RU2753884C2 - Промоторы для усиления экспрессии в поксвирусах - Google Patents

Промоторы для усиления экспрессии в поксвирусах Download PDF

Info

Publication number
RU2753884C2
RU2753884C2 RU2018106643A RU2018106643A RU2753884C2 RU 2753884 C2 RU2753884 C2 RU 2753884C2 RU 2018106643 A RU2018106643 A RU 2018106643A RU 2018106643 A RU2018106643 A RU 2018106643A RU 2753884 C2 RU2753884 C2 RU 2753884C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
ser
pro
ala
leu
gly
Prior art date
Application number
RU2018106643A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2018106643A3 (ru
RU2018106643A (ru
Inventor
Ален ДЕЛЬКЕР
Цзэнцзи ЛИ
Райан РАУНТРИ
Original Assignee
Бавариан Нордик А/С
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Бавариан Нордик А/С filed Critical Бавариан Нордик А/С
Publication of RU2018106643A publication Critical patent/RU2018106643A/ru
Publication of RU2018106643A3 publication Critical patent/RU2018106643A3/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2753884C2 publication Critical patent/RU2753884C2/ru

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6897—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids involving reporter genes operably linked to promoters
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C12N15/86—Viral vectors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C12N15/86—Viral vectors
    • C12N15/863—Poxviral vectors, e.g. entomopoxvirus
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/24011—Poxviridae
    • C12N2710/24041—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2710/24043—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2830/00—Vector systems having a special element relevant for transcription
    • C12N2830/15—Vector systems having a special element relevant for transcription chimeric enhancer/promoter combination
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

Группа изобретений относится к биотехнологии, в частности к промоторам экспрессии белка Brachyury в поксвирусах. Предложены экспрессионная кассета для экспрессии кодирующей последовательности Brachyury в векторе, поксвирусный вектор, содержащий ее, и способ экспрессии последовательности, кодирующей антиген Brachyury, в векторе. Экспрессионная кассета содержит (а) последовательность нуклеиновой кислоты, содержащую промотор, активный в качестве промотора поксвируса и содержащий последовательность SEQ ID NO: 9 или подпоследовательность SEQ ID NO: 9, которая содержит любую из SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 8, и (b) гетерологичную последовательность, кодирующую антиген Brachyury, функционально связанную с промотором, причем экспрессия кодирующей последовательности контролируется промотором. Изобретения позволяют усилить экспрессию антигена Brachyury, используемого в иммунотерапии. 3 н. и 15 з.п. ф-лы, 6 ил., 1 табл., 4 пр.

