RU2782620C1 - Method for quantifying syringin in the bark of common lilac - Google Patents
Method for quantifying syringin in the bark of common lilac Download PDFInfo
- Publication number
- RU2782620C1 RU2782620C1 RU2021125863A RU2021125863A RU2782620C1 RU 2782620 C1 RU2782620 C1 RU 2782620C1 RU 2021125863 A RU2021125863 A RU 2021125863A RU 2021125863 A RU2021125863 A RU 2021125863A RU 2782620 C1 RU2782620 C1 RU 2782620C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- syringin
- solution
- bark
- sample
- raw materials
- Prior art date
Links
- QJVXKWHHAMZTBY-GCPOEHJPSA-N Syringin Chemical compound COC1=CC(\C=C\CO)=CC(OC)=C1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 QJVXKWHHAMZTBY-GCPOEHJPSA-N 0.000 title claims abstract description 80
- QJVXKWHHAMZTBY-NUUCXFROSA-N Syringin Natural products O(C)c1c(O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O2)c(OC)cc(/C=C/CO)c1 QJVXKWHHAMZTBY-NUUCXFROSA-N 0.000 title claims abstract description 79
- 235000004338 Syringa vulgaris Nutrition 0.000 title claims abstract description 31
- 240000004203 Syringa vulgaris Species 0.000 title claims abstract description 28
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims abstract description 26
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 20
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 claims abstract description 16
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 15
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims abstract description 15
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 14
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 10
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims abstract description 8
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 claims abstract description 8
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 8
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims abstract description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims abstract 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 24
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 claims description 10
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 8
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 claims description 4
- 230000001488 breeding Effects 0.000 claims 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 claims 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 4
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 abstract description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 abstract description 3
- 238000005039 chemical industry Methods 0.000 abstract description 2
- 238000005020 pharmaceutical industry Methods 0.000 abstract description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 abstract 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 21
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 5
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 5
- 241001104043 Syringa Species 0.000 description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 4
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 241001632410 Eleutherococcus senticosus Species 0.000 description 3
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 3
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 3
- 241000208340 Araliaceae Species 0.000 description 2
- 229910000831 Steel Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000000538 analytical sample Substances 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 229940079593 drugs Drugs 0.000 description 2
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000017807 phytochemicals Nutrition 0.000 description 2
- 229930000223 plant secondary metabolites Natural products 0.000 description 2
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 2
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 2
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 239000010959 steel Substances 0.000 description 2
- 239000012085 test solution Substances 0.000 description 2
- 241000931365 Ampelodesmos mauritanicus Species 0.000 description 1
- 241000490050 Eleutherococcus Species 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 241000764773 Inna Species 0.000 description 1
- 210000000440 Neutrophils Anatomy 0.000 description 1
- 241000207834 Oleaceae Species 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 1
- 125000000490 cinnamyl group Chemical group C(C=CC1=CC=CC=C1)* 0.000 description 1
- 230000000875 corresponding Effects 0.000 description 1
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 150000002338 glycosides Chemical class 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 238000010829 isocratic elution Methods 0.000 description 1
- 239000005445 natural product Substances 0.000 description 1
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 1
- -1 octadecyl silica gel Chemical compound 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 150000002989 phenols Chemical class 0.000 description 1
- 229930000044 secondary metabolites Natural products 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000003595 spectral Effects 0.000 description 1
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010935 stainless steel Substances 0.000 description 1
- 238000010200 validation analysis Methods 0.000 description 1
Images
Abstract
Description
Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и может быть использовано в центрах контроля качества лекарственных средств и контрольно-аналитических лабораториях при проведении анализа содержания сирингина в коре сирени обыкновенной.The invention relates to the chemical and pharmaceutical industry and can be used in quality control centers for medicines and control and analytical laboratories when analyzing the content of syringin in the bark of common lilac.
Действующая система контроля качества требует постоянного усовершенствования подходов к стандартизации биологически активных соединений (БАС) с использованием современных методов анализа и актуальных данных об физико-химических, спектральных и фармакологических свойствах, позволяющих дифференцированно определять конкретные БАС. The current quality control system requires continuous improvement of approaches to the standardization of biologically active compounds (BAS) using modern methods of analysis and up-to-date data on physicochemical, spectral and pharmacological properties, which make it possible to differentiate specific BAS.
