RU2738448C2 - Method for producing and using a biological active additive based on proteoglycans and glycosaminoglycans - Google Patents

Abstract

FIELD: pharmaceuticals.

SUBSTANCE: invention relates to production of biologically active additives based on proteoglycans and glycosaminoglycans. Method of producing biologically active additive is characterized in that solution, containing proteoglycans and glycosaminoglycans in the form of fine suspension in 0.1 N sodium hydroxide solution at ratio of 1:200, is concentrated to the gel consistence. For this purpose, it is exposed for 20 minutes at room temperature for complete settling of aggregates and formation of stable dense sediment, then supernatant fluid is separated, sediment is centrifuged at 1000 rpm for 45 seconds and the supernatant is drained. Sedimentation, having pH 9.0–9.3, with gentle stirring is added to neutralize 0.1 N solution of hydrochloric acid, bringing solution to pH 8.0. Thereafter, the final gel residue is sublimated to solid state for at least 12 hours at −4 °C and after termination of sublimation drying are ground, conducted through a mesh filter with mesh size of 500 mcm, and the powder is packaged into solid gastro-resistant capsules. Alternatively, the final precipitate in form of concentrated gel, which ratio in total weight makes 40–55 % gel/solution—0.9 % sodium chloride, is placed into gastro-resistant capsules. Produced biologically active additive in the form of gastro-resistant capsules is orally administered.

EFFECT: invention enables to use biocompatible high-molecular glucuronic acid derivatives in pathological conditions accompanied by intoxication of various aetiology, contamination of pathogenic intestinal microflora, as well as with hepatotrophic and compensatory-reducing purpose with deficiency of these substances.

5 cl, 2 dwg, 4 tbl, 6 ex

Description

Классы МПК: A23L 1/30 содержащие добавкиIPC classes: A23L 1/30 containing additives

A23L 1/305 аминокислоты, пептиды или белкиA23L 1/305 amino acids, peptides or proteins

A23L 1/302 витаминыA23L 1/302 vitamins

A23L 1/304 неорганические соли, минералы, микроэлементыA23L 1/304 inorganic salts, minerals, trace elements

A23J 1/10 из волос, перьев, рога, шкур, кож, костей и т.п.A23J 1/10 of hair, feathers, horn, hides, leather, bones, etc.

A23L 2/52 - введение ингредиентов (введение консервантов A23L 2/44).A23L 2/52 - introduction of ingredients (introduction of preservatives A23L 2/44).

C12N 1/18 - хлебопекарные дрожжи; пивные дрожжи.C12N 1/18 - baker's yeast; Brewer's yeast.

Изобретение относится к производству биологически активных добавок на основе протеогликанов и гликозаминогликанов, которые могут быть использованы в качестве биодаптивных высокомолекулярных производных глюкуроновой кислоты для лечебной коррекции ее дефицита, а также повышения эффективности лечения при патологических состояниях сопровождающихся интоксикацией различной этиологии.The invention relates to the production of biologically active additives based on proteoglycans and glycosaminoglycans, which can be used as bio-responsive high-molecular derivatives of glucuronic acid for the therapeutic correction of its deficiency, as well as increasing the effectiveness of treatment in pathological conditions accompanied by intoxication of various etiologies.

Несмотря на большое количество разработанных биологически активных добавок (БАД), выпуск целого ряда которых освоен промышленностью, проблема поиска новых источников сырья для производства БАД остается актуальной. Наиболее эффективными можно считать БАД природного происхождения, обладающие широким спектром действия: антирадикальным, антиперекисным, мембрано-стабилизирующим, радиопротекторным, иммунокоррегирующим и соответственно содержащие в своем составе витамины антиоксидантного ряда, биогенные макро- и микроэлементы, некоторые регуляторы физиологических функций отдельных органов и систем организма. Важно отметить, что моча человека и млекопитающих широко использовалась многими народами с давних времен. Имеются сведения о применении мочи для пищевых целей в средние века в Европе для производства пива, сыроварении. Известно применение мочи в лечебных целях, в частности, при заболеваниях кожи, суставов, сосудов.Despite the large number of developed biologically active additives (BAA), the production of a number of which has been mastered by the industry, the problem of finding new sources of raw materials for the production of BAA remains urgent. The most effective can be considered dietary supplements of natural origin, which have a wide spectrum of action: antiradical, antiperoxide, membrane-stabilizing, radioprotective, immunocorrective and, accordingly, containing antioxidant vitamins, biogenic macro- and microelements, some regulators of the physiological functions of individual organs and systems of the body. It is important to note that human and mammalian urine has been widely used by many peoples since ancient times. There is information about the use of urine for food purposes in the Middle Ages in Europe for the production of beer, cheese making. It is known to use urine for medicinal purposes, in particular, for diseases of the skin, joints, blood vessels.

За счет содержания широкого набора биологических веществ, включающих антиоксиданты, различные витамины, микроэлементы, углеводы, липиды и др., БАД природного происхождения можно считать наиболее эффективными. Одним из путей решения проблемы, связанной с негативным влиянием на живой организм различных факторов внешней среды является алиментарная коррекция питания с применением БАД.Due to the content of a wide range of biological substances, including antioxidants, various vitamins, trace elements, carbohydrates, lipids, etc., dietary supplements of natural origin can be considered the most effective. One of the ways to solve the problem associated with the negative impact on the living organism of various environmental factors is alimentary correction of nutrition with the use of dietary supplements.

Анализ литературных источников свидетельствует о том, что сырьем для получения биодаптивных БАД могут служить биологические жидкости парнокопытных и человека. По нашему мнению, наиболее перспективными по биологическому составу и адаптивности являются моча парнокопытных, преимущественно самцов. В определенной степени это связано с удобствами получения сырья в объемах и качестве, необходимом для обеспечения потребности производства. Этот вид исходного сырья является уникальным по своему составу - содержит полноценные по аминокислотному составу и близким по иммунобиологическим свойствам к человеческим: белки, протеогликаны и гликозаминогликаны, целый комплекс макро- и микроэлементов, углеводов, и др.The analysis of literary sources indicates that biological fluids of artiodactyls and humans can serve as raw materials for obtaining bio-adaptive dietary supplements. In our opinion, the most promising in terms of biological composition and adaptability are the urine of artiodactyls, mainly males. To a certain extent, this is due to the convenience of obtaining raw materials in the volumes and quality necessary to meet the needs of production. This type of raw material is unique in its composition - it contains complete amino acid composition and similar immunobiological properties to human ones: proteins, proteoglycans and glycosaminoglycans, a whole complex of macro- and microelements, carbohydrates, etc.

Актуальность направления несомненна, поскольку разработка соответствующей технологии позволяет решить сразу несколько задач, а именно: создание ресурсосберегающих технологий и комплексного использования сырья, получения биоадаптивных БАД с программируемым спектром действия, безопасным для применения, существенным вкладом в решение проблемы охраны окружающей среды.The relevance of this direction is undoubted, since the development of the appropriate technology allows solving several problems at once, namely: the creation of resource-saving technologies and the complex use of raw materials, the production of bioadaptive dietary supplements with a programmable spectrum of action, safe for use, a significant contribution to solving the problem of environmental protection.

БАД предназначены для оптимизации рациона питания. Согласно определению, БАД не являются лекарствами. При заболеваниях используются только как дополнение к основной терапии. При этом они должны применяться под контролем врача для предотвращения неблагоприятных последствий (9).Supplements are designed to optimize the diet. By definition, dietary supplements are not drugs. For diseases, they are used only as an addition to the main therapy. Moreover, they should be used under medical supervision to prevent adverse consequences (9).

БАД способны активизировать иммунную систему человека, стимулировать общий обмен веществ, улучшить деятельность сердечнососудистой системы. Они широко применяются при различных заболеваниях желудочно-кишечного тракта, печени, нервной системы, в комплексной терапии онкологических заболеваний, особенно для купирования осложнений после химиолучевой терапии, и многих других состояний, требующих восстановления или поддержания гомеостаза организма на физиологическом уровне (8, 12, 17, 20)BAA can activate the human immune system, stimulate the general metabolism, improve the activity of the cardiovascular system. They are widely used in various diseases of the gastrointestinal tract, liver, nervous system, in the complex therapy of oncological diseases, especially for the relief of complications after chemoradiation therapy, and many other conditions requiring restoration or maintenance of the body's homeostasis at the physiological level (8, 12, 17 , twenty)

При анализе известных по этой тематике данных литературы и патентных источников обращено внимание на следующие близкие аналоги, и выделенный прототип.When analyzing literature data and patent sources known on this topic, attention was paid to the following close analogs, and a highlighted prototype.

Известный способ получения биологически активного пищевого полуфабриката (16) включает культивирование микроорганизмов, выращенных на растительном сырье. В качестве источника микроорганизмов используют спонтанные микробные ценозы винодельческого сырья, из которых при культивировании выделяют дрожжи сахаромицеты. При этом культивирование проводят в аэробных условиях при 20-40°С в течение 12-48 ч, а затем отбирают полученные при культивировании дрожжи сахаромицеты с размером клеток (1,5-3,0)×(3,0-6,0) мкм, образующие на винодельческом сырье не более 4-5% спирта. Затем их переносят на нейтральные питательные субстраты с содержанием сухих веществ 5-60% для выращивания до накопления не менее 2-3 млрд. клеток/мл или 2-3 млрд. клеток/г, а затем выращенные культуры используют в качестве пищевого полуфабриката. Из полученного пищевого полуфабриката готовят жидкие или сухие дрожжевые закваски или же его стерилизуют и сушат. В другом из вариантов пищевой полуфабрикат дополнительно ферментируют с помощью бактериальных культур с пробиотическими свойствами. Пищевой биологически активный продукт производят из пищевого полуфабриката, полученного по любому из вариантов способа.A known method of obtaining a biologically active food semi-finished product (16) includes the cultivation of microorganisms grown on plant raw materials. As a source of microorganisms, spontaneous microbial cenoses of wine-making raw materials are used, from which saccharomyces yeast is isolated during cultivation. In this case, the cultivation is carried out under aerobic conditions at 20-40 ° C for 12-48 hours, and then the saccharomycetes yeast obtained during the cultivation with a cell size of (1.5-3.0) × (3.0-6.0) microns, forming no more than 4-5% alcohol on wine-making raw materials. Then they are transferred to neutral nutrient substrates with a dry matter content of 5-60% for cultivation until the accumulation of at least 2-3 billion cells / ml or 2-3 billion cells / g, and then the grown cultures are used as a food semi-finished product. Liquid or dry yeast starter cultures are prepared from the obtained food semi-finished product, or it is sterilized and dried. In another variant, the semi-finished food product is additionally fermented using bacterial cultures with probiotic properties. The biologically active food product is produced from a semi-finished food product obtained according to any of the method variants.

Недостатком данного способа является многоэтапность и сложность технологического процесса получения БАД, необходимость двухкратного культивирования дрожжевого продукта. Изготовленный БАД не является биоадаптивным, поскольку получен из продуктов микробной переработки.The disadvantage of this method is the multistage and complexity of the technological process for obtaining dietary supplements, the need for two-fold cultivation of the yeast product. The manufactured dietary supplement is not bioadaptive, since it is obtained from products of microbial processing.

Известна биологически активная добавка к пище (7), изготовленная в в виде таблеток и капсул, содержащая следующие компоненты: гидролизат коллагена пищевой "Колламин-80", сырье для БАД "Акулий хрящ-сырье", жировой компонент "Делиос S", мальтодекстрин "Глюсидекс 19", фруктоза кристаллическая, стеарат магния. Данная добавка представляет собой комплекс из гидролизата коллагена, экстракта акульего хряща, жирового компонента витаминов, наполнителей: фруктозы кристаллической и стеарата магния. Недостатком данной БАД является то, что используются продукты глубокой переработки сырья - гидролизаты. При этом, само сырье выделяется из тканей животных, состав веществ которых существенно отличается от тканей человека. Все эти особенности значительно уменьшают биологическую активность и безопасность применения у человека.Known biologically active food supplement (7), made in the form of tablets and capsules, containing the following components: collagen hydrolyzate food "Collamin-80", raw materials for dietary supplements "Shark cartilage raw", fat component "Delios S", maltodextrin " Glusidex 19 ", crystalline fructose, magnesium stearate. This supplement is a complex of collagen hydrolyzate, shark cartilage extract, fatty component of vitamins, fillers: crystalline fructose and magnesium stearate. The disadvantage of this dietary supplement is that it uses products of deep processing of raw materials - hydrolysates. At the same time, the raw material itself is released from animal tissues, the composition of substances of which is significantly different from human tissues. All these features significantly reduce the biological activity and safety of use in humans.

Известно биологически активное вещество (4), которое представляет собой белковый гидролизат, полученный путем кислотного гидролиза и последующей нейтрализации пептидосодержащего животного сырья, выбранного из ряда: туши животных или рыб, альбумин, кровь животных или рыб, мясо животных или рыб, протеиносодержащиеся отходы при производстве продукции из животных или рыб, фильтрации с получением гидролизата и осадка, с последующей сушкой гидролизата, при этом готовый продукт содержит пептиды а также содержит натрий, хром, никель, кобальт, селен, кальций, калий, серу, фосфор, хлор, железо, цинк, медь, марганец.A biologically active substance (4) is known, which is a protein hydrolyzate obtained by acid hydrolysis and subsequent neutralization of peptide-containing animal raw materials selected from the series: carcasses of animals or fish, albumin, blood of animals or fish, meat of animals or fish, protein-containing wastes during production products from animals or fish, filtration to obtain hydrolyzate and sediment, followed by drying of the hydrolyzate, while the finished product contains peptides and also contains sodium, chromium, nickel, cobalt, selenium, calcium, potassium, sulfur, phosphorus, chlorine, iron, zinc , copper, manganese.

