RU2562595C2 - Production of product with biologically active properties from holothurians - Google Patents
Production of product with biologically active properties from holothurians Download PDFInfo
- Publication number
- RU2562595C2 RU2562595C2 RU2013147388/15A RU2013147388A RU2562595C2 RU 2562595 C2 RU2562595 C2 RU 2562595C2 RU 2013147388/15 A RU2013147388/15 A RU 2013147388/15A RU 2013147388 A RU2013147388 A RU 2013147388A RU 2562595 C2 RU2562595 C2 RU 2562595C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- biologically active
- product
- powder
- mixed
- holothurians
- Prior art date
Links
Landscapes
- Edible Oils And Fats (AREA)
- Fats And Perfumes (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к пищевой промышленности и может быть использовано как общеукрепляющая, питательная добавка, предназначенная для активации иммунной системы и профилактики заболеваний костно-мышечной системы и соединительной ткани, а также для введения в пищевые продукты, применяемые при заболеваниях опорно-двигательного аппарата, и улучшения физической и умственной работоспособности и касается способа получения биологически активного продукта из дальневосточных промысловых голотурий кукумарии Cucumaria japonica и дальневосточного трепанга Apostichopus japonicus.The invention relates to the food industry and can be used as a restorative, nutritional supplement intended for activation of the immune system and prevention of diseases of the musculoskeletal system and connective tissue, as well as for introduction into food products used for diseases of the musculoskeletal system, and improve physical and mental performance, and relates to a method of obtaining a biologically active product from the Far Eastern commercial holothuria of the cucumaria cucumaria japonica and Far Eastern trepang Apostichopus japonicus.
Известно широкое использование хондроитинсульфатов, гексозаминов и коллагена для профилактики и комплексной терапии заболеваний суставов. Установлено, что биополимеры, содержащие глюкозамин, повышают естественную резистентность организма, оказывают стимулирующее влияние на процессы кроветворения, их профилактическое введение благоприятно отражается на больных лучевой болезнью и получающих полихимиотерапию. Производные гексозаминов оказывают положительное влияние на содержание сахара в крови. В исследованиях in vivo показано, что хондроитин-сульфаты обладают противовоспалительной активностью, стимулируют синтез гиалуроновой кислоты и протеогликанов и ингибируют действие протеолитических ферментов - инициаторов воспаления. Хондроитинсульфаты, гексозамины и фрагментированный коллаген являются предшественниками макромолекул суставного хряща, и их введение вызывает стимулирующее действие и облегчает регенерацию хрящевой ткани за счет использования готового строительного материала и способности накапливаться в очагах воспаления [Boonen S., Aerssens J., Mbuyi-Muamba J.M., Dequeker J. Generalized osteoarthritis protecting against osteoporetic fractures: review of the evidence. J Orthopaedic Rheumatol. 1996. V.9. P.69-73; Маршалл В.Дж., Клиническая биохимия / В.Д. Маршалл; под ред. Н. Новикова. - М.: БИНОМ; СПб.: Невский диалект, 1999. - 367 с.].The widespread use of chondroitin sulfates, hexosamines and collagen for the prevention and treatment of joint diseases. It was found that biopolymers containing glucosamine increase the body's natural resistance, have a stimulating effect on blood formation processes, their prophylactic administration favorably affects patients with radiation sickness and receiving polychemotherapy. Derivatives of hexosamines have a positive effect on blood sugar. In vivo studies have shown that chondroitin sulfates have anti-inflammatory activity, stimulate the synthesis of hyaluronic acid and proteoglycans and inhibit the action of proteolytic enzymes that initiate inflammation. Chondroitin sulfates, hexosamines and fragmented collagen are the precursors of articular cartilage macromolecules, and their administration induces a stimulating effect and facilitates the regeneration of cartilage tissue by using ready-made building material and the ability to accumulate in the foci of inflammation [Boonen S., Aerssens J., Mbuyi-MuquerM, J. Generalized osteoarthritis protecting against osteoporetic fractures: review of the evidence. J Orthopedic Rheumatol. 1996. V.9. P.69-73; Marshall V.J., Clinical Biochemistry / V.D. Marshall under the editorship of N. Novikova. - M .: BINOM; St. Petersburg: Nevsky dialect, 1999. - 367 p.].
Известен способ получения солей гликозаминогликанов [пат РФ 2139715], включающий ферментативный гидролиз хрящевой ткани крупного рогатого скота, кипячение с добавлением трихлоруксусной кислоты и диализ. Измельченную ткань последовательно гидролизуют раствором коллагеназы и смесью химотрипсина и папаина, после кипячения центрифугируют, диализуют в течение 5-6 дней, центрифугируют, обрабатывают ионообменными смолами, осаждают гликозаминогликаны этанолом, насыщенным ацетатом металлов, промывают 80 и 96,6% этанолом и высушивают эфиром.A known method of producing salts of glycosaminoglycans [US Pat. RF 2139715], including enzymatic hydrolysis of cartilage in cattle, boiling with the addition of trichloroacetic acid and dialysis. The crushed tissue is successively hydrolyzed with a collagenase solution and a mixture of chymotrypsin and papain, after boiling it is centrifuged, dialyzed for 5-6 days, centrifuged, treated with ion-exchange resins, glycosaminoglycans are precipitated with ethanol saturated with metal acetate, washed with 80 and 96.6% ethanol and dried with ether.
Недостатком данного метода является сложность технологического процесса с использованием дорогостоящих ферментных препаратов, ограниченный спектр биологически активных компонентов.The disadvantage of this method is the complexity of the process using expensive enzyme preparations, a limited range of biologically active components.
Известен способ получения гликозаминогликанов [Патент РФ 2129871], включающий обработку ультразвуком измельченной ткани в кавитационном режиме, гидролиз смесью ферментов, кипячение в течение 5-30 мин, центрифугирование, диализ в течение 5-6 дней, повторное центрифугирование и осаждение гликозаминогликанов растворами этилацетатов щелочных и/или щелочноземельных металлов. Недостатком данного метода является сложность технологического процесса с использованием дорогостоящих ферментных препаратов, ограниченный спектр биологически активных компонентов.A known method of producing glycosaminoglycans [RF Patent 2129871], including ultrasonic treatment of crushed tissue in a cavitation mode, hydrolysis with a mixture of enzymes, boiling for 5-30 minutes, centrifugation, dialysis for 5-6 days, centrifugation and precipitation of glycosaminoglycans with alkaline and ethyl acetate solutions / or alkaline earth metals. The disadvantage of this method is the complexity of the process using expensive enzyme preparations, a limited range of biologically active components.
