RU2689607C2 - миРНК И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ В СПОСОБАХ И КОМПОЗИЦИЯХ ДЛЯ ИНГИБИРОВАНИЯ ЭКСПРЕССИИ ГЕНА ORAI1 - Google Patents
миРНК И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ В СПОСОБАХ И КОМПОЗИЦИЯХ ДЛЯ ИНГИБИРОВАНИЯ ЭКСПРЕССИИ ГЕНА ORAI1 Download PDFInfo
- Publication number
- RU2689607C2 RU2689607C2 RU2016119354A RU2016119354A RU2689607C2 RU 2689607 C2 RU2689607 C2 RU 2689607C2 RU 2016119354 A RU2016119354 A RU 2016119354A RU 2016119354 A RU2016119354 A RU 2016119354A RU 2689607 C2 RU2689607 C2 RU 2689607C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- seq
- orai1
- sirna
- allergic
- eye
- Prior art date
Links
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 title claims abstract description 92
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 title claims abstract description 90
- 101150060735 orai1 gene Proteins 0.000 title claims abstract description 16
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims description 30
- 238000000034 method Methods 0.000 title description 37
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 title description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 57
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims abstract description 34
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 33
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 8
- 102000049666 ORAI1 Human genes 0.000 claims abstract 3
- 108700027851 ORAI1 Proteins 0.000 claims abstract 3
- 108091070501 miRNA Proteins 0.000 claims description 85
- 239000002679 microRNA Substances 0.000 claims description 85
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 claims description 66
- 208000002205 allergic conjunctivitis Diseases 0.000 claims description 45
- 208000024998 atopic conjunctivitis Diseases 0.000 claims description 44
- 206010010744 Conjunctivitis allergic Diseases 0.000 claims description 40
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 30
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 claims description 20
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 claims description 20
- 206010010741 Conjunctivitis Diseases 0.000 claims description 18
- 230000001932 seasonal effect Effects 0.000 claims description 13
- 108091081021 Sense strand Proteins 0.000 claims description 10
- 206010023332 keratitis Diseases 0.000 claims description 10
- 201000010666 keratoconjunctivitis Diseases 0.000 claims description 10
- 206010069664 atopic keratoconjunctivitis Diseases 0.000 claims description 9
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 claims description 9
- 206010020718 hyperplasia Diseases 0.000 claims description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 9
- 208000003556 Dry Eye Syndromes Diseases 0.000 claims description 7
- 206010013774 Dry eye Diseases 0.000 claims description 7
- ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N Uracil Natural products O=C1C=CNC(=O)N1 ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 108091028664 Ribonucleotide Proteins 0.000 claims description 5
- 239000002336 ribonucleotide Substances 0.000 claims description 5
- 229940035893 uracil Drugs 0.000 claims description 4
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical class O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 claims description 3
- 238000007069 methylation reaction Methods 0.000 claims 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 claims 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 24
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 6
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 87
- 210000001508 eye Anatomy 0.000 description 74
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 72
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 59
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 54
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 52
- 230000000172 allergic effect Effects 0.000 description 51
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 51
- 208000030533 eye disease Diseases 0.000 description 49
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 40
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 40
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 37
- 210000000795 conjunctiva Anatomy 0.000 description 37
- 210000003630 histaminocyte Anatomy 0.000 description 33
- 244000281762 Chenopodium ambrosioides Species 0.000 description 31
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 31
- 239000013566 allergen Substances 0.000 description 31
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 31
- 235000000509 Chenopodium ambrosioides Nutrition 0.000 description 29
- 235000005490 Chenopodium botrys Nutrition 0.000 description 29
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 29
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 27
- 230000004044 response Effects 0.000 description 27
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 26
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 26
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 22
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 22
- JBIMVDZLSHOPLA-LSCVHKIXSA-N olopatadine Chemical compound C1OC2=CC=C(CC(O)=O)C=C2C(=C/CCN(C)C)\C2=CC=CC=C21 JBIMVDZLSHOPLA-LSCVHKIXSA-N 0.000 description 22
- 229940097078 patanol Drugs 0.000 description 19
- 230000009471 action Effects 0.000 description 16
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 16
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 16
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 14
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 14
- 238000012228 RNA interference-mediated gene silencing Methods 0.000 description 13
- -1 airborne pollen Substances 0.000 description 13
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical group P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 13
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 13
- 230000009368 gene silencing by RNA Effects 0.000 description 13
- 101001008922 Homo sapiens Kallikrein-11 Proteins 0.000 description 12
- 102100027612 Kallikrein-11 Human genes 0.000 description 12
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 12
- 210000003979 eosinophil Anatomy 0.000 description 12
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 12
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 12
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 12
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 12
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 12
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 12
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 12
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 12
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 12
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 101000745520 Homo sapiens Calcium release-activated calcium channel protein 1 Proteins 0.000 description 11
- 206010020565 Hyperaemia Diseases 0.000 description 11
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 11
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 11
- 210000000744 eyelid Anatomy 0.000 description 11
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 11
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 11
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 11
- 206010015993 Eyelid oedema Diseases 0.000 description 10
- NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N Histamine Chemical compound NCCC1=CN=CN1 NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 101001122471 Homo sapiens Protein orai-3 Proteins 0.000 description 10
- 108700027852 ORAI2 Proteins 0.000 description 10
- 101150002636 ORAI2 gene Proteins 0.000 description 10
- 102100027134 Protein orai-2 Human genes 0.000 description 10
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 10
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 10
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 10
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 10
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 10
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 10
- 102000020167 Calcium release-activated calcium channel Human genes 0.000 description 9
- 108091022898 Calcium release-activated calcium channel Proteins 0.000 description 9
- 206010010726 Conjunctival oedema Diseases 0.000 description 9
- 208000003251 Pruritus Diseases 0.000 description 9
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 9
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 9
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 9
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 9
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 9
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 9
- 102100039319 Calcium release-activated calcium channel protein 1 Human genes 0.000 description 8
- 101100537555 Mus musculus Tnfrsf9 gene Proteins 0.000 description 8
- 102100027135 Protein orai-3 Human genes 0.000 description 8
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 8
- 206010039085 Rhinitis allergic Diseases 0.000 description 8
- 201000010105 allergic rhinitis Diseases 0.000 description 8
- 230000008859 change Effects 0.000 description 8
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Chemical compound NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 230000002354 daily effect Effects 0.000 description 8
- 239000003889 eye drop Substances 0.000 description 8
- UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N guanine Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2 UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 8
- 239000012097 Lipofectamine 2000 Substances 0.000 description 7
- 208000004350 Strabismus Diseases 0.000 description 7
- 230000009285 allergic inflammation Effects 0.000 description 7
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 7
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 7
- 239000003246 corticosteroid Substances 0.000 description 7
- 229960001334 corticosteroids Drugs 0.000 description 7
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 7
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 7
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 7
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 7
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 7
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 7
- 239000000047 product Substances 0.000 description 7
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 7
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 7
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 7
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 7
- 108091006146 Channels Proteins 0.000 description 6
- 101100114828 Drosophila melanogaster Orai gene Proteins 0.000 description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 208000030961 allergic reaction Diseases 0.000 description 6
- 229940012356 eye drops Drugs 0.000 description 6
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 6
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 6
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 6
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 6
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 6
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 6
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 6
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 6
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 6
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 6
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 6
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 6
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 5
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 5
- 101000780643 Homo sapiens Protein argonaute-2 Proteins 0.000 description 5
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 5
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 5
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 5
- 239000000043 antiallergic agent Substances 0.000 description 5
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 5
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 5
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 5
- 239000000739 antihistaminic agent Substances 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 5
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 5
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 5
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 5
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 5
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 5
- 206010015915 eye discharge Diseases 0.000 description 5
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 5
- 229960001340 histamine Drugs 0.000 description 5
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 description 5
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 5
- 238000011158 quantitative evaluation Methods 0.000 description 5
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 5
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 4
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 102100023387 Endoribonuclease Dicer Human genes 0.000 description 4
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 101000907904 Homo sapiens Endoribonuclease Dicer Proteins 0.000 description 4
- 101000576802 Homo sapiens Mesothelin Proteins 0.000 description 4
- 102100025096 Mesothelin Human genes 0.000 description 4
- 208000022873 Ocular disease Diseases 0.000 description 4
- 206010034960 Photophobia Diseases 0.000 description 4
- 102100034207 Protein argonaute-2 Human genes 0.000 description 4
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 4
- 206010070834 Sensitisation Diseases 0.000 description 4
- 102000004094 Stromal Interaction Molecule 1 Human genes 0.000 description 4
- 108090000532 Stromal Interaction Molecule 1 Proteins 0.000 description 4
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 4
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 4
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 4
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 4
- 229940125715 antihistaminic agent Drugs 0.000 description 4
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 4
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 4
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 4
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- 208000010217 blepharitis Diseases 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 4
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 4
- 239000007859 condensation product Substances 0.000 description 4
- 210000004087 cornea Anatomy 0.000 description 4
- 229940104302 cytosine Drugs 0.000 description 4
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 4
- 210000002472 endoplasmic reticulum Anatomy 0.000 description 4
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 4
- 102000050732 human ORAI1 Human genes 0.000 description 4
- 230000009610 hypersensitivity Effects 0.000 description 4
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 4
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 4
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 4
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 4
- 230000004410 intraocular pressure Effects 0.000 description 4
- 230000007803 itching Effects 0.000 description 4
- 229960001120 levocabastine Drugs 0.000 description 4
- ZCGOMHNNNFPNMX-KYTRFIICSA-N levocabastine Chemical compound C1([C@@]2(C(O)=O)CCN(C[C@H]2C)[C@@H]2CC[C@@](CC2)(C#N)C=2C=CC(F)=CC=2)=CC=CC=C1 ZCGOMHNNNFPNMX-KYTRFIICSA-N 0.000 description 4
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 4
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 4
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 4
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 4
- 210000001525 retina Anatomy 0.000 description 4
- 206010039083 rhinitis Diseases 0.000 description 4
- 230000008313 sensitization Effects 0.000 description 4
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 4
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N thymine Chemical compound CC1=CNC(=O)NC1=O RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 4
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 4
- 102000008682 Argonaute Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108010088141 Argonaute Proteins Proteins 0.000 description 3
- 102100021943 C-C motif chemokine 2 Human genes 0.000 description 3
- 101710155857 C-C motif chemokine 2 Proteins 0.000 description 3
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N Ethylene oxide Chemical compound C1CO1 IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 3
- 101100114830 Mus musculus Orai1 gene Proteins 0.000 description 3
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 3
- 102000052376 Piwi domains Human genes 0.000 description 3
- 108700038049 Piwi domains Proteins 0.000 description 3
- 229920002873 Polyethylenimine Polymers 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010038848 Retinal detachment Diseases 0.000 description 3
- DIZPMCHEQGEION-UHFFFAOYSA-H aluminium sulfate (anhydrous) Chemical compound [Al+3].[Al+3].[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O DIZPMCHEQGEION-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 3
- 230000003266 anti-allergic effect Effects 0.000 description 3
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 3
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 3
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 3
- 208000037976 chronic inflammation Diseases 0.000 description 3
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- 208000028659 discharge Diseases 0.000 description 3
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 3
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 3
- 238000000556 factor analysis Methods 0.000 description 3
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 3
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 3
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 3
- 230000036541 health Effects 0.000 description 3
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 3
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 3
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 3
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 3
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 3
- 150000002617 leukotrienes Chemical class 0.000 description 3
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 3
- 210000003097 mucus Anatomy 0.000 description 3
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 3
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 3
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 3
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 3
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 3
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 3
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 210000000844 retinal pigment epithelial cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 3
- 125000002652 ribonucleotide group Chemical group 0.000 description 3
- 239000004055 small Interfering RNA Substances 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 3
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 3
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 3
- PUPZLCDOIYMWBV-UHFFFAOYSA-N (+/-)-1,3-Butanediol Chemical compound CC(O)CCO PUPZLCDOIYMWBV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZORQXIQZAOLNGE-UHFFFAOYSA-N 1,1-difluorocyclohexane Chemical compound FC1(F)CCCCC1 ZORQXIQZAOLNGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VBICKXHEKHSIBG-UHFFFAOYSA-N 1-monostearoylglycerol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)CO VBICKXHEKHSIBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IZHVBANLECCAGF-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxy-3-(octadecanoyloxy)propyl octadecanoate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)COC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC IZHVBANLECCAGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 7H-purine Chemical compound N1=CNC2=NC=NC2=C1 KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000003129 Ambrosia artemisiifolia var elatior Nutrition 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- 206010006784 Burning sensation Diseases 0.000 description 2
- 101150013553 CD40 gene Proteins 0.000 description 2
- 101710197144 Calcium release-activated calcium channel protein 1 Proteins 0.000 description 2
- 208000002177 Cataract Diseases 0.000 description 2
- 206010051625 Conjunctival hyperaemia Diseases 0.000 description 2
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 2
- 102000000331 Double-stranded RNA-binding domains Human genes 0.000 description 2
- 108050008793 Double-stranded RNA-binding domains Proteins 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- 108060002716 Exonuclease Proteins 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N Glycolic acid Chemical class OCC(O)=O AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 240000004153 Hibiscus sabdariffa Species 0.000 description 2
- 235000001018 Hibiscus sabdariffa Nutrition 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 208000035150 Hypercholesterolemia Diseases 0.000 description 2
- 206010023644 Lacrimation increased Diseases 0.000 description 2
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 2
- OVRNDRQMDRJTHS-CBQIKETKSA-N N-Acetyl-D-Galactosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@@H](O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-CBQIKETKSA-N 0.000 description 2
- MBLBDJOUHNCFQT-UHFFFAOYSA-N N-acetyl-D-galactosamine Natural products CC(=O)NC(C=O)C(O)C(O)C(O)CO MBLBDJOUHNCFQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010028741 Nasal inflammation Diseases 0.000 description 2
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 2
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 2
- 239000005662 Paraffin oil Substances 0.000 description 2
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- 102100033237 Pro-epidermal growth factor Human genes 0.000 description 2
- 108090000944 RNA Helicases Proteins 0.000 description 2
- 102000004409 RNA Helicases Human genes 0.000 description 2
- 102000000574 RNA-Induced Silencing Complex Human genes 0.000 description 2
- 108010016790 RNA-Induced Silencing Complex Proteins 0.000 description 2
- 235000005291 Rumex acetosa Nutrition 0.000 description 2
- 208000032023 Signs and Symptoms Diseases 0.000 description 2
- 108091027967 Small hairpin RNA Proteins 0.000 description 2
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 229920002125 Sokalan® Polymers 0.000 description 2
- 102000009292 Stromal interaction molecule Human genes 0.000 description 2
- 108050000143 Stromal interaction molecule Proteins 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-N Thiophosphoric acid Chemical class OP(O)(S)=O RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001615 Tragacanth Polymers 0.000 description 2
- 102100032101 Tumor necrosis factor ligand superfamily member 9 Human genes 0.000 description 2
- 102100040245 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 5 Human genes 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 239000013572 airborne allergen Substances 0.000 description 2
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 235000003484 annual ragweed Nutrition 0.000 description 2
- 230000001387 anti-histamine Effects 0.000 description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 2
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 2
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 239000003855 balanced salt solution Substances 0.000 description 2
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 2
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 2
- 201000005668 blepharoconjunctivitis Diseases 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 235000006263 bur ragweed Nutrition 0.000 description 2
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 2
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 2
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 230000006020 chronic inflammation Effects 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 235000003488 common ragweed Nutrition 0.000 description 2
- 238000013270 controlled release Methods 0.000 description 2
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 2
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 2
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 2
- 239000005547 deoxyribonucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000002637 deoxyribonucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 239000006196 drop Substances 0.000 description 2
- 239000000428 dust Substances 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 102000013165 exonuclease Human genes 0.000 description 2
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 239000007903 gelatin capsule Substances 0.000 description 2
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 2
- 244000144993 groups of animals Species 0.000 description 2
- 229920000591 gum Polymers 0.000 description 2
- BXWNKGSJHAJOGX-UHFFFAOYSA-N hexadecan-1-ol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCO BXWNKGSJHAJOGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-UHFFFAOYSA-N hexane-1,2,3,4,5,6-hexol Chemical compound OCC(O)C(O)C(O)C(O)CO FBPFZTCFMRRESA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 2
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 210000004969 inflammatory cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000015788 innate immune response Effects 0.000 description 2
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 2
- 230000007794 irritation Effects 0.000 description 2
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 2
- 230000004317 lacrimation Effects 0.000 description 2
- 230000004904 long-term response Effects 0.000 description 2
- 239000006210 lotion Substances 0.000 description 2
- 239000007937 lozenge Substances 0.000 description 2
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 2
- 235000010981 methylcellulose Nutrition 0.000 description 2
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 2
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 2
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 2
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 2
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 2
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 2
- 239000001788 mono and diglycerides of fatty acids Substances 0.000 description 2
- 239000000346 nonvolatile oil Substances 0.000 description 2
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 2
- 239000004006 olive oil Substances 0.000 description 2
- 235000008390 olive oil Nutrition 0.000 description 2
- WYWIFABBXFUGLM-UHFFFAOYSA-N oxymetazoline Chemical compound CC1=CC(C(C)(C)C)=C(O)C(C)=C1CC1=NCCN1 WYWIFABBXFUGLM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001606 poly(lactic acid-co-glycolic acid) Polymers 0.000 description 2
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 2
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 2
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 2
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 2
- 230000001323 posttranslational effect Effects 0.000 description 2
- 230000006785 proliferative vitreoretinopathy Effects 0.000 description 2
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 2
- QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N propylparaben Chemical compound CCCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000003230 pyrimidines Chemical class 0.000 description 2
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 2
- 235000009736 ragweed Nutrition 0.000 description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 230000004264 retinal detachment Effects 0.000 description 2
- 210000003583 retinal pigment epithelium Anatomy 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 235000003513 sheep sorrel Nutrition 0.000 description 2
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 2
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 2
- 206010041232 sneezing Diseases 0.000 description 2
- 235000011069 sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 2
- 239000001593 sorbitan monooleate Substances 0.000 description 2
- 229940035049 sorbitan monooleate Drugs 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 2
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 2
- 229940113082 thymine Drugs 0.000 description 2
- 229950003937 tolonium Drugs 0.000 description 2
- HNONEKILPDHFOL-UHFFFAOYSA-M tolonium chloride Chemical compound [Cl-].C1=C(C)C(N)=CC2=[S+]C3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 HNONEKILPDHFOL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 description 2
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 2
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 2
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 description 1
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 1
- WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N (E)-8-Octadecenoic acid Natural products CCCCCCCCCC=CCCCCCCC(O)=O WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JLPULHDHAOZNQI-ZTIMHPMXSA-N 1-hexadecanoyl-2-(9Z,12Z-octadecadienoyl)-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCC\C=C/C\C=C/CCCCC JLPULHDHAOZNQI-ZTIMHPMXSA-N 0.000 description 1
- IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 1-methyl-2,4-dioxo-1,3-diazinane-5-carboximidamide Chemical compound CN1CC(C(N)=N)C(=O)NC1=O IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 1-palmitoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 0.000 description 1
- ABEXEQSGABRUHS-UHFFFAOYSA-N 16-methylheptadecyl 16-methylheptadecanoate Chemical compound CC(C)CCCCCCCCCCCCCCCOC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC(C)C ABEXEQSGABRUHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZRNSSRODJSSVEJ-UHFFFAOYSA-N 2-methylpentacosane Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC(C)C ZRNSSRODJSSVEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 20:1omega9c fatty acid Natural products CCCCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010082808 4-1BB Ligand Proteins 0.000 description 1
- APRZHQXAAWPYHS-UHFFFAOYSA-N 4-[5-[3-(carboxymethoxy)phenyl]-3-(4,5-dimethyl-1,3-thiazol-2-yl)tetrazol-3-ium-2-yl]benzenesulfonate Chemical compound S1C(C)=C(C)N=C1[N+]1=NC(C=2C=C(OCC(O)=O)C=CC=2)=NN1C1=CC=C(S([O-])(=O)=O)C=C1 APRZHQXAAWPYHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000005168 4-hydroxybenzoic acids Chemical class 0.000 description 1
- QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 9-Heptadecensaeure Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000215068 Acacia senegal Species 0.000 description 1
- 241000238876 Acari Species 0.000 description 1
- 206010048998 Acute phase reaction Diseases 0.000 description 1
- 208000035285 Allergic Seasonal Rhinitis Diseases 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 239000005995 Aluminium silicate Substances 0.000 description 1
- 240000001592 Amaranthus caudatus Species 0.000 description 1
- 235000009328 Amaranthus caudatus Nutrition 0.000 description 1
- 235000009051 Ambrosia paniculata var. peruviana Nutrition 0.000 description 1
- 208000033399 Anaphylactic responses Diseases 0.000 description 1
- 201000002862 Angle-Closure Glaucoma Diseases 0.000 description 1
- 102000004121 Annexin A5 Human genes 0.000 description 1
- 108090000672 Annexin A5 Proteins 0.000 description 1
- 235000003911 Arachis Nutrition 0.000 description 1
- 244000105624 Arachis hypogaea Species 0.000 description 1
- 235000003097 Artemisia absinthium Nutrition 0.000 description 1
- 240000001851 Artemisia dracunculus Species 0.000 description 1
- 235000017731 Artemisia dracunculus ssp. dracunculus Nutrition 0.000 description 1
- 235000003261 Artemisia vulgaris Nutrition 0.000 description 1
- 241000208838 Asteraceae Species 0.000 description 1
- 241000416162 Astragalus gummifer Species 0.000 description 1
- 241000452953 Bernardia myricifolia Species 0.000 description 1
- 201000004569 Blindness Diseases 0.000 description 1
- 102000003922 Calcium Channels Human genes 0.000 description 1
- 108090000312 Calcium Channels Proteins 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 239000004215 Carbon black (E152) Substances 0.000 description 1
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 1
- 208000017667 Chronic Disease Diseases 0.000 description 1
- 208000031973 Conjunctivitis infective Diseases 0.000 description 1
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 1
- 208000028006 Corneal injury Diseases 0.000 description 1
- 229920000858 Cyclodextrin Polymers 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 101100408379 Drosophila melanogaster piwi gene Proteins 0.000 description 1
- 206010014476 Elevated cholesterol Diseases 0.000 description 1
- 206010014486 Elevated triglycerides Diseases 0.000 description 1
- 102100031780 Endonuclease Human genes 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 101800003838 Epidermal growth factor Proteins 0.000 description 1
- 206010053487 Exposure to toxic agent Diseases 0.000 description 1
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 1
- 206010052140 Eye pruritus Diseases 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 208000010412 Glaucoma Diseases 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 229920000084 Gum arabic Polymers 0.000 description 1
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 description 1
- 206010019799 Hepatitis viral Diseases 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 102000000543 Histamine Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010002059 Histamine Receptors Proteins 0.000 description 1
- 101000831496 Homo sapiens Toll-like receptor 3 Proteins 0.000 description 1
- 101000669402 Homo sapiens Toll-like receptor 7 Proteins 0.000 description 1
- 101000800483 Homo sapiens Toll-like receptor 8 Proteins 0.000 description 1
- 101000638251 Homo sapiens Tumor necrosis factor ligand superfamily member 9 Proteins 0.000 description 1
- 208000031226 Hyperlipidaemia Diseases 0.000 description 1
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 1
- 206010020880 Hypertrophy Diseases 0.000 description 1
- 102000009438 IgE Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010073816 IgE Receptors Proteins 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 102000002227 Interferon Type I Human genes 0.000 description 1
- 108010014726 Interferon Type I Proteins 0.000 description 1
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 1
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 1
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 1
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 1
- 241000764238 Isis Species 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- ZCGOMHNNNFPNMX-YHYDXASRSA-N Levocabastinum Chemical compound C1([C@@]2(C(O)=O)CCN(C[C@H]2C)C2CCC(CC2)(C#N)C=2C=CC(F)=CC=2)=CC=CC=C1 ZCGOMHNNNFPNMX-YHYDXASRSA-N 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- 241000218922 Magnoliophyta Species 0.000 description 1
- 108010037274 Member 9 Tumor Necrosis Factor Receptor Superfamily Proteins 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 1
- 235000003805 Musa ABB Group Nutrition 0.000 description 1
- 240000008790 Musa x paradisiaca Species 0.000 description 1
- 206010028735 Nasal congestion Diseases 0.000 description 1
- 206010052437 Nasal discomfort Diseases 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000005642 Oleic acid Substances 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N Oleic acid Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000041751 Orai family Human genes 0.000 description 1
- 108091074751 Orai family Proteins 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 208000001132 Osteoporosis Diseases 0.000 description 1
- 102000016187 PAZ domains Human genes 0.000 description 1
- 108050004670 PAZ domains Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 1
- 235000015266 Plantago major Nutrition 0.000 description 1
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 1
- 229920000148 Polycarbophil calcium Polymers 0.000 description 1
- 201000007902 Primary cutaneous amyloidosis Diseases 0.000 description 1
- 101710093543 Probable non-specific lipid-transfer protein Proteins 0.000 description 1
- 208000002158 Proliferative Vitreoretinopathy Diseases 0.000 description 1
- 102100038280 Prostaglandin G/H synthase 2 Human genes 0.000 description 1
- 108050003267 Prostaglandin G/H synthase 2 Proteins 0.000 description 1
- CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N Pyrimidine Chemical compound C1=CN=CN=C1 CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002123 RNA extraction Methods 0.000 description 1
- 238000010802 RNA extraction kit Methods 0.000 description 1
- 230000004570 RNA-binding Effects 0.000 description 1
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 241000700157 Rattus norvegicus Species 0.000 description 1
- 101100496572 Rattus norvegicus C6 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100114831 Rattus norvegicus Orai1 gene Proteins 0.000 description 1
- 208000002367 Retinal Perforations Diseases 0.000 description 1
- 206010038934 Retinopathy proliferative Diseases 0.000 description 1
- 208000036071 Rhinorrhea Diseases 0.000 description 1
- 206010039101 Rhinorrhoea Diseases 0.000 description 1
- 108010057163 Ribonuclease III Proteins 0.000 description 1
- 102000003661 Ribonuclease III Human genes 0.000 description 1
- 206010048908 Seasonal allergy Diseases 0.000 description 1
- 241000542420 Sphyrna tudes Species 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 235000021355 Stearic acid Nutrition 0.000 description 1
- GUGOEEXESWIERI-UHFFFAOYSA-N Terfenadine Chemical compound C1=CC(C(C)(C)C)=CC=C1C(O)CCCN1CCC(C(O)(C=2C=CC=CC=2)C=2C=CC=CC=2)CC1 GUGOEEXESWIERI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100031294 Thymic stromal lymphopoietin Human genes 0.000 description 1
- 102000002689 Toll-like receptor Human genes 0.000 description 1
- 108020000411 Toll-like receptor Proteins 0.000 description 1
- 102100024324 Toll-like receptor 3 Human genes 0.000 description 1
- 102100039390 Toll-like receptor 7 Human genes 0.000 description 1
- 102100033110 Toll-like receptor 8 Human genes 0.000 description 1
- 108060005989 Tryptase Proteins 0.000 description 1
- 102000001400 Tryptase Human genes 0.000 description 1
- 102100036856 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 9 Human genes 0.000 description 1
- 206010053613 Type IV hypersensitivity reaction Diseases 0.000 description 1
- 208000036866 Vitreoretinopathy Diseases 0.000 description 1
- WERKSKAQRVDLDW-ANOHMWSOSA-N [(2s,3r,4r,5r)-2,3,4,5,6-pentahydroxyhexyl] (z)-octadec-9-enoate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO WERKSKAQRVDLDW-ANOHMWSOSA-N 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000010489 acacia gum Nutrition 0.000 description 1
- 239000000205 acacia gum Substances 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N acetic acid;2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal;sodium Chemical compound [Na].CC(O)=O.OCC(O)C(O)C(O)C(O)C=O DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 201000001028 acute contagious conjunctivitis Diseases 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 230000007059 acute toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000403 acute toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000004658 acute-phase response Effects 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 210000001789 adipocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 238000004378 air conditioning Methods 0.000 description 1
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000000783 alginic acid Substances 0.000 description 1
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 1
- 229960001126 alginic acid Drugs 0.000 description 1
- 150000004781 alginic acids Chemical class 0.000 description 1
- 125000002947 alkylene group Chemical group 0.000 description 1
- 230000002009 allergenic effect Effects 0.000 description 1
- 235000012211 aluminium silicate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004178 amaranth Substances 0.000 description 1
- 235000012735 amaranth Nutrition 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000036783 anaphylactic response Effects 0.000 description 1
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 description 1
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 1
- 230000003501 anti-edematous effect Effects 0.000 description 1
- 229940121363 anti-inflammatory agent Drugs 0.000 description 1
- 239000002260 anti-inflammatory agent Substances 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 1
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940124623 antihistamine drug Drugs 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 239000001138 artemisia absinthium Substances 0.000 description 1
- 239000000607 artificial tear Substances 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 239000000305 astragalus gummifer gum Substances 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 235000013871 bee wax Nutrition 0.000 description 1
- 239000012166 beeswax Substances 0.000 description 1
- 230000006399 behavior Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 230000002146 bilateral effect Effects 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 239000000227 bioadhesive Substances 0.000 description 1
- 229920002988 biodegradable polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000004621 biodegradable polymer Substances 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 229920001222 biopolymer Polymers 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 1
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 description 1
- 150000001669 calcium Chemical class 0.000 description 1
- 235000010216 calcium carbonate Nutrition 0.000 description 1
- 159000000007 calcium salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000003185 calcium uptake Effects 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 239000012876 carrier material Substances 0.000 description 1
- 230000020411 cell activation Effects 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 230000012292 cell migration Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000002490 cerebral effect Effects 0.000 description 1
- 229960000541 cetyl alcohol Drugs 0.000 description 1
- 208000037893 chronic inflammatory disorder Diseases 0.000 description 1
- 235000019504 cigarettes Nutrition 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 229940110456 cocoa butter Drugs 0.000 description 1
- 235000019868 cocoa butter Nutrition 0.000 description 1
- 239000003240 coconut oil Substances 0.000 description 1
- 235000019864 coconut oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 238000011970 concomitant therapy Methods 0.000 description 1
- 208000027744 congestion Diseases 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 1
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 1
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 1
- 229940109248 cromoglycate Drugs 0.000 description 1
- IMZMKUWMOSJXDT-UHFFFAOYSA-N cromoglycic acid Chemical compound O1C(C(O)=O)=CC(=O)C2=C1C=CC=C2OCC(O)COC1=CC=CC2=C1C(=O)C=C(C(O)=O)O2 IMZMKUWMOSJXDT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012866 crystallographic experiment Methods 0.000 description 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 1
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 1
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 230000000368 destabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 239000003651 drinking water Substances 0.000 description 1
- 235000020188 drinking water Nutrition 0.000 description 1
- 230000008482 dysregulation Effects 0.000 description 1
- 230000001819 effect on gene Effects 0.000 description 1
- 230000001516 effect on protein Effects 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 229960000325 emedastine Drugs 0.000 description 1
- KBUZBQVCBVDWKX-UHFFFAOYSA-N emedastine Chemical compound N=1C2=CC=CC=C2N(CCOCC)C=1N1CCCN(C)CC1 KBUZBQVCBVDWKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003974 emollient agent Substances 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 230000005183 environmental health Effects 0.000 description 1
- 239000003344 environmental pollutant Substances 0.000 description 1
- 238000003912 environmental pollution Methods 0.000 description 1
- 229940116977 epidermal growth factor Drugs 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000007705 epithelial mesenchymal transition Effects 0.000 description 1
- BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N ethenylcyclopentane Chemical compound C=CC1CCCC1 BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002170 ethers Chemical class 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 1
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 1
- 206010015907 eye allergy Diseases 0.000 description 1
- 208000027993 eye symptom Diseases 0.000 description 1
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 1
- 150000002191 fatty alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 210000003746 feather Anatomy 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 239000000834 fixative Substances 0.000 description 1
- 239000011737 fluorine Substances 0.000 description 1
- 229910052731 fluorine Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960001048 fluorometholone Drugs 0.000 description 1
- FAOZLTXFLGPHNG-KNAQIMQKSA-N fluorometholone Chemical compound C([C@@]12C)=CC(=O)C=C1[C@@H](C)C[C@@H]1[C@]2(F)[C@@H](O)C[C@]2(C)[C@@](O)(C(C)=O)CC[C@H]21 FAOZLTXFLGPHNG-KNAQIMQKSA-N 0.000 description 1
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 229940074045 glyceryl distearate Drugs 0.000 description 1
- 229940075507 glyceryl monostearate Drugs 0.000 description 1
- 208000035474 group of disease Diseases 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 239000007902 hard capsule Substances 0.000 description 1
- 239000000938 histamine H1 antagonist Substances 0.000 description 1
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 description 1
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 description 1
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 description 1
- 239000000017 hydrogel Substances 0.000 description 1
- 229920001477 hydrophilic polymer Polymers 0.000 description 1
- 201000001421 hyperglycemia Diseases 0.000 description 1
- 238000005417 image-selected in vivo spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000008073 immune recognition Effects 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 230000001024 immunotherapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000000126 in silico method Methods 0.000 description 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 239000012442 inert solvent Substances 0.000 description 1
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 1
- 238000012739 integrated shape imaging system Methods 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- PGHMRUGBZOYCAA-ADZNBVRBSA-N ionomycin Chemical compound O1[C@H](C[C@H](O)[C@H](C)[C@H](O)[C@H](C)/C=C/C[C@@H](C)C[C@@H](C)C(/O)=C/C(=O)[C@@H](C)C[C@@H](C)C[C@@H](CCC(O)=O)C)CC[C@@]1(C)[C@@H]1O[C@](C)([C@@H](C)O)CC1 PGHMRUGBZOYCAA-ADZNBVRBSA-N 0.000 description 1
- PGHMRUGBZOYCAA-UHFFFAOYSA-N ionomycin Natural products O1C(CC(O)C(C)C(O)C(C)C=CCC(C)CC(C)C(O)=CC(=O)C(C)CC(C)CC(CCC(O)=O)C)CCC1(C)C1OC(C)(C(C)O)CC1 PGHMRUGBZOYCAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000622 irritating effect Effects 0.000 description 1
- QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N isooleic acid Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCCC(O)=O QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NLYAJNPCOHFWQQ-UHFFFAOYSA-N kaolin Chemical compound O.O.O=[Al]O[Si](=O)O[Si](=O)O[Al]=O NLYAJNPCOHFWQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 230000002045 lasting effect Effects 0.000 description 1
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 1
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 1
- 235000010445 lecithin Nutrition 0.000 description 1
- 239000000787 lecithin Substances 0.000 description 1
- 229940067606 lecithin Drugs 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000003589 local anesthetic agent Substances 0.000 description 1
- 229960005015 local anesthetics Drugs 0.000 description 1
- 229960004305 lodoxamide Drugs 0.000 description 1
- RVGLGHVJXCETIO-UHFFFAOYSA-N lodoxamide Chemical compound OC(=O)C(=O)NC1=CC(C#N)=CC(NC(=O)C(O)=O)=C1Cl RVGLGHVJXCETIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011866 long-term treatment Methods 0.000 description 1
- 210000003141 lower extremity Anatomy 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 210000003071 memory t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 208000030159 metabolic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000004530 micro-emulsion Substances 0.000 description 1
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- NBVXSUQYWXRMNV-UHFFFAOYSA-N monofluoromethane Natural products FC NBVXSUQYWXRMNV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N n'-amino-n-iminomethanimidamide Chemical compound N\N=C\N=N VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N 0.000 description 1
- 239000002088 nanocapsule Substances 0.000 description 1
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000006225 natural substrate Substances 0.000 description 1
- 229960004398 nedocromil Drugs 0.000 description 1
- RQTOOFIXOKYGAN-UHFFFAOYSA-N nedocromil Chemical compound CCN1C(C(O)=O)=CC(=O)C2=C1C(CCC)=C1OC(C(O)=O)=CC(=O)C1=C2 RQTOOFIXOKYGAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000021971 neovascular inflammatory vitreoretinopathy Diseases 0.000 description 1
- 230000004770 neurodegeneration Effects 0.000 description 1
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 1
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 1
- 231100000344 non-irritating Toxicity 0.000 description 1
- 239000012457 nonaqueous media Substances 0.000 description 1
- GYCKQBWUSACYIF-UHFFFAOYSA-N o-hydroxybenzoic acid ethyl ester Natural products CCOC(=O)C1=CC=CC=C1O GYCKQBWUSACYIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Natural products CCCCCCCC(C)CCCCCCCCC(O)=O OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003113 ocular antiinflammatory agent Substances 0.000 description 1
- 201000005111 ocular hyperemia Diseases 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N oleic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 1
- 238000011369 optimal treatment Methods 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000011164 ossification Effects 0.000 description 1
- 229960001528 oxymetazoline Drugs 0.000 description 1
- 229940094443 oxytocics prostaglandins Drugs 0.000 description 1
- 239000003973 paint Substances 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 235000021400 peanut butter Nutrition 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 239000003961 penetration enhancing agent Substances 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 1
- 239000002831 pharmacologic agent Substances 0.000 description 1
- 238000011458 pharmacological treatment Methods 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 150000004713 phosphodiesters Chemical group 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 231100000719 pollutant Toxicity 0.000 description 1
- 239000004584 polyacrylic acid Substances 0.000 description 1
- 239000004417 polycarbonate Substances 0.000 description 1
- 229920000515 polycarbonate Polymers 0.000 description 1
- 229950005134 polycarbophil Drugs 0.000 description 1
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 description 1
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 229960005205 prednisolone Drugs 0.000 description 1
- OIGNJSKKLXVSLS-VWUMJDOOSA-N prednisolone Chemical compound O=C1C=C[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 OIGNJSKKLXVSLS-VWUMJDOOSA-N 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 150000003180 prostaglandins Chemical class 0.000 description 1
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 1
- 230000010344 pupil dilation Effects 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 239000009342 ragweed pollen Substances 0.000 description 1
- 208000022064 reactive hyperemia Diseases 0.000 description 1
- 210000000664 rectum Anatomy 0.000 description 1
- 230000022532 regulation of transcription, DNA-dependent Effects 0.000 description 1
- 210000003289 regulatory T cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N renifolin D Natural products CC(=C)[C@@H]1Cc2c(O)c(O)ccc2[C@H]1CC(=O)c3ccc(O)cc3O BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N 0.000 description 1
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 1
- 230000002207 retinal effect Effects 0.000 description 1
- 210000001116 retinal neuron Anatomy 0.000 description 1
- 208000019793 rhegmatogenous retinal detachment Diseases 0.000 description 1
- 239000003161 ribonuclease inhibitor Substances 0.000 description 1
- CVHZOJJKTDOEJC-UHFFFAOYSA-N saccharin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)NS(=O)(=O)C2=C1 CVHZOJJKTDOEJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940081974 saccharin Drugs 0.000 description 1
- 235000019204 saccharin Nutrition 0.000 description 1
- 239000000901 saccharin and its Na,K and Ca salt Substances 0.000 description 1
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 1
- HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N schardinger α-dextrin Chemical compound O1C(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(O)C2O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC2C(O)C(O)C1OC2CO HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 239000008159 sesame oil Substances 0.000 description 1
- 235000011803 sesame oil Nutrition 0.000 description 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 1
- 210000004927 skin cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000779 smoke Substances 0.000 description 1
- 239000000344 soap Substances 0.000 description 1
- 235000010413 sodium alginate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000661 sodium alginate Substances 0.000 description 1
- 229940005550 sodium alginate Drugs 0.000 description 1
- WXMKPNITSTVMEF-UHFFFAOYSA-M sodium benzoate Chemical compound [Na+].[O-]C(=O)C1=CC=CC=C1 WXMKPNITSTVMEF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000010234 sodium benzoate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004299 sodium benzoate Substances 0.000 description 1
- 229960003885 sodium benzoate Drugs 0.000 description 1
- 229910001467 sodium calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019812 sodium carboxymethyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920001027 sodium carboxymethylcellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000007901 soft capsule Substances 0.000 description 1
- 229940075582 sorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000010199 sorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004334 sorbic acid Substances 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 229940083466 soybean lecithin Drugs 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 239000008117 stearic acid Substances 0.000 description 1
- 239000008174 sterile solution Substances 0.000 description 1
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N succinic acid Chemical compound OC(=O)CCC(O)=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 230000009747 swallowing Effects 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000007910 systemic administration Methods 0.000 description 1
- 230000001839 systemic circulation Effects 0.000 description 1
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 1
- 235000012222 talc Nutrition 0.000 description 1
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002562 thickening agent Substances 0.000 description 1
- 108010029307 thymic stromal lymphopoietin Proteins 0.000 description 1
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 1
- 231100000041 toxicology testing Toxicity 0.000 description 1
- 239000012096 transfection reagent Substances 0.000 description 1
- 230000010474 transient expression Effects 0.000 description 1
- 102000035160 transmembrane proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091005703 transmembrane proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 1
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 108010036927 trypsin-like serine protease Proteins 0.000 description 1
- 230000005951 type IV hypersensitivity Effects 0.000 description 1
- 208000027930 type IV hypersensitivity disease Diseases 0.000 description 1
- VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N uroanthelone Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C(C)C)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N 0.000 description 1
- 239000005526 vasoconstrictor agent Substances 0.000 description 1
- 230000024883 vasodilation Effects 0.000 description 1
- 208000018464 vernal keratoconjunctivitis Diseases 0.000 description 1
- 108700026220 vif Genes Proteins 0.000 description 1
- 201000001862 viral hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 230000004393 visual impairment Effects 0.000 description 1
- 210000004127 vitreous body Anatomy 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
- C12N15/1138—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against receptors or cell surface proteins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
- A61K31/7105—Natural ribonucleic acids, i.e. containing only riboses attached to adenine, guanine, cytosine or uracil and having 3'-5' phosphodiester links
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
- A61P27/02—Ophthalmic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
- A61P27/02—Ophthalmic agents
- A61P27/14—Decongestants or antiallergics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/08—Antiallergic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/14—Type of nucleic acid interfering N.A.