Сирень обыкновенная (Syringa vulgaris L., сем. Маслинные - Oleaceae) – листопадный кустарник, культивируется как декоративное растение, но известно своими лечебными свойствами (1-4). При фитохимическом изучении учеными СамГМУ и ВИЛАР выявлено, что доминирующим биологическим активным соединением коры сирени является циннамилгликозид сирингин (2,3,5). В официальной медицине кора сирени обыкновенной используется в качестве сырья для получения государственного стандартного образца элеутерозида В (сирингина) (ВФС 42-2088-92 «Cирингин-стандартный образец»), используемого при оценке качества корневищ и корней элеутерококка колючего (Eleutherococcus senticosus Maxim, сем. Аралиевые – Araliaceae), лекарственных препаратов и биологически активных добавок на основе сырья элеутерококка колючего (2, 5). Common lilac ( Syringa vulgaris L., family Oleaceae ) is a deciduous shrub, cultivated as an ornamental plant, but known for its medicinal properties (1-4). During a phytochemical study by scientists of the Samara State Medical University and VILAR, it was revealed that the dominant biologically active compound of the lilac bark is cinnamyl glycoside syringin (2,3,5). In official medicine, common lilac bark is used as a raw material for obtaining the state standard sample of eleutheroside B (syringin) (VFS 42-2088-92 "Siringin-standard sample"), used in assessing the quality of rhizomes and roots of Eleutherococcus senticosus Maxim, a family . Araliaceae - Araliaceae ), drugs and dietary supplements based on raw materials of Eleutherococcus senticosus (2, 5).
Для определения содержания сирингина в коре сирени используются спектрофотометрические, хроматоспектрофотометрические методы, метод высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) (2,5).To determine the content of syringin in lilac bark, spectrophotometric, chromatospectrophotometric methods, and high performance liquid chromatography (HPLC) are used (2.5).
В качестве прототипа нами взят фармакопейный способ определения сирингина в корневищах и корнях элеутерококка колючего (6). Способ предусматривает дробную экстракцию сирингина с использованием в качестве экстрагента 96 % этанолом при нагревании с обратным холодильником на водяной бане. ВЭЖХ-анализ содержания сирингина проводится в следующих условиях (6): As a prototype, we took the pharmacopoeial method for determining syringin in the rhizomes and roots of Eleutherococcus senticosus (6). The method involves fractional extraction of syringin using 96% ethanol as an extractant under reflux in a water bath. HPLC analysis of syringin content is carried out under the following conditions (6):
- колонка из нержавеющей стали 250×4,6 мм, эндкепированный октадецилсиликагель для хроматографии, диаметр 5 мкм, - stainless steel column 250×4.6 mm, endcapped octadecyl silica gel for chromatography, diameter 5 µm,
- элюирование в градиентном режиме, подвижная фаза – раствор фосфорной кислоты концентрированной в воде и ацетонитрил для хроматографии в разных соотношениях.- elution in a gradient mode, the mobile phase is a solution of concentrated phosphoric acid in water and acetonitrile for chromatography in different ratios.
- детекция при длине волны 266 нм. - detection at a wavelength of 266 nm.
Продолжительность анализа может составлять до 45 мин.The duration of the analysis can be up to 45 minutes.
На наш взгляд, используемые в прототипе параметры экстракции не позволяют обеспечить высокий выход сирингина, так как сирингин мало и медленно растворим в 95 % этаноле (2,3).In our opinion, the extraction parameters used in the prototype do not allow for a high yield of syringin, since syringin is slightly and slowly soluble in 95% ethanol (2,3).
Кроме этого, известно, что при градиентном режиме корректировка условий является более критичной, может привести к некорректной идентификации пиков, их наложению или сдвигам, при которых интересующие вещества могут выйти после указанного времени регистрации хроматограммы (7).In addition, it is known that in the gradient mode, the adjustment of conditions is more critical, it can lead to incorrect identification of peaks, their overlap or shifts, in which substances of interest can exit after the specified time of registration of the chromatogram (7).
Таким образом, целью изобретения является разработка нового способа определения количественного содержания сирингина в коре сирени обыкновенной с увеличенным выходом сирингина и меньшей продолжительностью анализа при сохранении правильности, специфичности и прецизионности метода.Thus, the aim of the invention is to develop a new method for determining the quantitative content of syringin in the bark of the common lilac with an increased yield of syringin and a shorter duration of analysis while maintaining the correctness, specificity and precision of the method.
Техническим результатом является увеличение выхода сирингина и уменьшение продолжительности способа количественного определения сирингина в коре сирени обыкновенной.The technical result is an increase in the yield of syringin and a decrease in the duration of the method for the quantitative determination of syringin in the bark of common lilac.
Технический результат достигается тем, что способ осуществляют путем экстракции сирингина из коры сирени обыкновенной 70 % этиловым спиртом, ВЭЖХ-анализа полученных извлечений в изократическом режиме элюирования с использованием в качестве подвижной фазы смеси ацетонитрила и 1% раствора уксусной кислоты в воде в соотношении 15:85 и детекцией при длине волны 266 нм. The technical result is achieved by the fact that the method is carried out by extracting syringin from the bark of common lilac with 70% ethyl alcohol, HPLC analysis of the obtained extracts in isocratic elution mode using a mixture of acetonitrile and 1% acetic acid solution in water as a mobile phase in a ratio of 15:85 and detection at a wavelength of 266 nm.
