RU2696289C1 - Способ получения ингибитора трипсина из люцерны посевной - Google Patents
Способ получения ингибитора трипсина из люцерны посевной Download PDFInfo
- Publication number
- RU2696289C1 RU2696289C1 RU2018142347A RU2018142347A RU2696289C1 RU 2696289 C1 RU2696289 C1 RU 2696289C1 RU 2018142347 A RU2018142347 A RU 2018142347A RU 2018142347 A RU2018142347 A RU 2018142347A RU 2696289 C1 RU2696289 C1 RU 2696289C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- inhibitor
- trypsin inhibitor
- lucerne
- trypsin
- sodium chloride
- Prior art date
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/48—Fabaceae or Leguminosae (Pea or Legume family); Caesalpiniaceae; Mimosaceae; Papilionaceae
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Alternative & Traditional Medicine (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Botany (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Изобретение относится к способу получения ингибитора трипсина из люцерны посевной. Способ получения ингибитора трипсина из люцерны посевной путем температурной коагуляции сока, полученного из вегетативной массы люцерны, аффинной хроматографии на специфическом сорбенте, при этом очистку ингибитора трипсина из люцерны посевной проводят в один этап, для этого сок коричневого цвета помещают в емкость с мешалкой и сюда же вносят сорбент трипсин-сефарозу, затем содержимое перемешивают, пигменты и неспецифические связанные белки удаляют промыванием водой и ацетатным буфером с 0,3 М хлоридом натрия, десорбцию ингибитора осуществляют 0,15 М ацетатным буферным раствором с 0,3 М хлоридом натрия, тонкую очистку ингибитора проводят методом гель-фильтрации на сефадексе G-75, далее ингибитор осаждают сернокислым аммонием до насыщения 70% с последующим центрифугированием и подвергают диализу через полупроницаемую мембрану против воды с 0,3 М хлоридом натрия, полученный ингибитор трипсина замораживают и сушат в лиофильной сушилке при определенных условиях. Вышеописанный способ позволяет упростить способ получения целевого продукта, сокращает время проведения процесса получения и увеличивает степень очистки ингибитора трипсина из люцерны посевной.
Description
Изобретение относится к способу получения ингибитора трипсина из люцерны посевной направленно на сокращение времени проведения процесса получения и увеличения степени очистки ингибитора трипсина из люцерны.
Известен способ получения ингибитора трипсина из люцерны А.С. СССР №1440924, заключающийся в связывании ингибитора трипсина из коричневого сока на аффинном сорбенте. Сорбент представляет собой поливиниловый спирт волокнистой структуры, предварительно активированный n-толуолсульфохлоридом и содержащим 47-60 мг трипсина на 1 г сухого сорбента, с последующей десорбцией целевого продукта.
Недостатком известного способа является длительность проведения процесса получения и недостаточная степень очистки ингибитора трипсина, которая составила 150-159 раз.
Наиболее близким к заявленному является способ получения ингибитора трипсина А.С. СССР №1162081 [Новиков Ю.Ф., Новиков Н.Н., Соколова Е.В., Шаповал И.В., Пройдак Н.И., Любецкая Х.А., Сухинин В.Н., Маслова Н.Ф., Потапов Н.В.]. В соответствии с этим способом сок коричневого цвета, полученный из люцерны посевной, использовали для биоспецифической колоночной хроматографии, в колонке объемом 265 см3 (150×15). Всего использовали 17 порций сока общим объемом 4,2 литра.
Недостатком известного способа является многоэтапность и длительность проведения очистки ингибитора при проведении биоспецифической хроматографии, поскольку она проводилась в колонке с объемом 265 см3. Ограниченный объем колонки приводит к тому, что супернатант, полученный после центрифугирования, необходимо делить на 17 порций. Такое длительное и многоэтапное проведение операции очистки приводит к потерям продукта, снижению степени очистки и снижению активности ингибитора.
Технический результат изобретения - упрощение способа получения целевого продукта. Направленно на сокращение времени проведения процесса получения и увеличения степени очистки ингибитора трипсина из люцерны посевной.
Технический результат достигается тем, что очистку ингибитора трипсина из люцерны посевной проводят в один этап, в емкости с мешалкой с прибавлением сорбента. Сок коричневого цвета помещают в емкость с мешалкой и сюда же вносят сорбент трипсин-сефарозу, содержимое перемешивают в течение 10-15 минут, температуру в емкости поддерживают в диапазоне 36-38°С. Полноту связывания ингибитора трипсина определяют в отдельном опыте по величине активности трипсина. Пигменты и неспецифические связанные белки удаляют промыванием водой и ацетатным буфером с 0,3 М хлоридом натрия, рН раствора 7.
Десорбцию ингибитора осуществляют 0,15 М ацетатным буферным раствором с 0,3 М хлоридом натрия. Тонкую очистку ингибитора проводят методом гель-фильтрации на сефадексе G-75. Ингибитор осаждают сернокислым аммонием до насыщения 70% с последующим центрифугированием при 5000 об/мин, в течение 15 минут и подвергают диализу через полупроницаемую мембрану против воды с 0,3 М хлоридом натрия. Полученный ингибитор трипсина замораживают и сушат в лиофильной сушилке.
Удельная активность полученного ингибитора трипсина составила 7,41±0,86 мг/мг белка, степень очистки 180-190 раз. Выход целевого продукта составил около 0,012-0,013 г из 1 килограмма исходного сырья.
Осуществление заявленного способа поясняется следующим примером технологического процесса.
Люцерну посевную в стадии бутонизации скашивают, измельчают при помощи измельчителя «Волгарь -5 А», отбирают 5 килограмм, далее из измельченной массы отжимают зеленый сок. В емкости, методом температурной коагуляции, нагревая сок до температуры 85°С, отделяют сопутствующие вещества, образовавшийся осадок осаждают центрифугированием при 5000 об/мин в течение 15 минут. Полученный раствор помещают в емкость объемом 8000 см3 для проведения сорбции, в нее вносят сорбент - трипсин-сефарозу, содержимое перемешивают в течение 10-15 минут, температуру раствора поддерживают в диапазоне 36-39°. Полноту связывания ингибитора трипсина определяют в отдельном опыте по активности трипсина. Пигменты и неспецифические связанные белки удаляют промыванием содержимого водой и ацетатным буфером с 0,3 М хлорида натрия, рН равна 7.
Десорбцию ингибитора осуществляют 0,15 М ацетатным буферным раствором с 0,3 М хлорида натрия. Ингибитор трипсина из полученного раствора осаждают сернокислым аммонием до насыщения 70% с последующим центрифугированием при 5000 об/мин, в течение 15 минут. Тонкую очистку ингибитора проводят методом гель-фильтрации на сефадексе G-75. После очистки ингибитор подвергают диализу через полупроницаемую мембрану против воды с 0,3 М хлорида натрия. Полученный ингибитор трипсина замораживают и сушат в лиофильной сушилке.
Выход целевого продукта составляет около 0,012 г из 1 килограмма исходного сырья, степень очистки 180-190 раз. Удельная активность полученного ингибитора трипсина составила 7,41±0,86 мг/мг белка.
Предлагаемая совокупность отличительных признаков (проведение процесса очистки в один этап в емкости с мешалкой, тонкая очистка ингибитора методом гель-фильтрации на сефадексе G-75, осаждение продукта сернокислым аммонием до насыщения 70% и диализ его через полупроницаемую мембрану) взамен многоэтапного способа получения ингибитора трипсина в колонке с объемом 265 см, включающий биоспецифическую очистку ингибитора трипсина в один этап, тонкую очистку методом гель-фильтрации, осаждение сернокислым аммонием, диализ и лиофильное высушивание готового продукта позволяет:
- упростить способ получения целевого продукта - ингибитора трипсина;
- увеличить степень очистки целевого продукта (степень очистки 180-190 раз) за счет проведения процесса биоспецифической сорбции в один этап и тонкой очистки методом гель-фильтрации с последующим осаждением сернокислым аммонием и лиофильной сушкой.
- получить целевой продукт с более высокой удельной активностью (удельная активность полученного ингибитора трипсина составляла 7,41±0,86 мг/мг белка).
Claims (1)
- Способ получения ингибитора трипсина из люцерны посевной путем температурной коагуляции сока, полученного из вегетативной массы люцерны, аффинной хроматографии на специфическом сорбенте, отличающийся тем, что очистку ингибитора трипсина из люцерны посевной проводят в один этап, при этом сок коричневого цвета помещают в емкость с мешалкой и сюда же вносят сорбент трипсин-сефарозу, затем содержимое перемешивают в течение 10-15 минут, температуру в емкости поддерживают в диапазоне 36-38°С, пигменты и неспецифические связанные белки удаляют промыванием водой и ацетатным буфером с 0,3 М хлоридом натрия, рН раствора 7, десорбцию ингибитора осуществляют 0,15 М ацетатным буферным раствором с 0,3 М хлоридом натрия, тонкую очистку ингибитора проводят методом гель-фильтрации на сефадексе G-75, далее ингибитор осаждают сернокислым аммонием до насыщения 70% с последующим центрифугированием при 5000 об/мин в течение 15 минут и подвергают диализу через полупроницаемую мембрану против воды с 0,3 М хлоридом натрия, полученный ингибитор трипсина замораживают и сушат в лиофильной сушилке.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2018142347A RU2696289C1 (ru) | 2018-11-29 | 2018-11-29 | Способ получения ингибитора трипсина из люцерны посевной |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2018142347A RU2696289C1 (ru) | 2018-11-29 | 2018-11-29 | Способ получения ингибитора трипсина из люцерны посевной |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2696289C1 true RU2696289C1 (ru) | 2019-08-01 |
Family
ID=67586824
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2018142347A RU2696289C1 (ru) | 2018-11-29 | 2018-11-29 | Способ получения ингибитора трипсина из люцерны посевной |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2696289C1 (ru) |
Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
SU1162081A1 (ru) * | 1983-07-08 | 1991-12-30 | Центральный Научно-Исследовательский И Проектно-Технологический Институт Механизации И Электрификации Животноводства Южной Зоны Ссср | Способ выделени ингибитора трипсина |
RU2524668C1 (ru) * | 2013-05-06 | 2014-07-27 | Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Астраханская государственная медицинская академия" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ГБОУ ВПО АГМА Минздрава России) | Способ выделения спермаспецифического ингибитора трипсина человека |
US20140295004A1 (en) * | 2002-01-25 | 2014-10-02 | Akzo Nobel Surface Chemistry Llc | Bioactive botanical cosmetic compositions and processes for their production |
RU2626541C2 (ru) * | 2008-04-30 | 2017-07-28 | Ксилеко, Инк. | Переработка биомассы |
CN108059671A (zh) * | 2018-02-07 | 2018-05-22 | 中国农业科学院植物保护研究所 | 一种紫花苜蓿胰蛋白酶抑制剂MT-mth2-36p5及其编码基因与应用 |
-
2018
- 2018-11-29 RU RU2018142347A patent/RU2696289C1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
SU1162081A1 (ru) * | 1983-07-08 | 1991-12-30 | Центральный Научно-Исследовательский И Проектно-Технологический Институт Механизации И Электрификации Животноводства Южной Зоны Ссср | Способ выделени ингибитора трипсина |
US20140295004A1 (en) * | 2002-01-25 | 2014-10-02 | Akzo Nobel Surface Chemistry Llc | Bioactive botanical cosmetic compositions and processes for their production |
RU2626541C2 (ru) * | 2008-04-30 | 2017-07-28 | Ксилеко, Инк. | Переработка биомассы |
RU2524668C1 (ru) * | 2013-05-06 | 2014-07-27 | Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Астраханская государственная медицинская академия" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ГБОУ ВПО АГМА Минздрава России) | Способ выделения спермаспецифического ингибитора трипсина человека |
CN108059671A (zh) * | 2018-02-07 | 2018-05-22 | 中国农业科学院植物保护研究所 | 一种紫花苜蓿胰蛋白酶抑制剂MT-mth2-36p5及其编码基因与应用 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN104152519B (zh) | 一种酶溶性高纯超螺旋结构ⅰ型胶原蛋白的制备方法 | |
CN107532191B (zh) | 西兰花蛋白肽的制备方法、制备得到的西兰花蛋白肽及其应用 | |
CN110272934A (zh) | 鸡内金小分子肽的提取方法及其应用 | |
CN104039164A (zh) | 米蛋白质组合物及其制造方法 | |
WO2017005134A1 (zh) | 一种具有抗病毒和免疫活性的亚麻籽多糖的制备及其应用 | |
CN104805164A (zh) | 一种具有低致敏性的高蛋白牡蛎活性肽制备方法 | |
JP4416188B2 (ja) | ポテト塊茎からのプロテイナーゼインヒビタータンパク質の単離方法 | |
RU2696289C1 (ru) | Способ получения ингибитора трипсина из люцерны посевной | |
CN101333245B (zh) | 一种人血白蛋白的分离方法 | |
CN104877007B (zh) | 牦牛乳乳清蛋白源ace抑制肽及其制备方法 | |
CN110183550B (zh) | 一种精品肝素钠的制备工艺 | |
CN112521487A (zh) | 一种改进的人血白蛋白生产工艺 | |
CN116813711A (zh) | 降血糖抗氧化的菊芋肽、其制备方法及其应用 | |
CN108441535A (zh) | 三酶一酵桑蚕肽的生产方法 | |
JPS58500737A (ja) | 植物の葉から蛋白質の単離法 | |
EP1526116A1 (en) | Method for the isolation of biologically active substances from by-product or waste flows, and biologically active substances obtained therefrom | |
CN104356231B (zh) | 一种有效去除人免疫球蛋白多聚体的方法 | |
RU2483565C2 (ru) | Способ получения модифицированного белкового изолята из подсолнечного жмыха | |
CN109280081B (zh) | 一种从金枪鱼卵中制备唾液酸糖肽的方法 | |
JPH03279396A (ja) | 紅藻類レクチン及びその製造方法 | |
SU411867A1 (ru) | ||
WO2017190396A1 (zh) | 一种制备α-1,6-葡聚糖的方法 | |
RU2134992C1 (ru) | Способ обработки молочной сыворотки | |
JPH0499448A (ja) | 油糧種子由来蛋白質 | |
SU875660A1 (ru) | Способ получени пищевых белковых студней |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20201130 |