Description

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ
Настоящее изобретение относится к одному или более новым промоторам экспрессии белка в поксвирусах, особенно к авипоксвирусам, таким как вирус оспы кур и канарипокс. Изобретение также относится к полинуклеотидам, содержащим указанный промотор, в частности, полинуклеотидам, содержащим указанный промотор и нуклеиновую кислоту, которая должна быть экспрессирована; векторам, содержащим их; клеткам-хозяевам, содержащим вышеуказанные конструкции; и композициям, содержащим любое из вышеуказанного. Кроме того, изобретение относится к одному или более новым полипептидам, функционально связанным с одним или более промоторами. Более конкретно, один или более новых полипептидов относятся к белку Brachyury.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Рекомбинантные поксвирусы использовали в качестве вакцин для возбудителей инфекции, а в последнее время - для опухолей. Mastrangelo et al. J Clin Invest. 2000; 105(8):1031-1034. Было показано, что две из этих групп поксвирусов, авипоксвирус и ортопоксвирус, эффективны при борьбе с опухолями и связаны с потенциальными методами лечения рака. Id.
Было показано, что один иллюстративный вид авипоксвируса, вирус оспы кур является безопасным средством для введения человеку, поскольку вирус оспы кур проникает в клетки млекопитающих и экспрессирует белки, но реплицирует прерывисто. Skinner et al.Expert Rev Vaccines. 2005 Feb;4(1):63-76. Кроме того, применение вируса оспы кур в качестве носителя для экспрессии исследовали в многочисленных клинических испытаниях вакцин против рака, малярии, туберкулеза, СПИДа и Эбола.
Рекомбинантные поксвирусы, такие как вирус оспы кур, были использованы для экспрессии широкого круга вставленных генов, включая несколько генов, связанных с инфекционными заболеваниями и опухолью, таких как p97, HER-2/neu, p53 и ETA (Paoletti, et al., 1993). Одним из примеров опухолевого антигена, который изучается в последнее время, является Brachyury (также известный как «T»).
Brachyury был идентифицирован у мышей как доминантный короткохвостый мутант, который также является рецессивной леталью; гомозиготные эмбрионы T/T умирают в середине созревания из-за нарушения образования задней мезодермы (Chesley, J. Exp. Zool., 70: 429-459, 1935). Мышиный ген Brachyury был клонирован (Herrmann et al., Nature (Lond.), 343: 617-622, 1990), также, как и гомологи у других видов, таких как люди. Экспрессия человеческого гомолога мышиного Brachyury была обнаружена при помощи ОТ-ПЦР в остатке нотохорды, пульпозном ядре, выкидышах человека на 14-15 неделе беременности (Edwards et al., Genome Res., 6: 226-233, 1996).
В целом, Brachyury оказался ценным маркером для распознавания мезодермальной дифференциации (Herrmann et al., Trends Genet., 10: 280-286, 1994). Например, помимо экспрессии у самих эмбрионов, сообщалось, что Brachyury активируется во время дифференцировки определенных EC (эмбриональной карциномы) и ES (эмбриональных стволовых клеток) клеточных линиях мыши, дифференцируя их по мезодермальным линиям in vitro (см., например, Bain et al., Biochem. Biophys. Res. Commun., 223: 691-694, 1996). Было показано, что у людей Brachyury экспрессируется в тератокарциномах (Gokhele et al., Cell Growth and Differentiation 11:157-62, 2000), хордомах (Vujovic et al., J. Pathol. 2: 157-65, 2006) и гемангиобластомах (Glasker et al., Cancer Res. 66: 4167-4172, 2006).
Совсем недавно было описано, что поксвирусы, экспрессирующие Brachyury, могут быть эффективными в виде активного иммунотерапевтического средства против опухолей (см. WO 2014/043535).
Очевидно, что существует значительная неудовлетворенная медицинская потребность в усовершенствовании методов лечения инфекционных заболеваний и рака, включая активные иммунотерапии и вакцины. Исходя из вышесказанного, существует потребность в улучшении экспрессии антигенов, таких как Brachyury, используемых в активных иммунотерапиях. Настоящее изобретение удовлетворяет эту потребность.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Настоящее изобретение относится к одному или более промоторам, нуклеиновым кислотам, экспрессионным кассетам, рекомбинантным пептидам и рекомбинантным поксвирусам, связанным с улучшениями экспрессии кодирующих последовательностей и антигенов, включенных в виде части поксвирусов.
В одном аспекте настоящее изобретение относится к экспрессионной кассете, содержащей:
a. промотор, содержащий последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую по меньшей мере 70% идентичность с любой из SEQ ID NO: 1-10, и 77; и
b. кодирующую последовательность, функционально связанную с промотором;
причем экспрессия кодирующей последовательности контролируется промотором.
В других аспектах настоящего изобретения экспрессионная кассета может быть включена как часть вектора, такого как вирус или плазмида, для усиления экспрессии кодирующей последовательности в ней. Предпочтительно экспрессионная кассета является частью поксвируса, такого как, но не ограничиваясь этим, ортопоксвируса и авипоксвируса. Более предпочтительно экспрессионная кассета представляет собой авипоксвирус, такой как вирус оспы кур. В еще одном аспекте экспрессионная кассета не является экспрессионной кассетой, естественно встречающейся в геноме поксвируса.
В дополнительных аспектах изобретение относится к одному или более промоторов, содержащих или состоящих из: а) последовательности нуклеиновой кислоты, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-10, b) подпоследовательности любой из SEQ ID NO: 1-10 и 77 или с) производной последовательности любой из SEQ ID NO: 1-10 и 77, причем производная последовательность имеет одну или более замен, делеций и/или вставок и при этом производная последовательность активна в качестве промотора поксвируса и/или активна в инфицированной поксвирусом клетке.
В еще дополнительных аспектах настоящее изобретение включает одну или более последовательностей нуклеиновых кислот, кодирующих один или более новых белков Brachyury, выбранных из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 18-19, 22-23, 26-27, 30-31, 34-35, 38-39, 42-43, 46-47, 50-51, 54-55, 58-59, 62-63, 66-67, 70, и 71. В еще одном дополнительном аспекте настоящее изобретение включает еще одну новую последовательность нуклеиновой кислоты, выбранную из группы, состоящей из: 16-17, 20-21, 24-25, 28-29, 32-33, 36-37, 40-41, 44-45, 48-49, 52-53, 56-57, 60-61, 64-65, 68, и 69.
В еще одном аспекте настоящее изобретение включает экспрессионную кассету экспрессии, содержащую:
a. промотор, содержащий последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую по меньшей мере 70% идентичность с любой из SEQ ID NO: 1-10, и 77; и
b. кодирующую последовательность, функционально связанную с промотором, причем кодирующие последовательности содержат или i) нуклеиновую кислоту, кодирующую белок Brachyury, выбранную из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 11, 13, 18-19, 22-23, 26-27, 30-31, 34-35, 38-39, 42-43, 46-47, 50-51, 54-55, 58-59, 62-63, 66-67, 70 и 71 или ii) содержат или состоят из нуклеиновой кислоты, имеющей по меньшей мере 70% идентичность с любой из нуклеиновых кислот, выбранных из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 12, 14-17, 20-21, 24-25, 28-29, 32-33, 36-37, 40-41, 44-45, 48-49, 52-53, 56-57, 60-61, 64-65, 68, и 69;
причем экспрессия кодирующей последовательности контролируется промотором.
Дополнительные цели и преимущества настоящего изобретения будут изложены частично в описании, которое следует ниже, и частично будут очевидны из описания, или могут быть изучены посредством осуществления настоящего изобретения на практике. Цели и преимущества настоящего изобретения будут реализованы и достигнуты посредством элементов и комбинаций, в особенности, указанных в прилагаемой формуле изобретения.
Следует понимать, что как вышеизложенное общее описание, так и последующее подробное описание настоящего изобретения являются только иллюстративными и пояснительными, и не предназначаются для ограничения настоящего изобретения, которое заявлено в формуле изобретения.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ
На фиг. 1 показана экспрессия белка Brachyury в дендритных клетках (DC) человека, инфицированных нерекомбинантным вирусом FPV-ДТ (FPV-WT -вирус оспы кур дикого типа), или рекомбинантных вирусов FPV-mBN343A, FPV-mBN344A или FPV-mBN345A. Вестерн-блоттинг проводили с использованием кроличьего моноклонального антитела против Brachyury, как описано в примере 1.
На фиг. 2 показана экспрессия белка Brachyury в дендритных клетках (DC) человека, инфицированных нерекомбинантными вирусами MVA-ДТ (MVA-модифицированный вирус осповакцины Анкара) или FPV-ДТ, или рекомбинантными вирусами MVA-Brachyury-TRICOM (TRiCOM - три костимулирующие молекулы), FPV-mBN249B, клон 32 FPV-mBN281A, клон 35 FPV-mBN281A, FPV-mBN343A, FPV-mBN344A, FPV-mBN345A, FPV-mBN354A или FPV-mBN355A. Вестерн-блоттинг проводили с использованием кроличьего моноклонального антитела против Brachyury, как описано в примере 2.
На фиг. 3 показана относительная экспрессия белка Brachyury по сравнению с GAPDH (глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназа) из вестерн-блоттинга дендритных клеток (DC) человека, инфицированных нерекомбинантными вирусами MVA-ДТ или FPV-ДТ, или рекомбинантными вирусами MVA-Brachyury-TRICOM, FPV-mBN249B, клон 32 FPV-mBN281A, клон 35 FPV-mBN281A, FPV-mBN343A, FPV-mBN344A, FPV-mBN345A, FPV-mBN354A или FPV-mBN355A, как описано в примере 2.
На фиг. 4 показана экспрессия белков Brachyury и TRICOM в клетках CMMT (клеточная линия опухолей молочной железы макаки резуса), инфицированных рекомбинантными вирусами MVA-Brachyury-TRICOM, FPV-mBN249B, FPV-mBN343A или FPV-mBN345A, которые оценивали при помощи проточной цитометрии с использованием флуоресцентно-меченных антител, специфичных для каждого белка, как описано в примере 3.
На фиг. 5 показаны средние уровни экспрессии белка Brachyury в клетках CMMT (клеточная линия опухолей молочной железы макаки резуса), инфицированных рекомбинантными вирусами MVA-Brachyury-TRICOM, FPV-mBN249B, FPV-mBN343A или FPV-mBN345A, которые оценивали при помощи проточной цитометрии, как описано в примере 3.
На фиг. 6 показана экспрессия белков Brachyury и TRICOM в клетках CMMT (линия клеток опухолей молочной железы макаки резуса), инфицированных рекомбинантным вирусом FPV-mBN345B, которую оценивали при помощи проточной цитометрии, как описано в примере 4.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Настоящее изобретение основано на неожиданном определении того, что промоторные последовательности, представленные в SEQ ID NO: 1-10 и 77, усиливают экспрессию опухолевого антигена Brachyury. Показанная на фиг. 1-6 и описанная более подробно в данном документе экспрессия антигена Brachyury усиливается при использовании промоторов согласно данному изобретению. Экспрессия дополнительно усиливается, если промоторы и антиген Brachyury используются как часть рекомбинантного поксвируса.
По меньшей мере в одном аспекте различные варианты осуществления настоящего изобретения были созданы в результате недостаточного уровня экспрессии белка Brachyury с использованием известных промоторов вируса осповакцины, таких как PrS и 40k вируса осповакцины (VV-40K). При попытке повысить уровни экспрессии Brachyury авторы настоящего изобретения проанализировали различные промоторы вируса осповакцины и связанные с ними белки (например, VV-40k, I3 и т. д.) и любые возможные гомологи в FPV. Изобретатели поняли, что некоторые гомологичные последовательности FPV были обнаружены ранее. См., например, Zantinge, J Gen Virol. 1996 Apr;77 (Pt 4):603-14 и ген FPV 088 в эталонной последовательности базы данных NCBI: NP_039051.1, Afonso, C.L et al., J. Virol. 74 (8), 3815-3831 (2000).
В первоначальной попытке усилить экспрессию Brachyury возможную промоторную область гена FPV 088 в эталонной последовательности базы данных NCBI: NP_039051.1 сконструировали с использованием Brachyury изобретателями и протестировали с получением нежелательных результатов для промотора (см., например, фиг. 1 и 2 для mBN344A). Авторы изобретения создали следующий промотор с добавлением нуклеотидов из ОРС (открытой рамки считывания) гена FPV 088, что также привело к нежелательным результатам (см., например, фиг. 1 и 2 для mBN354A). Другие конструкции были созданы авторами настоящего изобретения с использованием еще дополнительных нуклеотидов из ОРС гена FPV 088, которые, как описано и проиллюстрировано в данном документе, усиливают экспрессию опухолевого антигена Brachyury.
Таким образом, в различных вариантах осуществления настоящее изобретение относится к одной или более последовательностям нуклеиновых кислот, одному или более промоторам, содержащим последовательности нуклеиновых кислот, одной или более экспрессионных кассет, содержащих нуклеиновые кислоты, одному или более пептидам и/или пептидным последовательностям для усиления/экспрессии кодирующих последовательностей и/или нуклеиновых кислот в экспрессионных векторах, таких как, но не ограничиваясь ими, плазмиды, рекомбинантный вирус и так далее. В других вариантах осуществления настоящее изобретение относится к одному или более рекомбинантным поксвирусам, содержащим одну или более последовательностей нуклеиновых кислот, промоторов, экспрессионных кассет и/или пептидов и/или пептидных последовательностей, описанных в данном документе.
Кроме того, в различных вариантах осуществления изобретения имеется одна или более последовательностей нуклеиновых кислот, кодирующих полипептиды Brachyury. В одном варианте осуществления изобретения одна или более нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид Brachyury, выбирают из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 11, 13, 18-19, 22-23, 26-27, 30-31, 34-35, 38-39, 42-43, 46-47, 50-51, 54-55, 58-59, 62-63, 66-67, 70, и 71. Нуклеотидные последовательности, кодирующие полипептиды Brachyury в соответствии с настоящим изобретением, выбирают из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 12, 14-17, 20-21, 24-25, 28-29, 32-33, 36-37, 40-41, 44-45, 48-49, 52-53, 56-57, 60-61, 64-65, 68, и 69.
Определения
В рамках изобретения формы единственного числа включают ссылки на множественное число, если из контекста явно не следует иное. Так, например, ссылка на «эпитоп» включает один или более эпитопов, а ссылка на «способ» включает обозначение на эквивалентные этапы и способы, известные специалистам в данной области техники, которые могут быть модифицированы или заменены описанными способами в данном документе.
Если не указано иное, термин «по меньшей мере», предшествующий ряду элементов, следует рассматривать как относящийся к каждому элементу в ряду. Специалисты в данной области техники поймут или смогут определить множество эквивалентов конкретных вариантов осуществления изобретения, описанных в данном документе, с применением не более чем стандартных экспериментов. Такие эквиваленты охватываются настоящим изобретением.
В настоящем описании и формуле изобретения, если контекст не требует иного, слово «содержит» и его вариации, такие как «содержат» и «содержащий», следует понимать, как включающее указанное целое значение или стадию, или группу целых значений или стадий, но не исключающее любое другое целое значение или стадию, или группу целых значений или стадий. В настоящем описании термин «содержащий» может быть заменен термином «который содержит» или «включающий» или иногда используемым в настоящем описании термином «имеющий». Любой из указанных выше терминов (содержащий, который содержит, включающий, имеющий) во всех случаях при использовании в контексте аспекта или варианта осуществления настоящего изобретения может быть заменен термином «состоящий из». В рамках изобретения термин «состоящий из» исключает любой элемент, этап или ингредиент не указанный в элементе формулы изобретения. В рамках изобретения термин «состоящий по существу из» не исключает материалы или этапы, которые не оказывают существенного влияния на основные и новые характеристики заявленного изобретения.
В рамках изобретения связывающий термин «и/или» между несколькими перечисленными элементами расценивается как охватывающий индивидуальные и комбинированные варианты. Например, когда два элемента соединяются с помощью «и/или», первый вариант относится к применимости первого элемента без второго. Второй вариант относится к применимости второго элемента без первого. Третий вариант относится к применимости первого и второго элементов вместе. Подразумевается, что любой из этих вариантов подходит по смыслу, и, следовательно, соответствует требованию термина «и/или», используемого в настоящем описании. Также подразумевается, что параллельная применимость более чем одного из вариантов подходит по смыслу, и, следовательно, соответствует требованию термина «и/или».
Используемый в рамках изобретения термин «промотор» обозначает регуляторную область нуклеиновой кислоты, обычно ДНК, расположенную против хода транскрипции последовательности экспрессируемой нуклеиновой кислоты, которая содержит определенные элементы последовательности ДНК, которые распознаются и связаны, например, белковыми транскрипционными факторами и полимеразами, ответственными за синтез РНК из кодирующей области гена. Поскольку промоторы обычно непосредственно примыкают к рассматриваемому гену, положения в промоторе обозначают относительно места начала транскрипции, причем транскрипция ДНК начинается для определенного гена (т.е. положения против хода транскрипции являются отрицательными числами, отсчитываемыми от -1, например -100 - позиция 100 пар оснований против хода транскрипции). Таким образом, промоторная последовательность может содержать нуклеотиды до положения -1. Однако нуклеотиды из положения +1 не являются частью промотора, то есть в этом отношении следует отметить, что кодон инициации трансляции (ATG или AUG) не является частью промотора. Таким образом, SEQ ID NO: 1-10 и 77 представляют собой полинуклеотиды, содержащие промоторы согласно данному изобретению.
Используемый в рамках изобретения термин «усиление» или «усиленный» при использовании в отношении уровней экспрессии кодирующей последовательности, нуклеиновой кислоты, белка и/или антигена относится к увеличению экспрессии кодирующей последовательности, нуклеиновой кислоты, белка, и/или антигена, если они связаны с и/или как часть одного или более промоторов, экспрессионных кассет, нуклеиновых кислот, белков и/или векторов согласно данному изобретению относительно уровней экспрессии кодирующей последовательности, нуклеиновых кислот, белка, и/или антигена, если они связаны с и/или являются частью одного или более промоторов, известных в данной области техники, таких как PrS или VV-40k.
В рамках изобретения, нуклеотидная последовательность, имеющая «по существу те же характеристики экспрессии», что и нуклеотидная последовательность, представленная в SEQ ID NO: 1-10 и 77, будет проявлять по меньшей мере 70%, предпочтительно по меньшей мере 80%, еще более предпочтительно по меньшей мере 90% активность промотора SEQ ID NO: 1-10 и 77, как измерено количеством продуцируемого рекомбинантного белка. Специалисту в данной области техники с использованием способов, изложенных в примерах 1-4 данной заявки, можно будет легко определить имеет ли указанная промоторная последовательность «по существу те же характеристики экспрессии», что и любая из SEQ ID NO: 1-10 и 77. Промоторы в соответствии с настоящим изобретением предпочтительно активны в качестве промоторов поксвируса, предпочтительно авипоксвируса или активны в качестве промоторов в инфицированных поксвирусом клетках, предпочтительно в клетках, инфицированных авипоксвирусом. Авипоксвирус предпочтительно является вирусом оспы кур. «Активен как промотор поксвируса» означает, что промотор способен направлять экспрессию гена, с которым он функционально связан в вирусе оспы, после инфицирования клеток указанным вирусом. Клетки предпочтительно представляют собой клетки, которые допускают позднюю и/или раннюю, и/или раннюю/позднюю экспрессию поксвируса. «Промотор, активный в клетках, инфицированных поксвирусом», включает также случай, в котором промотор не является частью генома поксвируса, например, частью плазмиды или линейного полинуклеотида или вирусного генома не поксвируса; в таком случае промотор в соответствии с настоящим изобретением активен, если клетка, содержащая промотор, также содержит геном поксвируса, например, если клетка инфицирована поксвирусом. В этих условиях вирусная РНК-полимераза распознает промотор в соответствии с настоящим изобретением и активирует экспрессию гена/кодирующей последовательности, которая связана с промотором.
Используемый в рамках изобретения термин «производный от нуклеиновой кислоты, представленной в SEQ ID NO: 1-10 и 77», означает, что нуклеотидная последовательность SEQ ID NO: 1-10 и 77 взята за основу для осуществления указанных нуклеотидных модификаций, например, по меньшей мере добавления, делеции, замены и/или инверсии одного нуклеотида. Термин «производный» включает возможность, например, фактического изменения физической последовательности, соответствующей SEQ ID NO: 1-10 и 77, при помощи известных методов, например, ПЦР пониженной точности. Термин «производный» дополнительно включает возможность выполнения модификаций последовательности SEQ ID NO: 1-10 и 77 in silico, с последующим синтезом установленной таким образом последовательности как физической нуклеиновой кислоты. Например, термин «производный» включает возможность использования любой известной компьютерной программы для анализа последовательностей нуклеиновых кислот в отношении, например, стабильности гибридизации и возможности любой вторичной структуры нуклеиновой кислоты в модификации исходной последовательности SEQ ID NOs: 1-10, и 77. Предпочтительно, не более 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 или 1 нуклеотидов были добавлены, удалены, заменены и/или инвертированы из нуклеиновых кислот SEQ ID NO: 1-10, и 77. Кроме того, добавление, инсерция или делеция по меньшей мере одного нуклеотида не должна приводить к тому, что инициирующий кодон нуклеиновой кислоты должен быть экспрессирован.
Используемый в рамках изобретения термин «экспрессированный», «экспрессировать», «экспрессия» и тому подобное обозначает только транскрипцию, а также как транскрипцию, так и трансляцию последовательности, представляющей интерес. Таким образом, в отношении экспрессии нуклеиновой кислоты, присутствующей в форме ДНК, продукт, полученный в результате этой экспрессии, может представлять собой или РНК (в результате только транскрипции экспрессируемой последовательности), или полипептидную последовательность (в результате как транскрипции, так и трансляции экспрессируемой последовательности). Таким образом, термин «экспрессия» также включает возможность того, что как РНК, так и полипептидный продукт являются результатом указанной экспрессии и остаются вместе в одной и той же общей среде. Например, в том случае, когда мРНК сохраняется после ее трансляции в полипептидный продукт.
Используемый в рамках изобретения термин «экспрессионная кассета» определяется как часть вектора или рекомбинантного вируса, обычно используемого для клонирования и/или трансформации. Экспрессионная кассета обычно состоит из: a) одной или более кодирующих последовательностей (например, открытой рамки считывания (ОРС), генов, нуклеиновых кислот, кодирующих белок и/или антиген) и b) последовательностей, контролирующих экспрессию одной или более кодирующих последовательностей. Кроме того, экспрессионная кассета может содержать 3'-нетранслируемую область, которая у эукариот обычно содержит сайт полиаденилирования.
Термин «рекомбинантный» означает полинуклеотид или полипептид полусинтетического или синтетического происхождения, который или не встречается в природе, или связан с другим полинуклеотидом в композиции, не обнаруженной в природе.
Один аспект настоящего изобретения включает промоторы с нуклеиновыми кислотами, имеющими по меньшей мере 70%, предпочтительно 75%, 80%, 85%, 90% или 95% идентичность с SEQ ID NO: 1-10 и 77, и имеющие по существу те же характеристики экспрессии, что и SEQ ID NO: 1-10, и 77.
«Процент (%) гомологии или идентичности последовательностей» в отношении последовательностей нуклеиновых кислот, описанных в рамках изобретения, определяется как процентное содержание нуклеотидов в последовательности-кандидате, которые идентичны нуклеотидам в эталонной последовательности (то есть последовательность нуклеиновой кислоты, из которой она получена), после выравнивания последовательностей и введения разрывов, если необходимо, для достижения максимальной процентной идентичности последовательности и без учета каких-либо консервативных замен как части идентичности последовательности. Выравнивание для целей определения процента идентичности или гомологии нуклеотидных последовательностей можно осуществить различными способами, известными специалистам в данной области техники, например, с использованием общедоступного компьютерного программного обеспечения, такого как программное обеспечение BLAST, ALIGN или Megalign (DNASTAR). Специалисты в данной области могут определить соответствующие параметры для измерения степени выравнивания, включая любые алгоритмы, необходимые для достижения максимального выравнивания по всей длине сравниваемых последовательностей.
Программа BESTFIT использует алгоритм локальной гомологии Смита и Ватермана (Smith и Waterman) (1981) для поиска сегмента с самой высокой степенью сходства между двумя последовательностями, Advances in Applied Mathematics 2:482- 489. Этот алгоритм может быть применен к аминокислотным последовательностям с применением матрицы подсчета баллов, разработанной Dayhoff, Atlas of Protein Sequences and Structure, M. O. Dayhoff ed., 5 suppl. 3:353-358, National Biomedical Research Foundation, Washington, D.C., USA, и нормированной Gribskov (1986), Nucl. Acids Res. 14(6):6745-6763. Типичная реализация этого алгоритма для определения процента идентичности последовательностей представлена Genetics Computer Group (Мэдисон, штат Висконсин) в приложении «BestFit». Параметры по умолчанию для этого метода описаны в Висконсинском руководстве к пакету программ для анализа последовательностей, версия 8 (1995) (доступно в Genetics Computer Group, Мэдисон, штат Висконсин). Предпочтительным способом определения процента идентичности в контексте настоящего изобретения является применение пакета программ MPSRCH, защищенного авторским правом Университета Эдинбурга, который разработан John F. Collins and Shane S. Sturrok, и распространяемые IntelliGenetics, Inc. (Маунтин-Вью, Калифорния). Из этого набора пакетов можно применять алгоритм Smith-Waterman, в котором параметры по умолчанию используются для таблицы подсчета баллов (например, штраф на внесение делеции в размере 12, штраф на продолжение делеции в размере один и делеция в размере шесть). Среди полученных данных значение «Match» отображает «идентичность последовательностей» Другие подходящие программы для вычисления процента идентичности или сходства между последовательностями в общем известны из уровня техники, например, другой программой выравнивания является BLAST, применяемая с параметрами по умолчанию. Например, BLASTN и BLASTP могут использоваться с использованием следующих параметров по умолчанию: genetic code=standard; filter=none; strand=both; cutoff=60; expect=10; Matrix=BLOSUM62; Descriptions=50 sequences; sort by=HIGH SCORE; Databases=non- redundant, GenBank+EMBL+DDBJ+PDB+ GenBank CDS translations+Swiss protein+Spupdate+PIR. Более подробную информацию по этим программам можно найти по следующему интернет-адресу: http:// http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/.
Промоторы и последовательности нуклеиновой кислоты
В одном варианте осуществления настоящее раскрытие включает последовательность нуклеиновой кислоты, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-10, и 77.
В другом варианте осуществления настоящее раскрытие включает последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую по меньшей мере 70% идентичность с нуклеиновой кислотой, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-10 и 77, и имеющую по существу те же характеристики экспрессии, что и последовательность нуклеиновой кислоты, выбранная из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-10, и 77. В дополнительных вариантах осуществления изобретения предложена последовательность нуклеиновой кислоты, имеющая по меньшей мере 75%, 80%, 85%, 90% или 95% идентичность с нуклеиновой кислотой, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-10 и 77, и имеющая по существу те же характеристики экспрессии, что и последовательность нуклеиновой кислоты, выбранная из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-10, и 77.
Еще в дополнительном варианте осуществления изобретение относится к нуклеиновой кислоте, имеющей нуклеотидную последовательность, полученную из нуклеиновой кислоты, представленной в SEQ ID NO: 1-10 и 77, содержащую по меньшей мере добавление, делецию, замену и/или инверсию одного нуклеотида по сравнению с нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 1-10 и 77 и имеющую по существу те же характеристики экспрессии, что и нуклеиновая кислота SEQ ID NO: 1-10, и 77.
Еще в дополнительном варианте осуществления изобретение относится к нуклеиновой кислоте, имеющей нуклеотидную последовательность, способную к гибридизации с последовательностью нуклеиновой кислоты, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-10 и 77, и имеющую по существу те же характеристики экспрессии, что и последовательность нуклеиновой кислоты, выбранная из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-10, и 77.
В одном аспекте изобретение относится к промотору для усиления экспрессии кодирующей последовательности и/или нуклеотидной последовательности гена, выбранному из группы, состоящей из:
a) последовательности нуклеиновой кислоты, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-10 и 77 или их подпоследовательности;
b) нуклеиновой кислоты, имеющей нуклеотидную последовательность, полученную из нуклеиновой кислоты, указанной в (а), содержащей по меньшей мере добавление, делецию, замену и/или инверсию одного нуклеотида по сравнению с нуклеотидной последовательностью (а), и имеющей по существу те же характеристики экспрессии, что и нуклеиновая кислота (а);
c) последовательности нуклеиновой кислоты, имеющей по меньшей мере 70% идентичность с нуклеиновой кислотой (а) и имеющей по существу те же характеристики экспрессии, что и нуклеиновая кислота (а); и
d) нуклеиновой кислоты, способной к гибридизации с последовательностью нуклеиновой кислоты (а), (b) или (с), и имеющей по существу те же характеристики экспрессии, что и нуклеиновая кислота (а).
e) последовательности нуклеиновой кислоты, содержащей SEQ ID NO: 3, 4, 5, 6, 7, 8 или 9, причем последовательность нуклеиновой кислоты содержит до 245 нуклеотидов.
Еще один аспект изобретения относится к нуклеиновой кислоте, способной к гибридизации с последовательностью нуклеиновой кислоты (а), (b) или (с) и имеющей по существу те же характеристики экспрессии, что и нуклеиновая кислота (а). Термин «способный к гибридизации» означает гибридизацию в условиях, когда любая часть нуклеиновой кислоты (a), (b) или (c) может подвергаться гибридизации с другой последовательностью ДНК, чтобы обеспечить обнаружение и выделение любой последовательности ДНК, имеющей по существу те же характеристики экспрессии, что и нуклеиновая кислота (а). Гибридизация проводится в жестких условиях; чем более жесткие условия, тем более вероятно, что частично комплементарные последовательности должны быть разделены друг от друга, то есть более высокая жесткость снижает вероятность гибридизации. На практике термин «жесткие условия» означает условия гибридизации с высокой температурой (например, 65°С) и/или низкой концентрацией соли (например, 0,1×SSC). Повышение температуры и/или уменьшение концентрации соли увеличивает жесткость. В жестких условиях гибридизация будет происходить только в том случае, если существует по меньшей мере 70% или предпочтительно по меньшей мере 75, 80, 85, 90 или 95% идентичность между последовательностями. Гибридизацию можно проводить, как указано в Ausubel et al. (2002) Short Protocols in Molecular Biology Vol. 1 5th ed. Canada.
Предпочтительно промотор и/или нуклеиновая кислота согласно настоящему изобретению имеют длину до 245 или 242 нуклеотидов включительно. Также, промотор и/или нуклеиновая кислота согласно настоящему изобретению имеют длину до 232 или 215 нуклеотидов включительно. Более предпочтительно промотор согласно настоящему изобретению имеет длину до 212, 200 включительно или длину до 195 нуклеотидов включительно или длину до 183 включительно или длину до 170 или 167 нуклеотидов включительно. В одном варианте осуществления изобретения нуклеиновая кислота (b), (c) или (d), как указано выше, содержит около 50-250 нуклеотидов, около 60-220 нуклеотидов, около 70-200 нуклеотидов, около 80-190 нуклеотидов, или около 90-180 нуклеотидов.
Альтернативно, объем настоящего изобретения охватывает применение производного этих промоторов, который может быть подпоследовательностью последовательностей, определенных в любом из SEQ ID NO: 1-10, и 77. Термин «подпоследовательность последовательностей любой из SEQ ID NO: 1-10 и 77» относится к более коротким фрагментам любой из SEQ ID NO: 1-10 и 77, которые все еще активны в качестве промотора, в частности в качестве промотора в ортопоксвирусе, таком как FPV, или в ортопоксвирусе, таких как инфицированных FPV клетках.
В различных вариантах осуществления изобретения примерные подпоследовательности SEQ ID NO: 9 выбраны из SEQ ID NO: 2-8. В одном аспекте SEQ ID NO: 4 или 5 являются предпочтительной подпоследовательностью SEQ ID NO: 9. В других аспектах подпоследовательности SEQ ID NO: 8 включают SEQ ID NO: 2-7, последовательности SEQ ID NO: 7 включают SEQ ID NO: 2-6, подпоследовательности SEQ ID NO: 6 включают SEQ ID NO: 2-5, подпоследовательности SEQ ID NO: 5 включают SEQ ID NO: 2-4 подпоследовательности SEQ ID NO: 6 включают SEQ ID NO: 2-5, подпоследовательности SEQ ID NO: 5 включают SEQ ID NO: 2-4, подпоследовательности SEQ ID NO: 4 включают SEQ ID NO: 2-3 и подпоследовательности SEQ ID NO: 3 включают SEQ ID NO: 2.
Производные промотора, содержащие или состоящие из нуклеотидной последовательности любой из SEQ ID NO: 1-10 и 77 или их подпоследовательностей, также может быть последовательностью, которая имеет одну или более нуклеотидных замен, делеций и/или вставок по отношению к любой из последовательностей SEQ ID NO: 1-10, и 77. Производные согласно настоящему изобретению по-прежнему активны в качестве промотора, в частности в качестве ортопоксивируса и/или промотора авипоксвируса в клетках, инфицированных ортопоксвирусом и/или вирусом авипоксвируса, более предпочтительно в качестве промотора авипоксвируса в инфицированных авипоксвирусом клетках. В производных согласно настоящему изобретению делеции, замены и вставки могут быть объединены в одну последовательность.
Предпочтительно производное имеет гомологию по меньшей мере 40%, более предпочтительно по меньшей мере 60%, еще более предпочтительно по меньшей мере 80%, наиболее предпочтительно по меньшей мере 90% по сравнению с любой из последовательностей SEQ ID NO: 1-10 и 77 или их подпоследовательностей, как описано в рамках изобретения.
Белки Brachyury
В нескольких аспектах настоящего изобретения авторы изобретения определили, что в результате синтеза различных промоторов, описанных в рамках изобретения, изобретатели создали один или более рекомбинантных белков Brachyury. В частности, один или более рекомбинантных белков Brachyury представляют собой слитые белки, полученные в результате комбинации одного или более промоторов согласно настоящему изобретению и белка Brachyury. Предполагается, что один или более рекомбинантных белков Brachyury могут быть полезны в составе вакцины, фармацевтической или другой терапевтической композиции.
Таким образом, в различных аспектах изобретение включает один или более синтетических и новых рекомбинантных белков Brachyury и/или синтетических и новых нуклеиновых кислот, кодирующих рекомбинантные белки Brachyury.
В одном варианте осуществления изобретение относится к одной или более последовательностей нуклеиновых кислот, имеющих по меньшей мере 70% идентичность с нуклеиновой кислотой, кодирующей белок Brachyury, причем белок Brachyury выбран из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 18-19, 22-23, 26-27, 30-31, 34-35, 38-39, 42-43, 46-47, 50-51, 54-55, 58-59, 62-63, 66-67, 70, и 71. В дополнительных вариантах осуществления изобретение относится к одной или более нуклеиновых кислот, имеющих по меньшей мере 75%, 80%, 85%, 90% или 95% идентичность с нуклеиновой кислотой, кодирующей белок Brachyury, причем белок Brachyury выбран из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 18-19, 22-23, 26-27, 30-31, 34-35, 38-39, 42-43, 46-47, 50-51, 54-55, 58-59, 62-63, 66-67, 70, и 71.
В различных других вариантах осуществления изобретение относится к одному или более белков Brachyury, выбранных из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 18-19, 22-23, 26-27, 30-31, 34-35, 38-39, 42-43, 46-47, 50-51, 54-55, 58-59, 62-63, 66-67, 70, и 71. В дополнительных вариантах осуществления изобретение относится к одному или более белков Brachyury, имеющих по меньшей мере 70% идентичность с пептидом, выбранным из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 18-19, 22-23, 26-27, 30-31, 34-35, 38-39, 42-43, 46-47, 50-51, 54-55, 58-59, 62-63, 66-67, 70, и 71. В еще дополнительных вариантах осуществления изобретение относится к пептиду, имеющему по меньшей мере 75%, 80%, 85%, 90% или 95% идентичность с пептидом, выбранным из группы, состоящей из SEQ ID NO: 18-19, 22-23, 26-27, 30-31, 34-35, 38-39, 42-43, 46-47, 50-51, 54-55, 58-59, 62-63, 66-67, 70, и 71.
В другом варианте осуществления изобретение относится к одной или более последовательностей нуклеиновых кислот, кодирующих белок Brachyury, при этом последовательность нуклеиновой кислоты выбрана из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 16-17, 20-21, 24-25, 28-29, 32-33, 36-37, 40-41, 44-45, 48-49, 52-53, 56-57, 60-61, 64-65, 68, и 69.
В других вариантах осуществления изобретение относится к одной или более последовательностей нуклеиновых кислот, имеющих по меньшей мере 70% идентичность с нуклеиновой кислотой, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 16-17, 20-21, 24-25, 28-29, 32-33, 36-37, 40-41, 44-45, 48-49, 52-53, 56-57, 60-61, 64-65, 68 и 69 и имеющих по существу те же характеристики экспрессии, что и последовательность нуклеиновой кислоты, выбранная из группы, состоящей из SEQ ID NO: 16-17, 20-21, 24-25, 28-29, 32-33, 36-37, 40-41, 44-45, 48-49, 52-53, 56-57, 60-61, 64-65, 68, и 69. В дополнительных вариантах осуществления изобретение относится к последовательности нуклеиновой кислоты, имеющей по меньшей мере 75%, 80%, 85%, 90% или 95% идентичность с нуклеиновой кислотой, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 16-17, 20-21, 24-25, 28-29, 32-33, 36-37, 40-41, 44-45, 48-49, 52-53, 56-57, 60-61, 64-65, 68 и 69 и имеющих по существу те же характеристики экспрессии, что и последовательность нуклеиновой кислоты, выбранная из группы, состоящей из SEQ ID NO: 16-17, 20-21, 24-25, 28-29, 32-33, 36-37, 40-41, 44-45, 48-49, 52-53, 56-57, 60-61, 64-65, 68, и 69.
В предпочтительном варианте осуществления изобретение относится к одной или более последовательностей нуклеиновых кислот, выбранных из группы, состоящей из SEQ ID NO: 16-17, 20-21, 24-25, 28-29, 32-33, 36-37, 40-41, 44-45, 48-49, 52-53, 56-57, 60-61, 64-65, 68, и 69.
Экспрессионные кассеты
В соответствии с дополнительным вариантом осуществления настоящее изобретение относится к экспрессионной кассете, содержащей один или более промоторов и/или рекомбинантных белков Brachyury, и/или нуклеиновых кислот в соответствии с настоящим изобретением.
В одном варианте осуществления изобретение относится к экспрессионной кассете, содержащей промотор, имеющий по меньшей мере 70% идентичность с нуклеиновой кислотой, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-10 и нуклеиновой кислоты, кодирующей пептид Brachyury, выбранный из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 11, 13, 18-19, 22-23, 26-27, 30-31, 34-35, 38-39, 42-43, 46-47, 50-51, 54-55, 58-59, 62-63, 66-67, 70, и 71. В другом варианте осуществления изобретение относится к экспрессионной кассете, содержащей промотор, выбранный из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-10 и 77, и/или нуклеиновой кислоты, кодирующей пептид Brachyury, причем нуклеиновая кислота выбрана из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 12, 14-17, 20-21, 24-25, 28-29, 32-33, 36-37, 40-41, 44-45, 48-49, 52-53, 56-57, 60-61, 64-65, 68, и 69.
В предпочтительном варианте осуществления изобретение относится к экспрессионной кассете, содержащей последовательность нуклеиновой кислоты по меньшей мере на 70% гомологичную последовательности нуклеиновой кислоты, выбранной из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 72-76. В дополнительных вариантах осуществления изобретение относится к экспрессионной кассете, содержащей последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую по меньшей мере 75%, 80%, 85%, 90% или 95% идентичность с нуклеиновой кислотой, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 72-76.
В более предпочтительном варианте осуществления изобретение относится к экспрессионной кассете, содержащей SEQ ID NO: 72.
В более предпочтительном варианте осуществления изобретение относится к экспрессионной кассете, содержащей SEQ ID NO: 73.
В более предпочтительном варианте осуществления изобретение относится к экспрессионной кассете, содержащей SEQ ID NO: 74.
Рекомбинантные поксвирусы