Полученное биологически активное вещество используется при производстве биологически активной добавки к пище, фармацевтического препарата, биологически активной добавки для кормления животных, ветеринарного препарата, удобрения, активатора микробиологических процессов, перорального питания, парфюмерно-косметического средства, гигиенического средства, молочного продукта, кондитерского изделия, хлебобулочного изделия, масло-жирового продукта, соуса, алкогольного напитка, безалкогольного напитка, рыбного продукта, мясного продукта, макаронных изделий, жевательной резинки, пива.The obtained biologically active substance is used in the production of a biologically active food supplement, a pharmaceutical preparation, a biologically active additive for animal feeding, a veterinary drug, fertilizer, an activator of microbiological processes, oral nutrition, a perfumery and cosmetic product, a hygiene product, a dairy product, a confectionery product, a bakery products, oil and fat product, sauce, alcoholic drink, soft drink, fish product, meat product, pasta, chewing gum, beer.

Недостатком этого вещества в качестве БАД можно отнести его относительную биологическую совместимость, поскольку оно получено из тканей животных и рыб, а также то, что процесс его получения требует глубокой переработки - гидролиза. Что существенно уменьшает биологическую активность конечного продукта.The disadvantage of this substance as a dietary supplement can be attributed to its relative biological compatibility, since it is obtained from the tissues of animals and fish, as well as the fact that the process of its production requires deep processing - hydrolysis. This significantly reduces the biological activity of the final product.

Известен способ получения БАД из пищевых дрожжей (15), который состоит в том, что пивные, пекарские или винные промывают водой при температуре от 5 до 15°С и соотношении 1:(3,5-4,5). После первого этапа промывки, дрожжи обрабатывают 0,8-1,2%-ным раствором поваренной соли для удаления горечи. Обработку ведут в течение 1,0-1,5 ч при постоянном перемешивании. После этого осуществляют еще два этапа промывки, аналогично первому. Автолиз ведут в течение 11-16 ч при 45-60°С. В таком режиме автолизат накапливает максимально возможное количество аминокислот, низших пептидов, витаминов и пр. при их минимальном разрушении и денатурации. Контроль процесса автолиза ведут по значению аминного азота, которое должно составлять 2,2-3,8% Полученный автолизат разделяют путем сепарирования на фугат автолизата и концентрат клеточных оболочек. Концентрат клеточных оболочек в дальнейшем обрабатывают путем дополнительного сепарирования с одновременной промывкой водой при 50-80°С, взятой в количестве 55-65% от объема концентрата клеточных оболочек, а полученный при этом фугат и фугат автолизата основного сепарирования упаривают при остаточном давлении 0,01-0,02 МПа и температуре 50-60°С. Полученные таким образом два вида биологически активных добавок сушат на вакуум-вальцевых сушилках при 50-60°С до влагосодержания не выше 8%. За счет щадящего режима автолиза, концентрирования и сушки, получают биологически активные продукты с высокими показателями.There is a known method for producing dietary supplements from nutritional yeast (15), which consists in the fact that beer, baker's or wine is washed with water at a temperature of 5 to 15 ° C and a ratio of 1: (3.5-4.5). After the first stage of washing, the yeast is treated with 0.8-1.2% sodium chloride solution to remove bitterness. The treatment is carried out for 1.0-1.5 h with constant stirring. After that, two more stages of washing are carried out, similar to the first. Autolysis is carried out for 11-16 hours at 45-60 ° C. In this mode, autolysate accumulates the maximum possible amount of amino acids, lower peptides, vitamins, etc. with minimal destruction and denaturation. The autolysis process is monitored by the value of the amine nitrogen, which should be 2.2-3.8%. The resulting autolysate is separated by separation into an autolysate centrate and a concentrate of cell membranes. The concentrate of cell walls is further processed by additional separation with simultaneous washing with water at 50-80 ° C, taken in an amount of 55-65% of the volume of the concentrate of cell walls, and the centrate and centrate of the autolysate of the main separation obtained are evaporated at a residual pressure of 0.01 -0.02 MPa and a temperature of 50-60 ° C. The thus obtained two types of biologically active additives are dried on a vacuum roller dryer at 50-60 ° C to a moisture content of no higher than 8%. Due to the gentle mode of autolysis, concentration and drying, biologically active products with high performance are obtained.

Основным недостатком данного способа является то, что пищевые дрожжи не являются естественным метаболитом кишечника человека и биоадаптивным продуктом, и их применение в качестве сырья для получения БАД этой группы несет риск изменения состава и жизнедеятельности естественной бактериальной среды кишечника, что при длительном применении может иметь негативные последствия. Помимо этого предлагаемый авторами патента технологический процесс получения БАД требует проведения многочисленных этапов, длительностью не менее 30 часов, сложного технического и лабораторного обеспечения контроля параметров температуры, давления, биохимических показателей, применения энергозатратного, разнообразного, дорогостоящего оборудования: автоклавы, сепараторы, вакуумные вальцевые сушилки, что существенно сказывается на экономической эффективности и себестоимости конечного продукта.The main disadvantage of this method is that nutritional yeast is not a natural metabolite of the human intestine and a bioadaptive product, and their use as a raw material for obtaining dietary supplements of this group carries a risk of changing the composition and vital activity of the natural bacterial environment of the intestine, which, with prolonged use, can have negative consequences. ... In addition, the technological process for obtaining dietary supplements proposed by the authors of the patent requires numerous stages, lasting at least 30 hours, complex technical and laboratory support for monitoring the parameters of temperature, pressure, biochemical parameters, the use of energy-consuming, various, expensive equipment: autoclaves, separators, vacuum roller dryers, which significantly affects the economic efficiency and cost of the final product.

Известна биологически активная добавка (6), изготовленная в виде порошка, содержащая следующие компоненты: гидролизат коллагена, желатин, фруктовый порошок, лимонную кислоту, декстрозу, аспартам К, ацесульфам К, мальтодекстрин, растительное масло и ароматизаторы. Данная добавка представляет собой комплекс из гидролизата коллагена, желатина, солей калия, ароматизаторов и стабилизаторов. Коллагеновые белки представлены в виде гидролизата и денатурированного коллагена - желатина. К существенным недостаткам данной БАД относится то, что в ее составе нет нативных биологически активных веществ, поскольку основные действующие вещества представлены в виде гидролизата и денатурированных продуктов, эффективность которых незначительна.Known biologically active additive (6), made in the form of a powder, containing the following components: collagen hydrolyzate, gelatin, fruit powder, citric acid, dextrose, aspartame K, acesulfame K, maltodextrin, vegetable oil and flavors. This supplement is a complex of collagen hydrolyzate, gelatin, potassium salts, flavors and stabilizers. Collagen proteins are presented in the form of hydrolyzate and denatured collagen - gelatin. The significant disadvantages of this dietary supplement include the fact that there are no native biologically active substances in its composition, since the main active substances are presented in the form of a hydrolyzate and denatured products, the effectiveness of which is insignificant.

Известен способ получения БАД на основе денатурированных коллагеновых белков (5), который может быт использован как функциональная БАД к пище для укрепления соединительных тканей. БАД включает следующие компоненты: денатурированные коллагеновые белки кожи или хряща, или связок, или сухожилий, или их смесь, витамины С, В6, РР, кальция карбонат, железа сульфат, меди цитрат, магния цитрат, тиосульфат натрия, ламинарии слоевища, топинамбура лист или корень, или их смесь и наполнитель. Состав БАД различается в зависимости от возраста и физических особенностей человека. Изобретение позволяет получить функционально-активные биодобавки к пище, которые устраняют соединительнотканную недостаточность у разных категорий людей и стимулируют восстановление соединительных тканей после болезней, травм и больших физических нагрузок. К существенным недостаткам данной БАД относится то, что в ее составе нет нативных биологически активных веществ, поскольку основные действующие вещества представлены в виде гидролизата и денатурированных продуктов, эффективность которых незначительна.There is a known method of producing dietary supplements based on denatured collagen proteins (5), which can be used as a functional dietary supplement for food to strengthen connective tissues. The dietary supplement includes the following components: denatured collagen proteins of the skin or cartilage, or ligaments, or tendons, or a mixture thereof, vitamins C, B6, PP, calcium carbonate, iron sulfate, copper citrate, magnesium citrate, sodium thiosulfate, kelp thallus, Jerusalem artichoke leaf or root, or mixture and filler. The composition of dietary supplements varies depending on the age and physical characteristics of a person. The invention makes it possible to obtain functionally active food supplements that eliminate connective tissue deficiency in different categories of people and stimulate the restoration of connective tissues after diseases, injuries and heavy physical exertion. The significant disadvantages of this dietary supplement include the fact that there are no native biologically active substances in its composition, since the main active substances are presented in the form of a hydrolyzate and denatured products, the effectiveness of which is insignificant.

Наиболее близким по совокупным признакам к предполагаемому изобретению является патент (RU 2240123) «Экзогенные биологически активные конъюгирующие вещества» Автор Н.Ш. Кайшева (19), который прият нами как прототип. Описанное изобретение касается применения полиуронидных кислот или их солей в качестве средств заместительной терапии заболеваний, связанных с нарушением метаболических процессов, в частности реакций конъюгации с глюкуроновой кислотой (почечная кома, печеночно-клеточная недостаточность, гепатиты, желтухи и др.). Предлагаемые средства применимы для пероральной заместительной терапии и получены из растительного сырья. Они содержат уроновые кислоты, в том числе полигалактуроновую кислоту со степенью этерификации 40,4% (свекловичный пектин) или производную натриевых солей полиманнуроновой и полигулуроновой кислот (альгинат натрия). По данным автора средства способствуют эффективной защите больных с нарушением метаболических процессов.The closest in aggregate characteristics to the alleged invention is the patent (RU 2240123) "Exogenous biologically active conjugating substances" Author N.Sh. Kaishev (19), who we like as a prototype. The described invention relates to the use of polyuronic acids or their salts as agents for substitution therapy for diseases associated with metabolic disorders, in particular conjugation reactions with glucuronic acid (renal coma, hepatocellular failure, hepatitis, jaundice, etc.). The proposed agents are applicable for oral substitution therapy and are obtained from plant materials. They contain uronic acids, including polygalacturonic acid with a degree of esterification of 40.4% (beet pectin) or a derivative of sodium salts of polymannuronic and polyguluronic acids (sodium alginate). According to the author's data, the means contribute to the effective protection of patients with metabolic disorders.

Недостатками указанного способа является низкая биосовместимость препарата, обусловленная использованием исходного растительного сырья. Немаловажным недостатком предлагаемых указанных препаратов представляется то, что их основными активными коньюгирующими компонентами являются полигалактуроновая кислота или производные натриевых солей полиманнуроновой и полигулуроновой кислот, которые присущи только растительным продуктам и в организме человека встречаются в следовых количествах. В силу этого, реальное участие этих веществ в процессах детоксикации, конкретно конъюгации в организме человека ограниченно и несущественно, поскольку в этих реакциях основная и доминирующая роль принадлежит глюкуроновой кислоте и (или) ее производным. К отмеченному следует добавить и то, что ферментные системы, ответственные за реакции конъюгации с уроновыми кислотами растительного происхождения, в организме человека отсутствуют, и прохождение этих реакций в организме человека определяется ограниченной возможностью его ферментных систем к побочным, неспецифическим, реакциям с субстратами растительного происхождения.The disadvantages of this method is the low biocompatibility of the drug due to the use of the original plant material. An important disadvantage of the proposed specified preparations is that their main active conjugating components are polygalacturonic acid or derivatives of sodium salts of polymannuronic and polyguluronic acids, which are inherent only in plant products and are found in the human body in trace amounts. Due to this, the real participation of these substances in detoxification processes, specifically conjugation in the human body, is limited and insignificant, since in these reactions the main and dominant role belongs to glucuronic acid and (or) its derivatives. To the above, it should be added that the enzyme systems responsible for conjugation reactions with uronic acids of plant origin are absent in the human body, and the passage of these reactions in the human body is determined by the limited ability of its enzyme systems to side, nonspecific, reactions with substrates of plant origin.

В настоящее время авторами предлагаемого изобретения из доступных источников информации не выявлен способ получения биосовместимых высокомолекулярных производных D-глюкуроновой кислоты, а также препараты пригодные для перорального применения с целью повышения эффективности детоксикации при проведении основного патогенетического лечения, конкретно реакции коньюгации, а именно, гликозаминогликаны и протеогликаны из биологической жидкости организма млекопитающих и человека, необходимых для реализации предлагаемого изобретения.Currently, the authors of the present invention from the available information sources have not identified a method for producing biocompatible high molecular weight derivatives of D-glucuronic acid, as well as preparations suitable for oral administration in order to increase the efficiency of detoxification during the main pathogenetic treatment, specifically conjugation reactions, namely, glycosaminoglycans and proteoglycans from the biological fluid of the body of mammals and humans, necessary for the implementation of the proposed invention.

С этих позиций нами остановлен выбор на применении в качестве конъюгирующих веществ уже полученных ранее нами препаратов гликозаминогликанов и протеогликанов «Способ получения протеогликана» патент №2621311 от 09.12.2015. Автор Б.И. Асатуров) (2). Этот способ и препарат имеет целый ряд преимуществ перед существующими по следующим признакам, а именно:From these positions, we have chosen to use as conjugating substances already obtained earlier by us preparations of glycosaminoglycans and proteoglycans "Method of obtaining proteoglycan" patent No. 2621311 dated 09.12.2015. Author B.I. Asaturov) (2). This method and the preparation has a number of advantages over the existing ones in the following ways, namely:

1. Препарат состоит из протеогликанов и глюкозаминогликанови полностью биосовместим, поскольку получен из биологической жидкости организма парнокопытных или человека.1. The drug consists of proteoglycans and glucosaminoglycans and is completely biocompatible, since it is obtained from the biological fluid of the body of artiodactyls or humans.

2. Глюкуроновая кислота, входящая в состав гликозаминогликанов и протеогликанов в этом препарате, находится в восстановленном (активном) состоянии, поскольку на заключительном этапе применяемого способа выделения, подвергается щелочному гидролизу с разрушением эфирной связи с ранее присоединенным метаболитом, и последующим процессом нейтрализации кислотой, который приводит к восстановлению карбоксильной группы и полной растворимости соединения.2. Glucuronic acid, which is a part of glycosaminoglycans and proteoglycans in this preparation, is in a restored (active) state, since at the final stage of the used isolation method, it undergoes alkaline hydrolysis with the destruction of the ester bond with the previously attached metabolite, and the subsequent process of neutralization with acid, which leads to the restoration of the carboxyl group and the complete solubility of the compound.