Известен способ получения препарата из хрящевой и частично минерализованной ткани акул, осетров, лососей, кальмаров, скатов, заключающийся в следующем: сырье - свежую хрящевую ткань - дважды измельчают и экстрагируют 1,0-2,0% раствором хлористого натрия в течение 24 часов при 5-10°C, ферментативный гидролиз осуществляют с помощью протеолитических ферментов при 37°C в течение 7-8 ч, инактивацию ферментов проводили нагреванием до 70-80°C в течение 15-20 мин, последующее осаждение жиров осуществляли 2-3% раствором хитозана в уксусной кислоте в течение 12 ч при 5-10°C, выделение целевого продукта проводят путем фильтрации, сушку проводят сублимационным способом или распылительным способом. Ферментативный гидролиз проводят с использованием протеолитического ферментного препарата, выделенного из пилорических придатков дальневосточных лососей (пилорин) с активностью 100-200 Е/г в коичестве 1-4% от массы измельченного сырья, или протеолитического ферментного препарата, выделенного из гепатопанкреаса камчатского краба с активностью 150-250 Е/г в колличестве 0,5-3% от массы измельченного сырья [Пат. РФ №2250047].There is a method of obtaining a preparation from cartilage and partially mineralized tissue of sharks, sturgeons, salmon, squid, stingrays, which consists in the following: raw materials - fresh cartilage tissue - is crushed twice and extracted with 1.0-2.0% sodium chloride solution for 24 hours at 5-10 ° C, enzymatic hydrolysis is carried out using proteolytic enzymes at 37 ° C for 7-8 hours, inactivation of the enzymes was carried out by heating to 70-80 ° C for 15-20 minutes, the subsequent precipitation of fats was carried out with a 2-3% solution chitosan in acetic acid for 12 hours and 5-10 ° C, the selection of the target product is carried out by filtration, drying is carried out by freeze-drying or spraying. Enzymatic hydrolysis is carried out using a proteolytic enzyme preparation isolated from pyloric appendages of Far Eastern salmon (pylorin) with an activity of 100-200 U / g in the amount of 1-4% of the mass of ground raw materials, or a proteolytic enzyme preparation isolated from king crab hepatopancreas with an activity of 150 -250 U / g in the amount of 0.5-3% by weight of the crushed raw materials [US Pat. RF №2250047].
Недостатком способа является многоступенчатость и длительность процесса, ограниченный спектр биологической активности за счет отсутствия тритерпеновых гликозидов, низкое содержание коллагена, отсутствие жировой составляющей, обеспечивающей усвоения БАВ и усиление противовоспалительного действия.The disadvantage of this method is the multi-stage and duration of the process, a limited spectrum of biological activity due to the absence of triterpene glycosides, low collagen content, the absence of a fatty component, which provides assimilation of biologically active substances and enhances anti-inflammatory action.
По противовоспалительной активности биоактивные компоненты из трепанга сопоставимы с синтетическими противовоспалительными препаратами, но при этом не имеют побочных эффектов, свойственных лекарственным препаратам. Препараты на основе трепанга в настоящее время широко применяются с целью уменьшения дозировки таких лекарств или их полной отмены. БАВ трепанга уменьшают боль и ригидность (тугоподвижность) суставов. Считается, что наиболее целесообразно сочетать БАВ подобного типа в составе комплексной терапии, включающей полиненасыщенные жирные кислоты, как это показано для БАД «Инолтра», являющейся синтетическим средством, сочетающим в себе составляющие хрящевой ткани - глюкозамин и хондроитинсульфат и болеутоляющие и противовоспалительные ингредиенты - незаменимые полинасыщенные кислоты и антиоксиданты [Патент US 5840715; Номер заявки: 952272; Дата подачи: 6.01.98; Правопреемник: Инолтра].In terms of anti-inflammatory activity, bioactive components from trepang are comparable to synthetic anti-inflammatory drugs, but do not have the side effects that are characteristic of drugs. Trepang-based preparations are currently widely used to reduce the dosage of such drugs or to completely withdraw them. Biologically active substances of trepang reduce pain and stiffness (stiffness) of joints. It is believed that it is most advisable to combine a biologically active substance of this type in complex therapy, including polyunsaturated fatty acids, as shown for Inoltra dietary supplement, which is a synthetic agent that combines the components of cartilage tissue - glucosamine and chondroitin sulfate and painkillers and anti-inflammatory ingredients - essential polyneses acids and antioxidants [Patent US 5840715; Application Number: 952272; Date of submission: 6.01.98; Assignee: Inoltra].
Известен способ комплексной переработки голотурий, при котором сырье (трепанг или кукумария) разделывают, удаляют внутренности, венчики и внутрибрюшную пленку и варят в морской, пресной или подсоленной воде. Сушку термически обработанной кукумарии производят при температуре от 10 до 65°C до содержания воды в продукте, равного 5-12%, минеральных веществ 4-8% с получением полуфабриката для производства пищевого продукта. Внутренности голотурии подвергают стечке, легкой подпрессовке, подмораживанию, измельчению и сушке.There is a method of complex processing of holothurians, in which raw materials (trepang or cucumaria) are cut, the entrails, corollas and intraperitoneal film are removed and boiled in sea, fresh or salted water. Drying of heat-treated cucumaria is carried out at a temperature of from 10 to 65 ° C until the water content in the product is 5-12%, mineral substances 4-8% to obtain a semi-finished product for the production of a food product. The internals of holothuria are subjected to drainage, light prepressing, freezing, grinding and drying.
Полученную кормовую биологически активную добавку используют как средство, повышающее устойчивость животных к инфекционным заболеваниям, в виде добавки к корму. Варочные среды собирают и высушивают до содержания воды 5-12% с получением биологически активной добавки к пище «Акмар». Полученный продукт используют как адаптогенное средство в виде порошка, таблеток, а также в капсулированной форме. Биологически активная добавка «Акмар» представляет собой порошок серого с различными оттенками коричневого цвета, полученный из высушенных вод при комплексной переработке голотурии, и состоит из белка - 32,0-42,0%, воды - 5,0-12,0%, минеральных веществ - 50,0-55,0% (преобладающими элементами являются кальций, калий, натрий, магний), липидов - 0,05-0,2%, сумма тритерпеновых гликозидов находится в пределах 5000-7000 мкг/г, аминосахаров - 0,5-2,0% [RU 2236155 C2, 20.09.2004].The obtained feed biologically active additive is used as a means of increasing the resistance of animals to infectious diseases, in the form of an additive to the feed. Cooking media is collected and dried to a water content of 5-12% to obtain Akmar biologically active food supplement. The resulting product is used as an adaptogenic agent in the form of powder, tablets, as well as in encapsulated form. Akmar dietary supplement is a gray powder with various shades of brown, obtained from dried water during the complex processing of holothuria, and consists of protein - 32.0-42.0%, water - 5.0-12.0%, mineral substances - 50.0-55.0% (the predominant elements are calcium, potassium, sodium, magnesium), lipids - 0.05-0.2%, the amount of triterpene glycosides is in the range of 5000-7000 μg / g, amino sugars - 0.5-2.0% [RU 2236155 C2, 09/20/2004].
К недостаткам БАД, получаемой путем высушивания варочных сред голотурий, относится низкое содержание хондроитинсульфатов и гексозаминов, отсутствие в варочной воде и, соответственно, в готовом продукте коллагена.The disadvantages of dietary supplements obtained by drying the cooking media of holothuria include the low content of chondroitin sulfates and hexosamines, the absence of collagen in the cooking water and, accordingly, in the finished product.
Известен способ получения суммы тритерпеновых гликозидов из выварочных вод - промышленных отходов переработки дальневосточной голотурии, согласно которому гликозиды либо осаждают совместно с полисахарид-белковым комплексом при подкислении выварочных вод до pH 2,8 или при добавлении 1%-ного хитозана в качестве флокулянта, либо выварочные воды подвергают высушиванию до порошка, экстрагируют сумму гликозидов из осадка или порошка этиловым спиртом или смесью средне-полярных растворителей и очищают их путем обращенно-фазовой хроматографии на колонках с гидрофобным сорбентом, а затем с силикагелем [Патент РФ №2110522].A known method of obtaining the sum of triterpene glycosides from boiling water - industrial waste processing of the Far Eastern holothuria, according to which glycosides are either precipitated together with the polysaccharide-protein complex when acidified boiling water to a pH of 2.8 or by adding 1% chitosan as a flocculant, or boiling water is dried to a powder, the amount of glycosides is extracted from the precipitate or powder with ethanol or a mixture of mid-polar solvents and purified by reverse phase chromatography on columns with a hydrophobic sorbent, and then with silica gel [RF Patent No. 2110522].