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/31—Chemical structure of the backbone
- C12N2310/315—Phosphorothioates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
- C12N2310/321—2'-O-R Modification
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/33—Chemical structure of the base
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/33—Chemical structure of the base
- C12N2310/335—Modified T or U
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/50—Physical structure
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2320/00—Applications; Uses
- C12N2320/30—Special therapeutic applications
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Ophthalmology & Optometry (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области биохимии. Описана группа изобретений, включающая молекулу миРНК, которая снижает экспрессию гена ORAI1 при введении в клетку, применение вышеуказанной молекулы миРНК в получении лекарственного средства для лечения состояния глаза, характеризующегося повышенной экспрессией или активностью гена ORAI1, и фармацевтическую композицию, содержащую вышеуказанную молекулу миРНК, для лечения и/или предотвращения состояния глаза, характеризующегося повышенной экспрессией или активностью ORAI1. В одном из вариантов изобретения молекула миРНК содержит 19-нуклеотидную двухцепочечную область. Изобретение расширяет арсенал средств для специфичного воздействия на ген ORAI1. 3 н. и 7 з.п. ф-лы, 29 ил., 1 табл., 32 пр.
Description
Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к области продуктов миРНК (малые интерферирующие РНК) и их применению в способах и композициях для лечения и/или предотвращения состояний глаза, и в частности, для лечения и/или предотвращения состояний глаза, таких как конъюнктивит и/или аллергические заболевания глаз, связанные с высоким уровнем экспрессии и/или активности ORAI1.
Уровень техники
РНК-интерференция представляет собой существующий в природе механизм посттрансляционной регуляции, присутствующий в большинстве эукариотических клеток, в котором малые двухцепочечные молекулы РНК (дцРНК) применяют для индукции гомологичного подавления экспрессии гена. Открытие РНК-интерференции Fire и Mello у червя C. elegans (Fire, 1998) было отмечено Нобелевской премией в 2006 г. Вскоре после этого первого описания показали, что РНК-интерференция также происходит в клетках млекопитающих, не посредством длинных дцРНК, а посредством малых двухцепочечных интерферирующих РНК (миРНК) длиной 21 нуклеотид (Elbashir, 2001).
Процесс РНК-интерференции считают эволюционно консервативным механизмом клеточной защиты, используемым для предотвращения экспрессии чужеродных генов и широко распространенным в разных таксономических группах и у растения, где его называют посттрансляционным подавлением экспрессии гена. После открытия механизма РНК-интерференции появилось огромное количество исследований, направленных на открытие новых соединений, способных селективно изменять экспрессию генов, в качестве нового способа лечения заболеваний человека, действующего на мишени, не поддающиеся медикаментозному лечению с помощью традиционных фармацевтических подходов с применением малых молекул или белков.
Согласно имеющимся знаниям механизм РНК-интерференции запускается при процессировании длинных двухцепочечных РНК РНКаза III-подобным белком, известным как Dicer. Белок Dicer, как правило, содержит N-концевой домен РНК-хеликазы, РНК-связывающий домен, так называемый Piwi/Argonaute/Zwille (PAZ), два домена РНКазы III и домен связывания двухцепочечной РНК (dsRBD, double-stranded RNA binding domain) (Collins, 2005), а его активность вызывает процессирование длинных двухцепочечных РНК до двухцепочечных миРНК длиной 21-24 нуклеотида с 2 неспаренными выступающими основаниями на 3'-конце, 5'-фосфатом и 3'-гидроксильной группой. Образующиеся в результате дуплексы миРНК затем встраиваются в эффекторный комплекс, называемый RISC (RNA-induced silencing complex, комплекс сайленсинга, индуцированный РНК), где антисмысловая или направляющая цепь миРНК обеспечивает узнавание и разрезание последовательности мРНК-мишени комплексом RISC (Elbashir, 2001) посредством аденозинтрифосфат (АТФ)-зависимого расплетания молекулы двухцепочечной миРНК за счет активности РНК-хеликазы (Nykanen, 2001). Каталитическая активность RISC, обеспечивающая деградацию мРНК, опосредована эндонуклеазой Argonaute 2 (AGO2) (Liu, 2004; Song, 2004). AGO2 относится к высококонсервативному семейству белков Argonaute. Белки Argonaute представляют собой ~100 кДа сильно основные белки, содержащие два общих домена, а именно домены PIWI и PAZ (Cerutti, 2000). Домен PIWI необходим для взаимодействия с Dicer и обладает нуклеазной активностью, обеспечивающей расщепление мРНК (Song, 2004). AGO2 использует одну цепочку дуплекса миРНК как направляющую для поиска матричных РНК, содержащих комплементарные последовательности, и расщепляет фосфодиэфирный остов между основаниями 10 и 11 относительно 5'-конца направляющей цепочки (Elbashir, 2001). Важной стадией при активации RISC является расщепление смысловой или «сопровождающей» цепи с помощью AGO2, высвобождающее эту цепочку из комплекса (Rand, 2005). Кристаллографические исследования, анализирующие взаимодействие направляющей цепи миРНК и домена PIWI, показывают, что только нуклеотиды со 2 по 8 составляют «затравочную последовательность», обеспечивающую узнавание целевой мРНК комплексом RISC, и что даже один неспаренный нуклеотид в этой последовательности может сильно нарушать способность молекулы подавлять экспрессию гена (Ma, 2005; Doench, 2004; Lewis, 2003). После расщепления мРНК из-за присутствия незащищенных концов РНК в фрагментах мРНК далее подвергается расщеплению и деградации внутриклеточными нуклеазами и больше не транслируется в белки (Orban, 2005), в то время как RISC повторно вступает в последующие циклы (Hutvagner, 2002). Это составляет каталитический процесс, приводящий к селективному уменьшению содержания конкретных молекул мРНК и соответствующих белков. Можно исследовать этот нативный механизм подавления экспрессии генов с целью регуляции любых выбранных генов (гена) посредством прямой доставки миРНК эффекторов в клетки или ткани, где они будут активировать RISC и обеспечивать сильное и специфичное подавление экспрессии целевой мРНК. РНК-интерференцию применяют в биомедицинских исследованиях, таких как лечение ВИЧ, вирусного гепатита, сердечно-сосудистых заболеваний и нарушений мозгового кровообращения, нарушения обмена веществ, нейродегенеративных заболеваний и рака (Angaji SA, et al., 2010).
Опубликовано много исследований, описывающих идеальные свойства, которыми должны обладать миРНК для достижения максимальной эффективности, в зависимости от длины, структуры, химического состава и последовательности. Исходные параметры создания миРНК были заданы Tuschl с соавторами в WO02/44321, хотя с тех пор было опубликовано много последующих исследований, алгоритмов и/или усовершенствований. Подходы к подбору миРНК усложнялись по мере появления новых подробностей механизма, дополнительно дальнейший анализ существующих и новых данных может предоставить дополнительную информацию, способствующую дальнейшему усовершенствованию данных подходов (Walton SP, et al., 2010). Альтернативно, в нескольких недавних исследованиях сообщили о создании и анализе новых индуцирующих РНК-интерференцию структур, отличающихся от классических «19+2» структур миРНК и не соответствующих основным свойствам классических миРНК, касающихся выступающих неспаренных оснований, длины или симметрии, что поднимает вопрос о пластичности аппарата РНК-интерференции в клетках млекопитающих (Chang CI, et al., 2011).
Также предпринято много попыток увеличения стабильности миРНК, поскольку она является основным препятствием терапии на основе миРНК из-за повсеместной распространенности РНКаз в биологических жидкостях. Другой свойственной молекулам миРНК проблемой является их иммуногенность, из-за которой миРНК, как было обнаружено, индуцируют неспецифичную активацию врожденного иммунитета. Нокдаун нецелевых генов (мРНК) является хорошо известным побочным эффектом подавления экспрессии гена посредством миРНК. Это происходит из-за частичной комплементарности миРНК и мРНК, отличающихся от целевой мРНК, и оказывает нецелевое действие на гены с последовательностью, комплементарной одной их двух цепей миРНК. Одной из основных стратегий увеличения стабильности и уменьшения нецелевых эффектов является применение модифицированных нуклеотидов, таких как 2'-O-метилнуклеотиды, 2'-аминонуклеотиды или нуклеотиды, содержащие 2'-О- или 4'-С-метиленовые мостики. Также описана модификация рибонуклеотидного остова, соединяющего соседние нуклеотиды, в основном посредством введения тиофосфатных нуклеотидов. По-видимому, увеличенная стабильность и/или снижение иммуногенности часто обратно пропорциональны эффективности [Parrish, 2000), и лишь определенное количество, положение и/или комбинации модифицированных нуклеотидов могут привести к образованию стабильного и неиммуногенного соединения для подавления экспрессии гена. Поскольку это представляет собой серьезное препятствие для терапии на основе миРНК, были опубликованы различные исследования, описывающие определенные профили модификации, демонстрирующие хорошие результаты, примеры таких исследований включают EP1527176, WO2008/050329, WO2008/104978 или WO2009/044392, хотя гораздо больше можно найти в литературе (Sanghvi YS. 2011; Deleavey, et al., 2012).
Аллергические заболевания характеризует повышенная реакция иммунной системы на чужеродное белковое вещество («аллерген»), которое поступает с пищей, с вдыхаемым воздухом в легкие, при инъекции или прикосновении. У аллергии есть генетический компонент. Если всего у одного из родителей есть аллергия любого типа, шансы, что у каждого ребенка будет аллергия, равны 1 к 3. Если аллергия есть у обоих родителей, гораздо вероятней (7 из 10), что у их детей будет аллергия. Аллергию невозможно вылечить, однако можно контролировать с помощью подходящей профилактики и лечения.
Около 30% людей по всему миру страдают от симптомов аллергии и 40-80% из них имеют глазные симптомы (Key B., 2001). Аллергические заболевания, затрагивающие глаз, или глазные аллергии составляют гетерогенную группу заболеваний с широким спектром клинических проявлений. Аллергическое заболевание глаз обычно развивается при взаимодействии конъюнктивы (мембраны, покрывающей глаз и выстилающей веко) с аллергеном. Аллергическое заболевание глаз может развиться независимо или в связи с другими симптомами аллергии (такими как ринит или астма).
Фундаментальные и клинические исследования способствуют пониманию того, какие клетки, медиаторы и иммунологические события участвуют в аллергических заболеваниях глаз. В глазу, в частности, в конъюнктиве, содержится большое число тучных клеток. При наличии аллергены могут связываться с иммуноглобулином IgE на рецепторах FcεRI на поверхности тучных клеток и индуцировать их активацию и высвобождение медиаторов аллергии (процесс, называемый дегрануляцией). При дегрануляции во внеклеточное окружение тучной клетки высвобождаются компоненты тучной клетки, включая гистамин, простагландины, триптазу и лейкотриены. Посредством разных механизмов эти компоненты вызывают признаки и симптомы аллергического заболевания глаз. Активацию тучных клеток аллергического воспаления часто называют острой фазой ответа или начальной фазой аллергического заболевания глаз. Ответ острой фазы может прогрессировать до ответа поздней фазы, характеризующегося привлечением клеток воспаления к очагу аллергического воспаления, например, проникновением эозинофилов и нейтрофилов в конъюнктиву.
Аллергическое заболевание глаз представляет собой одно из наиболее распространенных состояний, с которым сталкиваются аллергологи и офтальмологи. Аллергическое заболевание глаз обычно связано со следующими симптомами и признаками: конъюнктивитом, блефаритом, блефароконъюнктивитом или кератоконъюнктивитом. Глаз краснеет, начинает зудеть, появляется слезоточивость и выделения из глаз. В тяжелых случаях возникает ощущение жжения, боль и светобоязнь.
Аллергические заболевания, затрагивающие глаз, включают умеренные формы, такие как сезонный аллергический конъюнктивит и круглогодичный аллергический конъюнктивит; и более тяжелые проявления, такие как весенний кератоконъюнктивит; атопический кератоконъюнктивит и конъюнктивит с гиперплазией сосочков. Последние могут быть связаны с осложнениями, такими как повреждение роговицы, и могут вызывать потерю зрения. Сезонный аллергический конъюнктивит и круглогодичный аллергический конъюнктивит обычно представляют собой опосредованную IgE-тучными клетками реакцию гиперчувствительности к внешним аллергенами; в то время как атопический кератоконъюнктивит и весенний кератоконъюнктивит характеризует хроническое воспаление с участием нескольких типов иммунных клеток. Аллергены сезонного аллергического конъюнктивита и круглогодичного аллергического конъюнктивита с помощью антигенпрезентирующих клеток запускают иммунный ответ с преобладанием Th2, который индуцирует высвобождение IgE В-клетками. Активация аллергического ответа обычно включает инфильтрацию и дегрануляцию тучных клеток.
Сезонный аллергический конъюнктивит является наиболее частым аллергическим заболеванием глаз, обычно вызываемым аллергенами, такими как переносимая по воздуху пыльца, пыль и аллергены, содержащиеся в клетках кожи домашних животных. Признаки и симптомы, как правило, возникают в течение весны и лета и, как правило, ослабевают в зимние месяцы. Зуд, покраснение и отек конъюнктивы являются наиболее характерными симптомами, также симптомами являются слезоточивость, ощущение жжения и светобоязнь. В большинстве случаев сезонный аллергический конъюнктивит не является серьезным состоянием. Однако он может очень беспокоить пациентов, поскольку влияет на качество жизни и может иметь большое социоэкономическое значение (Kari O. And Saari KM, 2010).
Круглогодичный аллергический конъюнктивит является вторым по распространенности аллергическим заболеванием глаз, обычно вызываемым животными или клещами. Симптомы и признаки в основном такие же, как при сезонном аллергическом конъюнктивите, отличие в конкретных аллергенах, к которым у пациента есть аллергия, и то, что круглогодичный аллергический конъюнктивит может возникать на протяжении всего года при контакте с постоянными аллергенами. Круглогодичный аллергический конъюнктивит возникает во всех возрастных группах, но чаще в молодом или среднем возрасте у людей обоих полов. Кроме того, круглогодичный аллергический конъюнктивит часто связан с синдромом сухости глаз.
Сезонный аллергический конъюнктивит и круглогодичный аллергический конъюнктивит являются наиболее распространенными формами аллергических заболеваний глаз. Оценки варьируют, но считается, что эти типы аллергии поражают по меньшей мере 15-20% всей популяции. Сезонный аллергический конъюнктивит и круглогодичный аллергический конъюнктивит зачастую не диагностируют и, следовательно, не долечивают. При сезонном аллергическом конъюнктивите и круглогодичном аллергическом конъюнктивите индуцированное аллергеном локальное высвобождение IgE стимулирует дегрануляцию тучных клеток посредством Са2+-зависимого механизма. Активированные IgE тучные клетки высвобождают заранее образованные медиаторы воспаления, такие как гистамин и лейкотриен 4, являющиеся первыми медиаторами аллергической реакции. Эти медиаторы привлекают эозинофилы, которые проникают в очаг, усиливая аллергическую реакцию.
Весенний кератоконъюнктивит является относительно редким хроническим аллергическим воспалением окулярной поверхности которое в основном поражает детей и подростков. Основными симптомами являются зуд, покраснение, отек, выделения из глаз и светобоязнь. Наиболее характерным признаком является разрастание сосочков в верхней тарзальной конъюнктиве.
Атопический кератоконъюнктивит является билатеральным хроническим воспалительным заболеванием окулярной поверхности и века. Наиболее характерными признаками являются экзематозные зудящие очаги на веке. Нередко у пациентов в раннем возрасте была операция по удалению катаракты [Kari O. and Saari KM, 2010).
Конъюнктивит с гиперплазией сосочков является воспалительным заболеванием, характеризующимся гипертрофией сосочков верхней тарзальной конъюнктивы. Конъюнктивит с гиперплазией сосочков вызывают скорее инертные вещества, чем аллергены. При удалении этих раздражающих стимулов изменения сосочков конъюнктивы проходят. Отложение белков на поверхности контактных линз может стать антигенным и стимулировать образование IgE (La Rosa M. et al., 2013).
Современное лечение аллергического заболевания глаз включает нефармакологические и фармакологические стратегии. Избегание антигена является первичной модификацией поведения при всех типах аллергических заболеваний глаз. Искусственные заменители слезной жидкости выполняют барьерную функцию и помогают улучшить защиту первой линии на уровне слизи конъюнктивы. Если нефармакологические стратегии не обеспечивают адекватное уменьшение симптомов, можно применять фармакологическое лечение.
Главное направление контроля аллергического заболевания глаз включает применение противоаллергических терапевтических агентов, таких как противогистаминные, средства двойного действия или комбинированные средства и стабилизаторы тучных клеток. Местные противогистаминные средства (такие как эмедастин и левокабастин) конкурентно и обратимо блокируют гистаминовые рецепторы и ослабляют зуд и покраснение, но лишь на короткий период. Антигистаминные средства влияют на другие провоспалиительные медиаторы, которые остаются заингибированными. Ограниченная продолжительность действия требует частого введения, а местные антигистаминные средства могут раздражать глаз, особенно при длительном применении.
Комбинированное лечение с применением противоотечных средств (таких как оксиметазолин, тетрагидрозолин и нафазонлин) в комбинации с антигистаминными средствами действует как сосудосуживающее, но, известно, что оно может вызвать болезненность и жжение при инстилляции. Другие побочные явления включают расширение зрачка и реактивную гиперемию, что делает эти комбинированные средства более подходящими для краткосрочного применения. Кроме того, эти лекарственные средства не рекомендованы для применения у пациентов с закрытоугольной глаукомой. Стабилизаторы тучных клеток (такие как кромогликат, лодоксамид, недокромил) имеют неясный механизм действия. Они не облегчают существующие симптомы, и их можно применять только в профилактических целях для предотвращения дегрануляции тучных клеток при последующем контакте с аллергеном. Им требуется период нагрузки, в течение которого необходимо вводить их перед контактом с антигеном (La Rosa M. et al., 2013).
Если упомянутые выше противоаллергические лекарственные средства не обеспечивают адекватный контроль аллергического воспалительного процесса, применяют противовоспалительные агенты. Кортикостероиды остаются среди наиболее сильных фармакологических агентов, применяемых при более тяжелых вариантах аллергического заболевания глаз (La Rosa M. et al., 2013). Однако стероидные лекарственные средства обладают побочными эффектами, которые угрожают здоровью пациента в целом. Хроническое введение кортикостероидов может вызвать медикаментозный остеопороз за счет подавления всасывания кальция в кишечнике и ингибирования формирования кости. Другие побочные эффекты хронического введения кортикостероидов включают гипертензию, гипергликемию, гиперлипидемию (повышенные уровни триглицеридов) и гиперхолестеринемию (повышенные уровни холестерина) из-за действия этих лекарственных средств на метаболические процессы в организме. Также известно, что определенные кортикостероиды обладают большей способностью повышать внутриглазное давление, чем другие соединения этого класса. Например, известно, что преднизолон, являющийся очень сильным окулярным противовоспалительным агентом, обладает более выраженной способностью повышать внутриглазное давление, чем фторметолон, обладающий умеренной окулярной противовоспалительной активностью. Также известно, что риск повышения внутриглазного давления, связанного с местным офтальмологическим применением кортикостероидов, возрастает с течением времени. Другими словами, хроническое (т.е. продолжительное) применение этих агентов повышает риск значительного повышения внутриглазного давления. Таким образом, кортикостероиды могут не подходить для продолжительного лечения аллергических заболеваний глаз. Кроме того, хроническое применение кортикостероидов противопоказано из-за повышенного риска развития катаракты и глаукомы (Ono SJ, and Abelson MB, 2005).
Иммунотерапия аллергии полезна для снижения ответа на аллергены, но ее роль при аллергическом конъюнктивите не доказана. Основной целью такого лечения является индукция клинической толерантности по отношению к конкретному аллергену. Терапию проводят подкожно с постепенным увеличением доз для поддержания на уровне ниже порогового уровня клинической реакции. Сублингвальную иммунотерапию считают альтернативой подкожной иммунотерапии аллергии и вводят перорально под язык, но отдаленные результаты сублингвальной иммунотерапии еще не доступны. Большинство исследований этой формы терапии были исследованиями аллергического ринита. Как правило, иммунные ответы на введение аллергена не предсказывают эффективность терапии, а сама терапия может вызывать системные реакции, частота и тяжесть которых варьирует в зависимости от типа введенного аллергена (La Rosa M. et al., 2013).
Дополнительно, большинство новых офтальмологических противоаллергических агентов обладает ограниченной продолжительностью действия, и требует введения дозы дважды в день. Местный препарат с более продолжительным действием был бы предпочтительным, поскольку его можно было бы вводить в виде капель один раз в день. Таким образом, существует необходимость в новых видах терапии, предоставляющих преимущества в таких параметрах как эффективность и продолжительность действия, обладая при этом такими же профилями безопасности, как традиционные офтальмологические противоаллергические агенты.
Терапию на основе РНК-интерференции выделяют как способную удовлетворить нереализованные потребности в лечении аллергии (Popescu FD. 2005). Было показано, что системное введение миРНК к CD40 мышам, сенсибилизированным аллергеном, способно ослаблять назальные симптомы аллергии посредством ингибирования функций дендритных клеток и В-клеток и образования регуляторных Т-клеток (Suzuki M. et al., 2009). Кроме того, также разработали аллерген-специфичную терапию аллергического ринита на основе миРНК с помощью сенсибилизированных аллергеном дендритных клеток с подавленной экспрессией CD40 (Suzuki M et al., 2010).