3. Препарат не обладает кумулятивным эффектом, быстро выводится с мочой, неиммуногенен и не вызывает токсических реакций (при испытании на лабораторных животных) и тем самым, может быть применен для заявляемых целей, в том числе и при оценке результатов, без опасности возникновения побочных эффектов.3. The drug does not have a cumulative effect, is quickly excreted in the urine, is non-immunogenic and does not cause toxic reactions (when tested on laboratory animals) and thus can be used for the stated purposes, including when evaluating the results, without the risk of side effects ...

4. Предлагаемый способ получения протеогликанов и гликозаминогликанов успешно апробирован в опытно-промышленном масштабе с использованием загрузок реагентов в количестве несколько сотен грамм.4. The proposed method for obtaining proteoglycans and glycosaminoglycans has been successfully tested on a pilot scale using reagent loads in an amount of several hundred grams.

Сущность способа получения биоадаптивного БАД на основе протеогликана и гликозаминогликана предусматривает использование сырья, полученного из биологической жидкости парнокопытных или человека, конкретно мочи. Сырье для этого препарата содержит высокомолекулярные производные глюкуроновой кислоты - гликозаминогликаны и протеогликаны, которые находятся в коньюгированном с эндогенными метаболитами состоянии. Технологический процесс обработки сырья по этому способу позволяет избирательно выделить продукт, обладающий функциональными возможностями к реакциям коньюгации и, соответственно, с детоксикационными свойствами. Конкретно, извлекаются преимущественно глюкурониды, тропные к реакциям конъюгации. При выделении и очистки препарата происходит разрушение эфирной связи конъюгата, отделение его от токсического метаболита. При этом, токсический метаболит или его аналоги уже не могут вновь вступать в реакции коньюгации с отделенным глюкуронидом вне организма, поскольку процесс реконъюгации зависит, прежде всего, от ферментных систем, коферментов и субстратов, которые в комплексе присутствуют только в организме и конкретно в клетках печени. Заключительный этап получения препарата приводит к восстановлению его активности и растворимости, обеспечивающих функциональные возможности к детоксикации путем реакций конъюгации. Не менее важным является то, что полученный таким способом препарат обладает полифункциональными возможностями, которые заключаются в способности к реакциям коньюгации, практически со всеми представителями эндогенных метаболитов и ядами, с которыми вступает в реакции коньюгации глюкуроновая кислота и ее производные, механизм реакций с которыми доказан.The essence of the method for producing bioadaptive dietary supplements based on proteoglycan and glycosaminoglycan involves the use of raw materials obtained from the biological fluid of artiodactyls or humans, specifically urine. The raw material for this preparation contains high-molecular derivatives of glucuronic acid - glycosaminoglycans and proteoglycans, which are in a state conjugated with endogenous metabolites. The technological process of processing raw materials according to this method makes it possible to selectively isolate a product with functional capabilities for conjugation reactions and, accordingly, with detoxification properties. Specifically, predominantly glucuronides that are tropic to conjugation reactions are recovered. When the preparation is isolated and purified, the ether bond of the conjugate is destroyed, separating it from the toxic metabolite. At the same time, the toxic metabolite or its analogs can no longer re-enter into conjugation reactions with the separated glucuronide outside the body, since the reconjugation process depends primarily on enzyme systems, coenzymes and substrates, which in the complex are present only in the body and specifically in liver cells ... The final stage of obtaining the drug leads to the restoration of its activity and solubility, providing functionality for detoxification through conjugation reactions. No less important is the fact that the drug obtained in this way has polyfunctional capabilities, which consist in the ability to conjugate reactions, with almost all representatives of endogenous metabolites and poisons with which glucuronic acid and its derivatives enter into conjugation reactions, the reaction mechanism with which has been proven.

Таким образом, выбранный для использования в предполагаемом изобретении препарат высокомолекулярных производных D-глюкуроновой кислоты обладает широкими функциональными возможностями, биосовместим, доступен и экологически безопасен.Thus, the preparation of high molecular weight derivatives of D-glucuronic acid selected for use in the proposed invention has broad functional capabilities, is biocompatible, available and environmentally friendly.

В связи с вышеизложенным можно считать оправданным использования биосовместимых высокомолекулярных производных глюкуроновой кислоты для лечебной коррекции ее дефицита, а также при патологических состояниях сопровождающихся интоксикацией различной этиологии.In connection with the above, it can be considered justified to use biocompatible high molecular weight derivatives of glucuronic acid for the therapeutic correction of its deficiency, as well as in pathological conditions accompanied by intoxication of various etiologies.

Целью предлагаемого изобретения является применение высокополимерных биосовместимых производных глюкуроновой кислоты - гликозаминогликанов и протеогликанов как БАД для повышения эффективности проводимого лечения при заболеваниях, связанных интоксикацией различной этиологии, микробной контаминацией кишечника, а также с компенсаторно-восстановительной целью при дефиците этих веществ.The purpose of the present invention is the use of high-polymeric biocompatible derivatives of glucuronic acid - glycosaminoglycans and proteoglycans as dietary supplements to improve the effectiveness of treatment for diseases associated with intoxication of various etiologies, microbial contamination of the intestine, as well as with a compensatory-restorative purpose with a deficiency of these substances

Технический результат достигается за счет использования функциональных особенностей биоадаптивного препарата высокомолекулярных производных глюкуроновой кислоты, конкретно гликозаминогликанов и протеогликанов, которые способны к реакции конъюгации с токсичными продуктами метаболизма для их перевода в связанную с глюкуроновой кислотой нетоксичную форму и последующим выведением образованного комплекса из организма.The technical result is achieved through the use of the functional features of the bioadaptive preparation of high molecular weight derivatives of glucuronic acid, specifically glycosaminoglycans and proteoglycans, which are capable of conjugating with toxic metabolic products to convert them into a non-toxic form associated with glucuronic acid and subsequent elimination of the formed complex from the body.

Оценка эффективности предлагаемого способа получения БАД на основе протеогликанов и гликозаминогликанов (в дальнейшем БАДПГ) заключается в следующем.Evaluation of the effectiveness of the proposed method for producing dietary supplements based on proteoglycans and glycosaminoglycans (hereinafter BADPG) is as follows.

Для проведения исследований были выбраны методики и методология, которые по нашему мнению, наиболее оптимальны для оценки экспериментов. Эти методики известны и успешно использованы в ранее опубликованном патенте (19), который был получен по сходному с предлагаемым изобретение вопросу, однако, касался перорального применения полиуронидов растительного происхождения.For the research, methods and methodology were selected that, in our opinion, are the most optimal for evaluating experiments. These techniques are known and successfully used in a previously published patent (19), which was obtained on a question similar to the proposed invention, however, concerned the oral use of polyuronides of plant origin.

Содержание гексуроновых кислот в полученном у животных биологическом материале определяли карбазоловым методом с последующим измерением светопоглощения при длине волны 530 нм (3). Определение билирубина в сыворотке крови проводили по методу (Jendrassik, Grof) (21) на автоматизированном анализаторе "Humalizer 3000" Human, Германия. Определение прямого билирубина в моче проводили качественной реакцией и полуколичественным определением по диазореакции (Jendrassik, Grof) с использованием тест полосок "DiruiH-10" с последующим качественным и полуколичественном определении на анализаторе "DiruiH-100", производитель - "DiruiIndustrialGroupCo.", Ltd, Китай.The content of hexuronic acids in the biological material obtained from animals was determined by the carbazole method with subsequent measurement of light absorption at a wavelength of 530 nm (3). Determination of bilirubin in blood serum was carried out according to the method (Jendrassik, Grof) (21) on an automated Humalizer 3000 analyzer Human, Germany. Determination of direct bilirubin in urine was carried out by a qualitative reaction and semi-quantitative determination by diazo reaction (Jendrassik, Grof) using test strips "DiruiH-10", followed by qualitative and semi-quantitative determination on an analyzer "DiruiH-100", manufacturer - "DiruiIndustrial GroupCo.", Ltd, China.

Для стандартизации и повышения качествам лабораторных исследований на экспериментальных животных применено разработанное нами устройство для работы с мелкими лабораторными животными.To standardize and improve the quality of laboratory research on experimental animals, we used a device developed by us for working with small laboratory animals.

Изучение "острой" токсичности БАДПГ проведено методом Кербера (13, 14) на 20 белых крысах-самцах массой 180-220 г путем перорального введения 5 мл 3% раствора БАДПГ в дозе 3500 мг/кг массы тела. После одноразового введения за время наблюдения (в течение 14 дней) гибели животных не отмечалось, что позволило определить LD₅₀ при пероральном введении >3500 мг/кг. Согласно классификации токсических веществ (14) исследованный препарат относится к группе малотоксичных веществ.The study of the "acute" toxicity of BAADPG was carried out by the Kerber method (13, 14) on 20 white male rats weighing 180-220 g by oral administration of 5 ml of 3% BAADPG solution at a dose of 3500 mg / kg of body weight. After a single administration during the observation period (within 14 days), no deaths of animals were noted, which made it possible to determine the LD ₅₀ after oral administration> 3500 mg / kg. According to the classification of toxic substances (14), the studied drug belongs to the group of low toxic substances.

Коэффициент корреляции (r) между содержанием гексуроновых кислот и прямого билирубина в сыворотке крови, а также характер зависимости и количественного выражения достоверности связи между двумя указанными признаками вычислен по методике (1).The correlation coefficient (r) between the content of hexuronic acids and direct bilirubin in the blood serum, as well as the nature of the dependence and quantitative expression of the reliability of the relationship between the two indicated signs, was calculated by the method (1).

На первом этапе было изучено влияние 3% раствора БАДПГ при пероральном введении на уровень гексуроновых кислот и билирубина в сыворотке крови и моче интактных животных (1 группа). Для этого использовали крыс-самцов линии Вистар массой 180-200 г. Во 2 и 3 группах животных исследовали те же показатели после введения БАДПГ. Забор материала для исследований проводили до введения БАДПГ (1 группа) и после, а именно: через 2 часа после завершения введения (2 группа) и снова через 24 часа (3 группа). Результаты исследования содержания билирубина приведены в таблице 2. (Содержание билирубина в биологических жидкостях животных (М±m).At the first stage, the effect of a 3% solution of BAADP when administered orally on the level of hexuronic acids and bilirubin in the blood serum and urine of intact animals (group 1) was studied. For this, male Wistar rats weighing 180-200 g were used. In groups 2 and 3 of animals, the same parameters were studied after administration of BAADP. The sampling of material for research was carried out before the introduction of BADPG (group 1) and after, namely: 2 hours after the completion of the introduction (group 2) and again after 24 hours (group 3). The results of the study of the content of bilirubin are shown in table 2. (The content of bilirubin in biological fluids of animals (M ± m).

Обращает внимание прогрессивное падение уровня прямого билирубина в сыворотке крови, значения которого после завершения введения БАДПГ снижаются до нерегистрируемых величин ко 2 часу (2 группа). Через 24 часа (3 группа) у животных количество прямого билирубина вновь повышалось, что можно объяснить выведением БПГ из организма и восстановления баланса с содержанием прямого билирубина в крови. При определении наличия билирубина в моче по качественной пробе и полуколичественному способу на тест-полосках, в каждой группе животных на протяжении всего периода исследования реакция на билирубин была отрицательной, что свидетельствовало о нормальном течение метаболических процессов в печени. Результаты исследования содержания гексуроновых кислот представлены в таблице 3. (Содержание гексуроновых кислот в биологических жидкостях животных (M±m).Attention is drawn to the progressive drop in the level of direct bilirubin in the blood serum, the values of which, after the completion of the administration of BADPG, decrease to unrecorded values by 2 hours (group 2). After 24 hours (group 3), the amount of direct bilirubin in animals increased again, which can be explained by the elimination of PPG from the body and restoration of the balance with the content of direct bilirubin in the blood. When determining the presence of bilirubin in urine using a qualitative sample and a semi-quantitative method on test strips, in each group of animals throughout the entire study period, the reaction to bilirubin was negative, which indicated the normal course of metabolic processes in the liver. The results of the study of the content of hexuronic acids are presented in table 3. (The content of hexuronic acids in biological fluids of animals (M ± m).

Эти данные свидетельствуют о том, что после введения животными БАДПГ через 2 часа (2 группа) уровень гексуроновых кислот в биологических жидкостях повышается. Наибольшее, почти 3-х кратное увеличение отмечается в сыворотке крови (р<0,001), меньшее, но достоверное (р<0,01) в моче. Через 24 часа (3 группа) после введения БАДПГ показатели сохраняют стабильность и практически не изменяются. Эти данные указывают на целенаправленное положительное влияние примененного БАДПГ на печеночный метаболизм гексуроновых кислот и конкретно, конъюгацию билирубина.These data indicate that after the introduction of BADPG to animals after 2 hours (group 2), the level of hexuronic acids in biological fluids increases. The greatest, almost 3-fold increase is observed in blood serum (p <0.001), less, but significant (p <0.01) in urine. In 24 hours (group 3) after the administration of BADPG, the indicators remain stable and practically do not change. These data indicate a targeted positive effect of the applied BADPG on the hepatic metabolism of hexuronic acids and, in particular, the conjugation of bilirubin.

