RU2782076C2 - Способ получения кровезаменителя для применения в ветеринарии - Google Patents
Способ получения кровезаменителя для применения в ветеринарии Download PDFInfo
- Publication number
- RU2782076C2 RU2782076C2 RU2018136935A RU2018136935A RU2782076C2 RU 2782076 C2 RU2782076 C2 RU 2782076C2 RU 2018136935 A RU2018136935 A RU 2018136935A RU 2018136935 A RU2018136935 A RU 2018136935A RU 2782076 C2 RU2782076 C2 RU 2782076C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- hemoglobin
- purification
- carried out
- kda
- solution
- Prior art date
Links
- 239000003633 blood substitute Substances 0.000 title claims abstract description 16
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 8
- 239000003814 drug Substances 0.000 title abstract description 14
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 claims abstract description 64
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 claims abstract description 64
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 claims abstract description 16
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims abstract description 15
- 238000011026 diafiltration Methods 0.000 claims abstract description 14
- 102000008015 Hemeproteins Human genes 0.000 claims abstract description 12
- 108010089792 Hemeproteins Proteins 0.000 claims abstract description 12
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 12
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims abstract description 11
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims abstract description 9
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims abstract description 8
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N glutaraldehyde Chemical class O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 8
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 claims abstract description 7
- 230000002949 hemolytic Effects 0.000 claims abstract description 7
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims abstract description 7
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims abstract description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 5
- 238000002616 plasmapheresis Methods 0.000 claims abstract description 5
- 229910000033 sodium borohydride Inorganic materials 0.000 claims abstract description 5
- YOQDYZUWIQVZSF-UHFFFAOYSA-N sodium borohydride Substances [BH4-].[Na+] YOQDYZUWIQVZSF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- ODGROJYWQXFQOZ-UHFFFAOYSA-N sodium;boron(1-) Chemical compound [B-].[Na+] ODGROJYWQXFQOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims abstract description 4
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims abstract description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims abstract description 3
- 210000003743 Erythrocytes Anatomy 0.000 claims description 10
- 210000000265 Leukocytes Anatomy 0.000 claims description 4
- 239000002510 pyrogen Substances 0.000 abstract description 8
- 238000005406 washing Methods 0.000 abstract description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 2
- 239000012467 final product Substances 0.000 abstract 3
- 238000007792 addition Methods 0.000 abstract 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 26
- 229940079593 drugs Drugs 0.000 description 10
- 238000000034 method Methods 0.000 description 10
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 9
- 210000004369 Blood Anatomy 0.000 description 7
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 7
- 239000000047 product Substances 0.000 description 7
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 5
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 5
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 5
- 238000006392 deoxygenation reaction Methods 0.000 description 4
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N oxygen Chemical compound O=O MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 4
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 3
- 230000002572 peristaltic Effects 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 230000001698 pyrogenic Effects 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 3
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 2
- 230000036760 body temperature Effects 0.000 description 2
- 238000009529 body temperature measurement Methods 0.000 description 2
- UGFAIRIUMAVXCW-UHFFFAOYSA-N carbon monoxide Chemical compound [O+]#[C-] UGFAIRIUMAVXCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000006011 modification reaction Methods 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 2
- 230000001954 sterilising Effects 0.000 description 2
- 239000012085 test solution Substances 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000001772 Blood Platelets Anatomy 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N D-Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 229960002989 Glutamic Acid Drugs 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 206010069173 Product contamination Diseases 0.000 description 1
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Vitamin C Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 108010002255 deoxyhemoglobin Proteins 0.000 description 1
- 238000005137 deposition process Methods 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 239000003607 modifier Substances 0.000 description 1
- 238000010606 normalization Methods 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012466 permeate Substances 0.000 description 1
- 108010050918 polyhemoglobin Proteins 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000005086 pumping Methods 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 238000005057 refrigeration Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing Effects 0.000 description 1
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 1
- 238000004065 wastewater treatment Methods 0.000 description 1
Images
Abstract
Изобретение относится ветеринарной медицине, а именно к способу получения кровезаменителя. Способ получения кровезаменителя включает получение дезоксигенированного гемоглобина, его полимеризацию, очистку и сушку, причем получение дезоксигенированного гемоглобина включает сепарацию, гемолиз, отделение стромы, осаждение негемовых белков и их удаление из полученного раствора гемоглобина, фильтрацию; полимеризация включает обработку полученного дезоксигенированного гемоглобина немодифицированным глутаровым альдегидом, завершение реакции полимеризации проводят путем внесения боргидрида натрия; очистка включает диафильтрацию с последующей лиофилизацией и получением готового продукта в виде стерильного порошка, при этом для получения дезоксигенированного гемоглобина выделяют свободную от лейкоцитов эритроцитарную массу посредством плазмафереза, осаждение негемовых белков ведут путем добавления к раствору гемоглобина сухого хлорида натрия до конечной концентрации 0,6 мас.%, этап диафильтрации для очистки полимеризованного гемоглобина осуществляют в одну стадию на отсекающих мембранах по молекулярной массе 100 кДа, получают готовый продукт с определенным молекулярным составом гемоглобина. Вышеописанный способ позволяет сократить время фильтрации полимеризованного гемоглобина, снизить объем промывочного раствора, снизить пирогенность готового продукта. 3 ил., 2 табл., 3 пр.