В соответствии с дополнительным вариантом осуществления изобретения нуклеиновые кислоты, промоторы, рекомбинантные белки и/или экспрессионные кассеты согласно настоящему изобретению могут быть частью вектора. Термин «вектор» относится к любым векторам, известным специалисту в данной области техники. Вектор может представлять собой плазмидный вектор, такой как pBR322 или вектор серии pUC. Более предпочтительно вектор представляет собой рекомбинантный вирус. В контексте настоящего изобретения термин «вирус» или «рекомбинантный вирус» относится к инфекционному вирусу, содержащему вирусный геном. В этом случае нуклеиновые кислоты, промоторы, рекомбинантные белки и/или экспрессионные кассеты согласно настоящему изобретению являются частью вирусного генома соответствующего рекомбинантного вируса. Рекомбинантный вирусный геном упаковывают, и полученные рекомбинантные вирусы могут быть использованы для инфицирования клеток и клеточных линий, в частности для инфицирования живых животных, включая людей. Типичными рекомбинантными вирусами, которые могут быть использованы в соответствии с настоящим изобретением, являются аденовирусные векторы, ретровирусные векторы или векторы на основе аденоассоциированного вируса 2 (AAV2). Наиболее предпочтительными являются поксвирусные векторы.
В различных вариантах осуществления изобретения нуклеиновые кислоты, промоторы, полипептиды и экспрессионные кассеты в соответствии с настоящим изобретением предпочтительно активны в качестве поксвирусных промоторов или активны в качестве промоторов в инфицированных поксвирусом клетках. Поксвирус предпочтительно представляет собой авипоксивирус или ортопоксвирус. Более предпочтительно, поксвирус представляет собой авипоксвирус.
Термин «авипоксвирус» относится к любому авипоксвирусу, такому как вирус оспы кур, вирус оспы канареек, вирус оспы юнко, вирус оспы скворцов, вирус оспы голубей, вирус оспы попугаев, вирус оспы перепелов, вирус оспы фазанов, вирус оспы пингвинов, вирус оспы воробьев, вирус оспы скворцов и вирус оспы индеек. Предпочтительными авипоксвирусами являются вирус оспы канареек и вирус оспы кур.
Примером вируса оспы канареек является штамм Rentschler. Выделенный из бляшки и очищенный штамм вируса оспа канареек, обозначенный как ALVAC (патент США № 5766598) был депонирован в соответствии с условиями Будапештского договора в Американской коллекции типовых культур (ATCC) под номером доступа VR-2547. Другой штамм вируса оспы канареек, представляющий собой штамм коммерчески доступной вакцины канарипокса, обозначенный как LF2 CEP 524 24 10 75, доступен от Institute Merieux, Inc.
Примерами вируса оспы кур (Fowlpox) являются штаммы FP-1, FP-5, TROVAC (патент США № 5766598), и POXVAC-TC (патент США 7410644). FP-1 представляет собой штамм Duvette, модифицированный для использования в качестве вакцины у однодневных цыплят. Этот штамм, представляющий собой штамм коммерчески доступной вакцины вируса оспы кур, был обозначен как O DCEP 25/CEP67/2309, октябрь 1980 г., и доступен от Institute Merieux, Inc. FP-5 представляет собой штамм коммерчески доступной вакцины вируса оспы кур, полученной из эмбриона цыпленка, доступный от Американских научных лабораторий (отдел компании Schering Corp.) Мэдисон, Висконсин, Ветеринарная лицензия США № 165, серийный № 30321.
В некоторых вариантах осуществления изобретения рекомбинантный FPV содержит последовательность нуклеиновой кислоты, выбранную из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 1-10, и 77. В различных дополнительных вариантах осуществления изобретения рекомбинантный FPV содержит экспрессионную кассету, содержащую последовательность нуклеиновой кислоты, выбранную из SEQ ID NO: 72-76. В более предпочтительном варианте осуществления изобретения рекомбинантный FPV содержит экспрессионную кассету, содержащую последовательность нуклеиновой кислоты, выбранную из SEQ ID NO: 72, 73 и 74
В других вариантах осуществления изобретения рекомбинантный FPV содержит нуклеиновую кислоту, кодирующую антиген Brachyury, выбранный из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 11, 13, 18-19, 22-23, 26-27, 30-31, 34-35, 38-39, 42-43, 46-47, 50-51, 54-55, 58-59, 62-63, 66-67, 70, и 71. В других вариантах осуществления изобретения рекомбинантный FPV содержит пептид Brachyury, выбранный из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 11, 13, 18-19, 22-23, 26-27, 30-31, 34-35, 38-39, 42-43, 46-47, 50-51, 54-55, 58-59, 62-63, 66-67, 70, и 71. В других вариантах осуществления изобретения рекомбинантный FPV содержит нуклеиновую кислоту, выбранную из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 12, 14-17, 20-21, 24-25, 28-29, 32-33, 36-37, 40-41, 44-45, 48-49, 52-53, 56-57, 60-61, 64-65, 68, и 69. В более предпочтительных вариантах осуществления изобретения рекомбинантный FPV содержит пептид Brachyury, выбранный из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 18-19, 22-23, 26-27, 30-31, 34-35, 38-39, 42-43, 46-47, 50-51, 54-55, 58-59, 62-63, 66-67, 70 и 71, и/или нуклеиновую кислоту, выбранную из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 16-17, 20-21, 24-25, 28-29, 32-33, 36-37, 40-41, 44-45, 48-49, 52-53, 56-57, 60-61, 64-65, 68, и 69.
В различных других вариантах осуществления изобретения рекомбинантный поксвирус представляет собой ортопоксвирус, такой как, но не ограничиваясь ими, вирус осповакцины, модифицированный вирус осповакцины Анкара (Анкара) (MVA) или MVA-BN.
Примеры штаммов вируса осповакцины представляют собой штаммы Temple of Heaven, Copenhagen, Paris, Budapest, Dairen, Gam, MRIVP, Per, Tashkent, TBK, Tom, Bern, Patwadangar, BIEM, B-15, Lister, EM-63, New York City Board of Health, Elstree, Ikeda и WR. Предпочтительным штаммом вируса осповакцины (VV) является штамм Wyeth (DRYVAX) (патент США 7410644) Другим предпочтительным штаммом VV является MVA (Sutter, G. et al. [1994], Vaccine 12: 1032-40). Другим предпочтительным штаммом VV является MVA-BN.
Примерами штаммов вируса MVA, применяемых при осуществлении на практике настоящего изобретения и депонированных в соответствии с требованиями Будапештского договора, являются штаммы MVA 572, депонированные в Европейской коллекции культур клеток животных (ECACC), Лаборатории исследования и производства вакцин, Лабораторной службе общественного здравоохранения, Центре прикладной микробиологии и исследований в Porton Down, Salisbury, Wiltshire SP4 0JG, United Kingdom (Великобритания) под номером депозита ECACC 94012707 от 27 января 1994 г. и MVA 575, депонированный под номером ECACC 00120707 7 декабря 2000 г. Дополнительными иллюстративными штаммами являются MVA-BN, депонированный 30 августа 2000 г в Европейской коллекции культур клеток (ECACC) под номером V00083008, и его производные.
Хотя MVA-BN является предпочтительным благодаря более высокой безопасности (менее способен к репликации), для настоящего изобретения пригодны все штаммы MVA. В соответствии с вариантом осуществления изобретения штамм MVA представляет собой MVA-BN и его производные. Определение MVA-BN и его производных приведено в публикации PCT/EP01/13628, которая включена в настоящий документ путем ссылки.
В одном варианте осуществления настоящее изобретение охватывает применение рекомбинантных ортопоксвирусов, предпочтительно вируса осповакцины (VV), штамма Wyeth, ACAM 1000, ACAM 2000, MVA или MVA-BN для терапии рака. Рекомбинантные ортопоксвирусы генерируются путем вставки в ортопоксвирус гетерологичных последовательностей.
В некоторых вариантах осуществления изобретения MVA представляет собой MVA-BN, депонированный 30 августа 2000 г в Европейской коллекции культур клеток (ECACC) под номером V00083008, и описанный в международной публикации PCT WO2002042480 (см. также, например, патент США № 6761893 и 6913752), которые включены в данный документ посредством ссылки.
В некоторых вариантах осуществления изобретения рекомбинантный MVA является производным MVA-BN. Такие «производные» включают вирусы, проявляющие по существу те же самые репликационные характеристики, что и депонированный штамм (ECACC № V00083008), но имеющие отличия в одной или более частей своего генома. Вирусы, имеющие те же «репликационные характеристики», что и депонированный вирус, представляют собой вирусы, которые реплицируются со сходными амплификационными отношениями, что и депонированный штамм, в клетках CEF и клеточных линиях HeLa, HaCat и 143B, и которые проявляют подобные репликационные характеристики in vivo при определении, например, на модели трансгенной мыши AGR129.
В некоторых вариантах осуществления изобретения рекомбинантный ортопоксвирус содержит нуклеиновую кислоту, выбранную из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 1-10, и 77. В различных дополнительных вариантах осуществления изобретения рекомбинантный ортопоксвирус содержит экспрессионную кассету, содержащую последовательность нуклеиновой кислоты, выбранную из SEQ ID NO: 72-76. В более предпочтительном варианте осуществления изобретения рекомбинантный ортопоксвирус содержит экспрессионную кассету, содержащую последовательность нуклеиновой кислоты, выбранную из SEQ ID NO: 72, 73 и 74
В других вариантах осуществления изобретения рекомбинантный ортопоксвирус содержит нуклеиновую кислоту, кодирующую антиген Brachyury, выбранный из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 11, 13, 18-19, 22-23, 26-27, 30-31, 34-35, 38-39, 42-43, 46-47, 50-51, 54-55, 58-59, 62-63, 66-67, 70, и 71. В дополнительных вариантах осуществления изобретения рекомбинантный ортопоксвирус содержит нуклеиновую кислоту, выбранную из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 12, 14-17, 20-21, 24-25, 28-29, 32-33, 36-37, 40-41, 44-45, 48-49, 52-53, 56-57, 60-61, 64-65, 68, и 69. В более предпочтительных вариантах осуществления изобретения рекомбинантный ортопоксвирус содержит пептид Brachyury, выбранный из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 18-19, 22-23, 26-27, 30-31, 34-35, 38-39, 42-43, 46-47, 50-51, 54-55, 58-59, 62-63, 66-67, 70 и 71, и/или нуклеиновую кислоту, выбранную из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 16-17, 20-21, 24-25, 28-29, 32-33, 36-37, 40-41, 44-45, 48-49, 52-53, 56-57, 60-61, 64-65, 68, и 69.
Специалистам в данной области техники известны способы вставки экспрессионной кассеты или промотора в соответствии с настоящим изобретением в вирусный геном, в частности, в геном поксвируса, наиболее предпочтительно в геном ортопоксвируса и/или FPV. Например, экспрессионная кассета или ее промотор, или производное в соответствии с настоящим изобретением могут быть вставлены в геном поксвируса при помощи гомологичной рекомбинации. С этой целью нуклеиновая кислота трансфицируется в линию пермиссивных клеток, такую как клетки CEF или BHK, причем нуклеиновая кислота содержит экспрессионную кассету или промотор, или их производное в соответствии с настоящим изобретением, фланкированные нуклеотидными участками, которые гомологичны области поксвирусного генома, в который должна быть вставлена экспрессионная кассета или промотор, или их производное в соответствии с настоящим изобретением. Клетки инфицированы поксвирусом, а в инфицированных клетках происходит гомологичная рекомбинация между нуклеиновой кислотой и вирусным геномом. Альтернативно, также возможно сначала инфицировать клетки поксвирусом, а затем трансфицировать нуклеиновую кислоту в инфицированные клетки. И в этом случае рекомбинация происходит в клетках. Затем рекомбинантный поксвирус выбирают способами, известными в существующем уровне техники. Конструкция рекомбинантного поксвируса не ограничивается этим конкретным способом. В качестве альтернативы для этого может быть использован любой подходящий способ, известный специалисту в данной области техники.
Экспрессионная кассета или промотор в соответствии с настоящим изобретением могут быть введены в любую подходящую часть вируса или вирусного вектора, в частности, в вирусный геном. В случае ортопоксвируса и авипоксвируса вставка может быть выполнена в не относящимся к незаменимым частям вирусного генома или в межгенную область вирусного генома. Термин «межгенная область» предпочтительно относится к тем частям вирусного генома, которые расположены между двумя соседними генами, которые не содержат кодирующих последовательностей. Если вирус является ортопоксвирусом и авипоксвирусом, вставка также может быть выполнена в сайт делеции вирусного генома. Термин «сайт делеции» относится к тем частям вирусного генома, которые удаляются по отношению к геному встречающегося в природе ортопоксвируса или авипоксвируса. Однако сайты вставки не ограничены этими предпочтительными сайтами для вставки в геном ортопоксвируса и авипоксвируса, поскольку в объем настоящего изобретения входит экспрессионная кассета, которая может быть вставлена в любом месте вирусного генома до тех пор, пока можно получить рекомбинанты, которые могут быть амплифицированы и размножены по меньшей мере в одной системе клеточной культуры, такой как фибробласты куриных эмбрионов (клетки CEF).
Промотор в соответствии с настоящим изобретением может быть использован для экспрессии гена, который уже является частью вектора, например, геном ортопоксвируса и/или авипоксвируса. Такой ген может представлять собой ген, который, естественно, является частью вирусного генома или чужеродного гена, который уже был вставлен в вектор. В этих случаях промотор согласно настоящему изобретению вводится в 3'-5' направлении от гена в векторе, экспрессия которого должна контролироваться промотором.
Вакцины и/или композиции
В соответствии с еще одним вариантом осуществления настоящее изобретение относится к вектору в соответствии с настоящим изобретением в качестве вакцины или лекарственного средства. В более общем плане настоящее изобретение относится к вакцине или фармацевтической композиции, содержащей экспрессионную кассету, ДНК или вектор в соответствии с настоящим изобретением. Специалистам в данной области техники известны способы введения вакцины или фармацевтической композиции животному или человеческому организму. В случае ДНК и рекомбинантных плазмидных векторов ДНК и вектор можно просто вводить путем инъекции. Если вакцина или композиция представляют собой рекомбинантный вирус, такой как ортопоксвирус или авипоксвирус, в частности рекомбинантный MVA или рекомбинантный FPV, то ее также можно вводить животному или человеческому организму в соответствии со знаниями специалиста в данной области техники, например, при помощи внутривенного, внутримышечного, интраназального, внутрикожного или подкожного введения. Более подробная информация о количестве вводимого вируса приведена ниже.
В дополнение к промотору, экспрессионной кассете или вектору в соответствии с настоящим изобретением фармацевтическая композиция или вакцина обычно могут содержать один или более фармацевтически приемлемых и/или одобренных носителей, добавок, антибиотиков, консервантов, адъювантов, разбавителей и/или стабилизаторов. Кроме того, в таких основах могут присутствовать вспомогательные вещества, такие как увлажняющие или эмульгирующие агенты, буферные вещества для коррекции рН и т.п. Подходящие носители обычно представляют собой большие, медленно метаболизируемые молекулы, такие как белки, полисахариды, полимолочные кислоты, полигликолевые кислоты, полимерные аминокислоты, сополимеры аминокислот, липидные агрегаты или тому подобное.
Для получения фармацевтических композиций или вакцин ДНК, экспрессионная кассета или вектор в соответствии с настоящим изобретением, в частности рекомбинантный ортопоксвирус или авипоксвирус, такой как рекомбинантный MVA или рекомбинантный FPV, превращают в физиологически приемлемую форму. Для MVA и FPV это можно сделать на основе опыта изготовления поксвирусных вакцин, применяемых для вакцинации против оспы, как описано H. et al. [1974] Dtsch. med. Wschr. 99, 2386-2392). Например, очищенный вирус с титром 5×108 TCID50/мл в составе композиции 10 ммоль/л Трис, 140 ммоль/л NaCl, pH 7,4 хранят при -80°C. Для получения вакцин для инъекций, например, 101-109 частиц рекомбинантного вируса в соответствии с настоящим изобретением подвергают лиофилизации в фосфатно-буферном растворе (PBS) в присутствии 2% пептона и 1% альбумина человека в ампуле, предпочтительно в стеклянной ампуле. В качестве альтернативы, дозы вакцины могут быть получены путем ступенчатой сублимационной сушки вируса в препарате. Такая композиция может содержать дополнительные добавки, такие как маннит, декстран, сахар, глицин, лактоза или поливинилпирролидон, или другие вспомогательные вещества, такие как антиоксиданты или инертный газ, стабилизаторы или рекомбинантные белки (например, сывороточный альбумин человека), подходящие для введения in vivo. Типичный препарат, содержащий вирус, подходящий для сублимационной сушки, содержит 10 ммоль/л Трис-буфер, 140 ммоль/л NaCl, 18,9 г/л декстрана (MW 36000-40000), 45 г/л сахарозы, 0,108 г/л монокалиевой соли L-глутаминовой кислоты моногидрат pH 7,4. Затем стеклянную ампулу герметизируют и ее можно хранить в диапазоне от 4°C до комнатной температуры в течение нескольких месяцев. Однако до тех пор, пока нет необходимости в обратном, ампулу предпочтительно хранить при температуре ниже -20°C.
Для вакцинации или терапии лиофилизат или лиофилизированный продукт может быть растворен в 0,1-0,5 мл водного раствора, предпочтительно воды, физиологического раствора или Трис-буфера, и вводиться системно или местно, т.е., парентерально, подкожно, внутримышечно, или любым другим способом введения, известным квалифицированному специалисту. Фактическое фармацевтически эффективное количество или терапевтическая доза будут, конечно, зависеть от факторов, известных специалистам в данной области техники, таких как возраст и вес пациента, способа введения и степени тяжести заболевания.
В одном или более вариантах осуществления настоящее изобретение дополнительно относится к способу введения кодирующей последовательности в целевую клетку, такую как клетка человека для терапевтических целей, включающему введение нуклеиновых кислот, промоторов, рекомбинантных белков и/или экспрессионных кассет в соответствии с настоящим изобретением в целевую клетку. Иллюстративные человеческие целевые клетки могут включать антигенпрезентирующие клетки (APC), такие как дендритные клетки, макрофаги и другие не-APC, такие как фибробласты, опухолевые клетки и так далее.
Настоящее изобретение также относится к способу получения пептида, белка и/или вируса, включающему инфицирование клетки-хозяина рекомбинантным вирусом в соответствии с настоящим изобретением, с последующим культивированием инфицированной клетки-хозяина в подходящих условиях и далее с последующим выделением и/или обогащением пептида и/или белка и/или вирусов, продуцируемых указанной клеткой-хозяином. Клетка должна быть клеткой, в которой вирус способен реплицироваться, если она предназначена для продуцирования, то есть амплификации вируса в соответствии с настоящим изобретением. Для поксвирусов, в частности MVA, подходящими клетками являются клетки CEF (фибробласты куриных эмбрионов) или BHK (почки новорожденного хомяка). Для авипоксвирусов, таких как вирус оспы кур, подходящие клетки включают клетки CEF или CED (дермальные фибробласты куриных эмбрионов). Если предполагается получение пептида/белка, кодируемого рекомбинантным вирусом в соответствии с настоящим изобретением, клеткой может быть любая клетка, которая может быть инфицирована рекомбинантным вирусным вектором и которая позволяет экспрессировать кодируемые вирусом белки/пептиды.
Настоящее изобретение также относится к способу получения пептида, белка и/или вируса, включающему трансфекцию клетки с помощью экспрессионной кассеты, нуклеиновой кислоты, промотора, рекомбинантного белка и/или ДНК экспрессионной кассеты ДНК в соответствии с настоящим изобретением с последующим инфицированием клетки поксвирусом. Инфицированную клетку-хозяина культивируют в подходящих условиях. Следующая стадия включает выделение и/или обогащение пептида и/или белка и/или вирусов, продуцируемых указанной клеткой-хозяином. Стадию инфицирования клеток поксвирусом можно выполнить до или после стадии трансфекции клеток.
Настоящее изобретение также относится к клеткам, содержащим нуклеиновую кислоту, промотор, рекомбинантный белок и/или экспрессионную кассету в соответствии с настоящим изобретением. В частности, настоящее изобретение относится к клеткам, инфицированным рекомбинантным вирусом в соответствии с настоящим изобретением.
Примеры
Следующие примеры дополнительно иллюстрируют настоящее изобретение. Специалисту в данной области техники будет понятно, что приведенные примеры никоим образом не могут быть истолкованы как ограничивающие применимость технологии.
Пример 1: Экспрессия Brachyury в человеческих DC, инфицированных рекомбинантными вирусами оспы кур
Для идентификации экспрессии белка Brachyury человеческие дендритные клетки (DC) инфицировали положительным контрольным вирусом, рекомбинантным MVA, содержащим Brachyury и TRICOM, при множественности заражения (MOI) 2,5. DC человека также были инфицированы отрицательным контрольным нерекомбинантным вирусом оспы кур (FPV-ДТ) или рекомбинантными штаммами вируса оспы кур, содержащими экспрессионную кассету Brachyury и TRICOM в соответствии с настоящим изобретением. Каждый штамм FPV (приведенные более подробно в таблице 1), включая FPV-ДТ, FPV-mBN343A, FPV-mBN344A и FPV-mBN345A, использовали для инфицирования DC с MOI 20. Экспрессию Brachyury FPV выявляли с помощью вестерн-блоттинга, выполненного с использованием кроличьего моноклонального антитела против Brachyury. Белок ʺдомашнего хозяйстваʺ глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназу (GAPDH) также выявляли с помощью вестерн-блоттинга в качестве контроля для нанесения.
Таблица 1. Рекомбинантные штаммы вируса оспы кур, содержащие экспрессионную кассету Brachyury и TRICOM
Рекомбинантный штамм FPV Экспрессионная кассета
FPV-mBN343A SEQ ID NO: 74
FPV-mBN344A SEQ ID NO: 75
FPV-mBN345A SEQ ID NO: 72
FPV-mBN354A SEQ ID NO: 76
FPV-mBN355A SEQ ID NO: 73
Результаты показаны на фиг. 1. Экспрессию Brachyury выявляли с использованием рекомбинантных FPV FPV-mBN343A и FPVmBN345, но не выявляли с использованием рекомбинантного FPV FPV-mBN344A. Экспрессию Brachyury также выявляли с помощью MVA-Brachyury-TRICOM. Аналогичный контроль (образец) был продемонстрирован при помощи экспрессии GAPDH.
Пример 2: Экспрессия Brachyury в человеческих DC, инфицированных рекомбинантными вирусами оспы кур
Уровни экспрессии белка Brachyury также сравнивали между дополнительными рекомбинантными штаммами FPV, экспрессирующими Brachyury с различными промоторами. Дендритные клетки человека (DC) инфицировали с MOI равной 5 положительным контрольным рекомбинантным MVA, содержащим Brachyury и TRICOM, и отрицательным контрольным нерекомбинантным штаммом MVA-ДТ. DC человека также инфицировали рекомбинантными FPV, содержащими экспрессионную кассету Brachyury и TRICOM в соответствии с настоящим описанием (например, FPV-mBN343A, FPV-mBN344A, FPV-mBN345A, FPV-mBN354A, FPV-mBN355A, см. таблицу 1). DC человека дополнительно инфицировали рекомбинантным вирусом оспы кур (FPV), содержащим экспрессионную кассету Brachyury, имеющую или промотор вируса осповакцины (VV) -40k, или промотор PrS. Нерекомбинантный штамм FPV-ДТ служил в качестве отрицательного контроля. Все FPV использовали при MOI равной 40. Экспрессию Brachyury выявляли с помощью вестерн-блоттинга, выполненного с использованием кроличьего моноклонального антитела против Brachyury. GAPDH также определяли, как контроль для нанесения.
Результаты показаны на фиг. 2. Экспрессию Brachyury выявляли с использованием рекомбинантных FPV FPV-mBN343A и FPV-mBN345A, но не выявляли с использованием рекомбинантного FPV FPV-mBN344A и FPV-mBN354A. Более конкретно, экспрессия Brachyury была обнаружена при более низких уровнях для рекомбинантных FPV, имеющих промоторы VV-40k или PrS, которые управляют Brachyury (то есть FVP-mBN281A, FVP-mBN249B). В отрицательных контролях (неинфицированных DC, MVA-ДТ или FPV-ДТ) не была выявлена экспрессия Brachyury. Аналогичный контроль (образец) была продемонстрирован при помощи экспрессии GAPDH.
Уровни экспрессии Brachyury из вестерн-блоттинга, показанного в примере 2, были нормированы относительно экспрессии гена «домашнего хозяйства» GAPDH, который, как ожидается, будет экспрессирован на эквивалентных уровнях между клетками. Была измерена интенсивность каждой полосы Brachyury и GAPDH, и было рассчитано соотношение между интенсивностью полос Brachyury и GAPDH в пределах одного и того же образца.
Результаты показаны на фиг. 3. Среди конструктов FPV наивысшая экспрессия Brachyury относительно GAPDH была обнаружена у DC, инфицированных FPV-mBN355A. Умеренная относительная экспрессия Brachyury была обнаружена у DC, инфицированных FPV-mBN343A или FPV-mBN345A. Наименьшая относительная экспрессия Brachyury была обнаружена для рекомбинантных FPV, имеющих промоторы VV-40k или PrS, управляющие Brachyury (то есть FVP-mBN281A, FVP-mBN249B). Наибольшую относительную экспрессию Brachyury наблюдали для инфицированных положительным контрольным вирусом MVA-Brachyury-TRICOM; в образцах отрицательного контроля не была выявлена экспрессия Brachyury. Поэтому среди рекомбинантных штаммов FPV превосходную экспрессию Brachyury индуцировали векторы, управляющие экспрессией Brachyury, с промоторами FPV-mBN355, FPV-mBN345 или FPV-mBN344.
Пример 3: Экспрессия Brachyury и TRICOM в клетках CMMT, инфицированных рекомбинантными вирусами оспы кур
Экспрессию белков Brachyury и TRICOM также оценивали при помощи проточной цитометрии с использованием флуоресцентно-меченных антител, специфичных для каждого белка. Клетки CMMT (линия клеток опухолей молочной железы макаки резуса) были инфицированы положительным контрольным рекомбинантным MVA, содержащим Brachyury и TRICOM, или рекомбинантными FPV, содержащими экспресссионную кассету Brachyury и TRICOM в соответствии с настоящим изобретением (например, FPV-mBN343A, FPV-mBN345A), или рекомбинантным FPV, имеющим промотор PrS, управляющий Brachyury (FVP-mBN249B). Клетки инфицировали с MOI ниже 1, так что анализировали смесь неинфицированных и инфицированных клеток. Неинфицированные клетки CMMT служили в качестве отрицательного контроля.
Образцы FACS приобретали в компании BDLSRII или Fortessa и анализированы с использованием программного обеспечения BDFACSDIVA (BDBioscience, Сан-Хосе, Калифорния) или FlowJo (TreeStarInc., Ашленд, Орегон).
Результаты показаны на фиг. 4. Гистограммы сигналов, обнаруженных для белков Brachyury и трех TRICOM (CD80, CD54 и CD58), были нанесены на график, и были выведены ворота, где был обнаружен положительный сигнал (черные линии). Среди конструкций FPV самая высокая экспрессия Brachyury (показанное самым большим сдвигом сигнала вдоль оси x) была обнаружена в клетках CMMT, инфицированных FPV-mBN343A или FPV-mBN345A. Самая низкая экспрессия Brachyury была обнаружена для рекомбинантного FPV с промотором PrS, управляющим Brachyury (то есть FVP-mBN281A, FVP-mBN249B). Аналогичные уровни экспрессии белков TRICOM были обнаружены среди конструкций FPV. Экспрессию Brachyury и белков TRICOM наблюдали также при инфицировании положительным контрольным вирусом MVA-Brachyury-TRICOM.
Для количественного определения уровня экспрессии Brachyury в инфицированных клетках была рассчитана средняя интенсивность флуоресценции (СИФ) для клеток, содержащих Brachyury, которые показаны на фиг. 4.
Результаты показаны на фиг. 5. Среди конструкций FPV была обнаружена самая высокая СИФ Brachyury в клетках CMMT, инфицированных FPV-mBN343A или FPV-mBN345A. Самая низкая СИФ Brachyury была обнаружена для рекомбинантного FPV с промотором PrS, управляющим Brachyury (FVP-mBN249B). Самая высокая СИФ Brachyury всех тестируемых конструкций была в клетках, инфицированных положительным контрольным вирусом MVA-Brachyury-TRICOM. Таким образом, средний уровень экспрессии Brachyury в инфицированных клетках CMMT был выше по сравнению с векторами, управляющими экспрессией Brachyury, с промоторами FPV-mBN345 или FPV-mBN344, чем с промотором PrS.
Пример 4: Экспрессия Brachyury из FPV-mBN345B
Кассету для отбора клеток по чувствительности к лекарственному препарату, используемую для первоначального генерирования рекомбинантного штамма FPV-mBN345A, удаляли для получения рекомбинантного вектора, подходящего для клинического исследования. Это было достигнуто путем пассирования вируса на фибробластах куриных эмбрионов (CEF) без отбора по чувствительности к лекарственному препарату, очистки отдельных клонов с помощью метода бляшкообразования, и идентификации клонов, лишенных кассеты для отбора по чувствительности к лекарственному препарату с помощью ПЦР и секвенирования ДНК. Это привело к генерации FPV-mBN345B, который содержит экспрессионную кассету Brachyury, управляемую промотором I3+15aa и TRICOM, но не содержит кассету для отбора по чувствительности к лекарственному препарату.
Экспрессия белков Brachyury и TRICOM из FPV-mBN345B была подтверждена в клетках CMMT, путем их инфицирования FPV-BN345B при MOI равном 0,625 для инфицирования подмножества клеток или равном 40 для инфицирования всех клеток.
Результаты показаны на фиг. 6. Гистограммы сигналов, обнаруженных для белков Brachyury и трех TRICOM (CD80, CD54 и CD58), были нанесены с использованием красных линий для образцов, инфицированных с MOI равном 0,625, и синих линий для образцов, инфицированных с MOI равном 40. Неинфицированные клетки служили в качестве отрицательного контроля (черные линии). При MOI равном 0,625 экспрессия белков Brachyury и трех TRICOM была обнаружена в виде пика, сдвинутого справа от более высокого пика из неинфицированных клеток. При MOI равном 40 экспрессия Brachyury и TRICOM была обнаружена во всех клетках в виде пика, сдвинутого справа от неинфицированных клеток.
Другие варианты осуществления изобретения понятны специалистам в данной области техники из рассмотрения данного описания и практического осуществления изобретения, описанного в рамках изобретения. Предполагается, что описание и примеры следует рассматривать только как иллюстративные, причем истинный объем и сущность настоящего изобретения указаны в следующей формуле изобретения.
--->
СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110> BAVARIAN NORDIC A/S
<120> ПРОМОТОРЫ ДЛЯ УСИЛЕНИЯ ЭКСПРЕССИИ В ПОКСВИРУСАХ
<130> BNIT0010PCT
<140> 62/199681
<141> 2015-07-31
<160> 77
<170> PatentIn версии 3.5
<210> 1
<211> 167
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Промоторная последовательность с нуклеотидами 5' гена FPV 088
<400> 1
tatccgtaca ggtttgtttc tgaaattcac tttgtaagat acataattaa caaattcagg 60
gggaaaaatc tttacaaaat tagtatagaa gctatagata tatcaaaagg tagacaacaa 120
ataatcagaa cctaattttt ttatcaaaaa attaaaatat aaataaa 167
<210> 2
<211> 170
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Промоторная последовательность с нуклеотидами 5' гена FPV 088 +  последовательность atc
<400> 2
tatccgtaca ggtttgtttc tgaaattcac tttgtaagat acataattaa caaattcagg 60
gggaaaaatc tttacaaaat tagtatagaa gctatagata tatcaaaagg tagacaacaa 120
ataatcagaa cctaattttt ttatcaaaaa attaaaatat aaataaaatc 170
<210> 3
<211> 183
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Промоторная последовательность с нуклеотидами 5' гена FPV 088 с добавлением 16 нуклеотидов FPV 088
<400> 3
tatccgtaca ggtttgtttc tgaaattcac tttgtaagat acataattaa caaattcagg 60
gggaaaaatc tttacaaaat tagtatagaa gctatagata tatcaaaagg tagacaacaa 120
ataatcagaa cctaattttt ttatcaaaaa attaaaatat aaataaaatg aaaaataact 180
tgt 183
<210> 4
<211> 194
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Промоторная последовательность с областью из гена FPV 088 плюс добавление 27 нуклеотидов
<400> 4
tatccgtaca ggtttgtttc tgaaattcac tttgtaagat acataattaa caaattcagg 60
gggaaaaatc tttacaaaat tagtatagaa gctatagata tatcaaaagg tagacaacaa 120
ataatcagaa cctaattttt ttatcaaaaa attaaaatat aaataaaatg aaaaataact 180
tgtatgaaga aaaa 194
<210> 5
<211> 200
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Промоторная последовательность с областью из гена FPV 088 плюс добавление 33 нуклеотида
<400> 5
tatccgtaca ggtttgtttc tgaaattcac tttgtaagat acataattaa caaattcagg 60
gggaaaaatc tttacaaaat tagtatagaa gctatagata tatcaaaagg tagacaacaa 120
ataatcagaa cctaattttt ttatcaaaaa attaaaatat aaataaaatg aaaaataact 180
tgtatgaaga aaaaatgaac 200
<210> 6
<211> 212
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Промоторная последовательность с областью из гена FPV 088 плюс добавление 45 нуклеотидов
<400> 6
tatccgtaca ggtttgtttc tgaaattcac tttgtaagat acataattaa caaattcagg 60
gggaaaaatc tttacaaaat tagtatagaa gctatagata tatcaaaagg tagacaacaa 120
ataatcagaa cctaattttt ttatcaaaaa attaaaatat aaataaaatg aaaaataact 180
tgtatgaaga aaaaatgaac atgagtaaga aa 212
<210> 7
<211> 232
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Промоторная последовательность с областью из гена FPV 088 плюс добавление  65 нуклеотидов
<400> 7
tatccgtaca ggtttgtttc tgaaattcac tttgtaagat acataattaa caaattcagg 60
gggaaaaatc tttacaaaat tagtatagaa gctatagata tatcaaaagg tagacaacaa 120
ataatcagaa cctaattttt ttatcaaaaa attaaaatat aaataaaatg aaaaataact 180
tgtatgaaga aaaaatgaac atgagtaaga aacaagtaaa aactcaaagt aa 232
<210> 8
<211> 242
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Промоторная последовательность с областью из гена FPV 088 плюс добавление 75 нуклеотидов
<400> 8
tatccgtaca ggtttgtttc tgaaattcac tttgtaagat acataattaa caaattcagg 60
gggaaaaatc tttacaaaat tagtatagaa gctatagata tatcaaaagg tagacaacaa 120
ataatcagaa cctaattttt ttatcaaaaa attaaaatat aaataaaatg aaaaataact 180
tgtatgaaga aaaaatgaac atgagtaaga aacaagtaaa aactcaaagt aaatgtaata 240
at 242
<210> 9
<211> 245
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Промоторная последовательность с областью из гена FPV 088 плюс добавление 78 нуклеотидов
<400> 9
tatccgtaca ggtttgtttc tgaaattcac tttgtaagat acataattaa caaattcagg 60
gggaaaaatc tttacaaaat tagtatagaa gctatagata tatcaaaagg tagacaacaa 120
ataatcagaa cctaattttt ttatcaaaaa attaaaatat aaataaaatg aaaaataact 180
tgtatgaaga aaaaatgaac atgagtaaga aacaagtaaa aactcaaagt aaatgtaata 240
atatc 245
<210> 10
<211> 119
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Промоторная последовательность с нуклеотидами 5' гена FPV L2R
<400> 10
ttaatgtata gaactaattt ataataaaca tagtaaatat gggtaacttc ttaatagcca 60
taattaaaat tgaaaaaaaa atatcattat aaaacgtaaa cgaacaaaaa acattaatt 119
<210> 11
<211> 435
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Изоформа 1 белка Brachyury с № доступа GenBank O15178.1
<400> 11
Met Ser Ser Pro Gly Thr Glu Ser Ala Gly Lys Ser Leu Gln Tyr Arg
1 5 10 15
Val Asp His Leu Leu Ser Ala Val Glu Asn Glu Leu Gln Ala Gly Ser
20 25 30
Glu Lys Gly Asp Pro Thr Glu Arg Glu Leu Arg Val Gly Leu Glu Glu
35 40 45
Ser Glu Leu Trp Leu Arg Phe Lys Glu Leu Thr Asn Glu Met Ile Val
50 55 60
Thr Lys Asn Gly Arg Arg Met Phe Pro Val Leu Lys Val Asn Val Ser
65 70 75 80
Gly Leu Asp Pro Asn Ala Met Tyr Ser Phe Leu Leu Asp Phe Val Ala
85 90 95
Ala Asp Asn His Arg Trp Lys Tyr Val Asn Gly Glu Trp Val Pro Gly
100 105 110
Gly Lys Pro Glu Pro Gln Ala Pro Ser Cys Val Tyr Ile His Pro Asp
115 120 125
Ser Pro Asn Phe Gly Ala His Trp Met Lys Ala Pro Val Ser Phe Ser
130 135 140
Lys Val Lys Leu Thr Asn Lys Leu Asn Gly Gly Gly Gln Ile Met Leu
145 150 155 160
Asn Ser Leu His Lys Tyr Glu Pro Arg Ile His Ile Val Arg Val Gly
165 170 175
Gly Pro Gln Arg Met Ile Thr Ser His Cys Phe Pro Glu Thr Gln Phe
180 185 190
Ile Ala Val Thr Ala Tyr Gln Asn Glu Glu Ile Thr Ala Leu Lys Ile
195 200 205
Lys Tyr Asn Pro Phe Ala Lys Ala Phe Leu Asp Ala Lys Glu Arg Ser
210 215 220
Asp His Lys Glu Met Met Glu Glu Pro Gly Asp Ser Gln Gln Pro Gly
225 230 235 240
Tyr Ser Gln Trp Gly Trp Leu Leu Pro Gly Thr Ser Thr Leu Cys Pro
245 250 255
Pro Ala Asn Pro His Pro Gln Phe Gly Gly Ala Leu Ser Leu Pro Ser
260 265 270
Thr His Ser Cys Asp Arg Tyr Pro Thr Leu Arg Ser His Arg Ser Ser
275 280 285
Pro Tyr Pro Ser Pro Tyr Ala His Arg Asn Asn Ser Pro Thr Tyr Ser
290 295 300
Asp Asn Ser Pro Ala Cys Leu Ser Met Leu Gln Ser His Asp Asn Trp
305 310 315 320
Ser Ser Leu Gly Met Pro Ala His Pro Ser Met Leu Pro Val Ser His
325 330 335
Asn Ala Ser Pro Pro Thr Ser Ser Ser Gln Tyr Pro Ser Leu Trp Ser
340 345 350
Val Ser Asn Gly Ala Val Thr Pro Gly Ser Gln Ala Ala Ala Val Ser
355 360 365
Asn Gly Leu Gly Ala Gln Phe Phe Arg Gly Ser Pro Ala His Tyr Thr
370 375 380
Pro Leu Thr His Pro Val Ser Ala Pro Ser Ser Ser Gly Ser Pro Leu
385 390 395 400
Tyr Glu Gly Ala Ala Ala Ala Thr Asp Ile Val Asp Ser Gln Tyr Asp
405 410 415
Ala Ala Ala Gln Gly Arg Leu Ile Ala Ser Trp Thr Pro Val Ser Pro
420 425 430
Pro Ser Met
435
<210> 12
<211> 1308
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Кодирующая последовательность для изоформы 1 белка Brachyury с № доступа в GenBank O15178.1
<400> 12
atgagctccc ctggcaccga gagcgcggga aagagcctgc agtaccgagt ggaccacctg 60
ctgagcgccg tggagaatga gctgcaggcg ggcagcgaga agggcgaccc cacagagcgc 120
gaactgcgcg tgggcctgga ggagagcgag ctgtggctgc gcttcaagga gctcaccaat 180
gagatgatcg tgaccaagaa cggcaggagg atgtttccgg tgctgaaggt gaacgtgtct 240
ggcctggacc ccaacgccat gtactccttc ctgctggact tcgtggcggc ggacaaccac 300
cgctggaagt acgtgaacgg ggaatgggtg ccggggggca agccggagcc gcaggcgccc 360
agctgcgtct acatccaccc cgactcgccc aacttcgggg cccactggat gaaggctccc 420
gtctccttca gcaaagtcaa gctcaccaac aagctcaacg gagggggcca gatcatgctg 480
aactccttgc ataagtatga gcctcgaatc cacatagtga gagttggggg tccacagcgc 540
atgatcacca gccactgctt ccctgagacc cagttcatag cggtgactgc ttatcagaac 600
gaggagatca cagctcttaa aattaagtac aatccatttg caaaagcttt ccttgatgca 660
aaggaaagaa gtgatcacaa agagatgatg gaggaacccg gagacagcca gcaacctggg 720
tactcccaat gggggtggct tcttcctgga accagcaccc tgtgtccacc tgcaaatcct 780
catcctcagt ttggaggtgc cctctccctc ccctccacgc acagctgtga caggtaccca 840
accctgagga gccaccggtc ctcaccctac cccagcccct atgctcatcg gaacaattct 900
ccaacctatt ctgacaactc acctgcatgt ttatccatgc tgcaatccca tgacaattgg 960
tccagccttg gaatgcctgc ccatcccagc atgctccccg tgagccacaa tgccagccca 1020
cctaccagct ccagtcagta ccccagcctg tggtctgtga gcaacggcgc cgtcaccccg 1080
ggctcccagg cagcagccgt gtccaacggg ctgggggccc agttcttccg gggctccccc 1140
gcgcactaca cacccctcac ccatccggtc tcggcgccct cttcctcggg atccccactg 1200
tacgaagggg cggccgcggc cacagacatc gtggacagcc agtacgacgc cgcagcccaa 1260
ggccgcctca tagcctcatg gacacctgtg tcgccacctt ccatgtga 1308
<210> 13
<211> 435
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Изоформа 1 белка Brachyury (L254V)
<400> 13
Met Ser Ser Pro Gly Thr Glu Ser Ala Gly Lys Ser Leu Gln Tyr Arg
1 5 10 15
Val Asp His Leu Leu Ser Ala Val Glu Asn Glu Leu Gln Ala Gly Ser
20 25 30
Glu Lys Gly Asp Pro Thr Glu Arg Glu Leu Arg Val Gly Leu Glu Glu
35 40 45
Ser Glu Leu Trp Leu Arg Phe Lys Glu Leu Thr Asn Glu Met Ile Val
50 55 60
Thr Lys Asn Gly Arg Arg Met Phe Pro Val Leu Lys Val Asn Val Ser
65 70 75 80
Gly Leu Asp Pro Asn Ala Met Tyr Ser Phe Leu Leu Asp Phe Val Ala
85 90 95
Ala Asp Asn His Arg Trp Lys Tyr Val Asn Gly Glu Trp Val Pro Gly
100 105 110
Gly Lys Pro Glu Pro Gln Ala Pro Ser Cys Val Tyr Ile His Pro Asp
115 120 125
Ser Pro Asn Phe Gly Ala His Trp Met Lys Ala Pro Val Ser Phe Ser
130 135 140
Lys Val Lys Leu Thr Asn Lys Leu Asn Gly Gly Gly Gln Ile Met Leu
145 150 155 160
Asn Ser Leu His Lys Tyr Glu Pro Arg Ile His Ile Val Arg Val Gly
165 170 175
Gly Pro Gln Arg Met Ile Thr Ser His Cys Phe Pro Glu Thr Gln Phe
180 185 190
Ile Ala Val Thr Ala Tyr Gln Asn Glu Glu Ile Thr Ala Leu Lys Ile
195 200 205
Lys Tyr Asn Pro Phe Ala Lys Ala Phe Leu Asp Ala Lys Glu Arg Ser
210 215 220
Asp His Lys Glu Met Met Glu Glu Pro Gly Asp Ser Gln Gln Pro Gly
225 230 235 240
Tyr Ser Gln Trp Gly Trp Leu Leu Pro Gly Thr Ser Thr Val Cys Pro
245 250 255
Pro Ala Asn Pro His Pro Gln Phe Gly Gly Ala Leu Ser Leu Pro Ser
260 265 270
Thr His Ser Cys Asp Arg Tyr Pro Thr Leu Arg Ser His Arg Ser Ser
275 280 285
Pro Tyr Pro Ser Pro Tyr Ala His Arg Asn Asn Ser Pro Thr Tyr Ser
290 295 300
Asp Asn Ser Pro Ala Cys Leu Ser Met Leu Gln Ser His Asp Asn Trp
305 310 315 320
Ser Ser Leu Gly Met Pro Ala His Pro Ser Met Leu Pro Val Ser His
325 330 335
Asn Ala Ser Pro Pro Thr Ser Ser Ser Gln Tyr Pro Ser Leu Trp Ser
340 345 350
Val Ser Asn Gly Ala Val Thr Pro Gly Ser Gln Ala Ala Ala Val Ser
355 360 365
Asn Gly Leu Gly Ala Gln Phe Phe Arg Gly Ser Pro Ala His Tyr Thr
370 375 380
Pro Leu Thr His Pro Val Ser Ala Pro Ser Ser Ser Gly Ser Pro Leu
385 390 395 400
Tyr Glu Gly Ala Ala Ala Ala Thr Asp Ile Val Asp Ser Gln Tyr Asp
405 410 415
Ala Ala Ala Gln Gly Arg Leu Ile Ala Ser Trp Thr Pro Val Ser Pro
420 425 430
Pro Ser Met
435
<210> 14
<211> 1308
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Кодирующая последовательность, кодирующая изоформу 1 белка Brachyury с L254V
<400> 14
atgagctccc ctggcaccga gagcgcggga aagagcctgc agtaccgagt ggaccacctg 60
ctgagcgccg tggagaatga gctgcaggcg ggcagcgaga agggcgaccc cacagagcgc 120
gaactgcgcg tgggcctgga ggagagcgag ctgtggctgc gcttcaagga gctcaccaat 180
gagatgatcg tgaccaagaa cggcaggagg atgtttccgg tgctgaaggt gaacgtgtct 240
ggcctggacc ccaacgccat gtactccttc ctgctggact tcgtggcggc ggacaaccac 300
cgctggaagt acgtgaacgg ggaatgggtg ccggggggca agccggagcc gcaggcgccc 360
agctgcgtct acatccaccc cgactcgccc aacttcgggg cccactggat gaaggctccc 420
gtctccttca gcaaagtcaa gctcaccaac aagctcaacg gagggggcca gatcatgctg 480
aactccttgc ataagtatga gcctcgaatc cacatagtga gagttggggg tccacagcgc 540
atgatcacca gccactgctt ccctgagacc cagttcatag cggtgactgc ttatcagaac 600
gaggagatca cagctcttaa aattaagtac aatccatttg caaaggcttt ccttgatgca 660
aaggaaagaa gtgatcacaa agagatgatg gaggaacccg gagacagcca gcaacctggg 720
tactcccaat gggggtggct tcttcctgga accagcaccg tttgtccacc tgcaaatcct 780
catcctcagt ttggaggtgc cctctccctc ccctccacgc acagctgtga caggtaccca 840
accctgagga gccaccggtc ctcaccctac cccagcccct atgctcatcg gaacaattct 900
ccaacctatt ctgacaactc acctgcatgt ttatccatgc tgcaatccca tgacaattgg 960
tccagccttg gaatgcctgc ccatcccagc atgctccccg tgagccacaa tgccagccca 1020
cctaccagct ccagtcagta ccccagcctg tggtctgtga gcaacggcgc cgtcaccccg 1080
ggctcccagg cagcagccgt gtccaacggg ctgggggccc agttcttccg gggctccccc 1140
gcgcactaca cacccctcac ccatccggtc tcggcgccct cttcctcggg atccccactg 1200
tacgaagggg cggccgcggc cacagacatc gtggacagcc agtacgacgc cgcagcccaa 1260
ggccgcctca tagcctcatg gacacctgtg tcgccacctt ccatgtga 1308
<210> 15
<211> 1305
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Кодирующая последовательность, кодирующая изоформу 1 белка Brachyury с L254V без последовательности 5' atg
<400> 15
agctcccctg gcaccgagag cgcgggaaag agcctgcagt accgagtgga ccacctgctg 60
agcgccgtgg agaatgagct gcaggcgggc agcgagaagg gcgaccccac agagcgcgaa 120
ctgcgcgtgg gcctggagga gagcgagctg tggctgcgct tcaaggagct caccaatgag 180
atgatcgtga ccaagaacgg caggaggatg tttccggtgc tgaaggtgaa cgtgtctggc 240
ctggacccca acgccatgta ctccttcctg ctggacttcg tggcggcgga caaccaccgc 300