Недостатком этого способа является многостадийность процесса, низкий выход биологически активных составляющих и ограниченная направленность применения.The disadvantage of this method is the multi-stage process, the low yield of biologically active components and the limited focus of the application.
Известен способ получения иммуномодулирующего средства «кумазид», имеющего хорошую иммуностимулирующую активность. Согласно одному из вариантов выполнения способа кумазид получают из кожно-мышечных мешков (филе) кукумарии японской. Для этого потрошенную кукумарию измельчают и экстрагируют спиртом, экстракт отделяют декантацией, а осадок повторно экстрагируют спиртом. Объединенный экстракт центрифугируют, супернатант отделяют, упаривают до воды и экстрагируют бутанолом. Верхнюю фазу отделяют, профильтровывают и добавляют к ней раствор стерина. Реакционный раствор концентрируют и центрифугируют. Образующийся осадок отделяют от надосадочной жидкости и трижды промывают комплекс равными объемами охлажденного растворителя с последующим центрифугированием. Затем осадок отмытого комплекса несколько раз промывают равными объемами серного эфира с последующим центрифугированием и высушиванием до постоянного веса [Патент РФ №2271820].A known method of obtaining an immunomodulatory agent "coumazide" having good immunostimulating activity. According to one embodiment of the method, coumazide is obtained from muscular skin bags (fillet) of Japanese cucumaria. To do this, gutted cucumaria is crushed and extracted with alcohol, the extract is separated by decantation, and the precipitate is re-extracted with alcohol. The combined extract was centrifuged, the supernatant was separated, evaporated to water and extracted with butanol. The upper phase is separated, filtered and a sterol solution is added to it. The reaction solution was concentrated and centrifuged. The precipitate formed is separated from the supernatant and the complex is washed three times with equal volumes of chilled solvent, followed by centrifugation. Then the precipitate of the washed complex is washed several times with equal volumes of sulfuric ether, followed by centrifugation and drying to constant weight [RF Patent No. 2271820].
Недостатком такой переработки промысловой голотурии является то, что используется ценное пищевое сырье - филе дальневосточной кукумарии, которое после экстракции гликозидов далее не используется и является промышленным отходом, использование большого количества растворителей и отсутствие в конечном продукте углеводных и белковых составляющих.The disadvantage of such processing of commercial holothuria is that it uses valuable food raw materials - fillet of Far Eastern cucumaria, which after extraction of glycosides is not further used and is an industrial waste, the use of a large number of solvents and the absence of carbohydrate and protein components in the final product.
Наиболее близким является способ переработки дальневосточной кукумарии Cucumaria japonica (голотурии) для получения продукта, обладающего биологически активными свойствами из голотурий, включающий измельчение кожно-мускульного мешка его до однородной массы, выделение из нее биологически активных компонентов, высушивание. Для выделения биологически активного продукта применяют двукратную экстракцию спиртом с удалением экстракта центрифугированием, высушивание осадка, являющегося целевым продуктом [Патент РФ №2426453].The closest is a method of processing Far Eastern cucumaria Cucumaria japonica (holothuria) to obtain a product having biologically active properties from holothuria, including grinding its skin-muscle bag to a homogeneous mass, isolating biologically active components from it, and drying. To isolate the biologically active product, double extraction with alcohol is used to remove the extract by centrifugation, drying the precipitate, which is the target product [RF Patent No. 2426453].
Недостатком этого способа является многостадийность процесса, использование большого количества органических растворителей, что предъявляет повышенные требования к пожаро- и взрывобезопасности производства. Кроме того, получаемый препарат имеет узкую направленность применения, т.к. при обработке теряется значительное количество биологически активных компонентов, таких как тритерпеновые гликозиды.The disadvantage of this method is the multi-stage process, the use of a large number of organic solvents, which imposes increased requirements for fire and explosion safety of production. In addition, the resulting drug has a narrow focus, because a significant amount of biologically active components, such as triterpene glycosides, is lost during processing.
Задача изобретения - разработка нового эффективного способа получения пищевого продукта, обладающего биологически активными свойствами с более широким спектром физиологического воздействия - хондропротекторными и иммуномодулирующими.The objective of the invention is the development of a new effective way to obtain a food product with biologically active properties with a wider range of physiological effects - chondroprotective and immunomodulating.
Для решения поставленной задачи в способе получения продукта, обладающего биолгически активными свойствами, из голотурий, включающем освобождение голотурий от внутренних органов, промывание кожно-мускульного мешка, измельчение его до однородной массы, выделение из нее биологически активных компонентов, согласно изобретению, выделение биологически активных компонентов проводят в два этапа, на первом этапе измельченную кожно-мускульного массу смешивают с водой в соотношении 1:0,5-1:1 соответственно, проводят обработку ультразвуком мощностью 250-300 Вт/см с частотой 20-30 Гц в течение 5-10 минут, затем проводят щелочной гидролиз при pH 11,0 в течение 20-40 минут при комнатной температуре, далее нейтрализуют до pH 7,0, полученный гидролизат сушат до остаточной влажности не более 12%, сухой продукт измельчают до порошкообразного состояния, а на втором этапе порошок смешивают с подсолнечным или рапсовым маслом в соотношении 1:5 и выдерживают при постоянном перемешивании в течение 3-4 часов, полученную жировую суспензию стабилизируют с помощью диспергатора.To solve the problem in a method for producing a product having biologically active properties from holothuria, including the release of holothuria from internal organs, washing the skin-muscle bag, grinding it to a homogeneous mass, isolating biologically active components from it, according to the invention, isolating biologically active components carried out in two stages, at the first stage, the crushed skin-muscle mass is mixed with water in a ratio of 1: 0.5-1: 1, respectively, ultrasonic treatment is carried out powerfully Thy 250-300 W / cm with a frequency of 20-30 Hz for 5-10 minutes, then alkaline hydrolysis is carried out at pH 11.0 for 20-40 minutes at room temperature, then neutralized to pH 7.0, the resulting hydrolyzate is dried to a residual moisture content of not more than 12%, the dry product is crushed to a powder state, and in the second stage, the powder is mixed with sunflower or rapeseed oil in a ratio of 1: 5 and maintained with constant stirring for 3-4 hours, the resulting fat suspension is stabilized using a dispersant .
Технический результат, обеспечиваемый изобретением, заключается в том, что разработан новый эффективный способ получения пищевого продукта, обладающего биологически активными свойствами с более широким спектром физиологического воздействия - хондропротекторными и иммуномодулирующими. Продукт по изобретению может использоваться самостоятельно в качестве пищевой биологически активной добавки, а также в качестве ингредиента в производстве других пищевых добавок.The technical result provided by the invention is that a new effective method for producing a food product having biologically active properties with a wider range of physiological effects — chondroprotective and immunomodulating, has been developed. The product according to the invention can be used independently as a dietary supplement, as well as an ingredient in the manufacture of other food additives.
Заявляемое техническое решение соответствует критерию «новизна», поскольку вся совокупность существенных признаков изобретения, содержащихся в независимом пункте формулы, не известна из уровня техники.The claimed technical solution meets the criterion of "novelty", since the entire set of essential features of the invention contained in the independent claim is not known from the prior art.