Description
Изобретение относится к ветеринарной медицине, в частности, к гематологии, и относится к способу получения кровезаменителя на основе полимеризованного гемоглобина с функцией переноса кислорода. Способ включает получение дезоксигенированного гемоглобина, его полимеризацию и очистку. Изобретение может быть использовано для производства кровезамещающих растворов, сопоставимых по эффективности газового транспорта (по переносу кислорода) с эритроцитами крови животных.
Известен способ получения кровезаменителя-переносчика кислорода «Геленпол» /RU 2132687, А61К 35/18, опубл. 1999, RU 2162707, A61K 38/42, опубл.2001/. Для его приготовления в качестве сырья предложено использовать эритроцитарную массу человеческой крови со сроком хранения не более 36 суток, а это может негативно сказаться на запасах клинической крови. В технологии получения препарата «Геленпол» отсутствует этап удаления низкомолекулярного гемоглобина (несшитого тетрамера), что может негативно сказаться на качестве лечения больных.
Известен способ получения кровезаменителя - «бесклеточного заменителя эритроцитов» /RU 2203087, 2003, А61К 38/42/, в соответствии с которым удаляют лейкоциты и тромбоциты из крови, отмывают и лизируют эритроциты, переводят гемоглобин эритроцитов в СО-форму, удаляют примеси стромы с помощью фильтрации и тепловой обработки. Затем получают дезоксиформу гемоглобина, которую пиридоксилируют и полимеризуют. Проводят дальнейшую очистку, концентрирование и дезоксигенацию.
Недостатком известного способа является его многостадийность, высокая стоимость и низкая производительность. Указанные недостатки связаны с тем, что для защиты гемоглобина от окисления используют окись углерода, для удаления которой необходима оксигенация раствора гемоглобина с последующей дезоксигенацией, что значительно (на 16 часов) удлиняет технологический процесс. Удаление негемовых белков в прототипе осуществляют путем нагрева раствора гемоглобина до 60°С, что также приводит к увеличению длительности технологического процесса на 10 часов. Кроме того, проведение модификации гемоглобина, а также тепловая обработка и гемолиз в атмосфере окиси углерода могут привести к денатурации гемоглобина, что снижает надежность технологии.
Известен способ получения кровезаменителя /Патент RU2341286, 2007, А61К 38/42/, включающий получение дезоксигенированного гемоглобина, его полимеризацию и очистку. При этом получение дезоксигенированного гемоглобина включает гемолиз добавлением воды к эритроцитарной массе, отделение стромы, осаждение негемовых белков и их удаление из полученного раствора гемоглобина.
Полимеризация включает обработку полученного дезоксигенированного гемоглобина модифицированным глутаровым альдегидом и восстановление боргидридом натрия, а чистка включает диафильтрацию. Для получения дезоксигенированного гемоглобина используют свободную от лейкоцитов эритроцитарную массу; осаждение негемовых белков ведут путем добавления к раствору гемоглобина концентрированного раствора хлорида натрия. После удаления негемовых белков осуществляют концентрирование раствора гемоглобина ультрафильтрацией. Очистку диафильтацией ведут на отсекающих мембранах с получением готового продукта в диапазоне по молекулярной массе не более 450 кДа и не менее 100 кДа.
