ммоль) добавляли для расщепления нежелательных побочных продуктов, затем реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 10 минут. Затем реакционную смесь концентрировали, и неочищенный продукт очищали препаративной ВЭЖХ (градиент 5-70% ACN/вода, колонка C18) с получением соли TFA указанного в заголовке соединения (22 мг, 28% выход). (m/z): [M+H]+ вычислено для C₃₀H₃₇N₇O₃ 544,30 найдено 544,3. (S)-2-(6-(2-ethyl-4-hydroxyphenyl)-1H-indazol-3-yl)-5-methyl-4,5,6,7-tetrahydro-3H-imidazo[4,5- c]pyridine-6-carboxylic acid, TFA (I-21) (55 mg, 0.103 mmol), (R)-2-(3-methylpiperazin-1-yl)ethan-1-ol, dihydrochloride (I-24) (33.7 mg, 0.155 mmol) and DIPEA (0.090 ml, 0.517 mmol) were dissolved in DMF (1.5 ml), then HATU (59.0 mg, 0.155 mmol) was added and the reaction mixture was stirred at room temperature for 16 hours (reaction progress was monitored by LCMS). Hydrazine (0.016 ml, 0.517 mmol) was added to cleave unwanted by-products, then the reaction mixture was stirred at room temperature for 10 minutes. The reaction mixture was then concentrated and the crude product was purified by preparative HPLC (5-70% ACN/water gradient, column C18) to give the TFA salt of the title compound (22 mg, 28% yield). (m/z): [M+H]+ calculated for C ₃₀ H ₃₇ N ₇ O ₃ 544.30 found 544.3.

Пример 6: ((S)-3-(диметиламино)пирролидин-1-ил)((S)-2-(6-(2-этил-4-гидроксифенил)-1H-индазол-3-ил)-5-изопропил-4,5,6,7-тетрагидро-3H-имидазо[4,5-c]пиридин-6-ил)метанон Example 6: ((S)-3-(dimethylamino)pyrrolidin-1-yl)((S)-2-(6-(2-ethyl-4-hydroxyphenyl)-1H-indazol-3-yl)-5- isopropyl-4,5,6,7-tetrahydro-3H-imidazo[4,5-c]pyridin-6-yl)methanone

(S)-2-(6-(2-этил-4-гидроксифенил)-1H-индазол-3-ил)-5-изопропил-4,5,6,7-тетрагидро-3H-имидазо[4,5-c]пиридин-6-карбоновую кислоту, TFA (I-19) (50 мг, 0,089 ммоль), (S)-(-)-3-(диметиламино)пирролидин (0,023 мл, 0,179 ммоль), и DIPEA (0,031 мл, 0,179 ммоль) растворяли в DMF (1,5 мл), затем добавляли HATU (51,0 мг, 0,134 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов (за ходом реакции следили с помощью LCMS). Гидразин (0,014 мл, 0,447 ммоль) добавляли для расщепления нежелательных побочных продуктов, и раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 10 минут. Затем реакционную смесь концентрировали и неочищенный продукт очищали препаративной ВЭЖХ (градиент 5-70% ACN/вода, колонка C18) с получением соли TFA указанного в заголовке соединения (37 мг, 53% выход). (m/z): [M+H]+ вычислено для C₃₁H₃₉N₇O₂ 542,32 найдено 542,3. (S)-2-(6-(2-ethyl-4-hydroxyphenyl)-1H-indazol-3-yl)-5-isopropyl-4,5,6,7-tetrahydro-3H-imidazo[4,5- c]pyridine-6-carboxylic acid, TFA (I-19) (50 mg, 0.089 mmol), (S)-(-)-3-(dimethylamino)pyrrolidine (0.023 ml, 0.179 mmol), and DIPEA (0.031 ml , 0.179 mmol) was dissolved in DMF (1.5 ml), then HATU (51.0 mg, 0.134 mmol) was added and the reaction mixture was stirred at room temperature for 3 hours (the reaction was followed by LCMS). Hydrazine (0.014 mL, 0.447 mmol) was added to cleave unwanted by-products and the solution was stirred at room temperature for 10 minutes. The reaction mixture was then concentrated and the crude product was purified by preparative HPLC (5-70% ACN/water gradient, column C18) to give the TFA salt of the title compound (37 mg, 53% yield). (m/z): [M+H]+ calculated for C ₃₁ H ₃₉ N ₇ O ₂ 542.32 found 542.3.

Пример 7: (S)-(3-(диметиламино)азетидин-1-ил)(2-(6-(2-этил-4-гидроксифенил)-1H-индазол-3-ил)-5-изопропил-4,5,6,7-тетрагидро-3H-имидазо[4,5-c]пиридин-6-ил)метанон Example 7: (S)-(3-(dimethylamino)azetidin-1-yl)(2-(6-(2-ethyl-4-hydroxyphenyl)-1H-indazol-3-yl)-5-isopropyl-4, 5,6,7-tetrahydro-3H-imidazo[4,5-c]pyridin-6-yl)methanone

(S)-2-(6-(2-этил-4-гидроксифенил)-1H-индазол-3-ил)-5-изопропил-4,5,6,7-тетрагидро-3H-имидазо[4,5-c]пиридин-6-карбоновую кислоту, TFA (I-19) (50 мг, 0,089 ммоль), 3-(диметиламино)азетидин дигидрохлорид (23,20 мг, 0,134 ммоль), и DIPEA (0,078 мл, 0,447 ммоль) растворяли в DMF (1,5 мл), затем добавляли HATU (51,0 мг, 0,134 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов (за ходом реакции следили с помощью LCMS). Гидразин (0,014 мл, 0,447 ммоль) добавляли для расщепления нежелательных побочных продуктов, и раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 10 минут. Затем реакционную смесь концентрировали и неочищенный продукт очищали препаративной ВЭЖХ (градиент 5-70% ACN/вода, колонка C18) с получением соли TFA указанного в заголовке соединения (25 мг, 37% выход). (m/z): [M+H]+ вычислено для C₃₀H₃₇N₇O₂ 528,30 найдено 528,3. ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) δ 13,09 (с, 1H), 9,40 (с, 1H), 8,27 (д, J=8,31, 1H), 7,30 (с, 1H), 7,04 (м, 2H), 6,71 (д, J=2,54, 1H), 6,64 (дд, J=2,53, 8,26, 1H), 4,26 (м, 1H), 4,06 (м, 2H), 3,82 (м, 2H), 3,64 (м, 2H), 3,03 (м, 2H), 2,74 (м, 2H), 2,47 (кв, J=7,56, 2H), 2,07 (д, J=3,69, 6H), 1,07 (м, 6H), 1,00 (т, J=7,50, 3H). (S)-2-(6-(2-ethyl-4-hydroxyphenyl)-1H-indazol-3-yl)-5-isopropyl-4,5,6,7-tetrahydro-3H-imidazo[4,5- c]pyridine-6-carboxylic acid, TFA (I-19) (50 mg, 0.089 mmol), 3-(dimethylamino)azetidine dihydrochloride (23.20 mg, 0.134 mmol), and DIPEA (0.078 ml, 0.447 mmol) were dissolved in DMF (1.5 ml), then HATU (51.0 mg, 0.134 mmol) was added and the reaction mixture was stirred at room temperature for 3 hours (reaction progress was monitored by LCMS). Hydrazine (0.014 mL, 0.447 mmol) was added to cleave unwanted by-products and the solution was stirred at room temperature for 10 minutes. The reaction mixture was then concentrated and the crude product was purified by preparative HPLC (5-70% ACN/water gradient, column C18) to give the TFA salt of the title compound (25 mg, 37% yield). (m/z): [M+H]+ calculated for C ₃₀ H ₃₇ N ₇ O ₂ 528.30 found 528.3. ¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13.09 (s, 1H), 9.40 (s, 1H), 8.27 (d, J=8.31, 1H), 7.30 (s , 1H), 7.04 (m, 2H), 6.71 (d, J=2.54, 1H), 6.64 (dd, J=2.53, 8.26, 1H), 4.26 (m, 1H), 4.06 (m, 2H), 3.82 (m, 2H), 3.64 (m, 2H), 3.03 (m, 2H), 2.74 (m, 2H) , 2.47 (q, J=7.56, 2H), 2.07 (d, J=3.69, 6H), 1.07 (m, 6H), 1.00 (t, J=7, 50, 3H).

Получение 10: 6-бензил 5-(трет-бутил) (S)-1-бензил-2-(6-(4-(бензилокси)-2-этил-5-фторфенил)-1H-индазол-3-ил)-1,4,6,7-тетрагидро-5H-имидазо[4,5-c]пиридин-5,6-дикарбоксилат Receipt 10: 6-benzyl 5-(tert-butyl) (S)-1-benzyl-2-(6-(4-(benzyloxy)-2-ethyl-5-fluorophenyl)-1H-indazol-3-yl)- 1,4,6,7-tetrahydro-5H-imidazo[4,5-c]pyridine-5,6-dicarboxylate

К перемешиваемому раствору 6-бензил 5-(трет-бутил) (S)-1-бензил-2-(6-бром-1H-индазол-3-ил)-1,4,6,7-тетрагидро-5H-имидазо[4,5-c]пиридин-5,6-дикарбоксилата (1,12 кг, 1,74 моль) в 2-метилтетрагидрофуране (11,2 л, 10 об.) добавляли ((4-(бензилокси)-2-этил-5-фторфенил)трифторборан, калиевую соль) (0,702 кг, 2,1 моль) и рыхлое белое твердое вещество, выделенное в получении 4 (0,223 кг, 1,04 моль). Полученную реакционную смесь дегазировали азотом в течение следующих 30 мин через впускное отверстие капельницы. К этому раствору добавляли полученный водный раствор Cs₂CO₃ (2,27 кг, 6,96 моль в 7,30 л H₂O, 6 об.). Полученную реакционную смесь дополнительно дегазировали в течение следующих 15 мин. В полученную реакционную смесь добавляли Pd(amphos) (0,74 кг, 1,04 моль) и реакционную смесь откачивали под вакуумом и продували азотом. Полученную реакционную смесь нагревали до 90°C в течение 20 часов. После завершения реакции, полученную реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и фильтровали через слой целита, и промывали этилацетатом (3×7,5 л). Объединенные органические слои промывали 1н раствором NaOH (3×3 л). Объединенные органические слои промывали насыщенным солевым раствором и сушили над Na₂SO₄, фильтровали и выпаривали при пониженном давлении с получением неочищенного продукта, который очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (100-200 М) с использованием элюентов 20% этилацетат в гексане с получением указанного в заголовке продукта в виде смеси регион-изомеров в виде не совсем белого твердого вещества (1,10 кг, 80%). (m/z): [M+H]⁺ вычислено для C₄₈H₄₆FN₅O₅ 792,92 найдено 792,34.To a stirred solution of 6-benzyl 5-(tert-butyl) (S)-1-benzyl-2-(6-bromo-1H-indazol-3-yl)-1,4,6,7-tetrahydro-5H-imidazo [4,5-c]pyridine-5,6-dicarboxylate (1.12 kg, 1.74 mol) in 2-methyltetrahydrofuran (11.2 L, 10 vol) was added ((4-(benzyloxy)-2-ethyl-5-fluorophenyl)trifluoroborane, potassium salt) (0.702 kg, 2.1 mol) and the fluffy white solid isolated in preparation 4 (0.223 kg, 1.04 mol). The resulting reaction mixture was degassed with nitrogen for the next 30 minutes through the dropper inlet. To this solution was added the resulting aqueous solution of Cs₂CO₃ (2.27 kg, 6.96 mol in 7.30 L H₂O, 6 vol.). The resulting reaction mixture was further degassed for a further 15 minutes. Pd(amphos) (0.74 kg, 1.04 mol) was added to the resulting reaction mixture and the reaction mixture was evacuated and purged with nitrogen. The resulting reaction mixture was heated to 90°C for 20 hours. After completion of the reaction, the resulting reaction mixture was cooled to room temperature and filtered through a pad of celite, and washed with ethyl acetate (3×7.5 l). The combined organic layers were washed with 1N NaOH solution (3×3 L). The combined organic layers were washed with brine and dried over Na₂SO₄, filtered and evaporated under reduced pressure to give the crude product, which was purified by silica gel column chromatography (100-200 M) using 20% ethyl acetate in hexane as eluents to give the title product as a mixture of region isomers as not quite white solid (1.10 kg, 80%). (m/z): [M+H]⁺ calculated for C₄₈H₄₆FN_fiveO_five792.92 found 792.34.

Получение 11: Бензил (S)-1-бензил-2-(6-(4-(бензилокси)-2-этил-5-фторфенил)-1H-индазол-3-ил)-4,5,6,7-тетрагидро-1H-имидазо[4,5-c]пиридин-6-карбоксилат, 2Бензолсульфоновая кислота Preparation 11: Benzyl (S)-1-benzyl-2-(6-(4-(benzyloxy)-2-ethyl-5-fluorophenyl)-1H-indazol-3-yl)-4,5,6,7- tetrahydro-1H-imidazo[4,5-c]pyridine-6-carboxylate, 2Benzenesulfonic acid

К раствору 6-бензил 5-(трет-бутил) (S)-1-бензил-2-(6-(4-(бензилокси)-2-этил-5-фторфенил)-1H-индазол-3-ил)-1,4,6,7-тетрагидро-5H-имидазо[4,5-c]пиридин-5,6-дикарбоксилата (1,005 г, 1269 ммоль) в 2-метилтетрагидрофуране (10,050 мл) и изопропилацетате (4321,5 мл) в атмосфере азота добавляли бензолсульфоновую кислоту (703 г, 4,442 ммоль). Полученную реакционную смесь перемешивали при 50ºC в течение 15 часов. После завершения реакции добавляли изопропилацетат (5728,5 мл). Суспензию охлаждали до 20ºC и выдерживали в течение 1 часа. Затем загустевшую суспензию фильтровали под давлением азота. Затем осадок промывали изопропилацетатом (5000 мл) и сушили под давлением азота при 25ºC в течение 2 часов с последующей сушкой при 60ºC в течение 16 часов в высоком вакууме с продувкой азота с получением указанного в заголовке соединения в виде не совсем белого свободно текучего твердого вещества (1210 г, 95% выход). (m/z): [M+H]⁺ вычислено для C₄₃H₃₈FN₅O₃ 692,81 найдено 692,88.To a solution of 6-benzyl 5-(tert-butyl) (S)-1-benzyl-2-(6-(4-(benzyloxy)-2-ethyl-5-fluorophenyl)-1H-indazol-3-yl)- 1,4,6,7-tetrahydro-5H-imidazo[4,5-c]pyridine-5,6-dicarboxylate (1.005 g, 1269 mmol) in 2-methyltetrahydrofuran (10.050 ml) and isopropyl acetate (4321.5 ml) benzenesulfonic acid (703 g, 4.442 mmol) was added under nitrogen atmosphere. The resulting reaction mixture was stirred at 50°C for 15 hours. After completion of the reaction, isopropyl acetate (5728.5 ml) was added. The suspension was cooled to 20ºC and kept for 1 hour. The thickened suspension was then filtered under nitrogen pressure. The precipitate was then washed with isopropyl acetate (5000 ml) and dried under nitrogen pressure at 25ºC for 2 hours, followed by drying at 60ºC for 16 hours under high vacuum with a nitrogen purge to give the title compound as an off-white free-flowing solid ( 1210 g, 95% yield). ( m/z ): [M+H] ⁺ calculated for C ₄₃ H ₃₈ FN ₅ O ₃ 692.81 found 692.88.

Получение 12: Бензил (S)-1-бензил-2-(6-(4-(бензилокси)-2-этил-5-фторфенил)-1H-индазол-3-ил)-5-изопропил-4,5,6,7-тетрагидро-1H-имидазо[4,5-c]пиридин-6-карбоксилат Preparation 12: Benzyl (S)-1-benzyl-2-(6-(4-(benzyloxy)-2-ethyl-5-fluorophenyl)-1H-indazol-3-yl)-5-isopropyl-4.5, 6,7-tetrahydro-1H-imidazo[4,5-c]pyridine-6-carboxylate

К суспензии молекулярных сит (1,21 кг) в ацетоне (12,0 л) добавляли бензил (S)-1-бензил-2-(6-(4-(бензилокси)-2-этил-5-фторфенил)-1H-индазол-3-ил)-4,5,6,7-тетрагидро-1H-имидазо[4,5-c]пиридин-6-карбоксилат, 2Бензолсульфоновую кислоту (1,20 кг, 1,190 ммоль) и уксусную кислоту (26 мл, 446 ммоль). Суспензии давали перемешиваться при 25ºC в течение 30 минут с получением гетерогенной не совсем бело-желтой гетерогенной смеси. К реакционной смеси добавляли триацетоксиборгидрид натрия (492 г, 2,321 ммоль) и перемешивали при 25ºC в течение 1 часа. Реакционную смесь фильтровали через целит и осадок промывали 2-метилтетрагидрофураном (500 мл). Фильтрат разбавляли 2-метилтетрагидрофураном (8,0 л) и растворитель заменяли отгонкой ацетона. Для промывки раствора добавляли насыщенный бикарбонат натрия (3025 мл), и смесь перемешивали в течение 1 часа, перемешивание прекращали, слои разделяли в течение 15 минут, водный слой (pH=7,5) удаляли и на этот раз повторяли промывку, оставляя 2 часа перемешивания перед разделением слоев. Органический слой перегоняли до 2,0 л, добавляли изопропилацетат (8,0 л) и заменяли растворитель путем отгонки 2-метилтетрагидрофурана с получением суспензии. Суспензию перемешивали при 20ºC в течение 1 часа, затем фильтровали под давлением азота, с получением указанного в заголовке соединения в виде не совсем белого твердого вещества (795 г, 91% выход). (m/z): [M+H]⁺ вычислено для C₄₆H₄₄FN₅O₃ 734,89 найдено 734,96.To a suspension of molecular sieves (1.21 kg) in acetone (12.0 L) was added benzyl (S)-1-benzyl-2-(6-(4-(benzyloxy)-2-ethyl-5-fluorophenyl)-1H -indazol-3-yl)-4,5,6,7-tetrahydro-1H-imidazo[4,5-c]pyridine-6-carboxylate, 2Benzenesulfonic acid (1.20 kg, 1.190 mmol) and acetic acid (26 ml, 446 mmol). The suspension was allowed to mix at 25°C for 30 minutes to obtain a heterogeneous off-white-yellow heterogeneous mixture. Sodium triacetoxyborohydride (492 g, 2.321 mmol) was added to the reaction mixture and stirred at 25° C. for 1 hour. The reaction mixture was filtered through celite and the precipitate was washed with 2-methyltetrahydrofuran (500 ml). The filtrate was diluted with 2-methyltetrahydrofuran (8.0 L) and the solvent was replaced by distillation of acetone. Saturated sodium bicarbonate (3025 ml) was added to wash the solution and the mixture was stirred for 1 hour, stirring was stopped, the layers were separated for 15 minutes, the aqueous layer (pH=7.5) was removed and this time the washing was repeated, leaving 2 hours mixing before separating layers. The organic layer was distilled to 2.0 L, isopropyl acetate (8.0 L) was added and the solvent was replaced by distilling off 2-methyltetrahydrofuran to obtain a suspension. The suspension was stirred at 20° C. for 1 hour, then filtered under nitrogen pressure to give the title compound as an off-white solid (795 g, 91% yield). ( m/z ): [M+H] ⁺ calculated for C ₄₆ H ₄₄ FN ₅ O ₃ 734.89 found 734.96.

Получение 13: (S)-2-(6-(2-этил-5-фтор-4-гидроксифенил)-1H-индазол-3-ил)-5-изопропил-4,5,6,7-тетрагидро-3H-имидазо[4,5-c]пиридин-6-карбоновая кислота, 2HClReceipt 13: (S)-2-(6-(2-ethyl-5-fluoro-4-hydroxyphenyl)-1H-indazol-3-yl)-5-isopropyl-4,5,6,7-tetrahydro-3H- imidazo[4,5-c]pyridine-6-carboxylic acid, 2HCl

К дегазированному перемешиваемому гомогенному раствору бензил (S)-1-бензил-2-(6-(4-(бензилокси)-2-этил-5-фторфенил)-1H-индазол-3-ил)-5-изопропил-4,5,6,7-тетрагидро-1H-имидазо[4,5-c]пиридин-6-карбоксилата (760 г, 1,036 ммоль), пропан-2-ола (3800 мл) и 1M хлороводорода(вод.) (2589 мл, 2,589 ммоль) при 50^oC добавляли 10% масс.Pd/C, 50% масс. H₂O (76 г, 35,7 ммоль) сразу с последующим барботированием газообразного водорода через реакционную смесь в течение 4 часов. Реакционную смесь фильтровали через подушку из целита (200 грамм). К прозрачному темно-желтому фильтрату добавляли SiliaMetS Thiol (76 г, в виде белого твердого вещества) и перемешивали при 50^oC в течение 1 часа для удаления остатка палладия. SiliaMetS Thiol отфильтровывали через фильтр 0,2 мкм, получая однородный фильтрат светло-желтого цвета, затем SiliaMetS Thiol стал ярко-оранжевым. К фильтрату добавляли изопропилацетат (7600 мл) и его концентрировали на роторном испарителе до приблизительно 3,0 литров. К концентрату, затем в виде густой суспензии, добавляли изопропилацетат (7600 мл), после чего суспензия становилась свободно текучей и фильтруемой. Суспензию фильтровали, и лепешку промывали изопропилацетатом (3000 мл), сушили в высоком вакууме в течение 1 часа, затем дополнительно сушили в высоком вакууме с продувкой азота при 50°C в течение 18 часов с получением указанного в заголовке соединения (472 г, 81% выход). (m/z): [M+H]⁺ вычислено для C₂₅H₂₆FN₅O₃ 464,51 найдено 464,58.To a degassed stirred homogeneous solution of benzyl (S)-1-benzyl-2-(6-(4-(benzyloxy)-2-ethyl-5-fluorophenyl)-1H-indazol-3-yl)-5-isopropyl-4, 5,6,7-tetrahydro-1H-imidazo[4,5-c]pyridine-6-carboxylate (760 g, 1.036 mmol), propan-2-ol (3800 ml) and 1M hydrogen chloride (aq.) (2589 ml , 2,589 mmol) at 50 ^o C was added 10 wt.% Pd/C, 50 wt.%. H ₂ O (76 g, 35.7 mmol) immediately followed by bubbling hydrogen gas through the reaction mixture for 4 hours. The reaction mixture was filtered through a pad of celite (200 grams). SiliaMetS Thiol (76 g, as a white solid) was added to the clear dark yellow filtrate and stirred at 50 ^° C. for 1 hour to remove residual palladium. SiliaMetS Thiol was filtered through a 0.2 µm filter, obtaining a uniform light yellow filtrate, then SiliaMetS Thiol turned bright orange. Isopropyl acetate (7600 ml) was added to the filtrate and concentrated on a rotary evaporator to approximately 3.0 liters. To the concentrate, then in the form of a thick suspension, was added isopropyl acetate (7600 ml), after which the suspension became free-flowing and filterable. The suspension was filtered and the cake was washed with isopropyl acetate (3000 ml), dried under high vacuum for 1 hour, then further dried under high vacuum with nitrogen purge at 50° C. for 18 hours to give the title compound (472 g, 81% exit). ( m/z ): [M+H] ⁺ calculated for C ₂₅ H ₂₆ FN ₅ O ₃ 464.51 found 464.58.

Пример 8: (S)-(3-(диметиламино)азетидин-1-ил)(2-(6-(2-этил-5-фтор-4-гидроксифенил)-1H-индазол-3-ил)-5-изопропил-4,5,6,7-тетрагидро-3H-имидазо[4,5-c]пиридин-6-ил)метанон Example 8: (S)-(3-(dimethylamino)azetidin-1-yl)(2-(6-(2-ethyl-5-fluoro-4-hydroxyphenyl)-1H-indazol-3-yl)-5- isopropyl-4,5,6,7-tetrahydro-3H-imidazo[4,5-c]pyridin-6-yl)methanone

К перемешиваемому раствору (S)-2-(6-(2-этил-5-фтор-4-гидроксифенил)-1H-индазол-3-ил)-5-изопропил-4,5,6,7-тетрагидро-3H-имидазо[4,5-c]пиридин-6-карбоновой кислоты, 2HCl (470 г, 876 ммоль) и N, N-диметилазетидин-3-амина, 2HCl (197 г, 1139 ммоль) в N, N-диметилацетамиде (2436 мл), охлажденному до -20ºC, добавляли DIPEA (413 мл, 2366 ммоль) в течение не менее 15 минут (экзотермическое добавление вызывало повышение температуры партии до -9,1°C). Партию снова охлаждали до -15ºC и добавляли HCTU (453 г, 1095 ммоль). Смесь нагревали до 20°C в течение 1 часа и выдерживали еще час. К полученной реакционной смеси добавляли изопропилацетат (5,0 л) и 1M HCl (2,0 л) и смесь перемешивали в течение 15 минут, слои разделяли для извлечения примесей в слой изопропилацетата. Водный слой, содержащий продукт, трижды экстрагировали изопропилацетатом (5,0 л каждый). После 4-й экстракции водный слой добавляли к 2-метилтетрагидрофурану, затем насыщенный раствор бикарбоната натрия (~2,2 л, для доведения значения pH=8) перемешивали 15 минут, слои разделяли, а водный слой отбрасывали. Органический слой заменяли растворителем на ацетонитрил и перемешивали до конечного объема 2,35 л, при этом продукт выпадал в осадок из раствора в виде аморфных фильтруемых твердых веществ. Затем суспензию фильтровали под давлением азота с получением 345 граммов неочищенного продукта. Неочищенный продукт (345 г) растворяли в метаноле (1035 л) при перемешивании при 55ºC и выдерживали в течение 15 часов для кристаллизации продукта из раствора. Суспензию охлаждали до 10ºC и выдерживали при этой температуре при перемешивании в течение 2 часов. Загустевшую суспензию фильтровали под давлением азота в течение 2 часов при 20°C с последующей сушкой в высоком вакууме с продувкой азота при 65°C в течение 18 часов с получением указанного в заголовке соединения в виде свободно текучего твердого вещества от не совсем белого до белого цвета (253 г, 53% выход). (m/z): [M+H]⁺ вычислено для C₃₀H₃₆FN₇O₂ 546,66 найдено 546,73.To a stirred solution of (S)-2-(6-(2-ethyl-5-fluoro-4-hydroxyphenyl)-1H-indazol-3-yl)-5-isopropyl-4,5,6,7-tetrahydro-3H -imidazo[4,5-c]pyridine-6-carboxylic acid, 2HCl (470 g, 876 mmol) and N,N-dimethylazetidine-3-amine, 2HCl (197 g, 1139 mmol) in N,N-dimethylacetamide ( 2436 ml) cooled to -20°C, DIPEA (413 ml, 2366 mmol) was added over at least 15 minutes (exothermic addition caused the batch temperature to rise to -9.1°C). The batch was again cooled to -15ºC and HCTU (453 g, 1095 mmol) was added. The mixture was heated to 20°C for 1 hour and kept for another hour. To the resulting reaction mixture was added isopropyl acetate (5.0 L) and 1M HCl (2.0 L) and the mixture was stirred for 15 minutes, the layers were separated to extract impurities in the layer of isopropyl acetate. The aqueous layer containing the product was extracted three times with isopropyl acetate (5.0 L each). After the 4th extraction, the aqueous layer was added to 2-methyltetrahydrofuran, then saturated sodium bicarbonate solution (~2.2 L, to adjust the pH=8) was stirred for 15 minutes, the layers were separated, and the aqueous layer was discarded. The organic layer was solvent exchanged with acetonitrile and stirred to a final volume of 2.35 L, whereupon the product precipitated out of solution as amorphous filterable solids. The slurry was then filtered under nitrogen pressure to give 345 grams of crude product. The crude product (345 g) was dissolved in methanol (1035 L) with stirring at 55° C. and held for 15 hours to crystallize the product from solution. The suspension was cooled to 10ºC and kept at this temperature with stirring for 2 hours. The thickened slurry was filtered under nitrogen pressure for 2 hours at 20°C followed by drying under high vacuum with a nitrogen purge at 65°C for 18 hours to give the title compound as a free-flowing off-white to white solid (253 g, 53% yield). ( m/z ): [M+H] ⁺ calculated for C ₃₀ H ₃₆ FN ₇ O ₂ 546.66 found 546.73.

Получение 14: (S)-5-этил-2-(6-(2-этил-4-гидроксифенил)-1H-индазол-3-ил)-4,5,6,7-тетрагидро-3H-имидазо[4,5-c]пиридин-6-карбоновая кислотаReceipt 14: (S)-5-ethyl-2-(6-(2-ethyl-4-hydroxyphenyl)-1H-indazol-3-yl)-4,5,6,7-tetrahydro-3H-imidazo[4, 5-c]pyridine-6-carboxylic acid

(S)-2-(6-(2-этил-4-гидроксифенил)-1H-индазол-3-ил)-4,5,6,7-тетрагидро-3H-имидазо[4,5-c]пиридин-6-карбоновую кислоту, HCl (0,100 г, 0,227 ммоль) (I-18) и ацетальдегид (0,019 мл, 0,341 ммоль) растворяли в метаноле (3,0 мл), затем добавляли цианоборгидрид натрия (0,057 г, 0,909 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 часов (за ходом реакции следили с помощью LCMS). Боргидрид натрия (9 мг, 0,227 ммоль) добавляли для гашения любого оставшегося ацетальдегида, затем реакционную смесь концентрировали. Затем неочищенный продукт очищали хроматографией с обращенной фазой (градиент 5-70% ACN/вода, колонка 40 г C18) с получением соли TFA указанного в заголовке соединения (62 мг, 50% выход). (m/z): [M+H]+ вычислено для C₂₄H₂₅N₅O₃ 432,20 найдено 432,1. (S)-2-(6-(2-ethyl-4-hydroxyphenyl)-1H-indazol-3-yl)-4,5,6,7-tetrahydro-3H-imidazo[4,5-c]pyridine- 6-carboxylic acid, HCl (0.100 g, 0.227 mmol) ( I-18 ) and acetaldehyde (0.019 ml, 0.341 mmol) were dissolved in methanol (3.0 ml), then sodium cyanoborohydride (0.057 g, 0.909 mmol) was added and the reaction the mixture was stirred at room temperature for 16 hours (the progress of the reaction was followed by LCMS). Sodium borohydride (9 mg, 0.227 mmol) was added to quench any remaining acetaldehyde, then the reaction mixture was concentrated. The crude product was then purified by reverse phase chromatography (5-70% ACN/water gradient, 40 g C18 column) to give the TFA salt of the title compound (62 mg, 50% yield). (m/z): [M+H]+ calculated for C ₂₄ H ₂₅ N ₅ O ₃ 432.20 found 432.1.

Пример 9: (S)-(3-(диметиламино)азетидин-1-ил)(5-этил-2-(6-(2-этил-4-гидроксифенил)-1H-индазол-3-ил)-4,5,6,7-тетрагидро-3H-имидазо[4,5-c]пиридин-6-ил)метанон Example 9: (S)-(3-(dimethylamino)azetidin-1-yl)(5-ethyl-2-(6-(2-ethyl-4-hydroxyphenyl)-1H-indazol-3-yl)-4, 5,6,7-tetrahydro-3H-imidazo[4,5-c]pyridin-6-yl)methanone

(S)-5-этил-2-(6-(2-этил-4-гидроксифенил)-1H-индазол-3-ил)-4,5,6,7-тетрагидро-3H-имидазо[4,5-c]пиридин-6-карбоновую кислоту, TFA (30 мг, 0,055 ммоль), 3-(диметиламино)азетидин дигидрохлорид (14,28 мг, 0,082 ммоль), и DIPEA (0,048 мл, 0,275 ммоль) растворяли в DMF (1,50 мл), затем добавляли HATU (31,4 мг, 0,082 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа (за ходом реакции следили с помощью LCMS). Гидразин (5,18 мкл, 0,165 ммоль) добавляли для расщепления нежелательных побочных продуктов, затем раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 10 минут. Затем реакционную смесь концентрировали и неочищенный продукт очищали препаративной ВЭЖХ (градиент 5-60% ACN/вода, колонка C18) с получением соли TFA указанного в заголовке соединения (25 мг, 63% выход). (m/z): [M+H]+ вычислено для C₂₉H₃₅N₇O₂ 514,29 найдено 514,2. (S)-5-ethyl-2-(6-(2-ethyl-4-hydroxyphenyl)-1H-indazol-3-yl)-4,5,6,7-tetrahydro-3H-imidazo[4,5- c]pyridine-6-carboxylic acid, TFA (30 mg, 0.055 mmol), 3-(dimethylamino)azetidine dihydrochloride (14.28 mg, 0.082 mmol), and DIPEA (0.048 ml, 0.275 mmol) were dissolved in DMF (1. 50 ml), then HATU (31.4 mg, 0.082 mmol) was added and the reaction mixture was stirred at room temperature for 1 hour (reaction progress was monitored by LCMS). Hydrazine (5.18 μl, 0.165 mmol) was added to cleave unwanted by-products, then the solution was stirred at room temperature for 10 minutes. The reaction mixture was then concentrated and the crude product was purified by preparative HPLC (5-60% ACN/water gradient, column C18) to give the TFA salt of the title compound (25 mg, 63% yield). (m/z): [M+H]+ calculated for C ₂₉ H ₃₅ N ₇ O ₂ 514.29 found 514.2.

Пример 10: (S)-(3-(диметиламино)-3-метилазетидин-1-ил)(5-этил-2-(6-(2-этил-4-гидроксифенил)-1H-индазол-3-ил)-4,5,6,7-тетрагидро-3H-имидазо[4,5-c]пиридин-6-ил)метанон Example 10: (S)-(3-(dimethylamino)-3-methylazetidin-1-yl)(5-ethyl-2-(6-(2-ethyl-4-hydroxyphenyl)-1H-indazol-3-yl) -4,5,6,7-tetrahydro-3H-imidazo[4,5-c]pyridin-6-yl)methanone

(S)-5-этил-2-(6-(2-этил-4-гидроксифенил)-1H-индазол-3-ил)-4,5,6,7-тетрагидро-3H-имидазо[4,5-c]пиридин-6-карбоновую кислоту, TFA (30 мг, 0,055 ммоль), N, N,3-триметилазетидин-3-амин гидрохлорид (12,43 мг, 0,082 ммоль), и DIPEA (0,048 мл, 0,275 ммоль) растворяли в DMF (1,50 мл), затем добавляли HATU (31,4 мг, 0,082 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа (за ходом реакции следили с помощью LCMS). Гидразин (5,18 мкл, 0,165 ммоль) добавляли для расщепления нежелательных побочных продуктов, затем раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 10 минут. Затем реакционную смесь концентрировали и неочищенный продукт очищали препаративной ВЭЖХ (градиент 5-60% ACN/вода, колонка C18) с получением соли TFA указанного в заголовке соединения (25 мг, 62% выход). (m/z): [M+H]+ вычислено для C₃₀H₃₇N₇O₂ 528,30 найдено 528,2. (S)-5-ethyl-2-(6-(2-ethyl-4-hydroxyphenyl)-1H-indazol-3-yl)-4,5,6,7-tetrahydro-3H-imidazo[4,5- c]pyridine-6-carboxylic acid, TFA (30 mg, 0.055 mmol), N,N,3-trimethylazetidine-3-amine hydrochloride (12.43 mg, 0.082 mmol), and DIPEA (0.048 ml, 0.275 mmol) were dissolved in DMF (1.50 ml), then HATU (31.4 mg, 0.082 mmol) was added and the reaction mixture was stirred at room temperature for 1 hour (reaction progress was monitored by LCMS). Hydrazine (5.18 μl, 0.165 mmol) was added to cleave unwanted by-products, then the solution was stirred at room temperature for 10 minutes. The reaction mixture was then concentrated and the crude product was purified by preparative HPLC (5-60% ACN/water gradient, column C18) to give the TFA salt of the title compound (25 mg, 62% yield). (m/z): [M+H]+ calculated for C ₃₀ H ₃₇ N ₇ O ₂ 528.30 found 528.2.

Пример 11: (S)-(3-(диметиламино)-3-метилазетидин-1-ил)(2-(6-(2-этил-4-гидроксифенил)-1H-индазол-3-ил)-5-изопропил-4,5,6,7-тетрагидро-3H-имидазо[4,5-c]пиридин-6-ил)метанон Example 11: (S)-(3-(dimethylamino)-3-methylazetidin-1-yl)(2-(6-(2-ethyl-4-hydroxyphenyl)-1H-indazol-3-yl)-5-isopropyl -4,5,6,7-tetrahydro-3H-imidazo[4,5-c]pyridin-6-yl)methanone

(S)-2-(6-(2-этил-4-гидроксифенил)-1H-индазол-3-ил)-5-изопропил-4,5,6,7-тетрагидро-3H-имидазо[4,5-c]пиридин-6-карбоновую кислоту (40 мг, 0,090 ммоль) (I-19) N, N,3-триметилазетидин-3-амин гидрохлорид (20,29 мг, 0,135 ммоль), и DIPEA (0,047 мл, 0,269 ммоль) растворяли в DMF (1,50 мл), затем добавляли HATU (51,2 мг, 0,135 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 часов (за ходом реакции следили с помощью LCMS). Гидразин (8,45 мкл, 0,269 ммоль) добавляли для расщепления нежелательных побочных продуктов, затем раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 10 минут. Затем реакционную смесь концентрировали и неочищенный продукт очищали препаративной ВЭЖХ (градиент 5-60% ACN/вода, колонка C18) с получением соли TFA указанного в заголовке соединения (26 мг, 38% выход). (m/z): [M+H]+ вычислено для C₃₁H₃₉N₇O₂ 542,32 найдено 542,2. (S)-2-(6-(2-ethyl-4-hydroxyphenyl)-1H-indazol-3-yl)-5-isopropyl-4,5,6,7-tetrahydro-3H-imidazo[4,5- c]pyridine-6-carboxylic acid (40 mg, 0.090 mmol) ( I-19 ) N,N,3-trimethylazetidine-3-amine hydrochloride (20.29 mg, 0.135 mmol), and DIPEA (0.047 ml, 0.269 mmol ) was dissolved in DMF (1.50 ml), then HATU (51.2 mg, 0.135 mmol) was added and the reaction mixture was stirred at room temperature for 16 hours (reaction progress was monitored by LCMS). Hydrazine (8.45 μl, 0.269 mmol) was added to cleave unwanted by-products, then the solution was stirred at room temperature for 10 minutes. The reaction mixture was then concentrated and the crude product was purified by preparative HPLC (5-60% ACN/water gradient, column C18) to give the TFA salt of the title compound (26 mg, 38% yield). (m/z): [M+H]+ calculated for C ₃₁ H ₃₉ N ₇ O ₂ 542.32 found 542.2.

Пример 12: (S)-(3-(диметиламино)азетидин-1-ил)(2-(6-(2-этил-4-гидроксифенил)-1H-индазол-3-ил)-5-пропил-4,5,6,7-тетрагидро-3H-имидазо[4,5-c]пиридин-6-ил)метанон Example 12: (S)-(3-(dimethylamino)azetidin-1-yl)(2-(6-(2-ethyl-4-hydroxyphenyl)-1H-indazol-3-yl)-5-propyl-4, 5,6,7-tetrahydro-3H-imidazo[4,5-c]pyridin-6-yl)methanone

(S)-2-(6-(2-этил-4-гидроксифенил)-1H-индазол-3-ил)-5-пропил-4,5,6,7-тетрагидро-3H-имидазо[4,5-c]пиридин-6-карбоновую кислоту, TFA (30 мг, 0,054 ммоль), (I-20) 3-(диметиламино)азетидин дигидрохлорид (13,92 мг, 0,080 ммоль), и DIPEA (0,047 мл, 0,268 ммоль) растворяли в DMF (1,50 мл), затем добавляли HATU (30,6 мг, 0,080 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа (за ходом реакции следили с помощью LCMS). Гидразин (5,05 мкл, 0,161 ммоль) добавляли для расщепления нежелательных побочных продуктов, затем раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 10 минут. Затем реакционную смесь концентрировали и неочищенный продукт очищали препаративной ВЭЖХ (градиент 5-60% ACN/вода, колонка C18) с получением соли TFA указанного в заголовке соединения (26 мг, 63% выход). (m/z): [M+H]+ вычислено для C₃₀H₃₇N₇O₂ 528,30 найдено 528,2. (S)-2-(6-(2-ethyl-4-hydroxyphenyl)-1H-indazol-3-yl)-5-propyl-4,5,6,7-tetrahydro-3H-imidazo[4,5- c]pyridine-6-carboxylic acid, TFA (30 mg, 0.054 mmol), ( I-20 ) 3-(dimethylamino)azetidine dihydrochloride (13.92 mg, 0.080 mmol), and DIPEA (0.047 ml, 0.268 mmol) were dissolved in DMF (1.50 ml), then HATU (30.6 mg, 0.080 mmol) was added and the reaction mixture was stirred at room temperature for 1 hour (reaction progress was monitored by LCMS). Hydrazine (5.05 μl, 0.161 mmol) was added to cleave unwanted by-products, then the solution was stirred at room temperature for 10 minutes. The reaction mixture was then concentrated and the crude product was purified by preparative HPLC (5-60% ACN/water gradient, column C18) to give the TFA salt of the title compound (26 mg, 63% yield). (m/z): [M+H]+ calculated for C ₃₀ H ₃₇ N ₇ O ₂ 528.30 found 528.2.

Пример 13: (S)-(3-(диметиламино)-3-метилазетидин-1-ил)(2-(6-(2-этил-4-гидроксифенил)-1H-индазол-3-ил)-5-пропил-4,5,6,7-тетрагидро-3H-имидазо[4,5-c]пиридин-6-ил)метанон Example 13: (S)-(3-(dimethylamino)-3-methylazetidin-1-yl)(2-(6-(2-ethyl-4-hydroxyphenyl)-1H-indazol-3-yl)-5-propyl -4,5,6,7-tetrahydro-3H-imidazo[4,5-c]pyridin-6-yl)methanone

(S)-2-(6-(2-этил-4-гидроксифенил)-1H-индазол-3-ил)-5-пропил-4,5,6,7-тетрагидро-3H-имидазо[4,5-c]пиридин-6-карбоновую кислоту, TFA (30 мг, 0,054 ммоль), (I-20) N, N,3-триметилазетидин-3-амин гидрохлорид (12,12 мг, 0,080 ммоль), и DIPEA (0,047 мл, 0,268 ммоль) растворяли в DMF (1,50 мл), затем добавляли HATU (30,6 мг, 0,080 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа (за ходом реакции следили с помощью LCMS). Гидразин (5,05 мкл, 0,161 ммоль) добавляли для расщепления нежелательных побочных продуктов, затем раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 10 минут. Затем реакционную смесь концентрировали и неочищенный продукт очищали препаративной ВЭЖХ (градиент 5-60% ACN/вода, колонка C18) с получением соли TFA указанного в заголовке соединения (18 мг, 44% выход). (m/z): [M+H]+ вычислено для C₃₁H₃₉N₇O₂ 542,32 найдено 542,2. (S)-2-(6-(2-ethyl-4-hydroxyphenyl)-1H-indazol-3-yl)-5-propyl-4,5,6,7-tetrahydro-3H-imidazo[4,5- c]pyridine-6-carboxylic acid, TFA (30 mg, 0.054 mmol), ( I-20 ) N,N,3-trimethylazetidine-3-amine hydrochloride (12.12 mg, 0.080 mmol), and DIPEA (0.047 ml , 0.268 mmol) was dissolved in DMF (1.50 ml), then HATU (30.6 mg, 0.080 mmol) was added and the reaction mixture was stirred at room temperature for 1 hour (the reaction was followed by LCMS). Hydrazine (5.05 μl, 0.161 mmol) was added to cleave unwanted by-products, then the solution was stirred at room temperature for 10 minutes. The reaction mixture was then concentrated and the crude product was purified by preparative HPLC (5-60% ACN/water gradient, column C18) to give the TFA salt of the title compound (18 mg, 44% yield). (m/z): [M+H]+ calculated for C ₃₁ H ₃₉ N ₇ O ₂ 542.32 found 542.2.

Биологические анализыBiological analyzes

Соединения настоящего описания охарактеризованы в одном или нескольких следующих биологических анализах.Compounds of the present disclosure are characterized in one or more of the following biological assays.

Анализ 1: Биохимические анализы киназы JAK Assay 1: JAK kinase biochemical assays

Панель четырех биохимических анализов LanthaScreen JAK (JAK1, 2, 3 и Tyk2) проводили в общем киназном реакционном буфере (50 мМ HEPES, pH 7,5, 0,01% Brij-35, 10 мМ MgCl₂ и 1 мМ EGTA). Рекомбинантные GST-меченные ферменты JAK и GFP-меченный пептидный субстрат STAT1 были получены от Life Technologies. A panel of four LanthaScreen JAK biochemical assays (JAK1, 2, 3 and Tyk2) were run in total kinase reaction buffer (50 mM HEPES, pH 7.5, 0.01% Brij-35, 10 mM MgCl ₂ and 1 mM EGTA). Recombinant GST-tagged JAK enzymes and GFP-tagged STAT1 peptide substrate were obtained from Life Technologies.

Последовательно разведенные соединения предварительно инкубировали с каждым из четырех ферментов JAK и субстратом в белых 384-луночных микропланшетах (Corning) при температуре окружающей среды в течение 1 часа. Затем добавляли АТФ для инициации киназных реакций в общем объеме 10 мкл с 1% DMSO. Конечные концентрации фермента для JAK1, 2, 3 и Tyk2 составляли 4,2 нМ, 0,1 нМ, 1 нМ и 0,25 нМ, соответственно; соответствующие используемые концентрации Km АТФ составляли 25 мкМ, 3 мкМ, 1,6 мкМ и 10 мкМ; в то время как концентрация субстрата составляли 200 нМ для всех четырех анализов. Киназным реакциям позволяли протекать в течение 1 часа при температуре окружающей среды, после чего добавляли 10 мкл препарата EDTA (конечная концентрация 10 мМ) и Tb-анти-pSTAT1 (pTyr701) антитело (Life Technologies, конечная концентрация 2 нМ) в буфере для разведения TR-FRET (Life Technologies). Планшеты оставляли для инкубации при температуре окружающей среды в течение 1 часа перед считыванием на считывателе EnVision (Perkin Elmer). Сигналы коэффициента излучения (520 нм/495 нм) записывали и использовали для расчета значений процентного ингибирования на основе DMSO и фоновых контролей. Serially diluted compounds were pre-incubated with each of the four JAK enzymes and substrate in white 384-well microplates (Corning) at ambient temperature for 1 hour. ATP was then added to initiate kinase reactions in a total volume of 10 μl with 1% DMSO. Final enzyme concentrations for JAK1, 2, 3, and Tyk2 were 4.2 nM, 0.1 nM, 1 nM, and 0.25 nM, respectively; the respective ATP Km concentrations used were 25 μM, 3 μM, 1.6 μM and 10 μM; while the substrate concentration was 200 nM for all four assays. Kinase reactions were allowed to proceed for 1 hour at ambient temperature, after which 10 μl of EDTA preparation (final concentration 10 mM) and Tb-anti-pSTAT1 (pTyr701) antibody (Life Technologies, final concentration 2 nM) were added in TR dilution buffer -FRET (Life Technologies). The plates were left to incubate at ambient temperature for 1 hour before being read on an EnVision reader (Perkin Elmer). Emissivity signals (520 nm/495 nm) were recorded and used to calculate percent inhibition values based on DMSO and background controls.

Для анализа доза-ответ данные процентного ингибирования наносили на график в зависимости от концентраций соединения, и значения IC₅₀ определяли с помощью 4-параметрической робастной модели подгонки с программным обеспечением Prism (GraphPad Software). Результаты выражали как pIC₅₀ (отрицательный логарифм IC₅₀) и затем конвертировали в pK_i (отрицательный логарифм константы диссоциации Ki) с использованием уравнения Ченга-Прусоффа.For dose-response analysis, percent inhibition data was plotted against compound concentrations and IC ₅₀ values were determined using a 4-parameter robust fitting model with Prism software (GraphPad Software). The results were expressed as pIC ₅₀ (negative log IC ₅₀ ) and then converted to pK _i (negative log dissociation constant Ki) using the Cheng-Prusoff equation.

Тестируемые соединения, имеющие более низкое значение K_i или более высокое значение pK_i в каждом из четырех анализов JAK, показывают большее ингибирование активности JAK. Test compounds having a lower K _i value or a higher pK _i value in each of the four JAK assays show greater inhibition of JAK activity.

Анализ 2: Ингибирование стимулированного IL-2 pSTAT5 в T-клетках Tall-1 Assay 2: Inhibition of IL-2 stimulated pSTAT5 in Tall-1 T cells

Эффективность тестируемых соединений в отношении ингибирования фосфорилирования STAT5, стимулированного интерлейкином-2 (IL-2), измеряли в линии Т-клеток человека Tall-1 (DSMZ) с использованием AlphaLisa. Поскольку IL-2 передает сигнал через JAK1/3, этот анализ обеспечивает измерение клеточной активности JAK1/3.The potency of test compounds in inhibiting interleukin-2 (IL-2) stimulated STAT5 phosphorylation was measured in the Tall-1 human T cell line (DSMZ) using AlphaLisa. Because IL-2 signals through JAK1/3, this assay provides a measure of JAK1/3 cellular activity.

Фосфорилированный STAT5 измеряли с помощью набора AlphaLISA SureFire Ultra pSTAT5 (Tyr694/699) (PerkinElmer).Phosphorylated STAT5 was measured using the AlphaLISA SureFire Ultra pSTAT5 (Tyr694/699) kit (PerkinElmer).

Человеческие Т-клетки из линии клеток Tall-1 культивировали во влажной камере при 37°C, 5% CO₂ в RPMI (Life Technologies), дополненной 15% инактивированной нагреванием фетальной бычьей сывороткой (FBS, Life Technologies), 2 мМ глутамакса (Life Technologies), 25 мМ HEPES (Life Technologies) и 1X Pen/Strep (Life Technologies). Соединения последовательно разбавляли в DMSO и акустически распределяли в пустые лунки. Среду для анализа (DMEM без фенолового красного (Life Technologies), дополненная 10% FBS (ATCC)) распределяли (4 мкл/лунка), и планшеты встряхивали при 900 об/мин в течение 10 минут. Клетки высевали из расчета 45000 клеток/лунку в среду для анализа (4 мкл/лунку) и инкубировали при 37°C, 5% CO₂ в течение 1 часа с последующим добавлением IL-2 (R&D Systems; конечная концентрация 300 нг/мл) в предварительно нагретую среду для анализа (4 мкл) в течение 30 минут. После стимуляции цитокинов клетки лизировали 6 мкл 3x буфера для лизиса AlphaLisa (PerkinElmer), содержащего 1x таблетки PhosStop and Complete (Roche). Лизат встряхивали при 900 об/мин в течение 10 минут при комнатной температуре (комн.темп.). Фосфорилированный STAT5 измеряли с помощью набора pSTAT5 AlphaLisa (PerkinElmer). Свежеприготовленную смесь акцепторных гранул распределяли на лизат (5 мкл) при отфильтрованном зеленом свете <100 люкс. Планшеты встряхивали при 900 об/мин в течение 2 минут, непродолжительное время центрифугировали и инкубировали в течение 2 часов при комнатной температуре в темноте. Донорные гранулы распределяли (5 мкл) под фильтрованным зеленым светом <100 люкс. Планшеты встряхивали при 900 об/мин в течение 2 минут, непродолжительное время центрифугировали и инкубировали в течение ночи при комнатной температуре в темноте. Люминесценцию измеряли при возбуждении при 689 нм и испускании при 570 нм с использованием планшет-ридера EnVision (PerkinElmer) в зеленом фильтрованном свете <100 люкс.Human T cells from the Tall-1 cell line were cultured in a humid chamber at 37°C, 5% CO ₂ in RPMI (Life Technologies) supplemented with 15% heat-inactivated fetal bovine serum (FBS, Life Technologies), 2 mM glutamax (Life Technologies), 25 mM HEPES (Life Technologies) and 1X Pen/Strep (Life Technologies). Compounds were serially diluted in DMSO and sonicated into empty wells. Assay medium (DMEM without phenol red (Life Technologies) supplemented with 10% FBS (ATCC)) was dispensed (4 μl/well) and the plates were shaken at 900 rpm for 10 minutes. Cells were plated at 45,000 cells/well in assay medium (4 μl/well) and incubated at 37°C, 5% CO ₂ for 1 hour followed by addition of IL-2 (R&D Systems; final concentration 300 ng/ml) into prewarmed assay medium (4 µl) for 30 minutes. Following cytokine stimulation, cells were lysed with 6 μl of 3x AlphaLisa lysis buffer (PerkinElmer) containing 1x PhosStop and Complete tablets (Roche). The lysate was shaken at 900 rpm for 10 minutes at room temperature (room temp.). Phosphorylated STAT5 was measured using the pSTAT5 AlphaLisa kit (PerkinElmer). The freshly prepared acceptor bead mixture was dispensed onto the lysate (5 μl) under filtered green light <100 lux. The plates were shaken at 900 rpm for 2 minutes, centrifuged briefly and incubated for 2 hours at room temperature in the dark. Donor beads were dispensed (5 μl) under <100 lux filtered green light. The plates were shaken at 900 rpm for 2 minutes, centrifuged briefly and incubated overnight at room temperature in the dark. Luminescence was measured with excitation at 689 nm and emission at 570 nm using an EnVision plate reader (PerkinElmer) in <100 lux green filtered light.