Изменения концентрации свободного внутриклеточного кальция (Ca2+) в клетке регулируют многие биологические функции. Ca2+ сигналы образуются при контролируемом выходе Ca2+ из эндоплазматического ретикулума (ЭР), являющегося основным депо кальция в клетках. Выход кальция из ЭР активирует депо-управляемые Ca2+ каналы (SOC, store-operated) на плазматической мембране, индуцируя депо-управляемый вход Ca2+ в рамках входа внеклеточного кальция в цитоплазму. Недавние исследования подчеркивают важность данного механизма входа Ca2+ для ряда физиологических процессов, включая аллергию (Bergmeier W et al., 2013).
Депо-управляемый вход Ca2+ активируется в ответ на истощение запаса Ca2+ в ЭР.
Активация депо-управляемого входа Ca2+ индуцирует вход Ca2+ из внеклеточных компартментов, опосредованный Ca2+ каналами, регулируемыми высвобождением Ca2+ из депо (CRAC, store-operated Ca2+ release-activated Ca2+) (Hoth M. et al., 1992).
Каналы CRAC состоят из чувствительных к кальцию белков STIM (stromal interaction molecule, молекула стромального взаимодействия) и порообразующих субъединиц, называемых ORAI. В клетках млекопитающих содержатся три ORAI: ORAI1, ORAI2 и ORAI3; хотя ORAI2 и ORAI3 выполняют такую же роль, как и ORAI1, токи Ca2+, образованные этими белками, приблизительно в два-три раза меньше, чем токи, образованные ORAI1 (Smyth J.T. et al., 2006).
ORAI1 является активно экспрессирующимся 33 кДа белком плазматической мембраны с 4 трансмембранными доменами, который активируется кальциевым сенсором молекулой стромального взаимодействия 1 (STIM1, stromal interaction molecule 1), когда депо кальция истощены, и индуцирует вход внеклеточного кальция в цитоплазму через каналы CRAC. ORAI1 также называют модулятором CRAC 1, CRACM1 (CRAC Modulator 1), ORAT1, трансмембранным белком Transmembrane Protein 142A, TMEM142A (Transmembrane Protein 142А) или канальным белком CRAC 1. ORAI1 идентифицировали как основную субъединицу каналов CRAC (Wang Y. et al., 2012).
Растущее число фактов указывает на то, что краткосрочная и долгосрочная активация иммунных клеток при аллергической реакции опосредована входом Ca2+ в иммунные клетки из внеклеточного компартмента. Краткосрочный иммунный ответ включает дегрануляцию тучных клеток и активацию эффекторных цитотоксических Т-клеток. Действительно, дегрануляция тучных клеток, лишенных либо STIM1, либо ORAI1, сильно нарушена (Vig M. et al., 2008; Baba Y. et al 2008). Долгосрочные ответы включают модуляцию экспрессии генов, контролирующих пролиферацию и дифференцировку В- и Т-клеток (Parekh A.B. et al., 2005).
Также предполагают, что ORAI1 важен для эффекторной функции мышиных тучных клеток. Дегрануляция тучных клеток, полученных из лишенных ORAIl мышей, была сильно нарушена, а индукция опосредованного IgE пассивного анафилактического ответа in vivo также зависела от ORAI1. (Vig M, et al., 2008).
Исследовали нокдаун ORAI1 с помощью РНК-интерференции при аллергическом рините. Рекомбинантные лентивирусные векторы, кодирующие кшРНК (короткие шпилечные РНК) против ORAI1, введенные в ноздри сенсибилизированных овальбумином мышей вызывали симптомы аллергического ринита (количество чиханий и потираний носа) (Wang et al., 2012). Ринит развивается в результате назального раздражения или воспаления из-за заложенности. Аллергический ринит представляет собой аллергическое воспаление верхних отделов дыхательных путей, связанное с гиперчувствительностью нескольких типов иммунных клеток (Wang et al., 2012). Однако не все случаи ринита вызваны аллергическими реакциями. Ринит также развивается в ответ на химическое воздействие, в том числе на сигаретный дым, изменение температуры, инфекции и другие факторы.
В другом исследовании подавляли ORAI1 с помощью миРНК для ослабления опосредованной гистамином экспрессии COX-2 и активации NFkB, что указывает на важность опосредованной ORAI активации NFkB как сигнального пути, отвечающего за передачу гистаминовых сигналов, которые запускают воспалительные реакции при аллергическом ответе (Huang WC et al., 2011).
Таким образом, весьма вероятно, что значительная часть воспалительной реакции при аллергическом заболевании глаз опосредована активацией ORAI1.
Существуют патентные документы, ссылающиеся на миРНК для нокдауна ORAI1 для лечения аллергии. В W02010/099401 (Попечительский совет Университета Леланда Стэнфрода (младшего), The Board of Trustees of the Leland Stanford Junior University) описан способ модуляции активности канала CRAC в клетке, где канал CRAC контактирует с аминокислотным остатком домена STIM1, который связывается с ORAI1 и открывает канал CRAC. Среди поддающихся лечению состояний перечислены: аллергия или гиперчувствительность иммунной системы, включая гиперчувствительность замедленного типа и астму. В описании указано, что миРНК можно применять для нарушения экспрессии эндогенного гена для определения эффекта эндогенного гена на модулирование взаимодействия между белками STIM и ORAI.
В W02007/121186 (Королевский медицинский центр, The Queen's Medical Center) описано опосредованное миРНК подавление экспрессии человеческого CRACM1 (ORAI1) в клетках эмбриональной почки человека (HEK293). В этой заявке также указано, что агенты, модулирующие активность канала CRAC через взаимодействие с белком CRACM1 (ORAI1) или нарушение экспрессии CRACM1 (ORAI1) можно применять для модуляции аллергических реакций.
В W02009/095719 (ISIS INNOVATION LIMITED) описаны способы, применение и изделия для применения в лечении нарушений, связанных с активацией тучных клеток, включая комбинации агентов, ингибирующих белок CRACM1(ORAI1), которые могут быть миРНК, и агентов, ингибирующих лейкотриеновую активацию тучных клеток, для применения в лечении аллергических заболеваний, в частности, аллергического ринита.
В US2011/0112058 (Incozen Therapeutics Pvt. Ltd.) описан способ определения кандидатного агента для лечения рака легких, который предпочтительно ингибирует CRACM1/ORAI1. Этот документ также описывает применение миРНК для модуляции пути CRAC/STIM. Этот документ также указывает, что модуляторы канала CRAC, как было заявлено, полезны в лечении, предотвращении и/или облегчении заболеваний или нарушений, связанных с кальциевым каналом, активирующимся высвобождением кальция, включая аллергический ринит и аллергический конъюнктивит.
В US2012/0264231 (Hogan Patrick et al.) описаны способы и системы для идентификации агента, который может быть миРНК, модулирующей вход кальция через канал ORAI и/или регулирующей внутриклеточный кальций посредством канала ORAI, для лечения состояний и заболеваний, связанных с нарушением регуляции кальциевой передачи сигнала, включая аллергический ринит или аллергический конъюнктивит. Важная часть воспалительного ответа при аллергическом заболевании глаз, опосредованная ORAI1, не только является ключевой детерминантой воспалительного ответа, но также имеют отношение к клеточной пролиферации и клеточной миграции. Ингибирование ORAI1 с помощью миРНК в клетках пигментного эпителия сетчатки показало, что ORAI1 вовлечен в опосредованный эпидермальным фактором роста (EGF, epidermal growth factor) рост клеток. В этом исследовании предположили, что ORAI1 может быть потенциальной терапевтической мишенью лекарственных средств, направленных на лечение связанных с EGF нарушений, таких как пролиферативная витреоретинопатия (Yang et al 2013). Витреоретинопатия представляет собой заболевание, развивающееся как осложнение регматогенного отслоения сетчатки, во время которого жидкость из жидкой части стекловидного тела попадает в разрыв в сетчатке. Механизмы образования перфораций или разрывов сетчатки еще не полностью изучены. Скопление жидкости в субретинальном пространстве и тракционная сила стекловидного тела на сетчатке приводят к регматогенному отслоению сетчатки. Во время этого процесса слои клеток сетчатки контактируют с цитокинами стекловидного тела, которые стимулируют пролиферацию и миграцию пигментного эпителия сетчатки в процессе эпителиально-мезенхимального перехода и развивают способность мигрировать внутрь стекловидного тела. Во время этого процесса теряются контакты слоя клеток пигментного эпителия сетчатки с нейронами сетчатки и контакты клеток пигментного эпителия сетчатки с внеклеточным матриксом. Клетки пигментного эпителия сетчатки при миграции откладывают волокнистые мембраны, и эти мембраны сокращаются и тянут сетчатку. Все это в итоге приводит ко вторичной отслойке сетчатки после первичной хирургической отслойки сетчатки.
Краткое содержание изобретения
Настоящее изобретение представляет улучшенные продукты для уменьшения экспрессии ORAI1 и последующего окулярного воспаления при аллергических заболеваниях глаз. Преимуществом лечения аллергических заболеваниях глаз с помощью миРНК продуктов по сравнению с традиционными противоаллергическими терапевтическими агентами и противоаллергическими иммунотерапевтическими лекарственными средствами является то, что лечение на основе миРНК будет обладать более продолжительным эффектом. Это обусловлено тем, что отсутствие эффекторной молекулы вынуждает клетку заново синтезировать новые рецепторы, в то время как традиционные средства лечения оставляют содержание рецепторов на клеточной мембране неизменным.
Отмечается рост количества аллергических заболеваний глаз во всем мире. Особенно в промышленно развитых странах загрязнение окружающей среды считают основным фактором повышения чувствительности аллергиков. В дополнение к повышению выбросов в окружающую среду исследования также указывают на глобальное повышение уровня аллергенов в воздухе. Еще одним фактором является то, что жители бедных стран меньше обращаются за медицинской помощью для лечения аллергических заболеваний глаз, из-за чего частота зарегистрированных случаев заболевания в слаборазвитых странах может быть искусственно занижена.
По данным Американского фонда астмы и аллергии (Asthma and Allergy Foundation in America, AAFA), ежегодные затраты на лечение аллергии в США оценивают приблизительно в 14,5 млн долларов США. По их оценкам 50 миллионов американцев страдают от всех типов аллергии (1 из 5 американцев), включая аллергии на домашние/уличные, пищевые и лекарственные аллергены, латекс, насекомых, аллергические заболевания кожи и глаз. Распространение аллергии в США ускоряется с начала 1980х во всех возрастных, половых и расовых группах.
Несмотря на наличие географических особенностей, терапевты всего мира применяют общие критерии подбора подходящего курса лечения. Эти критерии включают эффективность, безопасность, удобство дозирования и удобство введения пациенту, согласно мнению специалистов из разных стран. Таким образом, на фоне увеличения по всему миру количества пациентов, жалующихся на ряд симптомов аллергических заболеваний глаз, выявление оптимального лечения с каждым днем становится все сложнее и интереснее.
ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
Фигура 1: показывает короткие фрагменты целевой последовательности гена ORAI1, выбранные в качестве целевых последовательностей миРНК настоящего изобретения.
Фигура 2: показывает олигонуклеотидные последовательности молекул миРНК настоящего изобретения, действующих на ORAI1, включенные в объем настоящего изобретения. SEQ ID NO, указанные на Фигуре, обозначают смысловую цепь (5'->3'); как правило, миРНК вводят в виде дцРНК, и они включают и смысловую, и комплементарную ей антисмысловую цепь. С SEQ ID NO. 112 по SEQ ID NO. 222 представляют собой миРНК, действующие на последовательности с SEQ ID NO. 1 по SEQ ID NO. 111, соответственно. Как правило, миРНК включает смысловую и антисмысловую цепи, а также может содержать неспаренные выступающие динуклеотиды на 3'-конце (например, dTdT). Однако это не является необходимым.
Фигура 3: модифицированные миРНК, действующие на ORAI1. Заданные SEQ ID NO обозначают смысловую (5'->3') цепь модифицированных миРНК ORAI1.
Фигура 4: Уровни экспрессии ORAI1 in vitro после трансфекции SEQ ID NO. 112 в разных клеточных линиях (человеческая A204, мышиная C2C12 и мышиная J744A.1).
Фигура 5: Уровни экспрессии ORAI1 in vitro после трансфекции миРНК, действующих на ORAI1 в мышиной клеточной линии C2C12.
Фигура 6: Уровни токсичности in vitro в разных клеточных линиях после трансфекции SEQ ID NO. 112 в разных клеточных линиях (человеческая A204 и мышиная C2C12).
Фигура 7: Уровни экспрессии человеческого ORAI1 in vitro после трансфекции SEQ ID NO. 112 и ее модифицированными вариантами, SEQ ID NO. 223, SEQ ID NO. 224, SEQ ID NO. 225, SEQ ID NO. 226, SEQ ID NO. 227, SEQ ID NO. 228 и SEQ ID NO. 229, в человеческих клетках A204.
Фигура 8: Уровни экспрессии мышиного ORAI1 in vitro после трансфекции SEQ ID NO. 112 и ее модифицированными вариантами, SEQ ID NO. 223, SEQ ID NO. 224, SEQ ID NO. 225, SEQ ID NO. 226, SEQ ID NO. 227, SEQ ID NO. 228 и SEQ ID NO. 229 в мышиных клетках C2C12.
Фигура 9: показывает дозозависимый эффект SEQ ID NO. 112 (SYL116011) и SEQ ID NO. 227 (SYL116011v8) в человеческих клетках. Трансфекции человеческих клеток A204 возрастающими дозами (от 0,001 до 100 нМ) SEQ ID NO. 112 (SYL116011) и SEQ ID NO. 227(SYL116011v8) и количественное определение % экспрессии гена ORAI1 в результате действия миРНК.
Фигура 10: показывает дозозависимый эффект SEQ ID NO. 112 (SYL116011) и SEQ ID NO. 227 (SYL116011v8) в мышиных клетках. Трансфекции мышиных клеток C2C12 возрастающими дозами (от 0,001 до 100 нМ) SEQ ID NO. 112 (SYL116011) и SEQ ID NO. 227(SYL116011v8) и количественное определение % экспрессии гена ORAI1 в результате действия миРНК.
Фигура 11: показывает экспрессию ORAI1 и его паралогов ORAI2 и ORAI3 после трансфекции SEQ ID NO. 112 (SYL116011) и SEQ ID NO. 227 (SYL116011v8) в человеческих клетках. Трансфекция SEQ ID NO. 112 и SEQ ID NO. 227 в человеческих клетках A204 и количественное определение % экспрессии генов ORAI1, ORAI2 и ORAI3 в результате действия миРНК.
Фигура 12: показывает экспрессию ORAI1 и его паралогов ORAI2 и ORAI3 после трансфекции SEQ ID NO. 112 (SYL116011) и SEQ ID NO. 227 (SYL116011v8) в мышиных клетках. Трансфекция SEQ ID NO. 112 и SEQ ID NO. 227 в мышиных клетках C2C12 и количественное определение % экспрессии генов ORAI1, ORAI2 и ORAI3 в результате действия миРНК.
Фигура 13: показывает выраженность возможных нецелевых эффектов после трансфекции SEQ ID NO. 112 (SYL116011) в человеческих клетках. Трансфекция SEQ ID NO. 112 в человеческих клетках A204 и количественное определение % экспрессии генов ORAI1, MSLN и OLFM12A в результате действия миРНК.
Фигура 14: показывает уровни экспрессии ORAI1 после трансфекции SEQ ID NO. 112 (SYL116011) в крысиных клеточных линиях. Трансфекция SEQ ID NO. 112 в крысиных клетках С6 и количественное определение % экспрессии гена ORAI1 в результате действия миРНК.
Фигура 15: показывает уровни экспрессии ORAI1 после трансфекции SEQ ID NO. 112 (SYL116011) в крысиных клеточных линиях. Трансфекция SEQ ID NO. 112 в крысиных клетках JTC-19 и количественное определение % экспрессии гена ORAI1 в результате действия миРНК
Фигура 16: показывает уровни экспрессии ORAI1 после трансфекции SEQ ID NO. 112 (SYL116011), SEQ ID NO. 233 (SYL116011v11) и SEQ ID NO. 235 (SYL116011v11) в человеческих, мышиных и крысиных клетках.
Фигура 17: Схема in vivo исследования.
Фигура 18: уровни мРНК ORAI1 в цельном глазу мышей в разное время после индукции аллергического заболевания глаз. АН: аллергии нет.
Фигура 19: уровни мРНК TLSP и Tnfrsf9 в мышиной модели аллергии, вызванной пыльцой амброзии. Уровни мРНК выражены как процент от уровней, наблюдаемых перед индукцией аллергии.
Фигура 20: Окулярные клинические признаки, свидетельствующие об аллергическом заболевании глаз. Мышей наблюдали через 1, 3, 6 и 24 ч после индукции аллергического заболевания глаз. Клинические признаки определяли, оценивая следующие параметры по шкале от 0 до 3: отек конъюнктивы и конъюнктивальная инъекция, гиперемия, отек века, выделения из глаза и слезоточивость. Данные выражены в процентах клинической оценки через 1 ч после индукции аллергии в обработанной фосфатно-солевым буфером группе и представляют собой среднее ± стандартная ошибка среднего для 8 животных в случае обработанной фосфатно-солевым буфером группы и для 15 животных в случае обработанной SEQ ID NO. 112 (SYL116011) группы.
Фигура 21: Отек конъюнктивы и слезоточивость в ответ на обработку разными дозами SEQ ID NO. 112 (SYL116011) в мышиной модели аллергии, вызванной пыльцой амброзии. Мышей наблюдали через 1, 3, 6 и 24 ч после индукции аллергического заболевания глаз A) Отек конъюнктивы и B) слезоточивость оценивали по шкале от 0 до 3. Данные выражены в процентах оценки через 1 ч после индукции аллергии в обработанной фосфатно-солевым буфером группе и представляют собой среднее для 8 животных в случае обработанной фосфатно-солевым буфером группы и для 15 животных в случае обработанной SEQ ID NO. 112 (SYL116011) группы.
Фигура 22: Инфильтрация тучных клеток в конъюнктиву века и в бульбарную конъюнктиву в ответ на обработку разными дозами SEQ ID NO. 112 (SYL116011) в мышиной модели аллергии, вызванной пыльцой амброзии. A) Инфильтрация тучных клеток в конъюнктиву века, выраженная как процент от числа тучных клеток, наблюдаемых в обработанных фосфатно-солевым буфером образцах через 3 ч после обработки. B) Инфильтрация тучных клеток в бульбарную конъюнктиву, выраженная как процент от числа тучных клеток, наблюдаемых в обработанных фосфатно-солевым буфером образцах через 3 ч после обработки.
Фигура 23: Инфильтрация эозинофилов в конъюнктиву века и в бульбарную конъюнктиву в ответ на обработку разными дозами SEQ ID NO. 112 (SYL116011) в мышиной модели аллергии, вызванной пыльцой амброзии. A) Инфильтрация эозинофилов в конъюнктиву века, выраженная как процент от числа тучных клеток, в обработанных фосфатно-солевым буфером образцах через 24 ч после обработки. B) Инфильтрация эозинофилов в бульбарную конъюнктиву, выраженная как процент от числа эозинофилов, наблюдаемых в обработанных фосфатно-солевым буфером образцах через 24 ч после обработки.
Фигура 24: Экспрессия TLSP и CD-137 в ответ на обработку разными дозами SEQ ID NO. 112 (SYL116011) в мышиной модели аллергии, вызванной пыльцой амброзии. A) Экспрессия TLSP; B) Экспрессия CD-137 (Tnfrsf9).
Фигура 25: Клинические симптомы, наблюдаемые в разных временных точках после индукции аллергии. Аллергию индуцировали введением окулярной дозы пыльцы амброзии мышам, предварительно обработанным фосфатно-солевым буфером, SEQ ID NO. 227 (SYL116011v8) или левокабастином. Данные представляют среднее для 10 животных в группе.
Фигура 26: Изменение последозовой гиперемии при профилактике SEQ ID NO. 112(SYL116011) по сравнению с Patanol® и профилактикой инертным носителем.
Фигура 27: Изменение последозового косоглазия при профилактике SEQ ID NO. 112 (SYL116011) по сравнению с Patanol® и профилактикой инертным носителем.
Фигура 28: Изменение последозового отека век при профилактике SEQ ID NO. 112 (SYL116011) по сравнению с Patanol® и профилактикой инертным носителем.
Фигура 29: Изменение последозового выделения из глаз при профилактике SEQ ID NO. 112 (SYL116011) по сравнению с Patanol® и профилактикой инертным носителем.
Подробное описание изобретения
В первом аспекте настоящее изобретение относится к получению молекулы миРНК для применения в качестве лекарственного средства в лечении и/или предотвращении состояния глаз, характеризующегося повышенной экспрессией и/или активностью ORAI1, где указанная молекула специфично действует на последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO. 1 - SEQ ID NO. 111, и уменьшает экспрессию гена ORAI1 при попадании в клетку. Целевую последовательность предпочтительно выбирают из группы, состоящей из последовательностей SEQ ID NO. 1 - SEQ ID NO. 14, более предпочтительно, SEQ ID NO. 1 - SEQ ID NO. 8, и еще более предпочтительно, чтобы целевая последовательность содержала или состояла из SEQ ID NO. 1.