Заявляемое техническое решение, по мнению заявителя, соответствует критерию «изобретательский уровень», поскольку оно явным образом не следует из уровня техники, так как по результатам анализа технических решений того же назначения не выявлены решения, имеющие признаки, совпадающие с его отличительными признаками для достижения технического результата указанного заявителем.The claimed technical solution, according to the applicant, meets the criterion of "inventive step", because it does not explicitly follow from the prior art, as the analysis of technical solutions of the same purpose did not reveal solutions that have signs that match its distinctive features to achieve technical result indicated by the applicant.
Заявляемое техническое решение соответствует критерию «промышленное применение», поскольку заявленный способ соответствует указанному назначению и может использоваться в рыбной промышленности для производства нового пищевого продукта из голотурий, обладающего биологически активными свойствами, может быть использовано как общеукрепляющая добавка для активации иммунной системы и профилактики заболеваний костно-мышечной системы.The claimed technical solution meets the criterion of "industrial use", since the claimed method meets the specified purpose and can be used in the fishing industry to produce a new food product from holothuria, which has biologically active properties, can be used as a general strengthening additive to activate the immune system and prevent bone diseases muscle system.
Общими с прототипом известными признаками являются освобождение голотурий от внутренних органов, промывание кожно-мускульного мешка, измельчение его до однородной массы, выделение из нее биологически активных компонентов.Common with the prototype known signs are the release of holothurians from internal organs, washing the skin-muscle bag, grinding it to a homogeneous mass, the allocation of biologically active components from it.
Отличительные существенные признаки заявляемого технического решения: выделение биологически активных компонентов проводят в два этапа, на первом этапе измельченную кожно-мускульного массу смешивают с водой в соотношении 1:0,5-1:1 соответственно, проводят обработку ультразвуком мощностью 250-300 Вт/см с частотой 20-30 Гц в течение 5-10 минут, затем проводят щелочной гидролиз при pH 11,0 в течение 20-40 минут при комнатной температуре, далее нейтрализуют до pH 7,0, полученный гидролизат сушат до остаточной влажности не более 12%, сухой продукт измельчают до порошкообразного состояния, а на втором этапе порошок смешивают с подсолнечным или рапсовым маслом в соотношении 1:5 и выдерживают при постоянном перемешивании в течение 3-4 часов, полученную жировую суспензию стабилизируют с помощью диспергатора.Distinctive essential features of the proposed technical solution: the selection of biologically active components is carried out in two stages, at the first stage, the crushed skin-muscle mass is mixed with water in a ratio of 1: 0.5-1: 1, respectively, and ultrasound treatment with a power of 250-300 W / cm with a frequency of 20-30 Hz for 5-10 minutes, then alkaline hydrolysis is carried out at pH 11.0 for 20-40 minutes at room temperature, then neutralized to pH 7.0, the resulting hydrolyzate is dried to a residual moisture content of not more than 12% dry product is crushed to a powder state, and in the second stage, the powder is mixed with sunflower or rapeseed oil in a ratio of 1: 5 and maintained with constant stirring for 3-4 hours, the resulting fat suspension is stabilized using a dispersant.
Признаки изобретения, касающиеся параметров обработки сырья, являются существенными и вытекают из исследований, выполненных авторами настоящей заявки. Исследовались зависимость степени дезинтегрирования сырья от мощности и времени ультразвуковой обработки, а также влияние условий щелочной обработки на степень гидролиза протеогликанов, обеспечивающей переход биологически активных компонентов в растворимое состояние.The features of the invention regarding the processing parameters of the raw materials are essential and follow from the studies performed by the authors of this application. We studied the dependence of the degree of disintegration of raw materials on the power and time of ultrasonic treatment, as well as the influence of alkaline treatment conditions on the degree of hydrolysis of proteoglycans, which ensures the transition of biologically active components to a soluble state.
Результаты исследований приведены в таблицах 1 и 2.The research results are shown in tables 1 and 2.
Мощность ультразвукового воздействия влияет на температуру обрабатываемого сырья, что влияет на сохранение нативной структуры белков и может вызывать их денатурацию. Как известно из литературных источников увеличение денатурированный коллаген менее подвержен гидролизу. Поэтому при исследовании влияния ультразвукового воздействия на температуру обрабатываемого сырья подбирали мощность и продолжительность, не вызывающие значительного повышения температуры. Ультразвуковая обработка экстрактов проводилась с помощью прибора IKASONIC U 50 control.The power of ultrasonic exposure affects the temperature of the processed raw materials, which affects the preservation of the native structure of proteins and can cause their denaturation. As is known from literature, an increase in denatured collagen is less susceptible to hydrolysis. Therefore, when studying the effect of ultrasonic exposure on the temperature of the processed raw materials, power and duration were selected that did not cause a significant increase in temperature. Ultrasonic processing of the extracts was carried out using an IKASONIC U 50 control device.
Определение соотношения фаз определяли после 12-частвого отстаивания продукта, содержание сухих веществ определяли с помощью рефрактометра. Разжижение мышечной ткани голотурий при ультразвуковой обработке связано с разрушением белков соединительной ткани и гидролиза межуточного вещества, содержащего протеогликаны. Как видно из данных таблицы, снижение мощности ультразвукового воздействия, увеличение интенсивности не позволяет получить желаемой степени разрушения биополимеров и увеличения содержания в жидкой части сухих веществ, повышение мощности выше заданных пределов приводит к увеличению количества жидкой фракции, но при этом одновременно часть белковых компонентов денатурирует, переходит в нерастворимое состояние, а количество растворенных сухих веществ падает.The determination of the phase ratio was determined after 12-frequent sedimentation of the product, the solids content was determined using a refractometer. Muscle tissue liquefaction of holothuria during ultrasound treatment is associated with the destruction of connective tissue proteins and the hydrolysis of an interstitial substance containing proteoglycans. As can be seen from the table, a decrease in the power of ultrasonic exposure, an increase in the intensity does not allow one to obtain the desired degree of destruction of biopolymers and an increase in the content of solids in the liquid part, an increase in power above predetermined limits leads to an increase in the amount of the liquid fraction, but at the same time some protein components denature, goes into an insoluble state, and the amount of dissolved solids decreases.
О степени гидролиза протеоликанов кожно-мускульного мешка и переходе коллагена и хондроитинсульфатов в растворимое состояние при щелочном гидролизе судили по соотношению аминного и общего азота в гомогенате, накоплению оксипролина и гексозаминов в жидкой фракции гидролизата [Телишевская Л.Я. Белковые гидролизаты. М.: Аграрная наука, 2000, 290 с.; Woessner J. Determination of hydroxyproline in connective tissues. The methodology of connective tissues research. (Hall D A. ed.) Oxford. England: Johnson-Bruvvers Ltd. 1976, p. 235-45; Elson L.A., and Morgan W.J.. 1933. A colorimetric method for the determination of glucosamine and chondrosamine. Biochem. J. 27: 1824-1828].The degree of hydrolysis of proteolikans of the skin-muscle sac and the transition of collagen and chondroitin sulfates to a soluble state during alkaline hydrolysis was judged by the ratio of amine and total nitrogen in the homogenate, the accumulation of hydroxyproline and hexosamines in the liquid fraction of the hydrolyzate [Telishevskaya L.Ya. Protein hydrolysates. M .: Agricultural science, 2000, 290 p .; Woessner J. Determination of hydroxyproline in connective tissues. The methodology of connective tissues research. (Hall D A. ed.) Oxford. England: Johnson-Bruvvers Ltd. 1976, p. 235-45; Elson L.A., and Morgan W.J .. 1933. A colorimetric method for the determination of glucosamine and chondrosamine. Biochem. J. 27: 1824-1828].