tggaagtacg tgaacgggga atgggtgccg gggggcaagc cggagccgca ggcgcccagc 360
tgcgtctaca tccaccccga ctcgcccaac ttcggggccc actggatgaa ggctcccgtc 420
tccttcagca aagtcaagct caccaacaag ctcaacggag ggggccagat catgctgaac 480
tccttgcata agtatgagcc tcgaatccac atagtgagag ttgggggtcc acagcgcatg 540
atcaccagcc actgcttccc tgagacccag ttcatagcgg tgactgctta tcagaacgag 600
gagatcacag ctcttaaaat taagtacaat ccatttgcaa aggctttcct tgatgcaaag 660
gaaagaagtg atcacaaaga gatgatggag gaacccggag acagccagca acctgggtac 720
tcccaatggg ggtggcttct tcctggaacc agcaccgttt gtccacctgc aaatcctcat 780
cctcagtttg gaggtgccct ctccctcccc tccacgcaca gctgtgacag gtacccaacc 840
ctgaggagcc accggtcctc accctacccc agcccctatg ctcatcggaa caattctcca 900
acctattctg acaactcacc tgcatgttta tccatgctgc aatcccatga caattggtcc 960
agccttggaa tgcctgccca tcccagcatg ctccccgtga gccacaatgc cagcccacct 1020
accagctcca gtcagtaccc cagcctgtgg tctgtgagca acggcgccgt caccccgggc 1080
tcccaggcag cagccgtgtc caacgggctg ggggcccagt tcttccgggg ctcccccgcg 1140
cactacacac ccctcaccca tccggtctcg gcgccctctt cctcgggatc cccactgtac 1200
gaaggggcgg ccgcggccac agacatcgtg gacagccagt acgacgccgc agcccaaggc 1260
cgcctcatag cctcatggac acctgtgtcg ccaccttcca tgtga 1305
<210> 16
<211> 1323
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Кодирующая последовательность, кодирующая слитый белок, содержащий белок Brachyury (L254V), плюс добавление 15 нуклеотидов из гена FPV 088
<400> 16
atgaaaaata acttgatgag ctcccctggc accgagagcg cgggaaagag cctgcagtac 60
cgagtggacc acctgctgag cgccgtggag aatgagctgc aggcgggcag cgagaagggc 120
gaccccacag agcgcgaact gcgcgtgggc ctggaggaga gcgagctgtg gctgcgcttc 180
aaggagctca ccaatgagat gatcgtgacc aagaacggca ggaggatgtt tccggtgctg 240
aaggtgaacg tgtctggcct ggaccccaac gccatgtact ccttcctgct ggacttcgtg 300
gcggcggaca accaccgctg gaagtacgtg aacggggaat gggtgccggg gggcaagccg 360
gagccgcagg cgcccagctg cgtctacatc caccccgact cgcccaactt cggggcccac 420
tggatgaagg ctcccgtctc cttcagcaaa gtcaagctca ccaacaagct caacggaggg 480
ggccagatca tgctgaactc cttgcataag tatgagcctc gaatccacat agtgagagtt 540
gggggtccac agcgcatgat caccagccac tgcttccctg agacccagtt catagcggtg 600
actgcttatc agaacgagga gatcacagct cttaaaatta agtacaatcc atttgcaaag 660
gctttccttg atgcaaagga aagaagtgat cacaaagaga tgatggagga acccggagac 720
agccagcaac ctgggtactc ccaatggggg tggcttcttc ctggaaccag caccgtttgt 780
ccacctgcaa atcctcatcc tcagtttgga ggtgccctct ccctcccctc cacgcacagc 840
tgtgacaggt acccaaccct gaggagccac cggtcctcac cctaccccag cccctatgct 900
catcggaaca attctccaac ctattctgac aactcacctg catgtttatc catgctgcaa 960
tcccatgaca attggtccag ccttggaatg cctgcccatc ccagcatgct ccccgtgagc 1020
cacaatgcca gcccacctac cagctccagt cagtacccca gcctgtggtc tgtgagcaac 1080
ggcgccgtca ccccgggctc ccaggcagca gccgtgtcca acgggctggg ggcccagttc 1140
ttccggggct cccccgcgca ctacacaccc ctcacccatc cggtctcggc gccctcttcc 1200
tcgggatccc cactgtacga aggggcggcc gcggccacag acatcgtgga cagccagtac 1260
gacgccgcag cccaaggccg cctcatagcc tcatggacac ctgtgtcgcc accttccatg 1320
tga 1323
<210> 17
<211> 1320
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Кодирующая последовательность, кодирующая слитый белок, содержащий белок Brachyury (L254V), плюс добавление 15 нуклеотидов из гена FPV 088, без инициирующего кодона atg белка Brachyury
<400> 17
atgaaaaata acttgagctc ccctggcacc gagagcgcgg gaaagagcct gcagtaccga 60
gtggaccacc tgctgagcgc cgtggagaat gagctgcagg cgggcagcga gaagggcgac 120
cccacagagc gcgaactgcg cgtgggcctg gaggagagcg agctgtggct gcgcttcaag 180
gagctcacca atgagatgat cgtgaccaag aacggcagga ggatgtttcc ggtgctgaag 240
gtgaacgtgt ctggcctgga ccccaacgcc atgtactcct tcctgctgga cttcgtggcg 300
gcggacaacc accgctggaa gtacgtgaac ggggaatggg tgccgggggg caagccggag 360
ccgcaggcgc ccagctgcgt ctacatccac cccgactcgc ccaacttcgg ggcccactgg 420
atgaaggctc ccgtctcctt cagcaaagtc aagctcacca acaagctcaa cggagggggc 480
cagatcatgc tgaactcctt gcataagtat gagcctcgaa tccacatagt gagagttggg 540
ggtccacagc gcatgatcac cagccactgc ttccctgaga cccagttcat agcggtgact 600
gcttatcaga acgaggagat cacagctctt aaaattaagt acaatccatt tgcaaaggct 660
ttccttgatg caaaggaaag aagtgatcac aaagagatga tggaggaacc cggagacagc 720
cagcaacctg ggtactccca atgggggtgg cttcttcctg gaaccagcac cgtttgtcca 780
cctgcaaatc ctcatcctca gtttggaggt gccctctccc tcccctccac gcacagctgt 840
gacaggtacc caaccctgag gagccaccgg tcctcaccct accccagccc ctatgctcat 900
cggaacaatt ctccaaccta ttctgacaac tcacctgcat gtttatccat gctgcaatcc 960
catgacaatt ggtccagcct tggaatgcct gcccatccca gcatgctccc cgtgagccac 1020
aatgccagcc cacctaccag ctccagtcag taccccagcc tgtggtctgt gagcaacggc 1080
gccgtcaccc cgggctccca ggcagcagcc gtgtccaacg ggctgggggc ccagttcttc 1140
cggggctccc ccgcgcacta cacacccctc acccatccgg tctcggcgcc ctcttcctcg 1200
ggatccccac tgtacgaagg ggcggccgcg gccacagaca tcgtggacag ccagtacgac 1260
gccgcagccc aaggccgcct catagcctca tggacacctg tgtcgccacc ttccatgtga 1320
<210> 18
<211> 440
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Слитый белок, содержащий белок Brachyury (L254V), кодируемый
SEQ ID NO:16
<400> 18
Met Lys Asn Asn Leu Met Ser Ser Pro Gly Thr Glu Ser Ala Gly Lys
1 5 10 15
Ser Leu Gln Tyr Arg Val Asp His Leu Leu Ser Ala Val Glu Asn Glu
20 25 30
Leu Gln Ala Gly Ser Glu Lys Gly Asp Pro Thr Glu Arg Glu Leu Arg
35 40 45
Val Gly Leu Glu Glu Ser Glu Leu Trp Leu Arg Phe Lys Glu Leu Thr
50 55 60
Asn Glu Met Ile Val Thr Lys Asn Gly Arg Arg Met Phe Pro Val Leu
65 70 75 80
Lys Val Asn Val Ser Gly Leu Asp Pro Asn Ala Met Tyr Ser Phe Leu
85 90 95
Leu Asp Phe Val Ala Ala Asp Asn His Arg Trp Lys Tyr Val Asn Gly
100 105 110
Glu Trp Val Pro Gly Gly Lys Pro Glu Pro Gln Ala Pro Ser Cys Val
115 120 125
Tyr Ile His Pro Asp Ser Pro Asn Phe Gly Ala His Trp Met Lys Ala
130 135 140
Pro Val Ser Phe Ser Lys Val Lys Leu Thr Asn Lys Leu Asn Gly Gly
145 150 155 160
Gly Gln Ile Met Leu Asn Ser Leu His Lys Tyr Glu Pro Arg Ile His
165 170 175
Ile Val Arg Val Gly Gly Pro Gln Arg Met Ile Thr Ser His Cys Phe
180 185 190
Pro Glu Thr Gln Phe Ile Ala Val Thr Ala Tyr Gln Asn Glu Glu Ile
195 200 205
Thr Ala Leu Lys Ile Lys Tyr Asn Pro Phe Ala Lys Ala Phe Leu Asp
210 215 220
Ala Lys Glu Arg Ser Asp His Lys Glu Met Met Glu Glu Pro Gly Asp
225 230 235 240
Ser Gln Gln Pro Gly Tyr Ser Gln Trp Gly Trp Leu Leu Pro Gly Thr
245 250 255
Ser Thr Val Cys Pro Pro Ala Asn Pro His Pro Gln Phe Gly Gly Ala
260 265 270
Leu Ser Leu Pro Ser Thr His Ser Cys Asp Arg Tyr Pro Thr Leu Arg
275 280 285
Ser His Arg Ser Ser Pro Tyr Pro Ser Pro Tyr Ala His Arg Asn Asn
290 295 300
Ser Pro Thr Tyr Ser Asp Asn Ser Pro Ala Cys Leu Ser Met Leu Gln
305 310 315 320
Ser His Asp Asn Trp Ser Ser Leu Gly Met Pro Ala His Pro Ser Met
325 330 335
Leu Pro Val Ser His Asn Ala Ser Pro Pro Thr Ser Ser Ser Gln Tyr
340 345 350
Pro Ser Leu Trp Ser Val Ser Asn Gly Ala Val Thr Pro Gly Ser Gln
355 360 365
Ala Ala Ala Val Ser Asn Gly Leu Gly Ala Gln Phe Phe Arg Gly Ser
370 375 380
Pro Ala His Tyr Thr Pro Leu Thr His Pro Val Ser Ala Pro Ser Ser
385 390 395 400
Ser Gly Ser Pro Leu Tyr Glu Gly Ala Ala Ala Ala Thr Asp Ile Val
405 410 415
Asp Ser Gln Tyr Asp Ala Ala Ala Gln Gly Arg Leu Ile Ala Ser Trp
420 425 430
Thr Pro Val Ser Pro Pro Ser Met
435 440
<210> 19
<211> 439
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Слитый белок, содержащий белок Brachyury (L254V), кодируемый
       SEQ ID NO: 17 плюс добавление 15 нуклеотидов из гена FPV 088
       без инициирующего кодона atg белка Brachyury.
<400> 19
Met Lys Asn Asn Leu Ser Ser Pro Gly Thr Glu Ser Ala Gly Lys Ser
1 5 10 15
Leu Gln Tyr Arg Val Asp His Leu Leu Ser Ala Val Glu Asn Glu Leu
20 25 30
Gln Ala Gly Ser Glu Lys Gly Asp Pro Thr Glu Arg Glu Leu Arg Val
35 40 45
Gly Leu Glu Glu Ser Glu Leu Trp Leu Arg Phe Lys Glu Leu Thr Asn
50 55 60
Glu Met Ile Val Thr Lys Asn Gly Arg Arg Met Phe Pro Val Leu Lys
65 70 75 80
Val Asn Val Ser Gly Leu Asp Pro Asn Ala Met Tyr Ser Phe Leu Leu
85 90 95
Asp Phe Val Ala Ala Asp Asn His Arg Trp Lys Tyr Val Asn Gly Glu
100 105 110
Trp Val Pro Gly Gly Lys Pro Glu Pro Gln Ala Pro Ser Cys Val Tyr
115 120 125
Ile His Pro Asp Ser Pro Asn Phe Gly Ala His Trp Met Lys Ala Pro
130 135 140
Val Ser Phe Ser Lys Val Lys Leu Thr Asn Lys Leu Asn Gly Gly Gly
145 150 155 160
Gln Ile Met Leu Asn Ser Leu His Lys Tyr Glu Pro Arg Ile His Ile
165 170 175
Val Arg Val Gly Gly Pro Gln Arg Met Ile Thr Ser His Cys Phe Pro
180 185 190
Glu Thr Gln Phe Ile Ala Val Thr Ala Tyr Gln Asn Glu Glu Ile Thr
195 200 205
Ala Leu Lys Ile Lys Tyr Asn Pro Phe Ala Lys Ala Phe Leu Asp Ala
210 215 220
Lys Glu Arg Ser Asp His Lys Glu Met Met Glu Glu Pro Gly Asp Ser
225 230 235 240
Gln Gln Pro Gly Tyr Ser Gln Trp Gly Trp Leu Leu Pro Gly Thr Ser
245 250 255
Thr Val Cys Pro Pro Ala Asn Pro His Pro Gln Phe Gly Gly Ala Leu
260 265 270
Ser Leu Pro Ser Thr His Ser Cys Asp Arg Tyr Pro Thr Leu Arg Ser
275 280 285
His Arg Ser Ser Pro Tyr Pro Ser Pro Tyr Ala His Arg Asn Asn Ser
290 295 300
Pro Thr Tyr Ser Asp Asn Ser Pro Ala Cys Leu Ser Met Leu Gln Ser
305 310 315 320
His Asp Asn Trp Ser Ser Leu Gly Met Pro Ala His Pro Ser Met Leu
325 330 335
Pro Val Ser His Asn Ala Ser Pro Pro Thr Ser Ser Ser Gln Tyr Pro
340 345 350
Ser Leu Trp Ser Val Ser Asn Gly Ala Val Thr Pro Gly Ser Gln Ala
355 360 365
Ala Ala Val Ser Asn Gly Leu Gly Ala Gln Phe Phe Arg Gly Ser Pro
370 375 380
Ala His Tyr Thr Pro Leu Thr His Pro Val Ser Ala Pro Ser Ser Ser
385 390 395 400
Gly Ser Pro Leu Tyr Glu Gly Ala Ala Ala Ala Thr Asp Ile Val Asp
405 410 415
Ser Gln Tyr Asp Ala Ala Ala Gln Gly Arg Leu Ile Ala Ser Trp Thr
420 425 430
Pro Val Ser Pro Pro Ser Met
435
<210> 20
<211> 1353
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Кодирующая последовательность, кодирующая слитый белок, содержащий белок Brachyury (L254V), плюс добавление 45 нуклеотидов из гена FPV088
<400> 20
atgaaaaata acttgtatga agaaaaaatg aacatgagta agaaaatgag ctcccctggc 60
accgagagcg cgggaaagag cctgcagtac cgagtggacc acctgctgag cgccgtggag 120
aatgagctgc aggcgggcag cgagaagggc gaccccacag agcgcgaact gcgcgtgggc 180
ctggaggaga gcgagctgtg gctgcgcttc aaggagctca ccaatgagat gatcgtgacc 240
aagaacggca ggaggatgtt tccggtgctg aaggtgaacg tgtctggcct ggaccccaac 300
gccatgtact ccttcctgct ggacttcgtg gcggcggaca accaccgctg gaagtacgtg 360
aacggggaat gggtgccggg gggcaagccg gagccgcagg cgcccagctg cgtctacatc 420
caccccgact cgcccaactt cggggcccac tggatgaagg ctcccgtctc cttcagcaaa 480
gtcaagctca ccaacaagct caacggaggg ggccagatca tgctgaactc cttgcataag 540
tatgagcctc gaatccacat agtgagagtt gggggtccac agcgcatgat caccagccac 600
tgcttccctg agacccagtt catagcggtg actgcttatc agaacgagga gatcacagct 660
cttaaaatta agtacaatcc atttgcaaag gctttccttg atgcaaagga aagaagtgat 720
cacaaagaga tgatggagga acccggagac agccagcaac ctgggtactc ccaatggggg 780
tggcttcttc ctggaaccag caccgtttgt ccacctgcaa atcctcatcc tcagtttgga 840
ggtgccctct ccctcccctc cacgcacagc tgtgacaggt acccaaccct gaggagccac 900
cggtcctcac cctaccccag cccctatgct catcggaaca attctccaac ctattctgac 960
aactcacctg catgtttatc catgctgcaa tcccatgaca attggtccag ccttggaatg 1020
cctgcccatc ccagcatgct ccccgtgagc cacaatgcca gcccacctac cagctccagt 1080
cagtacccca gcctgtggtc tgtgagcaac ggcgccgtca ccccgggctc ccaggcagca 1140
gccgtgtcca acgggctggg ggcccagttc ttccggggct cccccgcgca ctacacaccc 1200
ctcacccatc cggtctcggc gccctcttcc tcgggatccc cactgtacga aggggcggcc 1260
gcggccacag acatcgtgga cagccagtac gacgccgcag cccaaggccg cctcatagcc 1320
tcatggacac ctgtgtcgcc accttccatg tga 1353
<210> 21
<211> 1350
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Кодирующая последовательность, кодирующая слитый белок, содержащий белок Brachyury (L254V), плюс добавление 45 нуклеотидов из гена FPV 088 без atg Brachyury
<400> 21
atgaaaaata acttgtatga agaaaaaatg aacatgagta agaaaagctc ccctggcacc 60
gagagcgcgg gaaagagcct gcagtaccga gtggaccacc tgctgagcgc cgtggagaat 120
gagctgcagg cgggcagcga gaagggcgac cccacagagc gcgaactgcg cgtgggcctg 180
gaggagagcg agctgtggct gcgcttcaag gagctcacca atgagatgat cgtgaccaag 240
aacggcagga ggatgtttcc ggtgctgaag gtgaacgtgt ctggcctgga ccccaacgcc 300
atgtactcct tcctgctgga cttcgtggcg gcggacaacc accgctggaa gtacgtgaac 360
ggggaatggg tgccgggggg caagccggag ccgcaggcgc ccagctgcgt ctacatccac 420
cccgactcgc ccaacttcgg ggcccactgg atgaaggctc ccgtctcctt cagcaaagtc 480
aagctcacca acaagctcaa cggagggggc cagatcatgc tgaactcctt gcataagtat 540
gagcctcgaa tccacatagt gagagttggg ggtccacagc gcatgatcac cagccactgc 600
ttccctgaga cccagttcat agcggtgact gcttatcaga acgaggagat cacagctctt 660
aaaattaagt acaatccatt tgcaaaggct ttccttgatg caaaggaaag aagtgatcac 720
aaagagatga tggaggaacc cggagacagc cagcaacctg ggtactccca atgggggtgg 780
cttcttcctg gaaccagcac cgtttgtcca cctgcaaatc ctcatcctca gtttggaggt 840
gccctctccc tcccctccac gcacagctgt gacaggtacc caaccctgag gagccaccgg 900
tcctcaccct accccagccc ctatgctcat cggaacaatt ctccaaccta ttctgacaac 960
tcacctgcat gtttatccat gctgcaatcc catgacaatt ggtccagcct tggaatgcct 1020
gcccatccca gcatgctccc cgtgagccac aatgccagcc cacctaccag ctccagtcag 1080
taccccagcc tgtggtctgt gagcaacggc gccgtcaccc cgggctccca ggcagcagcc 1140
gtgtccaacg ggctgggggc ccagttcttc cggggctccc ccgcgcacta cacacccctc 1200
acccatccgg tctcggcgcc ctcttcctcg ggatccccac tgtacgaagg ggcggccgcg 1260
gccacagaca tcgtggacag ccagtacgac gccgcagccc aaggccgcct catagcctca 1320
tggacacctg tgtcgccacc ttccatgtga 1350
<210> 22
<211> 450
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Слитый белок, содержащий белок Brachyury (L254V), кодируемый SEQ ID NO:20
<400> 22
Met Lys Asn Asn Leu Tyr Glu Glu Lys Met Asn Met Ser Lys Lys Met
1 5 10 15
Ser Ser Pro Gly Thr Glu Ser Ala Gly Lys Ser Leu Gln Tyr Arg Val
20 25 30
Asp His Leu Leu Ser Ala Val Glu Asn Glu Leu Gln Ala Gly Ser Glu
35 40 45
Lys Gly Asp Pro Thr Glu Arg Glu Leu Arg Val Gly Leu Glu Glu Ser
50 55 60
Glu Leu Trp Leu Arg Phe Lys Glu Leu Thr Asn Glu Met Ile Val Thr
65 70 75 80
Lys Asn Gly Arg Arg Met Phe Pro Val Leu Lys Val Asn Val Ser Gly
85 90 95
Leu Asp Pro Asn Ala Met Tyr Ser Phe Leu Leu Asp Phe Val Ala Ala
100 105 110
Asp Asn His Arg Trp Lys Tyr Val Asn Gly Glu Trp Val Pro Gly Gly
115 120 125
Lys Pro Glu Pro Gln Ala Pro Ser Cys Val Tyr Ile His Pro Asp Ser
130 135 140
Pro Asn Phe Gly Ala His Trp Met Lys Ala Pro Val Ser Phe Ser Lys
145 150 155 160
Val Lys Leu Thr Asn Lys Leu Asn Gly Gly Gly Gln Ile Met Leu Asn
165 170 175
Ser Leu His Lys Tyr Glu Pro Arg Ile His Ile Val Arg Val Gly Gly
180 185 190
Pro Gln Arg Met Ile Thr Ser His Cys Phe Pro Glu Thr Gln Phe Ile
195 200 205
Ala Val Thr Ala Tyr Gln Asn Glu Glu Ile Thr Ala Leu Lys Ile Lys
210 215 220
Tyr Asn Pro Phe Ala Lys Ala Phe Leu Asp Ala Lys Glu Arg Ser Asp
225 230 235 240
His Lys Glu Met Met Glu Glu Pro Gly Asp Ser Gln Gln Pro Gly Tyr
245 250 255
Ser Gln Trp Gly Trp Leu Leu Pro Gly Thr Ser Thr Val Cys Pro Pro
260 265 270
Ala Asn Pro His Pro Gln Phe Gly Gly Ala Leu Ser Leu Pro Ser Thr
275 280 285
His Ser Cys Asp Arg Tyr Pro Thr Leu Arg Ser His Arg Ser Ser Pro
290 295 300
Tyr Pro Ser Pro Tyr Ala His Arg Asn Asn Ser Pro Thr Tyr Ser Asp
305 310 315 320
Asn Ser Pro Ala Cys Leu Ser Met Leu Gln Ser His Asp Asn Trp Ser
325 330 335
Ser Leu Gly Met Pro Ala His Pro Ser Met Leu Pro Val Ser His Asn
340 345 350
Ala Ser Pro Pro Thr Ser Ser Ser Gln Tyr Pro Ser Leu Trp Ser Val
355 360 365
Ser Asn Gly Ala Val Thr Pro Gly Ser Gln Ala Ala Ala Val Ser Asn
370 375 380
Gly Leu Gly Ala Gln Phe Phe Arg Gly Ser Pro Ala His Tyr Thr Pro
385 390 395 400
Leu Thr His Pro Val Ser Ala Pro Ser Ser Ser Gly Ser Pro Leu Tyr
405 410 415
Glu Gly Ala Ala Ala Ala Thr Asp Ile Val Asp Ser Gln Tyr Asp Ala
420 425 430
Ala Ala Gln Gly Arg Leu Ile Ala Ser Trp Thr Pro Val Ser Pro Pro
435 440 445
Ser Met
450
<210> 23
<211> 449
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Слитый белок, содержащий белок Brachyury (L254V), кодируемый
SEQ ID NO:21
<400> 23
Met Lys Asn Asn Leu Tyr Glu Glu Lys Met Asn Met Ser Lys Lys Ser
1 5 10 15
Ser Pro Gly Thr Glu Ser Ala Gly Lys Ser Leu Gln Tyr Arg Val Asp
20 25 30
His Leu Leu Ser Ala Val Glu Asn Glu Leu Gln Ala Gly Ser Glu Lys
35 40 45
Gly Asp Pro Thr Glu Arg Glu Leu Arg Val Gly Leu Glu Glu Ser Glu
50 55 60
Leu Trp Leu Arg Phe Lys Glu Leu Thr Asn Glu Met Ile Val Thr Lys
65 70 75 80
Asn Gly Arg Arg Met Phe Pro Val Leu Lys Val Asn Val Ser Gly Leu
85 90 95
Asp Pro Asn Ala Met Tyr Ser Phe Leu Leu Asp Phe Val Ala Ala Asp
100 105 110
Asn His Arg Trp Lys Tyr Val Asn Gly Glu Trp Val Pro Gly Gly Lys
115 120 125
Pro Glu Pro Gln Ala Pro Ser Cys Val Tyr Ile His Pro Asp Ser Pro
130 135 140
Asn Phe Gly Ala His Trp Met Lys Ala Pro Val Ser Phe Ser Lys Val
145 150 155 160
Lys Leu Thr Asn Lys Leu Asn Gly Gly Gly Gln Ile Met Leu Asn Ser
165 170 175
Leu His Lys Tyr Glu Pro Arg Ile His Ile Val Arg Val Gly Gly Pro
180 185 190
Gln Arg Met Ile Thr Ser His Cys Phe Pro Glu Thr Gln Phe Ile Ala
195 200 205
Val Thr Ala Tyr Gln Asn Glu Glu Ile Thr Ala Leu Lys Ile Lys Tyr
210 215 220
Asn Pro Phe Ala Lys Ala Phe Leu Asp Ala Lys Glu Arg Ser Asp His
225 230 235 240
Lys Glu Met Met Glu Glu Pro Gly Asp Ser Gln Gln Pro Gly Tyr Ser
245 250 255
Gln Trp Gly Trp Leu Leu Pro Gly Thr Ser Thr Val Cys Pro Pro Ala
260 265 270
Asn Pro His Pro Gln Phe Gly Gly Ala Leu Ser Leu Pro Ser Thr His
275 280 285
Ser Cys Asp Arg Tyr Pro Thr Leu Arg Ser His Arg Ser Ser Pro Tyr
290 295 300
Pro Ser Pro Tyr Ala His Arg Asn Asn Ser Pro Thr Tyr Ser Asp Asn
305 310 315 320
Ser Pro Ala Cys Leu Ser Met Leu Gln Ser His Asp Asn Trp Ser Ser
325 330 335
Leu Gly Met Pro Ala His Pro Ser Met Leu Pro Val Ser His Asn Ala
340 345 350
Ser Pro Pro Thr Ser Ser Ser Gln Tyr Pro Ser Leu Trp Ser Val Ser
355 360 365
Asn Gly Ala Val Thr Pro Gly Ser Gln Ala Ala Ala Val Ser Asn Gly
370 375 380
Leu Gly Ala Gln Phe Phe Arg Gly Ser Pro Ala His Tyr Thr Pro Leu
385 390 395 400
Thr His Pro Val Ser Ala Pro Ser Ser Ser Gly Ser Pro Leu Tyr Glu
405 410 415
Gly Ala Ala Ala Ala Thr Asp Ile Val Asp Ser Gln Tyr Asp Ala Ala
420 425 430
Ala Gln Gly Arg Leu Ile Ala Ser Trp Thr Pro Val Ser Pro Pro Ser
435 440 445
Met
<210> 24
<211> 1326
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Кодирующая последовательность, кодирующая слитый белок, содержащий белок Brachyury (L254V), плюс добавление 18 нуклеотидов из гена FPV 088
<400> 24
atgaacatga gtaagaaaat gagctcccct ggcaccgaga gcgcgggaaa gagcctgcag 60
taccgagtgg accacctgct gagcgccgtg gagaatgagc tgcaggcggg cagcgagaag 120
ggcgacccca cagagcgcga actgcgcgtg ggcctggagg agagcgagct gtggctgcgc 180
ttcaaggagc tcaccaatga gatgatcgtg accaagaacg gcaggaggat gtttccggtg 240
ctgaaggtga acgtgtctgg cctggacccc aacgccatgt actccttcct gctggacttc 300
gtggcggcgg acaaccaccg ctggaagtac gtgaacgggg aatgggtgcc ggggggcaag 360
ccggagccgc aggcgcccag ctgcgtctac atccaccccg actcgcccaa cttcggggcc 420
cactggatga aggctcccgt ctccttcagc aaagtcaagc tcaccaacaa gctcaacgga 480
gggggccaga tcatgctgaa ctccttgcat aagtatgagc ctcgaatcca catagtgaga 540
gttgggggtc cacagcgcat gatcaccagc cactgcttcc ctgagaccca gttcatagcg 600
gtgactgctt atcagaacga ggagatcaca gctcttaaaa ttaagtacaa tccatttgca 660
aaggctttcc ttgatgcaaa ggaaagaagt gatcacaaag agatgatgga ggaacccgga 720
gacagccagc aacctgggta ctcccaatgg gggtggcttc ttcctggaac cagcaccgtt 780
tgtccacctg caaatcctca tcctcagttt ggaggtgccc tctccctccc ctccacgcac 840
agctgtgaca ggtacccaac cctgaggagc caccggtcct caccctaccc cagcccctat 900
gctcatcgga acaattctcc aacctattct gacaactcac ctgcatgttt atccatgctg 960
caatcccatg acaattggtc cagccttgga atgcctgccc atcccagcat gctccccgtg 1020
agccacaatg ccagcccacc taccagctcc agtcagtacc ccagcctgtg gtctgtgagc 1080
aacggcgccg tcaccccggg ctcccaggca gcagccgtgt ccaacgggct gggggcccag 1140
ttcttccggg gctcccccgc gcactacaca cccctcaccc atccggtctc ggcgccctct 1200
tcctcgggat ccccactgta cgaaggggcg gccgcggcca cagacatcgt ggacagccag 1260
tacgacgccg cagcccaagg ccgcctcata gcctcatgga cacctgtgtc gccaccttcc 1320
atgtga 1326
<210> 25
<211> 1323
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Кодирующая последовательность, кодирующая слитый белок, содержащий белок Brachyury (L254V), плюс добавление 18 нуклеотидов из гена FPV 088 без atg Brachyury
<400> 25
atgaacatga gtaagaaaag ctcccctggc accgagagcg cgggaaagag cctgcagtac 60
cgagtggacc acctgctgag cgccgtggag aatgagctgc aggcgggcag cgagaagggc 120
gaccccacag agcgcgaact gcgcgtgggc ctggaggaga gcgagctgtg gctgcgcttc 180
aaggagctca ccaatgagat gatcgtgacc aagaacggca ggaggatgtt tccggtgctg 240
aaggtgaacg tgtctggcct ggaccccaac gccatgtact ccttcctgct ggacttcgtg 300
gcggcggaca accaccgctg gaagtacgtg aacggggaat gggtgccggg gggcaagccg 360
gagccgcagg cgcccagctg cgtctacatc caccccgact cgcccaactt cggggcccac 420
tggatgaagg ctcccgtctc cttcagcaaa gtcaagctca ccaacaagct caacggaggg 480
ggccagatca tgctgaactc cttgcataag tatgagcctc gaatccacat agtgagagtt 540
gggggtccac agcgcatgat caccagccac tgcttccctg agacccagtt catagcggtg 600
actgcttatc agaacgagga gatcacagct cttaaaatta agtacaatcc atttgcaaag 660
gctttccttg atgcaaagga aagaagtgat cacaaagaga tgatggagga acccggagac 720
agccagcaac ctgggtactc ccaatggggg tggcttcttc ctggaaccag caccgtttgt 780
ccacctgcaa atcctcatcc tcagtttgga ggtgccctct ccctcccctc cacgcacagc 840
tgtgacaggt acccaaccct gaggagccac cggtcctcac cctaccccag cccctatgct 900
catcggaaca attctccaac ctattctgac aactcacctg catgtttatc catgctgcaa 960
tcccatgaca attggtccag ccttggaatg cctgcccatc ccagcatgct ccccgtgagc 1020
cacaatgcca gcccacctac cagctccagt cagtacccca gcctgtggtc tgtgagcaac 1080
ggcgccgtca ccccgggctc ccaggcagca gccgtgtcca acgggctggg ggcccagttc 1140
ttccggggct cccccgcgca ctacacaccc ctcacccatc cggtctcggc gccctcttcc 1200
tcgggatccc cactgtacga aggggcggcc gcggccacag acatcgtgga cagccagtac 1260
gacgccgcag cccaaggccg cctcatagcc tcatggacac ctgtgtcgcc accttccatg 1320
tga 1323
<210> 26
<211> 441
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Слитый белок, содержащий белок Brachyury (L254V), кодируемый
SEQ ID NO:24
<400> 26
Met Asn Met Ser Lys Lys Met Ser Ser Pro Gly Thr Glu Ser Ala Gly
1 5 10 15
Lys Ser Leu Gln Tyr Arg Val Asp His Leu Leu Ser Ala Val Glu Asn
20 25 30
Glu Leu Gln Ala Gly Ser Glu Lys Gly Asp Pro Thr Glu Arg Glu Leu
35 40 45
Arg Val Gly Leu Glu Glu Ser Glu Leu Trp Leu Arg Phe Lys Glu Leu
50 55 60
Thr Asn Glu Met Ile Val Thr Lys Asn Gly Arg Arg Met Phe Pro Val
65 70 75 80
Leu Lys Val Asn Val Ser Gly Leu Asp Pro Asn Ala Met Tyr Ser Phe
85 90 95
Leu Leu Asp Phe Val Ala Ala Asp Asn His Arg Trp Lys Tyr Val Asn
100 105 110
Gly Glu Trp Val Pro Gly Gly Lys Pro Glu Pro Gln Ala Pro Ser Cys
115 120 125
Val Tyr Ile His Pro Asp Ser Pro Asn Phe Gly Ala His Trp Met Lys
130 135 140
Ala Pro Val Ser Phe Ser Lys Val Lys Leu Thr Asn Lys Leu Asn Gly
145 150 155 160
Gly Gly Gln Ile Met Leu Asn Ser Leu His Lys Tyr Glu Pro Arg Ile
165 170 175
His Ile Val Arg Val Gly Gly Pro Gln Arg Met Ile Thr Ser His Cys
180 185 190
Phe Pro Glu Thr Gln Phe Ile Ala Val Thr Ala Tyr Gln Asn Glu Glu
195 200 205
Ile Thr Ala Leu Lys Ile Lys Tyr Asn Pro Phe Ala Lys Ala Phe Leu
210 215 220
Asp Ala Lys Glu Arg Ser Asp His Lys Glu Met Met Glu Glu Pro Gly
225 230 235 240
Asp Ser Gln Gln Pro Gly Tyr Ser Gln Trp Gly Trp Leu Leu Pro Gly
245 250 255
Thr Ser Thr Val Cys Pro Pro Ala Asn Pro His Pro Gln Phe Gly Gly
260 265 270
Ala Leu Ser Leu Pro Ser Thr His Ser Cys Asp Arg Tyr Pro Thr Leu
275 280 285
Arg Ser His Arg Ser Ser Pro Tyr Pro Ser Pro Tyr Ala His Arg Asn
290 295 300
Asn Ser Pro Thr Tyr Ser Asp Asn Ser Pro Ala Cys Leu Ser Met Leu
305 310 315 320
Gln Ser His Asp Asn Trp Ser Ser Leu Gly Met Pro Ala His Pro Ser
325 330 335
Met Leu Pro Val Ser His Asn Ala Ser Pro Pro Thr Ser Ser Ser Gln
340 345 350
Tyr Pro Ser Leu Trp Ser Val Ser Asn Gly Ala Val Thr Pro Gly Ser
355 360 365
Gln Ala Ala Ala Val Ser Asn Gly Leu Gly Ala Gln Phe Phe Arg Gly
370 375 380
Ser Pro Ala His Tyr Thr Pro Leu Thr His Pro Val Ser Ala Pro Ser
385 390 395 400
Ser Ser Gly Ser Pro Leu Tyr Glu Gly Ala Ala Ala Ala Thr Asp Ile
405 410 415
Val Asp Ser Gln Tyr Asp Ala Ala Ala Gln Gly Arg Leu Ile Ala Ser
420 425 430
Trp Thr Pro Val Ser Pro Pro Ser Met
435 440
<210> 27
<211> 440
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Слитый белок, содержащий белок Brachyury (L254V), кодируемый
SEQ ID NO:25
<400> 27
Met Asn Met Ser Lys Lys Ser Ser Pro Gly Thr Glu Ser Ala Gly Lys
1 5 10 15
Ser Leu Gln Tyr Arg Val Asp His Leu Leu Ser Ala Val Glu Asn Glu
20 25 30
Leu Gln Ala Gly Ser Glu Lys Gly Asp Pro Thr Glu Arg Glu Leu Arg
35 40 45
Val Gly Leu Glu Glu Ser Glu Leu Trp Leu Arg Phe Lys Glu Leu Thr
50 55 60
Asn Glu Met Ile Val Thr Lys Asn Gly Arg Arg Met Phe Pro Val Leu
65 70 75 80
Lys Val Asn Val Ser Gly Leu Asp Pro Asn Ala Met Tyr Ser Phe Leu
85 90 95
Leu Asp Phe Val Ala Ala Asp Asn His Arg Trp Lys Tyr Val Asn Gly
100 105 110
Glu Trp Val Pro Gly Gly Lys Pro Glu Pro Gln Ala Pro Ser Cys Val
115 120 125
Tyr Ile His Pro Asp Ser Pro Asn Phe Gly Ala His Trp Met Lys Ala
130 135 140
Pro Val Ser Phe Ser Lys Val Lys Leu Thr Asn Lys Leu Asn Gly Gly
145 150 155 160
Gly Gln Ile Met Leu Asn Ser Leu His Lys Tyr Glu Pro Arg Ile His
165 170 175
Ile Val Arg Val Gly Gly Pro Gln Arg Met Ile Thr Ser His Cys Phe
180 185 190
Pro Glu Thr Gln Phe Ile Ala Val Thr Ala Tyr Gln Asn Glu Glu Ile
195 200 205
Thr Ala Leu Lys Ile Lys Tyr Asn Pro Phe Ala Lys Ala Phe Leu Asp
210 215 220
Ala Lys Glu Arg Ser Asp His Lys Glu Met Met Glu Glu Pro Gly Asp
225 230 235 240
Ser Gln Gln Pro Gly Tyr Ser Gln Trp Gly Trp Leu Leu Pro Gly Thr
245 250 255
Ser Thr Val Cys Pro Pro Ala Asn Pro His Pro Gln Phe Gly Gly Ala
260 265 270
Leu Ser Leu Pro Ser Thr His Ser Cys Asp Arg Tyr Pro Thr Leu Arg
275 280 285
Ser His Arg Ser Ser Pro Tyr Pro Ser Pro Tyr Ala His Arg Asn Asn
290 295 300
Ser Pro Thr Tyr Ser Asp Asn Ser Pro Ala Cys Leu Ser Met Leu Gln
305 310 315 320
Ser His Asp Asn Trp Ser Ser Leu Gly Met Pro Ala His Pro Ser Met
325 330 335
Leu Pro Val Ser His Asn Ala Ser Pro Pro Thr Ser Ser Ser Gln Tyr
340 345 350
Pro Ser Leu Trp Ser Val Ser Asn Gly Ala Val Thr Pro Gly Ser Gln
355 360 365
Ala Ala Ala Val Ser Asn Gly Leu Gly Ala Gln Phe Phe Arg Gly Ser
370 375 380
Pro Ala His Tyr Thr Pro Leu Thr His Pro Val Ser Ala Pro Ser Ser
385 390 395 400
Ser Gly Ser Pro Leu Tyr Glu Gly Ala Ala Ala Ala Thr Asp Ile Val
405 410 415
Asp Ser Gln Tyr Asp Ala Ala Ala Gln Gly Arg Leu Ile Ala Ser Trp
420 425 430
Thr Pro Val Ser Pro Pro Ser Met
435 440
<210> 28
<211> 1320
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Кодирующая последовательность, кодирующая слитый белок, содержащий белок Brachyury (L254V), плюс добавление 12 нуклеотидов из гена FPV 088
<400> 28
atgagtaaga aaatgagctc ccctggcacc gagagcgcgg gaaagagcct gcagtaccga 60
gtggaccacc tgctgagcgc cgtggagaat gagctgcagg cgggcagcga gaagggcgac 120
cccacagagc gcgaactgcg cgtgggcctg gaggagagcg agctgtggct gcgcttcaag 180
gagctcacca atgagatgat cgtgaccaag aacggcagga ggatgtttcc ggtgctgaag 240
gtgaacgtgt ctggcctgga ccccaacgcc atgtactcct tcctgctgga cttcgtggcg 300
gcggacaacc accgctggaa gtacgtgaac ggggaatggg tgccgggggg caagccggag 360
ccgcaggcgc ccagctgcgt ctacatccac cccgactcgc ccaacttcgg ggcccactgg 420
atgaaggctc ccgtctcctt cagcaaagtc aagctcacca acaagctcaa cggagggggc 480
cagatcatgc tgaactcctt gcataagtat gagcctcgaa tccacatagt gagagttggg 540
ggtccacagc gcatgatcac cagccactgc ttccctgaga cccagttcat agcggtgact 600
gcttatcaga acgaggagat cacagctctt aaaattaagt acaatccatt tgcaaaggct 660
ttccttgatg caaaggaaag aagtgatcac aaagagatga tggaggaacc cggagacagc 720
cagcaacctg ggtactccca atgggggtgg cttcttcctg gaaccagcac cgtttgtcca 780
cctgcaaatc ctcatcctca gtttggaggt gccctctccc tcccctccac gcacagctgt 840
gacaggtacc caaccctgag gagccaccgg tcctcaccct accccagccc ctatgctcat 900
cggaacaatt ctccaaccta ttctgacaac tcacctgcat gtttatccat gctgcaatcc 960
catgacaatt ggtccagcct tggaatgcct gcccatccca gcatgctccc cgtgagccac 1020
aatgccagcc cacctaccag ctccagtcag taccccagcc tgtggtctgt gagcaacggc 1080
gccgtcaccc cgggctccca ggcagcagcc gtgtccaacg ggctgggggc ccagttcttc 1140
cggggctccc ccgcgcacta cacacccctc acccatccgg tctcggcgcc ctcttcctcg 1200
ggatccccac tgtacgaagg ggcggccgcg gccacagaca tcgtggacag ccagtacgac 1260
gccgcagccc aaggccgcct catagcctca tggacacctg tgtcgccacc ttccatgtga 1320
<210> 29
<211> 1317
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Кодирующая последовательность, кодирующая слитый белок, содержащий белок Brachyury (L254V), плюс добавление 12 нуклеотидов из гена FPV 088 без инициирующего кодона atg Brachyury
<400> 29
atgagtaaga aaagctcccc tggcaccgag agcgcgggaa agagcctgca gtaccgagtg 60
gaccacctgc tgagcgccgt ggagaatgag ctgcaggcgg gcagcgagaa gggcgacccc 120
acagagcgcg aactgcgcgt gggcctggag gagagcgagc tgtggctgcg cttcaaggag 180
ctcaccaatg agatgatcgt gaccaagaac ggcaggagga tgtttccggt gctgaaggtg 240
aacgtgtctg gcctggaccc caacgccatg tactccttcc tgctggactt cgtggcggcg 300
gacaaccacc gctggaagta cgtgaacggg gaatgggtgc cggggggcaa gccggagccg 360
caggcgccca gctgcgtcta catccacccc gactcgccca acttcggggc ccactggatg 420
aaggctcccg tctccttcag caaagtcaag ctcaccaaca agctcaacgg agggggccag 480
atcatgctga actccttgca taagtatgag cctcgaatcc acatagtgag agttgggggt 540
ccacagcgca tgatcaccag ccactgcttc cctgagaccc agttcatagc ggtgactgct 600
tatcagaacg aggagatcac agctcttaaa attaagtaca atccatttgc aaaggctttc 660
cttgatgcaa aggaaagaag tgatcacaaa gagatgatgg aggaacccgg agacagccag 720
caacctgggt actcccaatg ggggtggctt cttcctggaa ccagcaccgt ttgtccacct 780
gcaaatcctc atcctcagtt tggaggtgcc ctctccctcc cctccacgca cagctgtgac 840
aggtacccaa ccctgaggag ccaccggtcc tcaccctacc ccagccccta tgctcatcgg 900
aacaattctc caacctattc tgacaactca cctgcatgtt tatccatgct gcaatcccat 960
gacaattggt ccagccttgg aatgcctgcc catcccagca tgctccccgt gagccacaat 1020
gccagcccac ctaccagctc cagtcagtac cccagcctgt ggtctgtgag caacggcgcc 1080
gtcaccccgg gctcccaggc agcagccgtg tccaacgggc tgggggccca gttcttccgg 1140
ggctcccccg cgcactacac acccctcacc catccggtct cggcgccctc ttcctcggga 1200
tccccactgt acgaaggggc ggccgcggcc acagacatcg tggacagcca gtacgacgcc 1260
gcagcccaag gccgcctcat agcctcatgg acacctgtgt cgccaccttc catgtga 1317
<210> 30
<211> 439
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Слитый белок, содержащий белок Brachyury (L254V), кодируемый
SEQ ID NO:28
<400> 30
Met Ser Lys Lys Met Ser Ser Pro Gly Thr Glu Ser Ala Gly Lys Ser
1 5 10 15
Leu Gln Tyr Arg Val Asp His Leu Leu Ser Ala Val Glu Asn Glu Leu
20 25 30
Gln Ala Gly Ser Glu Lys Gly Asp Pro Thr Glu Arg Glu Leu Arg Val
35 40 45
Gly Leu Glu Glu Ser Glu Leu Trp Leu Arg Phe Lys Glu Leu Thr Asn
50 55 60
Glu Met Ile Val Thr Lys Asn Gly Arg Arg Met Phe Pro Val Leu Lys
65 70 75 80
Val Asn Val Ser Gly Leu Asp Pro Asn Ala Met Tyr Ser Phe Leu Leu
85 90 95
Asp Phe Val Ala Ala Asp Asn His Arg Trp Lys Tyr Val Asn Gly Glu
100 105 110
Trp Val Pro Gly Gly Lys Pro Glu Pro Gln Ala Pro Ser Cys Val Tyr
115 120 125
Ile His Pro Asp Ser Pro Asn Phe Gly Ala His Trp Met Lys Ala Pro
130 135 140
Val Ser Phe Ser Lys Val Lys Leu Thr Asn Lys Leu Asn Gly Gly Gly
145 150 155 160
Gln Ile Met Leu Asn Ser Leu His Lys Tyr Glu Pro Arg Ile His Ile
165 170 175
Val Arg Val Gly Gly Pro Gln Arg Met Ile Thr Ser His Cys Phe Pro
180 185 190
Glu Thr Gln Phe Ile Ala Val Thr Ala Tyr Gln Asn Glu Glu Ile Thr
195 200 205
Ala Leu Lys Ile Lys Tyr Asn Pro Phe Ala Lys Ala Phe Leu Asp Ala
210 215 220
Lys Glu Arg Ser Asp His Lys Glu Met Met Glu Glu Pro Gly Asp Ser
225 230 235 240
Gln Gln Pro Gly Tyr Ser Gln Trp Gly Trp Leu Leu Pro Gly Thr Ser
245 250 255
Thr Val Cys Pro Pro Ala Asn Pro His Pro Gln Phe Gly Gly Ala Leu
260 265 270
Ser Leu Pro Ser Thr His Ser Cys Asp Arg Tyr Pro Thr Leu Arg Ser
275 280 285
His Arg Ser Ser Pro Tyr Pro Ser Pro Tyr Ala His Arg Asn Asn Ser
290 295 300
Pro Thr Tyr Ser Asp Asn Ser Pro Ala Cys Leu Ser Met Leu Gln Ser
305 310 315 320
His Asp Asn Trp Ser Ser Leu Gly Met Pro Ala His Pro Ser Met Leu
325 330 335
Pro Val Ser His Asn Ala Ser Pro Pro Thr Ser Ser Ser Gln Tyr Pro
340 345 350
Ser Leu Trp Ser Val Ser Asn Gly Ala Val Thr Pro Gly Ser Gln Ala
355 360 365
Ala Ala Val Ser Asn Gly Leu Gly Ala Gln Phe Phe Arg Gly Ser Pro
370 375 380
Ala His Tyr Thr Pro Leu Thr His Pro Val Ser Ala Pro Ser Ser Ser
385 390 395 400
Gly Ser Pro Leu Tyr Glu Gly Ala Ala Ala Ala Thr Asp Ile Val Asp
405 410 415
Ser Gln Tyr Asp Ala Ala Ala Gln Gly Arg Leu Ile Ala Ser Trp Thr
420 425 430
Pro Val Ser Pro Pro Ser Met
435
<210> 31
<211> 438
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Слитый белок, содержащий белок Brachyury (L254V), кодируемый
SEQ ID NO:29
<400> 31
Met Ser Lys Lys Ser Ser Pro Gly Thr Glu Ser Ala Gly Lys Ser Leu
1 5 10 15
Gln Tyr Arg Val Asp His Leu Leu Ser Ala Val Glu Asn Glu Leu Gln
20 25 30
Ala Gly Ser Glu Lys Gly Asp Pro Thr Glu Arg Glu Leu Arg Val Gly
35 40 45
Leu Glu Glu Ser Glu Leu Trp Leu Arg Phe Lys Glu Leu Thr Asn Glu
50 55 60
Met Ile Val Thr Lys Asn Gly Arg Arg Met Phe Pro Val Leu Lys Val
65 70 75 80
Asn Val Ser Gly Leu Asp Pro Asn Ala Met Tyr Ser Phe Leu Leu Asp
85 90 95
Phe Val Ala Ala Asp Asn His Arg Trp Lys Tyr Val Asn Gly Glu Trp
100 105 110
Val Pro Gly Gly Lys Pro Glu Pro Gln Ala Pro Ser Cys Val Tyr Ile
115 120 125
His Pro Asp Ser Pro Asn Phe Gly Ala His Trp Met Lys Ala Pro Val
130 135 140
Ser Phe Ser Lys Val Lys Leu Thr Asn Lys Leu Asn Gly Gly Gly Gln
145 150 155 160
Ile Met Leu Asn Ser Leu His Lys Tyr Glu Pro Arg Ile His Ile Val
165 170 175
Arg Val Gly Gly Pro Gln Arg Met Ile Thr Ser His Cys Phe Pro Glu
180 185 190
Thr Gln Phe Ile Ala Val Thr Ala Tyr Gln Asn Glu Glu Ile Thr Ala
195 200 205
Leu Lys Ile Lys Tyr Asn Pro Phe Ala Lys Ala Phe Leu Asp Ala Lys
210 215 220
Glu Arg Ser Asp His Lys Glu Met Met Glu Glu Pro Gly Asp Ser Gln
225 230 235 240
Gln Pro Gly Tyr Ser Gln Trp Gly Trp Leu Leu Pro Gly Thr Ser Thr
245 250 255
Val Cys Pro Pro Ala Asn Pro His Pro Gln Phe Gly Gly Ala Leu Ser
260 265 270
Leu Pro Ser Thr His Ser Cys Asp Arg Tyr Pro Thr Leu Arg Ser His
275 280 285
Arg Ser Ser Pro Tyr Pro Ser Pro Tyr Ala His Arg Asn Asn Ser Pro
290 295 300
Thr Tyr Ser Asp Asn Ser Pro Ala Cys Leu Ser Met Leu Gln Ser His
305 310 315 320
Asp Asn Trp Ser Ser Leu Gly Met Pro Ala His Pro Ser Met Leu Pro
325 330 335
Val Ser His Asn Ala Ser Pro Pro Thr Ser Ser Ser Gln Tyr Pro Ser
340 345 350
Leu Trp Ser Val Ser Asn Gly Ala Val Thr Pro Gly Ser Gln Ala Ala
355 360 365
Ala Val Ser Asn Gly Leu Gly Ala Gln Phe Phe Arg Gly Ser Pro Ala
370 375 380
His Tyr Thr Pro Leu Thr His Pro Val Ser Ala Pro Ser Ser Ser Gly
385 390 395 400
Ser Pro Leu Tyr Glu Gly Ala Ala Ala Ala Thr Asp Ile Val Asp Ser
405 410 415
Gln Tyr Asp Ala Ala Ala Gln Gly Arg Leu Ile Ala Ser Trp Thr Pro
420 425 430
Val Ser Pro Pro Ser Met
435
<210> 32
<211> 1386
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Кодирующая последовательность, кодирующая слитый белок, содержащий белок Brachyury (L254V), плюс добавление 75 нуклеотидов из гена FPV 088 и atc
<400> 32
atgaaaaata acttgtatga agaaaaaatg aacatgagta agaaacaagt aaaaactcaa 60
agtaaatgta ataatatcat gagctcccct ggcaccgaga gcgcgggaaa gagcctgcag 120
taccgagtgg accacctgct gagcgccgtg gagaatgagc tgcaggcggg cagcgagaag 180
ggcgacccca cagagcgcga actgcgcgtg ggcctggagg agagcgagct gtggctgcgc 240
ttcaaggagc tcaccaatga gatgatcgtg accaagaacg gcaggaggat gtttccggtg 300
ctgaaggtga acgtgtctgg cctggacccc aacgccatgt actccttcct gctggacttc 360
gtggcggcgg acaaccaccg ctggaagtac gtgaacgggg aatgggtgcc ggggggcaag 420
ccggagccgc aggcgcccag ctgcgtctac atccaccccg actcgcccaa cttcggggcc 480
cactggatga aggctcccgt ctccttcagc aaagtcaagc tcaccaacaa gctcaacgga 540
gggggccaga tcatgctgaa ctccttgcat aagtatgagc ctcgaatcca catagtgaga 600
gttgggggtc cacagcgcat gatcaccagc cactgcttcc ctgagaccca gttcatagcg 660
gtgactgctt atcagaacga ggagatcaca gctcttaaaa ttaagtacaa tccatttgca 720
aaggctttcc ttgatgcaaa ggaaagaagt gatcacaaag agatgatgga ggaacccgga 780
gacagccagc aacctgggta ctcccaatgg gggtggcttc ttcctggaac cagcaccgtt 840
tgtccacctg caaatcctca tcctcagttt ggaggtgccc tctccctccc ctccacgcac 900
agctgtgaca ggtacccaac cctgaggagc caccggtcct caccctaccc cagcccctat 960
gctcatcgga acaattctcc aacctattct gacaactcac ctgcatgttt atccatgctg 1020
caatcccatg acaattggtc cagccttgga atgcctgccc atcccagcat gctccccgtg 1080
agccacaatg ccagcccacc taccagctcc agtcagtacc ccagcctgtg gtctgtgagc 1140
aacggcgccg tcaccccggg ctcccaggca gcagccgtgt ccaacgggct gggggcccag 1200
ttcttccggg gctcccccgc gcactacaca cccctcaccc atccggtctc ggcgccctct 1260
tcctcgggat ccccactgta cgaaggggcg gccgcggcca cagacatcgt ggacagccag 1320
tacgacgccg cagcccaagg ccgcctcata gcctcatgga cacctgtgtc gccaccttcc 1380
atgtga 1386
<210> 33
<211> 1383
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Кодирующая последовательность, кодирующая слитый белок, содержащий белок Brachyury (L254V), плюс добавление 75 нуклеотидов из гена FPV 088  и atc, без инициирующего кодона atg Brachyury
<400> 33
atgaaaaata acttgtatga agaaaaaatg aacatgagta agaaacaagt aaaaactcaa 60
agtaaatgta ataatatcag ctcccctggc accgagagcg cgggaaagag cctgcagtac 120
cgagtggacc acctgctgag cgccgtggag aatgagctgc aggcgggcag cgagaagggc 180
gaccccacag agcgcgaact gcgcgtgggc ctggaggaga gcgagctgtg gctgcgcttc 240
aaggagctca ccaatgagat gatcgtgacc aagaacggca ggaggatgtt tccggtgctg 300
aaggtgaacg tgtctggcct ggaccccaac gccatgtact ccttcctgct ggacttcgtg 360
gcggcggaca accaccgctg gaagtacgtg aacggggaat gggtgccggg gggcaagccg 420
gagccgcagg cgcccagctg cgtctacatc caccccgact cgcccaactt cggggcccac 480
tggatgaagg ctcccgtctc cttcagcaaa gtcaagctca ccaacaagct caacggaggg 540
ggccagatca tgctgaactc cttgcataag tatgagcctc gaatccacat agtgagagtt 600
gggggtccac agcgcatgat caccagccac tgcttccctg agacccagtt catagcggtg 660
actgcttatc agaacgagga gatcacagct cttaaaatta agtacaatcc atttgcaaag 720
gctttccttg atgcaaagga aagaagtgat cacaaagaga tgatggagga acccggagac 780
agccagcaac ctgggtactc ccaatggggg tggcttcttc ctggaaccag caccgtttgt 840
ccacctgcaa atcctcatcc tcagtttgga ggtgccctct ccctcccctc cacgcacagc 900
tgtgacaggt acccaaccct gaggagccac cggtcctcac cctaccccag cccctatgct 960
catcggaaca attctccaac ctattctgac aactcacctg catgtttatc catgctgcaa 1020
tcccatgaca attggtccag ccttggaatg cctgcccatc ccagcatgct ccccgtgagc 1080
cacaatgcca gcccacctac cagctccagt cagtacccca gcctgtggtc tgtgagcaac 1140
ggcgccgtca ccccgggctc ccaggcagca gccgtgtcca acgggctggg ggcccagttc 1200
ttccggggct cccccgcgca ctacacaccc ctcacccatc cggtctcggc gccctcttcc 1260
tcgggatccc cactgtacga aggggcggcc gcggccacag acatcgtgga cagccagtac 1320
gacgccgcag cccaaggccg cctcatagcc tcatggacac ctgtgtcgcc accttccatg 1380
tga 1383
<210> 34
<211> 461
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Слитый белок, содержащий белок Brachyury (L254V), кодируемый
SEQ ID NO: 32
<400> 34
Met Lys Asn Asn Leu Tyr Glu Glu Lys Met Asn Met Ser Lys Lys Gln
1 5 10 15
Val Lys Thr Gln Ser Lys Cys Asn Asn Ile Met Ser Ser Pro Gly Thr
20 25 30
Glu Ser Ala Gly Lys Ser Leu Gln Tyr Arg Val Asp His Leu Leu Ser
35 40 45
Ala Val Glu Asn Glu Leu Gln Ala Gly Ser Glu Lys Gly Asp Pro Thr
50 55 60
Glu Arg Glu Leu Arg Val Gly Leu Glu Glu Ser Glu Leu Trp Leu Arg
65 70 75 80
Phe Lys Glu Leu Thr Asn Glu Met Ile Val Thr Lys Asn Gly Arg Arg
85 90 95
Met Phe Pro Val Leu Lys Val Asn Val Ser Gly Leu Asp Pro Asn Ala
100 105 110
Met Tyr Ser Phe Leu Leu Asp Phe Val Ala Ala Asp Asn His Arg Trp
115 120 125
Lys Tyr Val Asn Gly Glu Trp Val Pro Gly Gly Lys Pro Glu Pro Gln
130 135 140
Ala Pro Ser Cys Val Tyr Ile His Pro Asp Ser Pro Asn Phe Gly Ala
145 150 155 160
His Trp Met Lys Ala Pro Val Ser Phe Ser Lys Val Lys Leu Thr Asn
165 170 175
Lys Leu Asn Gly Gly Gly Gln Ile Met Leu Asn Ser Leu His Lys Tyr
180 185 190
Glu Pro Arg Ile His Ile Val Arg Val Gly Gly Pro Gln Arg Met Ile
195 200 205
Thr Ser His Cys Phe Pro Glu Thr Gln Phe Ile Ala Val Thr Ala Tyr
210 215 220
Gln Asn Glu Glu Ile Thr Ala Leu Lys Ile Lys Tyr Asn Pro Phe Ala
225 230 235 240
Lys Ala Phe Leu Asp Ala Lys Glu Arg Ser Asp His Lys Glu Met Met
245 250 255
Glu Glu Pro Gly Asp Ser Gln Gln Pro Gly Tyr Ser Gln Trp Gly Trp
260 265 270
Leu Leu Pro Gly Thr Ser Thr Val Cys Pro Pro Ala Asn Pro His Pro
275 280 285
Gln Phe Gly Gly Ala Leu Ser Leu Pro Ser Thr His Ser Cys Asp Arg
290 295 300
Tyr Pro Thr Leu Arg Ser His Arg Ser Ser Pro Tyr Pro Ser Pro Tyr
305 310 315 320
Ala His Arg Asn Asn Ser Pro Thr Tyr Ser Asp Asn Ser Pro Ala Cys
325 330 335
Leu Ser Met Leu Gln Ser His Asp Asn Trp Ser Ser Leu Gly Met Pro
340 345 350
Ala His Pro Ser Met Leu Pro Val Ser His Asn Ala Ser Pro Pro Thr
355 360 365
Ser Ser Ser Gln Tyr Pro Ser Leu Trp Ser Val Ser Asn Gly Ala Val
370 375 380
Thr Pro Gly Ser Gln Ala Ala Ala Val Ser Asn Gly Leu Gly Ala Gln
385 390 395 400
Phe Phe Arg Gly Ser Pro Ala His Tyr Thr Pro Leu Thr His Pro Val
405 410 415
Ser Ala Pro Ser Ser Ser Gly Ser Pro Leu Tyr Glu Gly Ala Ala Ala
420 425 430
Ala Thr Asp Ile Val Asp Ser Gln Tyr Asp Ala Ala Ala Gln Gly Arg
435 440 445
Leu Ile Ala Ser Trp Thr Pro Val Ser Pro Pro Ser Met
450 455 460
<210> 35
<211> 460
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Слитый белок, содержащий белок Brachyury (L254V), кодируемый
SEQ ID NO: 33
<400> 35
Met Lys Asn Asn Leu Tyr Glu Glu Lys Met Asn Met Ser Lys Lys Gln
1 5 10 15
Val Lys Thr Gln Ser Lys Cys Asn Asn Ile Ser Ser Pro Gly Thr Glu
20 25 30
Ser Ala Gly Lys Ser Leu Gln Tyr Arg Val Asp His Leu Leu Ser Ala
35 40 45
Val Glu Asn Glu Leu Gln Ala Gly Ser Glu Lys Gly Asp Pro Thr Glu
50 55 60
Arg Glu Leu Arg Val Gly Leu Glu Glu Ser Glu Leu Trp Leu Arg Phe
65 70 75 80
Lys Glu Leu Thr Asn Glu Met Ile Val Thr Lys Asn Gly Arg Arg Met
85 90 95
Phe Pro Val Leu Lys Val Asn Val Ser Gly Leu Asp Pro Asn Ala Met
100 105 110
Tyr Ser Phe Leu Leu Asp Phe Val Ala Ala Asp Asn His Arg Trp Lys
115 120 125
Tyr Val Asn Gly Glu Trp Val Pro Gly Gly Lys Pro Glu Pro Gln Ala
130 135 140
Pro Ser Cys Val Tyr Ile His Pro Asp Ser Pro Asn Phe Gly Ala His
145 150 155 160
Trp Met Lys Ala Pro Val Ser Phe Ser Lys Val Lys Leu Thr Asn Lys
165 170 175
Leu Asn Gly Gly Gly Gln Ile Met Leu Asn Ser Leu His Lys Tyr Glu
180 185 190
Pro Arg Ile His Ile Val Arg Val Gly Gly Pro Gln Arg Met Ile Thr
195 200 205
Ser His Cys Phe Pro Glu Thr Gln Phe Ile Ala Val Thr Ala Tyr Gln
210 215 220
Asn Glu Glu Ile Thr Ala Leu Lys Ile Lys Tyr Asn Pro Phe Ala Lys
225 230 235 240
Ala Phe Leu Asp Ala Lys Glu Arg Ser Asp His Lys Glu Met Met Glu
245 250 255
Glu Pro Gly Asp Ser Gln Gln Pro Gly Tyr Ser Gln Trp Gly Trp Leu
260 265 270
Leu Pro Gly Thr Ser Thr Val Cys Pro Pro Ala Asn Pro His Pro Gln
275 280 285
Phe Gly Gly Ala Leu Ser Leu Pro Ser Thr His Ser Cys Asp Arg Tyr
290 295 300
Pro Thr Leu Arg Ser His Arg Ser Ser Pro Tyr Pro Ser Pro Tyr Ala
305 310 315 320
His Arg Asn Asn Ser Pro Thr Tyr Ser Asp Asn Ser Pro Ala Cys Leu
325 330 335
Ser Met Leu Gln Ser His Asp Asn Trp Ser Ser Leu Gly Met Pro Ala
340 345 350
His Pro Ser Met Leu Pro Val Ser His Asn Ala Ser Pro Pro Thr Ser
355 360 365
Ser Ser Gln Tyr Pro Ser Leu Trp Ser Val Ser Asn Gly Ala Val Thr
370 375 380
Pro Gly Ser Gln Ala Ala Ala Val Ser Asn Gly Leu Gly Ala Gln Phe
385 390 395 400
Phe Arg Gly Ser Pro Ala His Tyr Thr Pro Leu Thr His Pro Val Ser
405 410 415
Ala Pro Ser Ser Ser Gly Ser Pro Leu Tyr Glu Gly Ala Ala Ala Ala
420 425 430
Thr Asp Ile Val Asp Ser Gln Tyr Asp Ala Ala Ala Gln Gly Arg Leu
435 440 445