На ген «действует» миРНК в соответствии с настоящим изобретением когда, например, молекула миРНК селективно уменьшает или ингибирует экспрессию гена. Фраза «селективно уменьшает или ингибирует», как применяют в настоящей заявке, охватывает миРНК, которые нарушают экспрессию одного гена, в данном случае ORAI1. Альтернативно, миРНК действует на ген, когда (одна цепь) миРНК гибридизуется в строгих условиях с транскриптом гена, т.е. в его мРНК. Гибридизация «в строгих условиях» обозначает отжиг в целевой области мРНК в стандартных условиях, напр., при высокой температуре и/или низком содержании соли, которая обычно ухудшает гибридизацию. Подходящий протокол (с применением 0,1×SSC, 68°C в течение 2 часов) описан в Maniatis, T., et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, 1982, at pages 387-389.
Нуклеиновые кислоты, которые приведены в настоящей заявке, написаны в направлении от 5'- к 3'-концу, если иное не указано. Термин «нуклеиновая кислота» обозначает либо ДНК, либо РНК, либо их модифицированную форму, содержащую пуриновые или пиримидиновые основания, присутствующие в ДНК (аденин (A, adenine), цитозин (C, cytosine), гуанин (G, guanine), тимин (T, thymine)) или в РНК (аденин (A, adenine), цитозин (C, cytosine), гуанин (G, guanine), урацил (u, uracil)). Интерферирующие РНК, представленные в настоящей заявке, могут включать «Т» основания, например, на 3'-концах, даже несмотря на то, что основания «Т» не встречаются в РНК в природе. В некоторых случаях эти основания указаны как «dT», чтобы отличить дезоксирибонуклеотиды, присутствующие в цепочке рибонуклеотидов.
Целевая последовательность, как определено выше, описана как целевая последовательность ДНК, как применяют для определения вариантов транскриптов в базах данных, применяемых для создания миРНК, где конкретные применяемые соединения будут последовательностями РНК, определенными таким образом.
Специалист в данной области техники может получить доступ к любой последовательности целевого гена через базы данных общего пользования. Например, учетный номер в GenBank, соответствующий мРНК человеческого ORAI1, - это NM_032790 (Gene ID: 84876). Учетный номер гомолога в GenBank, соответствующий мРНК мышиного ORAI1, - это NM_175423 (Gene ID: 109305). Более того, в базе ENSEMBL (MBL-EBI/Wellcome Trust Sanger Institute) содержится следующие учетные номера человеческого и мышиного ORAI1: ENSG00000182500 и ENSMUSGO0000049686, соответственно. Общедоступные транскрипты мРНК человеческого ORAI1 - это ENST00000330079 и ENST00000537188.
Указанная предпочтительная целевая область, определенная настоящим изобретением, содержит или состоит из по меньшей мере одной последовательности, выбираемой из группы, состоящей из последовательностей с SEQ ID NO. 1 по SEQ ID NO. 111.
В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения указанная предпочтительная целевая область содержит или состоит из по меньшей мере одной последовательности, выбираемой из группы, состоящей из последовательностей с SEQ ID NO. 1 по SEQ ID NO.14.
В другом предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения указанная предпочтительная целевая область содержит или состоит из по меньшей мере одной последовательности, выбираемой из группы, состоящей из последовательностей с SEQ ID NO. 1 по SEQ ID NO.8. Эти последовательности являются на 100% гомологичными в следующих видах: Homo sapiens, Mus musculus, Canis lupus familiaris и Rattus norvegicus.
В области РНК-интерференции после демонстрации в in vitro исследованиях отсутствия способности человеческих миРНК вызвать нокдаун гена модельного животного, синтезируют суррогатное соединение (активный в животных аналог) для анализа эффективности миРНК в соответствующей животной модели. Этот суррогат конструируют к той же области, за исключением нескольких нуклеотидов в зависимости от гомологии между человеческим и кроличьим целевым геном. Этот подход широко применяли для разработки других олигонуклеотидов, в частности для токсикологических исследований (Kornbrust D. et al., 2013).
В более предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения указанная предпочтительная целевая область содержит или состоит из SEQ ID NO. 1 (5'-TGATGAGCCTCAACGAGCA-3').
Следовательно, миРНК в соответствии с аспектами настоящего изобретения будет предпочтительно содержать двухцепочечную молекулу РНК, антисмысловая цепь которой будет содержать последовательность РНК, в основном комплементарную по меньшей мере одной последовательности, выбираемой из группы, состоящей из SEQ ID NO. 1 - SEQ ID NO. 111, а смысловая цепь будет содержать последовательность РНК, комплементарную антисмысловой цепи, где обе цепи гибридизуются посредством стандартного спаривания оснований нуклеотидов. Более предпочтительно, чтобы миРНК в соответствии с аспектами настоящего изобретения предпочтительно содержала двухцепочечную молекулу РНК, антисмысловая цепь которой содержит последовательность РНК, в основном комплементарную последовательности, выбираемой из группы, состоящей из SEQ ID NO. 1 - SEQ ID NO. 8, и еще предпочтительнее, состоящей из SEQ ID NO. 1.
Как определено настоящим изобретением, «в основном комплементарный» последовательности целевой мРНК можно также понимать как «в основном идентичный» указанной целевой последовательности. «Идентичность», как понимают специалисты в данной области техники, представляет собой степень родства последовательности нуклеотидных последовательностей, как определено при сопоставлении положения и идентичности нуклеотидов последовательностей. В одном варианте осуществления настоящего изобретения антисмысловую цепь миРНК, имеющую 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%,95%, 96%, 97%, 98% или 99% комплементарности последовательности целевой мРНК, считают в основном комплементарной, и ее можно применять в настоящем изобретении. Процент комплементарности описывает процент непрерывной последовательности нуклеотидов в первой молекуле нуклеиновой кислоты, которые могут образовывать пары по Уотсону-Крику с рядом непрерывных нуклеотидов во второй молекуле нуклеиновой кислоты. В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения антисмысловая цепь миРНК является на 100% комплементарной целевой последовательности мРНК, а смысловая цепь миРНК является на 100% комплементарной антисмысловой на протяжении двухцепочечной части миРНК. Также миРНК может содержать выступающие неспаренные нуклеотиды на концах, например, выступающие неспаренные динуклеотиды на 3'-конце, предпочтительно, dTdT.
В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения указанное состояние глаз, определенное настоящим изобретением, является аллергическим заболеванием глаз и/или окулярным конъюнктивитом. Более предпочтительно, чтобы указанное состояние глаз выбирали из сезонного аллергического конъюнктивита, круглогодичного аллергического конъюнктивита, весеннего кератоконъюнктивита, атопического кератоконъюнктивита, конъюнктивита с гиперплазией сосочков, синдрома сухости глаз и их комбинаций.
В соответствии с известным в данном уровне техники, было предложено множество разных структур для РНК-интерференции. Как правило, эти двухцепочечные молекулы составляют в длину приблизительно от 19 до приблизительно 25 нуклеотидов и содержат структуры с тупыми концами, а также с выступающими неспаренными концами. Было описано, что выступающие неспаренные концы являются преимуществом и могут присутствовать на 5'-концах или на 3'-концах любой из цепей, поскольку они снижают узнавание РНКазами и имитируют природный субстрат для Dicer. Некоторые авторы рекомендуют включать выступающие неспаренные концы на обоих 3'-концах молекул, в то время как другие считают достаточным один выступающий неспаренный конец. Другие описывают применение структур с тупыми концами со специфичными профилями модификаций (EP 1527176, WO 2005/062937, WO 2008/104978, EP 2322617, EP 2348133, US 2013/0130377 и многие другие).
Выступающие неспаренные концы могут состоять из от 1 до 5 нуклеотидов; как правило, выступающие неспаренные концы состоят из динуклеотидов. Классические молекулы, применяемые в данной области, содержат 19-нуклеотидную двухцепочечную молекулу, которая также содержит динуклеотидные выступающие неспаренные концы на 3'-конце, предпочтительно содержащие динуклеотиды, как описано в оригинальных исследованиях Tuschl (WO02/44321). Эти выступающие неспаренные концы еще больше увеличивают сопротивляемость деградации нуклеазами (РНКазой). Позднее Kim et al., 2005 описали, что 21-мерные продукты (содержащие динуклеотидные выступающие неспаренные концы) необходимы для связывания с RISC. Также Bramsen et al. 2009 описали, что введение возможных дестабилизирующих модификаций в выступающие неспаренные концы далее увеличивает эффективность подавления экспрессии.
Таким образом, предпочтительный вариант осуществления различных аспектов настоящего изобретения относится к молекулам миРНК, действующим по меньшей мере на одну последовательность, выбираемую из группы, состоящей из SEQ ID NO. 1 - SEQ ID NO.111, содержащую по меньшей мере один выступающий неспаренный конец. Предпочтительнее, чтобы указанные молекулы миРНК действовали по меньшей мере на одну последовательность, выбираемую из группы, состоящей из SEQ ID NO. 1 - SEQ ID NO.8, и еще предпочтительней, состоящей из SEQ ID NO. 1. Там, где настоящее изобретение относится к молекуле миРНК, действующей по меньшей мере на одну последовательность, выбираемую из группы, состоящей из SEQ ID NO. 1 - SEQ ID NO.111, миРНК будет включать антисмысловую цепь эквивалентной длины и комплементарную мишени и смысловую цепь эквивалентной длины и комплементарную антисмысловой цепи. Антисмысловая и смысловая цепи могут также содержать дополнительные основания, не комплементраные другой цепи или мишени и/или неспаренные в двухцепочечной части миРНК. Например, SEQ ID NO 1 является 19-нуклеотидной последовательностью; миРНК может включать двухцепочечный участок из 19 п.о. (пар оснований), соответствующий этой части последовательности и динуклеотидные выступающие неспаренные концы.
Предпочтительный вариант осуществления различных аспектов настоящего изобретения относится к молекулам миРНК, действующим по меньшей мере на одну последовательность, выбираемую из группы, состоящей из SEQ ID NO. 1 - SEQ ID NO.111, где каждая цепь двухцепочечной молекулы миРНК составляет приблизительно от 18 до приблизительно 28 или более (напр., около 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27 или 28 или более) нуклеотидов в длину.
Другой предпочтительный вариант осуществления различных аспектов настоящего изобретения относится к молекулам миРНК длиной 18-28 нуклеотидов или более, содержащих нуклеотидную последовательность, выбираемую из группы, состоящей из SEQ ID NO. 112 - SEQ ID NO. 229. Предпочтительнее, чтобы двухцепочечные молекулы миРНК были по меньшей мере 19 нуклеотидов в длину и, чтобы их выбирали из группы, состоящей из SEQ ID NO. 112 - SEQ ID NO. 229.
Другой альтернативный вариант осуществления различных аспектов настоящего изобретения относится к молекулам с тупыми концами.
Также предпочтительный вариант осуществления настоящего изобретения относится к миРНК, содержащей или состоящей из 19-нуклеотидной двухцепочечной структуры, действующей по меньшей мере на одну последовательность, выбираемую из группы, состоящей из SEQ ID NO. 1 - SEQ ID NO. 111. Предпочтительнее, чтобы миРНК содержала или состояла из 19-нуклеотидной двухцепочечной структуры, действующей по меньшей мере на одну последовательность, выбираемую из группы, состоящей из SEQ ID NO. 1 - SEQ ID NO. 8, и еще предпочтительнее, состоящей из SEQ ID NO. 1.
Частный вариант осуществления настоящего изобретения относится к 19-нуклеотидным двухцепочечным миРНК с тупыми концами, действующим по меньшей мере на одну последовательность, выбираемую из группы, состоящей из SEQ ID NO. 1 - SEQ ID NO. 111. Предпочтительнее, чтобы миРНК действовала по меньшей мере на одну последовательность, выбираемую из группы, состоящей из SEQ ID NO. 1 - SEQ ID NO. 8, и, еще предпочтительнее, состоящей из SEQ ID NO. 1. В следующем частном варианте осуществления настоящего изобретения данное соединение содержит или состоит из по меньшей мере одной последовательности, выбираемой из группы, состоящей из SEQ ID NO: 112 - SEQ ID NO. 229. В следующем предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения антисмысловая цепь этой миРНК является по меньшей мере на 80%, предпочтительно, по меньшей мере на 90% комплементарной по меньшей мере одной последовательности, выбираемой из группы, состоящей из SEQ ID NO. 1 - SEQ ID NO. 111.
В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения данное соединение содержит или состоит из по меньшей мере одной последовательности, выбираемой из группы, состоящей из SEQ ID NO. 112 - SEQ ID NO. 119.
В более предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения данное соединение содержит или состоит из SEQ ID NO. 112 (5'- UGAUGAGCCUCAACGAGCA -3'), соответствующей смысловой цепи нашего контрольного соединения SYL1160011.
Более того, как описано в разделе «Предшествующий уровень техники», важной проблемой молекул миРНК является их нестабильность в биологических жидкостях из-за повсеместной распространенности РНКаз. Следовательно, было описано применение многих различных химических модификаций нуклеотидов с целью увеличения стабильности соединения.
Другой характерной проблемой молекул миРНК является их иммуногенность, из-за которой, как было обнаружено, миРНК вызывают неспецифичную активацию врожденного иммунитета, включая повышение уровня определенных цитокинов, напр., образования интерферона типа I и/или типа II, а также IL-12, IL-6 и/или TNF-α (Tumor Necrosis Factor alpha, фактор некроза опухоли альфа). Источником этих эффектов считают активацию Toll-подобных рецепторов, таких как TLR7, TLR8 и/или TLR3, посредством миРНК.
Также было описано, что оба эффекта, узнавание РНКазами и иммуногенность, зависят от последовательности.
Некоторые химические модификации, увеличивающие стабильность соединения за счет снижения чувствительности к РНКазам, также способны уменьшать индукцию иммунного распознавания в рамках последующего ответа. Однако введение химически модифицированных нуклеотидов в миРНК также может привести к снижению эффективности подавление экспрессии, как описано в предыдущем разделе, и, следовательно, применять его следует с осторожностью.
Следовательно, в предпочтительном варианте осуществления различных аспектов настоящего изобретения миРНК также включает по меньшей мере один нуклеотид с химической модификацией.
Предпочтительные химические модификации, увеличивающие стабильность и снижающие иммуногенные эффекты, включают 2'-O-метилнуклеотиды, 2'-фторнуклеотиды, 2'-аминонуклеотиды, 2'-дезоксинуклеотиды или нуклеотиды, содержащие 2'-0 или 4'-C-метиленовые мостики. Другие предпочтительные химические модификации для защиты от экзонуклеаз включают ExoEndoLight (EEL): модификацию всех пиримидинов в смысловой цепи до 2'-O-метиловых остатков и модификации всех пиримидинов в мотиве 5'-UA-3' или 5'-CA-3' в антисмысловой цепи. Дополнительно положение 1 смысловой цепи также можно заменить на 2'-O-метил, что предотвращает 5'-фосфорилирование смысловой цепи и таким образом увеличивает специфичность миРНК далее инактивируя смысловую цепь. Дополнительно смысловая цепь также может включать 2'-O-метиловую модификацию в положении 14, поскольку 2'-0-Me в этом положении далее инактивирует смысловую цепь и таким образом повышает специфичность миРНК. Дополнительно, другие предпочтительные модификации для защиты от экзонуклеаз включают метилфторовую защиту, при которой чередуются 2'-фторовые и 2'-O-метиловые модификации, начинающиеся (на 5'-конце) с 2'-F в смысловой цепи и начинающиеся с 2'-0-Me в антисмысловой цепи. Дополнительно, положение 1 в смысловой цепи также можно заменить 2'-0-Me, а положение 1 в антисмысловой цепи - 2'-F (поскольку его можно эффективно 5'-фосфорилировать). Также можно внести модификацию рибонуклеотидного остова, соединяющего соседние нуклеотиды, посредством введения модифицированных тиофосфатом нуклеотидов. Следующая предпочтительная модификация в объеме настоящего изобретения относится к замене урациловых рибонуклеотидов дезокситимидином (дезоксирибонуклеотидами). В другом предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения по меньшей мере один химически модифицированный нуклеотид содержится в смысловой цепи, в антисмысловой цепи или в обеих цепях миРНК.
Соответственно, в одном варианте осуществления настоящего изобретения миРНК содержит или состоит по меньшей мере из одной последовательности, выбираемой из группы, состоящей из SEQ ID NO. 223 - SEQ ID NO. 229.
Молекулы миРНК, как описано выше, можно доставлять внутрь клетки в виде нативных структур, применяя способы, известные в данной области техники. Например, при исследовании подавления экспрессии гена in vitro эти соединения вводят с помощью стандартных трансфекционных реагентов.
Для развития эффектов in vivo эти соединения также можно вводить сами по себе или с помощью агентов, способствующих доставке, таких как, например, липосомы, с помощью конъюгации со специфичной функциональной группой и т.п., хотя в данной области техники известно много разных вариантов, которые применяют по-разному в зависимости от локализации желаемой мишени в организме.
Альтернативно, молекулы миРНК различных аспектов настоящего изобретения можно экспрессировать в клетках с эукариотических промоторов. Рекомбинантные векторы, способные экспрессировать молекулы миРНК можно доставлять в клетки-мишени, где они могут сохраняться. Альтернативно, можно применять векторы, обеспечивающие транзиентную экспрессию молекул нуклеиновых кислот. Такие векторы по необходимости можно вводить повторно. После экспрессии молекула миРНК взаимодействует с целевой мРНК и запускает ответ по механизму РНК-интерференции. Молекулы миРНК, образующиеся таким способом, часто называют кшРНК (короткими шпилечными РНК), а их смысловая и антисмысловая цепи соединены небольшой петлей нуклеотидов. Доставка векторов, экспрессирующих молекулы миРНК, может быть системной, такой как внутривенное или внутримышечное введение, посредством введения в извлеченные из организма клетки-мишени и последующим введением обратно в организм или с помощью любых других способов, обеспечивающих введение в желаемую целевую клетку.
Следующий аспект настоящего изобретения относится к применению миРНК, действующей по меньшей мере на одну последовательность, выбираемую из группы, состоящей из SEQ ID NO. 1 - SEQ ID NO. 111, в препарате лекарственного средства для применения в способе лечения состояния глаза, характеризующегося повышенной экспрессией и/или активностью ORAI1. Предпочтительнее, чтобы указанную по меньшей мере одну последовательность выбирали из группы, состоящей из SEQ ID NO. 1 - SEQ ID NO. 8, и еще предпочтительнее, чтобы указанная по меньшей мере одна последовательность состояла из SEQ ID NO. 1. Способ включает ингибирование экспрессии ORAI1 у пациента. Термин «ингибирование» применяют для обозначения снижения или подавления экспрессии или активности. Предпочтительно, чтобы состояние глаза было аллергическим заболеванием глаз и/или конъюнктивитом. В одном варианте осуществления настоящего изобретения состояние глаза выбирают из группы, состоящей из сезонного аллергического конъюнктивита, круглогодичного аллергического конъюнктивита, весеннего кератоконъюнктивита, атопического кератоконъюнктивита, конъюнктивита с гиперплазией сосочков, синдрома сухости глаз и их комбинаций.
Также представлен способ лечения состояния глаза, характеризующегося повышенной экспрессией и/или активностью ORAI1. Способ включает ингибирование экспрессии ORAI1 у пациента. Способ может включать введение миРНК, действующей по меньшей мере на одну последовательность, выбираемую из группы, состоящей из SEQ ID NO. 1 - SEQ ID NO. 111. Предпочтительнее, чтобы указанную по меньшей мере одну последовательность выбирали из группы, состоящей из SEQ ID NO. 1 - SEQ ID NO. 8, и еще предпочтительнее, чтобы указанная по меньшей мере одна последовательность состояла из SEQ ID NO. 1.
В некоторых странах комбинация хронического аллергического конъюнктивита и синдрома сухости глаз является достаточно распространенной. Растущая проблема сухости глаз обусловлена распространенным искусственным кондиционированием воздуха, загрязняющими веществами в помещении и на улице и другими неизвестными причинами. Пациенты с синдромом сухости глаз большей степени подвержены аллергическим заболеваниям глаз, поскольку слезная пленка является важным барьером, препятствующим контактированию аллергенов с тучными клетками.
Ожидают, что терапевтическая обработка миРНК, действующими на мРНК ORAI1 будет обладать преимуществами по сравнению с малыми молекулами глазных капель для местного применения, увеличивая продолжительность эффекта, что позволяет уменьшить частоту дозирования и улучшить соблюдение пациентом схемы лечения. Это особенно важно в таких случаях, как аллергические заболевания глаз и/или конъюнктивит, включающий, но не ограничивающийся весенним кератоконъюнктивитом, атопическим кератоконъюнктивитом и конъюнктивитом с гиперплазией сосочков, поскольку часто они являются хроническими состояниями.
Принимая во внимание получение такого лекарственного средства, миРНК различных аспектов настоящего изобретения можно выпускать в виде фармацевтической композиции. Предпочтительно, чтобы композиции и составы указанных миРНК можно было вводить местно в заданный орган. В еще более предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения их можно составлять в форме для местного применения в глазах, предпочтительно, на поверхности роговицы глаза. Применение на поверхности роговицы глаза может быть, например, в форме глазных капель, геля, лосьона, крема или офтальмологических вкладок. Другие формы введения в глаз могут включать инъекцию в глаз.