Недостатком известного способа является его сложность, высокая степень затрат ресурсов и времени на проведение технологического процесса. Указанный недостаток связан с тем, что при получении дезоксигенированного гемоглобина используют стадию концентрирования гемоглобина ультрафильтрацией, что удлиняет технологический процесс и приводит к удорожанию продукта. Для процесса полимеризации дезоксигенированного гемоглобина используют модифицированный глутаровый альдегид, что также удлиняет технологический процесс.
Известен способ получения кровезаменителя /Патент RU2361608, А61К 38/42, опубл. 2008/, включающий получение дезоксигенированного гемоглобина, его полимеризацию, очистку и сушку. Для процесса полимеризации не требуется модификации глутарового альдегида, следовательно, процесс сокращается на один этап, при этом исключается использование модификатора глутарового альдегида, глутаминовой кислоты. Диафильтацию проводят в стеклянных реакторах, вместо полимерных одноразовых контейнеров, как указано в способе по патенту /RU 2203087/, на отсекающих мембранах дважды (двухстадийная диафильтрация): по молекулярной массе 300 кДа, а затем 100 кДа. При этом получают готовый целевой продукт с молекулярной массой в диапазоне 192-320 кДа. Данный способ получения кровезаменителя выбран за прототип.
Недостатком прототипа является высокая степень затрат ресурсов и времени на проведение технологического процесса. Указанный недостаток связан с тем, что при двухстадийной диафильтрации очистку полимеризованного гемоглобина проводят дважды на отсекающих мембранах 300 кДа и 100 кДа, что удлиняет технологический процесс до 40 часов, а также требует использования значительных объемов воды для инъекций, используемой для приготовления промывного буфера (до 320 л).
Таким образом, техническая проблема, на решение которой направлено заявленное изобретение, заключается в упрощении технологии получения кровезаменителя и получении безопасного конечного продукта.
Технический результат заключается в сокращении времени фильтрации полимеризованного гемоглобина в 4 раза, снижении объема промывочного раствора до 4-х раз, снижении пирогенности готового продукта.
Для решения обозначенной технической проблемы и достижения заявленного технического результата предлагается способ получения кровезаменителя, включающий получение дезоксигенированного гемоглобина, его полимеризацию, очистку и сушку. Причем получение дезоксигенированного гемоглобина включает сепарацию, гемолиз, отделение стромы, осаждение негемовых белков и их удаление из полученного раствора гемоглобина, его фильтрацию. Полимеризация включает обработку полученного дезоксигенированного гемоглобина немодифицированным глутаровым альдегидом, завершение реакции полимеризации проводят путем внесения боргидрида натрия; очистка включает диафильтрацию.
Отличительной особенностью заявленного способа является то, что для получения дезоксигенированного гемоглобина выделяют свободную от лейкоцитов эритроцитарную массу посредством плазмафереза, осаждение негемовых белков проводят путем добавления к раствору гемоглобина сухого хлорида натрия до конечной концентрации 0,6 мас.%, этап диафильтрации для очистки полимеризованного гемоглобина осуществляют в одну стадию на отсекающих мембранах по молекулярной массе 100 кДа, получают готовый продукт со следующим молекулярным составом гемоглобина:
- полимеризованный гемоглобин с молекулярной массой более 64 кДа - от 75% до 95%;
- модифицированный гемоглобин с молекулярной массой 64 кДа - от 25% до 5%.
Далее приводятся конкретные примеры реализации заявленного способа получения кровезаменителя.
Пример 1. Способ получения кровезаменителя.
Стабилизированная, охлажденная до +2-4°С кровь крупного рогатого скота (КРС), в пластиковых емкостях объемом 10 л передается из холодильной камеры через шлюз в производственное помещение. С помощью перистальтического насоса кровь подается в реактор, где проходит этап плазмафереза. Плазмаферез и отмывка эритромассы осуществляются с помощью ультрафильтрации на мембранах с диаметром пор 0,45 мкм. Для осуществления гемолиза эритроцитов в реактор, содержащий 2 л отмытой эритромассы, с помощью перистальтического насоса подается 6 л воды для инъекций (ВДИ) с температурой +6-8°С из сборной емкости, размещенной в помещении подготовки растворов. Этап гемолиза проходит при перемешивании в течение 40 мин.