На втором этапе в эксперименте у животных была создана искусственная модель нарушения метаболических процессов. Это достигалось тем, что белым крысам-самцам линии Вистар массой 180-220 г ежедневно, в течение 7 дней, перорально вводили раствор ацетата свинца (АС) в дозе 45 мг/кг массы тела (в пересчете на свинец) (4, 5, 6 группы). После этого животным вводили перорально 3% раствор БАДПГ, разведенный в 0,9% растворе хлористого натрия, в дозе 500 мг/кг. У животных в динамике эксперимента также изучали содержание гексуроновых кислот (в пересчете на глюкуроновую кислоту) и билирубина в сыворотке крови и моче. Забор крови для исследований проводили через 7 дней после завершения введения АС. При этом животным 4 группы исследования проводили до введения БАДПГ. Далее эксперимент продолжался введением БАДПГ как описано выше, при этом через 2 часа (5 группа) и 24 часа (6 группа) после завершения введения БАДПГ вновь производился забор проб биологических жидкостей для исследований. Результаты исследований приведены на таблице 2. Эти данные показывают, что после окончания 7 дневного введения раствора АС у животных 4 группы в крови существенно увеличивается содержание прямого и общего билирубина (р<0,001), (р<0,001) соответственно. Одновременно обнаруживается билирубин в моче, что свидетельствует о развитии гипербилирубинемии. Отмеченное, при этом, в 4 группе животных, содержание гексуроновых кислот в крови падает, более чем в 2 раза (р<0,05), а в моче - растет (р<0,01). Это можно объяснить известным влиянием свинца на блокирование трансфераз, катализирующих перенос глюкуронидной части с УДФГК на билирубин. В результате этого снижается образование глюкуронида-билирубина (прямого билирубина), и как следствие, в крови и в моче повышается содержание как несвязанного (непрямого) билирубина, так и прямого билирубина. Увеличение концентрации в крови связанного (прямого) глюкуронида - билирубина обусловлено блокадой его секреции в желчь. По этой же причине увеличивается и содержание глюкуроновой кислоты в моче. Поскольку с мочой выделяется преимущественно конъюгированный билирубин, его присутствие в моче указывает на конъюгированную гипербилирубинемию.At the second stage, an artificial model of metabolic disturbances was created in animals. This was achieved by the fact that white male Wistar rats weighing 180-220 g daily, for 7 days, were orally administered a solution of lead acetate (AC) at a dose of 45 mg / kg of body weight (in terms of lead) (4, 5, 6 groups). After that, the animals were injected orally with a 3% solution of BADPG, diluted in 0.9% sodium chloride solution, at a dose of 500 mg / kg. In animals, in the dynamics of the experiment, the content of hexuronic acids (in terms of glucuronic acid) and bilirubin in blood serum and urine were also studied. Blood sampling for research was carried out 7 days after the completion of the administration of the AS. In this case, the animals of the 4th group of the study were carried out before the introduction of BAAD. Further, the experiment continued with the introduction of BADPG as described above, while after 2 hours (group 5) and 24 hours (group 6) after completion of the administration of BADPG, samples of biological fluids were again taken for research. The research results are shown in Table 2. These data show that after the end of the 7-day administration of the AC solution in animals of the 4th group, the content of direct and total bilirubin (p <0.001), (p <0.001), respectively, significantly increases in the blood. At the same time, bilirubin is found in the urine, which indicates the development of hyperbilirubinemia. At the same time, noted, in the 4th group of animals, the content of hexuronic acids in the blood falls by more than 2 times (p <0.05), and in the urine - increases (p <0.01). This can be explained by the known effect of lead on the blocking of transferases that catalyze the transfer of the glucuronide moiety from UDPHC to bilirubin. As a result, the formation of glucuronide-bilirubin (direct bilirubin) decreases, and as a result, the content of both unbound (indirect) bilirubin and direct bilirubin increases in the blood and urine. An increase in the concentration of bound (direct) glucuronide - bilirubin in the blood - is due to the blockade of its secretion into bile. For the same reason, the content of glucuronic acid in urine also increases. Since conjugated bilirubin is predominantly excreted in the urine, its presence in the urine indicates conjugated hyperbilirubinemia.

Свинцовая интоксикация и как ее следствие, развивающаяся у животных паренхиматозная желтуха и гипербилирубинемия определяются по многократно повышенному уровня прямого билирубина. Однако введение БАДПГ приводит к прогрессивному падению его содержания в сыворотке крови и исчезновению в моче уже в первые 2 часа после введения (5 группа). При сравнении с 4 группой (р<0,001) общий билирубин, уровень которого был многократно повышен у животных 4 группы, после введения БАДПГ практически не изменяется и его высокое содержание сохраняется на прежнем уровне (р>0,05). При этом у животных 5 и 6 групп также выявляется высокое содержание билирубина в моче, что можно объяснить ускоренным выведением коньюгированного билирубина - глюкуронида билирубина. Эти показатели хорошо коррелируют с данными литературы, приведенными выше. Одновременно с этим отмечено, что содержание гексуроновых кислот в сыворотке крови у животных 4 группы существенно меньше аналогичных значений у интактных животных 1 группы (р<0,05). Однако после введения БАДПГ уровень гексуроновых кислот существенно (почти 5-кратно) повышается в первые 2 часа (5 группа) (р<0,001), максимально нарастая к 24 часам (6 группа) (р<0,001). Такую динамику уровня гексуроновых кислот можно объяснить повышенным расходом БПГ на реакцию коньюгации с билирубином. Это, в значительно степени подтверждается вышеописанным прогрессивным снижением последнего в сыворотке крови (почти в 3 раза) после введения БАДПГ и сохранения значений на низком уровне в течение 2 часов наблюдения (5 группа). Тот факт, что через 2 часа (5 группа) содержание гексуроновых кислот в моче достигает максимального уровня (р<0,001), после чего снова снижается до прежнего уровня (при сравнении 4 и 6 групп р>0,05) свидетельствует о повышенной вовлеченности введенного БАДПГ в конъюгационный процесс. На эту связь указывает повышенное содержание прямого билирубина в сыворотке крови этих групп животных. Эти данные приведены в таблице 3.Lead intoxication and, as a consequence, parenchymal jaundice and hyperbilirubinemia developing in animals are determined by the multiply increased level of direct bilirubin. However, the introduction of BADPG leads to a progressive decrease in its content in the blood serum and disappearance in the urine already in the first 2 hours after administration (group 5). When compared with group 4 (p <0.001), total bilirubin, the level of which was many times increased in animals of group 4, practically does not change after administration of BADPG and its high content remains at the same level (p> 0.05). At the same time, animals of groups 5 and 6 also show a high content of bilirubin in the urine, which can be explained by the accelerated excretion of conjugated bilirubin - bilirubin glucuronide. These indicators correlate well with the literature data given above. At the same time, it was noted that the content of hexuronic acids in the blood serum in animals of group 4 is significantly less than similar values in intact animals of group 1 (p <0.05). However, after the administration of BAAD, the level of hexuronic acids significantly (almost 5-fold) increases in the first 2 hours (group 5) (p <0.001), maximally increasing by 24 hours (group 6) (p <0.001). This dynamics of the level of hexuronic acids can be explained by the increased consumption of BPH for the conjugation reaction with bilirubin. This, to a significant extent, is confirmed by the above-described progressive decrease of the latter in the blood serum (almost 3 times) after the administration of BAAD and maintaining the values at a low level for 2 hours of observation (group 5). The fact that after 2 hours (group 5) the content of hexuronic acids in urine reaches its maximum level (p <0.001), after which it decreases again to the previous level (when comparing 4 and 6 groups, p> 0.05) indicates an increased involvement of the administered BADPG in the conjugation process. This connection is indicated by the increased content of direct bilirubin in the blood serum of these groups of animals. These data are shown in Table 3.

Коэффициент корреляции (r) между содержанием гексуроновых кислот и прямого билирубина в сыворотке крови, а также характер зависимости и количественного выражения достоверности связи между двумя указанными признаками вычисленный по методике (1), показывает, что после введения БАДПГ наблюдается отрицательное значение коэффициента корреляции, что указывает на обратную корреляцию между содержанием гексуроновых кислот и прямого билирубина в сыворотке крови. Значения коэффициента, близкие к единице, свидетельствуют о высокой вероятности связи между этими показателями при применении препарата. Это, в свою очередь, дает основания утверждать об эффективности применения БАДПГ для дезинтоксикации.The correlation coefficient (r) between the content of hexuronic acids and direct bilirubin in the blood serum, as well as the nature of the dependence and quantitative expression of the reliability of the relationship between the two indicated signs, calculated by the method (1), shows that after the introduction of BADPG, a negative value of the correlation coefficient is observed, which indicates on the inverse correlation between the content of hexuronic acids and direct bilirubin in the blood serum. Coefficient values close to one indicate a high probability of a relationship between these indicators when using the drug. This, in turn, gives grounds to assert the effectiveness of the use of BADPG for detoxification.

В случае использования глюкуроидных веществ, каким является БАДПГ, инактивация непрямого, токсичного билирубина достигается за счет восполнения дефицита субстрата для реакции конъюгации, которая завершается образованием глюкуронида билирубина, нетоксичного соединения. Этот комплекс беспрепятственно проходит через почечный барьер и не накапливается в организме, обеспечивая конечный этап детоксикации.In the case of the use of glucuroid substances, such as BADPG, inactivation of indirect, toxic bilirubin is achieved by replenishing the substrate deficiency for the conjugation reaction, which ends with the formation of bilirubin glucuronide, a non-toxic compound. This complex easily passes through the kidney barrier and does not accumulate in the body, providing the final stage of detoxification.

Не менее важным вопросом, который необходимо выделить является функциональные возможности известных, промышленно выпускаемых глюкуроидных препаратов, как на основе гликозаминогликанов, так и на основе их белковых производных протеогликанов.An equally important issue that needs to be highlighted is the functionality of well-known, industrially produced glucuroid preparations, both based on glycosaminoglycans and based on their protein derivatives of proteoglycans.

Главным и основным отличием этих препаратов от используемого в предполагаемом изобретении БАДПГ, является то, что практически все они, без исключения, приготовлены из сырья растительного происхождения или животного происхождения, конкретно из тканей, но не биологических жидкостей парнокопытных или человека, что предопределяет их низкую биосовместимость. Более того, все эти препараты получены из сырья, представляющего классы гликозаминогликанов или протеогликанов, участвующих в построении основного вещества соединительной ткани. Это предопределяет их использование по назначению, связанному с лечением воспалительных процессов, в частности артритов, синовиитов, бурситов и пр., а также косметологических целях, по назначению, связанному с восстановительными операциями тканей и коррекцией вещества соединительной ткани. Главным отличием является то, что все действующие субстраты или компоненты этих препаратов не обладают функциональными способностями к конкретным реакциям коньюгации и не предназначены для детоксикации.The main and main difference between these drugs and the BAAD used in the alleged invention is that almost all of them, without exception, are prepared from raw materials of plant origin or animal origin, specifically from tissues, but not biological fluids of artiodactyls or humans, which determines their low biocompatibility ... Moreover, all these drugs are obtained from raw materials representing the classes of glycosaminoglycans or proteoglycans involved in the construction of the basic substance of connective tissue. This predetermines their use for the intended purpose associated with the treatment of inflammatory processes, in particular arthritis, synovitis, bursitis, etc., as well as for cosmetic purposes, for purposes associated with tissue reconstructive operations and correction of the connective tissue substance. The main difference is that all active substrates or components of these drugs do not have the functional ability for specific conjugation reactions and are not intended for detoxification.

Напротив, предлагаемое использование полностью биосовместимого БАДПГ, имеет существенные преимущества. Прежде всего, следует отметить, что сырье для этого БАДПГ поступает в коньюгированном с эндогенными метаболитами состоянии, т.е. конкретно выделяется препарат, обладающий функциональными свойствами к реакциям коньюгации и, соответственно, с детоксикационными свойствами. В процессе обработки исходного сырья для получения препарата извлекаются преимущественно глюкурониды, тропные к реакциям конъюгации. При выделении и очистки препарата происходит разрушение эфирной связи конъюгата, отделение его от токсического метаболита. Последующий процесс приводит к восстановлению активной формы и растворимости препарата, обеспечивающих его функциональную способность к детоксикации путем реакций коньюгации. Не менее важным является то, что полученный таким способом препарат обладает полифункциональными возможностями, которые заключаются в способности к реакциям коньюгации не только с билирубином, но практически, со всеми представителями эндогенных метаболитов и ядами, с которыми вступает в реакции коньюгацииглюкуроновая кислота, механизм реакций с которыми доказан.On the contrary, the proposed use of a fully biocompatible BAAD has significant advantages. First of all, it should be noted that the raw material for this BADPG comes in a state conjugated with endogenous metabolites, i.e. specifically, a drug is allocated that has functional properties for conjugation reactions and, accordingly, with detoxification properties. In the process of processing the raw material for the preparation of the preparation, mainly glucuronides, tropic to conjugation reactions, are extracted. When the preparation is isolated and purified, the ether bond of the conjugate is destroyed, separating it from the toxic metabolite. The subsequent process leads to the restoration of the active form and solubility of the drug, providing its functional ability to detoxify by conjugation reactions. It is no less important that the drug obtained in this way has polyfunctional capabilities, which consist in the ability to conjugate not only with bilirubin, but practically, with all representatives of endogenous metabolites and poisons with which glucuronic acid enters into conjugation reactions, the reaction mechanism with which proven.

Анализ этих результатов позволяет с высокой степенью достоверности считать доказанным эффективное действие примененного БАДПГ на целенаправленное восстановление реакции конъюгации и соответственно существенное снижение уровня токсических веществ, в частности билирубина, в крови и моче при экспериментально созданной модели паренхиматозной желтухи.The analysis of these results makes it possible to consider with a high degree of reliability proven the effective effect of the used BADPG on the targeted restoration of the conjugation reaction and, accordingly, a significant decrease in the level of toxic substances, in particular bilirubin, in the blood and urine in an experimentally created model of parenchymal jaundice.

Гелевая форма БАДПГ обладает высокой сорбционной активностью, что обусловливает выраженное бактерицидное действие препарата на сальмонеллы, шигеллы и другую патогенную микрофлору кишечника. Основная масса бактерий погибает в течение нескольких часов. При этом нормальная микрофлора кишечника не страдает.The gel form of BADPG has a high sorption activity, which causes a pronounced bactericidal effect of the drug on Salmonella, Shigella and other pathogenic intestinal microflora. The bulk of the bacteria dies within a few hours. In this case, the normal intestinal microflora does not suffer.