Следующий предпочтительный вариант осуществления различных аспектов настоящего изобретения относится к миРНК, специфично действующей по меньшей мере на одну последовательность, выбираемую из группы, состоящей из SEQ ID NO. 1 - SEQ ID NO. 111, как описано в предыдущих параграфах, для применения в качестве лекарственного средства для лечения состояния глаза, характеризующегося повышенной экспрессией и/или активностью ORAI1. Предпочтительнее, чтобы указанную по меньшей одну последовательность выбирали из группы, состоящей из SEQ ID NO. 1 - SEQ ID NO. 8, и еще предпочтительнее, чтобы указанная по меньшей мере одна последовательность состояла из SEQ ID NO. 1. Как описано выше, это может быть миРНК, содержащая или состоящая из 19-нуклеотидной двухцепочечной структуры, действующая по меньшей мере на одну последовательность, выбираемую из группы, состоящей из SEQ ID NO. 1 - SEQ ID NO. 111. Эта мРНК может быть с тупыми концами. Предпочтительно, чтобы миРНК содержала или состояла из по меньшей мере одной последовательности, выбираемой из группы, состоящей из SEQ ID NO. 112 - SEQ ID NO. 229. Другие миРНК для применения в соответствии с настоящим изобретением содержат или состоят из по меньшей мере одной последовательности, выбираемой из группы, состоящей из SEQ ID NO. 223 - SEQ ID NO. 229.
В контексте настоящего изобретения для «специфичного действия» на последовательность миРНК настоящего изобретения, предпочтительно, содержит по меньшей мере такую же затравочную последовательность. Таким образом, любая последовательность в соответствии с настоящим изобретением, которая специфично действует по меньшей мере на одну последовательность, выбираемую из группы, состоящей из SEQ ID NO. 1 - SEQ ID NO. 111, предпочтительно, является идентичной в положениях 2-8 антисмысловой цепи. Предпочтительнее, чтобы указанную по меньшей мере одну последовательность выбирали из группы, состоящей из SEQ ID NO. 1 - SEQ ID NO. 8, и еще предпочтительнее, чтобы указанная по меньшей мере одна последовательность состояла из SEQ ID NO. 1.
Независимо от изложенного выше миРНК различных аспектов настоящего изобретения можно применять для подавления экспрессии ORAI1 в тканях, отличных от глаза. Следовательно, указанные миРНК необходимо составлять в соответствующей форме.
Например, молекула миРНК может содержать инертный носитель для доставки, включая липосомы, для введения субъекту. Носители, растворители и их соли могут присутствовать в виде фармацевтически приемлемых составов. Молекулы нуклеиновой кислоты можно вводить в клетки с помощью ряда способов, известных специалистам в данной области техники, включая, но не ограничиваясь энкапсулированием в липосомы, ионофорезом или включением в состав других инертных носителей, таких как биодеградируемые полимеры, гидрогели, циклодекстриновые поликислоты (сополимер молочной и гликолевой кислот (PLGA, poly (lactic-co-glycolic) acid)) и PLCA микросферы, биодеградируемые нанокапсулы и биоадгезивные микросферы, или посредством белковых векторов. В одном варианте осуществления настоящего изобретения молекулу миРНК доставляют с помощью клеточно-специфичного носителя миРНК, сочетающего компоненты вируса гепатита В и липосомы. В другом варианте осуществления настоящего изобретения молекулы нуклеиновых кислот настоящего изобретения также можно составлять в форме или в комплексе с полиэтиленимином и его производными, такими как полиэтиленимин-полиэтиленгликоль-N-ацетилгалактозаминовых (PEI-PEG-GAL, polyethyleneimine-polyethyleneglycol-N-acetylgalactosamine) или полиэтиленимин-полиэтиленгликоль-три-N-ацетилгалактозаминовых (PEI-PEG-triGAL, polyethyleneimine-polyethyleneglycol-tri-N-acetylgalactosamine) производных. Предпочтительными композициями настоящего изобретения являются водные растворы, в частности солевые растворы, такие как фосфатно-солевой буфер с диапазоном pH от приблизительно 7,0 до приблизительно 7,4, предпочтительно, с pH равным 7,2±0,5.
Молекула миРНК настоящего изобретения может образовывать комплекс с разрушающими мембрану агентами и/или молекулами катионных липидов или вспомогательных липидов.
Системы доставки, которые можно применять с настоящим изобретением включают, например, водные и неводные гели, крема, гетерогенные эмульсии, микроэмульсии, липосомы, мази, водные и неводные растворы, лосьоны, аэрозоли, углеводородные основы и порошки, и могут содержать эксципиенты, такие как солюбилизаторы, усилители проницаемости (напр., жирные кислоты, сложные эфиры жирных кислот, жирные спирты и аминокислоты) и гидрофильные полимеры (напр., поликарбофил и поливинилпиролидон). В одном варианте осуществления настоящего изобретения фармацевтически приемлемый носитель является липосомой или усилителем трансдермального проникновения.
Фармацевтический состав настоящего изобретения находится в форме, подходящей для введения, напр., системного или местного введения в клетку или в субъекта, включая, например, человека. Подходящие формы частично зависят от применения или способа введения, например, перорального, трансдермального или посредством инъекции. Другие факторы известны в данной области техники и включают такие особенности, как токсичность и формы, которые препятствуют проявлению эффекта композиции или состава.
Настоящее изобретение также включает композиции, полученные для хранения или введения, включающие фармацевтически эффективное количество заданных соединений в фармацевтически приемлемом носителе или растворителе. Приемлемые носители или растворители для терапевтического применения хорошо известны в фармацевтической области техники. Например, можно применять консерванты, стабилизаторы, красители и ароматизаторы. Такие агенты включают бензоат натрия, сорбиновую кислоту и сложные эфиры п-гидроксибензойной кислоты. Дополнительно, можно применять антиоксиданты и суспендирующие агенты.
Фармацевтически приемлемой дозой является доза, необходимая для предотвращения, ингибирования возникновения или для лечения (уменьшения симптома до некоторого уровня, предпочтительно, всех симптомов) болезненного состояния. Фармацевтически приемлемая доза, как правило, зависит от типа заболевания, применяемой композиции, способа введения, типа млекопитающего, подлежащего лечению, физических характеристик конкретного рассматриваемого млекопитающего, сопутствующей терапии и других факторов, известных специалистам в данной области техники.
Терапевтически эффективное количество также может обозначать количество миРНК, достаточное для задержки или минимизации начала окулярного нарушения, ассоциированного с аллергическим заболеванием глаз. Терапевтически эффективное количество также может обозначать количество терапевтического агента, оказывающее терапевтический эффект при лечении или контроле окулярного нарушения, ассоциированного с аллергическим заболеванием глаз. Также терапевтически эффективное количество в отношении миРНК настоящего изобретения обозначает количество только терапевтического агента или терапевтического агента в комбинации с другими лекарственными средствами, оказывающими терапевтический эффект при лечении или контроле окулярного нарушения, ассоциированного с аллергическим заболеванием глаз. При применении в связи с количеством миРНК настоящего изобретения данный термин может охватывать количество, которое улучшает терапию в целом, снижает или предотвращает нежелательные эффекты или увеличивает терапевтическую эффективность или оказывает синергическое действие с другим терапевтическим агентом.
Терапевтическим эффектом при лечении или контроле окулярного нарушения, такого как аллергическое заболевание глаз, является продолжительное уменьшение симптомов аллергии. Учитывая, что миРНК снизит уровень ORAI1 в клетке, после прекращения лечения клетке придется заново синтезировать новые белки. Таким образом, терапия на основе миРНК будет оказывать более продолжительное действие. Это считают существенным повышением терапевтической эффективности.
Дополнительным преимуществом применения миРНК является минимальная вероятность развития побочных эффектов или острой токсичности из-за присутствия в системном кровотоке, которые часто ассоциируются с различным лечением на основе глазных капель. Это обусловлено тем фактом, что при попадании в кровоток соединение быстро разрушается РНКазами, присутствующими в крови.
Вместе с тем, возможность выпуска молекул миРНК в однодозовых флаконах позволяет воздержаться от добавления в состав противомикробных консервантов. Консерванты присутствуют в большинстве составов, представленных на рынке на сегодняшний день. Эти консерванты могут вызвать развитие устойчивости у некоторых пациентов, что вынудит остановить лечение. Обе проблемы особенно важны, принимая во внимание тот факт, что состояния, такие как аллергические заболевания глаз и/или конъюнктивит, включающие, но не ограничивающиеся весенним кератоконъюнктивитом, атопическим кератоконъюнктивитом и конъюнктивитом с гиперплазией сосочков, часто являются хроническими, а значит, таковым является и лечение.
Одним из предпочтительных способов введения является местное, посредством инстилляции напрямую в глаз, предпочтительно, с помощью глазных капель. Как описано выше, терапевтическая обработка миРНК, действующими на мРНК ORAI1, как ожидают, будет обладать преимуществом по сравнению с малыми молекулами в глазных каплях для местного применения, увеличивая продолжительность эффекта, что позволяет уменьшить частоту дозирования и улучшить соблюдение пациентом схемы лечения.
Однако, как объяснено выше, также можно применять другие способы введения, помимо прямого введения в глаз. Точная дозировка и схема введения состава также будут зависеть от способа введения. Специалисту в данной области техники ясно, что точная дозировка и схема введения также зависят от степени тяжести заболевания, и подбирать их следует на основании клинической оценки практикующего врача и состояния каждого пациента. Также понятно, что конкретная величина дозы для любого конкретного субъекта зависит от ряда факторов, включая активность конкретного применяемого соединения, возраст, вес тела, общее состояние здоровья, пол, диету, время введения, способ введения и уровень выведения, комбинацию лекарственных средств и степень тяжести конкретного заболевания, подлежащего лечению.
Составы миРНК настоящего изобретения, описанные в настоящей заявке, можно вводить в дозированных лекарственных формах, содержащих стандартные нетоксичные фармацевтически приемлемые носители, адъюванты и/или инертные носители. Составы могут быть в форме, подходящей для перорального применения, например, в виде таблеток, пастилок, таблеток для рассасывания, водных или масляных суспензий, растворимых порошков или гранул, эмульсии, твердых или мягких капсул, сиропов или эликсиров. Композиции, предназначенные для перорального применения, можно получить в соответствии с любым известным в данной области техники способом получения фармацевтических композиций, и такие композиции могут содержать один или несколько подсластителей, ароматизаторов, красителей или консервантов для получения фармацевтически привлекательных и приятных на вкус препаратов. Таблетки содержат активный ингредиент в смеси с нетоксичными фармацевтически приемлемыми эксципиентами, подходящими для получения таблеток.
Такими эксципиентами могут быть, например, инертные растворители, такие как карбонат кальция, карбонат натрия, лактоза, фосфат кальция или фосфат натрия; гранулирующие и дезинтегрирующие агенты, такие как, кукурузный крахмал или альгиновая кислота; связывающие агенты, например, крахмал, желатин или камедь; и смазывающими агентами, например, стеаратом магния, стеариновой кислотой или тальком. Таблетки могут быть без оболочки или покрытые оболочкой с помощью известных техник. В некоторых случаях такие покрытия можно получить с помощью известных техник для задержки дезинтеграции и адсорбции в пищеварительном тракте, что обеспечивает более продолжительное действие. Например, можно применять замедляющие высвобождение материалы, такие как глицерилмоностеарат или глицерилдистеарат.
Составы для перорального применения также можно представлять в виде твердых желатиновых капсул, где активный ингредиент смешан с инертным твердым разбавителем, например, карбонатом кальция, фосфатом кальция или каолином, или в виде твердых желатиновых капсул, где активный ингредиент смешан с водной или масляной средой, например, с арахисовым маслом, парафиновым маслом или оливковым маслом.
Водные суспензии содержат активные вещества в смеси с эксципиентами, подходящими для получения водных суспензий. Такие эксципиенты являются суспендирующими агентами, например, карбоксиметилцеллюлозой натрия, метилцеллюлозой, гидропропилметилцеллюлозой, альгинатом натрия, поливинипирролидоном, трагакантовой камедью и аравийской камедью; диспергирующие или увлажняющие агенты могут быть встречающимся в природе фосфатидом, например, лецитином, или продуктами конденсации алкиленоксида с жирными кислотами, например, полиоксиэтиленстеаратом, или продуктами конденсации этиленоксида с алифатическими спиртами с длинной цепью., например, гептадекаэтиленоксиэтанолом, или продуктами конденсации этиленоксида с неполными эфирами, полученными из жирных кислот и гексита, такими как полиоксиэтиленсорбитолмоноолеат, или продуктами конденсации этиленоксида с неполными эфирами, полученными из жирных кислот и ангидридов гексита, например, полиэтиленсорбитанмоноолеатом. Водные суспензии могут также содержать один или несколько консервантов, например, этил или н-пропил п-гидроксибензоат, один или несколько красителей, один или несколько ароматизаторов и один или несколько подсластителей, таких как сахароза или сахарин.
Масляные суспензии можно выпускать, суспендируя активные ингредиенты в растительном масле, например, в арахисовом масле, оливковом масле, кунжутном масле или кокосовом масле, или в минеральном масле, таком как парафиновое масло. Масляные суспензии могут содержать загуститель, например, пчелиный воск, твердый парафин или цетиловый спирт. Подсластители и ароматизаторы можно добавлять для придания приятного вкуса пероральным препаратам. Эти композиции можно сохранить, добавляя антиоксидант, такой как аскорбиновая кислота.
Растворимые порошки и гранулы, подходящие для получения водной суспензии при добавлении воды, представляют активный ингредиент в смеси с диспергирующим или увлажняющим агентом, суспендирующим агентом и одним или несколькими консервантами. Примеры подходящих диспергирующих, увлажняющих агентов или суспендирующих агентов указаны выше. Также могут присутствовать дополнительные эксципиенты, например, подсластители, ароматизаторы и красители.
Фармацевтические композиции настоящего изобретения также могут быть в форме водомасляных эмульсий. Масляная фаза может быть растительным маслом или минеральным маслом или их смесью. Подходящие эмульгаторы могут быть встречающимися в природе камедями, например, аравийской камедью или трагакантовой камедью, встречающимися в природе фосфатидами, например, соевым лецитином и сложными или неполными эфирами, полученными из жирных кислот и гексита, ангидридами, например, сорбитанмоноолеатом, и продуктами конденсации указанных неполных эфиров с этиленоксидом, например, полиоксиэтиленсорбитанмоноолеатом. Эмульсии также могут содержать подсластители и ароматизаторы.
Сиропы и эликсиры можно составлять в форме с подсластителями, например, глицерином, пропиленгликолем, сорбитом, глюкозой или сахарозой. Такие составы также могут содержать смягчающее вещество, консервант, ароматизатор и краситель. Фармацевтические композиции или миРНК настоящего изобретения, описанные в настоящей заявке, могут быть в форме стерильной водной или масляной суспензии для инъекции.
Эту суспензию можно составлять в форме, соответствующей известному уровню техники, применяя подходящие диспергирующие или увлажняющие агенты и суспендирующие агенты, упомянутые выше.
Стерильный препарат для инъекции также может быть стерильным раствором или суспензией для инъекции в нетоксичном приемлемом для парентерального введения растворителе или разбавителе, например, в виде раствора в 1,3-бутандиоле. К приемлемым инертным носителям и растворителям, которые можно применять, относится вода, раствор Рингера и изотонический раствор хлорида натрия. Дополнительно, в качестве растворителя или суспендирующей среды традиционно применяют стерильные нелетучие масла. Для этой цели можно применять любое обычное нелетучее масло, включая моно- или диглицериды. Дополнительно, при получении препаратов для инъекции находят применение жирным кислотам, таким как олеиновая кислота.
В предпочтительных вариантах осуществления настоящего изобретения композиции настоящего изобретения составляют в форме раствора, предпочтительно буферного солевого раствора, такого как фосфатно-солевой буфер, или геля для местного введения в глаз, такого как, например, в форме глазных капель. В таких вариантах осуществления настоящего изобретения составы могут быть катионными эмульсиями и/или могут содержать биополимеры, включая, но не ограничиваясь сополимером молочной и гликолевой кислот, карбополом, гиалуроновой кислотой и полиакриловой кислотой.
Молекулы нуклеиновых кислот настоящего изобретения также можно вводить в форме суппозиторий, напр., для ректального введения лекарственного препарата. Эти композиции можно получить, смешивая лекарственное средство с подходящим не вызывающим раздражение эксципиентом, который находится в твердом состоянии при обычной температуре и в жидком состоянии при ректальной температуре и, таким образом, растворяется в прямой кишке, высвобождая лекарственное средство. Такие материалы включают масло какао и полиэтиленгликоли.
Молекулы нуклеиновых кислот настоящего изобретения можно вводить парентерально в стерильной среде. Лекарственное средство в зависимости от применяемого инертного носителя и концентрации можно либо суспендировать, либо растворять в инертном носителе. Эффективно можно растворять в инертном носителе адъюванты, такие как местные анестетики, консерванты и буферные агенты.
Таким образом следующий предпочтительный вариант осуществления настоящего изобретения относится к фармацевтической композиции, где указанная композиция содержит по меньшей мере миРНК, действующую по меньшей мере на одну последовательность, выбираемую из группы, состоящей из SEQ ID NO. 1 - SEQ ID NO. 111, как описано в предыдущих параграфах. Предпочтительнее, чтобы указанную по меньшей мере одну последовательность выбирали из группы, состоящей из SEQ ID NO. 1 - SEQ ID NO. 8, и еще предпочтительнее, чтобы указанная по меньшей мере одна последовательность состояла из SEQ ID NO. 1.
Молекулы нуклеиновых кислот настоящего изобретения также можно вводить субъекту в комбинации с другими терапевтическими соединениями для усиления общего терапевтического эффекта. Применение множества соединений для лечения по показаниям может усилить положительные эффекты на фоне уменьшения побочных эффектов.
Как применяют в настоящей заявке, термин «аллергическое заболевание глаз» обозначает аллергическое нарушение окулярной поверхности, вызванное повышенной экспрессией и/или активностью ORAI1. Его также можно называть аллергическим конъюнктивитом. Аллергическое заболевание глаз включает ряд патологических состояний, включая, но не ограничиваясь сезонным аллергическим конъюнктивитом, круглогодичным аллергическим конъюнктивитом, весенним кератоконъюнктивитом, атопическим кератоконъюнктивитом и конъюнктивитом с гиперплазией сосочков.
Как применяют в настоящей заявке, термин «конъюнктивит» обозначает воспаление конъюнктивы. В Индии его также называют «розовый глаз» или «глаз Мадраса». Обычно конъюнктивит вызывает инфекция (обычно вирусная, но иногда бактериальная) или аллергическая реакция.
«Клинические симптомы» аллергического заболевания глаз включают, но не ограничиваются окулярным зудом, покраснением глаз, отеком века, отеком конъюнктивы, слезоточивостью и назальным воспалением, заложенностью носа, насморком, назальным пруритом и ушным/небным пруритом и чиханием. Предпочтительно, чтобы настоящее изобретение лечило или предотвращало по меньшей мере два клинических симптома, предпочтительнее, по меньшей мере три, еще предпочтительнее более четырех.
Термин «пациент», как применяют в настоящей заявке, обозначает животных, включая млекопитающих, предпочтительно, человека.
Как применяют в настоящей заявке, термин «аллерген» обозначает любое антигенное вещество в окружающей среде, способное вызвать немедленное развитие гиперчувствительности (аллергии). Список известных аллергенов включает пыльцу растений, споры плесневых грибков, шерсть животных, домашняя пыль, пищевые продукты, перья, краски, мыла, детергенты, косметические средства, пластик и лекарственные средства. Аллергены могут попадать в организм при вдыхании, глотании, прикосновении или инъекции. Аллергены из воздуха являются аллергенами, достаточно легкими, чтобы переноситься потоком воздуха, например, пыльцой или спорами, но не ограничиваясь ими.
Под термином «аллергический конъюнктивит» в настоящем изобретении понимают воспаление конъюнктивы, вызванное аллергической реакцией. Конъюнктива является тонкой мембраной, покрывающей глаз. При раздражении конъюнктивы аллергеном обычно возникающие симптомы включают покраснение (в основном из-за вазодилатации малых периферических кровеносных сосудов), окулярный зуд, отек века, усиленную слезоточивость, светобоязнь, водянистое выделение из глаз и ощущение присутствия инородного тела (болезненное). Как правило, у пациентов усиливаются симптомы в теплую и сухую погоду, в то время как более низкая температура и дождь уменьшают симптомы.
Под термином «блефарит» в настоящем изобретении понимают хроническое воспаление века.
Под термином «блефароконъюнктивит» в настоящем изобретении понимают одновременное возникновение двух разных состояний глаза: блефарита и конъюнктивита. Блефарит затрагивает внешнюю часть века, в то время как конъюнктивит развивается в конъюнктиве.
Под термином «кератоконъюнктивит» в настоящем изобретении понимают воспаление роговицы и конъюнктивы.
Настоящее изобретение далее описывают следующие не ограничивающие примеры.
ПРИМЕРЫ
0. Материалы
Зонды для мышиного ORAI1: Taqman исследование экспрессии гена Mm00774349_ml.
Зонды для мышиного TLSP: Taqman исследование экспрессии гена Mm01157588_ml.
Зонды для мышиного TNFSR9: Taqman исследование экспрессии гена Mm00441899_ml.
18S эндогенный контроль: Taqman исследование экспрессии гена Hs99999901_sl.
Обратная транскриптаза Multiscribe 50 ед./мл (Applied Biosystems P/N 4311235).