Этап фильтрации. Полученный гемолизат перекачивают насосом на расположенные последовательно патронные фильтры с размером пор 50; 20; 10; 5 и 1 мкм, и далее в биоконтейнер Флексель для осаждения негемовых белков объемом 10 л. После перекачки насосом всего объема, в емкость подается сухой хлорид натрия до конечной концентрации 0,6 масс.%, в количестве 0,028 кг. Процесс осаждения длится 30 мин. После осаждения негемовых белков раствор гемоглобина перекачивают насосом на патронные фильтры с размером пор 5; 1 и 0,65 мкм, расположенные последовательно, и далее на стерилизующий фильтр с размером пор 0,22 мкм и затем в реактор для проведения синтеза полигемоглобина. В реактор подается поток стерильного азота (контроль по ротаметру) для перемешивания и дезоксигенации гемоглобина.
Дезоксигенацию проводят до достижения концентрации кислорода в равновесной газовой среде 1,0-2,0 об.% (по показанию датчика концентрации кислорода в реакторе).
Получение полимеризованного гемоглобина (Этап полимеризации). В реактор, содержащий дезоксигемоглобин, переносят 2,5% раствор глутарового альдегида в количестве 0,083 кг в течение 40 мин. Реакцию проводят при перемешивании в течение 1 ч при температуре +6-8°С в токе азота. Для остановки реакции в смесь вносят раствор боргидрида натрия в количестве 0,002 кг. Реакцию проводят в течение 30 мин при перемешивании.
Реакционную смесь подвергают очистке методом диафильтрации на отсекающих мембранах для молекул с молекулярной массой 100 кДа и выше. Использование только одного вида мембраны вместо использования двух видов отсекающих мембран с молекулярной массой 300 кДа, а затем 100 кДа, является отличительной особенностью данного способа, по сравнению с указанным в патенте RU2361608 способе. Раствор промывают 80 л ВДИ для частичного удаления модифицированного гемоглобина (внутримолекулярносшитого тетрамера) и низкомолекулярных соединений, менее 64 кДа. Полученный пермеат концентрируют до 2 л и сливают в биоконтейнер объемом 5 л. Промывной раствор направляют на станцию очистки стоков.
В биоконтейнер с раствором полимеризованного гемоглобина добавляют 0,231 л 40% стерильного раствора глюкозы путем стерильного соединения коннектором 0,01 л 13,6% стерильного раствора аскорбиновой кислоты, 0,750 л 0,9% стерильного раствора NaCl, перемешивают. Затем приготовленный раствор перистальтическим насосом подают на установку стерилизующей фильтрации с размером пор 0,22 мкм. Фильтрат поступает в накопительную емкость для подачи на розлив по флаконам с дальнейшей лиофилизацией препарата, для чего используется лиофилизатор, обеспечивающий получение стерильного порошка.
Таблица 1 – Результаты сравнения с прототипом (технологические параметры)
| Наименование | Время проведения процесса диафильтрации, час |
Объем промывного раствора, л | Рейтинг отсекающих мембран, кДа |
| Способ по патенту /RU2361608/ | 36 | 320 | 300; 100 |
| Заявляемый способ | 9 | 80 | 100 |
Пример 2. Снижение пирогенности готового препарата.
Испытание на пирогенность инъекционных растворов и субстанций, из которых они изготавливаются, основано на измерении температуры тела у кроликов до и после инъекции (ОФС 42-0061-07).
Испытание лекарственного средства проводили на группе из трех кроликов с исходной температурой 38,5 - 39,5°С.
Перед опытом, с интервалом не менее 30 мин, у каждого кролика дважды измеряют температуру тела. Различия в показаниях температуры у одного и того же животного не должны превышать 0,2°С. В противном случае кролика исключают из испытания. За исходную температуру принимают величину последнего результата измерения.
Раствор испытуемого лекарственного средства вводят внутривенно животным сразу после второго измерения температуры. Измерения температуры после введения испытуемого лекарственного средства проводят с интервалом не более 30 мин на протяжении трех часов.
Лекарственное средство признают апирогенным, если сумма индивидуальных максимальных повышений температур меньше или равна 1,2°С, а индивидуальное повышение температуры ни у одного из кроликов не превышает 0,5 °С.