Содержание сирингина в коре сирени обыкновенной в пересчете на абсолютно сухое сырье в процентах (X) вычисляют по формулеThe content of syringin in the bark of common lilac in terms of absolutely dry raw materials in percent ( X ) is calculated by the formula
где H – среднее значение высоты пика сирингина, вычисленное из хроматограмм раствора испытуемого образца;where H is the average value of the height of the syringin peak, calculated from the chromatograms of the test sample solution;
Hо – среднее значение высоты пика сирингина, вычисленное из хроматограмм раствора стандартного образца сирингина;H o is the average height of the syringin peak, calculated from the chromatograms of the syringin standard sample solution;
V – объем извлечения, мл;V is the volume of extraction, ml;
P – разведение; P - dilution;
Vо – объем раствора стандартного образца сирингина, мл,V o is the volume of the solution of the standard sample of syringin, ml,
V1 – объем вводимой пробы раствора испытуемого образца, мкл;V 1 - the volume of the injected sample of the solution of the test sample, μl;
V2 – объем вводимой пробы раствора стандартного образца сирингина, мкл;V 2 - the volume of the injected sample of the solution of the standard sample of syringin, µl;
mо – масса стандартного образца, г;m o is the mass of the standard sample, g;
m – масса сырья, г;m is the mass of raw materials, g;
W – потеря в массе при высушивании сырья, в процентах;W - weight loss during drying of raw materials, in percent;
0,95 – коэффициент пересчета сирингина на безводное вещество.0.95 is the conversion factor for syringin to an anhydrous substance.
Способ осуществляют следующим образом. Аналитическую пробу сырья измельчают до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 1 мм. Около 1 г измельченного сырья (точная навеска) помещают в колбу со шлифом вместимостью 100 мл, прибавляют 30 мл 70% этилового спирта. Колбу закрывают пробкой и взвешивают на весах с точностью до ±0,01 г. Колбу присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане (умеренное кипение) в течение 60 мин. Затем колбу охлаждают в течение 30 мин, закрывают той же пробкой, снова взвешивают и восполняют недостающий экстрагент до первоначальной массы. Извлечение фильтруют через бумажный фильтр (раствор А). 5 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, доводят водой очищенной до метки (раствор В).The method is carried out as follows. An analytical sample of raw materials is crushed to the size of particles passing through a sieve with holes with a diameter of 1 mm. About 1 g of crushed raw material (accurately weighed) is placed in a flask with a thin section with a capacity of 100 ml, 30 ml of 70% ethyl alcohol is added. Stopper the flask and weigh on a balance to the nearest ±0.01 g. Attach the flask to a reflux condenser and heat in a boiling water bath (moderate reflux) for 60 minutes. Then the flask is cooled for 30 min, closed with the same stopper, weighed again, and the missing extractant is replenished to the original weight. The extract is filtered through a paper filter (solution A). 5 ml of the resulting solution is placed in a volumetric flask with a capacity of 25 ml, adjusted with purified water to the mark (solution B).
1 мкл раствора В вводят в жидкостной хроматограф «Милихром-6» с УФ-детектором. Хроматографируют в условиях обращенно-фазовой хроматографии в изократическом режиме: стальная колонка «КАХ-6-80-4» (2 мм х 80 мм; Separon-C18, диаметр 5 мкм), подвижная фаза – ацетонитрил : 1% раствор уксусной кислоты в воде в соотношении 15:85, скорость элюирования – 100 мкл/мин, объем элюента - 1000 мкл.1 µl of solution B is injected into a Milichrom-6 liquid chromatograph with a UV detector. Chromatographed under conditions of reversed-phase chromatography in isocratic mode: steel column "KAH-6-80-4" (2 mm x 80 mm; Separon-C18, diameter 5 μm), mobile phase - acetonitrile: 1% solution of acetic acid in water in a ratio of 15:85, elution rate - 100 µl/min, eluent volume - 1000 µl.
Проводят УФ-детектирование при длине волны 266 нм, диапазон чувствительности 0,5. Проводят не менее 3 параллельных определений.Conduct UV detection at a wavelength of 266 nm, the sensitivity range of 0.5. Conduct at least 3 parallel determinations.