Ингибитор РНКазы 20 ед./мл (Applied Biosystems P/N N8080119).
Универсальная 2× реакционная смесь TaqMan Master Mix.
Набор для нерадиоактивного исследования клеточной пролиферации (Promega, Mannheim, Germany).
Человеческие тучные клетки (HMC-1).
Кальциевая соль иономицина 1 мМ в ДМСО (Sigma Life Science
Каталожный номер 13909-lml).
Набор для детектирования с Аннексином V (Annexin-V detection kit) Life Technologies (Каталожный номер: V13241).
1. In vitro исследование
1.1 Уровни экспрессии ORAI1 после трансфекции миРНК настоящего изобретения в различных клеточных линиях.
Для демонстрации эффекта подавления экспрессии с помощью миРНК настоящего изобретения проводили измерение уровня экспрессии ORAI1 in vitro после трансфекции рядом миРНК настоящего изобретения в разных клеточных линиях. Человеческие клетки A204 и мышиные клетки C2C12 и J744A.1 трансфицировали 100 нМ SEQ ID NO. 112, 19 п.о. структурой дцРНК с тупыми концами, с помощью Transit TKO и Lipofectamine 2000 в качестве трансфектанта, соответственно. Все трансфекции проводили, следуя стандартным инструкциям производителя. В той же трансфекции рандомизированную последовательность миРНК применяли в качестве контроля специфичности интерференции. Осадки клеток собирали через 24, 48 и 72 часа после эксперимента по трансфекции и обрабатывали для оценки возможных вариаций уровней мРНК в результате действия миРНК. Количественное определение уровней РНК проводили с помощью ПЦР в режиме реального времени, применяя способ относительной количественной оценки, способ сравнения пороговых циклов (2-ΔΔ CT) (Livak and Schmittgen, 2001). Все эксперименты с количественной ПЦР в режиме реального времени проводили в трех повторах и повторяли в трех независимых экспериментах. Рассчитывали среднее и стандартное отклонение. Как показано на Фигуре 4, SEQ ID NO. 112 существенно снижала уровни мРНК ORAI1 приблизительно на 70-80% в клетках A204 и в клетках C2C12 и на 40% в J744A.1. SEQ ID NO. 113, SEQ ID NO. 115, SEQ ID NO. 116, SEQ ID NO. 117, SEQ ID NO. 118 и SEQ ID NO. 119, 19 п.о. структуры дцРНК с тупыми концами, также существенно снижали уровни экспрессии мРНК ORAI1 приблизительно на 40-80% (Фигура 5).
1.2 Жизнеспособность клеток различных клеточных линий после трансфекции миРНК настоящего изобретения.
Для демонстрации жизнеспособности клеток в присутствии миРНК настоящего изобретения измеряли уровни токсичности in vitro после трансфекции рядом миРНК настоящего изобретения в разных клеточных линиях. Человеческие клетки A204 и мышиные клетки C2C12 и J744A.1 трансфицировали 100 нМ SEQ ID NO. 112 (19 п.о. структурой дцРНК с тупыми концами) с помощью Transit TKO и Lipofectamine 2000 в качестве трансфектанта, соответственно. Все трансфекции проводили, следуя стандартным инструкциям производителя. В той же трансфекции рандомизированную последовательность миРНК применяли в качестве контроля специфичности интерференции. Осадки клеток собирали через 24, 48 и 72 часа после эксперимента по трансфекции и обрабатывали для оценки возможных вариаций уровня жизнеспособности клеток в результате трансфекции миРНК. Жизнеспособность клеток оценивали с помощью набора для нерадиоактивного исследования клеточной пролиферации CellTiter 96® (Promega). Этот способ основан на способности живых клеток (дегидрогеназных ферментов) восстанавливать соединение MTS тетразолиум (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium, http://www.multitran.ru/c/m.exe?t=6555991_2_13-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-5-(3-карбоксиметоксифенил)-2-4-сульфофенилтетразолиум) до формазана, по данным измерения величины поглощения при 490 нм. Рассчитывали среднее и стандартное отклонение. Как показывает Фигура 6, не было обнаружено изменений жизнеспособности клеток для SEQ ID NO. 112. Таким образом, SEQ ID NO. 112 является нетоксичной и безопасной.
1.3 Уровни экспрессии ORAI1 после трансфекции немодифицированными и химически модифицированными миРНК настоящего изобретения в различных клеточных линиях.
Для улучшения стабильности миРНК настоящего изобретения и для обеспечения отсутствия иммуногенной активации вносили разные оптимизирующие миРНК химические модификации в каноническую последовательность SEQ ID NO. 112 (19 п.о. структурой дцРНК с тупыми концами); таким образом получали новые химически модифицированные соединения (SEQ ID NO. 223, SEQ ID NO. 224, SEQ ID NO. 225, SEQ ID NO. 226, SEQ ID NO. 227, SEQ ID NO. 228 и SEQ ID NO. 229) и трансфицировали их в человеческие и мышиные клетки, чтобы подтвердить их способность понижать уровень мРНК ORAI1. Химические модификации подробно описаны на Фигуре 3. Человеческие клетки A204 и мышиные клетки C2C12 и J744A.1 трансфицировали 100 нМ SEQ ID NO. 112, SEQ ID NO. 223, SEQ ID NO. 224, SEQ ID NO. 225, SEQ ID NO. 226, SEQ ID NO. 227, SEQ ID NO. 228 или SEQ ID NO. 229 (все эти структуры соответствуют 19 п.о. структуре дцРНК с тупыми концами) с помощью Transit TKO и Lipofectamine 2000 в качестве трансфектанта, соответственно. Все трансфекции проводили, следуя стандартным инструкциям производителя. В той же трансфекции рандомизированную последовательность миРНК применяли в качестве контроля специфичности интерференции. Осадки клеток собирали через 24, 48 и 72 часа после эксперимента по трансфекции и обрабатывали для оценки возможных вариаций уровня мРНК в результате обработки миРНК. Количественное определение уровней РНК проводили с помощью ПЦР в режиме реального времени, применяя способ относительной количественной оценки, способ сравнения пороговых циклов (2-ΔΔ CT) (Livak and Schmittgen, 2001). Все эксперименты с количественной ПЦР в режиме реального времени проводили в трех повторах и повторяли в трех независимых экспериментах. Рассчитывали среднее и стандартное отклонение. Как показано на Фигуре 7 и Фигуре 8 модифицированные миРНК демонстрировали высокую эффективность, сравнимую с SEQ ID NO. 112, как в человеческих, так и в мышиных клеточных линиях. Таким образом, химически модифицированные продукты SEQ ID NO. 223, SEQ ID NO. 224, SEQ ID NO. 225, SEQ ID NO. 226, SEQ ID NO. 227, SEQ ID NO. 228 и SEQ ID NO. 229 снижали уровни мРНК ORAI1 на 50% - 80%.
1.4 Дозозависимый эффект SEQ ID NO. 112 и SEQ ID NO. 227 в человеческих и мышиных клетках.
Человеческие клетки A204 и мышиные клетки C2C12 трансфицировали возрастающими дозами SEQ ID NO. 112 (19 п.о. структурой дцРНК с тупыми концами, SYL116011) и SEQ ID NO. 227 (19 п.о. структурой дцРНК с тупыми концами, SYL116011v8) (от 0,001 до 100 нМ) с помощью Transit TKO и Lipofectamine 2000 в качестве трансфектанта, соответственно. Все трансфекции проводили, соблюдая стандартные условия производителя. В той же трансфекции рандомизированную последовательность миРНК применяли в качестве контроля специфичности интерференции. Собирали осадки клеток и обрабатывали для оценки возможных вариаций уровня мРНК в результате действия миРНК. Количественное определение уровней РНК проводили с помощью ПЦР в режиме реального времени, применяя способ относительной количественной оценки, способ сравнения пороговых циклов (2-ΔΔ CT) (Livak and Schmittgen, 2001). Все эксперименты с количественной ПЦР в режиме реального времени проводили в трех повторах и повторяли в трех независимых экспериментах. Рассчитывали среднее и стандартную ошибку среднего. Как показано на Фигуре 9 существенное снижение уровней ORAI1 наблюдали в человеческих клетках при дозе 0,5 нМ. Наибольший эффект наблюдали в ответ на дозу 100 нМ как в случае SEQ ID NO. 112, так и SEQ ID NO. 227. Небольшие различия между SEQ ID NO. 112 и SEQ ID NO. 227 наблюдали при концентрациях от 10 до 50 нМ. SEQ ID NO. 227 снижала уровень мРНК ORAI1 на 60-80%, в то время как SEQ ID NO. 112 снижала уровень мРНК ORAI1 на 40-60%. Различий между концентрациями от 0,05 до 0,001 нМ не наблюдали.
Применяя эти данные, рассчитывали значение полумаксимальной ингибирующей концентрации (IC50, inhibitory concentration 50) равное 1,98 нМ для SEQ ID NO. 227 и 5,3 нМ для SEQ ID NO. 112.
Как показано на Фигуре 10, значительное снижение уровня ORAI1 также наблюдали в мышиных клетках C2C12 при дозе 2,5 нМ. Максимальный эффект наблюдали в ответ на дозу 50 нМ как SEQ ID NO. 112, так и SEQ ID NO. 227. Небольшие различия между SEQ ID NO. 112 и SEQ ID NO. 227 наблюдали при концентрациях от 5 до 100 нМ. Как SEQ ID NO. 112, так и SEQ ID NO. 227 снижали уровень мРНК ORAI1 на 70-80%. Различий между концентрациями от 0,1 до 0,001 нМ не наблюдали. Применяя эти данные, рассчитывали значение полумаксимальной ингибирующей концентрации (IC50, inhibitory concentration 50) равное 1,98 нМ для SEQ ID NO. 227 и 1,25 нМ для SEQ ID NO. 112.
1.5 Экспрессия ORAI1 и его паралогов ORAI2 и ORAI3 после трансфекции SEQ ID NO. 112 и SEQ ID NO. 227.
Чтобы продемонстрировать специфичный эффект подавления экспрессии миРНК настоящего изобретения проводили in vitro измерения уровня экспрессии ORAI1, ORAI2 и ORAI3 после трансфекции рядом миРНК настоящего изобретения в различных клеточных линиях. Исследовали эффект SEQ ID NO. 112 и SEQ ID NO. 227 на рецепторные каналы семейства ORAI, чтобы проанализировать их эффект на белки, структурно и функционально родственные каналу ORAI1. Уровни мРНК ORAI1, ORAI2 и ORAI3 оценивали в человеческих клетках A204 и в мышиных клетках C2C12 после обработки SEQ ID NO. 112 и SEQ ID NO. 227. Человеческие клетки A204 и мышиные клетки C2C12 трансфицировали 100 нМ SEQ ID NO 112 и SEQ ID NO 227 с помощью Transit TKO и Lipofectamine 2000 в качестве трансфектанта, соответственно. Все трансфекции проводили, соблюдая стандартные условия производителя. В той же трансфекции рандомизированную последовательность миРНК применяли в качестве контроля специфичности интерференции. Собирали осадки клеток через 24, 48 и 72 часа после эксперимента по трансфекции и обрабатывали для оценки возможных вариаций уровня мРНК в результате действия миРНК. Фигура 11 и Фигура 12 показывают, что SEQ ID NO. 112 и SEQ ID NO. 227 были способны селективно снижать уровни мРНК ORAI1, приблизительно на 70-80% в человеческих клетках, не оказывая существенного влияния на уровни мРНК ORAI2 или ORAI3 10 (Фигура 11), и на 60-70% в мышиных клетках (Фигура 12).
1.6 Проявление возможных нецелевых эффектов после трансфекции SEQ ID NO. 112 (SYL116011) в человеческих клетках.
Чтобы продемонстрировать специфичный эффект подавления экспрессии с помощью миРНК настоящего изобретения в отношении нежелательных целей, проводили in silico определение нецелевых эффектов SEQ ID NO. 112 в человеческих клеточных линиях. Измеряли уровни экспрессии MSLN и OLFM12A после трансфекции рядом миРНК настоящего изобретения в человеческих клеточных линиях. Анализировали эффект SEQ ID NO. 112 в отношении экспрессии генов MSLN и OLFM12A. Уровень мРНК MSLN и OLFM12A оценивали в человеческих клетках A204 после обработки 100 нМ SEQ ID NO. 112 с помощью Transit TKO в качестве трансфектанта. Все трансфекции проводили, соблюдая стандартные условия производителя, с положительным и отрицательным контролем. В той же трансфекции рандомизированную последовательность миРНК применяли в качестве контроля специфичности интерференции. Собирали осадки клеток через 24, 48 и 72 часа после эксперимента по трансфекции и обрабатывали для оценки возможных вариаций возможного нецелевого действия на уровни мРНК в результате действия SEQ ID NO. 112. Фигура 13 показывает, что SEQ ID NO. 112 не снижала уровень возможных нецелевых эффектов.
1.7 Уровень экспрессии ORAI1 после трансфекции SEQ ID NO. 112 в крысиных клеточных линиях
Чтобы продемонстрировать специфичный эффект подавления экспрессии SEQ ID NO. 112, проводили in vitro определение уровня экспрессии ORAI1 после трансфекции рядом миРНК настоящего изобретения в различных клеточных линиях. Крысиные клетки JTC-19 и C6 трансфицировали 100 нМ SEQ ID NO. 112 с помощью Transit IT2020 и Lipofectamine 2000 в качестве трансфектанта, соответственно. Все трансфекции проводили, соблюдая стандартные условия производителя, с отрицательным контролем. В той же трансфекции рандомизированную последовательность миРНК применяли в качестве контроля специфичности интерференции. Собирали осадки клеток через 24, 48 и 72 часа после эксперимента по трансфекции и обрабатывали для оценки возможных вариаций уровня мРНК в результате действия миРНК. Количественное определение уровней РНК проводили с помощью ПЦР в режиме реального времени, применяя способ относительной количественной оценки, способ сравнения пороговых циклов (2-ΔΔ CT) (Livak and Schmittgen, 2001). Все эксперименты с количественной ПЦР в режиме реального времени проводили в трех повторах и повторяли в трех независимых экспериментах. Рассчитывали среднее и стандартную ошибку среднего. Как показано на Фигуре 14 и на Фигуре 15, SEQ ID NO. 112 существенно снижала уровень мРНК ORAI1, приблизительно на 70% в клетках JTC-19 и на 40-70% в клетках C6. В случае SEQ ID NO. 112 уровень мРНК ORAI1 не восстанавливался полностью через 72 часа в клетках JTC-19, но не в клетках C6 (Фигура 14 и Фигура 15).
1.8 Уровни экспрессии гена ORAI1 после трансфекции SEQ ID NO. 112 (SYL116011), SEQ ID NO. 233 (SYL116011v11) и SEQ ID NO. 235 (SYL116011vll).
Человеческие клетки A204, мышиные клетки C2C12 и крысиные клетки JTC-19 трансфицировали 100 нМ SEQ ID NO. 112 (19 п.о. структура дцРНК с тупыми концами, SYL116011) и SEQ ID NO. 233 (19 п.о. структура дцРНК с тупыми концами, SYL116011v11) и SEQ ID NO. 235 (19 п.о. структура дцРНК с тупыми концами, SYL116011v12) с помощью Transit TKO, Lipofectamine 2000 и Mirus IT2020 в качестве трансфектанта, соответственно. Все трансфекции проводили, соблюдая стандартные условия производителя. В той же трансфекции рандомизированную последовательность миРНК применяли в качестве контроля специфичности интерференции. Собирали осадки клеток и обрабатывали для оценки возможных вариаций уровня мРНК в результате действия миРНК. Количественное определение уровней РНК проводили с помощью ПЦР в режиме реального времени, применяя способ относительной количественной оценки, способ сравнения пороговых циклов (2-ΔΔ CT) (Livak and Schmittgen, 2001). Как показано на Фигуре 16, существенное снижение уровня ORAI1 наблюдали в человеческих, мышиных и крысиных клетках. Уровень мРНК ORAI1 снижался на 70-80% в человеческих клетках в случае SEQ ID NO. 112 (SYL116O11), SEQ ID NO. 233 (SYL116O11v11) и SEQ ID NO. 235 (SYL116O11v11), а в мышиных клетках уровень мРНК ORAI1 уменьшался на 50% в случае SEQ ID NO. 112 (SYL116011), SEQ ID NO. 233(SYL116011vll) и SEQ ID NO. 235 (SYL116011v11), в то время как в крысиных уровень мРНК ORAI1 уменьшался на 50% в случае SEQ ID NO. 112 (SYL116011) и на 95% и 99% в случае SEQ ID NO. 233 (SYL116011v11) и SEQ ID NO. 235 (SYL116011v11), соответственно.
2. Исследование in vivo
2.1 In vivo анализ эффективности SEQ ID NO. 112 (SYL116011) и SEQ ID NO. 227 (SYL116011v8) в мышиной модели аллергического заболевания глаз, индуцированного пыльцой амброзии.
Целью настоящего исследования был анализ эффективности миРНК настоящего изобретения, созданных для подавления экспрессии ORAI1, в частности, SEQ ID NO. 112 (19 п.о. структуры дцРНК с тупыми концами, SYL116011) и SEQ ID NO. 227 (19 п.о. структуры дцРНК с тупыми концами, SYL116011v8), с целью уменьшения симптомов, ассоциированных с аллергическими заболеваниями глаз, в мышиной модели аллергического заболевания глаз, индуцированного пыльцой амброзии.
Амброзия представляет собой цветковое растение рода Амброзия (Ambrosia) семейства Сложноцветные (Asteraceae). Пыльца амброзии является очень аллергенной, как правило, ее считают самым сильным передающимся по воздуху аллергеном среди всех видов передающейся по воздуху пыльцы и основной причиной развития поллиноза по всему миру. Национальный институт изучения санитарного состояния окружающей среды (National Institute of Environmental Health Science, NIEHS) указывает на то, что амброзия и другая сорная трава, такая как щавель курчавый, марь белая, амарант, подорожник, щавель малый и полынь, являются самыми обильными источниками аллергенов пыльцы во всем мире. Эту пыльцу часто применяют в животных моделях исследования аллергического конъюнктивита (Bacsi A et al., 2005).
Целью данного анализа было определить, уменьшает ли подавление экспрессии ORAI1 при закапывании в глаза соединений настоящего изобретения (SEQ ID NO. 112 (SYL116011) и SEQ ID NO. 227 (SYL116011v8)) симптомы, вызванные индуцированным пыльцой амброзии аллергическим заболеванием глаз у мышей.
Проанализировали, экспрессируется ли ORAI1 в глазу мыши и повышается ли его экспрессия в ответ на индуцированное пыльцой амброзии аллергическое заболевание глаз. Также оценили эффект подавления экспрессии ORAI1 с помощью местного нанесения SEQ ID NO. 112 (SYL116011) или SEQ ID NO. 227 (SYL116011v8) на аллергический ответ в указанной выше мышиной модели. С этой целью анализировали следующие параметры:
клинические признаки в ответ на индукцию аллергии: типичные окулярные признаки аллергического конъюнктивита включают зуд, отек век, отек конъюнктивы (хемоз) и выделение слизи. Слизь, связанная с аллергическими заболеваниями глаз, обильная, вязкая и даже клейкая. Изменения конъюнктивы обычно придают бульбарной конъюнктиве «стеклянный» вид, а конъюнктива века становится более розовой, нежели красной, часто «молочного» вида.
Количество местных тучных клеток: в течение нескольких минут после аллергического раздражения конъюнктивы происходит дегрануляция тучных клеток; высвобождение медиаторов воспаления привлекает больше тучных клеток, которые мигрируют из более глубоких слоев конъюнктивы.
Местная инфильтрация эозинофилов: инфильтрация воспалительных клеток в конъюнктиву происходит через несколько часов после контакта с аллергеном и является частью долгосрочного ответа на аллергены. Хотя в конъюнктиву мигрируют несколько типов клеток, основными являются эозинофилы.
Изменения экспрессии биомаркеров, связанных с аллергией:
Тимусный стромальный лимфопоэтин (TLSP, thymic stromal lymphopoietin) является цитокином эпителиального происхождения, который активирует дендритные клетки, связываясь со своим специфичным рецептором TLSPR (TLSP receptor). Связывание TLSP с TLSPR индуцирует воспалительный ответ типа Th2. TLSP образуют в основном эпителиальные клетки, но также его могут образовывать тучные клетки, и его уровень может быть повышен в местах аллергического воспаления (Zheng X. et al., 2010).
Член суперсемейства рецепторов фактора некроза опухоли 9 (Tnfrsf9, tumor necrosis factor receptor superfamily, member 9) или CD-137 является костимулятором Т-клеток памяти. Этот костимулятор экспрессируется в активированных Т-клетках, NK клетках (natural killer, натуральные киллеры) и дендритных клетках, в то время как его лиганд CD137L (CD137 ligand) обнаруживают на зрелых дендритных клетках, активированных макрофагах и активированных В-клетках. CD-137 костимулирует активацию и пролиферацию Т-клеток, увеличивает выживаемость активированных Т-клеток и подавляет CD4+ T-хелперы. Было показано, что при аллергическом воспалении CD-137 опосредует зависящие от IL-4 Th2-ответы, и его уровень повышен в эозинофилах пациентов с опосредованной IgE аллергической реакцией.