Положительное влияние БАДПГ при острых кишечных инфекциях различной этиологии, в частности: энтерколитах, энтерита, вызванным лучевым поражением и других патологических состояниях проявляется в том, что попадая в тонкий кишечник, биокомпоненты БАДПГ снижают кислотность кишечного сока в сторону его нормализации, восстанавливая состав естественной микрофлоры и способствуют снижению количества гнилостной микрофлоры. Одновременно с этим, БАДПГ проявляет целенаправленное бактерицидное действие на патогенную микрофлору, а именно: гемолитическую кишечную палочку, клебсиеллу, грибки рода Candida. Механизм такого бактерицидного действия в определенной степени связан с высокими сорбционными свойствами БАДПГ которые проявляются в способности к прочной фиксации патогенной бактериальной и грибковой микрофлоры с последующим их выведением из организма. Следствием этого является прогрессивное снижение интоксикационного процесса, улучшение клинического состояния пациентов, нормализация лабораторных, биохимических, иммунологических и микробиологических показателей.The positive effect of BADPG in acute intestinal infections of various etiologies, in particular: entercolitis, enteritis caused by radiation injury and other pathological conditions, is manifested in the fact that when entering the small intestine, the biocomponents of BADPG reduce the acidity of intestinal juice towards its normalization, restoring the composition of the natural microflora and help to reduce the amount of putrefactive microflora. At the same time, BADPG exhibits a targeted bactericidal effect on pathogenic microflora, namely: hemolytic Escherichia coli, Klebsiella, Candida fungi. The mechanism of such a bactericidal action is to a certain extent associated with the high sorption properties of BADPG, which are manifested in the ability to firmly fix pathogenic bacterial and fungal microflora with their subsequent elimination from the body. The consequence of this is a progressive decrease in the intoxication process, an improvement in the clinical condition of patients, the normalization of laboratory, biochemical, immunological and microbiological parameters.

Восстановление моторики выделительной функции тонкого и толстого отделов кишечника способствует снижению нагрузки на основные системы детоксикации организма, преимущественно печени и почек, что приводит к ускорению вывода токсических веществ и соответственно устранению причин интоксикации. Важно отметить, что детоксикационное действие биокомпонентов БАДПГ обусловлено высоким, доминирующим содержанием высокомолекулярных производных глюкуроновой кислоты, которая является одним из основных звеньев печеночной детоксикации. Восстановление дефицита этих веществ в организме при попадании биокомпонентов БАДПГ в кровь способствует снижению уровня низко- и среднемолекулярных токсических веществ, в частности: билирубина, группы т.н. «средних молекул», патологических фосфолипидых фракций и ненасыщенных жирных кислот, холестерина, хиломикронов за счет их непосредственного связывания.The restoration of the motility of the excretory function of the small and large parts of the intestine helps to reduce the load on the main detoxification systems of the body, mainly the liver and kidneys, which leads to an acceleration of the removal of toxic substances and, accordingly, the elimination of the causes of intoxication. It is important to note that the detoxifying effect of the biocomponents of BAADPG is due to the high, dominant content of high molecular weight derivatives of glucuronic acid, which is one of the main links of hepatic detoxification. The restoration of the deficiency of these substances in the body when the biocomponents of BADPG enter the blood helps to reduce the level of low- and medium-molecular toxic substances, in particular: bilirubin, the so-called group. "Medium molecules", pathological phospholipid fractions and unsaturated fatty acids, cholesterol, chylomicrons due to their direct binding.

Для подтверждения заявленного в предлагаемом изобретении антимикробном эффекте БАДПГ были проведены следующие исследования.To confirm the antimicrobial effect of BADPG claimed in the present invention, the following studies were conducted.

Изучено влияние гелевой формы БАДПГ на связывание взвеси лифилизированных бактериальных клеток E. Coli in vitro. С этой целью готовилась композиция из 10% геля БАД и взвеси клеток E. Coli в концентрации 2 млрд. кл./1 мл. 0,9% раствора хлористого натрия в соотношении 10:1. Смесь экспонировали в течение 5 минут при температуре 36°С. Контролем служила взвесь туши с размерами микрочастиц от 1 до 10 микрон (Тушь черная, ЗАО «Гамма» РФ) в 0,9% растворе хлористого натрия, в концентрации 0,001 мг/мл раствора. Соотношение гелевой формы БАДПГ и раствора туши составило 10:1.The effect of the gel form of BADPG on the binding of a suspension of lyophilized bacterial E. Coli cells in vitro was studied. For this purpose, a composition was prepared from a 10% dietary supplement gel and a suspension of E. Coli cells at a concentration of 2 billion cells / 1 ml. 0.9% sodium chloride solution in a ratio of 10: 1. The mixture was exposed for 5 minutes at 36 ° C. The control was a suspension of an ink with a size of microparticles from 1 to 10 microns (Black ink, JSC "Gamma" RF) in 0.9% sodium chloride solution, at a concentration of 0.001 mg / ml solution. The ratio of the gel form of BADPG and the ink solution was 10: 1.

Неожиданно установлено, что для устойчивого необратимого связывания гелевой формой БАДПГ бактериальных клеток достаточно 120-150 секунд, причем связывание наблюдалось практически незамедлительно с момента смешивания растворов. Это определялось по субъективному визуальному контролю прозрачности смеси сразу после смешивания и через 60, 150 и 300 секунд после экспозиции. При этом виде контроля наблюдалось несколько фаз состояния гелевой формы БАДПГ, а именно: первоначальное устойчивое состояние в течение, в среднем до 30 секунд, последующее образование видимых мелкодисперсных агрегатов в течение, в среднем, 60 секунд, с незначительным оседанием, и интенсивное оседание суспензии агрегатов после этого периода в течение, в среднем 300 секунд.Surprisingly, it was found that for stable irreversible binding of bacterial cells by the gel form of BADPG, 120-150 seconds is sufficient, and binding was observed almost immediately from the moment of mixing the solutions. This was determined by subjective visual control of the transparency of the mixture immediately after mixing and after 60, 150 and 300 seconds after exposure. With this type of control, several phases of the state of the gel form of BADPG were observed, namely: the initial stable state for, on average, up to 30 seconds, the subsequent formation of visible fine aggregates for, on average, 60 seconds, with insignificant settling, and intensive settling of the suspension of the aggregates after this period for an average of 300 seconds.

К окончанию этого периода процесс оседания и уплотнения агрегатов практически завершается. Надосадочная жидкость полностью освобождается от остатков единичных микроагрегатов и становится прозрачной. Эти данные представлены на Фиг 2. (изображение №4). Аналогичная картина в сроках экспозиции и осадочной реакцией наблюдалась с частицами туши. Эти данные также представлены на Фиг 1. (изображение №4).By the end of this period, the process of subsidence and compaction of the units is practically completed. The supernatant liquid is completely freed from the residues of single microaggregates and becomes transparent. These data are presented in Fig 2. (image No. 4). A similar picture in terms of exposure and sedimentary reaction was observed with carcass particles. These data are also presented in Fig. 1. (Image No. 4).

Для объективного контроля проводилось нефелометрическое исследование образцов композиции гелевой формы БАДПГ с взвесью бактериальных клеток и туши в следующих временных интервалах: сразу после смешивания компонентов, и последующими через 60 сек., 120 сек, 180 сек, 240 сек. Исследования проводили на лазерном нефелометре «…» в одноразовых спектрофотометрических микрокюветах «Литопласт» производства Белорусь, объемом 4 мл. Данные представлены в таблице 4 (Изменение нефелометрического показателя (в %) в динамике фиксации БАДПГ), где показаны изменение нефелометрического показателя (в %) в динамике фиксации БАДПГ бактериальной взвеси (светлый фон) и туши (контроль) (черный фон). На Фиг. 1, 2. Показано, что фиксация бактерий и туши начинается практически сразу после смешивания компонентов заканчивается в интервале 150-300 сек. Как видно на изображении №4 Фиг. 2., надосадочная жидкость полностью освобождена от микроагрегатов геля с бактериальными клетками. Аналогично этому, на изображении №4 Фиг. 1. видно, что надосадочная жидкость полностью освобождена от микроагрегатов геля с частицами туши. Т.е. гелевая форма БАДПГ полностью, практически на 100% связала бактериальные клетки и микрочастицы туши.For objective control, a nephelometric study of samples of the composition of the gel form of BADPG with a suspension of bacterial cells and carcasses was carried out in the following time intervals: immediately after mixing the components, and subsequent after 60 sec., 120 sec., 180 sec, 240 sec. The studies were carried out on a laser nephelometer "..." in disposable spectrophotometric microcuvettes "Litoplast" manufactured by Belarus, with a volume of 4 ml. The data are presented in Table 4 (Change in the nephelometric indicator (in%) in the dynamics of BADPG fixation), which shows the change in the nephelometric indicator (in%) in the dynamics of BADPG fixation of the bacterial suspension (light background) and carcasses (control) (black background). FIG. 1, 2. It is shown that the fixation of bacteria and carcasses begins almost immediately after mixing the components and ends in the interval of 150-300 sec. As seen in image # 4 of FIG. 2., the supernatant is completely freed from the gel microaggregates with bacterial cells. Similarly, in the No. 4 image of FIG. 1. it can be seen that the supernatant liquid is completely freed from the microaggregates of the gel with the particles of the ink. Those. the gel form of BADPG completely, almost 100% bound bacterial cells and mascara microparticles.

Из представленных данных можно сделать вывод о том, что показания субъективного контроля и объективных показателей, основанных на нефелометрии полностью совпадают и однозначны. Их интерпретация дает возможность подтвердить факт селективного, прочного связывания гелевой формой исследованной БАДПГ как высоконцентрированной взвеси леофилизированных бактерий, так и индифферентных микрочастиц, конкретно, туши.From the presented data, it can be concluded that the indications of subjective control and objective indicators based on nephelometry completely coincide and are unambiguous. Their interpretation makes it possible to confirm the fact of selective, strong binding by the gel form of the studied BAADPG as a highly concentrated suspension of leophilized bacteria, and indifferent microparticles, in particular, carcasses.

Таким образом, подтверждается способность гелевой формы БАДПГ к целенаправленному и высоконасыщенному связыванию бактериальных клеток с возможностью их дальнейшего выведения из организма. В пересчете на концентрацию и объем БАДПГ в одной микрокапсуле можно утверждать, что ее достаточно для связывания не менее 10 млрд. бактериальных клеток. При пероральном приеме 3-4 капсул в течение 2-6 часов будет фиксировано не менее 30-40 млрд. бактериальных клеток, что, несомненно, существенно уменьшит количество патогенной микрофлоры в кишечнике и снимет интенсивность интоксикации.Thus, the ability of the gel form of BADPG to purposefully and highly saturated binding of bacterial cells with the possibility of their further removal from the body is confirmed. In terms of the concentration and volume of BADPG in one microcapsule, it can be argued that it is sufficient to bind at least 10 billion bacterial cells. With oral administration of 3-4 capsules within 2-6 hours, at least 30-40 billion bacterial cells will be fixed, which will undoubtedly significantly reduce the amount of pathogenic microflora in the intestine and relieve the intensity of intoxication.

Способ реализуется следующим образомThe method is implemented as follows

Исходный раствор, расфасованный в стеклянную тару, объемом 120 мл, содержащий протеогликаны и гликозаминогликаны в концентрации 1 гр./100 мл, в консерванте (0,1N раствор гидроксида натрия), в виде мелкодисперсной, быстро оседающей (в течение не более 5 минут) взвеси белого цвета, изготовлен и любезно предоставлен ООО «Медико-Биологические Системы», РФ, по ТУ 20.42.15-001-23245342-2017 «БИОГЕЛЬ НА ОСНОВЕ ПРОТЕОГЛИКАНОВ». Получен по технологическому процессу, разработанному на основании патента №2621311 «Способ получения протеогликана» автор Б.И. Асатуров. Состав исходного раствора представлен на стр. 24 «Результаты анализа биогеля на основе протеогликанов и гликозаминогликанов» и таблице 1.The stock solution, packaged in glass containers, with a volume of 120 ml, containing proteoglycans and glycosaminoglycans at a concentration of 1 g / 100 ml, in a preservative (0.1N sodium hydroxide solution), in the form of a finely dispersed, rapidly settling (within no more than 5 minutes) suspensions of white color, manufactured and kindly provided by LLC "Mediko-Biological Systems", RF, according to TU 20.42.15-001-23245342-2017 "BIOGEL BASED ON PROTEOGLYCANS". Obtained according to the technological process developed on the basis of patent No. 2621311 "Method for obtaining proteoglycan" by B.I. Asaturov. The composition of the initial solution is presented on page 24 "Results of the analysis of biogel based on proteoglycans and glycosaminoglycans" and Table 1.

Исходный 1% раствор, экспонируется в течение не менее 10-30 минут, предпочтительно, 20 минут, при комнатной температуре для полного оседания агрегатов и формирования устойчивого плотного осадка. Затем надосадочная жидкость осторожно, максимально возможно полностью отделяется, осадок переносится в центрифужные стаканы и центрифугируется при 1000 об/мин в течение 30-60 секунд, предпочтительно, в течение 45 секунд. Центрифугат представляет осадок белого цвета имеющий четкую разделительную линию с надосадочной жидкостью, которая осторожно сливается. К осадку, имеющем рН 9,0-9,3 при осторожном перемешивании добавляют для нейтрализации 0,1N раствор соляной кислоты, доводя раствор до значений рН 7,8-8,2, предпочтительно, рН 8,0. При этом плотный осадок, изменяет свою консистенцию, превращается в полупрозрачный светлый, опалесцирующий биогель, который представляет концентрат, в общей массе - соотношение составляет 40-55% гель/раствор - 0,9% хлорид натрия. Полностью растворим в воде. По результатам анализов состав конечный продукт представляет гелевую форму с концентрацией протеогликанов и гликозаминогликанов до 80% об общей массы компонентов. Основная часть углеводных компонентов и их производных (аминосахара, ди- и моносахариды, комплексы с глюкуроновой кислотой), характерных для структурных единиц протеогликанов и гликозаминогликанов, в основном хондроитинсульфатов и кератансульфатов, обнаружены во фракции, которая представляет собой осадок, полученный в результате предварительной подготовки образца (центрифугирование). В данной фракции углеводные компоненты составляют до 80% от общего состава фракции. Детализация анализа образцов биогеля представлена в таблице 2.The initial 1% solution is exposed for at least 10-30 minutes, preferably 20 minutes, at room temperature for complete settling of the aggregates and the formation of a stable dense sediment. The supernatant is then carefully, as completely as possible, separated, the precipitate is transferred to centrifuge beakers and centrifuged at 1000 rpm for 30-60 seconds, preferably 45 seconds. The centrifugate is a white precipitate with a clear dividing line with the supernatant, which is carefully drained off. A 0.1 N hydrochloric acid solution is added to the precipitate having a pH of 9.0-9.3 with gentle stirring to neutralize the solution to pH 7.8-8.2, preferably pH 8.0. In this case, the dense sediment changes its consistency, turns into a translucent light, opalescent biogel, which is a concentrate, in the total mass - the ratio is 40-55% gel / solution - 0.9% sodium chloride. Let's completely dissolve in water. According to the results of the analyzes, the composition of the final product is a gel form with a concentration of proteoglycans and glycosaminoglycans up to 80% by the total mass of the components. The bulk of carbohydrate components and their derivatives (amino sugars, di- and monosaccharides, complexes with glucuronic acid) characteristic of the structural units of proteoglycans and glycosaminoglycans, mainly chondroitin sulfates and keratan sulfates, are found in the fraction, which is a precipitate obtained as a result of preliminary sample preparation (centrifugation). In this fraction, carbohydrate components make up 80% of the total composition of the fraction. The detailed analysis of biogel samples is presented in Table 2.