Параллельно 1 мкл раствора стандартного образца сирингина вводят в хроматограф и хроматографируют, как описано выше. Проводят определение высоты пика сирингина и рассчитывают среднюю высоту пика по результатам трех параллельных определений.In parallel, 1 µl of the syringin standard solution is injected into the chromatograph and chromatographed as described above. The height of the syringin peak is determined and the average peak height is calculated from the results of three parallel determinations.
Содержание сирингина в коре сирени обыкновенной в пересчете на абсолютно сухое сырье в процентах (X) вычисляют по формулеThe content of syringin in the bark of common lilac in terms of absolutely dry raw materials in percent ( X ) is calculated by the formula
где H – среднее значение высоты пика сирингина, вычисленное из хроматограмм раствора испытуемого образца;where H is the average value of the height of the syringin peak, calculated from the chromatograms of the test sample solution;
Hо – среднее значение высоты пика сирингина, вычисленное из хроматограмм раствора стандартного образца сирингина;H o is the average height of the syringin peak, calculated from the chromatograms of the syringin standard sample solution;
V – объем извлечения, мл;V is the volume of extraction, ml;
P – разведение; P - dilution;
Vо – объем раствора стандартного образца сирингина, мл,V o is the volume of the solution of the standard sample of syringin, ml,
V1 – объем вводимой пробы раствора испытуемого образца, мкл;V 1 - the volume of the injected sample of the solution of the test sample, μl;
V2 – объем вводимой пробы раствора стандартного образца сирингина, мкл;V 2 - the volume of the injected sample of the solution of the standard sample of syringin, µl;
mо – масса стандартного образца, г;m o is the mass of the standard sample, g;
m – масса сырья, г;m is the mass of raw materials, g;
W – потеря в массе при высушивании сырья, в процентах;W - weight loss during drying of raw materials, in percent;
0,95 – коэффициент пересчета сирингина на безводное вещество.0.95 is the conversion factor for syringin to an anhydrous substance.
Примечание: Приготовление раствора стандартного образца сирингина. Около 0,025 г (точная навеска) государственного стандартного образца сирингина (содержание основного вещества ≥95 %) помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, растворяют в небольшом количестве 95% этилового спирта при нагревании на водяной бане, доводят 95% этиловым спиртом до метки, перемешивают. Note: Preparation of syringin standard sample solution. About 0.025 g (accurately weighed) of the state standard sample of syringin (content of the main substance ≥95%) is placed in a volumetric flask with a capacity of 50 ml, dissolved in a small amount of 95% ethyl alcohol when heated in a water bath, brought to the mark with 95% ethyl alcohol, mixed .
Валидационная оценка разработанной методики проводилась по показателям: специфичность, линейность, правильность (открываемость), прецизионность. Специфичность методики определялась по соответствию времен удерживания стандартного образца сирингина и соответствующего пика на ВЭЖХ-хроматограмме испытуемого раствора, а также по разрешению между наиболее близкими пиками и фактору асимметрии пиков сирингина.The validation evaluation of the developed methodology was carried out according to the following indicators: specificity, linearity, correctness (openness), precision. The specificity of the method was determined by the correspondence between the retention times of the standard sample of syringin and the corresponding peak on the HPLC chromatogram of the test solution, as well as by the resolution between the closest peaks and the asymmetry factor of the syringin peaks.
На фиг. 1 представлена ВЭЖХ-хроматограмма стандартного раствора сирингина, на фиг. 2 – ВЭЖХ-хроматограмма водно-спиртового извлечения из коры сирени обыкновенной (обозначения: 1 – водно-спиртовое извлечение из коры сирени обыкновенной; 2 – стандартный образец сирингина). В условиях ВЭЖХ-анализа время удерживания пика сирингина на хроматограммах стандартного образца сирингина и водно-спиртового извлечения из коры сирени обыкновенной составило 4,046±0,070 мин и 4,092±0,082 мин соответственно.In FIG. 1 shows the HPLC chromatogram of a standard solution of syringin, FIG. 2 – HPLC-chromatogram of water-alcohol extract from common lilac bark (symbols: 1 – water-alcohol extract from common lilac bark; 2 – standard sample of syringin). Under the conditions of HPLC analysis, the retention time of the syringin peak on the chromatograms of the standard sample of syringin and water-alcohol extract from the bark of common lilac was 4.046±0.070 min and 4.092±0.082 min, respectively.
Определение линейности проводили на пяти уровнях концентраций растворов сирингина (с концентрациями в диапазоне от 0,3424 до 0,5136 мг/мл). Коэффициент корреляции составил 0,99971. Этот диапазон можно рассматривать как аналитическую область методики.Linearity was determined at five concentration levels of syringin solutions (with concentrations ranging from 0.3424 to 0.5136 mg/ml). The correlation coefficient was 0.99971. This range can be considered as the analytical area of the technique.