A. Способы
a.1 Характеристика тестовой системы
Таблица 1 Характеристика тестовой системы |
|
Вид: | мышь |
Линия: | BALB-C |
Пол: | самки |
Окрас: | белый |
Обоснование выбора вида/линии: | Ранее эту линию разработали как хорошую модель аллергического заболевания глаз (Bacsi A. et al 2005). |
Приблизительный возраст животных на момент начала исследования: | 8-10 недель |
Следующим преимуществом миРНК настоящего изобретения является то, что SEQ ID NO. 1 - SEQ ID NO. 8 соответствуют областям гена ORAI1, высоко консервативным среди последовательностей многих животных. Фактически, эти последовательности идентичны у человека и мыши, что делает эту животную модель особенно подходящей для исследования аллергических заболеваний глаз.
a.2 Индукция аллергии
Аллергический конъюнктивит индуцировали, иммунизируя животных смесью из 50 мкг пыльцы амброзии (Rw, ragweed) в 0,25 мл алюминиевых квасцов с помощью внутрибрюшинной инъекции в день 1. Раствор для иммунизации готовили непосредственно перед введением и на протяжении всего времени держали в защищенном от света месте. Через десять дней после иммунизации местно наносили 1,25 мг пыльцы Rw в виде глазных капель в каждый глаз. Проводили введение дозы в объеме 5 мкл/глаз. Эта процедура является адаптацией стандартного опубликованного ранее протокола, известного специалистам в данной области техники, и прошла проверку перед проведением оценки эффективности миРНК (Magone M. T. et al., 1998).
a.3 Введение тестируемого образца
Тестируемый образец вводили с помощью местного окулярного введения в оба глаза животных один раз в день на протяжении 5 дней, начиная с дня 6 (Фигура 4). Отдельной группе животных, служащей контролем, вводили инертный носитель (фосфатно-солевой буфер. Проводили введение дозы в объеме 5 мкл/глаз.
a.4 Клинические наблюдения и сбор образцов
Общее состояние здоровья животных контролировали ежедневно с момента первого введения до умерщвления. Мышей обследовали на предмет клинических признаков гиперчувствительности перед местной окулярной инстилляцией пыльцы и в разные временные точки вплоть до 24 ч после инстилляции пыльцы. Отек конъюнктивы и конъюнктивальную инъекцию, отек века, выделения из глаза и слезоточивость оценивали по шкале от 0 до 3. Клиническую оценку проводил наблюдатель, которому не были известны экспериментальные условия. Животных умерщвляли либо через 3, либо через 24 ч после индукции аллергии. Перед умерщвлением отбирали кровь для оценки присутствия IgE, IL-13, IL-10 и MCP-1 в плазме. После умерщвления извлекали глаза, селезенку и шейные лимфатические узлы и либо обрабатывали для последующего гистологического анализа, в дальнейшем сохраняли в виде РНК или обрабатывали для анализа уровня упомянутых выше цитокинов в конъюнктиве.
a.5 Гистопатология
Извлеченные глаза помещали в 10% формалин (1/20 объема) на 24 часа, затем формалин удаляли, несколько раз промывая 0,1 М фосфатным буфером и инкубировали в этом буфере на протяжении почти 24 ч. Образцы дегидратировали, инкубируя в возрастающих концентрациях этанола, а затем заключали в легкоплавкий парафин в гистопроцессоре (Leica TP 1020, каталожный номер - 0704 37101, Leica Microsystems, Nussloch, Germany). Готовили срезы образцов с помощью микротома для получения срезов толщиной 2 мкм, которые затем окрашивали либо толуидином синим для определения количества тучных клеток, либо гематоксилином-эозином для оценки инфильтрации эозинофилов.
a.6 Выделение РНК и обратная транскрипция
Общую РНК выделяли из цельных глаз, селезенки или лимфатических узлов с помощью набора для выделения РНК RNeasy (Invitrogen, CA, USA). 4 мкг общей РНК применяли для обратной транскрипции с помощью набора High-Capacity cDNA Archive kit (Applied Biosystems, Inc., Foster City, CA, USA) в соответствии с инструкциями производителя и IT-B-0003-01.
a.7 Количественная ПЦР
Количественную ПЦР проводили с применением системы детектирования Stepone plus (Applied Biosystems). 500 нанограмм каждого образца амплифицировали в универсальной 2× реакционной смеси TaqMan при следующих условиях: 95°C в течение 10 мин, затем 40 циклов (95°C в течение 15 с и 60°C в течение 1 мин). Все количественные ПЦР проводили в трех повторах и повторяли по меньшей мере в двух независимых экспериментах, всегда осуществляя контроль обратной транскрипции и контроль без матрицы. Уровни мРНК ORAI1, TLSP и Tnfrsf9 анализировали с помощью количественной ПЦР, применяя способ относительной количественной оценки ΔΔCT, применяя ген 18S в качестве внутреннего контроля (Livak K. J. and Schmittgen T. D., 2001).
a.8 Анализ IgE, IL-13, IL-10 и MCP-1 в плазме и конъюнктиве
Оценивали количество следующих цитокинов: IgE, IL-13, IL-10 и MCP-1 в плазме и конъюнктиве мышей с помощью следующих наборов в соответствии с инструкциями производителя.
B. Результаты
b.1 Экспрессия ORAI1 в глазах мышей и ее индукция в ответ на аллергическое заболевание глаз.
Экспрессию ORAI1 оценивали в глазах мышей в разные временные точки после индукции аллергии, как упомянуто в разделе «Способы». Фигура 17 показывает, что ORAI1 присутствует в глазу и что его экспрессия резко увеличивается в ответ на индукцию аллергии. Двукратное увеличение уровня мРНК ORAI1 наблюдали через 3-6 ч после введения пыльцы амброзии. Через 24 ч после индукции аллергии уровни ORAI1 составляли приблизительно 350% от исходного уровня.
b.2 Оценка экспрессии биомаркеров аллергии в ответ на аллергическое заболевание глаз.
Уровни мРНК TLSP и Tnfrsf9 исследовали в разные временные точки после индукции аллергического заболевания глаз посредством инстилляции пыльцы амброзии в заранее сенсибилизированных мышах. Через 3 ч после индукции аллергии наблюдали значительную индукцию как TLSP, так и Tnfrsf9. Через 24 ч после индукции уровни мРНК Tnfrsf9 были близки к исходному уровню, в то время как уровни мРНК TLSP все еще оставались приблизительно в 1,5 раза выше исходного уровня (Фигура 18).
b.3 Эффективность SEQ ID NO. 112 (SYL116011) в мышиной модели аллергического заболевания глаз
Трем группам животных внутрибрюшинно вводили дозу пыльцы амброзии, адсорбированной на алюминиевых квасцах, как указано в разделе «Способы». Через пять дней после внутрибрюшинной инъекции одной группе (A, n=8) проводили окулярную инстилляцию один раз в день фосфатно-солевым буфером на протяжении пяти дней, а вторая группа получала SEQ ID NO. 112 (SYL116011) в дозировке 150 мкг/глаз/день (низкая доза) (B, n=15) на протяжении такого же периода времени, в то время как третья группа получала SEQ ID NO. 112 (SYL116011) в дозировке 375 мкг/глаз/день (высокая доза) на протяжении 5 дней. Животных обследовали на предмет симптомов, связанных с аллергическим заболеванием глаз, через 1, 3, 6 и 24 ч после окулярной инстилляции пыльцы амброзии. Как показано на Фигуре 20, обработка любой дозой SEQ ID NO. 112 (SYL116011) существенно уменьшала немедленные клинические признаки аллергии. Дальнейший анализ клинических признаков показал, что обе дозы SEQ ID NO. 112 (SYL116011) оказывали специфичный эффект на два исследуемых параметра: хемоз (отек конъюнктивы) и слезоточивость (Фигура 21).
Инфильтрацию тучных клеток оценивали в конъюнктиве века и в бульбарной конъюнктиве через 3 ч после индукции аллергического заболевания глаз. SEQ ID NO. 112 (SYL116011), введенная в дозе 375 мкг/глаз/день, вызывала существенное снижение количества тучных клеток, приникающих как в конъюнктиву века, так и в бульбарную конъюнктиву (Фигура 22).
Инфильтрацию эозинофилов оценивали в конъюнктиве через 24 ч после индукции аллергии. Вновь наблюдали существенное уменьшение количества инфильтрующих эозинофилов в ответ на высокую дозу SEQ ID NO. 112 (SYL116011) в обеих зонах конъюнктивы и в ответ на низкую дозу в бульбарной конъюнктиве (Фигура 23).
Анализ биомаркера аллергии TLSP в цельном глазу показал дозозависимое снижение экспрессии этого маркера в ответ на SEQ ID NO. 112 (SYL116011). Экспрессия CD-137 (Tnfrsf9) также была существенно снижена в ответ на SEQ ID NO. 112 (SYL116011) через 3 ч после индукции аллергии. Как показано на Фигуре 11, этот маркер аллергии выраженно индуцирован через 3 ч после индукции аллергии (Фигура 24).
b.4 Эффективность SEQ ID NO. 227 (SYL116011v8) в мышиной модели аллергического заболевания глаз
Далее поставили другой in vivo эксперимент, в котором трем группам животных внутрибрюшинно вводили дозу пыльцы амброзии, адсорбированной на алюминиевых квасцах, как указано в разделе «Способы». Через пять дней после внутрибрюшинной инъекции одной группе (A, n=10) проводили окулярную инстилляцию один раз в день фосфатно-солевым буфером на протяжении пяти дней, а вторая группа получала другое соединение настоящего изобретения (SEQ ID NO. 227 (SYL116011v8)) в дозировке 450 мкг/глаз/день (B, n=10) на протяжении такого же периода времени, в то время как третья группа получала 2 мкл 0,5 мг/мл левокабастина на протяжении 5 дней. Левокабастин является антагонистом рецептора H1 второго поколения, доступный в настоящее время на рынке для лечения аллергических заболеваний глаз. Животных обследовали на предмет симптомов, связанных с аллергическим заболеванием глаз, через 0,5, 1, 3, 6 и 24 ч после окулярной инстилляции пыльцы амброзии. Как показано на Фигуре 25, обработка SEQ ID NO. 227 (SYL116011v8) существенно уменьшала клинические признаки аллергии; уменьшение клинических признаков было сильнее выражено в ответ на левокабастин. Дальнейший анализ клинических симптомов показал, что SEQ ID NO. 227 (SYL116011v8) улучшает все исследуемые параметры по сравнению с обработанными фосфатно-солевым буфером животными. Таким образом, было доказано, что данное соединение является эффективным терапевтическим средством при аллергических заболеваниях глаз.
2.2 Оценка эффектов in vivo SEQ ID NO. 112 (SYL116011) в мышиной модели экспериментального аллергического конъюнктивита.
Целью настоящего исследования была оценка эффектов миРНК настоящего изобретения, созданных для подавления экспрессии ORAI1, для уменьшения симптомов аллергии, таких как гиперемия, косоглазие, выделения из глаз и отек века, ассоциированных с аллергическим конъюнктивитом, в мышиной модели.
Задачей настоящего исследования было оценить, уменьшает ли подавление экспрессии ORAI1 при окулярной инстилляции SEQ ID NO. 112 (19 п.о. структуры дцРНК с тупыми концами, SYL116011) симптомы аллергии (гиперемию, косоглазие, выделения из глаз и отек века) в мышиной модели аллергического конъюнктивита. В качестве положительного контроля применяли распространенное лекарственное средство противоаллергический Patanol®. Patanol® (0,1% олопатадин) является антигистаминным средством/стабилизатором тучных клеток двойного действия, вводимым в виде глазных капель. Patanol® блокирует эффекты гистамина и предотвращает высвобождение химических соединений, отвечающих за симптомы аллергии, из тучных клеток. Местное введение фосфатно-солевого буфера (инертного носителя) применяли в качестве отрицательного контроля.
A. Способы
В данном исследовании самок мышей Balb/C сенсибилизировали амброзией, смешанной с гидроксидом алюминия в день 0. В день 18 мышей местно сенсибилизировали амброзией в сбалансированном солевом растворе перед местной обработкой, чтобы удалить мышей, считающихся не отвечающими на индукцию аллергии. Не отвечающими считали мышей, у которых гиперемия не изменялась по меньшей мере на 2 единицы по сравнению с исходным уровнем. Из-за малого числа отвечающих мышей снова проводили сенсибилизацию мышей в день 21. В день 24 повторяли процедуру дня 18 для идентификации отвечающих мышей. Для исследования отобрали 48 мышей и рандомизировали их в 6 групп, по 8 мышей в группе. Группы профилактической обработки получали соответствующие местные лекарственные средства в дни 25-27 (один раз в день ежедневно для групп 2, 3 и 5; четыре раза ежедневно для группы 6). В дни 28-31 мышей местно нагружали аллергеном амброзии дважды в день на фоне введения соответствующего лекарственного средства (один раз в день всем группам, за исключением группы Patanol®, которая получала три доза ежедневно). Животных оценивали на предмет гиперемии, косоглазия, выделения из глаз и отека века, проводя оценку после первой, четвертой, шестой и восьмой нагрузки антигеном.
a.1 Животные
Мышей содержали в поликарбонатных клетках на подстилке (ALPHA-dri®). Клетки соответствовали стандартам, заданным Законом о благополучии животных (AWA, Animal Welfare Act) и Руководством по Уходу и применению лабораторных животных. Рекомендации по предоставлению пространства для животных соответствовали требованиям Службы здравоохранения (PHS, Public Health Service) и AWA. Наполнитель и подстилку в клетках животных меняли по мере необходимости, поддерживая сухость и чистоту.
Животные имели свободный доступ к свежему, аппетитному и сбалансированному корму. Животные имели свободный доступ к чистой питьевой незагрязненной воде. Контроль состояния окружающей среды был настроен на поддержание температуры равной 22±4°C (68±5°F) и относительной влажности равной 50±20%. Поддерживали 12-часовой светотемновой цикл. Животных адаптировали в течение по меньшей мере 5 дней после поступления в виварий перед проведением исходной оценки. Помощь ветеринара не требовалась на протяжении всего исследования.
a.2 Сенсибилизация аллергеном
Способ введения: подкожно, в подколенные области обеих задних конечностей.
Частота: в день 0 и день 21 во всех группах.
Процедура: при каждой сенсибилизации животные, получавшие амброзию (SRW), получали 100 мкг амброзии в 0,65 мг гидроксида алюминия в 50 мкл.
a.3 Введение доз
Местную обработку SEQ ID NO. 112 (SYL116011), Patanol® в качестве положительного контроля или инертным носителем в качестве контроля проводили всем группам, как указано. Мышам дозы вводили местно в роговицу с помощью откалиброванной микропипетки, 3 мкл каплю в каждый глаз. Во время профилактической обработки (дни 25-27) животным из группы Patanol® вводили дозу четыре раза в день ежедневно приблизительно в 9.00, 12.00, 14.00 и 17.00. Все время указано как ± 60 минут, а точное время введения дозы регистрировали в папке с материалами исследования. Животные в группах 2, 3, 5 и 6 получали местные дозы приблизительно в 13.00±60 минут. В дни нагрузки антигеном (дни 28-31) мышам из группы Patanol® вводили дозу трижды в день ежедневно в дни нагрузки антигеном приблизительно в 9.00, 13.00, 16.00, однако, время введения дозы указано как ±90 минут. Всем остальным группам вводили дозу приблизительно в 13.00. Снова точное время введения дозы регистрировали в папке с материалами исследования.
a.4 Нагрузка аллергеном
Способ введения: окулярное введение, в оба глаза.
Частота: в день 18 проводили скрининг нагрузки амброзией для идентификации отвечающих животных. Мышей оценивали в исходный период, перед нагрузкой амброзией. Затем через 18±1 минут после нагрузки снова проводили оценку животных. Из-за отсутствия отвечающих животных исследование задерживали. Вторую сенсибилизацию проводили в день 21 и повторяли скрининг нагрузкой амброзией в день 24. В дни 25-27 начинали соответствующую профилактическую обработку в группах 2, 3, 5 и 6. В дни 28-31 нагрузку два раза в день проводили приблизительно через 30 минут после 1й ежедневной дозы Patanol® и после 3й ежедневной дозы Patanol®. В дни 28-31 после местного введения дозы 1 в день 28 и после введения третьей местной дозы в дни 29-31, оценивали животных через 30 минут после введения местной дозы Patanol®, а затем нагружали ~3 минуты после оценки и снова оценивали через 18 минут после нагрузки (нагрузка после местного нанесения 1, 4, 6 и 8).
Процедура: мышей нагружали местными дозами 150 мкг амброзии (3 мкл 50 мг/мл) суспензии в 3 мкл сбалансированного солевого раствора в каждый глаз. Животных рандомизировали на основании изменений гиперемии в день 24 по сравнению с исходным уровнем.
a.5 Сбор тканей
Животных умерщвляли и, удостоверившись в их смерти, извлекали правый глаз и окружающие придатки глаза и хранили в фиксаторе Дэвидсона в течение 24 часов. После 24 часов фиксации ткань переносили в 70% этанол для длительного хранения. Глаза заключали в парафин и готовили 1 окрашенный гематоксилином-эозином, 1 окрашенный толуидином синим и 1 неокрашенный препарат для каждого глаза.
a.6 Статистические способы
Данные анализировали с помощью двухфакторного дисперсионного анализа с поправкой Бонферрони для сравнения различий клинических признаков между группами.
B. Результаты
Данные по гиперемии, косоглазию, отеку века и выделениям из глаз представляют собой среднее ± стандартную ошибку среднего для N=8 глаз. Тот же наблюдатель, не имеющей информации о кодах обработки, оценивал мышей при нагрузке 1, 4, 6 и 8, проведенной в дни исследования 28, 29, 30 и 31, соответственно. В случае гиперемии, косоглазия и выделения из глаз животных оценивали по шкале тяжести 0-4 (при этом 0 считали нормой, а 4 наиболее тяжелой степенью). В случае отека века мышей оценивали по шкале 0-2. Для каждой конечной точки животных оценивали через 30 минут после введения дозы (только для Patanol®) или в исходный период перед нагрузкой в тот день (для всех других групп). Все группы анализировали с помощью двухфакторного дисперсионного анализа с поправкой Бонферрони, и любую статистическую значимость по сравнению с инертным носителем отмечали звездочкой.
b.1 Изменение последозовой гиперемии - профилактика SEQ ID NO. 112 (SYL116011) по сравнению с Patanol® и профилактикой инертным носителем.
Данные представляют собой среднее ± стандартная ошибка среднего для n=8 глаз в группе. Patanol® демонстрировал статистически меньший ответ после первой нагрузки в день 28 (p<0,01). Профилактические дозы SEQ ID NO. 112 (SYL116011) демонстрировали схожую с Patanol® тенденцию, но статистическая значимость не обнаружена (см. Фигуру 26).
b.2 Изменение последозового косоглазия - профилактика SEQ ID NO. 112 (SYL116011) по сравнению с Patanol® и профилактикой инертным носителем.
Данные представляют собой среднее ± стандартная ошибка среднего для n=8 глаз в группе (см. Фигуру 27). Статистическая значимость не обнаружена.
b.3 Изменение последозового отека века - профилактика SEQ ID NO. 112 (SYL116011) по сравнению с Patanol® и профилактикой инертным носителем.
Данные представляют собой среднее ± стандартная ошибка среднего для n=8 глаз в группе (см. Фигуру 28). Статистическая значимость не обнаружена.
b.4 Изменение последозового выделения из глаз - профилактика SEQ ID NO. 112 (SYL116011) по сравнению с Patanol® и профилактикой инертным носителем.
Данные представляют собой среднее ± стандартная ошибка среднего для n=8 глаз в группе (см. Фигуру 29). Статистическая значимость не обнаружена.
C. Выводы
По итогам исследования представляется, что хотя профилактика SEQ ID NO. 112 (SYL116011) сохраняла ту же тенденцию снижения гиперемии, отека века и выделения из глаз (см. Фигуры 26-29), однако она не была статистически значимой при анализе этих данных с помощью двухфакторного дисперсионного анализа с поправкой Бонферрони из-за малого N, применяемого в данном исследовании.
Примечательно то, что при оценке эффектов SEQ ID NO. 112 (SYL116011) настоящего изобретения, созданных для подавления экспрессии ORAI1, результаты показали схожую тенденцию дозозависимого ответа в группе SEQ ID NO. 112 (SYL116011), что и в группе, обработанной Patanol®, известным противоаллергическим лекарственным средством, в настоящее время представленным на рынке, уменьшая в обоих случаях симптомы аллергии, ассоциированные с аллергическим конъюнктивитом, в мышиной модели. Ожидают, что при более высоких значениях N анализ данных будет статистически значимым.
ССЫЛКИ
Angaji S.A, Hedayati S.S, Poor R.H, et al. "Application of RNA interference in treating human diseases" J Genet. 2010. Vol. 89. 4. 527-37.
Baba Y, Nishida K, Fujii Y, Hirano T, et al. "Essential function for the calcium sensor STIM1 in mast cell activation and anaphylactic responses". Nat Immunol. 2008;9:81-88.
Bacsi A, Dharajiya N, Choudhury BK, et al. "Effect of pollen-mediated oxidative stress on immediate hypersensitivity reactions and late-phase inflammation in allergic conjunctivitis." J Allergy Clin Immunol. 2005 Oct; 116 (4):836-43.
Baumann TK & