RU2695380C1 - Полиацилированные производные 20(r)-гинзенозида rg3, их получение и применение - Google Patents
Полиацилированные производные 20(r)-гинзенозида rg3, их получение и применение Download PDFInfo
- Publication number
- RU2695380C1 RU2695380C1 RU2018136587A RU2018136587A RU2695380C1 RU 2695380 C1 RU2695380 C1 RU 2695380C1 RU 2018136587 A RU2018136587 A RU 2018136587A RU 2018136587 A RU2018136587 A RU 2018136587A RU 2695380 C1 RU2695380 C1 RU 2695380C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- ginsenoside
- 14bid
- octo
- group
- polyacylated
- Prior art date
Links
- RWXIFXNRCLMQCD-CZIWJLDFSA-N (20R)-ginsenoside Rg3 Chemical class O([C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@H]1CC[C@]2(C)[C@H]3C[C@@H](O)[C@H]4[C@@]([C@@]3(CC[C@H]2C1(C)C)C)(C)CC[C@@H]4[C@](C)(O)CCC=C(C)C)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O RWXIFXNRCLMQCD-CZIWJLDFSA-N 0.000 title claims abstract description 95
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 9
- XIRZPICFRDZXPF-GCIIHGAUSA-N 20(R)-Ginsenoside Rg3 Natural products CC(=CCC[C@](C)(O)[C@H]1CC[C@]2(C)[C@@H]1[C@H](O)C[C@@H]3[C@@]4(C)CC[C@H](O[C@@H]5O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]5O[C@H]6O[C@@H](CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]6O)C(C)(C)[C@@H]4[C@@H](O)C[C@@]23C)C XIRZPICFRDZXPF-GCIIHGAUSA-N 0.000 claims description 62
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 14
- 238000005886 esterification reaction Methods 0.000 claims description 10
- 230000032050 esterification Effects 0.000 claims description 8
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 7
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 7
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 claims description 7
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 claims description 7
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical group [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 4
- 150000008065 acid anhydrides Chemical class 0.000 claims description 4
- 150000001263 acyl chlorides Chemical class 0.000 claims description 4
- 150000007529 inorganic bases Chemical class 0.000 claims description 4
- BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L potassium carbonate Chemical compound [K+].[K+].[O-]C([O-])=O BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 4
- YHASWHZGWUONAO-UHFFFAOYSA-N butanoyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OC(=O)CCC YHASWHZGWUONAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- YWGHUJQYGPDNKT-UHFFFAOYSA-N hexanoyl chloride Chemical compound CCCCCC(Cl)=O YWGHUJQYGPDNKT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 claims description 3
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 claims description 2
- DVECBJCOGJRVPX-UHFFFAOYSA-N butyryl chloride Chemical compound CCCC(Cl)=O DVECBJCOGJRVPX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- PKHMTIRCAFTBDS-UHFFFAOYSA-N hexanoyl hexanoate Chemical compound CCCCCC(=O)OC(=O)CCCCC PKHMTIRCAFTBDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- XGISHOFUAFNYQF-UHFFFAOYSA-N pentanoyl chloride Chemical compound CCCCC(Cl)=O XGISHOFUAFNYQF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000011736 potassium bicarbonate Substances 0.000 claims description 2
- 229910000028 potassium bicarbonate Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 235000015497 potassium bicarbonate Nutrition 0.000 claims description 2
- 229910000027 potassium carbonate Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 235000011181 potassium carbonates Nutrition 0.000 claims description 2
- TYJJADVDDVDEDZ-UHFFFAOYSA-M potassium hydrogencarbonate Chemical compound [K+].OC([O-])=O TYJJADVDDVDEDZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 2
- RZWZRACFZGVKFM-UHFFFAOYSA-N propanoyl chloride Chemical compound CCC(Cl)=O RZWZRACFZGVKFM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- WYVAMUWZEOHJOQ-UHFFFAOYSA-N propionic anhydride Chemical compound CCC(=O)OC(=O)CC WYVAMUWZEOHJOQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 235000017550 sodium carbonate Nutrition 0.000 claims description 2
- 235000013832 Valeriana officinalis Nutrition 0.000 claims 1
- 244000126014 Valeriana officinalis Species 0.000 claims 1
- 125000004108 n-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 claims 1
- 235000016788 valerian Nutrition 0.000 claims 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 abstract description 29
- 208000005016 Intestinal Neoplasms Diseases 0.000 abstract description 9
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 abstract description 8
- 201000002313 intestinal cancer Diseases 0.000 abstract description 8
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 abstract description 7
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 abstract description 7
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 abstract description 7
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 abstract description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 6
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 abstract description 6
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 abstract description 6
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 abstract description 6
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 abstract description 4
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 abstract description 4
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 abstract description 3
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 abstract description 3
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 abstract description 2
- 201000005296 lung carcinoma Diseases 0.000 abstract description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 28
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 24
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 23
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 23
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 18
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 16
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 15
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 15
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 15
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- AEDDIBAIWPIIBD-ZJKJAXBQSA-N mangiferin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1C1=C(O)C=C(OC=2C(=CC(O)=C(O)C=2)C2=O)C2=C1O AEDDIBAIWPIIBD-ZJKJAXBQSA-N 0.000 description 14
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 14
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 14
- 238000001644 13C nuclear magnetic resonance spectroscopy Methods 0.000 description 12
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 12
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical group CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 12
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 12
- RWXIFXNRCLMQCD-JBVRGBGGSA-N (20S)-ginsenoside Rg3 Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@H]1CC[C@]2(C)[C@H]3C[C@@H](O)[C@H]4[C@@]([C@@]3(CC[C@H]2C1(C)C)C)(C)CC[C@@H]4[C@@](C)(O)CCC=C(C)C)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O RWXIFXNRCLMQCD-JBVRGBGGSA-N 0.000 description 10
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 10
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 9
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 9
- IAZDPXIOMUYVGZ-WFGJKAKNSA-N Dimethyl sulfoxide Chemical compound [2H]C([2H])([2H])S(=O)C([2H])([2H])[2H] IAZDPXIOMUYVGZ-WFGJKAKNSA-N 0.000 description 8
- YWQSXCGKJDUYTL-UHFFFAOYSA-N Mangiferin Natural products CC(CCC=C(C)C)C1CC(C)C2C3CCC4C(C)(C)CCCC45CC35CCC12C YWQSXCGKJDUYTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 8
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 8
- 229940043357 mangiferin Drugs 0.000 description 8
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 8
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 8
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 8
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 7
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 7
- 238000000119 electrospray ionisation mass spectrum Methods 0.000 description 7
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 7
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 7
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 6
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 5
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 5
- 238000013461 design Methods 0.000 description 5
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 5
- 239000005457 ice water Substances 0.000 description 5
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 5
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 5
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 5
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 5
- XIRZPICFRDZXPF-UHFFFAOYSA-N Ginsenoside Rg3 Natural products CC(C)=CCCC(C)(O)C1CCC(C2(CC(O)C3C4(C)C)C)(C)C1C(O)CC2C3(C)CCC4OC1OC(CO)C(O)C(O)C1OC1OC(CO)C(O)C(O)C1O XIRZPICFRDZXPF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 208000006552 Lewis Lung Carcinoma Diseases 0.000 description 4
- 235000002789 Panax ginseng Nutrition 0.000 description 4
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 4
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 4
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 4
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 4
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 4
- JUJWROOIHBZHMG-RALIUCGRSA-N pyridine-d5 Chemical compound [2H]C1=NC([2H])=C([2H])C([2H])=C1[2H] JUJWROOIHBZHMG-RALIUCGRSA-N 0.000 description 4
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 4
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 4
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 4
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 4
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 4
- 230000005760 tumorsuppression Effects 0.000 description 4
- WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N Acetic anhydride Chemical group CC(=O)OC(C)=O WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N Cyclophosphamide Chemical compound ClCCN(CCCl)P1(=O)NCCCO1 CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229930192392 Mitomycin Natural products 0.000 description 3
- NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N Mytomycin Chemical compound C1N2C(C(C(C)=C(N)C3=O)=O)=C3[C@@H](COC(N)=O)[C@@]2(OC)[C@@H]2[C@H]1N2 NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N 0.000 description 3
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000003405 delayed action preparation Substances 0.000 description 3
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 3
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 3
- 229960004857 mitomycin Drugs 0.000 description 3
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 3
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 3
- WMBWREPUVVBILR-WIYYLYMNSA-N (-)-Epigallocatechin-3-o-gallate Chemical compound O([C@@H]1CC2=C(O)C=C(C=C2O[C@@H]1C=1C=C(O)C(O)=C(O)C=1)O)C(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 WMBWREPUVVBILR-WIYYLYMNSA-N 0.000 description 2
- XULPLJSODQQHPH-UHFFFAOYSA-N Bergenin Natural products OCC1OC2C(OC(=O)c3cc(O)c(CO)c(O)c23)C(O)C1O XULPLJSODQQHPH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YWJXCIXBAKGUKZ-HJJNZUOJSA-N Bergenin Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]2C3=C(O)C(OC)=C(O)C=C3C(=O)O[C@@H]21 YWJXCIXBAKGUKZ-HJJNZUOJSA-N 0.000 description 2
- 208000001382 Experimental Melanoma Diseases 0.000 description 2
- WMBWREPUVVBILR-UHFFFAOYSA-N GCG Natural products C=1C(O)=C(O)C(O)=CC=1C1OC2=CC(O)=CC(O)=C2CC1OC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 WMBWREPUVVBILR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 2
- 240000004371 Panax ginseng Species 0.000 description 2
- NCBOXCFFSWALMZ-XTNBEGJDSA-N [(2r,3r,4r,4as,10bs)-3,4,8,10-tetraacetyloxy-9-methoxy-6-oxo-3,4,4a,10b-tetrahydro-2h-pyrano[3,2-c]isochromen-2-yl]methyl acetate Chemical compound CC(=O)O[C@H]1[C@H](OC(C)=O)[C@@H](COC(C)=O)O[C@H]2C3=C(OC(C)=O)C(OC)=C(OC(C)=O)C=C3C(=O)O[C@@H]21 NCBOXCFFSWALMZ-XTNBEGJDSA-N 0.000 description 2