Правильность методики определяли методом добавок путем добавления раствора сирингина с известной концентрацией (80 %, 100 % и 120 %) к испытуемому раствору. При этом средний процент открываемости составил 98,8 %. The correctness of the technique was determined by the method of additions by adding a solution of syringin with a known concentration (80%, 100% and 120%) to the test solution. At the same time, the average open rate was 98.8%.
Исследование внутренней прецизионности методики указывает на сходимость полученных концентраций анализируемого вещества: ошибка определения среднего результата содержания сирингина в коре сирени обыкновенной с доверительной вероятностью 95 % составляла ±3,20 %. При оценке внутрилабораторной прецизионности также показаны удовлетворительные результаты, так как относительная погрешность определения сирингина в первый и второй дни анализа находится в диапазоне от 0,82 % до 1,20 %.The study of the internal precision of the method indicates the convergence of the obtained concentrations of the analyte: the error in determining the average result of the content of syringin in the bark of common lilac with a confidence probability of 95% was ±3.20%. When evaluating the intralaboratory precision, satisfactory results were also shown, since the relative error in the determination of syringin on the first and second days of analysis is in the range from 0.82% to 1.20%.
Нами было также изучено влияние экстрагента на процесс экстракции. В таблице 1 представлено влияние различных параметров экстракции (экстрагент, продолжительность экстракции, соотношение «сырье-экстрагент») на полноту извлечения сирингина из коры сирени обыкновенной. В результате эксперимента было определено, что оптимальными параметрами экстракции являются: однократное извлечение 70 % этиловым спиртом на кипящей водяной бане в течение 60 минут в соотношении «сырье-экстрагент» - 1:30.We also studied the effect of the extractant on the extraction process. Table 1 shows the effect of various extraction parameters (extractant, extraction duration, raw material-extractant ratio) on the completeness of syringin extraction from common lilac bark. As a result of the experiment, it was determined that the optimal extraction parameters are: a single extraction with 70% ethyl alcohol in a boiling water bath for 60 minutes in the ratio of "raw material-extractant" - 1:30.
Учитывая, что увеличение числа операций на стадии пробоподготовки ведет к возрастанию ошибки, выбор сделан в пользу одностадийного процесса экстракции с подтверждением требуемой точности количественного определения. Taking into account that an increase in the number of operations at the stage of sample preparation leads to an increase in the error, the choice was made in favor of a single-stage extraction process with confirmation of the required accuracy of quantitative determination.
Предлагаемый способ поясняется следующим примером. The proposed method is illustrated by the following example.
Пример. Example.
Аналитическую пробу сырья измельчают до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 1 мм. Около 1 г измельченного сырья (точная навеска) помещают в колбу со шлифом вместимостью 100 мл, прибавляют 30 мл 70% этилового спирта. Колбу закрывают пробкой и взвешивают на весах с точностью до ±0,01 г. Колбу присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане (умеренное кипение) в течение 60 мин. Затем колбу охлаждают в течение 30 мин, закрывают той же пробкой, снова взвешивают и восполняют недостающий экстрагент до первоначальной массы. Извлечение фильтруют через бумажный фильтр (раствор А). 5 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, доводят водой очищенной до метки (раствор В).An analytical sample of raw materials is crushed to the size of particles passing through a sieve with holes with a diameter of 1 mm. About 1 g of crushed raw material (accurately weighed) is placed in a flask with a thin section with a capacity of 100 ml, 30 ml of 70% ethyl alcohol is added. Stopper the flask and weigh on a balance to the nearest ±0.01 g. Attach the flask to a reflux condenser and heat in a boiling water bath (moderate reflux) for 60 minutes. Then the flask is cooled for 30 min, closed with the same stopper, weighed again, and the missing extractant is replenished to the original weight. The extract is filtered through a paper filter (solution A). 5 ml of the resulting solution is placed in a volumetric flask with a capacity of 25 ml, adjusted with purified water to the mark (solution B).
1 мкл раствора В вводят в жидкостной хроматограф «Милихром-6» с УФ-детектором. Хроматографируют в условиях обращенно-фазовой хроматографии в изократическом режиме: стальная колонка «КАХ-6-80-4» (2 мм х 80 мм; Separon-C18, диаметр 5 мкм), подвижная фаза – ацетонитрил : 1% раствор уксусной кислоты в воде в соотношении 15:85, скорость элюирования – 100 мкл/мин, объем элюента - 1000 мкл.1 µl of solution B is injected into a Milichrom-6 liquid chromatograph with a UV detector. Chromatographed under conditions of reversed-phase chromatography in isocratic mode: steel column "KAH-6-80-4" (2 mm x 80 mm; Separon-C18, diameter 5 μm), mobile phase - acetonitrile: 1% solution of acetic acid in water in a ratio of 15:85, elution rate - 100 µl/min, eluent volume - 1000 µl.
Проводят УФ-детектирование при длине волны 266 нм, диапазон чувствительности 0,5. Проводят не менее 3 параллельных определений.Conduct UV detection at a wavelength of 266 nm, the sensitivity range of 0.5. Conduct at least 3 parallel determinations.
Параллельно 1 мкл раствора стандартного образца сирингина вводят в хроматограф и хроматографируют, как описано выше. Проводят определение высоты пика сирингина и рассчитывают среднюю высоту пика по результатам трех параллельных определений.In parallel, 1 µl of the syringin standard solution is injected into the chromatograph and chromatographed as described above. The height of the syringin peak is determined and the average peak height is calculated from the results of three parallel determinations.
Содержание сирингина в коре сирени обыкновенной в пересчете на абсолютно сухое сырье в процентах (X, %) вычисляют по формулеThe content of syringin in the bark of common lilac in terms of absolutely dry raw materials in percent ( X, % ) is calculated by the formula
где H = 472,7941 – среднее значение высоты пика сирингина, вычисленное из хроматограмм раствора испытуемого образца;where H = 472.7941 is the average height of the syringin peak calculated from the chromatograms of the test sample solution;
Hо = 327,3610 – среднее значение высоты пика сирингина, вычисленное из хроматограмм раствора стандартного образца сирингина;H o = 327.3610 is the average value of the syringin peak height calculated from the chromatograms of the syringin standard sample solution;
m = 1,0510 – масса сырья, г;m = 1.0510 is the mass of raw materials, g;
mо = 0,0249 – масса стандартного образца, г;m o = 0.0249 is the mass of the standard sample, g;
W = 11 – потеря в массе при высушивании сырья, в процентах;W = 11 - weight loss during drying of raw materials, in percent;
Примечание: Приготовление раствора стандартного образца сирингина. Около 0,025 г (точная навеска) государственного стандартного образца сирингина (содержание основного вещества ≥95%) помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, растворяют в небольшом количестве 95% этилового спирта при нагревании на водяной бане, доводят 95% этиловым спиртом до метки, перемешивают. Note: Preparation of syringin standard sample solution. About 0.025 g (accurately weighed) of the state standard sample of syringin (content of the main substance ≥95%) is placed in a volumetric flask with a capacity of 50 ml, dissolved in a small amount of 95% ethyl alcohol when heated in a water bath, brought to the mark with 95% ethyl alcohol, mixed .
Испытание проведено в трех повторностях. Все данные были статистически обработаны. Содержание сирингина составило 5,01 % ± 0,18 %.The test was carried out in triplicate. All data were statistically processed. The content of syringin was 5.01% ± 0.18%.
Таким образом, предлагаемый способ количественного определения сирингина в коре сирени обыкновенной обладает следующими преимуществами:Thus, the proposed method for the quantitative determination of syringin in the bark of common lilac has the following advantages:
1. Элюирование в изократическом режиме позволяет избежать проблем (некорректная идентификация пиков, их наложение или сдвиги, при которых интересующие вещества могут выйти после указанного времени регистрации хроматограммы), возникающих при проведении хроматографического анализа в градиентном режиме.1. Elution in isocratic mode avoids problems (incorrect peak identification, peak overlap, or shifts in which substances of interest can exit after the specified chromatogram acquisition time) that occur when performing chromatographic analysis in gradient mode.
2. Продолжительность хроматографического анализа составляет 10 мин по сравнению с 45 мин в прототипе. 2. The duration of the chromatographic analysis is 10 minutes compared to 45 minutes in the prototype.
3. Использование в разработанном способе 70 % этилового спирта позволяет повысить эффективность экстракции в 2 раза (при сравнении результатов анализа сирингина при использовании в качестве экстрагентов 70 % этанола и 95 % этанола, как в прототипе) (таблица 1).3. The use of 70% ethanol in the developed method makes it possible to increase the extraction efficiency by 2 times (when comparing the results of the analysis of syringin when using 70% ethanol and 95% ethanol as extractants, as in the prototype) (table 1).
4. Ошибка определения среднего результата содержания сирингина с доверительной вероятностью 95 % составляет +3,20 %, что свидетельствует о высокой воспроизводимости методики.4. The error in determining the average result of the syringin content with a confidence probability of 95% is + 3.20%, which indicates a high reproducibility of the technique.