Таблица 2 - Результаты сравнения с прототипом (биологические параметры)
| Наименование | Показатель | Результат испытания |
| Способ по патенту RU2361608 | Пирогенность | Испытуемый раствор в тест-дозе ввели каждому из 3-х кроликов. Максимальные изменения температуры у животных на протяжении 3-х часов: +0,6; +1,2; +0,3. Сумма максимальных повышений температуры у 3 кроликов: +2,1. Субстанция пирогенна. |
| Заявляемый способ | Пирогенность | Испытуемый раствор в тест-дозе ввели каждому из 3-х кроликов. Максимальные изменения температуры у животных на протяжении 3-х часов: +0,2; +0,2; +0,5. Сумма максимальных повышений температуры у 3 кроликов: +0,9. Субстанция апирогенна. |
Пример 3. Определение молекулярного состава гемоглобина в готовом продукте (кровезаменителе).
Предложенный способ позволяет получать кровезаменитель, основу которого составляет полимеризованный гемоглобин из крови КРС со следующим молекулярным распределением:
- полимеризованный гемоглобин с молекулярной массой свыше 64 кДа - от 75% до 95%;
- фракция модифицированного гемоглобина (64 кДа) - от 25% до 5%.
На хроматограммах (фиг. 1, 2, 3) представлены молекулярные параметры препарата. Профилю хроматограмм в интервале времени удерживания от 12 до 18 минуты соответствует фракция полимеризованного гемоглобина с молекулярным весом более 64 кДа. Интервалу времени удерживания от 18 до 22 минуты соответствует профиль модифицированного гемоглобина с молекулярной массой 64 кДа. Молекулярные параметры определяли методом ВЭЖХ с использованием колонки YMC-Pack Diol-200. Содержание фракций в препарате оценивали методом нормализации площадей пиков.
На фиг. 1-3 представлены хроматограммы трех опытных партий препарата.
Таким образом, указанный метод получения кровезаменителя способствует 4-х кратному снижению времени проведения этапа диафильтрации полимеризованного гемоглобина для удаления низкомолекулярных соединений с молекулярной массой менее 64 кДа и способствует 4-х кратному снижению объема промывного раствора. Кроме того, снижение объема промывного раствора благоприятно сказывается на показателе пирогенности получаемого препарата за счет снижения вероятности загрязнения продукта допускаемым количеством пирогенов в воде (по ФС.2.2.0019.15), а также себестоимости препарата.
Claims (3)
- Способ получения кровезаменителя, включающий получение дезоксигенированного гемоглобина, его полимеризацию, очистку и сушку, причем получение дезоксигенированного гемоглобина включает сепарацию, гемолиз, отделение стромы, осаждение негемовых белков и их удаление из полученного раствора гемоглобина, фильтрацию; полимеризация включает обработку полученного дезоксигенированного гемоглобина немодифицированным глутаровым альдегидом, завершение реакции полимеризации проводят путем внесения боргидрида натрия; очистка включает диафильтрацию с последующей лиофилизацией и получением готового продукта в виде стерильного порошка, отличающийся тем, что для получения дезоксигенированного гемоглобина выделяют свободную от лейкоцитов эритроцитарную массу посредством плазмафереза, осаждение негемовых белков ведут путем добавления к раствору гемоглобина сухого хлорида натрия до конечной концентрации 0,6 мас.%, этап диафильтрации для очистки полимеризованного гемоглобина осуществляют в одну стадию на отсекающих мембранах по молекулярной массе 100 кДа, получают готовый продукт со следующим молекулярным составом гемоглобина, %:
- - полимеризованный гемоглобин молекулярной массой более 64 кДа - от 75 до 95%;
- - модифицированный гемоглобин молекулярной массой 64 кДа - от 25 до 5%.