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 2
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- WETWJCDKMRHUPV-UHFFFAOYSA-N acetyl chloride Chemical group CC(Cl)=O WETWJCDKMRHUPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012346 acetyl chloride Substances 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 2
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 2
- 229960004397 cyclophosphamide Drugs 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- 229940030275 epigallocatechin gallate Drugs 0.000 description 2
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 235000008434 ginseng Nutrition 0.000 description 2
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 238000011580 nude mouse model Methods 0.000 description 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 2
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 2
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 2
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 2
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 2
- 239000002798 polar solvent Substances 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 2
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 2
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 241000792859 Enema Species 0.000 description 1
- 238000012449 Kunming mouse Methods 0.000 description 1
- 206010050017 Lung cancer metastatic Diseases 0.000 description 1
- 206010027457 Metastases to liver Diseases 0.000 description 1
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 238000007171 acid catalysis Methods 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000010933 acylation Effects 0.000 description 1
- 238000005917 acylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 239000012670 alkaline solution Substances 0.000 description 1
- 230000000954 anitussive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001088 anti-asthma Effects 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000000924 antiasthmatic agent Substances 0.000 description 1
- 229940124584 antitussives Drugs 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 1
- 238000007036 catalytic synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000013270 controlled release Methods 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000001784 detoxification Methods 0.000 description 1
- ZZVUWRFHKOJYTH-UHFFFAOYSA-N diphenhydramine Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(OCCN(C)C)C1=CC=CC=C1 ZZVUWRFHKOJYTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002330 electrospray ionisation mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 239000007920 enema Substances 0.000 description 1
- 229940095399 enema Drugs 0.000 description 1
- 239000002662 enteric coated tablet Substances 0.000 description 1
- 239000002702 enteric coating Substances 0.000 description 1
- 238000009505 enteric coating Methods 0.000 description 1
- 238000000105 evaporative light scattering detection Methods 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 238000002695 general anesthesia Methods 0.000 description 1
- 229930182494 ginsenoside Natural products 0.000 description 1
- 229940089161 ginsenoside Drugs 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000013415 human tumor xenograft model Methods 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000031891 intestinal absorption Effects 0.000 description 1
- 150000002605 large molecules Chemical class 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 1
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000003607 modifier Substances 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 1
- 239000012454 non-polar solvent Substances 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010606 normalization Methods 0.000 description 1
- 229940124531 pharmaceutical excipient Drugs 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 229940086066 potassium hydrogencarbonate Drugs 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 1
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 1
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 description 1
- 239000011973 solid acid Substances 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010935 stainless steel Substances 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 210000001562 sternum Anatomy 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 201000000498 stomach carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 150000003521 tetracyclic triterpenoids Chemical class 0.000 description 1
- 210000003371 toe Anatomy 0.000 description 1
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 1
- 210000002417 xiphoid bone Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07J—STEROIDS
- C07J17/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen, having an oxygen-containing hetero ring not condensed with the cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton
- C07J17/005—Glycosides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7028—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages
- A61K31/7034—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin
- A61K31/704—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin attached to a condensed carbocyclic ring system, e.g. sennosides, thiocolchicosides, escin, daunorubicin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07J—STEROIDS
- C07J17/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen, having an oxygen-containing hetero ring not condensed with the cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Abstract
Изобретение относится к полиацилированному производному 20(R)-гинзенозида Rg3 формулы (I), в которой R=CH3(CH2)nCO, n=1-5. Изобретение также относится к способу получения соединения формулы (I). Технический результат: получены новые полиацилированные производные 20(R)-гинзенозида Rg3 формулы (I), обладающие противораковой активностью в отношении рака груди, рак лёгких, рака желудка, рака кишечника, рака печени у человека; карциномы лёгких, меланомы, саркомы у животных. 2 н. и 4 з.п. ф-лы, 9 табл., 4 пр.
Description
Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к области фармацевтической химии и, в частности, настоящее изобретение относится к полиацилированному производному 20 (R)-гинзенозида Rg3 и способу его получения, а также к противоопухолевому фармакологическому действию указанных производных.
Предпосылки создания изобретения
20(R)-Гинзенозид Rg3 представляет собой тетрациклический тритерпеноидный мономер гинзенозида сапонина, выделенный из красного женьшеня (красный женьшень представляет собой продукт обработки Panax ginseng C. A. Mey). Он был выделен из корейского женьшеня японским исследователем Kitagawa Hoon в 1980, его молекулярная формула представляет собой C42H72O13, относительный молекулярный вес - 784,3. 20(R)-Гинзенозид Rg3 эффективен при синергетической детоксикации, оказывает положительное влияние при дефиците ци, усиливает иммунитет человеческого организма и т.д. Кроме того, исследования показали, что гинзенозид Rg3 участвует в подавлении пролиферации, инфильтрации и метастазирования опухолевых клеток, может индуцировать апоптоз раковых клеток печени, раковых клеток предстательной железы, раковых клеток при лейкемии, раковых клеток шейки матки.
20(R)-Гинзенозид Rg3
Из-за большого размера молекулы 20(R)-гинзенозид Rg3 нерастворим в воде и других высокополярных растворителях, а также нерастворим в петролейном эфире, хлороформе и других низкополярных или неполярных растворителях; 20(R)-гинзенозид Rg3 хорошо растворим в пиридине, растворе этанола (50-70%), водных растворах сильных кислот (pH < 2) и сильнощелочных растворах (pH > 10). Он принадлежит к IV классу лекарственных средств согласно Системе Биофармацевтической Классификации (Biopharmaceutics Classification System, BCS), и вследствие низкой растворимости и трансмембранной проницаемости, а также низкой биодоступности, фармакологическое действие 20(R)-гинзенозида Rg3 ограничено.
За последние годы многие исследователи провели тщательные исследования полиацилирования природных соединений, например Liu Jikai с соавторами синтезировали пентаацетат бергенина путем катализа твердой кислотой, что описано в Патентной Заявке CN200510010970.0 (Kunming Institute of Botany, Chinese Academy of Sciences). По сравнению с исходным бергенином, в экспериментах на животных было показано, что пентаацетат бергенина обладает выраженным синергетическим фармакологическим действием и может эффективно преодолевать ограничения, характерные для бергенина, такие как слабое противокашлевое и противоастматическое действие, а также низкую оральную абсорбцию.
Пентаацетат мангиферина, мангиферин гептаноил и мангиферин гексабутаноил были синтезированы с применением серной кислоты в качестве катализатора исследовательской группой под руководством Deng Jia Gang в Guangxi University of Medical Sciences. (Experiment Traditional Medical Formulae Vol 18, No 24, page 185-189); Фармакологические эксперименты с пентаацетатом мангиферина, мангиферин пропионил гептаацетатом и мангиферин бутирил гексаакрилатом, полученными каталитическим синтезом с серной кислотой (исследовательская группа под руководством Deng Jiagang et al., Guangxi Medical University), показали, что три указанные производные мангиферина могут оказывать фармакологическое действие, схожее с мангиферином, при дозировке 1/4 от дозировки мангиферина, что указывает на более сильное противовоспалительное действие ацилированных производных по сравнению с мангиферином (Chinese Journal of Experiment Traditional Medical Formulae Vol 18, No 24, page 185-189). Фармакологическое исследование эпигаллокатехин галлата октаацетата, полученного в результате полиацилирующей модификации эпигаллокатехин галлата (исследовательская группа под руководством Tak Hang Chan, Hong Kong Polytechnic University), показало, что данное производное обладает улучшенной стабильностью и более высокой противораковой эффективностью (Bioorg & Medicinal Chemistry 12 (2004) 5587-5593). Суммируя вышесказанное, сложноэфирные производные лекарственных средств, полученные посредством сложноэфирной модификации, имеют повышенную липорастворимость и более высокий коэффициент распределения в системе масло/вода, что повышает их трансмембранную проницаемость, приводя к улучшенной трансмембранной абсорбции, биодоступности лекарственных средств и повышенной эффективности лекарственных средств. Однако, таких исследований в отношении 20(R)-гинзенозида Rg3 не проводилось, поэтому авторы настоящего изобретения разработали и синтезировали полиацилированные производные 20(R)-гинзенозида Rg3 путем щелочного катализа и провели их фармакологическое исследование.
Краткое описание сути изобретения
Технической проблемой, на решение которой направлено настоящее изобретение, является получение полиацилированных производных 20(R)-гинзенозида Rg3 методами химического синтеза. В настоящем изобретении описано синтетическое полиацилированное производное 20(R)-гинзенозида Rg3, полученное ацилированием с использованием 20(R)-гинзенозида Rg3 в качестве исходного соединения.
Гидроксильные группы 20(R)-гинзенозида Rg3 блокируют для повышения липофильности и изменения коэффициента распределения в системе масло\вода, тем самым увеличивая всасываемость в кишечнике и повышая эффективность. Кроме того, в настоящем изобретении описан также способ получения полиацилированных производных 20(R)-гинзенозида Rg3, в котором используются мягкие условия проведения реакции и который пригоден для массового промышленного применения.
Прежде всего, в настоящем изобретении описаны полиацилированные производные 20(R)-гинзенозида Rg3 (т.е. мультиацилированные производные 20(R)-гинзенозида Rg3), имеющие формулу (I),
где R= CH3(CH2)nCO, n=0-5,
где R= CH3(CH2)nCO, n=2-4,
Также, в настоящем изобретении описана фармацевтическая композиция, содержащая полиацилированное производное 20(R)-гинзенозида Rg3 по настоящему изобретению и фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество.
К фармацевтически приемлемым вспомогательным веществам, описанным в настоящем документе, относятся нетоксичные твердые, полутвердые или жидкие наполнители, разбавители, носители, регуляторы уровня рН, модификаторы ионной силы, агенты для обеспечения замедленного высвобождения и контролируемого высвобождения, средства для создания покрытия и другие фармацевтические вспомогательные вещества. Применяющиеся вспомогательные вещества можно адаптировать к подходящей форме введения и можно создавать составы, известные квалифицированным специалистам в данной области, представляющие собой препараты для инъекций, лиофилизованные порошки для инъекций, спреи, растворы для перорального введения, суспензии для перорального введения, таблетки, капсулы, таблетки с кишечно-растворимой оболочкой, пилюли, порошки, гранулы, препараты с замедленным высвобождением и контролируемым высвобождением.
Полиацилированные производные 20(R)-гинзенозида Rg3 по первому аспекту настоящего изобретения можно вводить инъекционно или через желудочно-кишечный тракт, поэтому фармацевтическая композиция по настоящему изобретению предпочтительно представляет собой препарат для инъекций или препарат для введения через желудочно-кишечный тракт, другими словами – особенно предпочтительны вспомогательные вещества, подходящие для введения посредством инъекции и через желудочно-кишечный тракт.
Термин “введение через желудочно-кишечный тракт” в настоящем документе относится к форме введения через желудочно-кишечный тракт пациентов, включая пероральное введение, введение в виде принудительного питания и введение посредством клизмы, предпочтительно пероральное введение, например с применением вспомогательных веществ, известных квалифицированным специалистам в данной области, растворов для перорального введения, суспензий для перорального введения, таблеток, капсул, таблеток с кишечно-растворимой оболочкой, пилюль, порошков, гранул и препаратов с замедленным высвобождением и контролируемым высвобождением, а препараты для введения посредством инъекций включают инъецируемые растворы и порошки для приготовления инъецируемых растворов.
Также, в другом аспекте настоящего изобретения описан способ получения полиацилированных производных 20(R)-гинзенозида Rg3, включающий следующие стадии:
1) растворение 20(R)-гинзенозида Rg3 в органическом растворителе с получением раствора 20(R)-гинзенозида Rg3,
2) добавление ацилирующего агента для этерификации,
3) добавление воды для остановки реакции и доведение рН раствора до 7 с использованием основания, и
4) затем фильтрацию и перекристаллизацию с получением конечного продукта.
Органический растворитель на стадии 1) выбран из триэтиламина или безводного пиридина, предпочтительно безводного пиридина, а ацилирующий агент на стадии 2) представляет собой ацилхлорид или ангидрид кислоты.
В частности, ацилхлорид выбран из ацетил хлорида, пропионил хлорида, бутирил хлорида, валерил хлорида или гексаноил хлорида; и ангидрид кислоты выбран из уксусного ангидрида, пропионового ангидрида, масляного ангидрида, валерианового ангидрида или капронового ангидрида.
Температура реакции этерификации на стадии 2) составляет 80-100°C.
В частности, время этерификации составляет 2-5 часов.
В частности, ацилирующий агент добавляют в раствор 20(R)-гинзенозида Rg3 при комнатной температуре.
В частности, комнатная температура равна 15-35°C.
Основание на стадии 3) выбрано из неорганических оснований.
В частности, неорганическое основание выбирают из карбоната натрия, карбоната калия, бикарбоната натрия или гидрокарбоната калия, предпочтительно бикарбоната натрия.
В частности, вода, добавляемая на стадии 3), представляет собой ледяную воду, т.е. воду с температурой 0°C, для завершения процесса этерификации.
Перекристаллизацию полиацилированного производного 20(R)-гинзенозида Rg3 на стадии 4) осуществляют с использованием системы вода/метанол.
В другом аспекте настоящего изобретения описано применение полиацилированных производных 20(R)-гинзенозида Rg3 для приготовления противоопухолевых и противораковых лекарственных средств.
В настоящем изобретении описано также применение полиацилированных производных 20(R)-гинзенозида Rg3 в производстве лекарственных средств для борьбы с различными солидными опухолями у животных, раком легких у человека, раком груди, раком желудка, раком кишечника и гепатокарциномой.
Настоящее изобретение обеспечивает преимущества, заключающиеся в том, что способ получения полиацилированных производных 20(R)-гинзенозида Rg3 по настоящему изобретению легко контролируется, увеличивает суммарный выход продуктов и подходит для массового промышленного производства.
Подробное описание изобретения
Далее настоящее изобретение будет описано на приводимых ниже вариантах осуществления, и приведенные варианты осуществления следует во всех отношениях рассматривать как иллюстративные, а не ограничивающие объем настоящего изобретения. Все реагенты и материалы, применяющиеся в описанных вариантах осуществления, коммерчески доступны, а в случае недостатка коммерческих источников следует обратиться к Guidebook to Organic Synthesis, руководствам от регулирующих органов в области лекарственных средств и инструкциям производителей к соответствующим приборам и реагентам.
Пример 1
1) 20(R)-Гинзенозид Rg3 (4 г, 5,09 ммоль) добавляли в 180 мл сухого безводного пиридина и перемешивали для растворения, получая раствор 20(R)-гинзенозида Rg3.
2) При комнатной температуре (15-35°C) добавляли ацетил хлорид (0,71 мл, около 10 ммоль) в раствор 20(R)-гинзенозида Rg3.
3) Реакционную смесь нагревали при перемешивании и выдерживали при 80°C для проведения этерификации.
4) После выдерживания реакционной смеси при температуре 80°C в течение 5 часов реакционный раствор выливали в ледяную воду и добавляли насыщенный водный раствор бикарбоната натрия до значения pH 7, что приводило к выпадению большого количества белого твердого осадка.
5) Фильтрация давала белое твердое вещество, которое промывали большим количеством воды и перекристаллизовывали из смеси вода/метанол, с получением белого порошка.
20(R)-гинзенозид Rg3 октаацетат (3 г) в виде белого твердого порошка растворим в воде, этаноле. После проявления ТСХ-пластины (раствор для хроматографирования: хлороформ/метанол 50:1, Rf = 0,4) и опрыскивания реагентом 10% H2SO4-этанол, проявляется фиолетовым цветом. В спектре ESI-MS, m/z[M+Na] = 1143,6, и молекулярная масса составляет 1121.
1H-ЯМР и 13C-ЯМР параметры для 20(R)-гинзенозид Rg3 октоацетата приведены ниже:
1H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ (м.д.): 5,301-5,255 (т, 1H, J = 9,2 Гц), 5,192 - 5,146 (т, 1H, J = 9,2 Гц), 5,062 (с, 1H), 4,891-4,721 (м, 4H), 4,629 (с, 2H), 4,182-4,067 (м, 3H), 3,973-3,911 (м, 3H), 3,630-3,592 (т, 1H, J = 1,2 Гц), 3,512 (с, 1H), 3,054-3,053 (д, 1H, J = 7,6Гц), 2,088 (с, 2H), 1,984-1,902 (м, 22H), 1,738 (с, 3H), 1,626-1,210 (м, 18H), 0,992-0,889 (м, 12H), 0,794 (с, 3H), 0,721 (с, 5H);
13C-ЯМР (100 МГц, Пиридин-d5) δ (м.д.): 171,88, 171,81, 171,72, 171,61, 171,51, 171,31, 171,19, 171,15 (C=O), 132,05 (C-25), 127,30 (C-24), 104,92 (C-1′′), 102,35 (C-1′), 91,57 (C-3), 79,27 (C-2′), 76,78 (C-5′′), 74,96 (C-5′), 74,71 (C-2′′), 74,71 (C-20), 73,56 (C-3′′), 73,25 (C-3′), 72,98 (C-12), 70,79 (C-4′′), 70,39 (C-4′), 63,95 (C-6′′&6′), 57,54 (C-5), 53,76 (C-14), 51,56 (C-17), 51,47 (C-9), 47,40 (C-13), 44,35 (C-22), 41,17 (C-4), 40,85 (C-8), 40,04 (C-1), 38,18 (C-10), 36,06 (C-7), 32,75 (C-11), 30,09 (C-15), 27,22 (C-28), 25,64 (C-16), 24,96 (C-2), 24,83 (C-26), 22,39 (C-21), 21,93 (C-23), 21,71-21,79 (CH3CO), 18,29 (C-6), 17,65 (C-30), 17,26 (C-27), 16,17 (C-29), 16,13 (C-19), 16,90 (C-18).
На основе данных спектров ESI-MS, 1H-ЯМР и 13C-ЯМР, можно заключить, что структурная формула 20(R)-гинзенозид Rg3 октоацетата имеет следующий вид:
Пример 2
1) 20(R)-Гинзенозид Rg3 (4 г, 5,09 ммоль) добавляли в 180 мл сухого безводного пиридина и перемешивали для растворения, получая раствор 20(R)-гинзенозида Rg3.
2) При комнатной температуре (20-25°C) добавляли н-масляный ангидрид (3,07 мл, около 10 ммоль) в раствор 20(R)-гинзенозида Rg3.
3) Реакционную смесь нагревали при перемешивании и выдерживали при 100°C для проведения этерификации.
4) После выдерживания реакционной смеси при температуре 100°C в течение 5 часов реакционный раствор выливали в ледяную воду и добавляли насыщенный водный раствор бикарбоната натрия до значения pH 7, что приводило к выпадению большого количества белого твердого осадка.
5) Фильтрация давала белое твердое вещество, которое промывали большим количеством воды и перекристаллизовывали из смеси вода/метанол, с получением белого порошка.
20(R)-гинзенозид Rg3 окто-н-бутират (3 г) в виде белого твердого порошка растворим в воде и этаноле. После проявления ТСХ-пластины (раствор для хроматографирования: петролейный эфир/этилацетат 3:1, Rf = 0,5) и опрыскивания реагентом 10% H2SO4-этанол, проявляется фиолетовым цветом. В спектре ESI-MS, m/z[M+Na] = 1368,27, и молекулярная масса составляет 1345.
1H-ЯМР и 13C-ЯМР параметры для 20(R)-гинзенозид Rg3 окто-н-бутирата приведены ниже:
1H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ (м.д.): 5,301-5,255 (т, 1H, J = 9,2 Гц), 5,192 - 5,146 (т, 1H, J = 9,2 Гц), 5,062 (с, 1H), 4,891-4,721 (м, 4H), 4,629 (с, 2H), 4,182-4,067 (м, 3H), 3,973-3,911 (м, 3H), 3,630-3,592 (т, 1H, J = 1,2 Гц), 3,512 (с, 1H), 3,054-3,053 (д, 1H, J = 7,6 Гц), 2,35 (м, 12H), 2,32 (с, 2H), 1,984-1,902 (м, 22H), 1,801-1,793 (м, 16H), 1,738 (с, 3H), 0,992-0,889 (м, 16H), 0,794 (с, 3H), 0,721 (с, 5H).
13C-ЯМР (100 МГц, Пиридин-d5) δ (м.д.): 172,96, 172,89, 172,62, 172,51, 172,47, 172,28, 172,26, 172,06 (C=O), 130,55 (C-25), 125,81 (C-24), 103,44 (C-1′′), 100,82 (C-1′), 90,01 (C-3), 77,41 (C-2′), 77,11 (C-5′′), 76,68 (C-5′), 75,47 (C-2′′), 72,04 (C-20), 74,43 (C-3′′), 73,91 (C-3′), 71,64 (C-12), 69,14 (C-4′′), 68,74 (C-4′), 63,30 (C-6′), 63,35 (C-6′′), 56,34 (C-5), 51,39 (C-14), 50,16 (C-17), 49,99 (C-9), 48,73 (C-13), 42,59 (C-22), 40,25 (C-4), 40,04 (C-8), 39,25 (C-1), 36,85 (C-10), 35,59-35,90 (CH3CH2 CH2CO), 35,01 (C-7), 31,59 (C-11), 31,16 (C-15), 27,22 (C-28), 25,64 (C-16), 24,96 (C-2), 24,83 (C-26), 22,39 (C-21), 21,93 (C-23), 18,42 (C-6), 18,17-18,34 (CH3CH2CH2CO), 17,65 (C-30), 17,26 (C-27), 16,12 (C-29), 16,02 (C-19), 15,40 (C-18), 13,64 (CH3CH2CH2CO).
На основе данных спектров ESI-MS, 1H-ЯМР и 13C-ЯМР, можно заключить, что структурная формула 20(R)-гинзенозид Rg3 окто-н-бутирата имеет следующий вид:
Пример 3
1) 20(R)-Гинзенозид Rg3 (4 г, 5,09 ммоль) добавляли в 180 мл сухого безводного пиридина и перемешивали для растворения, получая раствор 20(R)-гинзенозида Rg3.
2) При комнатной температуре (15-25°C) добавляли н-пропионовый ангидрид (3,07 мл, около 10 ммоль) в раствор 20(R)-гинзенозида Rg3.
3) Реакционную смесь нагревали при перемешивании и выдерживали при 80°C для проведения этерификации.
4) После выдерживания реакционной смеси при температуре 80°C в течение 5 часов реакционный раствор выливали в ледяную воду и добавляли насыщенный водный раствор бикарбоната натрия до значения pH 7, что приводило к выпадению большого количества белого твердого осадка.
5) Фильтрация давала белое твердое вещество, которое промывали большим количеством воды и перекристаллизовывали из смеси вода/метанол, с получением белого порошка.
20(R)-гинзенозид Rg3 окто-н-пропионат (3 г) в виде белого твердого порошка растворим в воде и этаноле.
После проявления ТСХ-пластины (раствор для хроматографирования: петролейный эфир/этилацетат 3:1, Rf = 0,4) и опрыскивания реагентом 10% H2SO4-этанол, проявляется фиолетовым цветом. В спектре ESI-MS, m/z[M+Na] = 1255,71, и молекулярная масса составляет 1233.
1H-ЯМР и 13C-ЯМР параметры для 20(R)-гинзенозид Rg3 окто-н-пропионата приведены ниже:
1H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ (м.д.): 5,301-5,255 (т, 1H, J = 9,2 Гц), 5,192-5,146 (т, 1H, J = 9,2 Гц), 5,062 (с, 1H), 4,891-4,721 (м, 4H), 4,629 (с, 2H), 4,182-4,067 (м, 3H), 3,973 - 3,911 (м, 3H), 3,630-3,592 (т, 1H, J = 1,2 Гц), 3,512 (с, 1H), 3,054-3,053 (д, 1H, J = 7,6 Гц), 2,29-2,27 (м, 16H), 2,088 (с, 2H), 1,14-1,12 (м, 24H), 1,738 (с, 3H), 0,992-0,889 (м, 16H), 0,794 (с, 3H), 0,721 (с, 5H);
13C-ЯМР (100 МГц, Пиридин-d5) δ (м.д.): 175,27, 175,20, 175,04, 174,97, 174,87, 174,70, 174,68, 174,52 (C=O), 132,06 (C-25), 127,31 (C-24), 104,96 (C-1′′), 102,38 (C-1′), 91,53 (C-3), 79,14 (C-2′), 77,11 (C-5′′), 76,68 (C-5′), 75,47 (C-2′′), 72,46 (C-20), 74,43 (C-3′′), 73,91 (C-3′), 70,18 (C-12), 70,86 (C-4′′), 70,36 (C-4′), 63,81 (C-6′′&6′), 57,57 (C-5), 53,86 (C-14), 51,53 (C-17), 51,49 (C-9), 7,40 (C-13), 44,29 (C-22), 41,20 (C-4), 40,87 (C-8), 40,07 (C-1), 38,20 (C-10), 36,09 (C-7), 32,87 (C-11), 30,13 (C-15), 29,54-29,98 (CH3CH2CO), 29,10 (CH3CH2CO), 28,82-28,98 (CH3CH2CO), 27,08 (C-28), 24,24 (C-16), 24,96 (C-2), 24,83 (C-26), 22,39 (C-21), 21,93 (C-23), 19,65 (C-6), 18,97 (C-30), 18,96 (C-27), 17,53 (C-29), 17,50 (C-19), 16,90 (C-18), 10,45-10,58 (CH3CH2CO).
На основе данных спектров ESI-MS, 1H-ЯМР и 13C-ЯМР, можно заключить, что структурная формула 20(R)-гинзенозид Rg3 окто-н-пропионата имеет следующий вид:
Пример 4
1) 20(R)-Гинзенозид Rg3 (4 г, 5,09 ммоль) добавляли в 180 мл сухого безводного пиридина и перемешивали для растворения, получая раствор 20(R)-гинзенозида Rg3.
2) При комнатной температуре (15-35°C) добавляли гексаноил хлорид (1,387 мл, около 10 ммоль) в раствор 20(R)-гинзенозида Rg3.
3) Реакционную смесь нагревали при перемешивании и выдерживали при 80°C для проведения этерификации.
4) После выдерживания реакционной смеси при температуре 80°C в течение 5 часов реакционный раствор выливали в ледяную воду и добавляли насыщенный водный раствор бикарбоната натрия до значения pH 7, что приводило к выпадению большого количества белого твердого осадка.
5) Фильтрация давала белое твердое вещество, которое промывали большим количеством воды и перекристаллизовывали из смеси вода/метанол, с получением белого порошка.
20(R)-гинзенозид Rg3 окто-н-гексаноат (3 г) в виде белого твердого порошка растворим в воде и этаноле. После проявления ТСХ-пластины (раствор для хроматографирования: хлороформ/метанол 5:1, Rf = 0,4) и опрыскивания реагентом 10% H2SO4-этанол, проявляется фиолетовым цветом. В спектре ESI-MS, m/z[M+Na] = 1602,2, и молекулярная масса составляет 1570.
1H-ЯМР и 13C-ЯМР параметры для 20(R)-гинзенозид Rg3 окто-н-гексаноата приведены ниже:
1H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ (м.д.): 5,301-5,255 (т, 1H, J = 9,2 Гц), 5,192-5,146, (т, 1H, J = 9,2 Гц), 5,062 (с, 1H), 4,891-4,721 (м, 4H), 4,629 (с, 2H), 4,182-4,067 (м, 3H), 3,973-3,911 (м, 3H), 3,630-3,592 (т, 1H, J = 1,2 Гц), 3,512 (с, 1H), 3,054-3,053 (д, 1H, J = 7,6 Гц), 2,29-2,27 (м, 16H), 2,088 (с, 2H), 1,14-1,12 (м, 24H), 1,738 (с, 3H), 0,992-0,889 (м, 16H), 0,794 (с, 3H), 0,721 (с, 5H).
13C-ЯМР (100 МГц, Пиридин-d5) δ (м.д.): 173,27, 173,20, 173,04, 172,98, 172,82, 172,70, 172,67, 172,52 (C=O), 132,06 (C-25), 127,31 (C-24), 104,96 (C-1′′), 102,38 (C-1′), 91,53 (C-3), 79,14 (C-2′), 77,11 (C-5′′), 76,68 (C-5′), 75,47 (C-2′′), 72,46 (C-20), 74,43 (C-3′′), 73,91 (C-3′), 70,18 (C-12), 70,86 (C-4′′), 70,36 (C-4′), 63,81 (C-6′′&6′), 57,57 (C-5), 53,86 (C-14), 51,53 (C-17), 51,49 (C-9), 7,40 (C-13), 44,29 (C-22), 41,20 (C-4), 40,87 (C-8), 40,07 (C-1), 38,20 (C-10), 36,09 (C-7), 33,14-34,28 (CH3CH2CH2CH2CH2CO), 32,87 (C-11), 28,82-28,98 (CH3CH2CH2CH2CH2CO), 30,13 (C-15), 27,08 (C-28), 24,24 (C-16), 24,96 (C-2), 24,83 (C-26), 22,39 (C-21), 22,48-22,10 (CH3CH2CH2CH2CH2CO), 21,93 (C-23), 19,65 (C-6), 18,97 (C-30), 18,96 (C-27), 17,53 (C-29), 17,50 (C-19), 16,90 (C-18), 14,41-14,67 (CH3CH2CH2CH2CH2CO).
На основе данных спектров ESI-MS, 1H-ЯМР и 13C-ЯМР, можно заключить, что структурная формула 20(R)-гинзенозид Rg3 окто-н-гексаноата имеет следующий вид:
Экспериментальный пример. Влияние полиацилированных производных 20(R)-гинзенозида Rg3 на подавление роста опухоли
1. Протестированные лекарственные средства
Полиацилированные производные 20(R)-гинзенозида Rg3:
20(R)-гинзенозид Rg3 окто-ацетат, 20(R)-гинзенозид Rg3 окто-н-бутират и 20(R)-гинзенозид Rg3 окто-н-пропионат, предоставленные компанией Dalian Fusheng natural drug development Co. Ltd., детектировали методом нормализации площадей с применением ВЭЖХ с УФ-детектором и испарительным детектором светорассеяния, их чистота была определена как равная 99,6%, 99,2% и 99,1%, соответственно.
Способ получения
Точно отмеряли количество полиацилированных производных 20(R)-гинзенозида Rg3, добавляли 5% CMC-Na для получения целевой концентрации суспензии. Объем введения составлял 0,5 мл/мышь.
2. Материалы для эксперимента
Лекарственные средства для положительного контроля:
Циклофосфамид (CTX) для инъекций, от Shanghai Hualian Pharmaceuticals Group, введение один раз в день, в течение семи дней подряд;
5Fu раствор для инъекций, от Shanghai Xudonghaipu Pharmaceuticals Co., ltd.;
митомицин (MMC) для инъекций, от Kyowa Hakko Kogyo Co. Ltd.
Опухоли:
модель рака груди человека Bcap-37, модель рака легких человека A549, модель рака кишечника человека LOVO, модель рака желудка человека MGC и модель рака печени человека QGY, причем линии опухолевых клеток принадлежали ко второму или более поколению, линия клеток мышиной B16 меланомы, мышиная модель карциномы легких Льюиса, мышиная модель саркомы s180 – все перечисленные культуры пересевались и сохранялись в Фармакологическом Подразделении Шанхайского Института Фармацевтической Промышленности.
3. Животные для экспериментов
Происхождение:
Голые мыши, возраст 6 недель, вес 18-22 г/мышь, от Центра Лабораторных Животных Китайской Академии Наук, Шанхайское отделение, сертификат No,2001A032.
Мыши C57BL/6 и Куньминские мыши, 18-22 г/мышь, от Центра Лабораторных Животных Китайской Академии Наук, Шанхайское отделение, сертификат SYXK (Шанхай) 2004-0015.
Пол: самцы или самки, одинаковый половой состав для каждого повтора эксперимента
Число животных: 10 мышей и 10 голых мышей для каждой из групп положительного контроля и тестовых групп в эксперименте, и 20 для группы отрицательного контроля
4. Условия эксперимента
Дозировка:
Дозировки для 20(R)-гинзенозид Rg3 окто-ацетата, 20(R)-гинзенозид Rg3 окто-н-бутирата и 20(R)-гинзенозид Rg3 окто-н-пропионата были установлены на уровне группы с высокой дозой (0,3 мг/кг/с), группы со средней дозой (0,06 мг/кг/с) и группы с низкой дозой (0,012 мг/кг/с).
Режим дозировки: пероральное введение, два раза в сутки.
Модель опухоли человека и клеточная мышиная модель: po×14bid (po – перорально; bid – 2 раза в сутки);
Мышиная модель опухоли: po×10bid.
Контрольные эксперименты:
Группа отрицательного контроля: получала такой же объем 5%-ного CMC-Na, как тестовая группа, в таком же режиме дозирования, как тестовая группа.
Группа положительного контроля: Циклофосфамид CTX 30 мг/кг, MMC 2 мг/кг и 5Fu 30 мг/кг интраперитонеально или внутривенно, один раз в сутки, в течение семи дней подряд.
5. Методика эксперимента и основные стадии
5.1 Противоопухолевое тестирование
5.1.1 Модель подкожного инокулирования
Опухолевые клетки в фазе быстрого роста отбирали в стерильных условиях и готовили суспензии клеток с концентрацией примерно 2×107/мл путем гомогенизации, полученные суспензии вводили мышам-хозяевам подкожно в объеме 0,2 мл/мышь и повторяли на следующий день согласно дизайну эксперимента, животных из каждой группы забивали примерно через три недели, отбирали и взвешивали опухоли, и вычисляли степень подавления опухоли по следующей формуле:
степень подавления опухоли % = [(средний вес опухоли в контрольной группе - средний вес опухоли в тестовой группе)/средний вес опухоли в контрольной группе]×100%
Те же самые операции повторяли в модели ксенотрансплантанта опухоли человека, за исключением того, что корм, упаковку, клетку и контактирующие инструменты стерилизовали при высоком давлении перед использованием, и голых мышей кормили в подставке с ламинарным течением. Опухоли и вес животных с опухолями измеряли в динамике (размер опухоли измеряли штангенциркулем: длинный диаметр/a, короткий диаметр/b, и объем опухоли = a×b2/2).
5.1.2 Модель желудочного инокулирования in situ
Два пересева in vivo клеток рака желудка MGC в фазе быстрого роста отбирали в стерильных условиях и готовили суспензии клеток с концентрацией примерно 1-2×107/мл путем гомогенизации; полученные суспензии клеток (0,05 мл) хирургическим путем вводили голым мышам в большую кривизну желудка и повторяли на следующий день согласно дизайну эксперимента, и вычисляли степень увеличения продолжительности жизни животных с опухолью по следующей формуле:
Степень увеличения продолжительности жизни % = среднее число суток выживаемости в тестируемой группе/ среднее число суток выживаемости в контрольной группе ×100%
5.2 Тестирование в отношении метастазов опухолей
5.2.1 Модель инокулирования в хвостовую вену
Клетки мышиной меланомы B16 в фазе логарифмического роста отбирали в стерильных условиях и готовили суспензии клеток с концентрацией примерно 2,5×105/мл; полученные суспензии клеток вводили в дозировке 0,2 мл/мышь в хвостовую вену мышам C57BL/6 и повторяли на следующий день согласно дизайну эксперимента, животных забивали примерно через три недели, отбирали и взвешивали легкие в каждой группе, подсчитывали колонии метастазирующих раковых клеток в легких на одну мышь и среднее число колоний опухолевых клеток в каждой группе, и вычисляли степень подавления опухоли по следующей формуле:
степень подавления опухоли % = [(среднее число колоний в контрольной группе - среднее число колоний в тестовой группе)/ среднее число колоний в контрольной группе]×100%
5.2.2 Модель метастазов в печени с инокулированием в селезенку
Клетки рака кишечника LOVO (выращивали in vitro) в фазе логарифмического роста отбирали в стерильных условиях и готовили суспензии клеток с концентрацией примерно 1,8×107/мл, используя культуральную среду RPMI1640 как разбавитель. Голых мышей подвергали общему наркозу и разрезали живот после обычной дезинфекции кожи на животе, вынимали селезенку и вводили суспензии клеток рака кишечника LOVO (0,05 мл/мышь), затем возвращали селезенку на место, зашивали разрезы, и мышей помещали в клетки с подставкой с ламинарным течением. На следующий день мышам вводили препараты согласно дизайну эксперимента, наблюдали и регистрировали уровень смертности в каждой группе, и вычисляли степень увеличения продолжительности жизни в сравнении с группой отрицательного контроля.
5.2.3 Модель инокулирования в печень in situ
В стерильных условиях, из пересева in vivo второго поколения источника опухоли QGY в фазе быстрого роста готовили суспензии клеток с концентрацией примерно 1-2×107/мл путем гомогенизации (1:6), и полученные гомогенаты подготавливали к применению, фильтруя через сетки из нержавеющей стали 100 меш. Голым мышам обычным образом проводили дезинфекцию и анестезию, разрезали от мечевидного отростка грудины по середине брюшной полости, обнажая печень, инъецировали подготовленные суспензии клеток (0,05 мл) в паренхиму печени с помощью импортных 28ga 1/2мл шприцов, брюшную полость закрывали и затем зашивали слой за слоем. Голых мышей кормили в подставке с ламинарным течением, при этом стерилизуя под высоким давлением весь корм, упаковку, клетку и контактирующие инструменты перед использованием. На следующий день мышам вводили препараты согласно дизайну эксперимента, наблюдали и регистрировали время выживания в период 45 дней в каждой группе, и вычисляли время выживания в сравнении с группой отрицательного контроля и степень увеличения продолжительности жизни.
6. Результаты
6.1 Результаты противоопухолевого теста полиацилированных производных Rg3 в опухолевых моделях
Результаты противоопухолевого теста 20(R)-гинзенозид Rg3 окто-н-пропионата, 20(R)-гинзенозид Rg3 окто-н-бутирата и 20(R)-гинзенозид Rg3 окто-ацетата в мышиных и человеческих опухолевых моделях приведены в Таблице 1 и Таблице 2.