При щелочном гидролизе ткани голотурий, проводимой после обработки ультразвуком, также происходит частичный гидролиз протеогликанов и коллагена, в результате в жидкую фракцию переходят фрагменты коллагена, определяемые по суммарному содержанию оксипролина - маркерной аминокислоты этого белка. Также в жидкой фракции накапливаются углеводные компоненты, определяемые по содержанию гексозаминов. При pH 10 накопление обоих компонентов не достигает максимального уровня, при pH 11 величины содержания обоих компонентов имеют максимальные величины, а при pH 12 происходит некоторое их снижение. Способ осуществляют следующим образом.When alkaline hydrolysis of holothuria tissue, carried out after sonication, partial hydrolysis of proteoglycans and collagen also occurs, as a result, collagen fragments determined by the total content of oxyproline, a marker amino acid of this protein, pass into the liquid fraction. Also in the liquid fraction, carbohydrate components are accumulated, determined by the content of hexosamines. At pH 10, the accumulation of both components does not reach a maximum level; at pH 11, the contents of both components have maximum values, and at pH 12 some decrease occurs. The method is as follows.
Свежевыловленное или замороженное сырье - промысловые голотурии освобождают от внутренних органов. Кожно-мускульный мешок измельчают до однородной массы на волчке или мясорубке с диаметром отверстий решетки 2,0 мм, которую смешивают с водой в соотношении сырье:вода 1:0,5-1:1, проводят дезинтегрирование (диспергирование) сырья обработкой ультразвуком при частоте 20-30 Гц и мощности 250-300 Вт/см в течение 5-10 мин, при этом происходит подавление микробиологических процессов и увеличение степени измельчения сырья и разрушения структур тканевого уровня. Для частичного гидролиза белков доводят pH смеси до 11,0 с помощью 1 М раствора едкого натра, выдерживают 20-40 мин при комнатной температуре во избежание денатурации белков, после чего нейтрализуют до pH 7,0 с помощью 1 М уксусной кислоты. Полученный гидролизат сушат на сублимационной установке или сушках иного типа при температуре конечного продукта не выше 45°C и остаточной влажности сухого продукта не более 12%. Сухой продукт измельчают до порошкообразного состояния. Затем в полученный порошок вносят растительное масло в соотношении 1:5 соответственно при постоянном перемешивании смеси в течение 3-4 час с получением жировой суспензии. Эта суспензия неустойчива и может расслоиться через непродолжительное врем, например в течение суток. Поэтому по окончании процесса суспензию стабилизируют с помощью диспергатора, полученный продукт тарируют. В качестве растительных масел используют подсолнечное или рапсовое масла, имеющие высокое содержание полиненасыщенных жирных кислот и витамина Е.Freshly caught or frozen raw materials - commercial holothurians are exempted from internal organs. The skin-muscle bag is crushed to a homogeneous mass on a spinning top or meat grinder with a diameter of 2.0 mm lattice holes, which is mixed with water in the ratio of raw materials: water 1: 0.5-1: 1, the raw materials are disintegrated (dispersed) by ultrasonic treatment at a frequency 20-30 Hz and a power of 250-300 W / cm for 5-10 minutes, while there is a suppression of microbiological processes and an increase in the degree of grinding of raw materials and destruction of tissue level structures. For partial hydrolysis of proteins, the pH of the mixture was adjusted to 11.0 with a 1 M sodium hydroxide solution, held for 20-40 minutes at room temperature to avoid protein denaturation, and then neutralized to pH 7.0 with 1 M acetic acid. The resulting hydrolyzate is dried in a freeze dryer or other type of dryer at a temperature of the final product not higher than 45 ° C and a residual moisture content of the dry product of not more than 12%. The dry product is ground to a powder state. Then, vegetable oil is added to the obtained powder in a ratio of 1: 5, respectively, with constant stirring of the mixture for 3-4 hours to obtain a fat suspension. This suspension is unstable and can stratify after a short time, for example during the day. Therefore, at the end of the process, the suspension is stabilized using a dispersant, the resulting product is calibrated. As vegetable oils, use sunflower or rapeseed oils having a high content of polyunsaturated fatty acids and vitamin E.
Конечный продукт, полученный предлагаемым способом, представляет собой темно-зеленую эмульсию с вкраплениями твердых частиц, содержащую в качестве основных биологически активных компонентов голотурий, хондроитинсульфаты (не менее 0,45 мас. %), гексозамины (не менее 1,0 мас. %), коллаген (не менее 7 мас. %), тритерпеновые гликозиды (не менее 0,05 мас. %) в сочетании с полиненасыщенными жирными кислотами (не менее 20 мас. %) и витамином Е (0.05 мг/мл), входящими в состав растительных масел. Такое сочетание биологически активных компонентов определяет хондропротекторные и иммуномоделирующие свойства и хорошую усвояемость продукта по заявляемому способу. Состав биологически активного продукта (мас. %) представлен в таблице 3The final product obtained by the proposed method is a dark green emulsion interspersed with solid particles containing holothurium, chondroitin sulfates (at least 0.45 wt.%), Hexosamines (at least 1.0 wt.%) As the main biologically active components. , collagen (not less than 7 wt.%), triterpene glycosides (not less than 0.05 wt.%) in combination with polyunsaturated fatty acids (not less than 20 wt.%) and vitamin E (0.05 mg / ml), which are part vegetable oils. This combination of biologically active components determines the chondroprotective and immunomodulating properties and good digestibility of the product according to the claimed method. The composition of the biologically active product (wt.%) Are presented in table 3
Результаты анализа химического состава продукта, представленные в таблице, выполнены авторами известными методами: *Количество жира, белка и воды определяли по ГОСТ 7636-85 [Рыба, морские млекопитающие, морские беспозвоночные и продукты их переработки. Методы анализа]. *Содержание сульфат-ионов определяли турбо-димитрическим методом [Фармакопейная статья №42-1286-99 "Хонсурид"]. *Количество полиненасыщенных жирных кислот определяли методом газожидкостной хроматографии на хроматомасс-спектрометре HP 6890GC/MSD5973 (США). *Содержание тритерпеновых гликозидов определяли с помощью метода высокоэффективной жидкостной хроматографии [Чумак А.Д., Павель К.Г., Тимчишина Г.Н. Определение тритерпеновых гликозидов в голотуриях. Известия ТИНРО-центра, 1995. - Т. 118, С. 36-40].The results of the analysis of the chemical composition of the product, presented in the table, were performed by the known methods by the authors: * The amount of fat, protein and water was determined according to GOST 7636-85 [Fish, marine mammals, marine invertebrates and their processed products. Analysis Methods]. * The content of sulfate ions was determined by turbo-dimitric method [Pharmacopoeia article No. 42-1286-99 "Khonsurid"]. * The amount of polyunsaturated fatty acids was determined by gas-liquid chromatography on an HP 6890GC / MSD5973 chromato-mass spectrometer (USA). * The content of triterpene glycosides was determined using high performance liquid chromatography [Chumak AD, Pavel KG, Timchishina GN Determination of triterpene glycosides in holothuria. Proceedings of the TINRO Center, 1995. - T. 118, S. 36-40].
Выбор показателей для установления хондропротекторых и имуномодулирующих свойств продукта выполнен на основе известных научных данных.The choice of indicators for establishing chondroprotective and immunomodulatory properties of the product is based on well-known scientific data.
Имеются многочисленные сведения о влиянии гексозаминов и коллагена на метаболизм и регенерацию хрящевой ткани не только за счет использования их как «готового строительного материала», но и благодаря установленной способности накапливаться в очагах воспаления и снижать его [Pool R. Proteoglycans in health and disease: structure and function. Biochemistry journal. - 1986. - Vol. 236. - P. 1-14; Abdel Fattah W., Hammad T. Chondroitin Sulfate and Giucosamine: a review of the Safety Profile. JANA. - 2001. - Vol. 3, №4. - P. 16-23].Numerous data are available on the effect of hexosamines and collagen on the metabolism and regeneration of cartilage, not only through their use as a “ready-made building material”, but also due to the established ability to accumulate in the foci of inflammation and reduce it [Pool R. Proteoglycans in health and disease: structure and function. Biochemistry journal. - 1986. - Vol. 236. - P. 1-14; Abdel Fattah W., Hammad T. Chondroitin Sulfate and Giucosamine: a review of the Safety Profile. JANA. - 2001. - Vol. 3, No. 4. - P. 16-23].
В настоящее время доказана ведущая роль иммунной системы при хроническом воспалении хрящевой ткани.Currently, the leading role of the immune system in chronic inflammation of cartilage tissue has been proven.
В разработанном авторами настоящей заявки продукте функцию иммуномодуляции обеспечивают тритерпеновые гликозиды. Незаменимые полинасыщенные кислоты и антиоксиданты способствуют уменьшению боли и вовоспаления [Гусев Е.Ю., Черешнев В.А., Юрченко Л.Н. Системное воспаление с позиции теории типового патологического процесса Цитокины и воспаление. 2007. - Т. 6, №4. - С. 9-21].In the product developed by the authors of this application, the function of immunomodulation is provided by triterpene glycosides. Essential polyunsaturated acids and antioxidants help to reduce pain and inflammation [Gusev E.Yu., Chereshnev V.A., Yurchenko L.N. Systemic inflammation from the perspective of the theory of a typical pathological process Cytokines and inflammation. 2007. - T. 6, No. 4. - S. 9-21].
Ведущая роль в развитии воспаления принадлежит процессам активации лимфоцитов. Активированные лимфоциты, макрофаги, фибробласты и синовиоциты способны вырабатывать определенный набор провоспалительных цитокинов, играющих существенную роль в развитии системных проявлений и в поддержании хронического воспаления в суставах.The leading role in the development of inflammation belongs to the processes of activation of lymphocytes. Activated lymphocytes, macrophages, fibroblasts and synoviocytes are capable of producing a specific set of pro-inflammatory cytokines that play a significant role in the development of systemic manifestations and in the maintenance of chronic inflammation in the joints.
Высокие уровни исследованных маркеров лимфоцитов в синовиальной жидкости и синовиальной мембране пациентов с ревматоидным артритом коррелируют с активностью заболевания [Laffon A, Garcia-Vicuña R, Humbria A, Postigo AA, Corbi AL, de Landazuri MO, Sanchez-Madrid F: Upregulated expression and function of VLA-4 fibronectin receptors on human activated T cells in rheumatoid arthritis. J Clin Invest 1991, 88: 546-552]. Установлена важная роль CD69 и CD25+ в патогенезе артрита и ее использовании в качестве возможной терапевтической мишени [Murata К, Inami М, Hasegawa A, Kubo S, Kimura М, Yamashita М, Hosokawa Н, Nagao Т, Suzuki К, Hashimoto К, et al.: CD69-null mice protected from arthritis induced with anti-type II collagen antibodies. Int Immunol 2003, 15: 987-992].High levels of the studied lymphocyte markers in the synovial fluid and synovial membrane of patients with rheumatoid arthritis correlate with disease activity [Laffon A, Garcia-Vicuña R, Humbria A, Postigo AA, Corbi AL, de Landazuri MO, Sanchez-Madrid F: Upregulated expression and function of VLA-4 fibronectin receptors on human activated T cells in rheumatoid arthritis. J Clin Invest 1991, 88: 546-552]. The important role of CD69 and CD25 + in the pathogenesis of arthritis and its use as a possible therapeutic target has been established [Murata K, Inami M, Hasegawa A, Kubo S, Kimura M, Yamashita M, Hosokawa H, Nagao T, Suzuki K, Hashimoto K, et al .: CD69-null mice protected from arthritis induced with anti-type II collagen antibodies. Int Immunol 2003, 15: 987-992].
По мнению авторов настоящей заявки, исследование влияния масляных экстрактов из трепанга на экспрессию активационных мембранных молекул лимфоцитов периферической крови позволяет одновременно определять иммуностимулирующую и хондропротекторную активность полученных препаратов.According to the authors of this application, a study of the effect of oil extracts from trepang on the expression of activation membrane molecules of peripheral blood lymphocytes allows us to simultaneously determine the immunostimulating and chondroprotective activity of the preparations obtained.
Модулируя выраженность на клеточной поверхности активационных антигенов, можно достичь направленного изменения состояния активации иммунокомпетентных клеток, опосредующих развитие воспаления суставов.By modulating the severity of activation antigens on the cell surface, one can achieve a directed change in the state of activation of immunocompetent cells that mediate the development of joint inflammation.
Биологически активные свойства продукта из голотурий, полученного предлагаемым способом, изучали в условиях ФГБУ «Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.П. Сомова» во Владивостоке.The biologically active properties of the product from holothuria obtained by the proposed method were studied under the conditions of the FSBI Scientific Research Institute of Epidemiology and Microbiology. G.P. Somova ”in Vladivostok.
Для определения уровня экспрессии активационных антигенов лимфоциты периферической крови здоровых доноров выделяли на градиенте плотности фиколл-верографина (d=1,077), отмывали забуференным фосфатно-солевым буфером и доводили до концентрации 2×106/мл средой RPMI-1640, содержащей 10% эмбриональной телячьей сыворотки. Жизнеспособность выделенных клеток, по данным теста на окрашиваемость трипановым синим, составляла 95-98%. Взвесь лимфоцитов помещали в силиконированные пробирки, экстракт трепанга вносили в конечной концентрации 10 мкг/мл и инкубировали в течение 24 часа в CO2-инкубаторе при температуре 37°C. Экспрессию мембранных молекул определяли методом проточной цитометрии с использованием моноклональных антител, меченных флюоресцеин-изотиоционатом и фикоэритрином к антигенам CD25, CD38, CD71, CD69.To determine the level of expression of activation antigens, peripheral blood lymphocytes of healthy donors were isolated on a density gradient of ficoll-verographin (d = 1.077), washed with buffered phosphate-buffered saline and adjusted to a concentration of 2 × 106 / ml with RPMI-1640 medium containing 10% fetal calf serum . The viability of the isolated cells, according to the test for stain with trypan blue, was 95-98%. A suspension of lymphocytes was placed in silicone tubes, trepang extract was added at a final concentration of 10 μg / ml and incubated for 24 hours in a CO 2 incubator at a temperature of 37 ° C. The expression of membrane molecules was determined by flow cytometry using monoclonal antibodies labeled with fluorescein isothiocyanate and phycoerythrin to antigens CD25, CD38, CD71, CD69.
Относительное содержание лимфоцитов периферической крови здоровых доноров, экспрессирующих ранние активационные маркеры (CD25, CD71, CD38, CD69), составляло 10,7±1,2%, 6,7±0,8%, 36,0±2,4%, 10,5±1,4% соответственно.The relative content of peripheral blood lymphocytes of healthy donors expressing early activation markers (CD25, CD71, CD38, CD69) was 10.7 ± 1.2%, 6.7 ± 0.8%, 36.0 ± 2.4%, 10.5 ± 1.4%, respectively.
Внесение в культуру лимфоцитов периферической крови препарата в конечной концентрации 10 мкг/мл приводило к уменьшению экспрессии ранних активационных антигенов.The introduction into the culture of peripheral blood lymphocytes of the drug in a final concentration of 10 μg / ml led to a decrease in the expression of early activation antigens.
Снижение экспрессии активационных антигенов определяет изменение функциональной активности иммунокомпетентных клеток, а способность к их модуляции лежит в основе механизма противовоспалительного действия экстракта трепанга.A decrease in the expression of activation antigens determines a change in the functional activity of immunocompetent cells, and the ability to modulate them underlies the anti-inflammatory action of the trepang extract.
Таким образом, исследованный препарат обладает умеренной противовоспалительной активностью, снижает уровень экспрессии ранних активационных антигенов лимфоцитов периферической крови человека и обеспечивает иммуностимулирующее и хондропротекторное действие.Thus, the studied drug has moderate anti-inflammatory activity, reduces the level of expression of early activation antigens of human peripheral blood lymphocytes and provides immunostimulating and chondroprotective effects.
Полученный по изобретению продукт, который может быть использован для приготовления биологически активной добавки к пище, являющейся источником гексозаминов, тритерпеновых гликозидов и коллагена, а также полиненасыщенных жирных кислот и витамина Е, применяемой в качестве хондропротектора и иммуномодулятора.The product obtained according to the invention, which can be used to prepare a biologically active food supplement, which is a source of hexosamines, triterpene glycosides and collagen, as well as polyunsaturated fatty acids and vitamin E, used as a chondroprotector and immunomodulator.
Примеры конкретного выполнения.Examples of specific performance.
Пример 1Example 1
1 кг свежезамороженной мышечной ткани трепанга измельчают на волчке или мясорубке, добавляют 1 л воды. Смесь перемешивают и подвергают обработке ультразвуком при 25 Гц 250 Вт/см3 в течение 10 мин. К смеси добавляют 1 М раствора едкого натра до pH 11,0. Смесь выдерживают 30 мин при температуре 20°C и нейтрализуют до pH 7.0 добавлением 1 М уксусной кислоты. Смесь сушат на сублимационной установке до остаточной влажности 10%. Сухой порошок смешивают с подсолнечным маслом в соотношении на 100 г порошка - 500 мл масла. Смесь выдерживают в течение 3 часов при комнатной температуре при постоянном перемешивании. Масляную смесь эмульгируют с помощью насоса-диспергатора и направляют на упаковывание.1 kg of freshly frozen muscle tissue of trepang is ground in a spinning top or meat grinder, add 1 liter of water. The mixture is stirred and sonicated at 25 Hz to 250 W / cm 3 for 10 minutes. To the mixture was added a 1 M sodium hydroxide solution to a pH of 11.0. The mixture was incubated for 30 minutes at a temperature of 20 ° C and neutralized to pH 7.0 by the addition of 1 M acetic acid. The mixture is dried in a sublimation unit to a residual moisture content of 10%. Dry powder is mixed with sunflower oil in a ratio of 100 g of powder - 500 ml of oil. The mixture was incubated for 3 hours at room temperature with constant stirring. The oil mixture is emulsified using a dispersing pump and sent for packaging.
Конечный продукт содержит жир/в том числе, ПНЖК 82/44; белок/в том числе коллаген 15/7, гексозамины 1,2; сульфат-ионы 0,5; тритерпеновые гликозиды 0,05; α-токоферола ацетата 0,6 мг/мл.The final product contains fat (including PUFA 82/44; protein / including collagen 15/7, hexosamines 1,2; sulfate ions 0.5; triterpene glycosides 0.05; α-tocopherol acetate 0.6 mg / ml.
Пример 2Example 2
Трепанг-сырец разделывают, удаляя окологлоточные венчики и внутренности. 2 кг кожно-мышечной ткани промытого трепанга измельчают на мясорубке, добавляют 1.5 л воды. Смесь перемешивают и подвергают обработке ультразвуком при 30 Гц 300 Вт/см3 в течение 5 мин. К смеси добавляют 1 М раствор едкого натра до pH 11,0. Смесь выдерживают 30 мин при комнатной температуре и нейтрализуют до pH 7.0 добавлением 1 М раствора уксусной кислоты. Смесь сушат до остаточной влажности 12%. Сухой порошок смешивают с рапсовым маслом в соотношении на 100 г порошка - 500 мл масла. Смесь выдерживают в течение 4 часов. Масляную смесь эмульгируют и направляют на упаковывание.Raw trepang is cut, removing peri-pharyngeal corollas and entrails. 2 kg of musculoskeletal tissue of washed trepang is ground in a meat grinder, 1.5 l of water is added. The mixture is stirred and sonicated at 30 Hz 300 W / cm 3 for 5 minutes. A 1 M sodium hydroxide solution was added to the mixture to a pH of 11.0. The mixture was incubated for 30 minutes at room temperature and neutralized to pH 7.0 by the addition of a 1 M solution of acetic acid. The mixture is dried to a residual moisture content of 12%. Dry powder is mixed with rapeseed oil in a ratio of 100 g of powder to 500 ml of oil. The mixture was incubated for 4 hours. The oil mixture is emulsified and sent for packaging.
Конечный продукт содержит жир/в том числе, ПНЖК 82/22; белок/в том числе коллаген 18/8, гексозамины 1,6; сульфат-ионы 0,7; тритерпеновые гликозиды 0,11; α-токоферола ацетата 0,6 мг/мл.The final product contains fat (including PUFA 82/22; protein / including collagen 18/8, hexosamines 1.6; sulfate ions 0.7; triterpene glycosides 0.11; α-tocopherol acetate 0.6 mg / ml.
Пример 3Example 3
1 кг свежезамороженой мышечной ткани кукумарии измельчают на мясорубке и добавляют 0,5 л воды. Смесь перемешивают и подвергают обработке ультразвуком при 30 Гц 300 Вт/см3 в течение 8 мин. К смеси добавляют 1 М раствор едкого натра, доводят до pH 11,0. Смесь выдерживают 20 мин при температуре 20°C и нейтрализуют до pH 7,0 добавлением 1 М уксусной кислоты. Смесь сушат до остаточной влажности 12%. Сухой порошок кукумарии перемешивают с подсолнечным маслом в соотношении на 100 г порошка - 500 г масла. Смесь выдерживают в течение 4 часов. Масляную смесь эмульгируют и направляют на упаковывание. Конечный продукт содержит жир/в том числе ПНЖК 82/44; белок/в том числе коллаген 20/12, гексозамины 2,1; сульфат-ионы 0,9; тритерпеновые гликозиды 0,09; α-токоферола ацетата 0,6 мг/мл.1 kg of freshly frozen cucumari muscle tissue is ground in a meat grinder and 0.5 l of water is added. The mixture is stirred and sonicated at 30 Hz 300 W / cm 3 for 8 minutes. A 1 M sodium hydroxide solution was added to the mixture, adjusted to pH 11.0. The mixture was incubated for 20 minutes at a temperature of 20 ° C and neutralized to pH 7.0 by the addition of 1 M acetic acid. The mixture is dried to a residual moisture content of 12%. Dry powder of cucumaria is mixed with sunflower oil in a ratio of 100 g of powder - 500 g of oil. The mixture was incubated for 4 hours. The oil mixture is emulsified and sent for packaging. The final product contains fat (including PUFA 82/44; protein / including collagen 20/12, hexosamines 2.1; sulfate ions 0.9; triterpene glycosides 0.09; α-tocopherol acetate 0.6 mg / ml.