Ile Ala Ser Trp Thr Pro Val Ser Pro Pro Ser Met
450 455 460
<210> 36
<211> 1359
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Кодирующая последовательность, кодирующая слитый белок, содержащий белок Brachyury (L254V), плюс добавление 48 нуклеотидов из гена FPV088 и atc
<400> 36
atgaacatga gtaagaaaca agtaaaaact caaagtaaat gtaataatat catgagctcc 60
cctggcaccg agagcgcggg aaagagcctg cagtaccgag tggaccacct gctgagcgcc 120
gtggagaatg agctgcaggc gggcagcgag aagggcgacc ccacagagcg cgaactgcgc 180
gtgggcctgg aggagagcga gctgtggctg cgcttcaagg agctcaccaa tgagatgatc 240
gtgaccaaga acggcaggag gatgtttccg gtgctgaagg tgaacgtgtc tggcctggac 300
cccaacgcca tgtactcctt cctgctggac ttcgtggcgg cggacaacca ccgctggaag 360
tacgtgaacg gggaatgggt gccggggggc aagccggagc cgcaggcgcc cagctgcgtc 420
tacatccacc ccgactcgcc caacttcggg gcccactgga tgaaggctcc cgtctccttc 480
agcaaagtca agctcaccaa caagctcaac ggagggggcc agatcatgct gaactccttg 540
cataagtatg agcctcgaat ccacatagtg agagttgggg gtccacagcg catgatcacc 600
agccactgct tccctgagac ccagttcata gcggtgactg cttatcagaa cgaggagatc 660
acagctctta aaattaagta caatccattt gcaaaggctt tccttgatgc aaaggaaaga 720
agtgatcaca aagagatgat ggaggaaccc ggagacagcc agcaacctgg gtactcccaa 780
tgggggtggc ttcttcctgg aaccagcacc gtttgtccac ctgcaaatcc tcatcctcag 840
tttggaggtg ccctctccct cccctccacg cacagctgtg acaggtaccc aaccctgagg 900
agccaccggt cctcacccta ccccagcccc tatgctcatc ggaacaattc tccaacctat 960
tctgacaact cacctgcatg tttatccatg ctgcaatccc atgacaattg gtccagcctt 1020
ggaatgcctg cccatcccag catgctcccc gtgagccaca atgccagccc acctaccagc 1080
tccagtcagt accccagcct gtggtctgtg agcaacggcg ccgtcacccc gggctcccag 1140
gcagcagccg tgtccaacgg gctgggggcc cagttcttcc ggggctcccc cgcgcactac 1200
acacccctca cccatccggt ctcggcgccc tcttcctcgg gatccccact gtacgaaggg 1260
gcggccgcgg ccacagacat cgtggacagc cagtacgacg ccgcagccca aggccgcctc 1320
atagcctcat ggacacctgt gtcgccacct tccatgtga 1359
<210> 37
<211> 1356
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Кодирующая последовательность, кодирующая слитый белок, содержащий белок Brachyury (L254V), плюс добавление 48 нуклеотидов из гена FPV 088 и atc, без инициирующего кодона atg Brachyury
<400> 37
atgaacatga gtaagaaaca agtaaaaact caaagtaaat gtaataatat cagctcccct 60
ggcaccgaga gcgcgggaaa gagcctgcag taccgagtgg accacctgct gagcgccgtg 120
gagaatgagc tgcaggcggg cagcgagaag ggcgacccca cagagcgcga actgcgcgtg 180
ggcctggagg agagcgagct gtggctgcgc ttcaaggagc tcaccaatga gatgatcgtg 240
accaagaacg gcaggaggat gtttccggtg ctgaaggtga acgtgtctgg cctggacccc 300
aacgccatgt actccttcct gctggacttc gtggcggcgg acaaccaccg ctggaagtac 360
gtgaacgggg aatgggtgcc ggggggcaag ccggagccgc aggcgcccag ctgcgtctac 420
atccaccccg actcgcccaa cttcggggcc cactggatga aggctcccgt ctccttcagc 480
aaagtcaagc tcaccaacaa gctcaacgga gggggccaga tcatgctgaa ctccttgcat 540
aagtatgagc ctcgaatcca catagtgaga gttgggggtc cacagcgcat gatcaccagc 600
cactgcttcc ctgagaccca gttcatagcg gtgactgctt atcagaacga ggagatcaca 660
gctcttaaaa ttaagtacaa tccatttgca aaggctttcc ttgatgcaaa ggaaagaagt 720
gatcacaaag agatgatgga ggaacccgga gacagccagc aacctgggta ctcccaatgg 780
gggtggcttc ttcctggaac cagcaccgtt tgtccacctg caaatcctca tcctcagttt 840
ggaggtgccc tctccctccc ctccacgcac agctgtgaca ggtacccaac cctgaggagc 900
caccggtcct caccctaccc cagcccctat gctcatcgga acaattctcc aacctattct 960
gacaactcac ctgcatgttt atccatgctg caatcccatg acaattggtc cagccttgga 1020
atgcctgccc atcccagcat gctccccgtg agccacaatg ccagcccacc taccagctcc 1080
agtcagtacc ccagcctgtg gtctgtgagc aacggcgccg tcaccccggg ctcccaggca 1140
gcagccgtgt ccaacgggct gggggcccag ttcttccggg gctcccccgc gcactacaca 1200
cccctcaccc atccggtctc ggcgccctct tcctcgggat ccccactgta cgaaggggcg 1260
gccgcggcca cagacatcgt ggacagccag tacgacgccg cagcccaagg ccgcctcata 1320
gcctcatgga cacctgtgtc gccaccttcc atgtga 1356
<210> 38
<211> 452
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Слитый белок, содержащий белок Brachyury (L254V), кодируемый
SEQ ID NO:36
<400> 38
Met Asn Met Ser Lys Lys Gln Val Lys Thr Gln Ser Lys Cys Asn Asn
1 5 10 15
Ile Met Ser Ser Pro Gly Thr Glu Ser Ala Gly Lys Ser Leu Gln Tyr
20 25 30
Arg Val Asp His Leu Leu Ser Ala Val Glu Asn Glu Leu Gln Ala Gly
35 40 45
Ser Glu Lys Gly Asp Pro Thr Glu Arg Glu Leu Arg Val Gly Leu Glu
50 55 60
Glu Ser Glu Leu Trp Leu Arg Phe Lys Glu Leu Thr Asn Glu Met Ile
65 70 75 80
Val Thr Lys Asn Gly Arg Arg Met Phe Pro Val Leu Lys Val Asn Val
85 90 95
Ser Gly Leu Asp Pro Asn Ala Met Tyr Ser Phe Leu Leu Asp Phe Val
100 105 110
Ala Ala Asp Asn His Arg Trp Lys Tyr Val Asn Gly Glu Trp Val Pro
115 120 125
Gly Gly Lys Pro Glu Pro Gln Ala Pro Ser Cys Val Tyr Ile His Pro
130 135 140
Asp Ser Pro Asn Phe Gly Ala His Trp Met Lys Ala Pro Val Ser Phe
145 150 155 160
Ser Lys Val Lys Leu Thr Asn Lys Leu Asn Gly Gly Gly Gln Ile Met
165 170 175
Leu Asn Ser Leu His Lys Tyr Glu Pro Arg Ile His Ile Val Arg Val
180 185 190
Gly Gly Pro Gln Arg Met Ile Thr Ser His Cys Phe Pro Glu Thr Gln
195 200 205
Phe Ile Ala Val Thr Ala Tyr Gln Asn Glu Glu Ile Thr Ala Leu Lys
210 215 220
Ile Lys Tyr Asn Pro Phe Ala Lys Ala Phe Leu Asp Ala Lys Glu Arg
225 230 235 240
Ser Asp His Lys Glu Met Met Glu Glu Pro Gly Asp Ser Gln Gln Pro
245 250 255
Gly Tyr Ser Gln Trp Gly Trp Leu Leu Pro Gly Thr Ser Thr Val Cys
260 265 270
Pro Pro Ala Asn Pro His Pro Gln Phe Gly Gly Ala Leu Ser Leu Pro
275 280 285
Ser Thr His Ser Cys Asp Arg Tyr Pro Thr Leu Arg Ser His Arg Ser
290 295 300
Ser Pro Tyr Pro Ser Pro Tyr Ala His Arg Asn Asn Ser Pro Thr Tyr
305 310 315 320
Ser Asp Asn Ser Pro Ala Cys Leu Ser Met Leu Gln Ser His Asp Asn
325 330 335
Trp Ser Ser Leu Gly Met Pro Ala His Pro Ser Met Leu Pro Val Ser
340 345 350
His Asn Ala Ser Pro Pro Thr Ser Ser Ser Gln Tyr Pro Ser Leu Trp
355 360 365
Ser Val Ser Asn Gly Ala Val Thr Pro Gly Ser Gln Ala Ala Ala Val
370 375 380
Ser Asn Gly Leu Gly Ala Gln Phe Phe Arg Gly Ser Pro Ala His Tyr
385 390 395 400
Thr Pro Leu Thr His Pro Val Ser Ala Pro Ser Ser Ser Gly Ser Pro
405 410 415
Leu Tyr Glu Gly Ala Ala Ala Ala Thr Asp Ile Val Asp Ser Gln Tyr
420 425 430
Asp Ala Ala Ala Gln Gly Arg Leu Ile Ala Ser Trp Thr Pro Val Ser
435 440 445
Pro Pro Ser Met
450
<210> 39
<211> 451
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Слитый белок, содержащий белок Brachyury (L254V), кодируемый
SEQ ID NO:37
<400> 39
Met Asn Met Ser Lys Lys Gln Val Lys Thr Gln Ser Lys Cys Asn Asn
1 5 10 15
Ile Ser Ser Pro Gly Thr Glu Ser Ala Gly Lys Ser Leu Gln Tyr Arg
20 25 30
Val Asp His Leu Leu Ser Ala Val Glu Asn Glu Leu Gln Ala Gly Ser
35 40 45
Glu Lys Gly Asp Pro Thr Glu Arg Glu Leu Arg Val Gly Leu Glu Glu
50 55 60
Ser Glu Leu Trp Leu Arg Phe Lys Glu Leu Thr Asn Glu Met Ile Val
65 70 75 80
Thr Lys Asn Gly Arg Arg Met Phe Pro Val Leu Lys Val Asn Val Ser
85 90 95
Gly Leu Asp Pro Asn Ala Met Tyr Ser Phe Leu Leu Asp Phe Val Ala
100 105 110
Ala Asp Asn His Arg Trp Lys Tyr Val Asn Gly Glu Trp Val Pro Gly
115 120 125
Gly Lys Pro Glu Pro Gln Ala Pro Ser Cys Val Tyr Ile His Pro Asp
130 135 140
Ser Pro Asn Phe Gly Ala His Trp Met Lys Ala Pro Val Ser Phe Ser
145 150 155 160
Lys Val Lys Leu Thr Asn Lys Leu Asn Gly Gly Gly Gln Ile Met Leu
165 170 175
Asn Ser Leu His Lys Tyr Glu Pro Arg Ile His Ile Val Arg Val Gly
180 185 190
Gly Pro Gln Arg Met Ile Thr Ser His Cys Phe Pro Glu Thr Gln Phe
195 200 205
Ile Ala Val Thr Ala Tyr Gln Asn Glu Glu Ile Thr Ala Leu Lys Ile
210 215 220
Lys Tyr Asn Pro Phe Ala Lys Ala Phe Leu Asp Ala Lys Glu Arg Ser
225 230 235 240
Asp His Lys Glu Met Met Glu Glu Pro Gly Asp Ser Gln Gln Pro Gly
245 250 255
Tyr Ser Gln Trp Gly Trp Leu Leu Pro Gly Thr Ser Thr Val Cys Pro
260 265 270
Pro Ala Asn Pro His Pro Gln Phe Gly Gly Ala Leu Ser Leu Pro Ser
275 280 285
Thr His Ser Cys Asp Arg Tyr Pro Thr Leu Arg Ser His Arg Ser Ser
290 295 300
Pro Tyr Pro Ser Pro Tyr Ala His Arg Asn Asn Ser Pro Thr Tyr Ser
305 310 315 320
Asp Asn Ser Pro Ala Cys Leu Ser Met Leu Gln Ser His Asp Asn Trp
325 330 335
Ser Ser Leu Gly Met Pro Ala His Pro Ser Met Leu Pro Val Ser His
340 345 350
Asn Ala Ser Pro Pro Thr Ser Ser Ser Gln Tyr Pro Ser Leu Trp Ser
355 360 365
Val Ser Asn Gly Ala Val Thr Pro Gly Ser Gln Ala Ala Ala Val Ser
370 375 380
Asn Gly Leu Gly Ala Gln Phe Phe Arg Gly Ser Pro Ala His Tyr Thr
385 390 395 400
Pro Leu Thr His Pro Val Ser Ala Pro Ser Ser Ser Gly Ser Pro Leu
405 410 415
Tyr Glu Gly Ala Ala Ala Ala Thr Asp Ile Val Asp Ser Gln Tyr Asp
420 425 430
Ala Ala Ala Gln Gly Arg Leu Ile Ala Ser Trp Thr Pro Val Ser Pro
435 440 445
Pro Ser Met
450
<210> 40
<211> 1353
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Кодирующая последовательность, кодирующая слитый белок, содержащий белок Brachyury (L254V), плюс добавление 42 нуклеотидов из гена FPV 088 и atc
<400> 40
atgagtaaga aacaagtaaa aactcaaagt aaatgtaata atatcatgag ctcccctggc 60
accgagagcg cgggaaagag cctgcagtac cgagtggacc acctgctgag cgccgtggag 120
aatgagctgc aggcgggcag cgagaagggc gaccccacag agcgcgaact gcgcgtgggc 180
ctggaggaga gcgagctgtg gctgcgcttc aaggagctca ccaatgagat gatcgtgacc 240
aagaacggca ggaggatgtt tccggtgctg aaggtgaacg tgtctggcct ggaccccaac 300
gccatgtact ccttcctgct ggacttcgtg gcggcggaca accaccgctg gaagtacgtg 360
aacggggaat gggtgccggg gggcaagccg gagccgcagg cgcccagctg cgtctacatc 420
caccccgact cgcccaactt cggggcccac tggatgaagg ctcccgtctc cttcagcaaa 480
gtcaagctca ccaacaagct caacggaggg ggccagatca tgctgaactc cttgcataag 540
tatgagcctc gaatccacat agtgagagtt gggggtccac agcgcatgat caccagccac 600
tgcttccctg agacccagtt catagcggtg actgcttatc agaacgagga gatcacagct 660
cttaaaatta agtacaatcc atttgcaaag gctttccttg atgcaaagga aagaagtgat 720
cacaaagaga tgatggagga acccggagac agccagcaac ctgggtactc ccaatggggg 780
tggcttcttc ctggaaccag caccgtttgt ccacctgcaa atcctcatcc tcagtttgga 840
ggtgccctct ccctcccctc cacgcacagc tgtgacaggt acccaaccct gaggagccac 900
cggtcctcac cctaccccag cccctatgct catcggaaca attctccaac ctattctgac 960
aactcacctg catgtttatc catgctgcaa tcccatgaca attggtccag ccttggaatg 1020
cctgcccatc ccagcatgct ccccgtgagc cacaatgcca gcccacctac cagctccagt 1080
cagtacccca gcctgtggtc tgtgagcaac ggcgccgtca ccccgggctc ccaggcagca 1140
gccgtgtcca acgggctggg ggcccagttc ttccggggct cccccgcgca ctacacaccc 1200
ctcacccatc cggtctcggc gccctcttcc tcgggatccc cactgtacga aggggcggcc 1260
gcggccacag acatcgtgga cagccagtac gacgccgcag cccaaggccg cctcatagcc 1320
tcatggacac ctgtgtcgcc accttccatg tga 1353
<210> 41
<211> 1350
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Кодирующая последовательность, кодирующая слитый белок, содержащий белок Brachyury (L254V), плюс добавление 42 нуклеотидов из гена FPV 088 и atc, без инициирующего кодона atg Brachyury
<400> 41
atgagtaaga aacaagtaaa aactcaaagt aaatgtaata atatcagctc ccctggcacc 60
gagagcgcgg gaaagagcct gcagtaccga gtggaccacc tgctgagcgc cgtggagaat 120
gagctgcagg cgggcagcga gaagggcgac cccacagagc gcgaactgcg cgtgggcctg 180
gaggagagcg agctgtggct gcgcttcaag gagctcacca atgagatgat cgtgaccaag 240
aacggcagga ggatgtttcc ggtgctgaag gtgaacgtgt ctggcctgga ccccaacgcc 300
atgtactcct tcctgctgga cttcgtggcg gcggacaacc accgctggaa gtacgtgaac 360
ggggaatggg tgccgggggg caagccggag ccgcaggcgc ccagctgcgt ctacatccac 420
cccgactcgc ccaacttcgg ggcccactgg atgaaggctc ccgtctcctt cagcaaagtc 480
aagctcacca acaagctcaa cggagggggc cagatcatgc tgaactcctt gcataagtat 540
gagcctcgaa tccacatagt gagagttggg ggtccacagc gcatgatcac cagccactgc 600
ttccctgaga cccagttcat agcggtgact gcttatcaga acgaggagat cacagctctt 660
aaaattaagt acaatccatt tgcaaaggct ttccttgatg caaaggaaag aagtgatcac 720
aaagagatga tggaggaacc cggagacagc cagcaacctg ggtactccca atgggggtgg 780
cttcttcctg gaaccagcac cgtttgtcca cctgcaaatc ctcatcctca gtttggaggt 840
gccctctccc tcccctccac gcacagctgt gacaggtacc caaccctgag gagccaccgg 900
tcctcaccct accccagccc ctatgctcat cggaacaatt ctccaaccta ttctgacaac 960
tcacctgcat gtttatccat gctgcaatcc catgacaatt ggtccagcct tggaatgcct 1020
gcccatccca gcatgctccc cgtgagccac aatgccagcc cacctaccag ctccagtcag 1080
taccccagcc tgtggtctgt gagcaacggc gccgtcaccc cgggctccca ggcagcagcc 1140
gtgtccaacg ggctgggggc ccagttcttc cggggctccc ccgcgcacta cacacccctc 1200
acccatccgg tctcggcgcc ctcttcctcg ggatccccac tgtacgaagg ggcggccgcg 1260
gccacagaca tcgtggacag ccagtacgac gccgcagccc aaggccgcct catagcctca 1320
tggacacctg tgtcgccacc ttccatgtga 1350
<210> 42
<211> 450
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Слитый белок, содержащий белок Brachyury (L254V), кодируемый
SEQ ID NO:40
<400> 42
Met Ser Lys Lys Gln Val Lys Thr Gln Ser Lys Cys Asn Asn Ile Met
1 5 10 15
Ser Ser Pro Gly Thr Glu Ser Ala Gly Lys Ser Leu Gln Tyr Arg Val
20 25 30
Asp His Leu Leu Ser Ala Val Glu Asn Glu Leu Gln Ala Gly Ser Glu
35 40 45
Lys Gly Asp Pro Thr Glu Arg Glu Leu Arg Val Gly Leu Glu Glu Ser
50 55 60
Glu Leu Trp Leu Arg Phe Lys Glu Leu Thr Asn Glu Met Ile Val Thr
65 70 75 80
Lys Asn Gly Arg Arg Met Phe Pro Val Leu Lys Val Asn Val Ser Gly
85 90 95
Leu Asp Pro Asn Ala Met Tyr Ser Phe Leu Leu Asp Phe Val Ala Ala
100 105 110
Asp Asn His Arg Trp Lys Tyr Val Asn Gly Glu Trp Val Pro Gly Gly
115 120 125
Lys Pro Glu Pro Gln Ala Pro Ser Cys Val Tyr Ile His Pro Asp Ser
130 135 140
Pro Asn Phe Gly Ala His Trp Met Lys Ala Pro Val Ser Phe Ser Lys
145 150 155 160
Val Lys Leu Thr Asn Lys Leu Asn Gly Gly Gly Gln Ile Met Leu Asn
165 170 175
Ser Leu His Lys Tyr Glu Pro Arg Ile His Ile Val Arg Val Gly Gly
180 185 190
Pro Gln Arg Met Ile Thr Ser His Cys Phe Pro Glu Thr Gln Phe Ile
195 200 205
Ala Val Thr Ala Tyr Gln Asn Glu Glu Ile Thr Ala Leu Lys Ile Lys
210 215 220
Tyr Asn Pro Phe Ala Lys Ala Phe Leu Asp Ala Lys Glu Arg Ser Asp
225 230 235 240
His Lys Glu Met Met Glu Glu Pro Gly Asp Ser Gln Gln Pro Gly Tyr
245 250 255
Ser Gln Trp Gly Trp Leu Leu Pro Gly Thr Ser Thr Val Cys Pro Pro
260 265 270
Ala Asn Pro His Pro Gln Phe Gly Gly Ala Leu Ser Leu Pro Ser Thr
275 280 285
His Ser Cys Asp Arg Tyr Pro Thr Leu Arg Ser His Arg Ser Ser Pro
290 295 300
Tyr Pro Ser Pro Tyr Ala His Arg Asn Asn Ser Pro Thr Tyr Ser Asp
305 310 315 320
Asn Ser Pro Ala Cys Leu Ser Met Leu Gln Ser His Asp Asn Trp Ser
325 330 335
Ser Leu Gly Met Pro Ala His Pro Ser Met Leu Pro Val Ser His Asn
340 345 350
Ala Ser Pro Pro Thr Ser Ser Ser Gln Tyr Pro Ser Leu Trp Ser Val
355 360 365
Ser Asn Gly Ala Val Thr Pro Gly Ser Gln Ala Ala Ala Val Ser Asn
370 375 380
Gly Leu Gly Ala Gln Phe Phe Arg Gly Ser Pro Ala His Tyr Thr Pro
385 390 395 400
Leu Thr His Pro Val Ser Ala Pro Ser Ser Ser Gly Ser Pro Leu Tyr
405 410 415
Glu Gly Ala Ala Ala Ala Thr Asp Ile Val Asp Ser Gln Tyr Asp Ala
420 425 430
Ala Ala Gln Gly Arg Leu Ile Ala Ser Trp Thr Pro Val Ser Pro Pro
435 440 445
Ser Met
450
<210> 43
<211> 449
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Слитый белок, содержащий белок Brachyury (L254V), кодируемый
SEQ ID NO:41
<400> 43
Met Ser Lys Lys Gln Val Lys Thr Gln Ser Lys Cys Asn Asn Ile Ser
1 5 10 15
Ser Pro Gly Thr Glu Ser Ala Gly Lys Ser Leu Gln Tyr Arg Val Asp
20 25 30
His Leu Leu Ser Ala Val Glu Asn Glu Leu Gln Ala Gly Ser Glu Lys
35 40 45
Gly Asp Pro Thr Glu Arg Glu Leu Arg Val Gly Leu Glu Glu Ser Glu
50 55 60
Leu Trp Leu Arg Phe Lys Glu Leu Thr Asn Glu Met Ile Val Thr Lys
65 70 75 80
Asn Gly Arg Arg Met Phe Pro Val Leu Lys Val Asn Val Ser Gly Leu
85 90 95
Asp Pro Asn Ala Met Tyr Ser Phe Leu Leu Asp Phe Val Ala Ala Asp
100 105 110
Asn His Arg Trp Lys Tyr Val Asn Gly Glu Trp Val Pro Gly Gly Lys
115 120 125
Pro Glu Pro Gln Ala Pro Ser Cys Val Tyr Ile His Pro Asp Ser Pro
130 135 140
Asn Phe Gly Ala His Trp Met Lys Ala Pro Val Ser Phe Ser Lys Val
145 150 155 160
Lys Leu Thr Asn Lys Leu Asn Gly Gly Gly Gln Ile Met Leu Asn Ser
165 170 175
Leu His Lys Tyr Glu Pro Arg Ile His Ile Val Arg Val Gly Gly Pro
180 185 190
Gln Arg Met Ile Thr Ser His Cys Phe Pro Glu Thr Gln Phe Ile Ala
195 200 205
Val Thr Ala Tyr Gln Asn Glu Glu Ile Thr Ala Leu Lys Ile Lys Tyr
210 215 220
Asn Pro Phe Ala Lys Ala Phe Leu Asp Ala Lys Glu Arg Ser Asp His
225 230 235 240
Lys Glu Met Met Glu Glu Pro Gly Asp Ser Gln Gln Pro Gly Tyr Ser
245 250 255
Gln Trp Gly Trp Leu Leu Pro Gly Thr Ser Thr Val Cys Pro Pro Ala
260 265 270
Asn Pro His Pro Gln Phe Gly Gly Ala Leu Ser Leu Pro Ser Thr His
275 280 285
Ser Cys Asp Arg Tyr Pro Thr Leu Arg Ser His Arg Ser Ser Pro Tyr
290 295 300
Pro Ser Pro Tyr Ala His Arg Asn Asn Ser Pro Thr Tyr Ser Asp Asn
305 310 315 320
Ser Pro Ala Cys Leu Ser Met Leu Gln Ser His Asp Asn Trp Ser Ser
325 330 335
Leu Gly Met Pro Ala His Pro Ser Met Leu Pro Val Ser His Asn Ala
340 345 350
Ser Pro Pro Thr Ser Ser Ser Gln Tyr Pro Ser Leu Trp Ser Val Ser
355 360 365
Asn Gly Ala Val Thr Pro Gly Ser Gln Ala Ala Ala Val Ser Asn Gly
370 375 380
Leu Gly Ala Gln Phe Phe Arg Gly Ser Pro Ala His Tyr Thr Pro Leu
385 390 395 400
Thr His Pro Val Ser Ala Pro Ser Ser Ser Gly Ser Pro Leu Tyr Glu
405 410 415
Gly Ala Ala Ala Ala Thr Asp Ile Val Asp Ser Gln Tyr Asp Ala Ala
420 425 430
Ala Gln Gly Arg Leu Ile Ala Ser Trp Thr Pro Val Ser Pro Pro Ser
435 440 445
Met
<210> 44
<211> 1323
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Кодирующая последовательность, кодирующая слитый белок, содержащий изоформу 1 белка Brachyury, плюс добавление 15 нуклеотидов из гена FPV 088
<400> 44
atgaaaaata acttgatgag ctcccctggc accgagagcg cgggaaagag cctgcagtac 60
cgagtggacc acctgctgag cgccgtggag aatgagctgc aggcgggcag cgagaagggc 120
gaccccacag agcgcgaact gcgcgtgggc ctggaggaga gcgagctgtg gctgcgcttc 180
aaggagctca ccaatgagat gatcgtgacc aagaacggca ggaggatgtt tccggtgctg 240
aaggtgaacg tgtctggcct ggaccccaac gccatgtact ccttcctgct ggacttcgtg 300
gcggcggaca accaccgctg gaagtacgtg aacggggaat gggtgccggg gggcaagccg 360
gagccgcagg cgcccagctg cgtctacatc caccccgact cgcccaactt cggggcccac 420
tggatgaagg ctcccgtctc cttcagcaaa gtcaagctca ccaacaagct caacggaggg 480
ggccagatca tgctgaactc cttgcataag tatgagcctc gaatccacat agtgagagtt 540
gggggtccac agcgcatgat caccagccac tgcttccctg agacccagtt catagcggtg 600
actgcttatc agaacgagga gatcacagct cttaaaatta agtacaatcc atttgcaaaa 660
gctttccttg atgcaaagga aagaagtgat cacaaagaga tgatggagga acccggagac 720
agccagcaac ctgggtactc ccaatggggg tggcttcttc ctggaaccag caccgtttgt 780
ccacctgcaa atcctcatcc tcagtttgga ggtgccctct ccctcccctc cacgcacagc 840
tgtgacaggt acccaaccct gaggagccac cggtcctcac cctaccccag cccctatgct 900
catcggaaca attctccaac ctattctgac aactcacctg catgtttatc catgctgcaa 960
tcccatgaca attggtccag ccttggaatg cctgcccatc ccagcatgct ccccgtgagc 1020
cacaatgcca gcccacctac cagctccagt cagtacccca gcctgtggtc tgtgagcaac 1080
ggcgccgtca ccccgggctc ccaggcagca gccgtgtcca acgggctggg ggcccagttc 1140
ttccggggct cccccgcgca ctacacaccc ctcacccatc cggtctcggc gccctcttcc 1200
tcgggatccc cactgtacga aggggcggcc gcggccacag acatcgtgga cagccagtac 1260
gacgccgcag cccaaggccg cctcatagcc tcatggacac ctgtgtcgcc accttccatg 1320
tga 1323
<210> 45
<211> 1320
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Кодирующая последовательность, кодирующая слитый белок, содержащий изоформу 1 белка Brachyury, плюс добавление 15 нуклеотидов из гена FPV 088 без инициирующего кодона atg Brachyury
<400> 45
atgaaaaata acttgagctc ccctggcacc gagagcgcgg gaaagagcct gcagtaccga 60
gtggaccacc tgctgagcgc cgtggagaat gagctgcagg cgggcagcga gaagggcgac 120
cccacagagc gcgaactgcg cgtgggcctg gaggagagcg agctgtggct gcgcttcaag 180
gagctcacca atgagatgat cgtgaccaag aacggcagga ggatgtttcc ggtgctgaag 240
gtgaacgtgt ctggcctgga ccccaacgcc atgtactcct tcctgctgga cttcgtggcg 300
gcggacaacc accgctggaa gtacgtgaac ggggaatggg tgccgggggg caagccggag 360
ccgcaggcgc ccagctgcgt ctacatccac cccgactcgc ccaacttcgg ggcccactgg 420
atgaaggctc ccgtctcctt cagcaaagtc aagctcacca acaagctcaa cggagggggc 480
cagatcatgc tgaactcctt gcataagtat gagcctcgaa tccacatagt gagagttggg 540
ggtccacagc gcatgatcac cagccactgc ttccctgaga cccagttcat agcggtgact 600
gcttatcaga acgaggagat cacagctctt aaaattaagt acaatccatt tgcaaaagct 660
ttccttgatg caaaggaaag aagtgatcac aaagagatga tggaggaacc cggagacagc 720
cagcaacctg ggtactccca atgggggtgg cttcttcctg gaaccagcac cgtttgtcca 780
cctgcaaatc ctcatcctca gtttggaggt gccctctccc tcccctccac gcacagctgt 840
gacaggtacc caaccctgag gagccaccgg tcctcaccct accccagccc ctatgctcat 900
cggaacaatt ctccaaccta ttctgacaac tcacctgcat gtttatccat gctgcaatcc 960
catgacaatt ggtccagcct tggaatgcct gcccatccca gcatgctccc cgtgagccac 1020
aatgccagcc cacctaccag ctccagtcag taccccagcc tgtggtctgt gagcaacggc 1080
gccgtcaccc cgggctccca ggcagcagcc gtgtccaacg ggctgggggc ccagttcttc 1140
cggggctccc ccgcgcacta cacacccctc acccatccgg tctcggcgcc ctcttcctcg 1200
ggatccccac tgtacgaagg ggcggccgcg gccacagaca tcgtggacag ccagtacgac 1260
gccgcagccc aaggccgcct catagcctca tggacacctg tgtcgccacc ttccatgtga 1320
<210> 46
<211> 440
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Слитый белок, содержащий изоформу 1 белка Brachyury, кодируемый
SEQ ID NO:44
<400> 46
Met Lys Asn Asn Leu Met Ser Ser Pro Gly Thr Glu Ser Ala Gly Lys
1 5 10 15
Ser Leu Gln Tyr Arg Val Asp His Leu Leu Ser Ala Val Glu Asn Glu
20 25 30
Leu Gln Ala Gly Ser Glu Lys Gly Asp Pro Thr Glu Arg Glu Leu Arg
35 40 45
Val Gly Leu Glu Glu Ser Glu Leu Trp Leu Arg Phe Lys Glu Leu Thr
50 55 60
Asn Glu Met Ile Val Thr Lys Asn Gly Arg Arg Met Phe Pro Val Leu
65 70 75 80
Lys Val Asn Val Ser Gly Leu Asp Pro Asn Ala Met Tyr Ser Phe Leu
85 90 95
Leu Asp Phe Val Ala Ala Asp Asn His Arg Trp Lys Tyr Val Asn Gly
100 105 110
Glu Trp Val Pro Gly Gly Lys Pro Glu Pro Gln Ala Pro Ser Cys Val
115 120 125
Tyr Ile His Pro Asp Ser Pro Asn Phe Gly Ala His Trp Met Lys Ala
130 135 140
Pro Val Ser Phe Ser Lys Val Lys Leu Thr Asn Lys Leu Asn Gly Gly
145 150 155 160
Gly Gln Ile Met Leu Asn Ser Leu His Lys Tyr Glu Pro Arg Ile His
165 170 175
Ile Val Arg Val Gly Gly Pro Gln Arg Met Ile Thr Ser His Cys Phe
180 185 190
Pro Glu Thr Gln Phe Ile Ala Val Thr Ala Tyr Gln Asn Glu Glu Ile
195 200 205
Thr Ala Leu Lys Ile Lys Tyr Asn Pro Phe Ala Lys Ala Phe Leu Asp
210 215 220
Ala Lys Glu Arg Ser Asp His Lys Glu Met Met Glu Glu Pro Gly Asp
225 230 235 240
Ser Gln Gln Pro Gly Tyr Ser Gln Trp Gly Trp Leu Leu Pro Gly Thr
245 250 255
Ser Thr Leu Cys Pro Pro Ala Asn Pro His Pro Gln Phe Gly Gly Ala
260 265 270
Leu Ser Leu Pro Ser Thr His Ser Cys Asp Arg Tyr Pro Thr Leu Arg
275 280 285
Ser His Arg Ser Ser Pro Tyr Pro Ser Pro Tyr Ala His Arg Asn Asn
290 295 300
Ser Pro Thr Tyr Ser Asp Asn Ser Pro Ala Cys Leu Ser Met Leu Gln
305 310 315 320
Ser His Asp Asn Trp Ser Ser Leu Gly Met Pro Ala His Pro Ser Met
325 330 335
Leu Pro Val Ser His Asn Ala Ser Pro Pro Thr Ser Ser Ser Gln Tyr
340 345 350
Pro Ser Leu Trp Ser Val Ser Asn Gly Ala Val Thr Pro Gly Ser Gln
355 360 365
Ala Ala Ala Val Ser Asn Gly Leu Gly Ala Gln Phe Phe Arg Gly Ser
370 375 380
Pro Ala His Tyr Thr Pro Leu Thr His Pro Val Ser Ala Pro Ser Ser
385 390 395 400
Ser Gly Ser Pro Leu Tyr Glu Gly Ala Ala Ala Ala Thr Asp Ile Val
405 410 415
Asp Ser Gln Tyr Asp Ala Ala Ala Gln Gly Arg Leu Ile Ala Ser Trp
420 425 430
Thr Pro Val Ser Pro Pro Ser Met
435 440
<210> 47
<211> 439
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Слитый белок, содержащий изоформу 1 белка Brachyury, кодируемый
SEQ ID NO:45
<400> 47
Met Lys Asn Asn Leu Ser Ser Pro Gly Thr Glu Ser Ala Gly Lys Ser
1 5 10 15
Leu Gln Tyr Arg Val Asp His Leu Leu Ser Ala Val Glu Asn Glu Leu
20 25 30
Gln Ala Gly Ser Glu Lys Gly Asp Pro Thr Glu Arg Glu Leu Arg Val
35 40 45
Gly Leu Glu Glu Ser Glu Leu Trp Leu Arg Phe Lys Glu Leu Thr Asn
50 55 60
Glu Met Ile Val Thr Lys Asn Gly Arg Arg Met Phe Pro Val Leu Lys
65 70 75 80
Val Asn Val Ser Gly Leu Asp Pro Asn Ala Met Tyr Ser Phe Leu Leu
85 90 95
Asp Phe Val Ala Ala Asp Asn His Arg Trp Lys Tyr Val Asn Gly Glu
100 105 110
Trp Val Pro Gly Gly Lys Pro Glu Pro Gln Ala Pro Ser Cys Val Tyr
115 120 125
Ile His Pro Asp Ser Pro Asn Phe Gly Ala His Trp Met Lys Ala Pro
130 135 140
Val Ser Phe Ser Lys Val Lys Leu Thr Asn Lys Leu Asn Gly Gly Gly
145 150 155 160
Gln Ile Met Leu Asn Ser Leu His Lys Tyr Glu Pro Arg Ile His Ile
165 170 175
Val Arg Val Gly Gly Pro Gln Arg Met Ile Thr Ser His Cys Phe Pro
180 185 190
Glu Thr Gln Phe Ile Ala Val Thr Ala Tyr Gln Asn Glu Glu Ile Thr
195 200 205
Ala Leu Lys Ile Lys Tyr Asn Pro Phe Ala Lys Ala Phe Leu Asp Ala
210 215 220
Lys Glu Arg Ser Asp His Lys Glu Met Met Glu Glu Pro Gly Asp Ser
225 230 235 240
Gln Gln Pro Gly Tyr Ser Gln Trp Gly Trp Leu Leu Pro Gly Thr Ser
245 250 255
Thr Leu Cys Pro Pro Ala Asn Pro His Pro Gln Phe Gly Gly Ala Leu
260 265 270
Ser Leu Pro Ser Thr His Ser Cys Asp Arg Tyr Pro Thr Leu Arg Ser
275 280 285
His Arg Ser Ser Pro Tyr Pro Ser Pro Tyr Ala His Arg Asn Asn Ser
290 295 300
Pro Thr Tyr Ser Asp Asn Ser Pro Ala Cys Leu Ser Met Leu Gln Ser
305 310 315 320
His Asp Asn Trp Ser Ser Leu Gly Met Pro Ala His Pro Ser Met Leu
325 330 335
Pro Val Ser His Asn Ala Ser Pro Pro Thr Ser Ser Ser Gln Tyr Pro
340 345 350
Ser Leu Trp Ser Val Ser Asn Gly Ala Val Thr Pro Gly Ser Gln Ala
355 360 365
Ala Ala Val Ser Asn Gly Leu Gly Ala Gln Phe Phe Arg Gly Ser Pro
370 375 380
Ala His Tyr Thr Pro Leu Thr His Pro Val Ser Ala Pro Ser Ser Ser
385 390 395 400
Gly Ser Pro Leu Tyr Glu Gly Ala Ala Ala Ala Thr Asp Ile Val Asp
405 410 415
Ser Gln Tyr Asp Ala Ala Ala Gln Gly Arg Leu Ile Ala Ser Trp Thr
420 425 430
Pro Val Ser Pro Pro Ser Met
435
<210> 48
<211> 1353
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Кодирующая последовательность, кодирующая слитый белок, содержащий изоформу 1 белка Brachyury, плюс добавление 45 нуклеотидов из гена FPV   088
<400> 48
atgaaaaata acttgtatga agaaaaaatg aacatgagta agaaaatgag ctcccctggc 60
accgagagcg cgggaaagag cctgcagtac cgagtggacc acctgctgag cgccgtggag 120
aatgagctgc aggcgggcag cgagaagggc gaccccacag agcgcgaact gcgcgtgggc 180
ctggaggaga gcgagctgtg gctgcgcttc aaggagctca ccaatgagat gatcgtgacc 240
aagaacggca ggaggatgtt tccggtgctg aaggtgaacg tgtctggcct ggaccccaac 300
gccatgtact ccttcctgct ggacttcgtg gcggcggaca accaccgctg gaagtacgtg 360
aacggggaat gggtgccggg gggcaagccg gagccgcagg cgcccagctg cgtctacatc 420
caccccgact cgcccaactt cggggcccac tggatgaagg ctcccgtctc cttcagcaaa 480
gtcaagctca ccaacaagct caacggaggg ggccagatca tgctgaactc cttgcataag 540
tatgagcctc gaatccacat agtgagagtt gggggtccac agcgcatgat caccagccac 600
tgcttccctg agacccagtt catagcggtg actgcttatc agaacgagga gatcacagct 660
cttaaaatta agtacaatcc atttgcaaag gctttccttg atgcaaagga aagaagtgat 720
cacaaagaga tgatggagga acccggagac agccagcaac ctgggtactc ccaatggggg 780
tggcttcttc ctggaaccag caccgtttgt ccacctgcaa atcctcatcc tcagtttgga 840
ggtgccctct ccctcccctc cacgcacagc tgtgacaggt acccaaccct gaggagccac 900
cggtcctcac cctaccccag cccctatgct catcggaaca attctccaac ctattctgac 960
aactcacctg catgtttatc catgctgcaa tcccatgaca attggtccag ccttggaatg 1020
cctgcccatc ccagcatgct ccccgtgagc cacaatgcca gcccacctac cagctccagt 1080
cagtacccca gcctgtggtc tgtgagcaac ggcgccgtca ccccgggctc ccaggcagca 1140
gccgtgtcca acgggctggg ggcccagttc ttccggggct cccccgcgca ctacacaccc 1200
ctcacccatc cggtctcggc gccctcttcc tcgggatccc cactgtacga aggggcggcc 1260
gcggccacag acatcgtgga cagccagtac gacgccgcag cccaaggccg cctcatagcc 1320
tcatggacac ctgtgtcgcc accttccatg tga 1353
<210> 49
<211> 1350
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Кодирующая последовательность, кодирующая слитый белок, содержащий изоформу 1 белка Brachyury, плюс добавление 45 нуклеотидов из гена FPV 088 без atg Brachyury
<400> 49
atgaaaaata acttgtatga agaaaaaatg aacatgagta agaaaagctc ccctggcacc 60
gagagcgcgg gaaagagcct gcagtaccga gtggaccacc tgctgagcgc cgtggagaat 120
gagctgcagg cgggcagcga gaagggcgac cccacagagc gcgaactgcg cgtgggcctg 180
gaggagagcg agctgtggct gcgcttcaag gagctcacca atgagatgat cgtgaccaag 240
aacggcagga ggatgtttcc ggtgctgaag gtgaacgtgt ctggcctgga ccccaacgcc 300
atgtactcct tcctgctgga cttcgtggcg gcggacaacc accgctggaa gtacgtgaac 360
ggggaatggg tgccgggggg caagccggag ccgcaggcgc ccagctgcgt ctacatccac 420
cccgactcgc ccaacttcgg ggcccactgg atgaaggctc ccgtctcctt cagcaaagtc 480
aagctcacca acaagctcaa cggagggggc cagatcatgc tgaactcctt gcataagtat 540
gagcctcgaa tccacatagt gagagttggg ggtccacagc gcatgatcac cagccactgc 600
ttccctgaga cccagttcat agcggtgact gcttatcaga acgaggagat cacagctctt 660
aaaattaagt acaatccatt tgcaaaagct ttccttgatg caaaggaaag aagtgatcac 720
aaagagatga tggaggaacc cggagacagc cagcaacctg ggtactccca atgggggtgg 780
cttcttcctg gaaccagcac cgtttgtcca cctgcaaatc ctcatcctca gtttggaggt 840
gccctctccc tcccctccac gcacagctgt gacaggtacc caaccctgag gagccaccgg 900
tcctcaccct accccagccc ctatgctcat cggaacaatt ctccaaccta ttctgacaac 960
tcacctgcat gtttatccat gctgcaatcc catgacaatt ggtccagcct tggaatgcct 1020
gcccatccca gcatgctccc cgtgagccac aatgccagcc cacctaccag ctccagtcag 1080
taccccagcc tgtggtctgt gagcaacggc gccgtcaccc cgggctccca ggcagcagcc 1140
gtgtccaacg ggctgggggc ccagttcttc cggggctccc ccgcgcacta cacacccctc 1200
acccatccgg tctcggcgcc ctcttcctcg ggatccccac tgtacgaagg ggcggccgcg 1260
gccacagaca tcgtggacag ccagtacgac gccgcagccc aaggccgcct catagcctca 1320
tggacacctg tgtcgccacc ttccatgtga 1350
<210> 50
<211> 450
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Слитый белок, содержащий изоформу 1 белка Brachyury, кодируемый
SEQ ID NO:48
<400> 50
Met Lys Asn Asn Leu Tyr Glu Glu Lys Met Asn Met Ser Lys Lys Met
1 5 10 15
Ser Ser Pro Gly Thr Glu Ser Ala Gly Lys Ser Leu Gln Tyr Arg Val
20 25 30
Asp His Leu Leu Ser Ala Val Glu Asn Glu Leu Gln Ala Gly Ser Glu
35 40 45
Lys Gly Asp Pro Thr Glu Arg Glu Leu Arg Val Gly Leu Glu Glu Ser
50 55 60
Glu Leu Trp Leu Arg Phe Lys Glu Leu Thr Asn Glu Met Ile Val Thr
65 70 75 80
Lys Asn Gly Arg Arg Met Phe Pro Val Leu Lys Val Asn Val Ser Gly
85 90 95
Leu Asp Pro Asn Ala Met Tyr Ser Phe Leu Leu Asp Phe Val Ala Ala
100 105 110
Asp Asn His Arg Trp Lys Tyr Val Asn Gly Glu Trp Val Pro Gly Gly
115 120 125
Lys Pro Glu Pro Gln Ala Pro Ser Cys Val Tyr Ile His Pro Asp Ser
130 135 140
Pro Asn Phe Gly Ala His Trp Met Lys Ala Pro Val Ser Phe Ser Lys
145 150 155 160
Val Lys Leu Thr Asn Lys Leu Asn Gly Gly Gly Gln Ile Met Leu Asn
165 170 175
Ser Leu His Lys Tyr Glu Pro Arg Ile His Ile Val Arg Val Gly Gly
180 185 190
Pro Gln Arg Met Ile Thr Ser His Cys Phe Pro Glu Thr Gln Phe Ile
195 200 205
Ala Val Thr Ala Tyr Gln Asn Glu Glu Ile Thr Ala Leu Lys Ile Lys
210 215 220
Tyr Asn Pro Phe Ala Lys Ala Phe Leu Asp Ala Lys Glu Arg Ser Asp
225 230 235 240
His Lys Glu Met Met Glu Glu Pro Gly Asp Ser Gln Gln Pro Gly Tyr
245 250 255
Ser Gln Trp Gly Trp Leu Leu Pro Gly Thr Ser Thr Leu Cys Pro Pro
260 265 270
Ala Asn Pro His Pro Gln Phe Gly Gly Ala Leu Ser Leu Pro Ser Thr
275 280 285
His Ser Cys Asp Arg Tyr Pro Thr Leu Arg Ser His Arg Ser Ser Pro
290 295 300
Tyr Pro Ser Pro Tyr Ala His Arg Asn Asn Ser Pro Thr Tyr Ser Asp
305 310 315 320
Asn Ser Pro Ala Cys Leu Ser Met Leu Gln Ser His Asp Asn Trp Ser
325 330 335
Ser Leu Gly Met Pro Ala His Pro Ser Met Leu Pro Val Ser His Asn
340 345 350
Ala Ser Pro Pro Thr Ser Ser Ser Gln Tyr Pro Ser Leu Trp Ser Val
355 360 365
Ser Asn Gly Ala Val Thr Pro Gly Ser Gln Ala Ala Ala Val Ser Asn
370 375 380
Gly Leu Gly Ala Gln Phe Phe Arg Gly Ser Pro Ala His Tyr Thr Pro
385 390 395 400
Leu Thr His Pro Val Ser Ala Pro Ser Ser Ser Gly Ser Pro Leu Tyr
405 410 415
Glu Gly Ala Ala Ala Ala Thr Asp Ile Val Asp Ser Gln Tyr Asp Ala
420 425 430
Ala Ala Gln Gly Arg Leu Ile Ala Ser Trp Thr Pro Val Ser Pro Pro
435 440 445
Ser Met
450
<210> 51
<211> 449
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Слитый белок, содержащий изоформу 1 белка Brachyury, кодируемый
SEQ ID NO:49
<400> 51
Met Lys Asn Asn Leu Tyr Glu Glu Lys Met Asn Met Ser Lys Lys Ser
1 5 10 15
Ser Pro Gly Thr Glu Ser Ala Gly Lys Ser Leu Gln Tyr Arg Val Asp
20 25 30
His Leu Leu Ser Ala Val Glu Asn Glu Leu Gln Ala Gly Ser Glu Lys
35 40 45
Gly Asp Pro Thr Glu Arg Glu Leu Arg Val Gly Leu Glu Glu Ser Glu
50 55 60
Leu Trp Leu Arg Phe Lys Glu Leu Thr Asn Glu Met Ile Val Thr Lys
65 70 75 80
Asn Gly Arg Arg Met Phe Pro Val Leu Lys Val Asn Val Ser Gly Leu
85 90 95
Asp Pro Asn Ala Met Tyr Ser Phe Leu Leu Asp Phe Val Ala Ala Asp
100 105 110
Asn His Arg Trp Lys Tyr Val Asn Gly Glu Trp Val Pro Gly Gly Lys
115 120 125
Pro Glu Pro Gln Ala Pro Ser Cys Val Tyr Ile His Pro Asp Ser Pro
130 135 140
Asn Phe Gly Ala His Trp Met Lys Ala Pro Val Ser Phe Ser Lys Val
145 150 155 160
Lys Leu Thr Asn Lys Leu Asn Gly Gly Gly Gln Ile Met Leu Asn Ser
165 170 175
Leu His Lys Tyr Glu Pro Arg Ile His Ile Val Arg Val Gly Gly Pro
180 185 190
Gln Arg Met Ile Thr Ser His Cys Phe Pro Glu Thr Gln Phe Ile Ala
195 200 205
Val Thr Ala Tyr Gln Asn Glu Glu Ile Thr Ala Leu Lys Ile Lys Tyr
210 215 220
Asn Pro Phe Ala Lys Ala Phe Leu Asp Ala Lys Glu Arg Ser Asp His
225 230 235 240
Lys Glu Met Met Glu Glu Pro Gly Asp Ser Gln Gln Pro Gly Tyr Ser
245 250 255
Gln Trp Gly Trp Leu Leu Pro Gly Thr Ser Thr Leu Cys Pro Pro Ala
260 265 270
Asn Pro His Pro Gln Phe Gly Gly Ala Leu Ser Leu Pro Ser Thr His
275 280 285
Ser Cys Asp Arg Tyr Pro Thr Leu Arg Ser His Arg Ser Ser Pro Tyr
290 295 300
Pro Ser Pro Tyr Ala His Arg Asn Asn Ser Pro Thr Tyr Ser Asp Asn
305 310 315 320
Ser Pro Ala Cys Leu Ser Met Leu Gln Ser His Asp Asn Trp Ser Ser
325 330 335
Leu Gly Met Pro Ala His Pro Ser Met Leu Pro Val Ser His Asn Ala
340 345 350
Ser Pro Pro Thr Ser Ser Ser Gln Tyr Pro Ser Leu Trp Ser Val Ser
355 360 365
Asn Gly Ala Val Thr Pro Gly Ser Gln Ala Ala Ala Val Ser Asn Gly
370 375 380
Leu Gly Ala Gln Phe Phe Arg Gly Ser Pro Ala His Tyr Thr Pro Leu
385 390 395 400
Thr His Pro Val Ser Ala Pro Ser Ser Ser Gly Ser Pro Leu Tyr Glu
405 410 415
Gly Ala Ala Ala Ala Thr Asp Ile Val Asp Ser Gln Tyr Asp Ala Ala
420 425 430
Ala Gln Gly Arg Leu Ile Ala Ser Trp Thr Pro Val Ser Pro Pro Ser
435 440 445
Met
<210> 52
<211> 1326
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Кодирующая последовательность, кодирующая слитый белок, содержащий изоформу 1 белка Brachyury,плюс добавление 18 нуклеотидов из гена FPV  088
<400> 52
atgaacatga gtaagaaaat gagctcccct ggcaccgaga gcgcgggaaa gagcctgcag 60
taccgagtgg accacctgct gagcgccgtg gagaatgagc tgcaggcggg cagcgagaag 120
ggcgacccca cagagcgcga actgcgcgtg ggcctggagg agagcgagct gtggctgcgc 180
ttcaaggagc tcaccaatga gatgatcgtg accaagaacg gcaggaggat gtttccggtg 240
ctgaaggtga acgtgtctgg cctggacccc aacgccatgt actccttcct gctggacttc 300
gtggcggcgg acaaccaccg ctggaagtac gtgaacgggg aatgggtgcc ggggggcaag 360
ccggagccgc aggcgcccag ctgcgtctac atccaccccg actcgcccaa cttcggggcc 420
cactggatga aggctcccgt ctccttcagc aaagtcaagc tcaccaacaa gctcaacgga 480
gggggccaga tcatgctgaa ctccttgcat aagtatgagc ctcgaatcca catagtgaga 540
gttgggggtc cacagcgcat gatcaccagc cactgcttcc ctgagaccca gttcatagcg 600
gtgactgctt atcagaacga ggagatcaca gctcttaaaa ttaagtacaa tccatttgca 660
aaggctttcc ttgatgcaaa ggaaagaagt gatcacaaag agatgatgga ggaacccgga 720
gacagccagc aacctgggta ctcccaatgg gggtggcttc ttcctggaac cagcaccgtt 780
tgtccacctg caaatcctca tcctcagttt ggaggtgccc tctccctccc ctccacgcac 840
agctgtgaca ggtacccaac cctgaggagc caccggtcct caccctaccc cagcccctat 900
gctcatcgga acaattctcc aacctattct gacaactcac ctgcatgttt atccatgctg 960
caatcccatg acaattggtc cagccttgga atgcctgccc atcccagcat gctccccgtg 1020
agccacaatg ccagcccacc taccagctcc agtcagtacc ccagcctgtg gtctgtgagc 1080
aacggcgccg tcaccccggg ctcccaggca gcagccgtgt ccaacgggct gggggcccag 1140
ttcttccggg gctcccccgc gcactacaca cccctcaccc atccggtctc ggcgccctct 1200
tcctcgggat ccccactgta cgaaggggcg gccgcggcca cagacatcgt ggacagccag 1260
tacgacgccg cagcccaagg ccgcctcata gcctcatgga cacctgtgtc gccaccttcc 1320
atgtga 1326
<210> 53
<211> 1323
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Кодирующая последовательность, кодирующая слитый белок, содержащий изоформу 1 белка Brachyury, плюс добавление 18 нуклеотидов из гена FPV 088 без atg Brachyury
<400> 53
atgaacatga gtaagaaaag ctcccctggc accgagagcg cgggaaagag cctgcagtac 60
cgagtggacc acctgctgag cgccgtggag aatgagctgc aggcgggcag cgagaagggc 120
gaccccacag agcgcgaact gcgcgtgggc ctggaggaga gcgagctgtg gctgcgcttc 180
aaggagctca ccaatgagat gatcgtgacc aagaacggca ggaggatgtt tccggtgctg 240
aaggtgaacg tgtctggcct ggaccccaac gccatgtact ccttcctgct ggacttcgtg 300
gcggcggaca accaccgctg gaagtacgtg aacggggaat gggtgccggg gggcaagccg 360
gagccgcagg cgcccagctg cgtctacatc caccccgact cgcccaactt cggggcccac 420
tggatgaagg ctcccgtctc cttcagcaaa gtcaagctca ccaacaagct caacggaggg 480
ggccagatca tgctgaactc cttgcataag tatgagcctc gaatccacat agtgagagtt 540
gggggtccac agcgcatgat caccagccac tgcttccctg agacccagtt catagcggtg 600
actgcttatc agaacgagga gatcacagct cttaaaatta agtacaatcc atttgcaaaa 660
gctttccttg atgcaaagga aagaagtgat cacaaagaga tgatggagga acccggagac 720
agccagcaac ctgggtactc ccaatggggg tggcttcttc ctggaaccag caccgtttgt 780
ccacctgcaa atcctcatcc tcagtttgga ggtgccctct ccctcccctc cacgcacagc 840
tgtgacaggt acccaaccct gaggagccac cggtcctcac cctaccccag cccctatgct 900
catcggaaca attctccaac ctattctgac aactcacctg catgtttatc catgctgcaa 960
tcccatgaca attggtccag ccttggaatg cctgcccatc ccagcatgct ccccgtgagc 1020
cacaatgcca gcccacctac cagctccagt cagtacccca gcctgtggtc tgtgagcaac 1080
ggcgccgtca ccccgggctc ccaggcagca gccgtgtcca acgggctggg ggcccagttc 1140
ttccggggct cccccgcgca ctacacaccc ctcacccatc cggtctcggc gccctcttcc 1200
tcgggatccc cactgtacga aggggcggcc gcggccacag acatcgtgga cagccagtac 1260
gacgccgcag cccaaggccg cctcatagcc tcatggacac ctgtgtcgcc accttccatg 1320
tga 1323
<210> 54
<211> 441
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Слитый белок, содержащий изоформу 1 белка Brachyury, кодируемый
SEQ ID NO:52
<400> 54
Met Asn Met Ser Lys Lys Met Ser Ser Pro Gly Thr Glu Ser Ala Gly
1 5 10 15
Lys Ser Leu Gln Tyr Arg Val Asp His Leu Leu Ser Ala Val Glu Asn
20 25 30
Glu Leu Gln Ala Gly Ser Glu Lys Gly Asp Pro Thr Glu Arg Glu Leu
35 40 45
Arg Val Gly Leu Glu Glu Ser Glu Leu Trp Leu Arg Phe Lys Glu Leu
50 55 60
Thr Asn Glu Met Ile Val Thr Lys Asn Gly Arg Arg Met Phe Pro Val
65 70 75 80
Leu Lys Val Asn Val Ser Gly Leu Asp Pro Asn Ala Met Tyr Ser Phe
85 90 95
Leu Leu Asp Phe Val Ala Ala Asp Asn His Arg Trp Lys Tyr Val Asn
100 105 110
Gly Glu Trp Val Pro Gly Gly Lys Pro Glu Pro Gln Ala Pro Ser Cys
115 120 125
Val Tyr Ile His Pro Asp Ser Pro Asn Phe Gly Ala His Trp Met Lys
130 135 140
Ala Pro Val Ser Phe Ser Lys Val Lys Leu Thr Asn Lys Leu Asn Gly
145 150 155 160
Gly Gly Gln Ile Met Leu Asn Ser Leu His Lys Tyr Glu Pro Arg Ile
165 170 175
His Ile Val Arg Val Gly Gly Pro Gln Arg Met Ile Thr Ser His Cys
180 185 190
Phe Pro Glu Thr Gln Phe Ile Ala Val Thr Ala Tyr Gln Asn Glu Glu
195 200 205
Ile Thr Ala Leu Lys Ile Lys Tyr Asn Pro Phe Ala Lys Ala Phe Leu
210 215 220
Asp Ala Lys Glu Arg Ser Asp His Lys Glu Met Met Glu Glu Pro Gly
225 230 235 240
Asp Ser Gln Gln Pro Gly Tyr Ser Gln Trp Gly Trp Leu Leu Pro Gly
245 250 255
Thr Ser Thr Leu Cys Pro Pro Ala Asn Pro His Pro Gln Phe Gly Gly
260 265 270
Ala Leu Ser Leu Pro Ser Thr His Ser Cys Asp Arg Tyr Pro Thr Leu
275 280 285
Arg Ser His Arg Ser Ser Pro Tyr Pro Ser Pro Tyr Ala His Arg Asn
290 295 300
Asn Ser Pro Thr Tyr Ser Asp Asn Ser Pro Ala Cys Leu Ser Met Leu
305 310 315 320
Gln Ser His Asp Asn Trp Ser Ser Leu Gly Met Pro Ala His Pro Ser
325 330 335
Met Leu Pro Val Ser His Asn Ala Ser Pro Pro Thr Ser Ser Ser Gln
340 345 350
Tyr Pro Ser Leu Trp Ser Val Ser Asn Gly Ala Val Thr Pro Gly Ser
355 360 365
Gln Ala Ala Ala Val Ser Asn Gly Leu Gly Ala Gln Phe Phe Arg Gly
370 375 380
Ser Pro Ala His Tyr Thr Pro Leu Thr His Pro Val Ser Ala Pro Ser
385 390 395 400
Ser Ser Gly Ser Pro Leu Tyr Glu Gly Ala Ala Ala Ala Thr Asp Ile
405 410 415
Val Asp Ser Gln Tyr Asp Ala Ala Ala Gln Gly Arg Leu Ile Ala Ser
420 425 430
Trp Thr Pro Val Ser Pro Pro Ser Met
435 440
<210> 55
<211> 440
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Слитый белок, содержащий изоформу 1 белка Brachyury, кодируемый
SEQ ID NO:53
<400> 55
Met Asn Met Ser Lys Lys Ser Ser Pro Gly Thr Glu Ser Ala Gly Lys
1 5 10 15
Ser Leu Gln Tyr Arg Val Asp His Leu Leu Ser Ala Val Glu Asn Glu
20 25 30
Leu Gln Ala Gly Ser Glu Lys Gly Asp Pro Thr Glu Arg Glu Leu Arg
35 40 45
Val Gly Leu Glu Glu Ser Glu Leu Trp Leu Arg Phe Lys Glu Leu Thr
50 55 60
Asn Glu Met Ile Val Thr Lys Asn Gly Arg Arg Met Phe Pro Val Leu
65 70 75 80
Lys Val Asn Val Ser Gly Leu Asp Pro Asn Ala Met Tyr Ser Phe Leu
85 90 95
Leu Asp Phe Val Ala Ala Asp Asn His Arg Trp Lys Tyr Val Asn Gly
100 105 110
Glu Trp Val Pro Gly Gly Lys Pro Glu Pro Gln Ala Pro Ser Cys Val
115 120 125
Tyr Ile His Pro Asp Ser Pro Asn Phe Gly Ala His Trp Met Lys Ala
130 135 140
Pro Val Ser Phe Ser Lys Val Lys Leu Thr Asn Lys Leu Asn Gly Gly
145 150 155 160
Gly Gln Ile Met Leu Asn Ser Leu His Lys Tyr Glu Pro Arg Ile His
165 170 175
Ile Val Arg Val Gly Gly Pro Gln Arg Met Ile Thr Ser His Cys Phe
180 185 190
Pro Glu Thr Gln Phe Ile Ala Val Thr Ala Tyr Gln Asn Glu Glu Ile
195 200 205
Thr Ala Leu Lys Ile Lys Tyr Asn Pro Phe Ala Lys Ala Phe Leu Asp
210 215 220
Ala Lys Glu Arg Ser Asp His Lys Glu Met Met Glu Glu Pro Gly Asp
225 230 235 240
Ser Gln Gln Pro Gly Tyr Ser Gln Trp Gly Trp Leu Leu Pro Gly Thr
245 250 255
Ser Thr Leu Cys Pro Pro Ala Asn Pro His Pro Gln Phe Gly Gly Ala
260 265 270
Leu Ser Leu Pro Ser Thr His Ser Cys Asp Arg Tyr Pro Thr Leu Arg
275 280 285
Ser His Arg Ser Ser Pro Tyr Pro Ser Pro Tyr Ala His Arg Asn Asn
290 295 300
Ser Pro Thr Tyr Ser Asp Asn Ser Pro Ala Cys Leu Ser Met Leu Gln
305 310 315 320
Ser His Asp Asn Trp Ser Ser Leu Gly Met Pro Ala His Pro Ser Met
325 330 335
Leu Pro Val Ser His Asn Ala Ser Pro Pro Thr Ser Ser Ser Gln Tyr
340 345 350
Pro Ser Leu Trp Ser Val Ser Asn Gly Ala Val Thr Pro Gly Ser Gln
355 360 365
Ala Ala Ala Val Ser Asn Gly Leu Gly Ala Gln Phe Phe Arg Gly Ser
370 375 380
Pro Ala His Tyr Thr Pro Leu Thr His Pro Val Ser Ala Pro Ser Ser
385 390 395 400
Ser Gly Ser Pro Leu Tyr Glu Gly Ala Ala Ala Ala Thr Asp Ile Val
405 410 415
Asp Ser Gln Tyr Asp Ala Ala Ala Gln Gly Arg Leu Ile Ala Ser Trp
420 425 430
Thr Pro Val Ser Pro Pro Ser Met
435 440
<210> 56
<211> 1320
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Кодирующая последовательность, кодирующая слитый белок, содержащий изоформу 1 белка Brachyury, плюс добавление 12 нуклеотидов из гена FPV 088
<400> 56
atgagtaaga aaatgagctc ccctggcacc gagagcgcgg gaaagagcct gcagtaccga 60
gtggaccacc tgctgagcgc cgtggagaat gagctgcagg cgggcagcga gaagggcgac 120
cccacagagc gcgaactgcg cgtgggcctg gaggagagcg agctgtggct gcgcttcaag 180
gagctcacca atgagatgat cgtgaccaag aacggcagga ggatgtttcc ggtgctgaag 240
gtgaacgtgt ctggcctgga ccccaacgcc atgtactcct tcctgctgga cttcgtggcg 300
gcggacaacc accgctggaa gtacgtgaac ggggaatggg tgccgggggg caagccggag 360
ccgcaggcgc ccagctgcgt ctacatccac cccgactcgc ccaacttcgg ggcccactgg 420
atgaaggctc ccgtctcctt cagcaaagtc aagctcacca acaagctcaa cggagggggc 480
cagatcatgc tgaactcctt gcataagtat gagcctcgaa tccacatagt gagagttggg 540
ggtccacagc gcatgatcac cagccactgc ttccctgaga cccagttcat agcggtgact 600
gcttatcaga acgaggagat cacagctctt aaaattaagt acaatccatt tgcaaaagct 660
ttccttgatg caaaggaaag aagtgatcac aaagagatga tggaggaacc cggagacagc 720
cagcaacctg ggtactccca atgggggtgg cttcttcctg gaaccagcac cgtttgtcca 780