Таблица 1 Эффективность полиацилированных производных 20(R)-гинзенозида Rg3 в отношении карциномы легких Льюиса у мышей (подкожное инокулирование на пальцах ног) (n=3)
Образец | Доза мг/кг/д |
Режим введения | Число животных (мыши) старт/конец |
Вес тела животных (г) старт/конец |
Вес пальца с опухолью (г) X±SD |
Степень подавления опухоли (%) |
Rg3-окто-н-пропионат группа с высокой дозой | 0,3 | po×14bid | 10/10 | 20,1/24,5 | 0,191±0,105*** | 78,50 |
Rg3-окто-н-пропионат группа со средней дозой | 0,06 | po×14bid | 10/10 | 20,6/25,1 | 0,548±0,09*** | 61,58 |
Rg3-окто-н-пропионат группа с низкой дозой | 0,012 | po×14bid | 10/10 | 20,6/24,2 | 0,508±0,07*** | 50,12 |
Rg3-окто-н-бутират группа с высокой дозой | 0,3 | po×14bid | 10/10 | 20,6/23,9 | 0,208±0,05*** | 76,66 |
Rg3-окто-н-бутират группа со средней дозой | 0,06 | po×14bid | 10/10 | 20,9/25,0 | 0,347±0,06*** | 61,00 |
Rg3-окто-н-бутират группа с низкой дозой | 0,012 | po×14bid | 10/10 | 20,1/25,2 | 0,440±0,05*** | 50,55 |
Rg3-окто-ацетат группа с высокой дозой | 0,3 | po×14bid | 10/10 | 20,5/23,6 | 0,633±0,08*** | 71,09 |
Rg3-окто-ацетат группа со средней дозой | 0,06 | po×14bid | 10/10 | 20,5/24,4 | 0,366±0,09*** | 58,89 |
Rg3-окто-ацетат группа с низкой дозой | 0,012 | po×14bid | 10/10 | 20,1/24,5 | 0,444±0,09*** | 50,15 |
группа CTX | 100 | ip×2qod | 10/10 | 20,2/21,9 | 0,0541±0,02*** | 93,92 |
группа отрицательного контроля | 0,5% CMC-Na | po×14bid | 20/20 | 20,3/28,8 | 0,89±0,11 |
В сравнении с группой отрицательного контроля, ***значение p < 0,01
Таблица 2 Эффективность полиацилированных производных 20(R)-гинзенозида Rg3 в отношении клеток рака груди человека Bcap-37 (подкожное инокулирование) (n=3)
Образец | Доза мг/кг/д |
Режим введения | Число животных (мыши) старт/конец |
Вес тела животных (г) старт/конец |
Вес опухоли (г) X±SD |
Степень подавления опухоли (%) |
Rg3-окто-н-пропионат группа с высокой дозой | 0,3 | po×14bid | 10/10 | 20,9/24,2 | 0,360±0,10*** | 72,09 |
Rg3-окто-н-пропионат группа со средней дозой | 0,06 | po×14bid | 10/10 | 20,3/25,1 | 0,502±0,07*** | 61,11 |
Rg3-окто-н-пропионат группа с низкой дозой | 0,012 | po×14bid | 10/10 | 20,7/24,4 | 0,612±0,09*** | 52,58 |
Rg3-окто-н-бутират группа с высокой дозой | 0,3 | po×14bid | 10/10 | 20,1/24,2 | 0,380±0,06*** | 70,52 |
Rg3-окто-н-бутират группа со средней дозой | 0,06 | po×14bid | 10/10 | 20,8/25,1 | 0,610±0,08*** | 60,95 |
Rg3-окто-н-бутират группа с низкой дозой | 0,012 | po×14bid | 10/10 | 20,1/24,0 | 0,627±0,07*** | 51,41 |
Rg3-окто-ацетат группа с высокой дозой | 0,3 | po×14bid | 10/10 | 20,3/23,6 | 0,400±0,09*** | 68,98 |
Rg3-окто-ацетат группа со средней дозой | 0,06 | po×14bid | 10/10 | 20,2/24,5 | 0,520±0,08*** | 59,69 |
Rg3-окто-ацетат группа с низкой дозой | 0,012 | po×14bid | 10/10 | 20,0/25,7 | 0,672±0,07*** | 47,93 |
группа CTX | 100 | ip×2qod | 10/10 | 20,4/22,0 | 0,130±0,06*** | 89,90 |
группа отрицательного контроля | 0,5% CMC-Na |
po×14bid | 20/20 | 20,2/25,5 | 1,29±0,09*** |
В сравнении с группой отрицательного контроля, ***p <0,01
Из Таблицы 1 и Таблицы 2 видно, что 20(R)-гинзенозид Rg3 окто-н-пропионат, 20(R)-гинзенозид Rg3 окто-н-бутират и 20(R)-гинзенозид Rg3 окто-ацетат оказывают подавляющее действие на мышиные и человеческие опухолевые модели, и оптимальная степень подавления опухоли в тестируемых группах превышает 70%, демонстрируя существенное отличие в сравнении с группой отрицательного контроля (p<0,01).
6.2 Результаты тестирования полиацилированных производных Rg3 (а именно Rg3 мульти-ацилированных производных) в моделях метастазов опухолей
Результаты тестирования в отношении метастазов опухолей для 20(R)-гинзенозид Rg3 окто-н-пропионата, 20(R)-гинзенозид Rg3 окто-н-бутирата и 20(R)-гинзенозид Rg3 окто-ацетата в моделях метастазов мышиной меланомы B16, S180 и карциномы легких Льюиса, а также в модели метастазов рака легких человека, приведены в Таблице 3-6.
Таблица 3 Эффективность полиацилированных производных 20(R)-гинзенозида Rg3 в отношении клеток мышиной меланомы B16 (n=3)
Образец | Доза мг/кг/д |
Режим введения | Число животных (мыши) Старт/конец |
Вес тела животных (г) Старт/конец |
Число клонов в легких (мыши) X±SD |
Степень подавления метастазов (%) |
Rg3-окто-н-пропионат группа с высокой дозой | 0,3 | po×14bid | 10/10 | 20,1/24,8 | 7,21±7,3*** | 85,01 |
Rg3-окто-н-пропионат группа со средней дозой | 0,06 | po×14bid | 10/10 | 19,3/24,3 | 14,82±7,6*** | 69,19 |
Rg3-окто-н-пропионат группа с низкой дозой | 0,012 | po×14bid | 10/10 | 19,6/25,7 | 21,44±7,1*** | 55,42 |
Rg3-окто-н-бутират группа с высокой дозой | 0,3 | po×14bid | 10/10 | 20,1/21,1 | 8,07±7,0*** | 83,22 |
Rg3-окто-н-бутират группа со средней дозой | 0,06 | po×14bid | 10/10 | 19,3/25,3 | 16,29±7,8*** | 66,13 |
Rg3-окто-н-бутират группа с низкой дозой | 0,012 | po×14bid | 10/10 | 19,1/25,2 | 23,15±7,9*** | 51,88 |
Rg3-окто-ацетат группа с высокой дозой | 0,3 | po×14bid | 10/10 | 20,0/24,0 | 9,63±7,9*** | 79,98 |
Rg3-окто-ацетат группа со средней дозой | 0,06 | po×14bid | 10/10 | 19,4/24,7 | 17,38±7,1*** | 63,87 |
Rg3-окто-ацетат группа с низкой дозой | 0,012 | po×14bid | 10/10 | 19,8/25,2 | 23,62±7,0*** | 50,90 |
группа CTX | 100 | ip×2qod | 10/10 | 20,1/21,4 | 2,26±2,8*** | 95,30 |
группа отрицательного контроля | 0,5% CMC-Na |
po×14bid | 20/20 | 19,2/25,5 | 48,10±11,2 |
В сравнении с группой отрицательного контроля, ***значение p <0,01
Таблица 4 Эффективность полиацилированных производных 20(R)-гинзенозида Rg3 в отношении клеток мышиной саркомы S180 (n=3)
Образец | Доза мг/кг/д |
Режим введения | Число животных (мыши) Старт/конец |
Вес тела животных (г) Старт/конец |
Число клонов в легких (мыши) X±SD |
Степень подавления метастазов (%) |
Rg3 -окто-н- пропионат группа с высокой дозой | 0,3 | po×14bid | 10/10 | 20,8/24,1 | 0,47±7,4*** | 84,00 |
0,06 | po×14bid | 10/10 | 19,8/24,3 | 0,88±7,4*** | 70,12 | |
0,012 | po×14bid | 10/10 | 19,2/25,1 | 1,33±7,2*** | 54,86 | |
Rg3-окто-н-бутират группа | 0,3 | po×14bid | 10/10 | 20,1/21,2 | 0,55±7,3*** | 81,38 |
0,06 | po×14bid | 10/10 | 19,1/25,5 | 0,96±7,8*** | 67,51 | |
0,012 | po×14bid | 10/10 | 19,91/25,4 | 1,40±7,7*** | 52,55 | |
Rg3-окто-ацетат группа | 0,3 | po×14bid | 10/10 | 20,9/24,1 | 0,62±7,3*** | 78,94 |
0,06 | po×14bid | 10/10 | 19,2/24,7 | 1,01±7,2*** | 65,80 | |
0,012 | po×14bid | 10/10 | 19,6/25,3 | 1,43±7,1*** | 51,50 | |
группа CTX | 100 | ip×2qod | 10/10 | 20,2/21,0 | 0,18±2,1*** | 93,84 |
группа отрицательного контроля | 0,5% CMC-Na |
po×14bid | 20/20 | 19,1/25,0 | 2,95±10,5 |
В сравнении с группой отрицательного контроля, ***значение p <0,01
Таблица 5. Эффективность полиацилированных производных 20(R)-гинзенозида Rg3 в отношении карциномы легких Льюиса мышей (подкожное инокулирование) (n=3)
Образец | Доза мг/кг/д |
Режим введения | Число животных (мыши) Старт/конец |
Вес тела животных (г) Старт/конец |
Число клонов в легких (мыши) X±SD |
Степень подавления метастазов (%) |
Rg3-окто-н- пропионат группа с высокой дозой | 0,3 | po×14bid | 10/10 | 20,1/24,3 | 0,77±0,11*** | 72,15 |
0,06 | po×14bid | 10/10 | 19,2/24,4 | 1,09±0,15*** | 60,97 | |
0,012 | po×14bid | 10/10 | 19,6/25,1 | 1,35±0,12*** | 51,55 | |
Rg3-окто-н- бутират группа | 0,3 | po×14bid | 10/10 | 20,0/21,3 | 0,78±0,11*** | 71,85 |
0,06 | po×14bid | 10/10 | 19,1/25,4 | 1,08±0,11*** | 61,23 | |
0,012 | po×14bid | 10/10 | 19,5/25,1 | 1,37±0,17*** | 50,87 | |
Rg3-окто-ацетат группа | 0,3 | po×14bid | 10/10 | 19,3/24,3 | 0,84±0,15*** | 69,96 |
0,06 | po×14bid | 10/10 | 19,2/24,7 | 1,14±0,12*** | 58,90 | |
0,012 | po×14bid | 10/10 | 19,1/25,0 | 1,38±0,13*** | 50,30 | |
группа CTX | 100 | ip×2qod | 10/10 | 19,4/21,0 | 0,50±0,09*** | 82,12 |
группа отрицательного контроля | 0,5% CMC-Na | po×14bid | 20/20 | 19,3/25,5 | 2,78±0,26 |
В сравнении с группой отрицательного контроля, ***значение p <0,01
Таблица 6 Эффективность полиацилированных производных 20(R)-гинзенозида Rg3 в отношении клеток рака легких человека A549 (подкожное инокулирование) (n=3)
Образец | Доза мг/кг/д |
Режим введения | Число животных (мыши) Старт/конец |
Вес тела животных (г) Старт/конец |
Число клонов в легких (мыши) X±SD |
Степень подавления метастазов (%) |
Rg3 окто-н- пропионат группа с высокой дозой | 0,3 | po×14bid | 10/10 | 20,8/24,9 | 0,77±0,13*** | 70,72 |
0,06 | po×14bid | 10/10 | 19,8/24,0 | 1,09±0,10*** | 61,09 | |
0,012 | po×14bid | 10/10 | 19,2/25,9 | 1,35±0,13*** | 50,58 | |
Rg3-окто-н-бутират группа | 0,3 | po×14bid | 10/10 | 20,1/21,7 | 0,78±0,13*** | 70,55 |
0,06 | po×14bid | 10/10 | 19,3/25,3 | 1,08±0,14*** | 60,89 | |
0,012 | po×14bid | 10/10 | 19,91/25,0 | 1,37±0,11*** | 50,01 | |
Rg3-окто-ацетат группа |
0,3 | po×14bid | 10/10 | 19,9/24,0 | 0,84±0,13*** | 68,52 |
0,06 | po×14bid | 10/10 | 19,4/24,5 | 0,81±0,15*** | 57,90 | |
0,012 | po×14bid | 10/10 | 19,7/25,2 | 0,96±0,12*** | 49,91 | |
группа CTX | 100 | ip×2qod | 10/10 | 19,6/21,3 | 0,29±0,12*** | 85,10 |
группа отрицательного контроля | 0,5% CMC-Na | po×14bid | 20/20 | 19,2/25,5 | 1,92±0,15 |
В сравнении с группой отрицательного контроля, ***значение p <0,01
Из Таблиц 3-6 видно, что степени подавления раковых метастазов в случае 20(R)-гинзенозид Rg3 окто-н-пропионата, 20(R)-гинзенозид Rg3 окто-н-бутирата и 20(R)-гинзенозид Rg3 окто-ацетата в моделях метастазов мышиной меланомы B16, S180 и карциномы легких Льюиса, а также в модели метастазов рака легких человека, достигают 70-80%.
6.3 Степень увеличения продолжительности жизни по результатам противоопухолевого тестирования полиацилированных производных Rg3 в моделях метастазов опухолей
Степень увеличения продолжительности жизни по результатам противоопухолевого тестирования гинзенозид Rg3 окто-н-пропионата, гинзенозид Rg3 окто-н-бутирата и гинзенозид Rg3 окто-ацетата в моделях метастазов рака желудка человека, метастазов рака кишечника человека, метастазов рака печени человека приведена в Таблицах 7-9.
Таблица 7 Эффективность полиацилированных производных 20(R)-гинзенозида Rg3 в отношении клеток рака желудка человека MGC (in situ инокулирование) (n=3)
Образец | Доза мг/кг/д |
Режим введения | Число животных (мыши) Старт/конец |
Вес тела животных (г) Старт/конец |
Средняя выживаемость (дни), X±SD | Степень увеличения продолжительности жизни, T/C×% |
Rg3 окто-н- пропионат группа с высокой дозой | 0,3 | po×14bid | 10/10 | 20,1/24,5 | 48,30±0,15*** | 212,11 |
0,06 | po×14bid | 10/10 | 19,6/24,3 | 43,15±0,15*** | 189,52 | |
0,012 | po×14bid | 10/10 | 19,4/25,8 | 39,23±0,18*** | 172,30 | |
Rg3-окто-н-бутират группа | 0,3 | po×14bid | 10/10 | 20,3/21,2 | 47,86±0,15*** | 210,19 |
0,06 | po×14bid | 10/10 | 19,1/25,4 | 42,22±0,12*** | 185,44 | |
0,012 | po×14bid | 10/10 | 19,1/25,4 | 39,35±0,15*** | 172,83 | |
Rg3-окто-ацетат группа | 0,3 | po×14bid | 10/10 | 19,7/24,1 | 46,04±0,12*** | 202,19 |
0,06 | po×14bid | 10/10 | 19,6/24,6 | 41,21±0,11*** | 180,98 | |
0,012 | po×14bid | 10/10 | 19,8/25,4 | 38,84±0,14*** | 170,56 | |
Группа CTX | 100 | ip×2qod | 10/10 | 19,5/21,1 | 41,22±3,5*** | 181,01 |
группа отрицательного контроля | 0,5% CMC-Na | po×14bid | 20/20 | 19,5/25,2 | 22,77±2,14 |
В сравнении с группой отрицательного контроля, ***значение p <0,01
Таблица 8 Эффективность полиацилированных производных 20(R)-гинзенозида Rg3 в отношении клеток рака кишечника человека LOVO (инокулирование в селезенку)
Образец | Доза мг/кг/д |
Режим введения | Число животных (мыши) Старт/конец |
Вес тела животных (г) Старт/конец |
Средняя выживаемость (дни), X±SD | Степень увеличения продолжительности жизни, T/C×% |
Rg3- окто-н-пропионат группа с высокой дозой | 0,3 | po×14bid | 10/10 | 20,1/24,5 | 33,21±5,5*** | 243,11 |
0,06 | po×14bid | 10/10 | 19,6/24,3 | 26,08±4,2*** | 190,89 | |
0,012 | po×14bid | 10/10 | 19,4/25,8 | 24,63±3,9*** | 180,33 | |
Rg3-окто-н- бутират группа | 0,3 | po×14bid | 10/10 | 20,3/21,2 | 32,77±4,1*** | 239,88 |
0,06 | po×14bid | 10/10 | 19,1/25,4 | 25,67±3,9*** | 187,94 | |
0,012 | po×14bid | 10/10 | 19,1/25,4 | 24,60±5,8*** | 180,12 | |
Rg3-окто-ацетат группа |
0,3 | po×14bid | 10/10 | 19,7/24,1 | 31,50±5,1*** | 230,59 |
0,06 | po×14bid | 10/10 | 19,6/24,6 | 25,80±4,8*** | 188,90 | |
0,012 | po×14bid | 10/10 | 19,8/25,4 | 24,59±4,5*** | 179,99 | |
группа CTX | 100 | ip×2qod | 10/10 | 19,5/21,1 | 29,36±3,3*** | 214,91 |
группа отрицательного контроля | 0,5% CMC-Na | po×14bid | 20/20 | 19,5/25,2 | 13,66±2,31 |
В сравнении с группой отрицательного контроля, ***значение p <0,01
Таблица 9 Эффективность полиацилированных производных 20(R)-гинзенозида Rg3 в отношении клеток рака печени человека QGY (in situ инокулирование)
Образец | Доза мг/кг/д |
Режим введения | Число животных (мыши) Старт/конец |
Вес тела животных (г) Старт/конец |
Средняя выживаемость (дни), X±SD | Степень увеличения продолжительности жизни, T/C×% |
Rg3- окто-н-пропионат группа с высокой дозой | 0,3 | po×14bid | 10/10 | 20,2/24,2 | 44,19±5,3*** | 189,23 |
0,06 | po×14bid | 10/10 | 19,5/24,1 | 39,72±4,9*** | 170,10 | |
0,012 | po×14bid | 10/10 | 19,8/25,3 | 37,49±3,5*** | 160,55 | |
Rg3-окто-н-бутират группа | 0,3 | po×14bid | 10/10 | 20,1/21,8 | 43,40±4,8*** | 185,85 |
0,06 | po×14bid | 10/10 | 19,3/25,6 | 39,51±3,9*** | 169,22 | |
0,012 | po×14bid | 10/10 | 19,2/25,6 | 37,36±5,3*** | 160,01 | |
Rg3-окто-ацетат группа |
0,3 | po×14bid | 10/10 | 19,3/24,8 | 42,49±5,0*** | 181,98 |
0,06 | po×14bid | 10/10 | 19,1/24,3 | 38,90±4,1*** | 166,59 | |
0,012 | po×14bid | 10/10 | 19,1/25,2 | 37,26±4,5*** | 159,58 | |
группа CTX | 100 | ip×2qod | 10/10 | 19,1/21,0 | 37,23±3,4*** | 159,44 |
группа отрицательного контроля | 0,5% CMC-Na | po×14bid | 20/20 | 19,6/25,1 | 23,35±2,3 |
В сравнении с группой отрицательного контроля, ***значение p <0,01
Из Таблиц 7-9 видно, что 20(R)-гинзенозид Rg3 окто-н-пропионат, 20(R)-гинзенозид Rg3 окто-н-бутират и 20(R)-гинзенозид Rg3 окто-ацетат могут существенно увеличить время выживаемости в моделях рака желудка человека, рака кишечника человека и рака печени человека, с очевидным эффектом увеличения продолжительности жизни. Среди всех групп, группы с высокой дозой 20(R)-гинзенозид Rg3 окто-н-пропионата, 20(R)-гинзенозид Rg3 окто-н-бутирата и 20(R)-гинзенозид Rg3 окто-ацетата продемонстрировали очевидный эффект увеличения продолжительности жизни при раке желудка человека, раке кишечника человека и раке печени человека, во всех случаях более сильный, чем в группе положительного контроля; а группы с низкими дозами продемонстрировали эффект увеличения продолжительности жизни, аналогичный группе положительного контроля.
Claims (12)
1. Полиацилированное производное 20(R)-гинзенозида Rg3, имеющее формулу (I),
где R= CH3(CH2)nCO, n=1-5.
2. Полиацилированное производное 20(R)-гинзенозида Rg3 по п. 1, в котором R представляет собой н-Bu(O) или Pr(O).
3. Способ получения полиацилированного производного 20(R)-гинзенозида Rg3, имеющего формулу (I), по п. 1, отличающийся тем, что этот способ включает следующие стадии:
1) растворение 20(R)-гинзенозида Rg3 в безводном пиридине с получением раствора 20(R)-гинзенозида Rg3,
2) добавление ацилхлорида или ангидрида кислоты для этерификации и проведение реакции этерификации при температуре 80-100°C,
3) добавление воды для остановки реакции и доведение рН раствора до 7 с использованием основания, и
4) фильтрацию и перекристаллизацию с получением полиацилированного производного 20(R)-гинзенозида Rg3.
4. Способ по п. 3, отличающийся тем, что ацилхлорид выбран из группы, состоящей из пропионил хлорида, бутирил хлорида, валерил хлорида или гексаноил хлорида; и ангидрид кислоты выбран из группы, состоящей из пропионового ангидрида, масляного ангидрида, валерианового ангидрида или капронового ангидрида.
5. Способ по п. 3, отличающийся тем, что основание на стадии 3) представляет собой неорганическое основание.
6. Способ по п. 5, отличающийся тем, что неорганическое основание выбрано из карбоната натрия, карбоната калия, бикарбоната натрия и гидрокарбоната калия.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201410785172.4A CN105753923B (zh) | 2014-12-17 | 2014-12-17 | 20(R)‑人参皂苷Rg3多酰基化衍生物、制备及其应用 |
CN2014107851724 | 2014-12-17 |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2017124917A Division RU2673885C1 (ru) | 2014-12-17 | 2014-12-23 | Полиацилированные производные 20(r)-гинзенозида rg3, их получение и применение |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2695380C1 true RU2695380C1 (ru) | 2019-07-23 |
Family
ID=56125703
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2017124917A RU2673885C1 (ru) | 2014-12-17 | 2014-12-23 | Полиацилированные производные 20(r)-гинзенозида rg3, их получение и применение |
RU2018136587A RU2695380C1 (ru) | 2014-12-17 | 2018-10-17 | Полиацилированные производные 20(r)-гинзенозида rg3, их получение и применение |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2017124917A RU2673885C1 (ru) | 2014-12-17 | 2014-12-23 | Полиацилированные производные 20(r)-гинзенозида rg3, их получение и применение |
Country Status (10)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US9969766B2 (ru) |
EP (1) | EP3235826B1 (ru) |
JP (1) | JP6415725B2 (ru) |
KR (1) | KR102010484B1 (ru) |
CN (1) | CN105753923B (ru) |
AU (1) | AU2014414533B2 (ru) |
CA (1) | CA2971365C (ru) |
ES (1) | ES2786092T3 (ru) |
RU (2) | RU2673885C1 (ru) |
WO (1) | WO2016095249A1 (ru) |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1997031933A1 (en) * | 1996-02-27 | 1997-09-04 | Cheil Je Dang Co. | Novel ginseng saponin compounds, process for preparation thereof and anti-tumor agent comprising the same as an active component |
WO2006019685A2 (en) * | 2004-07-16 | 2006-02-23 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Compounds and their preparation for the treatment of alzheimer's disease by inhibiting beta-amyloid peptide production |
RU2410389C2 (ru) * | 2005-09-02 | 2011-01-27 | Оцука Фармасьютикал Ко., Лтд. | Противоопухолевое средство |
Family Cites Families (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR100547253B1 (ko) * | 2004-05-29 | 2006-01-26 | 박명환 | 암 예방 및 치료에 유효한 진세노사이드 유도체 |
US20060014704A1 (en) * | 2004-07-16 | 2006-01-19 | Landry Donald W | Compounds and their preparation for the treatment of Alzheimer's disease by inhibiting beta-amyloid peptide production |
JP4740938B2 (ja) * | 2007-12-27 | 2011-08-03 | ダイセル化学工業株式会社 | 6位高アセチル化セルロースジアセテート及びその製造方法 |
CN102603847A (zh) * | 2010-11-18 | 2012-07-25 | 吉林农业大学 | 人参皂苷Rh2脂肪酸酯类化合物制备方法及其医药用途 |
CN102603848A (zh) * | 2011-01-24 | 2012-07-25 | 吉林农业大学 | 人参皂苷Rh2脂肪酸双酯的制备方法及其医药用途 |
CN102775461A (zh) * | 2012-07-02 | 2012-11-14 | 云南农业大学 | 一种20(r)-人参皂苷的制备方法 |
-
2014
- 2014-12-17 CN CN201410785172.4A patent/CN105753923B/zh active Active
- 2014-12-23 EP EP14908284.4A patent/EP3235826B1/en active Active
- 2014-12-23 ES ES14908284T patent/ES2786092T3/es active Active
- 2014-12-23 RU RU2017124917A patent/RU2673885C1/ru active
- 2014-12-23 KR KR1020177018133A patent/KR102010484B1/ko active IP Right Grant
- 2014-12-23 WO PCT/CN2014/094726 patent/WO2016095249A1/zh active Application Filing
- 2014-12-23 US US15/536,301 patent/US9969766B2/en active Active
- 2014-12-23 AU AU2014414533A patent/AU2014414533B2/en active Active
- 2014-12-23 CA CA2971365A patent/CA2971365C/en active Active
- 2014-12-23 JP JP2017530148A patent/JP6415725B2/ja active Active
-
2018
- 2018-10-17 RU RU2018136587A patent/RU2695380C1/ru active
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1997031933A1 (en) * | 1996-02-27 | 1997-09-04 | Cheil Je Dang Co. | Novel ginseng saponin compounds, process for preparation thereof and anti-tumor agent comprising the same as an active component |
WO2006019685A2 (en) * | 2004-07-16 | 2006-02-23 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Compounds and their preparation for the treatment of alzheimer's disease by inhibiting beta-amyloid peptide production |
RU2410389C2 (ru) * | 2005-09-02 | 2011-01-27 | Оцука Фармасьютикал Ко., Лтд. | Противоопухолевое средство |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
V. Ph. Anufriev et al. "Synthesis of ginsenoside Rg3, a minor constituent of Ginseng Radix" Carbohydrate Research, Vol.304, N2, 1997, 179-182. * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CA2971365C (en) | 2019-03-19 |
EP3235826A4 (en) | 2018-08-15 |
JP6415725B2 (ja) | 2018-10-31 |
ES2786092T3 (es) | 2020-10-08 |
JP2017537932A (ja) | 2017-12-21 |
US20170327529A1 (en) | 2017-11-16 |
EP3235826B1 (en) | 2020-02-05 |
AU2014414533A1 (en) | 2017-07-20 |
CN105753923A (zh) | 2016-07-13 |
KR102010484B1 (ko) | 2019-08-13 |
CA2971365A1 (en) | 2016-06-23 |
RU2673885C1 (ru) | 2018-12-03 |
CN105753923B (zh) | 2017-09-29 |
WO2016095249A1 (zh) | 2016-06-23 |
KR20170087513A (ko) | 2017-07-28 |
AU2014414533B2 (en) | 2019-02-21 |
US9969766B2 (en) | 2018-05-15 |
EP3235826A1 (en) | 2017-10-25 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US9321804B2 (en) | Synthesis and use of anti-tumor drug LQC-Y | |
WO2018028511A1 (zh) | 杨梅素衍生物及制备方法,及其在治疗结肠炎、防治结肠炎癌转化和治疗结直肠癌中的应用 | |
TWI422377B (zh) | 用於促進抗癌治療活性之方法及組成物 | |
WO2018090891A1 (zh) | 联吡啶类生物碱、其制备方法和用途 | |
KR101738232B1 (ko) | 진세노사이드 화합물 k 및 글리콜 키토산의 결합체 및 이의 항암 용도 | |
CN110693872A (zh) | 具有广谱抗肿瘤活性的二氢杨梅素及其衍生物和应用 | |
CN106236752A (zh) | 联合用药抗肿瘤药物、制备方法及应用 | |
WO2012136133A1 (zh) | A-失碳-5α-雄甾烷化合物在制备抗恶性肿瘤药物中的应用 | |
RU2695380C1 (ru) | Полиацилированные производные 20(r)-гинзенозида rg3, их получение и применение | |
CN101029034B (zh) | 多烯紫杉醇水溶性衍生物及制备方法和用途 | |
CN113069554B (zh) | 一种齐墩果酸季铵盐-肝素-壳聚糖纳米粒的制备方法及其应用 | |
WO2016034126A1 (en) | Anti-tumor compound and medical use thereof | |
CN104151388A (zh) | 抗肿瘤药物lqc-y的制备及其应用 | |
CN107188923B (zh) | 乙烷-1,2-双救必应酸酯医药新用途 | |
CN115626946B (zh) | 一种桦木醇-卡洛芬衍生物及其自组装纳米颗粒和在制备抗肺癌药物中的用途 | |
CN102838652B (zh) | 一种具有抗恶性肿瘤作用的齐墩果酸衍生物及其制备方法和用途 | |
CN115558012B (zh) | 一种薯蓣皂苷元-丹参素衍生物及其自组装纳米颗粒和制备方法及用途 | |
GB2494595A (en) | Phenylbutyryl curcumin derivatives and uses for preparing anti-tumor drugs thereof | |
WO2016095248A1 (zh) | 20(R)-人参皂苷Rg3衍生物、制备方法及其应用 | |
CN112516313A (zh) | 一种血卟啉衍生物联合化学药物在结肠癌治疗中的应用 | |
CN108840907A (zh) | 酪丝亮肽-脱镁叶绿酸a单酯及其制备方法 | |
CN1733670A (zh) | 长链烃基取代苯酚类化合物及其制备方法与用途 |