Для определения ингибирующей способности тестируемых соединений в ответ на IL-2 измеряли среднюю интенсивность излучения шариков, связанных с pSTAT5, в линии Т-клеток человека. Значения IC₅₀ определяли из анализа кривых ингибирования интенсивности сигнала в зависимости от концентрации соединения. Данные выражали в виде значений pIC₅₀ (отрицательный десятичный логарифм IC₅₀) (среднее значение± стандартное отклонение).To determine the inhibitory ability of the test compounds in response to IL-2, the average emission intensity of the beads associated with pSTAT5 was measured in a human T cell line. IC ₅₀ values were determined from analysis of signal intensity inhibition curves versus compound concentration. Data were expressed as pIC ₅₀ values (negative decimal logarithm of IC ₅₀ ) (mean ± standard deviation).

Результаты анализа in vitro Results of in vitro analysis

Соединения по изобретению тестировали в четырех ферментных анализах JAK; JAK1, JAK2, JAK3 и Tyk2, а также анализе активности клеток BEAS-2B, описанных выше. Compounds of the invention were tested in four JAK enzyme assays; JAK1, JAK2, JAK3 and Tyk2, as well as the analysis of the activity of the BEAS-2B cells described above.

Таблица 1Table 1

Номер примераExample number JAK1
pK_i JAK1
pK _i JAK2
pK_i JAK2
pK _i JAK3 pK_i JAK3pK _i Tyk2 pK_i Tyk2pK _i Tall-1
pIC50Tall-1
pIC50 1one 10,210.2 10,310.3 9,89.8 9,09.0 8,88.8 22 10,310.3 10,210.2 9,89.8 8,98.9 8,48.4 33 10,210.2 10,410.4 10,210.2 9,39.3 8,88.8 44 10,110.1 10,410.4 10,110.1 9,09.0 8,68.6 5five 10,310.3 10,510.5 10,110.1 9,29.2 8,88.8 66 10,210.2 10,410.4 10,010.0 9,09.0 8,78.7 77 10,210.2 10,510.5 10,210.2 9,19.1 8,68.6 8eight 10,410.4 10,810.8 10,110.1 9,59.5 8,88.8 9nine 10,310.3 10,710.7 10,310.3 9,29.2 8,78.7 1010 10,410.4 10,610.6 10,210.2 9,19.1 8,68.6 11eleven 10,010.0 10,810.8 9,99.9 9,19.1 8,78.7 1212 10,510.5 10,610.6 10,310.3 9,09.0 8,78.7 1313 10,310.3 10,510.5 9,89.8 9,09.0 8,68.6

Анализ 3: Крысиная (мышиная) модель индуцированной IL-13 индукции pSTAT6 в легочной ткани.Analysis 3: Rat (mouse) model of IL-13 induced pSTAT6 induction in lung tissue.

IL-13 представляет собой важный цитокин, лежащий в основе патофизиологии астмы (Kudlacz et al. Eur. J. Pharmacol, 2008, 582,154-161). IL-13 связывается с рецепторами клеточной поверхности, активирующими членов семейства янус киназ (JAK), которые затем фосфорилируют STAT6 и впоследствии активируют дальнейшие пути транскрипции. В описанной модели дозу IL-13 доставляли локально в легкие мышей, чтобы вызвать фосфорилирование STAT6 (pSTAT6), которое затем измеряли в качестве конечной точки. IL-13 is an important cytokine underlying the pathophysiology of asthma (Kudlacz et al. Eur. J. Pharmacol , 2008 , 582,154-161 ). IL-13 binds to cell surface receptors that activate members of the Janus kinase (JAK) family, which then phosphorylate STAT6 and subsequently activate further transcriptional pathways. In the model described, a dose of IL-13 was delivered locally to the lungs of mice to induce STAT6 (pSTAT6) phosphorylation, which was then measured as an end point.

В анализе использовали взрослых мышей Balb/c от Harlan. В день исследования животных слегка анестезировали изофлураном и вводили либо носитель, либо тестируемое соединение (1 мг/мл, общий объем 50 мкл за несколько вдохов) посредством пероральной аспирации. После введения дозы животных помещали в положение лежа на боку и наблюдали за полным восстановлением после анестезии перед возвращением в их домашнюю клетку. Через четыре часа животных снова ненадолго анестезировали и вводили либо носитель, либо IL-13 (общая доставленная доза 0,03 мкг, общий объем 50 мкл) с помощью пероральной аспирации, после чего наблюдали за восстановлением после анестезии и возвращали в их домашнюю клетку. Через час после введения носителя или IL-13 цельную кровь и легкие собирали как для обнаружения pSTAT6 в гомогенатах легких, используя набор для анализа Perkin Elmer AlphaLISA® SureFire® Ultra™ HV p-STAT6 (Tyr641), так и для анализа общей концентрации лекарственного средства как в легких, так и в плазме. Образцы крови центрифугировали (центрифуга Eppendorf, 5804R) в течение 4 минут при приблизительно 12000 об/мин при 4°C для сбора плазмы. Легкие промывали в DPBS (физиологический раствор, забуференный фосфатом Дульбекко), высушивали, замораживали, взвешивали и гомогенизировали в разведении 1:3 в 0,1% муравьиной кислоте в воде ВЭЖХ. Уровни тестируемого соединения в плазме и легких определяли с помощью анализа ЖХ-МС по аналитическим стандартам, построенным на стандартной кривой в тестовой матрице. Отношение легких к плазме определяли как отношение концентрации в легких в нг/г к концентрации в плазме в нг/мл через 5 часов. Balb/c adult mice from Harlan were used in the assay. On the day of the study, animals were lightly anesthetized with isoflurane and administered with either vehicle or test compound (1 mg/ml, total volume 50 μl over several breaths) via oral aspiration. After dosing, the animals were placed in the lateral prone position and observed for complete recovery from anesthesia before returning to their home cage. Four hours later, animals were briefly anesthetized again and either vehicle or IL-13 (total delivered dose 0.03 µg, total volume 50 µl) was administered by oral aspiration, followed by recovery from anesthesia and returned to their home cage. One hour after vehicle or IL-13 administration, whole blood and lungs were collected for both detection of pSTAT6 in lung homogenates using the Perkin Elmer AlphaLISA® SureFire® Ultra™ HV p-STAT6 assay kit (Tyr641) and total drug concentration assay both in the lungs and in plasma. Blood samples were centrifuged (Eppendorf centrifuge, 5804R) for 4 minutes at approximately 12,000 rpm at 4° C. to collect plasma. Lungs were washed in DPBS (Dulbecco's Phosphate Buffered Saline), dried, frozen, weighed and homogenized at a 1:3 dilution in 0.1% formic acid in water by HPLC. Plasma and lung test compound levels were determined by LC-MS analysis against analytical standards plotted against a standard curve in a test matrix. The lung-to-plasma ratio was defined as the ratio of lung concentration in ng/g to plasma concentration in ng/ml after 5 hours.

Активность в модели подтверждается снижением уровня pSTAT6, присутствующего в легких животных, получивших лечение, через 5 часов, по сравнению с получившими носитель контрольными животными с IL-13. Разница между контрольными животными с IL-13, которым вводили носитель, и контрольными животными с носителем, которым вводили носитель, диктовала 0% и 100% ингибирующий эффект, соответственно, в любом данном эксперименте. Соединения, протестированные в этом анализе, проявляли ингибирование фосфорилирования STAT6 через 5 часов после введения IL-13, как указано ниже. Activity in the model is confirmed by a decrease in the level of pSTAT6 present in the lungs of treated animals after 5 hours compared to vehicle-treated control animals with IL-13. The difference between vehicle-treated IL-13 control animals and vehicle-treated control animals dictated 0% and 100% inhibitory effect, respectively, in any given experiment. Compounds tested in this assay exhibited inhibition of STAT6 phosphorylation 5 hours after IL-13 administration, as indicated below.