Полученный концентрат биогеля по одному из вариантов получения БАДПГ расфасовывается в мягкие желудочно-резистентные капсулы, обеспечивающие высвобождение лекарственных средств в кишечном соке.The obtained biogel concentrate according to one of the variants of obtaining BAADPG is packaged in soft gastro-resistant capsules, providing the release of drugs in intestinal juice.

По второму варианту получения БАДПГ концентрат биогеля сублимируется до твердого состояния в течение не менее 10-14 часов, предпочтительно 12 часов, при -2 - -6°С, предпочтительно -4°С. После окончания сублимационной сушки плотный, твердый, хрупкий продукт светло-коричневого оттенка, размельчается в фарфоровой чашке и проводится через сетчатый фильтр с размером сетки 500 микрон. Порошок расфасовывается в твердые желудочно-резистентные капсулы. Готовый конечный продукт сохраняет свой состав и растворимость в течение не менее 6 месяцев.According to the second variant of BADPG production, the biogel concentrate is sublimated to a solid state for at least 10-14 hours, preferably 12 hours, at -2 - -6 ° C, preferably -4 ° C. After the end of freeze drying, a dense, hard, brittle product with a light brown color is crushed in a porcelain cup and passed through a 500 micron mesh filter. The powder is packaged in hard gastro-resistant capsules. The finished final product retains its composition and solubility for at least 6 months.

Предлагаемый способ решает задачу получения из биологической жидкости - мочи парнокопытных животных или человека биоадптивных БАДПГ для применения в качестве средств, способствующих повышению эффективности лечебной терапии, а также профилактике развития тяжелых заболеваний организма различной этиологии. Получаемые БАДПГ преимущественно состоят из природных биологически активных веществ, таких как протеогликаны и гликозаминогликаны, которые биодаптивны, являются естественными и жизненно незаменимыми метаболитами организма млекопитающих. При реализации способа конечный продукт получается в порошкообразном состоянии или в виде концентрированного геля, сохраняет высокую биологическую активность, высокоочищен, не содержит вредных и опасных химических веществ, сбалансирован по органолептическим показателям, не обладает запахом и вкусом. Окончательная форма выпуска и применения БАДПГ находится в желудочно-резистентных капсулах, которые обеспечивают сохранность продукта от воздействия желудочного сока на структуру и биологические свойства протеогликанов и гликозаминогликанов (11). При этом собственная кислотность БАДПГ внутри капсул не превышает рН 8,2-8,3, что безопасно для пациента и не превышает кислотность кишечного сока толстой кишки, которая находится в пределах рН 8,5-8,6 (18).The proposed method solves the problem of obtaining from biological fluid - urine of cloven-hoofed animals or humans bioadptive BADPG for use as a means of improving the effectiveness of therapeutic therapy, as well as prevention of the development of severe diseases of the body of various etiology. The resulting BADPGs mainly consist of natural biologically active substances such as proteoglycans and glycosaminoglycans, which are bio-responsive and are natural and vital metabolites of the mammalian body. When implementing the method, the final product is obtained in a powdery state or in the form of a concentrated gel, retains high biological activity, is highly purified, does not contain harmful and hazardous chemicals, is balanced in terms of organoleptic characteristics, does not have a smell and taste. The final form of the release and application of BAAD is in gastro-resistant capsules, which ensure the safety of the product from the effects of gastric juice on the structure and biological properties of proteoglycans and glycosaminoglycans (11). At the same time, the intrinsic acidity of BADPG inside the capsules does not exceed pH 8.2-8.3, which is safe for the patient and does not exceed the acidity of the intestinal juice of the large intestine, which is in the range of pH 8.5-8.6 (18).

Предполагаемое изобретение далее описано более подробно в примерах, которые, однако, не ограничивают объем изобретения.The alleged invention is further described in more detail in the examples, which, however, do not limit the scope of the invention.

Пример 1.Example 1.

Опыты проводили на 30 половозрелых белых крысах-самцах линии Вистар массой 180-220 г, разделенных на 3 группы по 10 животных в каждой (1, 2 и 3 группы). Все животные до и в течение эксперимента находились на стандартном режиме питания.The experiments were carried out on 30 sexually mature white male Wistar rats weighing 180-220 g, divided into 3 groups of 10 animals each (1, 2 and 3 groups). All animals before and during the experiment were on a standard diet.

Первая группа животных - интактные. Животные 2 и 3 групп - контрольные группы. Животным второй группы перорально капельно, со скоростью 20 кап/мин, в течение 2,5 минут вводился согретый до +25°С 20% раствор БАДПГ на 0,9% растворе хлористого натрия. После экспозиции в течение 2 часов всех животных декапитировали. Собранную кровь отстаивали в холодильнике при 1-0°С в течение 1 часа до образования сыворотки, после чего проводили исследования.The first group of animals is intact. Animals of groups 2 and 3 are control groups. The animals of the second group were administered orally drip, at a rate of 20 drops / min, for 2.5 minutes, warmed to + 25 ° C, a 20% solution of BADPG in 0.9% sodium chloride solution. After exposure for 2 hours, all animals were decapitated. The collected blood was defended in a refrigerator at 1-0 ° C for 1 hour until the formation of serum, after which the studies were carried out.

Животным третьей группы в перорально капельно, со скоростью 20 кап/мин, в течение 2,5 минут вводился согретый до +25°С 20% раствор БАДПГ на 0,9% растворе хлористого натрия. После экспозиции в течение 24 часов всех животных декапитировали. Собранную кровь отстаивали в холодильнике при 1-0°С в течение 1 часа до образования сыворотки, после чего проводили исследования.The animals of the third group were injected orally with a drip at a rate of 20 drops / min for 2.5 minutes, warmed to + 25 ° C, a 20% solution of BADPG in 0.9% sodium chloride solution. After exposure for 24 hours, all animals were decapitated. The collected blood was defended in a refrigerator at 1-0 ° C for 1 hour until the formation of serum, after which the studies were carried out.

Мочу получали в накопителе применяемого нами устройства, выделяемым животным до декапитации. При этом, предварительно, за 4 часа до начала эксперимента, крысам создавали водную нагрузку в количестве 2-5% от веса животного путем внутрижелудочного введения 5 мл воды. Собранную мочу фильтровали через мелкосетчатый фильтр, не центрифугировали, и использовали для исследования.The urine was obtained in the storage device of the device we used, which was secreted by the animals before decapitation. In this case, preliminary, 4 hours before the start of the experiment, the rats were given a water load in the amount of 2-5% of the animal's weight by intragastric administration of 5 ml of water. The collected urine was filtered through a fine mesh filter, not centrifuged, and used for research.

Материалы для исследований - кровь и мочу животных получали следующим образом. Во всех случаях кровь получали после декапитации животного. Мочу получали в накопителе применяемого нами устройства, выделяемым животным до декапитации. При этом, исходя из рекомендаций (10) предварительно, за 4 часа до начала эксперимента, крысам создавали водную нагрузку в количестве 2-5% от веса животного путем внутрижелудочного введения 5 мл воды.Materials for research - blood and urine of animals were obtained as follows. In all cases, blood was obtained after decapitation of the animal. The urine was obtained in the storage device of the device we used, which was secreted by the animals before decapitation. At the same time, based on the recommendations (10), preliminary, 4 hours before the start of the experiment, the rats were given a water load in the amount of 2-5% of the animal's weight by intragastric administration of 5 ml of water.

У животных всех групп изучали содержание гексуроновых кислот (в пересчете на глюкуроновую кислоту) в сыворотке крови и моче карбазоловым методом (3) Определение общего и прямого билирубина в сыворотке крови проводили по методу Jendrassik, Grof (21) на автоматизированном анализаторе "Humalizer 3000" Human, Германия. Определение прямого билирубина в моче проводили и использованием тест полосок "DiruiH-10" с последующим качественным и полуколичественном определении на анализаторе "DiruiH-100", производитель - "DiruiIndustrialGroupCo.", Ltd, Китай.In animals of all groups, the content of hexuronic acids (in terms of glucuronic acid) in blood serum and urine was studied by the carbazole method (3) Determination of total and direct bilirubin in blood serum was carried out according to the Jendrassik, Grof method (21) on an automated analyzer "Humalizer 3000" Human , Germany. Determination of direct bilirubin in urine was carried out using test strips "DiruiH-10" followed by qualitative and semi-quantitative determination on an analyzer "DiruiH-100", manufacturer - "DiruiIndustrialGroupCo.", Ltd, China.

Полученные результаты биохимического анализа биологических жидкостей приведены в таблице 2. Вероятность различий результатов по отношению к контролю не превышает 0,05, что находится в пределах нормы и свидетельствует о статистической достоверности данных.The obtained results of biochemical analysis of biological fluids are shown in Table 2. The probability of differences in the results in relation to the control does not exceed 0.05, which is within the normal range and indicates the statistical reliability of the data.

Пример 2.Example 2.

Опыты проводили на 30 половозрелых белых крысах-самцах линии Вистар массой 180-220 г, разделенных на 3 группы по 10 животных в каждой (4, 5 и 6 группы). Все животные до и в течение эксперимента находились на стандартном режиме питания.The experiments were carried out on 30 sexually mature white male Wistar rats weighing 180-220 g, divided into 3 groups of 10 animals each (4, 5 and 6 groups). All animals before and during the experiment were on a standard diet.

Экспериментальную модель нарушения метаболических процессов с развитием печеночно-клеточной недостаточности и гипербилирубинемии создавали по схеме, которая достигалась тем, что всем 30 животным 4, 5 и 6 групп - белым крысам-самцам линии Вистар массой 180-220 г ежедневно, в течение 7 дней, перорально вводили раствор ацетата свинца (АС) в дозе 45 мг/кг массы тела (в пересчете на свинец). Для получения указанного раствора навеску ацетата свинца массой 3,5313 г растворяли в 100 мл воды, перемешивали на магнитной мешалке, после чего переливали в мерную колбу вместимостью 250 мл. Для подавления гидролиза ионов свинца и ацетат ионов к полученному раствору прибавляли 0,2 мл 0,1 моль/л раствора уксусной кислоты до исчезновения мутной взвеси. Затем раствор доводили водой до верхней метки колбы. Один мл приготовленного раствора АС содержит 9 мг ионов свинца.An experimental model of metabolic disturbances with the development of hepatocellular insufficiency and hyperbilirubinemia was created according to the scheme, which was achieved by the fact that all 30 animals of groups 4, 5 and 6 - white male Wistar rats weighing 180-220 g daily, for 7 days, a solution of lead acetate (AC) was administered orally at a dose of 45 mg / kg of body weight (in terms of lead). To obtain the specified solution, a weighed portion of lead acetate weighing 3.5313 g was dissolved in 100 ml of water, stirred on a magnetic stirrer, and then poured into a volumetric flask with a capacity of 250 ml. To suppress the hydrolysis of lead ions and acetate ions, 0.2 ml of 0.1 mol / L acetic acid solution was added to the resulting solution until the cloudy suspension disappeared. Then the solution was brought up to the top mark of the flask with water. One ml of the prepared AC solution contains 9 mg of lead ions.

Материалы для исследований - кровь и мочу животных получали следующим образом. Во всех случаях кровь получали после декапитации животного. Собранную кровь отстаивали в холодильнике при 1-0°С в течение 1 часа до образования сыворотки, после чего проводили исследования.Materials for research - blood and urine of animals were obtained as follows. In all cases, blood was obtained after decapitation of the animal. The collected blood was defended in a refrigerator at 1-0 ° C for 1 hour until the formation of serum, after which the studies were carried out.

Мочу получали в накопителе применяемого нами устройства, выделяемым животным до декапитации. Собранную мочу фильтровали через мелкосетчатый фильтр, не центрифугировали, и использовали для исследования. При этом, исходя из рекомендаций (10) предварительно, за 4 часа до начала эксперимента, крысам создавали водную нагрузку в количестве 2-5% от веса животного путем внутрижелудочного введения 5 мл воды.The urine was obtained in the storage device of the device we used, which was secreted by the animals before decapitation. The collected urine was filtered through a fine mesh filter, not centrifuged, and used for research. At the same time, based on the recommendations (10), preliminary, 4 hours before the start of the experiment, the rats were given a water load in the amount of 2-5% of the animal's weight by intragastric administration of 5 ml of water.

У животных этой группы изучали содержание гексуроновых кислот (в пересчете на глюкуроновую кислоту) в сыворотке крови и моче карбазоловым методом (3). Определение общего и прямого билирубина в сыворотке крови проводили по методу (Jendrassik, Grof) (21) на автоматизированном анализаторе "Humalizer 3000" Human, Германия. Определение прямого билирубина в моче проводили и использованием тест полосок "DiruiH-10" с последующим качественным и полуколичественном определении на анализаторе "DiruiH-100", производитель - "DiruiIndustrialGroupCo.", Ltd, Китай.In animals of this group, the content of hexuronic acids (in terms of glucuronic acid) in blood serum and urine was studied by the carbazole method (3). Determination of total and direct bilirubin in blood serum was carried out according to the method (Jendrassik, Grof) (21) on an automated analyzer "Humalizer 3000" Human, Germany. Determination of direct bilirubin in urine was carried out using test strips "DiruiH-10" followed by qualitative and semi-quantitative determination on an analyzer "DiruiH-100", manufacturer - "DiruiIndustrialGroupCo.", Ltd, China.