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2018136935A RU2782076C2 (ru) | 2018-10-19 | Способ получения кровезаменителя для применения в ветеринарии | |
| PCT/RU2019/050191 WO2020080978A2 (ru) | 2018-10-19 | 2019-10-21 | Cпособ получения кровезаменителя для применения в ветеринарии |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2018136935A RU2782076C2 (ru) | 2018-10-19 | Способ получения кровезаменителя для применения в ветеринарии |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2018136935A RU2018136935A (ru) | 2020-04-20 |
| RU2018136935A3 RU2018136935A3 (ru) | 2022-04-25 |
| RU2782076C2 true RU2782076C2 (ru) | 2022-10-21 |
Family
ID=
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4826811A (en) * | 1986-06-20 | 1989-05-02 | Northfield Laboratories, Inc. | Acellular red blood cell substitute |
| RU2341286C1 (ru) * | 2007-07-25 | 2008-12-20 | Общество с ограниченной ответственностью "Геленпол" | Способ получения кровезаменителя и установка для осуществления способа |
| RU2361608C1 (ru) * | 2008-03-18 | 2009-07-20 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Научно-Производственная Компания "Медбиофарм" | Кровезаменитель с функцией переноса кислорода, фармацевтическая композиция (варианты) |
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4826811A (en) * | 1986-06-20 | 1989-05-02 | Northfield Laboratories, Inc. | Acellular red blood cell substitute |
| RU2341286C1 (ru) * | 2007-07-25 | 2008-12-20 | Общество с ограниченной ответственностью "Геленпол" | Способ получения кровезаменителя и установка для осуществления способа |
| RU2361608C1 (ru) * | 2008-03-18 | 2009-07-20 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Научно-Производственная Компания "Медбиофарм" | Кровезаменитель с функцией переноса кислорода, фармацевтическая композиция (варианты) |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DE3877811T2 (de) | Pasteurisierbares, lyophilisierbares blutsurrogat auf haemoglobinbasis. | |
| FI86141B (fi) | Foerfarande foer framstaellning av peritoneal dialysloesning. | |
| Cohen et al. | Effect of immunoglobulin light chains from hemodialysis and continuous ambulatory peritoneal dialysis patients on polymorphonuclear leukocyte functions. | |
| RU2475252C1 (ru) | Способ приготовления лекарственного препарата, содержащего переносчик кислорода, стабильного при высоких температурах, и его применение | |
| CN111499736B (zh) | 一种静注covid-19人免疫球蛋白的制备方法 | |
| KR20140031915A (ko) | 고온 단기 열처리 기구로 변형되지 않은 헤모글로빈을 중합 헤모글로빈을 포함하는 상호결합된 헤모글로빈 용액으로부터 제거하는 방법 | |
| JP2004535368A (ja) | ヘモグロビンベース酸素運搬体の製造 | |
| RU2782076C2 (ru) | Способ получения кровезаменителя для применения в ветеринарии | |
| WO2020080978A2 (ru) | Cпособ получения кровезаменителя для применения в ветеринарии | |
| CZ299357B6 (cs) | Vodný roztok pyridoxylovaného zpolymerovaného hemoglobinu a zpusoby jeho prípravy | |
| WO1991009615A1 (en) | Polyhemoglobin stabilized by purine derivatives and glutathione | |
| KR19990063654A (ko) | 열처리에 의한 부분적 산소화 형태의 약제 등급 헤모글로빈의제조 방법 | |
| RU2341286C1 (ru) | Способ получения кровезаменителя и установка для осуществления способа | |
| US2460550A (en) | Modified globin and method for its preparation | |
| CN102603891B (zh) | 一种双重病毒灭活制备破伤风人免疫球蛋白的方法 | |
| RU2799637C1 (ru) | Способ получения биологически активного пептидно-аминокислотного препарата на основе плазмы крови человека | |
| RU2340354C1 (ru) | Кровезаменитель с функцией переноса кислорода | |
| CN110872345A (zh) | 一种高纯免疫球蛋白g的制备方法 | |
| CN105505867B (zh) | 用于分离淋巴细胞的组合物及其分离液 | |
| RU2745443C1 (ru) | Способ получения средства, обладающего антигипоксической, регенеративной активностью | |
| RU2286350C1 (ru) | Способ получения ветеринарного альбумина | |
| RU2125888C1 (ru) | Способ получения мономерного альбумина | |
| RU2264826C1 (ru) | Способ получения антитимоцитарного глобулина для внутривенного введения | |
| CN107303385A (zh) | 一种脑蛋白水解物溶液的制备方法 | |
| KR100562762B1 (ko) | 무세포성적혈구대체물을제조하기위한방법및장치 |