Таблица 2: Наблюдаемое ингибирование pSTAT6 и воздействие на плазму/легкиеTable 2: Observed pSTAT6 Inhibition and Plasma/Lung Effects

СоединениеCompound Концентрация в легких (нг/г) через 5 чLung concentration (ng/g) after 5 hours Концентрация в плазме (нг/мл) через 5 чPlasma concentration (ng / ml) after 5 hours Соотношение содержания в легких и плазме через 5 чThe ratio of the content in the lungs and plasma after 5 hours ингибирование pSTAT6 через 5 чpSTAT6 inhibition after 5 h 1one 13000±572013000±5720 10,3±3,910.3±3.9 12621262 6767 22 23450±1252823450±12528 17,5±2517.5±25 13401340 7272 33 6330±11316330±1131 15,4±715.4±7 411411 7676 44 17350±662517350±6625 22,0±2322.0±23 788788 6767 5five 5445±18625445±1862 13,0±3,713.0±3.7 418418 7373 66 11600±468211600±4682 11,3±5,711.3±5.7 10261026 3737 77 10155±197910155±1979 24,0±16,224.0±16.2 423423 7575 8eight 22138±554722138±5547 58±1758±17 381381 5151 9nine 7750±16527750±1652 23±623±6 339339 7272 1010 5130±22055130±2205 24±624±6 216216 7373 11eleven 15000±334915000±3349 55±2155±21 271271 7272 1212 6940±42486940±4248 25±925±9 281281 5555 1313 7465±30847465±3084 23±2,523±2.5 330330 6666

Наблюдение за значительной концентрацией тестируемых соединений в легких мыши подтвердило, что наблюдаемое ингибирование индуцированной IL-13 индукции pSTAT6 было результатом активности тестируемого соединения. Соотношение содержания в легких и плазме через 5 часов показало, что соединения с 1 по 6 показали значительно большее воздействие в легких, чем воздействие в плазме мышей. Observation of a significant concentration of test compounds in mouse lungs confirmed that the observed inhibition of IL-13 induced pSTAT6 induction was a result of the activity of the test compound. The lung to plasma ratio at 5 hours indicated that compounds 1 to 6 showed significantly greater lung exposure than mouse plasma exposure.

Анализ 4: Ингибирование вызванного TSLP высвобождения TARC в мононуклеарных клетках периферической крови человекаAssay 4: Inhibition of TSLP-induced TARC release in human peripheral blood mononuclear cells

Тимический стромальный лимфопоэтин (TSLP) и тимусом и активацией регулируемый хемокин (TARC) сверхэкспрессируются в дыхательных путях при астме и коррелируют с тяжестью заболевания. В легких TSLP может выделяться эпителиальными клетками бронхов в ответ на аллергены и вирусные инфекции. Сигналы TSLP через гетеродимер IL-7Rα/TSLPR обнаружены в широком диапазоне тканей и типов клеток, включая эпителиальные клетки, эндотелиальные клетки, нейтрофилы, макрофаги и тучные клетки. Связывание TSLP с его рецептором вызывает конформационное изменение, которое активирует JAK1 и JAK2 для фосфорилирования различных факторов транскрипции, включая STAT3 и STAT5. В иммунных клетках это запускает каскад внутриклеточных событий, которые приводят к пролиферации клеток, антиапоптозу, миграции дендритных клеток и продукции Th2 цитокинов и хемокинов. В мононуклеарных клетках периферической крови (PBMC) TSLP оказывает провоспалительное действие, активируя миелоидные дендритные клетки для привлечения и стимуляции Т-клеток, процесс, опосредованный хемоаттрактантом TARC.Thymic stromal lymphopoietin (TSLP) and thymus-activated regulated chemokine (TARC) are overexpressed in the airways in asthma and correlate with disease severity. In the lungs, TSLP can be secreted by bronchial epithelial cells in response to allergens and viral infections. TSLP signals through the IL-7Rα/TSLPR heterodimer have been found in a wide range of tissues and cell types, including epithelial cells, endothelial cells, neutrophils, macrophages, and mast cells. Binding of TSLP to its receptor causes a conformational change that activates JAK1 and JAK2 to phosphorylate various transcription factors, including STAT3 and STAT5. In immune cells, this triggers a cascade of intracellular events that lead to cell proliferation, anti-apoptosis, dendritic cell migration, and production of Th2 cytokines and chemokines. In peripheral blood mononuclear cells (PBMCs), TSLP has a pro-inflammatory effect by activating myeloid dendritic cells to recruit and stimulate T cells, a process mediated by the TARC chemoattractant.

В этом анализе было показано, что стимуляция TSLP индуцирует высвобождение TARC из PBMC, и что этот ответ ослабляется дозозависимым образом при лечении соединением. Эффективность тестируемых соединений измеряли по ингибированию высвобождения TARC.In this assay, it was shown that TSLP stimulation induces the release of TARC from PBMC, and that this response is attenuated in a dose-dependent manner upon treatment with the compound. The efficacy of test compounds was measured by inhibition of TARC release.

Аликвоты PBMC (ранее выделенные из цельной крови и замороженные в аликвотах при -80°C) от 3-5 доноров размораживали при 37°C и добавляли по каплям в 40 мл предварительно нагретой, стерильно фильтрованной, полной среды RPMI в 50 мл пробирки фирмы Falcon. Клетки осаждали и ресуспендировали в полной среде при 2,24×10⁶ клеток/мл. Клетки высевали по 85 мкл (190000 клеток) на лунку в 96-луночный планшет с плоским дном, обработанным культурой ткани. Клеткам давали отдохнуть в течение 1 часа при 37°C с 5% CO₂.Aliquots of PBMC (previously isolated from whole blood and frozen in aliquots at -80°C) from 3-5 donors were thawed at 37°C and added dropwise to 40 ml of pre-warmed, sterile-filtered, complete RPMI medium in a 50 ml Falcon tube . Cells were pelleted and resuspended in complete medium at 2.24×10 ⁶ cells/ml. Cells were seeded at 85 μl (190,000 cells) per well in a 96 well tissue cultured flat bottom plate. The cells were allowed to rest for 1 hour at 37°C with 5% CO ₂ .

Соединения получали в виде 10 мМ исходных растворов в DMSO. 3,7-кратные серийные разведения были выполнены для получения 9 концентраций тестируемого соединения в DMSO при 300X конечной тестовой концентрации для анализа. 150-кратные промежуточные разведения осуществляли в полной среде для получения соединения в 2X конечной тестовой концентрации для анализа с 0,2% DMSO. После 1-часового периода отдыха в каждую лунку PBMC добавляли 95 мкл 2X соединения для конечного диапазона концентраций для анализа от 33,33 мкМ до 0,95 мкМ. 95 мкл 0,2% DMSO в полной среде добавляли в необработанные контрольные лунки. Клетки предварительно обрабатывали соединением в течение 1 часа при 37°C с 5% CO₂ перед стимуляцией.Compounds were obtained as 10 mM stock solutions in DMSO. 3.7-fold serial dilutions were performed to give 9 concentrations of test compound in DMSO at 300X the final assay test concentration. 150-fold intermediate dilutions were made in complete medium to give the compound at 2X the final assay test concentration with 0.2% DMSO. After a 1 hour rest period, 95 μl of 2X compound was added to each well of PBMC for a final assay concentration range of 33.33 μM to 0.95 μM. 95 μl of 0.2% DMSO in complete medium was added to untreated control wells. Cells were pre-treated with the compound for 1 hour at 37°C with 5% CO ₂ before stimulation.

Рекомбинантный белок TSLP человека восстанавливали в концентрации 10 мкг/мл в стерильном DPBS с 0,1% BSA и хранили в аликвотах при -20°C. Непосредственно перед использованием аликвоту размораживали и получали при 20X конечной концентрации анализа в полной среде. 10 мкл 20X TSLP добавляли в каждую лунку PBMC для конечной концентрации анализа 10 нг/мл. В нестимулированные контрольные лунки добавляли 10 мкл полной среды. Клетки стимулировали в присутствии соединения в течение 48 часов при 37°C с 5% CO₂.Recombinant human TSLP protein was reconstituted at 10 μg/ml in sterile DPBS with 0.1% BSA and stored in aliquots at -20°C. Just prior to use, an aliquot was thawed and prepared at 20X the final concentration of the assay in complete medium. 10 μl of 20X TSLP was added to each well of PBMC for a final assay concentration of 10 ng/ml. 10 μl of complete medium was added to unstimulated control wells. Cells were stimulated in the presence of the compound for 48 hours at 37° C. with 5% CO ₂ .

После стимуляции собирали супернатанты клеточных культур и определяли уровни TARC с помощью твердофазного иммуноферментного анализа (ELISA) с использованием набора Human CCL17/TARC Quantikine ELISA (R&D Systems #DDN00) в соответствии с инструкциями производителя.After stimulation, cell culture supernatants were collected and TARC levels were determined by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) using the Human CCL17/TARC Quantikine ELISA kit (R&D Systems #DDN00) according to the manufacturer's instructions.

Для анализа эффекта дозы log [тестируемое соединение (M)] наносили на график в зависимости от значений процентного ответа для каждого донора, и значения IC50 определяли с использованием нелинейного регрессионного анализа с программным обеспечением GraphPad Prism Software с использованием 4-параметрического сигмоидального алгоритма зависимости доза-ответ с переменный наклоном. Данные выражены в виде средних значений pIC₅₀ (отрицательный десятичный логарифм IC₅₀), рассчитанных на основе значений pIC₅₀ отдельных доноров и округленных до одного десятичного знака. Значения эффективности ингибирования приведены в таблице 3.For dose effect analysis, log [test compound (M)] was plotted against percentage response values for each donor, and IC50 values were determined using non-linear regression analysis with GraphPad Prism Software using a 4-parameter sigmoidal dose-response algorithm. response with a variable slope. Data are expressed as mean pIC ₅₀ values (negative decimal logarithm of IC ₅₀ ) calculated from individual donor pIC ₅₀ values and rounded to one decimal place. The inhibition efficiency values are shown in Table 3.

Таблица 3: Значения эффективности (pIC₅₀) тестируемых соединений для ингибирования TSLP-вызванного высвобождения TARC в мононуклеарных клетках периферической крови человекаTable 3: Efficacy (pIC ₅₀ ) values of test compounds for inhibiting TSLP-induced TARC release in human peripheral blood mononuclear cells

СоединениеCompound pIC50 ± стандартное отклонение.pIC50 ± standard deviation. 1one 7,1 ± 0,17.1±0.1 22 6,8 ± 0,26.8±0.2 33 7,3 ± 0,27.3±0.2 44 6,8 ± 0,16.8±0.1 5five 7,5 ± 0,67.5±0.6 66 6,8 ± 0,26.8±0.2 77 7,2 ± 0,17.2±0.1 8eight 7,0 ± 0,17.0±0.1

Хотя настоящее изобретение было описано со ссылкой на его конкретные варианты осуществления, специалисту в данной области будет понятно, что могут быть внесены различные изменения и могут быть заменены эквиваленты без отклонения от истинной сущности и объема изобретения. Кроме того, могут быть сделаны многие модификации для адаптации конкретной ситуации, вещества, рассматриваемой композиции, способа, стадии или стадий способа для задачи, существа и объема настоящего изобретения. Предполагается, что все такие модификации входят в объем прилагаемой формулы изобретения. Кроме того, все публикации, патенты и патентные документы, цитированные выше в данном контексте, включены в данное описание во всей своей полноте посредством ссылки, как если бы каждый из них был включен по отдельности посредством ссылки.While the present invention has been described with reference to specific embodiments thereof, one skilled in the art will appreciate that various changes may be made and equivalents may be substituted without departing from the true spirit and scope of the invention. In addition, many modifications can be made to adapt the particular situation, substance, composition in question, method, process step or steps for the object, spirit and scope of the present invention. All such modifications are intended to be within the scope of the appended claims. In addition, all publications, patents and patent documents cited above in this context, are incorporated into this description in their entirety by reference, as if each of them were included individually by reference.

Claims (89)

1. Способ получения соединения формулы J-15 или его соли:1. Method for preparing a compound of formula J-15 or a salt thereof:

где where X представляет собой Br; X is Br; PG¹ представляет собой защитную группу для карбоновой кислоты;PG ¹ is a protecting group for a carboxylic acid; PG² представляет собой аминозащитную группу; иPG ² is an amino protecting group; and PG³ представляет собой аминозащитную группу;PG ³ is an amino protecting group; включающий:including: (a) взаимодействие соединения формулы J-14:(a) reacting a compound of formula J-14:

или его соли с гидразином с получением соединения формулы J-15 иor its salt with hydrazine to give a compound of formula J-15 and (b) необязательно образование соли соединения J-15.(b) optionally forming a salt of compound J-15. 2. Способ по п. 1, где реакцию с гидразином проводят при 60±20°C.2. The method according to p. 1, where the reaction with hydrazine is carried out at 60±20°C. 3. Способ по любому из пп. 1 или 2, где3. The method according to any one of paragraphs. 1 or 2 where PG¹ представляет собой алкильную или бензильную группу, где бензильная группа является необязательно замещенной;PG ¹ is an alkyl or benzyl group, where the benzyl group is optionally substituted; PG² выбран из группы, состоящей из ацильной группы, алкоксикарбонильной группы, арилметильной группы и силильной группы; иPG ² is selected from the group consisting of an acyl group, an alkoxycarbonyl group, an arylmethyl group, and a silyl group; and PG³ выбран из группы, состоящей из ацильной группы, алкоксикарбонильной группы, арилметильной группы и силильной группы.PG ³ is selected from the group consisting of an acyl group, an alkoxycarbonyl group, an arylmethyl group, and a silyl group. 4. Способ по любому из пп. 1 или 2, где PG¹ представляет собой бензил, PG² представляет собой трет-бутоксикарбонил и PG³ представляет собой бензил.4. The method according to any one of paragraphs. 1 or 2, where PG ¹ is benzyl, PG ² is t-butoxycarbonyl and PG ³ is benzyl. 5. Способ по любому из пп. 1-4, где соединение J-14 или его соль получают:5. The method according to any one of paragraphs. 1-4, where the compound J-14 or its salt is obtained: (a) взаимодействием соединения формулы J-13:(a) reacting a compound of formula J-13:

где Y представляет собой уходящую группу, с соединением формулы J-11:where Y is a leaving group, with a compound of formula J-11:

в присутствии основания с получением J-14, и in the presence of a base to give J-14, and (b) необязательно образованием соли соединения J-14.(b) optionally forming a salt of compound J-14. 6. Способ по п. 5, где Y представляет собой Cl.6. The method according to p. 5, where Y represents Cl. 7. Соединение формулы J-14:7. Compound of formula J-14:

или его соль, где or its salt, where X представляет собой Br;X is Br; PG¹ представляет собой защитную группу для карбоновой кислоты;PG ¹ is a protecting group for a carboxylic acid; PG² представляет собой аминозащитную группу; и PG ² is an amino protecting group; and PG³ представляет собой аминозащитную группу.PG ³ is an amino protecting group. 8. Соединение по п. 7 или его соль, где 8. The compound according to claim 7 or its salt, where PG¹ представляет собой алкильную или бензильную группу, где бензильная группа является необязательно замещенной;PG ¹ is an alkyl or benzyl group, where the benzyl group is optionally substituted; PG² выбран из группы, состоящей из ацильной группы, алкоксикарбонильной группы, арилметильной группы и силильной группы; иPG ² is selected from the group consisting of an acyl group, an alkoxycarbonyl group, an arylmethyl group, and a silyl group; and PG³ выбран из группы, состоящей из ацильной группы, алкоксикарбонильной группы, арилметильной группы и силильной группы.PG ³ is selected from the group consisting of an acyl group, an alkoxycarbonyl group, an arylmethyl group, and a silyl group. 9. Соединение по п. 7, имеющее формулу I-14:9. The compound according to claim 7, having the formula I-14:

или его соль.or its salt. 10. Соединение формулы J-15:10. Compound of formula J-15:

или его соль, or its salt, где where X представляет собой Br;X is Br; PG¹ представляет собой защитную группу для карбоновой кислоты;PG ¹ is a protecting group for a carboxylic acid; PG² представляет собой аминозащитную группу; и PG ² is an amino protecting group; and PG³ представляет собой аминозащитную группу.PG ³ is an amino protecting group. 11. Соединение по п. 10 или его соль, где11. The compound according to claim 10 or its salt, where PG¹ представляет собой алкильную или бензильную группу, где бензильная группа является необязательно замещенной;PG ¹ is an alkyl or benzyl group, where the benzyl group is optionally substituted; PG² выбран из группы, состоящей из ацильной группы, алкоксикарбонильной группы, арилметильной группы и силильной группы; и PG ² is selected from the group consisting of an acyl group, an alkoxycarbonyl group, an arylmethyl group, and a silyl group; and PG³ выбран из группы, состоящей из ацильной группы, алкоксикарбонильной группы, арилметильной группы и силильной группы.PG ³ is selected from the group consisting of an acyl group, an alkoxycarbonyl group, an arylmethyl group, and a silyl group. 12. Соединение по п. 10, имеющее формулу I-15:12. The compound according to claim 10, having the formula I-15:

или его соль.or its salt. 13. Способ получения соединения формулы J-16 или его соли:13. Method for preparing a compound of formula J-16 or a salt thereof:

где where PG¹ представляет собой защитную группу для карбоновой кислоты;PG ¹ is a protecting group for a carboxylic acid; PG² представляет собой аминозащитную группу; PG ² is an amino protecting group; PG³ представляет собой аминозащитную группу; PG ³ is an amino protecting group; PG⁴ представляет собой гидроксилзащитную группу; иPG ⁴ is a hydroxyl protecting group; and R представляет собой H или F;R is H or F; включающий:including: (a) взаимодействие соединения формулы J-13:(a) reacting a compound of formula J-13:

где X представляет собой Br и Y представляет собой уходящую группу; с соединением формулы J-11:where X is Br and Y is a leaving group; with a compound of formula J-11:

в присутствии основания, с получением соединения формулы J-14:in the presence of a base, to give a compound of formula J-14:

и необязательно образование соли соединения J-14;and optionally forming a salt of compound J-14; (b) взаимодействие соединения формулы J-14 или его соли с гидразином с получением соединения формулы J-15:(b) reacting a compound of formula J-14 or a salt thereof with hydrazine to give a compound of formula J-15:

и необязательно образование соли соединения J-15;and optionally forming a salt of compound J-15; (c) взаимодействие соединения формулы J-15 или его соли с соединением формулы J-5:(c) reacting a compound of formula J-15 or a salt thereof with a compound of formula J-5:

J-5J-5 в присутствии основания, палладиевого катализатора и фосфинового лиганда с получением соединения формулы J-16 и необязательно образование соли соединения J-16.in the presence of a base, a palladium catalyst and a phosphine ligand to give a compound of formula J-16, and optionally forming a salt of compound J-16. 14. Способ по п. 13, где стадию (c) проводят в присутствии диборонового реагента или катализатора.14. The method of claim 13 wherein step (c) is carried out in the presence of a diboronic reagent or catalyst. 15. Способ по п. 14, где стадию (c) проводят в присутствии тетрагидроксидиборона, сложного эфира дибороновой кислоты или продукта реакции бис(пинаколато)диборона с гидрофторидом фторида калия.15. The process of claim 14, wherein step (c) is carried out in the presence of tetrahydroxydiborone, a diboronic acid ester, or the reaction product of bis(pinacolato)diborone with potassium fluoride hydrofluoride. 16. Способ по любому из пп. 13-15, где взаимодействие с гидразином на стадии (b) проводят при 60±20°C.16. The method according to any one of paragraphs. 13-15, where the interaction with hydrazine in step (b) is carried out at 60±20°C. 17. Способ по любому из пп. 13-16, где17. The method according to any one of paragraphs. 13-16, where PG¹ представляет собой алкильную или бензильную группу, где бензильная группа является необязательно замещенной;PG ¹ is an alkyl or benzyl group, where the benzyl group is optionally substituted; PG² выбран из группы, состоящей из ацильной группы, алкоксикарбонильной группы, арилметильной группы и силильной группы; PG ² is selected from the group consisting of an acyl group, an alkoxycarbonyl group, an arylmethyl group, and a silyl group; PG³ выбран из группы, состоящей из ацильной группы, алкоксикарбонильной группы, арилметильной группы и силильной группы;PG ³ is selected from the group consisting of an acyl group, an alkoxycarbonyl group, an arylmethyl group, and a silyl group; PG⁴ выбран из группы, состоящей из силильной группы, ацильной группы и арилметильной группы.PG ⁴ is selected from the group consisting of a silyl group, an acyl group and an arylmethyl group. 18. Способ по любому из пп. 13-16, где PG¹ представляет собой бензил, PG² представляет собой трет-бутоксикарбонил, PG³ представляет собой бензил и PG⁴ представляет собой бензил.18. The method according to any one of paragraphs. 13-16, where PG ¹ is benzyl, PG ² is t-butoxycarbonyl, PG ³ is benzyl, and PG ⁴ is benzyl. 19. Способ по любому из пп. 13-18, где Y представляет собой Cl.19. The method according to any one of paragraphs. 13-18, where Y is Cl. 20. Способ по любому из пп. 13-19, где палладиевый катализатор и фосфиновый лиганд стадии (c) представляют собой бис(ди-трет-бутил(4-диметиламинофенил)фосфин)дихлорпалладий (II).20. The method according to any one of paragraphs. 13-19, wherein the palladium catalyst and the phosphine ligand of step (c) are bis(di-tert-butyl(4-dimethylaminophenyl)phosphine)dichloropalladium (II).