ИСТОЧНИКИ ИНФОРМАЦИИSOURCES OF INFORMATION
1. Спиридович, Е.В. Анализ вторичных метаболитов в коре видов рода сирень (Syringa L.), интродуцированных в Центральном ботаническом саду НАН Беларуси / Е.В. Спиридонович, П.С. Шабуня, С.А. Фатыхова и др. // Вестник фармации. – 2018. – Т. 82, № 4. – С. 28-37.1. Spiridovich, E.V. Analysis of secondary metabolites in the bark of species of the genus lilac ( Syringa L.) introduced in the Central Botanical Garden of the National Academy of Sciences of Belarus / E.V. Spiridonovich, P.S. Shabunya, S.A. Fatykhova and others // Bulletin of Pharmacy. - 2018. - T. 82, No. 4. - S. 28-37.
2. Климова, И.Ю. Аналитические и технические исследования по разработке новых препаратов на основе коры сирени обыкновенной / Инна Юрьевна Климова // Дисс. на соискание … уч. степени канд. фармац. наук. – Самара, 2005. – 159 с.2. Klimova, I.Yu. Analytical and technical research on the development of new drugs based on the bark of common lilac / Inna Yurievna Klimova // Diss. for the competition ... account. degree cand. pharmaceutical Sciences. - Samara, 2005. - 159 p.
3. Куркин, В.А., Фенольные соединения коры Syringa vulgaris / В.А. Куркин, Г.Г. Запесочная, Н.А. Гриненко и др. // Химия природных соединений. – 1989. - № 4. – С. 581–582.3. Kurkin, V.A., Phenolic compounds of the bark of Syringa vulgaris / V.A. Kurkin, G.G. Zapesochnaya, N.A. Grinenko et al. // Chemistry of natural compounds. - 1989. - No. 4. - S. 581–582.
4. Woźniak, M. Effects of phytochemically characterized extracts from Syringa vulgaris and isolated secoiridoids on mediators of inflammation in a human neutrophil model / M. Woźniak, B. Michalak, J. Wyszomierska et al. // Front. Pharmacol. – 2018. – Vol. 9. – P. 349. doi: 10.3389/fphar.2018.00349.4. Woźniak, M. Effects of phytochemically characterized extracts from Syringa vulgaris and isolated secoiridoids on mediators of inflammation in a human neutrophil model / M. Woźniak, B. Michalak, J. Wyszomierska et al. // front. Pharmacol. - 2018. - Vol. 9. – P. 349. doi: 10.3389/fphar.2018.00349.
5. Авдеева, Е.В. Фитохимические и аналитические исследования по созданию галеновых препаратов на основе лекарственного растительного сырья, содержащего производные коричных спиртов / Е.В. Авдеева // Вестник Воронежского государственного университета. Серия: Химия. Биология. Фармация. – 2007. – № 2. – С. 129-136.5. Avdeeva E.V. Phytochemical and analytical studies on the creation of galenic preparations based on medicinal plant raw materials containing derivatives of cinnamic alcohols / E.V. Avdeeva // Bulletin of the Voronezh State University. Series: Chemistry. Biology. Pharmacy. - 2007. - No. 2. - S. 129-136.
6. ФС.2.5.0053.15 Элеутерококка колючего корневища и корни (Eleutherococci senticosi rhizomata et radices) / Государственная фармакопея Российской Федерации. XIV изд., Т. IV. – Министерство здравоохранения Российской Федерации, 2018. URL: http://resource.rucml.ru/feml/pharmacopia/14_4/HTML/1467/index.html#zoom=z.6. FS.2.5.0053.15 Eleutherococcus prickly rhizome and roots ( Eleutherococci senticosi rhizomata et radices ) / State Pharmacopoeia of the Russian Federation. XIV ed., Vol. IV. – Ministry of Health of the Russian Federation, 2018. URL: http://resource.rucml.ru/feml/pharmacopia/14_4/HTML/1467/index.html#zoom=z.
7. ОФС.1.2.1.2.0001.15 Хроматография / Государственная фармакопея Российской Федерации. XIV изд. – Министерство здравоохранения Российской Федерации, 2018. URL: http://www.femb.ru/femb/pharmacopea.php.7. OFS.1.2.1.2.0001.15 Chromatography / State Pharmacopoeia of the Russian Federation. XIV ed. – Ministry of Health of the Russian Federation, 2018. URL: http://www.femb.ru/femb/pharmacopea.php.