Четвертая группа животных служила контролем для сравнения с 5 и 6 группами животных и им не вводился БАДПГ. После окончания введения в течение 7 дней АС, на восьмой день животных декапитировали.The fourth group of animals served as a control for comparison with groups 5 and 6 of animals and did not receive BADPG. After the end of the administration within 7 days of the AC, on the eighth day the animals were decapitated.

Животным пятой группы после окончания введения в течение 7 дней АС, на восьмой день перорально капельно, со скоростью 20 кап/мин, в течение 2,5 минут вводился согретый до +25°С 20% раствор БАДПГ на 0,9% растворе хлористого натрия. После экспозиции в течение 2 часов всех животных декапитировали. Собранную кровь и мочу исследовали.Animals of the fifth group after the end of the administration within 7 days of AS, on the eighth day orally drip, at a rate of 20 drops / min, for 2.5 minutes, warmed up to + 25 ° C 20% solution of BADPG in 0.9% sodium chloride solution was injected ... After exposure for 2 hours, all animals were decapitated. The collected blood and urine were examined.

Животным шестой группы после окончания введения в течение 7 дней АС, на восьмой день перорально капельно, со скоростью 20 кап/мин, в течение 2,5 минут вводился согретый до +25°С 20% раствор БАДПГ на 0,9% растворе хлористого натрия. После экспозиции в течение 24 часов всех животных декапитировали. Собранную кровь и мочу исследовали.Animals of the sixth group after the end of the administration within 7 days of AS, on the eighth day orally drip, at a rate of 20 drops / min, for 2.5 minutes, warmed up to + 25 ° C, 20% solution of BADPG on 0.9% sodium chloride solution was injected ... After exposure for 24 hours, all animals were decapitated. The collected blood and urine were examined.

Полученные результаты биохимического анализа биологических жидкостей приведены в таблице 2. Вероятность различий результатов по отношению к контролю не превышает 0,05, что находится в пределах нормы и свидетельствует о статистической достоверности данных.The obtained results of biochemical analysis of biological fluids are shown in Table 2. The probability of differences in the results in relation to the control does not exceed 0.05, which is within the normal range and indicates the statistical reliability of the data.

Пример 3.Example 3.

Изучение "острой" токсичности БАДГП проведено методом Кербера (13, 14) Опыты проводились на 20 белых крысах-самцах линии Вистар, массой 180-220 г путем перорального введения 5 мл 10% раствора БАДПГ на 0,9% растворе хлористого натрия, в дозе 3500 мг/кг массы тела. После одноразового введения за время наблюдения в течение 14 дней, гибели животных не отмечалось. Это что позволило определить LD₅₀ при пероральном введении >3500 мг/кг. Согласно классификации токсических веществ (13, 14) исследованный препарат относится к группе малотоксичных веществ.The study of the "acute" toxicity of BAADHP was carried out by the Kerber method (13, 14). Experiments were carried out on 20 white male Wistar rats weighing 180-220 g by oral administration of 5 ml of 10% BAADPG solution in 0.9% sodium chloride solution, in a dose 3500 mg / kg body weight. After a single injection during the observation period of 14 days, no deaths of animals were noted. This made it possible to determine the LD ₅₀ after oral administration> 3500 mg / kg. According to the classification of toxic substances (13, 14), the studied drug belongs to the group of low-toxic substances.

Пример 4.Example 4.

Изучение "острой" токсичности препарата БАДГП проведено методом Кербера (13). Опыты проводились на 20 белых крысах-самцах массой 180-220 г путем введения в хвостовую вену 16 мл 3% раствора БАДПГ на 0,9% растворе хлористого натрия, согретого до 25С, в дозе 3500 мг/кг массы тела. После одноразового введения за время наблюдения в течение 14 дней гибели животных не отмечалось, что позволило определить LD₅₀ при пероральном введении >3500 мг/кг. Согласно классификации токсических веществ (13.14) исследованный препарат относится к группе малотоксичных веществ.The study of the "acute" toxicity of the drug BAHP was carried out by the Kerber method (13). The experiments were carried out on 20 male white rats weighing 180-220 g by injecting into the tail vein 16 ml of a 3% BAADPG solution in 0.9% sodium chloride solution, warmed to 25C, at a dose of 3500 mg / kg body weight. After a single administration, no deaths of animals were noted during the observation period of 14 days, which made it possible to determine the LD ₅₀ after oral administration> 3500 mg / kg. According to the classification of toxic substances (13.14), the investigated drug belongs to the group of low-toxic substances.

Пример 5.Example 5.

Пример реализации способа получения БАД в виде гелевой формы протеогликанов и гликозаминогликанов.An example of the implementation of the method for producing dietary supplements in the form of a gel form of proteoglycans and glycosaminoglycans.

Полученный по способу («Способ получения протеогликана». Патент 2621311 (2), 1% раствор, в количестве 100 мл, содержащий протеогликаны и гликозаминогликаны в виде мелкодисперсной взвеси в консерванте (0,1N раствор гидроксида натрия), экспонировался в течение 20 минут, при комнатной температуре для полного оседания агрегатов и формирования устойчивого плотного осадка. Затем надосадочная жидкость осторожно, максимально возможно полностью отделялась, осадок переносился в центрифужные стаканы и центрифугировался при 1000 об/мин в течение 45 секунд. Центрифугат представлял осадок белого цвета имеющий четкую разделительную линию с надосадочной жидкостью, которая осторожно сливалась. К осадку, имеющем рН 9,0-9,3 при осторожном перемешивании добавляют для нейтрализации 0,1N раствор соляной кислоты, доводя раствор до значений рН 8,0. При этом плотный осадок, изменял свою консистенцию, превращался в полупрозрачный светлый, опалесцирующий биогель, который представляет полностью растворимый в воде концентрат, в общей массе - соотношение составляет 40-55% гель/раствор - 0,9% хлорид натрия. По результатам анализов состав конечный продукт представлял гелевую форму протеогликанов и гликозаминогликанов с концентрацией до 80% об общей массы компонентов.Obtained by the method ("Method of obtaining proteoglycan". Patent 2621311 (2), 1% solution, in an amount of 100 ml, containing proteoglycans and glycosaminoglycans in the form of a fine suspension in a preservative (0.1N sodium hydroxide solution), was exposed for 20 minutes, at room temperature for complete sedimentation of the aggregates and the formation of a stable dense sediment. Then the supernatant liquid was carefully, as completely as possible, completely separated, the sediment was transferred into centrifuge beakers and centrifuged at 1000 rpm for 45 seconds. The centrifugate was a white sediment with a clear dividing line with the supernatant liquid, which was carefully drained.To the sediment, having a pH of 9.0-9.3 with gentle stirring, add 0.1N hydrochloric acid solution to neutralize, bringing the solution to pH 8.0. At the same time, the dense sediment changed its consistency, transformed into a translucent light, opalescent biogel, which is completely soluble in water concentrate, in total mass - the ratio is 40-55% gel / solution - 0.9% sodium chloride. According to the analysis results, the composition of the final product was a gel form of proteoglycans and glycosaminoglycans with a concentration of up to 80% of the total mass of the components.

Полученный концентрат гелевой формы протеогликанов и гликозаминогликанов расфасовывался в желудочно-резистентные мягкие капсулы, объемом, в среднем 0,5 мл, после чего БАД использовалась по назначению.The obtained concentrate of the gel form of proteoglycans and glycosaminoglycans was packed in gastro-resistant soft capsules, with a volume of 0.5 ml on average, after which the dietary supplement was used as intended.

Пример 6.Example 6.

Пример реализации способа получения БАД в виде твердой формы порошка протеогликанов и гликозаминогликанов.An example of the implementation of the method for producing dietary supplements in the form of a solid powder of proteoglycans and glycosaminoglycans.

Полученный по способу («Способ получения протеогликана». Патент 2621311 (2), 1% раствор, в количестве 100 мл, содержащий протеогликаны и гликозаминогликаны в виде мелкодисперсной взвеси в консерванте (0,1N раствор гидроксида натрия), экспонировался в течение 20 минут, при комнатной температуре для полного оседания агрегатов и формирования устойчивого плотного осадка. Затем надосадочная жидкость осторожно, максимально возможно полностью отделялась, осадок переносился в центрифужные стаканы и центрифугировался при 1000 об/мин в течение 45 секунд. Центрифугат представлял осадок белого цвета имеющий четкую разделительную линию с надосадочной жидкостью, которая осторожно сливалась. К осадку, имеющем рН 9,0-9,3 при осторожном перемешивании добавляют для нейтрализации 0,1N раствор соляной кислоты, доводя раствор до значений рН 8,0. При этом плотный осадок, изменял свою консистенцию, превращался в полупрозрачный светлый, опалесцирующий биогель, который представляет полностью растворимый в воде концентрат, в общей массе - соотношение составляет 40-55% гель/раствор - 0,9% хлорид натрия. По результатам анализов состав конечный продукт представлял гелевую форму протеогликанов и гликозаминогликанов с концентрацией до 80% об общей массы компонентов.Obtained by the method ("Method of obtaining proteoglycan". Patent 2621311 (2), 1% solution, in an amount of 100 ml, containing proteoglycans and glycosaminoglycans in the form of a fine suspension in a preservative (0.1N sodium hydroxide solution), was exposed for 20 minutes, at room temperature for complete sedimentation of the aggregates and the formation of a stable dense sediment. Then the supernatant liquid was carefully, as completely as possible, completely separated, the sediment was transferred into centrifuge beakers and centrifuged at 1000 rpm for 45 seconds. The centrifugate was a white sediment with a clear dividing line with the supernatant liquid, which was carefully drained.To the sediment, having a pH of 9.0-9.3 with gentle stirring, add 0.1N hydrochloric acid solution to neutralize, bringing the solution to pH 8.0. At the same time, the dense sediment changed its consistency, transformed into a translucent light, opalescent biogel, which is completely soluble in water concentrate, in total mass - the ratio is 40-55% gel / solution - 0.9% sodium chloride. According to the analysis results, the composition of the final product was a gel form of proteoglycans and glycosaminoglycans with a concentration of up to 80% of the total mass of the components.

Полученный концентрат гелевой формы протеогликанов и гликозаминогликанов сублимировался до твердого состояния в течение 12 часов, при -4°С. После окончания сублимационной сушки плотный, твердый, хрупкий продукт светло-коричневого оттенка, размельчался в фарфоровой чашке и пропускался через сетчатый фильтр с размером сетки 500 микрон. Порошок расфасовывался в твердые желудочно-резистентные желатиновые капсулы после чего БАД использовалась по назначению.The resulting concentrate of the gel form of proteoglycans and glycosaminoglycans was sublimated to a solid state within 12 hours at -4 ° C. After the end of freeze drying, a dense, hard, brittle product of light brown color was crushed in a porcelain cup and passed through a 500 micron mesh filter. The powder was packaged in hard gastro-resistant gelatin capsules after which the dietary supplement was used as directed.

Предлагаемое изобретение было объяснено в приведенном выше описании в соответствии с приведенными примерами, не ограничивающими объем настоящего изобретения. Следует считать, что все варианты, включающие приведенную ниже формулу изобретения, находятся в пределах объема настоящего изобретения.The present invention has been explained in the above description in accordance with the examples given, without limiting the scope of the present invention. It should be considered that all variations including the following claims are within the scope of the present invention.

Результаты анализа биогеля на основе протеогликанов и гликозаминогликановBiogel analysis results based on proteoglycans and glycosaminoglycans

В данном исследовании в качестве основной задачи было поставлено обнаружение и подтверждение присутствия в образцах компонентов, относящихся к классу углеводов (моно- и дисахаридов) и их производных, в частности, глюкуроновой кислоты.In this study, the main task was the detection and confirmation of the presence in samples of components belonging to the class of carbohydrates (mono- and disaccharides) and their derivatives, in particular, glucuronic acid.

При этом необходимо учитывать, что в виде некоторых специфичных характеристик реакции неизбирательного химического дегликозилирования, в большей степени ожидаемо обнаружение свободной глюкуроновой кислоты, а также десульфатированных углеводных остатков, так как в ходе реакции большая часть тиоэфирных связей будет разрушено.It should be borne in mind that in the form of some specific characteristics of the reaction of nonselective chemical deglycosylation, the detection of free glucuronic acid, as well as desulfated carbohydrate residues, is more expected, since during the reaction most of the thioether bonds will be destroyed.

В результате проведенного анализа фракций образца 1 были сделаны следующие выводы:As a result of the analysis of the fractions of sample 1, the following conclusions were drawn:

1. Образец 1 представляет гелевую форму с концентрацией протеогликанов и гликозаминогликанов до 80% об общей массы компонентов.1. Sample 1 is a gel form with a concentration of proteoglycans and glycosaminoglycans up to 80% by volume of the components.

2. Основная часть углеводных компонентов и их производных (аминосахара, ди- и моносахариды, комплексы с глюкуроновой кислотой), характерных для структурных единиц протеогликанов и гликозаминогликанов, в основном хондроитинсульфатов и кератансульфатов, обнаружены во фракции, которая представляет собой осадок, полученный в результате предварительной подготовки образца (центрифугирование). В данной фракции углеводные компоненты составляет до 80% от общего состава фракции.2. The main part of carbohydrate components and their derivatives (amino sugars, di- and monosaccharides, complexes with glucuronic acid) characteristic of the structural units of proteoglycans and glycosaminoglycans, mainly chondroitin sulfates and keratan sulfates, are found in the fraction, which is a precipitate obtained as a result of preliminary sample preparation (centrifugation). In this fraction, carbohydrate components make up 80% of the total composition of the fraction.

В виду высокой комплексности и сложности анализируемых образцов, полная идентификация компонентов не проводилась.Due to the high complexity and complexity of the analyzed samples, a complete identification of the components was not carried out.

В общей массе - соотношение 40-55% гель/растворитель.In total, the ratio is 40-55% gel / solvent.

Растворитель 0,9% хлорид натрия или 0,5% цитрат натрия.Solvent 0.9% sodium chloride or 0.5% sodium citrate.

Состав сухого остатка образца 1 представлен на таблице 1.The composition of the dry residue of sample 1 is shown in table 1.

Образец 2. После сублимации гелевой формы, измельчения и пропускания через сетчатый фильтр с размерами сетки 500 микрон, представляет порошкообразную форму твердой консистенции. 100 мг твердой формы полностью растворяются в 10 мл 0,9% раствора NaCl при 20°С в течение 60 минут без перемешивания. Концентрация протеогликанов и гликозаминогликанов составляет до 80% от общей массы компонентов.Sample 2. After sublimation of the gel form, grinding and passing through a mesh filter with a mesh size of 500 microns, it is a powdery form of solid consistency. 100 mg of the solid form is completely dissolved in 10 ml of 0.9% NaCl solution at 20 ° C for 60 minutes without stirring. The concentration of proteoglycans and glycosaminoglycans is up to 80% of the total mass of the components.

ЛитератураLiterature

1. В.С. Асатиани. Новые методы биохимической фотометрии. М.: Наука, 1965. - С. 507-510.1.V.S. Asatiani. New methods of biochemical photometry. Moscow: Nauka, 1965 .-- S. 507-510.

2. Б.И. Асатуров. «Способ получения протеогликана». Патент №2621311 от 09.12.2015.2. B.I. Asaturov. "Method for obtaining proteoglycan". Patent No. 2621311 dated 09.12.2015.

3. Е.Б. Берхин, Ю.И. Иванов. «Методы экспериментального исследования почек и водно-солевого обмена», Барнаул, 1972, стр. 6-10, 14-19, 108-116.3. E.B. Berkhin, Yu.I. Ivanov. "Methods of experimental study of the kidneys and water-salt metabolism", Barnaul, 1972, pp. 6-10, 14-19, 108-116.

4. Биологически активное вещество, биологически активная добавка к пище. RU 2221456. Авторы: Макаров Н.В., Новиков В.И.4. Biologically active substance, biologically active food additive. RU 2221456. Authors: Makarov N.V., Novikov V.I.

5. Биологически активная добавка к пище на основе денатурированного коллагена патент РФ №2489906 автор Николаева Т.И.5. Biologically active food additive based on denatured collagen RF patent No. 2489906 author Nikolaeva TI

6. Биологически активная добавка «Геленк Нарунг», изготовленная в «ПроВиста АГ» («ProVista AG») в ФРГ (Свидетельство о государственной регистрации №77.99.23.3.У.3191.4.09).6. Dietary supplement “Gelenk Narung”, manufactured by “ProVista AG” in Germany (Certificate of state registration No. 77.99.23.3.U.3191.4.09).

7. Биологически активная добавка к пище «Супер Акулий Хрящ», изготовленная в ООО «АРТ Современные научные технологии» (Свидетельство о государственной регистрации №7.99.13.3.У.4569.6.10).7. Dietary supplement to food "Super Shark Cartilage", manufactured in LLC "ART Modern Scientific Technologies" (Certificate of State Registration No. 7.99.13.3.U.4569.6.10).

8. Зенков Н.К., Кандалинцева Н.В., Ланкин В.З. и др. Фенольные биооксиданты. Новосибирск, 2003. С. 186-196.8. Zenkov N.K., Kandalintseva N.V., Lankin V.Z. and other Phenolic biooxidants. Novosibirsk, 2003.S. 186-196.

9. Методические указания «Определение безопасности и эффективности БАД» (№2.3.2.721-98, введены в действие с 01.01.1999).9. Methodical instructions "Determination of safety and effectiveness of dietary supplements" (No. 2.3.2.721-98, entered into force on 01.01.1999).

10. Методы исследований в профпатологии (биохимические). Руководство для врачей. / О.Г. Архипова, М.М. Шацкая, Л.С. Семенова и др. / Под ред. О.Г. Архиповой. - М.: Медицина, 1988. - 203 с.10. Research methods in occupational pathology (biochemical). A guide for doctors. / O.G. Arkhipova, M.M. Shatskaya, L.S. Semenov et al. / Ed. O.G. Arkhipova. - M .: Medicine, 1988 .-- 203 p.

11. Отраслевой стандарт ОСТ 91500.05.001-00 "Стандарты качества лекарственных средств. Основные положения" (приложение).11. Industry standard OST 91500.05.001-00 "Quality standards of medicines. Basic provisions" (Appendix).

12. Радиационный мониторинг жителей и их продуктов питания в Чернобыльской зоне Беларуси, 2002, Международная экспертиза проекта Института «Белрад» по радиационной защите населения, с. 80.12. Radiation monitoring of residents and their food products in the Chernobyl zone of Belarus, 2002, International expertise of the project of the Institute "Belrad" on radiation protection of the population, p. 80.

13. Сидоров К.К. Методы определения острой токсичности и опасности химических веществ (токсикометрия). - М.: Медицина, 1970.13. Sidorov K.K. Methods for determining the acute toxicity and hazard of chemicals (toxicometry). - M .: Medicine, 1970.

14. Сидоров К.К. О классификации токсичности ядов при парентеральных способах введения. В кн. Токсикология новых промышленных веществ. Вып. 13. М., 1973, с. 47-51.14. Sidorov K.K. On the classification of the toxicity of poisons with parenteral routes of administration. In the book. Toxicology of new industrial substances. Issue 13.M., 1973, p. 47-51.

15. Способ получения биологически активных добавок RU 2070399. Авторы патента: Зотов Е.А., Борисов О.А., Никульшин В.Н., Авдеев В.А., Соколов В.М.15. Method for producing biologically active additives RU 2070399. Authors of the patent: Zotov EA, Borisov OA, Nikul'shin VN, Avdeev VA, Sokolov VM.

16. Способ получения биологически активного пищевого полуфабриката и пищевой биологически активный продукт, полученный на его основе RU 2181018. Автор Борисенко Е.Г.16. A method of obtaining a biologically active food semi-finished product and a food biologically active product obtained on its basis RU 2181018. Author Borisenko EG

17. Тутельян В.А., Суханов Б.П., Австриевских А.Н., Позняковский В.М. Биологически активные добавки в питании человека: учебник для последипломного образования врачей. Томск, 1999. 38 с.17. Tutelian V.A., Sukhanov B.P., Austrievskikh A.N., Poznyakovsky V.M. Dietary supplements in human nutrition: a textbook for postgraduate education of doctors. Tomsk, 1999.38 p.

18. Физиология человека. Глава 9. Пищеварение. Под редакцией Покровского В.М., Коротько Г.Ф. 2-е изд., перераб. и доп. - М.: 2003. - 656 с.18. Human physiology. Chapter 9. Digestion. Edited by V.M. Pokrovsky, G.F. Korotko 2nd ed., Rev. and add. - M .: 2003 .-- 656 p.

19. Экзогенные биологически активные коньюгирующие вещества (RU 2240123). Автор Н.Ш. Кайшева.19. Exogenous biologically active conjugating substances (RU 2240123). Author N.Sh. Kaisheva.

20. Food, nutrition, and the prevention of cancer: a global perspective. Washington, DC: World Cancer Research Fund/American Institute for Cancer Research, 1997.20. Food, nutrition, and the prevention of cancer: a global perspective. Washington, DC: World Cancer Research Fund / American Institute for Cancer Research, 1997.

21. Lo D.H., Wu T.W. Assessment of the fundamental accuracy of the Jendrassik and Grof total and direct bilirubin assays // Clin. Chem. 1983. Vol. 29. P. 31-21. Lo D.H., Wu T.W. Assessment of the fundamental accuracy of the Jendrassik and Grof total and direct bilirubin assays // Clin. Chem. 1983. Vol. 29. P. 31-

Источники, принятые во вниманиеSources taken into account

1. Способ получения водорастворимых солевых комплексов гиалуроновой кислоты (варианты) (RU 2280041). Авторы: М.Б. Хазов, А.В. Рудаков, И.А. Федорищев.1. A method of obtaining water-soluble salt complexes of hyaluronic acid (options) (RU 2280041). Authors: M. B. Khazov, A.V. Rudakov, I.A. Fedorishchev.

2. Способ выделения сульфатированных гликозаминогликанов из роговицы (RU 2056851), 1996. Авторы: С.Н. Багров, Е.В. Ларионов, А.Ф. Панасюк.2. Method for the isolation of sulfated glycosaminoglycans from the cornea (RU 2056851), 1996. Authors: S.N. Bagrov, E.V. Larionov, A.F. Panasyuk.

3. Способ получения биологически активных веществ RU 2003262. Авторы патента: Кудряшева Александра Андреевна3. Method for producing biologically active substances RU 2003262. Authors of the patent: Kudryasheva Alexandra Andreevna

4. М.Н. Порцель. Разработка технологии получения хондроитинсульфата из гидробионтов Баренцева моря и изучение его физико-химических свойств. Дисс. к.б.н., Мурманск, 2011.4. M.N. Porcel. Development of a technology for obtaining chondroitin sulfate from hydrobionts of the Barents Sea and the study of its physical and chemical properties. Diss. Ph.D., Murmansk, 2011.

Claims (5)

1. Способ получения биологически активной добавки, характеризующийся тем, что раствор, содержащий протеогликаны и гликозаминогликаны в виде мелкодисперсной взвеси в 0,1 N растворе гидроксида натрия в соотношении 1:200, концентрируют до консистенции геля, для чего экспонируют в течение 20 минут при комнатной температуре для полного оседания агрегатов и формирования устойчивого плотного осадка, после чего надосадочную жидкость отделяют, осадок центрифугируют при 1000 об/мин в течение 45 секунд и надосадочную жидкость сливают, а к осадку, имеющему рН 9,0-9,3, при осторожном перемешивании добавляют для нейтрализации 0,1 N раствор соляной кислоты, доводя раствор до значений рН 8,0, после чего конечный осадок в виде геля сублимируют до твердого состояния в течение не менее 12 часов при -4°С и после окончания сублимационной сушки размельчают, проводят через сетчатый фильтр с размером сетки 500 микрон, а порошок расфасовывают в твердые желудочно-резистентные капсулы.1. A method of obtaining a biologically active additive, characterized in that a solution containing proteoglycans and glycosaminoglycans in the form of a fine suspension in a 0.1 N sodium hydroxide solution in a ratio of 1: 200 is concentrated to a gel consistency, for which it is exposed for 20 minutes at room temperature temperature for complete sedimentation of the aggregates and the formation of a stable dense sediment, after which the supernatant is separated, the sediment is centrifuged at 1000 rpm for 45 seconds and the supernatant is drained, and to the sediment having a pH of 9.0-9.3, with gentle stirring add for neutralization 0.1 N hydrochloric acid solution, bringing the solution to pH 8.0, after which the final precipitate in the form of a gel is sublimated to a solid state for at least 12 hours at -4 ° C and after the end of freeze-drying it is crushed, carried out through a mesh filter with a mesh size of 500 microns, and the powder is packaged in hard gastro-resistant capsules. 2. Способ получения биологически активной добавки, характеризующийся тем, что раствор, содержащий протеогликаны и гликозаминогликаны в виде мелкодисперсной взвеси в 0,1 N растворе гидроксида натрия в соотношении 1:200, концентрируют до консистенции геля, для чего экспонируют в течение 20 минут при комнатной температуре для полного оседания агрегатов и формирования устойчивого плотного осадка, после чего надосадочную жидкость отделяют, осадок центрифугируют при 1000 об/мин в течение 45 секунд и надосадочную жидкость сливают, а к осадку, имеющему рН 9,0-9,3, при осторожном перемешивании добавляют для нейтрализации 0,1 N раствор соляной кислоты, доводя раствор до значений рН 8,0, после чего конечный осадок в виде концентрированного геля, соотношение которого в общей массе составляет 40-55% гель/раствор - 0,9% хлорид натрия, помещают в желудочно-резистентные капсулы.2. A method of obtaining a biologically active additive, characterized in that a solution containing proteoglycans and glycosaminoglycans in the form of a fine suspension in a 0.1 N sodium hydroxide solution in a ratio of 1: 200 is concentrated to a gel consistency, for which it is exposed for 20 minutes at room temperature. temperature for complete sedimentation of the aggregates and the formation of a stable dense sediment, after which the supernatant is separated, the sediment is centrifuged at 1000 rpm for 45 seconds and the supernatant is drained, and to the sediment having a pH of 9.0-9.3, with gentle stirring add to neutralize 0.1 N hydrochloric acid solution, bringing the solution to pH 8.0, after which the final precipitate in the form of a concentrated gel, the ratio of which in the total mass is 40-55% gel / solution - 0.9% sodium chloride, placed in gastro-resistant capsules. 3. Способ применения биологически активной добавки по п. 1 или 2, характеризующийся тем, что расфасованные в желудочно-резистентные капсулы протеогликаны и гликозаминогликаны вводят перорально для получения детоксикационного и антимикробного эффекта в кишечнике.3. A method of using a dietary supplement according to claim 1 or 2, characterized in that proteoglycans and glycosaminoglycans packaged in gastro-resistant capsules are administered orally to obtain a detoxifying and antimicrobial effect in the intestine. 4. Способ применения по п. 3, отличающийся тем, что расфасованные в желудочно-резистентные капсулы протеогликаны и гликозаминогликаны вводят перорально для получения компенсационного восстановительного эффекта при дефиците протеогликанов и гликозаминогликанов в организме.4. The method of application according to claim 3, characterized in that the proteoglycans and glycosaminoglycans packaged in gastro-resistant capsules are administered orally to obtain a compensatory restorative effect in the case of a deficiency of proteoglycans and glycosaminoglycans in the body. 5. Способ применения п. 3. отличающийся тем, что расфасованные в желудочно-резистентные капсулы протеогликаны и гликозаминогликаны вводят перорально для получения гепатотропного эффекта при дефиците протеогликанов и гликозаминогликанов в организме.5. Method of application of claim 3. characterized in that proteoglycans and glycosaminoglycans packaged in gastro-resistant capsules are administered orally to obtain a hepatotropic effect with a deficiency of proteoglycans and glycosaminoglycans in the body.

Images