Пример 4Example 4
2 кг кукумарии-сырца разделывают, отделяя мускульный мешок от внутренностей, измельчают его на мясорубке. К измельченной массе добавляют 1,5 л воды, тщательно перемешивают и подвергают обработке ультразвуком при 25 Гц 300 Вт/см3 в течение 10 мин. К смеси добавляют 1 М раствор едкого натра, доводя до pH 11,0. Смесь выдерживают 30 мин при температуре 25°C и нейтрализуют до pH 7,0 добавлением уксусной кислоты. Смесь сушат до остаточной влажности 12%. Сухой порошок смешивают с рапсовым маслом в соотношении на 100 г порошка - 500 г масла. Смесь выдерживают в течение 3 часов при постоянном перемешивании. Масляную смесь эмульгируют и направляют на упаковывание.2 kg of raw cucumaria are cut, separating the muscular bag from the viscera, chopped in a meat grinder. 1.5 l of water is added to the crushed mass, mixed thoroughly and sonicated at 25 Hz 300 W / cm 3 for 10 minutes. A 1 M sodium hydroxide solution was added to the mixture, adjusting to pH 11.0. The mixture was incubated for 30 minutes at 25 ° C and neutralized to pH 7.0 by the addition of acetic acid. The mixture is dried to a residual moisture content of 12%. Dry powder is mixed with rapeseed oil in a ratio of 100 g of powder to 500 g of oil. The mixture was incubated for 3 hours with constant stirring. The oil mixture is emulsified and sent for packaging.
Конечный продукт содержит мас. % - жир/в том числе ПНЖК 80/20; белок/в том числе коллаген 19/10, гексозамины 1,6; сульфат-ионы 0,6; тритерпеновые гликозиды 0,07; α-токоферола ацетат 0,6 мг/мл.The final product contains wt. % - fat / including PUFA 80/20; protein / including collagen 19/10, hexosamines 1.6; sulfate ions 0.6; triterpene glycosides 0.07; α-tocopherol acetate 0.6 mg / ml.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2013147388/15A RU2562595C2 (en) | 2013-10-23 | 2013-10-23 | Production of product with biologically active properties from holothurians |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2013147388/15A RU2562595C2 (en) | 2013-10-23 | 2013-10-23 | Production of product with biologically active properties from holothurians |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2013147388A RU2013147388A (en) | 2015-04-27 |
| RU2562595C2 true RU2562595C2 (en) | 2015-09-10 |
Family
ID=53283122
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2013147388/15A RU2562595C2 (en) | 2013-10-23 | 2013-10-23 | Production of product with biologically active properties from holothurians |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2562595C2 (en) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114522183A (en) * | 2022-01-24 | 2022-05-24 | 江南大学 | Sea cucumber extract for increasing bone mineral density |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2236155C2 (en) * | 2002-08-05 | 2004-09-20 | Федеральное государственное унитарное предприятие "Тихоокеанский научно-исследовательский рыбохозяйственный центр" | Method for complex processing sea cucumbers, biologically active supplement "akmar", fodder biologically active supplement |
| RU2244547C2 (en) * | 1998-05-19 | 2005-01-20 | Рисерч Дивелопмент Фаундейшн | Triterpene compositions and methods for their applying |
| RU2426453C1 (en) * | 2009-11-12 | 2011-08-20 | Учреждение Российской академии наук Тихоокеанский институт биоорганической химии Дальневосточного отделения Российской академии наук (ТИБОХ ДВО РАН) | METHOD FOR PROCESSING Cucumaria japonica (JAPANESE CUCUMARIA) AND BIOLOGICALLY ACTIVE PRODUCT PRODUCED BY THIS METHOD |
| RU2446822C2 (en) * | 2010-04-19 | 2012-04-10 | Федеральное Государственное Автономное Образовательное Учреждение Высшего Профессионального Образования "Дальневосточный Федеральный Университет" (Двфу) | Immunostimulating complex, method for preparing and using it |
-
2013
- 2013-10-23 RU RU2013147388/15A patent/RU2562595C2/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2244547C2 (en) * | 1998-05-19 | 2005-01-20 | Рисерч Дивелопмент Фаундейшн | Triterpene compositions and methods for their applying |
| RU2236155C2 (en) * | 2002-08-05 | 2004-09-20 | Федеральное государственное унитарное предприятие "Тихоокеанский научно-исследовательский рыбохозяйственный центр" | Method for complex processing sea cucumbers, biologically active supplement "akmar", fodder biologically active supplement |
| RU2426453C1 (en) * | 2009-11-12 | 2011-08-20 | Учреждение Российской академии наук Тихоокеанский институт биоорганической химии Дальневосточного отделения Российской академии наук (ТИБОХ ДВО РАН) | METHOD FOR PROCESSING Cucumaria japonica (JAPANESE CUCUMARIA) AND BIOLOGICALLY ACTIVE PRODUCT PRODUCED BY THIS METHOD |
| RU2446822C2 (en) * | 2010-04-19 | 2012-04-10 | Федеральное Государственное Автономное Образовательное Учреждение Высшего Профессионального Образования "Дальневосточный Федеральный Университет" (Двфу) | Immunostimulating complex, method for preparing and using it |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2013147388A (en) | 2015-04-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Shavandi et al. | Marine waste utilization as a source of functional and health compounds | |
| Khora | Marine fish-derived bioactive peptides and proteins for human therapeutics | |
| Kim et al. | Bioactive compounds from marine processing byproducts–a review | |
| Okolie et al. | Influence of conventional and recent extraction technologies on physicochemical properties of bioactive macromolecules from natural sources: A review | |
| KR102287247B1 (en) | The composition of joint nutritional supplement for companion animals | |
| CA2435392C (en) | Desiccated avian sternal cartilage powder | |
| Venugopal | Nutrients and nutraceuticals from seafood | |
| Nag et al. | Seafood discards: a potent source of enzymes and biomacromolecules with nutritional and nutraceutical significance | |
| JP5154964B2 (en) | Contains royal jelly-degrading enzyme | |
| CN101451157A (en) | Method for preparing low molecular weight sea cucumber polysaccharide | |
| KR20150132704A (en) | Extract of sea cucumber and sea urchin, preparing thereof, functional foods and cosmetics using the same | |
| WO2018117867A1 (en) | Bioactive mussel compositions and/or extracts | |
| Castañeda-Valbuena et al. | Biological activities of peptides obtained by pepsin hydrolysis of fishery products | |
| RU2355240C1 (en) | Production method of food product with chondroprotective action | |
| CN108456248B (en) | Hydrolyzed jellyfish type I, type II and type V collagen and uses thereof | |
| Binsi et al. | Functional and nutraceutical ingredients from marine resources | |
| JP2006225270A (en) | Tripeptide having sex hormone modification action, extract containing the same, eicosapentaenoic acid-bonded tripeptide, food preparation, cosmetic preparation and endometriosis treating agent containing the same | |
| RU2562595C2 (en) | Production of product with biologically active properties from holothurians | |
| Wang et al. | The nutritional value of Spirulina and Utilization Research | |
| Sadiq et al. | Application of food by‐products in medical and pharmaceutical industries | |
| JPWO2006120974A1 (en) | Health food and pharmaceutical composition for improving diseases of cartilage metabolism disorder | |
| JP2003268004A (en) | Chondroitin sulfate derived from cartilage of rajiformes and method for producing the same | |
| RU2562581C1 (en) | Method of producing biologically active agent from sea cucumber, having general tonic and immunomodulating properties | |
| JP2003313131A (en) | Medicine or cosmetic | |
| RU2460313C2 (en) | Method for production of fodder additive with chondroprotective properties of sea hydrobionts wastes |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20181024 |