Claims (13)
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2782620C1 true RU2782620C1 (en) | 2022-10-31 |
Family
ID=
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2796764C1 (en) * | 2022-10-26 | 2023-05-29 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Самарский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Method for quantitative determination of eleutheroside in rhizomes and roots of eleutherococcus senticosus |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101643484A (en) * | 2008-08-06 | 2010-02-10 | 苑立超 | High-purity syringin, preparation method and application |
| UA53596U (en) * | 2010-04-19 | 2010-10-11 | Виктория Сергеевна Кисличенко | Method for identification and quantitative determination of syringine (eleuterozide b) and flavonoids in biologically active substances of plant origin |
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101643484A (en) * | 2008-08-06 | 2010-02-10 | 苑立超 | High-purity syringin, preparation method and application |
| UA53596U (en) * | 2010-04-19 | 2010-10-11 | Виктория Сергеевна Кисличенко | Method for identification and quantitative determination of syringine (eleuterozide b) and flavonoids in biologically active substances of plant origin |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| KURKIN V. A. et al. TLC AND HPLC ANALYSIS OF SYRINGIN IN Syringa vulgaris //All-Union Scientific-Research Institute of Medicinal Plants Scientific-Production Com- bine, Moscow. Translated from Khimiya Prirodnykh Soedinenii, No. i, pp. 45-49, January- February, 1992. Original article submitted March 27, 1991. Госуд. система санитарно-эпидемиологич. нормирования РФ. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Руководство по методам контроля качества и безопасности Биологически активных добавок к пище. Руководство Р 4.1.1672-03.;14. Определение содержания элеутерозида В (сирингина) в БАД, содержащих элеутерококк колючий. //М.: Федеральный центр Госсанэпиднадзора Минздрава России, 2004, https://web.archive.org/web/20161121224653/https://files.stroyinf.ru/Data2/1/4293855/4293855460.htm;Руководство Р 4.1.1672-03. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2796764C1 (en) * | 2022-10-26 | 2023-05-29 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Самарский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Method for quantitative determination of eleutheroside in rhizomes and roots of eleutherococcus senticosus |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US20230213487A1 (en) | Fingerprint Detection Method for Pharmaceutical Preparation | |
| CN109596751B (en) | Mailuoning oral liquid component detection method for clearing heat, nourishing yin, promoting blood circulation and removing blood stasis | |
| CN105467059A (en) | Quality detecting method for traditional Chinese medicine composition for treating hematuresis | |
| Sultan et al. | Phytochemical studies for quantitative estimation of iridoid glycosides in Picrorhiza kurroa Royle | |
| Xie et al. | Simultaneous determination of six main components in Bushen Huoxue prescription by HPLC-CAD | |
| Yu et al. | Simultaneous quantification of eight organic acid components in Artemisia capillaris Thunb (Yinchen) extract using high-performance liquid chromatography coupled with diode array detection and high-resolution mass spectrometry | |
| CN106442789A (en) | Establishment and active component quantitative analysis methods of compound Xuezhining extract fingerprint map | |
| CN110836944A (en) | HPLC fingerprint spectrum establishment method for pediatric exterior syndrome relieving granules | |
| CN1322951A (en) | Red sage medicine fingerprint establishing method and standard fingerprint atlas | |
| CN110297060B (en) | Fingerprint detection method and fingerprint thereof for ixeris sonchifolia medicinal materials | |
| CN114152686B (en) | Fingerprint construction method of traditional Chinese medicine compound containing cinnamon and application of fingerprint construction method | |
| CN111443154B (en) | Research method of medicinal genetic relationship of glycyrrhiza | |
| CN101788537A (en) | Method for measuring content of ellagic acid ingredients in euscaphis japonica medicinal materials | |
| CN109765322A (en) | The characteristic spectrum construction method and quality determining method of schizonepeta | |
| Xu et al. | Comparative study of the contents of analogues of aristolochic acid in two kinds of Aristolochiae Fructus by high-performance liquid chromatography | |
| RU2782620C1 (en) | Method for quantifying syringin in the bark of common lilac | |
| Huang et al. | Simultaneous determination of nine flavonoids and qualitative evaluation of Herba Epimedii by high performance liquid chromatography with ultraviolet detection | |
| Li et al. | Simultaneous determination of phenols in Radix Polygalae by high performance liquid chromatography: quality assurance of herbs from different regions and seasons | |
| RU2747483C1 (en) | Method for quantitative determination of amount of phenylpropanoids in lilac flowers | |
| CN109142563A (en) | A kind of construction method of guilingji capsules UPLC finger-print and its application | |
| Xie et al. | Simultaneous quantification of five compounds from Nauclea officinalis leaves by High Performance Liquid Chromatography | |
| CN108693289A (en) | The content assaying method of magnoflorine in a kind of herringbone fruit medicinal material | |
| RU2796764C1 (en) | Method for quantitative determination of eleutheroside in rhizomes and roots of eleutherococcus senticosus | |
| CN110231418B (en) | Method for separating and measuring contents of various components in Huoxiang Zhengqi oral liquid by HPLC method | |
| CN113933436A (en) | Method for measuring contents of various components in caulis et folium piperis nigri medicinal material |