cctgcaaatc ctcatcctca gtttggaggt gccctctccc tcccctccac gcacagctgt 840
gacaggtacc caaccctgag gagccaccgg tcctcaccct accccagccc ctatgctcat 900
cggaacaatt ctccaaccta ttctgacaac tcacctgcat gtttatccat gctgcaatcc 960
catgacaatt ggtccagcct tggaatgcct gcccatccca gcatgctccc cgtgagccac 1020
aatgccagcc cacctaccag ctccagtcag taccccagcc tgtggtctgt gagcaacggc 1080
gccgtcaccc cgggctccca ggcagcagcc gtgtccaacg ggctgggggc ccagttcttc 1140
cggggctccc ccgcgcacta cacacccctc acccatccgg tctcggcgcc ctcttcctcg 1200
ggatccccac tgtacgaagg ggcggccgcg gccacagaca tcgtggacag ccagtacgac 1260
gccgcagccc aaggccgcct catagcctca tggacacctg tgtcgccacc ttccatgtga 1320
<210> 57
<211> 1317
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Кодирующая последовательность, кодирующая слитый белок, содержащий изоформу 1 белка Brachyury, плюс добавление 12 нуклеотидов из гена FPV 088 без инициирующего кодона atg Brachyury
<400> 57
atgagtaaga aaagctcccc tggcaccgag agcgcgggaa agagcctgca gtaccgagtg 60
gaccacctgc tgagcgccgt ggagaatgag ctgcaggcgg gcagcgagaa gggcgacccc 120
acagagcgcg aactgcgcgt gggcctggag gagagcgagc tgtggctgcg cttcaaggag 180
ctcaccaatg agatgatcgt gaccaagaac ggcaggagga tgtttccggt gctgaaggtg 240
aacgtgtctg gcctggaccc caacgccatg tactccttcc tgctggactt cgtggcggcg 300
gacaaccacc gctggaagta cgtgaacggg gaatgggtgc cggggggcaa gccggagccg 360
caggcgccca gctgcgtcta catccacccc gactcgccca acttcggggc ccactggatg 420
aaggctcccg tctccttcag caaagtcaag ctcaccaaca agctcaacgg agggggccag 480
atcatgctga actccttgca taagtatgag cctcgaatcc acatagtgag agttgggggt 540
ccacagcgca tgatcaccag ccactgcttc cctgagaccc agttcatagc ggtgactgct 600
tatcagaacg aggagatcac agctcttaaa attaagtaca atccatttgc aaaagctttc 660
cttgatgcaa aggaaagaag tgatcacaaa gagatgatgg aggaacccgg agacagccag 720
caacctgggt actcccaatg ggggtggctt cttcctggaa ccagcaccgt ttgtccacct 780
gcaaatcctc atcctcagtt tggaggtgcc ctctccctcc cctccacgca cagctgtgac 840
aggtacccaa ccctgaggag ccaccggtcc tcaccctacc ccagccccta tgctcatcgg 900
aacaattctc caacctattc tgacaactca cctgcatgtt tatccatgct gcaatcccat 960
gacaattggt ccagccttgg aatgcctgcc catcccagca tgctccccgt gagccacaat 1020
gccagcccac ctaccagctc cagtcagtac cccagcctgt ggtctgtgag caacggcgcc 1080
gtcaccccgg gctcccaggc agcagccgtg tccaacgggc tgggggccca gttcttccgg 1140
ggctcccccg cgcactacac acccctcacc catccggtct cggcgccctc ttcctcggga 1200
tccccactgt acgaaggggc ggccgcggcc acagacatcg tggacagcca gtacgacgcc 1260
gcagcccaag gccgcctcat agcctcatgg acacctgtgt cgccaccttc catgtga 1317
<210> 58
<211> 439
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Слитый белок, содержащий изоформу 1 белка Brachyury, кодируемый
SEQ ID NO: 56
<400> 58
Met Ser Lys Lys Met Ser Ser Pro Gly Thr Glu Ser Ala Gly Lys Ser
1 5 10 15
Leu Gln Tyr Arg Val Asp His Leu Leu Ser Ala Val Glu Asn Glu Leu
20 25 30
Gln Ala Gly Ser Glu Lys Gly Asp Pro Thr Glu Arg Glu Leu Arg Val
35 40 45
Gly Leu Glu Glu Ser Glu Leu Trp Leu Arg Phe Lys Glu Leu Thr Asn
50 55 60
Glu Met Ile Val Thr Lys Asn Gly Arg Arg Met Phe Pro Val Leu Lys
65 70 75 80
Val Asn Val Ser Gly Leu Asp Pro Asn Ala Met Tyr Ser Phe Leu Leu
85 90 95
Asp Phe Val Ala Ala Asp Asn His Arg Trp Lys Tyr Val Asn Gly Glu
100 105 110
Trp Val Pro Gly Gly Lys Pro Glu Pro Gln Ala Pro Ser Cys Val Tyr
115 120 125
Ile His Pro Asp Ser Pro Asn Phe Gly Ala His Trp Met Lys Ala Pro
130 135 140
Val Ser Phe Ser Lys Val Lys Leu Thr Asn Lys Leu Asn Gly Gly Gly
145 150 155 160
Gln Ile Met Leu Asn Ser Leu His Lys Tyr Glu Pro Arg Ile His Ile
165 170 175
Val Arg Val Gly Gly Pro Gln Arg Met Ile Thr Ser His Cys Phe Pro
180 185 190
Glu Thr Gln Phe Ile Ala Val Thr Ala Tyr Gln Asn Glu Glu Ile Thr
195 200 205
Ala Leu Lys Ile Lys Tyr Asn Pro Phe Ala Lys Ala Phe Leu Asp Ala
210 215 220
Lys Glu Arg Ser Asp His Lys Glu Met Met Glu Glu Pro Gly Asp Ser
225 230 235 240
Gln Gln Pro Gly Tyr Ser Gln Trp Gly Trp Leu Leu Pro Gly Thr Ser
245 250 255
Thr Leu Cys Pro Pro Ala Asn Pro His Pro Gln Phe Gly Gly Ala Leu
260 265 270
Ser Leu Pro Ser Thr His Ser Cys Asp Arg Tyr Pro Thr Leu Arg Ser
275 280 285
His Arg Ser Ser Pro Tyr Pro Ser Pro Tyr Ala His Arg Asn Asn Ser
290 295 300
Pro Thr Tyr Ser Asp Asn Ser Pro Ala Cys Leu Ser Met Leu Gln Ser
305 310 315 320
His Asp Asn Trp Ser Ser Leu Gly Met Pro Ala His Pro Ser Met Leu
325 330 335
Pro Val Ser His Asn Ala Ser Pro Pro Thr Ser Ser Ser Gln Tyr Pro
340 345 350
Ser Leu Trp Ser Val Ser Asn Gly Ala Val Thr Pro Gly Ser Gln Ala
355 360 365
Ala Ala Val Ser Asn Gly Leu Gly Ala Gln Phe Phe Arg Gly Ser Pro
370 375 380
Ala His Tyr Thr Pro Leu Thr His Pro Val Ser Ala Pro Ser Ser Ser
385 390 395 400
Gly Ser Pro Leu Tyr Glu Gly Ala Ala Ala Ala Thr Asp Ile Val Asp
405 410 415
Ser Gln Tyr Asp Ala Ala Ala Gln Gly Arg Leu Ile Ala Ser Trp Thr
420 425 430
Pro Val Ser Pro Pro Ser Met
435
<210> 59
<211> 438
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Слитый белок, содержащий изоформу 1 белка Brachyury, кодируемый
SEQ ID NO:57
<400> 59
Met Ser Lys Lys Ser Ser Pro Gly Thr Glu Ser Ala Gly Lys Ser Leu
1 5 10 15
Gln Tyr Arg Val Asp His Leu Leu Ser Ala Val Glu Asn Glu Leu Gln
20 25 30
Ala Gly Ser Glu Lys Gly Asp Pro Thr Glu Arg Glu Leu Arg Val Gly
35 40 45
Leu Glu Glu Ser Glu Leu Trp Leu Arg Phe Lys Glu Leu Thr Asn Glu
50 55 60
Met Ile Val Thr Lys Asn Gly Arg Arg Met Phe Pro Val Leu Lys Val
65 70 75 80
Asn Val Ser Gly Leu Asp Pro Asn Ala Met Tyr Ser Phe Leu Leu Asp
85 90 95
Phe Val Ala Ala Asp Asn His Arg Trp Lys Tyr Val Asn Gly Glu Trp
100 105 110
Val Pro Gly Gly Lys Pro Glu Pro Gln Ala Pro Ser Cys Val Tyr Ile
115 120 125
His Pro Asp Ser Pro Asn Phe Gly Ala His Trp Met Lys Ala Pro Val
130 135 140
Ser Phe Ser Lys Val Lys Leu Thr Asn Lys Leu Asn Gly Gly Gly Gln
145 150 155 160
Ile Met Leu Asn Ser Leu His Lys Tyr Glu Pro Arg Ile His Ile Val
165 170 175
Arg Val Gly Gly Pro Gln Arg Met Ile Thr Ser His Cys Phe Pro Glu
180 185 190
Thr Gln Phe Ile Ala Val Thr Ala Tyr Gln Asn Glu Glu Ile Thr Ala
195 200 205
Leu Lys Ile Lys Tyr Asn Pro Phe Ala Lys Ala Phe Leu Asp Ala Lys
210 215 220
Glu Arg Ser Asp His Lys Glu Met Met Glu Glu Pro Gly Asp Ser Gln
225 230 235 240
Gln Pro Gly Tyr Ser Gln Trp Gly Trp Leu Leu Pro Gly Thr Ser Thr
245 250 255
Leu Cys Pro Pro Ala Asn Pro His Pro Gln Phe Gly Gly Ala Leu Ser
260 265 270
Leu Pro Ser Thr His Ser Cys Asp Arg Tyr Pro Thr Leu Arg Ser His
275 280 285
Arg Ser Ser Pro Tyr Pro Ser Pro Tyr Ala His Arg Asn Asn Ser Pro
290 295 300
Thr Tyr Ser Asp Asn Ser Pro Ala Cys Leu Ser Met Leu Gln Ser His
305 310 315 320
Asp Asn Trp Ser Ser Leu Gly Met Pro Ala His Pro Ser Met Leu Pro
325 330 335
Val Ser His Asn Ala Ser Pro Pro Thr Ser Ser Ser Gln Tyr Pro Ser
340 345 350
Leu Trp Ser Val Ser Asn Gly Ala Val Thr Pro Gly Ser Gln Ala Ala
355 360 365
Ala Val Ser Asn Gly Leu Gly Ala Gln Phe Phe Arg Gly Ser Pro Ala
370 375 380
His Tyr Thr Pro Leu Thr His Pro Val Ser Ala Pro Ser Ser Ser Gly
385 390 395 400
Ser Pro Leu Tyr Glu Gly Ala Ala Ala Ala Thr Asp Ile Val Asp Ser
405 410 415
Gln Tyr Asp Ala Ala Ala Gln Gly Arg Leu Ile Ala Ser Trp Thr Pro
420 425 430
Val Ser Pro Pro Ser Met
435
<210> 60
<211> 1386
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Кодирующая последовательность, кодирующая слитый белок, содержащий изоформу 1 белка Brachyury, плюс добавление 75 нуклеотидов из гена FPV 088 и atc
<400> 60
atgaaaaata acttgtatga agaaaaaatg aacatgagta agaaacaagt aaaaactcaa 60
agtaaatgta ataatatcat gagctcccct ggcaccgaga gcgcgggaaa gagcctgcag 120
taccgagtgg accacctgct gagcgccgtg gagaatgagc tgcaggcggg cagcgagaag 180
ggcgacccca cagagcgcga actgcgcgtg ggcctggagg agagcgagct gtggctgcgc 240
ttcaaggagc tcaccaatga gatgatcgtg accaagaacg gcaggaggat gtttccggtg 300
ctgaaggtga acgtgtctgg cctggacccc aacgccatgt actccttcct gctggacttc 360
gtggcggcgg acaaccaccg ctggaagtac gtgaacgggg aatgggtgcc ggggggcaag 420
ccggagccgc aggcgcccag ctgcgtctac atccaccccg actcgcccaa cttcggggcc 480
cactggatga aggctcccgt ctccttcagc aaagtcaagc tcaccaacaa gctcaacgga 540
gggggccaga tcatgctgaa ctccttgcat aagtatgagc ctcgaatcca catagtgaga 600
gttgggggtc cacagcgcat gatcaccagc cactgcttcc ctgagaccca gttcatagcg 660
gtgactgctt atcagaacga ggagatcaca gctcttaaaa ttaagtacaa tccatttgca 720
aaagctttcc ttgatgcaaa ggaaagaagt gatcacaaag agatgatgga ggaacccgga 780
gacagccagc aacctgggta ctcccaatgg gggtggcttc ttcctggaac cagcaccgtt 840
tgtccacctg caaatcctca tcctcagttt ggaggtgccc tctccctccc ctccacgcac 900
agctgtgaca ggtacccaac cctgaggagc caccggtcct caccctaccc cagcccctat 960
gctcatcgga acaattctcc aacctattct gacaactcac ctgcatgttt atccatgctg 1020
caatcccatg acaattggtc cagccttgga atgcctgccc atcccagcat gctccccgtg 1080
agccacaatg ccagcccacc taccagctcc agtcagtacc ccagcctgtg gtctgtgagc 1140
aacggcgccg tcaccccggg ctcccaggca gcagccgtgt ccaacgggct gggggcccag 1200
ttcttccggg gctcccccgc gcactacaca cccctcaccc atccggtctc ggcgccctct 1260
tcctcgggat ccccactgta cgaaggggcg gccgcggcca cagacatcgt ggacagccag 1320
tacgacgccg cagcccaagg ccgcctcata gcctcatgga cacctgtgtc gccaccttcc 1380
atgtga 1386
<210> 61
<211> 1383
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Кодирующая последовательность, кодирующая слитый белок, содержащий изоформу 1 белка Brachyury, плюс добавление 75 нуклеотидов из гена FPV 088 и atc, без инициирующего кодона atg Brachyury
<400> 61
atgaaaaata acttgtatga agaaaaaatg aacatgagta agaaacaagt aaaaactcaa 60
agtaaatgta ataatatcag ctcccctggc accgagagcg cgggaaagag cctgcagtac 120
cgagtggacc acctgctgag cgccgtggag aatgagctgc aggcgggcag cgagaagggc 180
gaccccacag agcgcgaact gcgcgtgggc ctggaggaga gcgagctgtg gctgcgcttc 240
aaggagctca ccaatgagat gatcgtgacc aagaacggca ggaggatgtt tccggtgctg 300
aaggtgaacg tgtctggcct ggaccccaac gccatgtact ccttcctgct ggacttcgtg 360
gcggcggaca accaccgctg gaagtacgtg aacggggaat gggtgccggg gggcaagccg 420
gagccgcagg cgcccagctg cgtctacatc caccccgact cgcccaactt cggggcccac 480
tggatgaagg ctcccgtctc cttcagcaaa gtcaagctca ccaacaagct caacggaggg 540
ggccagatca tgctgaactc cttgcataag tatgagcctc gaatccacat agtgagagtt 600
gggggtccac agcgcatgat caccagccac tgcttccctg agacccagtt catagcggtg 660
actgcttatc agaacgagga gatcacagct cttaaaatta agtacaatcc atttgcaaaa 720
gctttccttg atgcaaagga aagaagtgat cacaaagaga tgatggagga acccggagac 780
agccagcaac ctgggtactc ccaatggggg tggcttcttc ctggaaccag caccgtttgt 840
ccacctgcaa atcctcatcc tcagtttgga ggtgccctct ccctcccctc cacgcacagc 900
tgtgacaggt acccaaccct gaggagccac cggtcctcac cctaccccag cccctatgct 960
catcggaaca attctccaac ctattctgac aactcacctg catgtttatc catgctgcaa 1020
tcccatgaca attggtccag ccttggaatg cctgcccatc ccagcatgct ccccgtgagc 1080
cacaatgcca gcccacctac cagctccagt cagtacccca gcctgtggtc tgtgagcaac 1140
ggcgccgtca ccccgggctc ccaggcagca gccgtgtcca acgggctggg ggcccagttc 1200
ttccggggct cccccgcgca ctacacaccc ctcacccatc cggtctcggc gccctcttcc 1260
tcgggatccc cactgtacga aggggcggcc gcggccacag acatcgtgga cagccagtac 1320
gacgccgcag cccaaggccg cctcatagcc tcatggacac ctgtgtcgcc accttccatg 1380
tga 1383
<210> 62
<211> 461
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Слитый белок, содержащий изоформу 1 белка Brachyury, кодируемый
SEQ ID NO:60
<400> 62
Met Lys Asn Asn Leu Tyr Glu Glu Lys Met Asn Met Ser Lys Lys Gln
1 5 10 15
Val Lys Thr Gln Ser Lys Cys Asn Asn Ile Met Ser Ser Pro Gly Thr
20 25 30
Glu Ser Ala Gly Lys Ser Leu Gln Tyr Arg Val Asp His Leu Leu Ser
35 40 45
Ala Val Glu Asn Glu Leu Gln Ala Gly Ser Glu Lys Gly Asp Pro Thr
50 55 60
Glu Arg Glu Leu Arg Val Gly Leu Glu Glu Ser Glu Leu Trp Leu Arg
65 70 75 80
Phe Lys Glu Leu Thr Asn Glu Met Ile Val Thr Lys Asn Gly Arg Arg
85 90 95
Met Phe Pro Val Leu Lys Val Asn Val Ser Gly Leu Asp Pro Asn Ala
100 105 110
Met Tyr Ser Phe Leu Leu Asp Phe Val Ala Ala Asp Asn His Arg Trp
115 120 125
Lys Tyr Val Asn Gly Glu Trp Val Pro Gly Gly Lys Pro Glu Pro Gln
130 135 140
Ala Pro Ser Cys Val Tyr Ile His Pro Asp Ser Pro Asn Phe Gly Ala
145 150 155 160
His Trp Met Lys Ala Pro Val Ser Phe Ser Lys Val Lys Leu Thr Asn
165 170 175
Lys Leu Asn Gly Gly Gly Gln Ile Met Leu Asn Ser Leu His Lys Tyr
180 185 190
Glu Pro Arg Ile His Ile Val Arg Val Gly Gly Pro Gln Arg Met Ile
195 200 205
Thr Ser His Cys Phe Pro Glu Thr Gln Phe Ile Ala Val Thr Ala Tyr
210 215 220
Gln Asn Glu Glu Ile Thr Ala Leu Lys Ile Lys Tyr Asn Pro Phe Ala
225 230 235 240
Lys Ala Phe Leu Asp Ala Lys Glu Arg Ser Asp His Lys Glu Met Met
245 250 255
Glu Glu Pro Gly Asp Ser Gln Gln Pro Gly Tyr Ser Gln Trp Gly Trp
260 265 270
Leu Leu Pro Gly Thr Ser Thr Leu Cys Pro Pro Ala Asn Pro His Pro
275 280 285
Gln Phe Gly Gly Ala Leu Ser Leu Pro Ser Thr His Ser Cys Asp Arg
290 295 300
Tyr Pro Thr Leu Arg Ser His Arg Ser Ser Pro Tyr Pro Ser Pro Tyr
305 310 315 320
Ala His Arg Asn Asn Ser Pro Thr Tyr Ser Asp Asn Ser Pro Ala Cys
325 330 335
Leu Ser Met Leu Gln Ser His Asp Asn Trp Ser Ser Leu Gly Met Pro
340 345 350
Ala His Pro Ser Met Leu Pro Val Ser His Asn Ala Ser Pro Pro Thr
355 360 365
Ser Ser Ser Gln Tyr Pro Ser Leu Trp Ser Val Ser Asn Gly Ala Val
370 375 380
Thr Pro Gly Ser Gln Ala Ala Ala Val Ser Asn Gly Leu Gly Ala Gln
385 390 395 400
Phe Phe Arg Gly Ser Pro Ala His Tyr Thr Pro Leu Thr His Pro Val
405 410 415
Ser Ala Pro Ser Ser Ser Gly Ser Pro Leu Tyr Glu Gly Ala Ala Ala
420 425 430
Ala Thr Asp Ile Val Asp Ser Gln Tyr Asp Ala Ala Ala Gln Gly Arg
435 440 445
Leu Ile Ala Ser Trp Thr Pro Val Ser Pro Pro Ser Met
450 455 460
<210> 63
<211> 460
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Слитый белок, содержащий изоформу 1 белка Brachyury, кодируемый
       SEQ ID NO: 61
<400> 63
Met Lys Asn Asn Leu Tyr Glu Glu Lys Met Asn Met Ser Lys Lys Gln
1 5 10 15
Val Lys Thr Gln Ser Lys Cys Asn Asn Ile Ser Ser Pro Gly Thr Glu
20 25 30
Ser Ala Gly Lys Ser Leu Gln Tyr Arg Val Asp His Leu Leu Ser Ala
35 40 45
Val Glu Asn Glu Leu Gln Ala Gly Ser Glu Lys Gly Asp Pro Thr Glu
50 55 60
Arg Glu Leu Arg Val Gly Leu Glu Glu Ser Glu Leu Trp Leu Arg Phe
65 70 75 80
Lys Glu Leu Thr Asn Glu Met Ile Val Thr Lys Asn Gly Arg Arg Met
85 90 95
Phe Pro Val Leu Lys Val Asn Val Ser Gly Leu Asp Pro Asn Ala Met
100 105 110
Tyr Ser Phe Leu Leu Asp Phe Val Ala Ala Asp Asn His Arg Trp Lys
115 120 125
Tyr Val Asn Gly Glu Trp Val Pro Gly Gly Lys Pro Glu Pro Gln Ala
130 135 140
Pro Ser Cys Val Tyr Ile His Pro Asp Ser Pro Asn Phe Gly Ala His
145 150 155 160
Trp Met Lys Ala Pro Val Ser Phe Ser Lys Val Lys Leu Thr Asn Lys
165 170 175
Leu Asn Gly Gly Gly Gln Ile Met Leu Asn Ser Leu His Lys Tyr Glu
180 185 190
Pro Arg Ile His Ile Val Arg Val Gly Gly Pro Gln Arg Met Ile Thr
195 200 205
Ser His Cys Phe Pro Glu Thr Gln Phe Ile Ala Val Thr Ala Tyr Gln
210 215 220
Asn Glu Glu Ile Thr Ala Leu Lys Ile Lys Tyr Asn Pro Phe Ala Lys
225 230 235 240
Ala Phe Leu Asp Ala Lys Glu Arg Ser Asp His Lys Glu Met Met Glu
245 250 255
Glu Pro Gly Asp Ser Gln Gln Pro Gly Tyr Ser Gln Trp Gly Trp Leu
260 265 270
Leu Pro Gly Thr Ser Thr Leu Cys Pro Pro Ala Asn Pro His Pro Gln
275 280 285
Phe Gly Gly Ala Leu Ser Leu Pro Ser Thr His Ser Cys Asp Arg Tyr
290 295 300
Pro Thr Leu Arg Ser His Arg Ser Ser Pro Tyr Pro Ser Pro Tyr Ala
305 310 315 320
His Arg Asn Asn Ser Pro Thr Tyr Ser Asp Asn Ser Pro Ala Cys Leu
325 330 335
Ser Met Leu Gln Ser His Asp Asn Trp Ser Ser Leu Gly Met Pro Ala
340 345 350
His Pro Ser Met Leu Pro Val Ser His Asn Ala Ser Pro Pro Thr Ser
355 360 365
Ser Ser Gln Tyr Pro Ser Leu Trp Ser Val Ser Asn Gly Ala Val Thr
370 375 380
Pro Gly Ser Gln Ala Ala Ala Val Ser Asn Gly Leu Gly Ala Gln Phe
385 390 395 400
Phe Arg Gly Ser Pro Ala His Tyr Thr Pro Leu Thr His Pro Val Ser
405 410 415
Ala Pro Ser Ser Ser Gly Ser Pro Leu Tyr Glu Gly Ala Ala Ala Ala
420 425 430
Thr Asp Ile Val Asp Ser Gln Tyr Asp Ala Ala Ala Gln Gly Arg Leu
435 440 445
Ile Ala Ser Trp Thr Pro Val Ser Pro Pro Ser Met
450 455 460
<210> 64
<211> 1359
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Кодирующая последовательность, кодирующая слитый белок, содержащий изоформу 1 белка Brachyury, плюс добавление 48 нуклеотидов из гена FPV 088 и atc
<400> 64
atgaacatga gtaagaaaca agtaaaaact caaagtaaat gtaataatat catgagctcc 60
cctggcaccg agagcgcggg aaagagcctg cagtaccgag tggaccacct gctgagcgcc 120
gtggagaatg agctgcaggc gggcagcgag aagggcgacc ccacagagcg cgaactgcgc 180
gtgggcctgg aggagagcga gctgtggctg cgcttcaagg agctcaccaa tgagatgatc 240
gtgaccaaga acggcaggag gatgtttccg gtgctgaagg tgaacgtgtc tggcctggac 300
cccaacgcca tgtactcctt cctgctggac ttcgtggcgg cggacaacca ccgctggaag 360
tacgtgaacg gggaatgggt gccggggggc aagccggagc cgcaggcgcc cagctgcgtc 420
tacatccacc ccgactcgcc caacttcggg gcccactgga tgaaggctcc cgtctccttc 480
agcaaagtca agctcaccaa caagctcaac ggagggggcc agatcatgct gaactccttg 540
cataagtatg agcctcgaat ccacatagtg agagttgggg gtccacagcg catgatcacc 600
agccactgct tccctgagac ccagttcata gcggtgactg cttatcagaa cgaggagatc 660
acagctctta aaattaagta caatccattt gcaaaagctt tccttgatgc aaaggaaaga 720
agtgatcaca aagagatgat ggaggaaccc ggagacagcc agcaacctgg gtactcccaa 780
tgggggtggc ttcttcctgg aaccagcacc gtttgtccac ctgcaaatcc tcatcctcag 840
tttggaggtg ccctctccct cccctccacg cacagctgtg acaggtaccc aaccctgagg 900
agccaccggt cctcacccta ccccagcccc tatgctcatc ggaacaattc tccaacctat 960
tctgacaact cacctgcatg tttatccatg ctgcaatccc atgacaattg gtccagcctt 1020
ggaatgcctg cccatcccag catgctcccc gtgagccaca atgccagccc acctaccagc 1080
tccagtcagt accccagcct gtggtctgtg agcaacggcg ccgtcacccc gggctcccag 1140
gcagcagccg tgtccaacgg gctgggggcc cagttcttcc ggggctcccc cgcgcactac 1200
acacccctca cccatccggt ctcggcgccc tcttcctcgg gatccccact gtacgaaggg 1260
gcggccgcgg ccacagacat cgtggacagc cagtacgacg ccgcagccca aggccgcctc 1320
atagcctcat ggacacctgt gtcgccacct tccatgtga 1359
<210> 65
<211> 1356
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Кодирующая последовательность, кодирующая слитый белок, содержащий изоформу 1 белка Brachyury, плюс добавление 48 нуклеотидов из гена FPV 088 и atc, без инициирующего кодона atg
<400> 65
atgaacatga gtaagaaaca agtaaaaact caaagtaaat gtaataatat cagctcccct 60
ggcaccgaga gcgcgggaaa gagcctgcag taccgagtgg accacctgct gagcgccgtg 120
gagaatgagc tgcaggcggg cagcgagaag ggcgacccca cagagcgcga actgcgcgtg 180
ggcctggagg agagcgagct gtggctgcgc ttcaaggagc tcaccaatga gatgatcgtg 240
accaagaacg gcaggaggat gtttccggtg ctgaaggtga acgtgtctgg cctggacccc 300
aacgccatgt actccttcct gctggacttc gtggcggcgg acaaccaccg ctggaagtac 360
gtgaacgggg aatgggtgcc ggggggcaag ccggagccgc aggcgcccag ctgcgtctac 420
atccaccccg actcgcccaa cttcggggcc cactggatga aggctcccgt ctccttcagc 480
aaagtcaagc tcaccaacaa gctcaacgga gggggccaga tcatgctgaa ctccttgcat 540
aagtatgagc ctcgaatcca catagtgaga gttgggggtc cacagcgcat gatcaccagc 600
cactgcttcc ctgagaccca gttcatagcg gtgactgctt atcagaacga ggagatcaca 660
gctcttaaaa ttaagtacaa tccatttgca aaagctttcc ttgatgcaaa ggaaagaagt 720
gatcacaaag agatgatgga ggaacccgga gacagccagc aacctgggta ctcccaatgg 780
gggtggcttc ttcctggaac cagcaccgtt tgtccacctg caaatcctca tcctcagttt 840
ggaggtgccc tctccctccc ctccacgcac agctgtgaca ggtacccaac cctgaggagc 900
caccggtcct caccctaccc cagcccctat gctcatcgga acaattctcc aacctattct 960
gacaactcac ctgcatgttt atccatgctg caatcccatg acaattggtc cagccttgga 1020
atgcctgccc atcccagcat gctccccgtg agccacaatg ccagcccacc taccagctcc 1080
agtcagtacc ccagcctgtg gtctgtgagc aacggcgccg tcaccccggg ctcccaggca 1140
gcagccgtgt ccaacgggct gggggcccag ttcttccggg gctcccccgc gcactacaca 1200
cccctcaccc atccggtctc ggcgccctct tcctcgggat ccccactgta cgaaggggcg 1260
gccgcggcca cagacatcgt ggacagccag tacgacgccg cagcccaagg ccgcctcata 1320
gcctcatgga cacctgtgtc gccaccttcc atgtga 1356
<210> 66
<211> 452
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Слитый белок, содержащий изоформу 1 белка Brachyury, кодируемый
SEQ ID NO:64
<400> 66
Met Asn Met Ser Lys Lys Gln Val Lys Thr Gln Ser Lys Cys Asn Asn
1 5 10 15
Ile Met Ser Ser Pro Gly Thr Glu Ser Ala Gly Lys Ser Leu Gln Tyr
20 25 30
Arg Val Asp His Leu Leu Ser Ala Val Glu Asn Glu Leu Gln Ala Gly
35 40 45
Ser Glu Lys Gly Asp Pro Thr Glu Arg Glu Leu Arg Val Gly Leu Glu
50 55 60
Glu Ser Glu Leu Trp Leu Arg Phe Lys Glu Leu Thr Asn Glu Met Ile
65 70 75 80
Val Thr Lys Asn Gly Arg Arg Met Phe Pro Val Leu Lys Val Asn Val
85 90 95
Ser Gly Leu Asp Pro Asn Ala Met Tyr Ser Phe Leu Leu Asp Phe Val
100 105 110
Ala Ala Asp Asn His Arg Trp Lys Tyr Val Asn Gly Glu Trp Val Pro
115 120 125
Gly Gly Lys Pro Glu Pro Gln Ala Pro Ser Cys Val Tyr Ile His Pro
130 135 140
Asp Ser Pro Asn Phe Gly Ala His Trp Met Lys Ala Pro Val Ser Phe
145 150 155 160
Ser Lys Val Lys Leu Thr Asn Lys Leu Asn Gly Gly Gly Gln Ile Met
165 170 175
Leu Asn Ser Leu His Lys Tyr Glu Pro Arg Ile His Ile Val Arg Val
180 185 190
Gly Gly Pro Gln Arg Met Ile Thr Ser His Cys Phe Pro Glu Thr Gln
195 200 205
Phe Ile Ala Val Thr Ala Tyr Gln Asn Glu Glu Ile Thr Ala Leu Lys
210 215 220
Ile Lys Tyr Asn Pro Phe Ala Lys Ala Phe Leu Asp Ala Lys Glu Arg
225 230 235 240
Ser Asp His Lys Glu Met Met Glu Glu Pro Gly Asp Ser Gln Gln Pro
245 250 255
Gly Tyr Ser Gln Trp Gly Trp Leu Leu Pro Gly Thr Ser Thr Leu Cys
260 265 270
Pro Pro Ala Asn Pro His Pro Gln Phe Gly Gly Ala Leu Ser Leu Pro
275 280 285
Ser Thr His Ser Cys Asp Arg Tyr Pro Thr Leu Arg Ser His Arg Ser
290 295 300
Ser Pro Tyr Pro Ser Pro Tyr Ala His Arg Asn Asn Ser Pro Thr Tyr
305 310 315 320
Ser Asp Asn Ser Pro Ala Cys Leu Ser Met Leu Gln Ser His Asp Asn
325 330 335
Trp Ser Ser Leu Gly Met Pro Ala His Pro Ser Met Leu Pro Val Ser
340 345 350
His Asn Ala Ser Pro Pro Thr Ser Ser Ser Gln Tyr Pro Ser Leu Trp
355 360 365
Ser Val Ser Asn Gly Ala Val Thr Pro Gly Ser Gln Ala Ala Ala Val
370 375 380
Ser Asn Gly Leu Gly Ala Gln Phe Phe Arg Gly Ser Pro Ala His Tyr
385 390 395 400
Thr Pro Leu Thr His Pro Val Ser Ala Pro Ser Ser Ser Gly Ser Pro
405 410 415
Leu Tyr Glu Gly Ala Ala Ala Ala Thr Asp Ile Val Asp Ser Gln Tyr
420 425 430
Asp Ala Ala Ala Gln Gly Arg Leu Ile Ala Ser Trp Thr Pro Val Ser
435 440 445
Pro Pro Ser Met
450
<210> 67
<211> 451
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Слитый белок, содержащий изоформу 1 белка Brachyury, кодируемый
SEQ ID NO:65
<400> 67
Met Asn Met Ser Lys Lys Gln Val Lys Thr Gln Ser Lys Cys Asn Asn
1 5 10 15
Ile Ser Ser Pro Gly Thr Glu Ser Ala Gly Lys Ser Leu Gln Tyr Arg
20 25 30
Val Asp His Leu Leu Ser Ala Val Glu Asn Glu Leu Gln Ala Gly Ser
35 40 45
Glu Lys Gly Asp Pro Thr Glu Arg Glu Leu Arg Val Gly Leu Glu Glu
50 55 60
Ser Glu Leu Trp Leu Arg Phe Lys Glu Leu Thr Asn Glu Met Ile Val
65 70 75 80
Thr Lys Asn Gly Arg Arg Met Phe Pro Val Leu Lys Val Asn Val Ser
85 90 95
Gly Leu Asp Pro Asn Ala Met Tyr Ser Phe Leu Leu Asp Phe Val Ala
100 105 110
Ala Asp Asn His Arg Trp Lys Tyr Val Asn Gly Glu Trp Val Pro Gly
115 120 125
Gly Lys Pro Glu Pro Gln Ala Pro Ser Cys Val Tyr Ile His Pro Asp
130 135 140
Ser Pro Asn Phe Gly Ala His Trp Met Lys Ala Pro Val Ser Phe Ser
145 150 155 160
Lys Val Lys Leu Thr Asn Lys Leu Asn Gly Gly Gly Gln Ile Met Leu
165 170 175
Asn Ser Leu His Lys Tyr Glu Pro Arg Ile His Ile Val Arg Val Gly
180 185 190
Gly Pro Gln Arg Met Ile Thr Ser His Cys Phe Pro Glu Thr Gln Phe
195 200 205
Ile Ala Val Thr Ala Tyr Gln Asn Glu Glu Ile Thr Ala Leu Lys Ile
210 215 220
Lys Tyr Asn Pro Phe Ala Lys Ala Phe Leu Asp Ala Lys Glu Arg Ser
225 230 235 240
Asp His Lys Glu Met Met Glu Glu Pro Gly Asp Ser Gln Gln Pro Gly
245 250 255
Tyr Ser Gln Trp Gly Trp Leu Leu Pro Gly Thr Ser Thr Leu Cys Pro
260 265 270
Pro Ala Asn Pro His Pro Gln Phe Gly Gly Ala Leu Ser Leu Pro Ser
275 280 285
Thr His Ser Cys Asp Arg Tyr Pro Thr Leu Arg Ser His Arg Ser Ser
290 295 300
Pro Tyr Pro Ser Pro Tyr Ala His Arg Asn Asn Ser Pro Thr Tyr Ser
305 310 315 320
Asp Asn Ser Pro Ala Cys Leu Ser Met Leu Gln Ser His Asp Asn Trp
325 330 335
Ser Ser Leu Gly Met Pro Ala His Pro Ser Met Leu Pro Val Ser His
340 345 350
Asn Ala Ser Pro Pro Thr Ser Ser Ser Gln Tyr Pro Ser Leu Trp Ser
355 360 365
Val Ser Asn Gly Ala Val Thr Pro Gly Ser Gln Ala Ala Ala Val Ser
370 375 380
Asn Gly Leu Gly Ala Gln Phe Phe Arg Gly Ser Pro Ala His Tyr Thr
385 390 395 400
Pro Leu Thr His Pro Val Ser Ala Pro Ser Ser Ser Gly Ser Pro Leu
405 410 415
Tyr Glu Gly Ala Ala Ala Ala Thr Asp Ile Val Asp Ser Gln Tyr Asp
420 425 430
Ala Ala Ala Gln Gly Arg Leu Ile Ala Ser Trp Thr Pro Val Ser Pro
435 440 445
Pro Ser Met
450
<210> 68
<211> 1353
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Кодирующая последовательность, кодирующая слитый белок, содержащий изоформу 1 белка Brachyury, плюс добавление 42 нуклеотидов из гена FPV  088 и atc
<400> 68
atgagtaaga aacaagtaaa aactcaaagt aaatgtaata atatcatgag ctcccctggc 60
accgagagcg cgggaaagag cctgcagtac cgagtggacc acctgctgag cgccgtggag 120
aatgagctgc aggcgggcag cgagaagggc gaccccacag agcgcgaact gcgcgtgggc 180
ctggaggaga gcgagctgtg gctgcgcttc aaggagctca ccaatgagat gatcgtgacc 240
aagaacggca ggaggatgtt tccggtgctg aaggtgaacg tgtctggcct ggaccccaac 300
gccatgtact ccttcctgct ggacttcgtg gcggcggaca accaccgctg gaagtacgtg 360
aacggggaat gggtgccggg gggcaagccg gagccgcagg cgcccagctg cgtctacatc 420
caccccgact cgcccaactt cggggcccac tggatgaagg ctcccgtctc cttcagcaaa 480
gtcaagctca ccaacaagct caacggaggg ggccagatca tgctgaactc cttgcataag 540
tatgagcctc gaatccacat agtgagagtt gggggtccac agcgcatgat caccagccac 600
tgcttccctg agacccagtt catagcggtg actgcttatc agaacgagga gatcacagct 660
cttaaaatta agtacaatcc atttgcaaaa gctttccttg atgcaaagga aagaagtgat 720
cacaaagaga tgatggagga acccggagac agccagcaac ctgggtactc ccaatggggg 780
tggcttcttc ctggaaccag caccgtttgt ccacctgcaa atcctcatcc tcagtttgga 840
ggtgccctct ccctcccctc cacgcacagc tgtgacaggt acccaaccct gaggagccac 900
cggtcctcac cctaccccag cccctatgct catcggaaca attctccaac ctattctgac 960
aactcacctg catgtttatc catgctgcaa tcccatgaca attggtccag ccttggaatg 1020
cctgcccatc ccagcatgct ccccgtgagc cacaatgcca gcccacctac cagctccagt 1080
cagtacccca gcctgtggtc tgtgagcaac ggcgccgtca ccccgggctc ccaggcagca 1140
gccgtgtcca acgggctggg ggcccagttc ttccggggct cccccgcgca ctacacaccc 1200
ctcacccatc cggtctcggc gccctcttcc tcgggatccc cactgtacga aggggcggcc 1260
gcggccacag acatcgtgga cagccagtac gacgccgcag cccaaggccg cctcatagcc 1320
tcatggacac ctgtgtcgcc accttccatg tga 1353
<210> 69
<211> 1350
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Кодирующая последовательность, кодирующая слитый белок, содержащий изоформу 1 белка Brachyury, плюс добавление 42 нуклеотидов из гена FPV 088 и atc, без инициирующего кодона atg Brachyury
<400> 69
atgagtaaga aacaagtaaa aactcaaagt aaatgtaata atatcagctc ccctggcacc 60
gagagcgcgg gaaagagcct gcagtaccga gtggaccacc tgctgagcgc cgtggagaat 120
gagctgcagg cgggcagcga gaagggcgac cccacagagc gcgaactgcg cgtgggcctg 180
gaggagagcg agctgtggct gcgcttcaag gagctcacca atgagatgat cgtgaccaag 240
aacggcagga ggatgtttcc ggtgctgaag gtgaacgtgt ctggcctgga ccccaacgcc 300
atgtactcct tcctgctgga cttcgtggcg gcggacaacc accgctggaa gtacgtgaac 360
ggggaatggg tgccgggggg caagccggag ccgcaggcgc ccagctgcgt ctacatccac 420
cccgactcgc ccaacttcgg ggcccactgg atgaaggctc ccgtctcctt cagcaaagtc 480
aagctcacca acaagctcaa cggagggggc cagatcatgc tgaactcctt gcataagtat 540
gagcctcgaa tccacatagt gagagttggg ggtccacagc gcatgatcac cagccactgc 600
ttccctgaga cccagttcat agcggtgact gcttatcaga acgaggagat cacagctctt 660
aaaattaagt acaatccatt tgcaaaagct ttccttgatg caaaggaaag aagtgatcac 720
aaagagatga tggaggaacc cggagacagc cagcaacctg ggtactccca atgggggtgg 780
cttcttcctg gaaccagcac cgtttgtcca cctgcaaatc ctcatcctca gtttggaggt 840
gccctctccc tcccctccac gcacagctgt gacaggtacc caaccctgag gagccaccgg 900
tcctcaccct accccagccc ctatgctcat cggaacaatt ctccaaccta ttctgacaac 960
tcacctgcat gtttatccat gctgcaatcc catgacaatt ggtccagcct tggaatgcct 1020
gcccatccca gcatgctccc cgtgagccac aatgccagcc cacctaccag ctccagtcag 1080
taccccagcc tgtggtctgt gagcaacggc gccgtcaccc cgggctccca ggcagcagcc 1140
gtgtccaacg ggctgggggc ccagttcttc cggggctccc ccgcgcacta cacacccctc 1200
acccatccgg tctcggcgcc ctcttcctcg ggatccccac tgtacgaagg ggcggccgcg 1260
gccacagaca tcgtggacag ccagtacgac gccgcagccc aaggccgcct catagcctca 1320
tggacacctg tgtcgccacc ttccatgtga 1350
<210> 70
<211> 450
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Слитый белок, содержащий изоформу 1 белка Brachyury, кодируемый SEQ ID NO:68
<400> 70
Met Ser Lys Lys Gln Val Lys Thr Gln Ser Lys Cys Asn Asn Ile Met
1 5 10 15
Ser Ser Pro Gly Thr Glu Ser Ala Gly Lys Ser Leu Gln Tyr Arg Val
20 25 30
Asp His Leu Leu Ser Ala Val Glu Asn Glu Leu Gln Ala Gly Ser Glu
35 40 45
Lys Gly Asp Pro Thr Glu Arg Glu Leu Arg Val Gly Leu Glu Glu Ser
50 55 60
Glu Leu Trp Leu Arg Phe Lys Glu Leu Thr Asn Glu Met Ile Val Thr
65 70 75 80
Lys Asn Gly Arg Arg Met Phe Pro Val Leu Lys Val Asn Val Ser Gly
85 90 95
Leu Asp Pro Asn Ala Met Tyr Ser Phe Leu Leu Asp Phe Val Ala Ala
100 105 110
Asp Asn His Arg Trp Lys Tyr Val Asn Gly Glu Trp Val Pro Gly Gly
115 120 125
Lys Pro Glu Pro Gln Ala Pro Ser Cys Val Tyr Ile His Pro Asp Ser
130 135 140
Pro Asn Phe Gly Ala His Trp Met Lys Ala Pro Val Ser Phe Ser Lys
145 150 155 160
Val Lys Leu Thr Asn Lys Leu Asn Gly Gly Gly Gln Ile Met Leu Asn
165 170 175
Ser Leu His Lys Tyr Glu Pro Arg Ile His Ile Val Arg Val Gly Gly
180 185 190
Pro Gln Arg Met Ile Thr Ser His Cys Phe Pro Glu Thr Gln Phe Ile
195 200 205
Ala Val Thr Ala Tyr Gln Asn Glu Glu Ile Thr Ala Leu Lys Ile Lys
210 215 220
Tyr Asn Pro Phe Ala Lys Ala Phe Leu Asp Ala Lys Glu Arg Ser Asp
225 230 235 240
His Lys Glu Met Met Glu Glu Pro Gly Asp Ser Gln Gln Pro Gly Tyr
245 250 255
Ser Gln Trp Gly Trp Leu Leu Pro Gly Thr Ser Thr Leu Cys Pro Pro
260 265 270
Ala Asn Pro His Pro Gln Phe Gly Gly Ala Leu Ser Leu Pro Ser Thr
275 280 285
His Ser Cys Asp Arg Tyr Pro Thr Leu Arg Ser His Arg Ser Ser Pro
290 295 300
Tyr Pro Ser Pro Tyr Ala His Arg Asn Asn Ser Pro Thr Tyr Ser Asp
305 310 315 320
Asn Ser Pro Ala Cys Leu Ser Met Leu Gln Ser His Asp Asn Trp Ser
325 330 335
Ser Leu Gly Met Pro Ala His Pro Ser Met Leu Pro Val Ser His Asn
340 345 350
Ala Ser Pro Pro Thr Ser Ser Ser Gln Tyr Pro Ser Leu Trp Ser Val
355 360 365
Ser Asn Gly Ala Val Thr Pro Gly Ser Gln Ala Ala Ala Val Ser Asn
370 375 380
Gly Leu Gly Ala Gln Phe Phe Arg Gly Ser Pro Ala His Tyr Thr Pro
385 390 395 400
Leu Thr His Pro Val Ser Ala Pro Ser Ser Ser Gly Ser Pro Leu Tyr
405 410 415
Glu Gly Ala Ala Ala Ala Thr Asp Ile Val Asp Ser Gln Tyr Asp Ala
420 425 430
Ala Ala Gln Gly Arg Leu Ile Ala Ser Trp Thr Pro Val Ser Pro Pro
435 440 445
Ser Met
450
<210> 71
<211> 449
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Слитый белок, содержащий изоформу 1 белка Brachyury, кодируемый
SEQ ID NO:69
<400> 71
Met Ser Lys Lys Gln Val Lys Thr Gln Ser Lys Cys Asn Asn Ile Ser
1 5 10 15
Ser Pro Gly Thr Glu Ser Ala Gly Lys Ser Leu Gln Tyr Arg Val Asp
20 25 30
His Leu Leu Ser Ala Val Glu Asn Glu Leu Gln Ala Gly Ser Glu Lys
35 40 45
Gly Asp Pro Thr Glu Arg Glu Leu Arg Val Gly Leu Glu Glu Ser Glu
50 55 60
Leu Trp Leu Arg Phe Lys Glu Leu Thr Asn Glu Met Ile Val Thr Lys
65 70 75 80
Asn Gly Arg Arg Met Phe Pro Val Leu Lys Val Asn Val Ser Gly Leu
85 90 95
Asp Pro Asn Ala Met Tyr Ser Phe Leu Leu Asp Phe Val Ala Ala Asp
100 105 110
Asn His Arg Trp Lys Tyr Val Asn Gly Glu Trp Val Pro Gly Gly Lys
115 120 125
Pro Glu Pro Gln Ala Pro Ser Cys Val Tyr Ile His Pro Asp Ser Pro
130 135 140
Asn Phe Gly Ala His Trp Met Lys Ala Pro Val Ser Phe Ser Lys Val
145 150 155 160
Lys Leu Thr Asn Lys Leu Asn Gly Gly Gly Gln Ile Met Leu Asn Ser
165 170 175
Leu His Lys Tyr Glu Pro Arg Ile His Ile Val Arg Val Gly Gly Pro
180 185 190
Gln Arg Met Ile Thr Ser His Cys Phe Pro Glu Thr Gln Phe Ile Ala
195 200 205
Val Thr Ala Tyr Gln Asn Glu Glu Ile Thr Ala Leu Lys Ile Lys Tyr
210 215 220
Asn Pro Phe Ala Lys Ala Phe Leu Asp Ala Lys Glu Arg Ser Asp His
225 230 235 240
Lys Glu Met Met Glu Glu Pro Gly Asp Ser Gln Gln Pro Gly Tyr Ser
245 250 255
Gln Trp Gly Trp Leu Leu Pro Gly Thr Ser Thr Leu Cys Pro Pro Ala
260 265 270
Asn Pro His Pro Gln Phe Gly Gly Ala Leu Ser Leu Pro Ser Thr His
275 280 285
Ser Cys Asp Arg Tyr Pro Thr Leu Arg Ser His Arg Ser Ser Pro Tyr
290 295 300
Pro Ser Pro Tyr Ala His Arg Asn Asn Ser Pro Thr Tyr Ser Asp Asn
305 310 315 320
Ser Pro Ala Cys Leu Ser Met Leu Gln Ser His Asp Asn Trp Ser Ser
325 330 335
Leu Gly Met Pro Ala His Pro Ser Met Leu Pro Val Ser His Asn Ala
340 345 350
Ser Pro Pro Thr Ser Ser Ser Gln Tyr Pro Ser Leu Trp Ser Val Ser
355 360 365
Asn Gly Ala Val Thr Pro Gly Ser Gln Ala Ala Ala Val Ser Asn Gly
370 375 380
Leu Gly Ala Gln Phe Phe Arg Gly Ser Pro Ala His Tyr Thr Pro Leu
385 390 395 400
Thr His Pro Val Ser Ala Pro Ser Ser Ser Gly Ser Pro Leu Tyr Glu
405 410 415
Gly Ala Ala Ala Ala Thr Asp Ile Val Asp Ser Gln Tyr Asp Ala Ala
420 425 430
Ala Gln Gly Arg Leu Ile Ala Ser Trp Thr Pro Val Ser Pro Pro Ser
435 440 445
Met
<210> 72
<211> 1516
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Экспрессионная кассета, обнаруженная в mBN345 -промотор + кДНК, кодирующая
       слитый белок, содержащий белок Brachyury (L254V)
<400> 72
atccgtacag gtttgtttct gaaattcact ttgtaagata cataattaac aaattcaggg 60
ggaaaaatct ttacaaaatt agtatagaag ctatagatat atcaaaaggt agacaacaaa 120
taatcagaac ctaatttttt tatcaaaaaa ttaaaatata aataaaatga aaaataactt 180
gtatgaagaa aaaatgaaca tgagtaagaa aagctcccct ggcaccgaga gcgcgggaaa 240
gagcctgcag taccgagtgg accacctgct gagcgccgtg gagaatgagc tgcaggcggg 300
cagcgagaag ggcgacccca cagagcgcga actgcgcgtg ggcctggagg agagcgagct 360
gtggctgcgc ttcaaggagc tcaccaatga gatgatcgtg accaagaacg gcaggaggat 420
gtttccggtg ctgaaggtga acgtgtctgg cctggacccc aacgccatgt actccttcct 480
gctggacttc gtggcggcgg acaaccaccg ctggaagtac gtgaacgggg aatgggtgcc 540
ggggggcaag ccggagccgc aggcgcccag ctgcgtctac atccaccccg actcgcccaa 600
cttcggggcc cactggatga aggctcccgt ctccttcagc aaagtcaagc tcaccaacaa 660
gctcaacgga gggggccaga tcatgctgaa ctccttgcat aagtatgagc ctcgaatcca 720
catagtgaga gttgggggtc cacagcgcat gatcaccagc cactgcttcc ctgagaccca 780
gttcatagcg gtgactgctt atcagaacga ggagatcaca gctcttaaaa ttaagtacaa 840
tccatttgca aaggctttcc ttgatgcaaa ggaaagaagt gatcacaaag agatgatgga 900
ggaacccgga gacagccagc aacctgggta ctcccaatgg gggtggcttc ttcctggaac 960
cagcaccgtt tgtccacctg caaatcctca tcctcagttt ggaggtgccc tctccctccc 1020
ctccacgcac agctgtgaca ggtacccaac cctgaggagc caccggtcct caccctaccc 1080
cagcccctat gctcatcgga acaattctcc aacctattct gacaactcac ctgcatgttt 1140
atccatgctg caatcccatg acaattggtc cagccttgga atgcctgccc atcccagcat 1200
gctccccgtg agccacaatg ccagcccacc taccagctcc agtcagtacc ccagcctgtg 1260
gtctgtgagc aacggcgccg tcaccccggg ctcccaggca gcagccgtgt ccaacgggct 1320
gggggcccag ttcttccggg gctcccccgc gcactacaca cccctcaccc atccggtctc 1380
ggcgccctct tcctcgggat ccccactgta cgaaggggcg gccgcggcca cagacatcgt 1440
ggacagccag tacgacgccg cagcccaagg ccgcctcata gcctcatgga cacctgtgtc 1500
gccaccttcc atgtga 1516
<210> 73
<211> 1552
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Экспрессионная кассета, обнаруженная в mBN355 - промотор+ кДНК, кодирующая слитый белок, содержащий белок Brachyury (L254V)
<400> 73
atccgtacag gtttgtttct gaaattcact ttgtaagata cataattaac aaattcaggg 60
ggaaaaatct ttacaaaatt agtatagaag ctatagatat atcaaaaggt agacaacaaa 120
taatcagaac ctaatttttt tatcaaaaaa ttaaaatata aataaaatga aaaataactt 180
gtatgaagaa aaaatgaaca tgagtaagaa acaagtaaaa actcaaagta aatgtaataa 240
tatcatgagc tcccctggca ccgagagcgc gggaaagagc ctgcagtacc gagtggacca 300
cctgctgagc gccgtggaga atgagctgca ggcgggcagc gagaagggcg accccacaga 360
gcgcgaactg cgcgtgggcc tggaggagag cgagctgtgg ctgcgcttca aggagctcac 420
caatgagatg atcgtgacca agaacggcag gaggatgttt ccggtgctga aggtgaacgt 480
gtctggcctg gaccccaacg ccatgtactc cttcctgctg gacttcgtgg cggcggacaa 540
ccaccgctgg aagtacgtga acggggaatg ggtgccgggg ggcaagccgg agccgcaggc 600
gcccagctgc gtctacatcc accccgactc gcccaacttc ggggcccact ggatgaaggc 660
tcccgtctcc ttcagcaaag tcaagctcac caacaagctc aacggagggg gccagatcat 720
gctgaactcc ttgcataagt atgagcctcg aatccacata gtgagagttg ggggtccaca 780
gcgcatgatc accagccact gcttccctga gacccagttc atagcggtga ctgcttatca 840
gaacgaggag atcacagctc ttaaaattaa gtacaatcca tttgcaaagg ctttccttga 900
tgcaaaggaa agaagtgatc acaaagagat gatggaggaa cccggagaca gccagcaacc 960
tgggtactcc caatgggggt ggcttcttcc tggaaccagc accgtttgtc cacctgcaaa 1020
tcctcatcct cagtttggag gtgccctctc cctcccctcc acgcacagct gtgacaggta 1080
cccaaccctg aggagccacc ggtcctcacc ctaccccagc ccctatgctc atcggaacaa 1140
ttctccaacc tattctgaca actcacctgc atgtttatcc atgctgcaat cccatgacaa 1200
ttggtccagc cttggaatgc ctgcccatcc cagcatgctc cccgtgagcc acaatgccag 1260
cccacctacc agctccagtc agtaccccag cctgtggtct gtgagcaacg gcgccgtcac 1320
cccgggctcc caggcagcag ccgtgtccaa cgggctgggg gcccagttct tccggggctc 1380
ccccgcgcac tacacacccc tcacccatcc ggtctcggcg ccctcttcct cgggatcccc 1440
actgtacgaa ggggcggccg cggccacaga catcgtggac agccagtacg acgccgcagc 1500
ccaaggccgc ctcatagcct catggacacc tgtgtcgcca ccttccatgt ga 1552
<210> 74
<211> 1464
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Экспрессионная кассета, обнаруженная в mBN343 - промотор + кДНК, кодирующая слитый белок, содержащий белок Brachyury (L254V)
<400> 74
taatgtatag aactaattta taataaacat agtaaatatg ggtaacttct taatagccat 60
aattaaaatt gaaaaaaaaa tatcattata aaacgtaaac gaacaaaaaa cattaattga 120
tcccccccct gtctcccccc tccagattga gcaatcatga gctcccctgg caccgagagc 180
gcgggaaaga gcctgcagta ccgagtggac cacctgctga gcgccgtgga gaatgagctg 240
caggcgggca gcgagaaggg cgaccccaca gagcgcgaac tgcgcgtggg cctggaggag 300
agcgagctgt ggctgcgctt caaggagctc accaatgaga tgatcgtgac caagaacggc 360
aggaggatgt ttccggtgct gaaggtgaac gtgtctggcc tggaccccaa cgccatgtac 420
tccttcctgc tggacttcgt ggcggcggac aaccaccgct ggaagtacgt gaacggggaa 480
tgggtgccgg ggggcaagcc ggagccgcag gcgcccagct gcgtctacat ccaccccgac 540
tcgcccaact tcggggccca ctggatgaag gctcccgtct ccttcagcaa agtcaagctc 600
accaacaagc tcaacggagg gggccagatc atgctgaact ccttgcataa gtatgagcct 660
cgaatccaca tagtgagagt tgggggtcca cagcgcatga tcaccagcca ctgcttccct 720
gagacccagt tcatagcggt gactgcttat cagaacgagg agatcacagc tcttaaaatt 780
aagtacaatc catttgcaaa ggctttcctt gatgcaaagg aaagaagtga tcacaaagag 840
atgatggagg aacccggaga cagccagcaa cctgggtact cccaatgggg gtggcttctt 900
cctggaacca gcaccgtttg tccacctgca aatcctcatc ctcagtttgg aggtgccctc 960
tccctcccct ccacgcacag ctgtgacagg tacccaaccc tgaggagcca ccggtcctca 1020
ccctacccca gcccctatgc tcatcggaac aattctccaa cctattctga caactcacct 1080
gcatgtttat ccatgctgca atcccatgac aattggtcca gccttggaat gcctgcccat 1140
cccagcatgc tccccgtgag ccacaatgcc agcccaccta ccagctccag tcagtacccc 1200
agcctgtggt ctgtgagcaa cggcgccgtc accccgggct cccaggcagc agccgtgtcc 1260
aacgggctgg gggcccagtt cttccggggc tcccccgcgc actacacacc cctcacccat 1320
ccggtctcgg cgccctcttc ctcgggatcc ccactgtacg aaggggcggc cgcggccaca 1380
gacatcgtgg acagccagta cgacgccgca gcccaaggcc gcctcatagc ctcatggaca 1440
cctgtgtcgc caccttccat gtga 1464
<210> 75
<211> 1478
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Экспрессионная кассета, обнаруженная в mBN343 - промотор + кДНК,
кодирующая слитый белок, содержащий белок Brachyury (L254V)
<400> 75
tatccgtaca ggtttgtttc tgaaattcac tttgtaagat acataattaa caaattcagg 60
gggaaaaatc tttacaaaat tagtatagaa gctatagata tatcaaaagg tagacaacaa 120
ataatcagaa cctaattttt ttatcaaaaa attaaaatat aaataaaatc atgagctccc 180
ctggcaccga gagcgcggga aagagcctgc agtaccgagt ggaccacctg ctgagcgccg 240
tggagaatga gctgcaggcg ggcagcgaga agggcgaccc cacagagcgc gaactgcgcg 300
tgggcctgga ggagagcgag ctgtggctgc gcttcaagga gctcaccaat gagatgatcg 360
tgaccaagaa cggcaggagg atgtttccgg tgctgaaggt gaacgtgtct ggcctggacc 420
ccaacgccat gtactccttc ctgctggact tcgtggcggc ggacaaccac cgctggaagt 480
acgtgaacgg ggaatgggtg ccggggggca agccggagcc gcaggcgccc agctgcgtct 540
acatccaccc cgactcgccc aacttcgggg cccactggat gaaggctccc gtctccttca 600
gcaaagtcaa gctcaccaac aagctcaacg gagggggcca gatcatgctg aactccttgc 660
ataagtatga gcctcgaatc cacatagtga gagttggggg tccacagcgc atgatcacca 720
gccactgctt ccctgagacc cagttcatag cggtgactgc ttatcagaac gaggagatca 780
cagctcttaa aattaagtac aatccatttg caaaggcttt ccttgatgca aaggaaagaa 840
gtgatcacaa agagatgatg gaggaacccg gagacagcca gcaacctggg tactcccaat 900
gggggtggct tcttcctgga accagcaccg tttgtccacc tgcaaatcct catcctcagt 960
ttggaggtgc cctctccctc ccctccacgc acagctgtga caggtaccca accctgagga 1020
gccaccggtc ctcaccctac cccagcccct atgctcatcg gaacaattct ccaacctatt 1080
ctgacaactc acctgcatgt ttatccatgc tgcaatccca tgacaattgg tccagccttg 1140
gaatgcctgc ccatcccagc atgctccccg tgagccacaa tgccagccca cctaccagct 1200
ccagtcagta ccccagcctg tggtctgtga gcaacggcgc cgtcaccccg ggctcccagg 1260
cagcagccgt gtccaacggg ctgggggccc agttcttccg gggctccccc gcgcactaca 1320
cacccctcac ccatccggtc tcggcgccct cttcctcggg atccccactg tacgaagggg 1380
cggccgcggc cacagacatc gtggacagcc agtacgacgc cgcagcccaa ggccgcctca 1440
tagcctcatg gacacctgtg tcgccacctt ccatgtga 1478
<210> 76
<211> 1486
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Экспрессионная кассета, обнаруженная в mBN343 - промотор + кДНК,
кодирующая слитый белок, содержащий белок Brachyury (L254V)
<400> 76
atccgtacag gtttgtttct gaaattcact ttgtaagata cataattaac aaattcaggg 60
ggaaaaatct ttacaaaatt agtatagaag ctatagatat atcaaaaggt agacaacaaa 120
taatcagaac ctaatttttt tatcaaaaaa ttaaaatata aataaaatga aaaataactt 180
gagctcccct ggcaccgaga gcgcgggaaa gagcctgcag taccgagtgg accacctgct 240
gagcgccgtg gagaatgagc tgcaggcggg cagcgagaag ggcgacccca cagagcgcga 300
actgcgcgtg ggcctggagg agagcgagct gtggctgcgc ttcaaggagc tcaccaatga 360
gatgatcgtg accaagaacg gcaggaggat gtttccggtg ctgaaggtga acgtgtctgg 420
cctggacccc aacgccatgt actccttcct gctggacttc gtggcggcgg acaaccaccg 480
ctggaagtac gtgaacgggg aatgggtgcc ggggggcaag ccggagccgc aggcgcccag 540
ctgcgtctac atccaccccg actcgcccaa cttcggggcc cactggatga aggctcccgt 600
ctccttcagc aaagtcaagc tcaccaacaa gctcaacgga gggggccaga tcatgctgaa 660
ctccttgcat aagtatgagc ctcgaatcca catagtgaga gttgggggtc cacagcgcat 720
gatcaccagc cactgcttcc ctgagaccca gttcatagcg gtgactgctt atcagaacga 780
ggagatcaca gctcttaaaa ttaagtacaa tccatttgca aaggctttcc ttgatgcaaa 840
ggaaagaagt gatcacaaag agatgatgga ggaacccgga gacagccagc aacctgggta 900
ctcccaatgg gggtggcttc ttcctggaac cagcaccgtt tgtccacctg caaatcctca 960
tcctcagttt ggaggtgccc tctccctccc ctccacgcac agctgtgaca ggtacccaac 1020
cctgaggagc caccggtcct caccctaccc cagcccctat gctcatcgga acaattctcc 1080
aacctattct gacaactcac ctgcatgttt atccatgctg caatcccatg acaattggtc 1140
cagccttgga atgcctgccc atcccagcat gctccccgtg agccacaatg ccagcccacc 1200
taccagctcc agtcagtacc ccagcctgtg gtctgtgagc aacggcgccg tcaccccggg 1260
ctcccaggca gcagccgtgt ccaacgggct gggggcccag ttcttccggg gctcccccgc 1320
gcactacaca cccctcaccc atccggtctc ggcgccctct tcctcgggat ccccactgta 1380
cgaaggggcg gccgcggcca cagacatcgt ggacagccag tacgacgccg cagcccaagg 1440
ccgcctcata gcctcatgga cacctgtgtc gccaccttcc atgtga 1486
<210> 77
<211> 182
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Промоторная последовательность с нуклеотидами 5' гена FPV 088 + 15
нуклеотидов
<400> 77
tatccgtaca ggtttgtttc tgaaattcac tttgtaagat acataattaa caaattcagg 60
gggaaaaatc tttacaaaat tagtatagaa gctatagata tatcaaaagg tagacaacaa 120
ataatcagaa cctaattttt ttatcaaaaa attaaaatat aaataaaatg aaaaataact 180
tg 182
<---

Claims (23)

1. Экспрессионная кассета для экспрессии кодирующей последовательности Brachyury в векторе, где экспрессионная кассета содержит:
(а) последовательность нуклеиновой кислоты, содержащую промотор, активный в качестве промотора поксвируса и содержащий последовательность, представленную в SEQ ID NO: 9, или содержащий подпоследовательность SEQ ID NO: 9, которая содержит любую из SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 8, и
(b) гетерологичную кодирующую последовательность, которая кодирует антиген Brachyury, функционально связанную с промотором для кодирования слитого белка, содержащего антиген Brachyury, причем экспрессия кодирующей последовательности контролируется промотором.
2. Экспрессионная кассета по п.1, в которой подпоследовательность SEQ ID NO: 9 содержит SEQ ID NO: 4.
3. Экспрессионная кассета по п.1, в которой подпоследовательность SEQ ID NO: 9 содержит SEQ ID NO: 5.
4. Экспрессионная кассета по п.1, в которой подпоследовательность SEQ ID NO: 9 содержит SEQ ID NO: 6.
5. Экспрессионная кассета по п.1, в которой антиген Brachyury содержит мутацию L254V.
6. Экспрессионная кассета по п.1, в которой кодирующая последовательность кодирует антиген Brachyury, имеющий последовательность, представленную в SEQ ID NO: 11 или SEQ ID NO:13.
7. Экспрессионная кассета по п.1, в которой кодирующая последовательность кодирует антиген Brachyury, содержащий последовательность, представленную в SEQ ID NO: 18.
8. Экспрессионная кассета по п.1, в которой кодирующая последовательность кодирует антиген Brachyury, содержащий последовательность, представленную в SEQ ID NO: 19.
9. Экспрессионная кассета по п.1, в которой кодирующая последовательность кодирует антиген Brachyury, содержащий последовательность, представленную в любой из: SEQ ID NO: 11, 13, 18-19, 22-23, 26-27, 30-31, 34-35, 38-39, 42-43, 46-47, 50-51, 54-55, 58-59, 62-63, 66-67, 70 или 71.
10. Экспрессионная кассета по п.1, содержащая нуклеиновую кислоту, имеющую по меньшей мере 90% идентичности последовательности с любой SEQ ID NO:72 или SEQ ID NO: 73.
11. Поксвирусный вектор для экспрессии кодирующей последовательности Brachyury, содержащий экспрессионную кассету по п.1.
12. Поксвирусный вектор по п.11, где поксвирус представляет собой авипоксвирус.
13. Поксвирусный вектор по п.12, где авипоксвирус представляет собой вирус оспы кур.
14. Способ экспрессии последовательности, кодирующей антиген Brachyury, в векторе, включающий:
a) получение промотора, активного в качестве промотора поксвируса и содержащего последовательность нуклеиновой кислоты, представленную в SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:5 или SEQ ID NO:4;
b) функциональное связывание промотора с гетерологичной кодирующей последовательностью, которая кодирует антиген Brachyury, для кодирования слитого белка, содержащего антиген Brachyury; и
c) введение промотора и кодирующей последовательности в вектор.
15. Способ по п.14, в котором промотор поксвируса содержит последовательность нуклеиновой кислоты, представленную в SEQ ID NO: 9.
16. Способ по п.15, в котором промотор поксвируса содержит последовательность нуклеиновой кислоты, представленную в SEQ ID NO: 4.
17. Способ по п.14, в котором вектор представляет собой вирусный вектор, выбранный из ортопоксвируса и авипоксвируса.
18. Способ по п.17, в котором вектор представляет собой авипоксвирус, который представляет собой вирус оспы кур.
RU2018106643A 2015-07-31 2016-07-28 Промоторы для усиления экспрессии в поксвирусах RU2753884C2 (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201562199681P 2015-07-31 2015-07-31
US62/199,681 2015-07-31
PCT/IB2016/001183 WO2017021776A1 (en) 2015-07-31 2016-07-28 Promoters for enhancing expression in poxviruses

Publications (3)

Publication Number Publication Date
RU2018106643A RU2018106643A (ru) 2019-08-28
RU2018106643A3 RU2018106643A3 (ru) 2020-01-30
RU2753884C2 true RU2753884C2 (ru) 2021-08-24

Family

ID=57068152

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2018106643A RU2753884C2 (ru) 2015-07-31 2016-07-28 Промоторы для усиления экспрессии в поксвирусах

Country Status (16)

Country Link
US (1) US11753652B2 (ru)
EP (1) EP3329016B1 (ru)
JP (1) JP6851364B2 (ru)
KR (1) KR102565284B1 (ru)
CN (1) CN107922981B (ru)
AU (1) AU2016303378B2 (ru)
CA (1) CA2990549A1 (ru)
DK (1) DK3329016T3 (ru)
ES (1) ES2901468T3 (ru)
HK (1) HK1254405A1 (ru)
IL (1) IL256869B (ru)
MX (1) MX2018001055A (ru)
RU (1) RU2753884C2 (ru)
SG (1) SG10202000447YA (ru)
WO (1) WO2017021776A1 (ru)
ZA (1) ZA201800104B (ru)

Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20200044000A (ko) 2017-08-24 2020-04-28 버베리안 노딕 에이/에스 재조합 mva 및 항체의 정맥내 투여에 의한 암 치료를 위한 병용 요법
EP3727446A1 (en) 2017-12-19 2020-10-28 Janssen Sciences Ireland Unlimited Company Methods and compositions for inducing an immune response against hepatitis b virus (hbv)
WO2020070303A1 (en) 2018-10-05 2020-04-09 Bavarian Nordic A/S Combination therapy for treating cancer with an intravenous administration of a recombinant mva and an immune checkpoint antagonist or agonist
MX2021005560A (es) 2018-11-20 2021-06-23 Bavarian Nordic As Terapia para el tratamiento del cancer con administracion intratumoral y/o intravenosa de un virus vaccinia ankara (mva) recombinante que codifica ligando 4-1bbl (cd137l) y/o ligando del cumulo o grupo de diferenciacion 40 (cd40l).
JP2023503857A (ja) 2019-11-20 2023-02-01 バヴァリアン・ノルディック・アクティーゼルスカブ がんを治療するための腫瘍内及び／または静脈内投与用組み換えｍｖａウイルス
WO2023118508A1 (en) 2021-12-23 2023-06-29 Bavarian Nordic A/S Recombinant mva viruses for intraperitoneal administration for treating cancer
CA3240596A1 (en) 2021-12-23 2023-06-29 Cigdem ATAY LANGBEIN Therapy for modulating immune response with recombinant mva encoding il-12
WO2024149832A1 (en) 2023-01-12 2024-07-18 Bavarian Nordic A/S RECOMBINANT MODIFIED saRNA (VRP) FOR CANCER VACCINE

Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5670367A (en) * 1991-08-26 1997-09-23 Immuno Aktiengesellschaft Recombinant fowlpox virus
RU2180352C2 (ru) * 1999-11-24 2002-03-10 Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор" ФРАГМЕНТ ГЕНОМА ВИРУСА ОСПЫ КУР ШТАММА "К", СОДЕРЖАЩИЙ ГЕН ТИМИДИНКИНАЗЫ, РЕКОМБИНАНТНЫЕ ПЛАЗМИДНЫЕ ДНК pTK1FPV И pTK2FPV, СОДЕРЖАЩИЕ ЭТУ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ, И РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДНАЯ ДНК pINTFPV1, ОБЛАДАЮЩАЯ СПОСОБНОСТЬЮ ИНТЕГРИРОВАТЬСЯ В ГЕНОМ ВИРУСА ОСПЫ КУР
WO2005038028A1 (en) * 2003-10-15 2005-04-28 Virax Development Pty Ltd Poxvirus vector encoding retrovirus (eg hiv) and cytokine
WO2008106551A2 (en) * 2007-02-28 2008-09-04 The Govt. Of The U.S.A. As Represented By The Secretary Of The Dept. Of Health & Human Serv. Brachyury polypeptides and methods for use
US7638134B2 (en) * 2003-02-20 2009-12-29 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Insertion sites in fowlpox vectors
CN101775410A (zh) * 2009-01-09 2010-07-14 中国人民解放军军事医学科学院军事兽医研究所 一种鸡痘病毒载体穿梭质粒及其应用
WO2010121180A1 (en) * 2009-04-17 2010-10-21 Globeimmune, Inc. Combination immunotherapy compositions against cancer and methods
CN102321637A (zh) * 2011-09-09 2012-01-18 中国人民解放军军事医学科学院军事兽医研究所 中国鸡痘病毒282e4弱毒株全基因组序列及其应用

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5766598A (en) 1991-03-07 1998-06-16 Virogenetics Corporation Recombinant attenuated ALVAC canarypoxvirus expression vectors containing heterologous DNA segments encoding lentiviral gene products
JP4475683B2 (ja) 1996-07-25 2010-06-09 アメリカ合衆国 腫瘍関連抗原に対する免疫のための組換えポックス・ウイルス
WO2014043535A1 (en) * 2012-09-14 2014-03-20 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Compositions for the treatment of cancer

Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5670367A (en) * 1991-08-26 1997-09-23 Immuno Aktiengesellschaft Recombinant fowlpox virus
RU2180352C2 (ru) * 1999-11-24 2002-03-10 Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор" ФРАГМЕНТ ГЕНОМА ВИРУСА ОСПЫ КУР ШТАММА "К", СОДЕРЖАЩИЙ ГЕН ТИМИДИНКИНАЗЫ, РЕКОМБИНАНТНЫЕ ПЛАЗМИДНЫЕ ДНК pTK1FPV И pTK2FPV, СОДЕРЖАЩИЕ ЭТУ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ, И РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДНАЯ ДНК pINTFPV1, ОБЛАДАЮЩАЯ СПОСОБНОСТЬЮ ИНТЕГРИРОВАТЬСЯ В ГЕНОМ ВИРУСА ОСПЫ КУР
US7638134B2 (en) * 2003-02-20 2009-12-29 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Insertion sites in fowlpox vectors
WO2005038028A1 (en) * 2003-10-15 2005-04-28 Virax Development Pty Ltd Poxvirus vector encoding retrovirus (eg hiv) and cytokine
WO2008106551A2 (en) * 2007-02-28 2008-09-04 The Govt. Of The U.S.A. As Represented By The Secretary Of The Dept. Of Health & Human Serv. Brachyury polypeptides and methods for use
CN101775410A (zh) * 2009-01-09 2010-07-14 中国人民解放军军事医学科学院军事兽医研究所 一种鸡痘病毒载体穿梭质粒及其应用
WO2010121180A1 (en) * 2009-04-17 2010-10-21 Globeimmune, Inc. Combination immunotherapy compositions against cancer and methods
CN102321637A (zh) * 2011-09-09 2012-01-18 中国人民解放军军事医学科学院军事兽医研究所 中国鸡痘病毒282e4弱毒株全基因组序列及其应用

Also Published As

Publication number Publication date
ES2901468T3 (es) 2022-03-22
JP6851364B2 (ja) 2021-03-31
HK1254405A1 (zh) 2019-07-19
US11753652B2 (en) 2023-09-12
CN107922981B (zh) 2022-02-25
WO2017021776A1 (en) 2017-02-09
BR112018002172A8 (pt) 2024-02-15
JP2018521651A (ja) 2018-08-09
BR112018002172A2 (pt) 2018-09-18
IL256869B (en) 2022-07-01
RU2018106643A3 (ru) 2020-01-30
CN107922981A (zh) 2018-04-17
KR102565284B1 (ko) 2023-08-08
AU2016303378A1 (en) 2018-01-25
US20180216134A1 (en) 2018-08-02
ZA201800104B (en) 2022-04-28
EP3329016B1 (en) 2021-10-20
EP3329016A1 (en) 2018-06-06
MX2018001055A (es) 2018-05-17
CA2990549A1 (en) 2017-02-09
IL256869A (en) 2018-03-29
SG10202000447YA (en) 2020-03-30
KR20180033498A (ko) 2018-04-03
DK3329016T3 (da) 2022-01-10
RU2018106643A (ru) 2019-08-28
AU2016303378B2 (en) 2021-12-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2753884C2 (ru) Промоторы для усиления экспрессии в поксвирусах
JP6818797B2 (ja) 強靭なｔ細胞用のｐｒ１３．５プロモータ及び抗体応答
US9951352B2 (en) Poxvirus expression system
US20110014242A1 (en) Promoters for expression in modified vaccinia virus ankara
JP7062003B2 (ja) ポックスウイルス内における導入遺伝子の安定性を向上させるための組成物及び方法
MXPA04011034A (es) Expresion de los genes en el virus de la vacuna de ankara modificada, usando el promotor ati de viruela.
BR112018002172B1 (pt) Promotores para intensificar a expressão em poxvírus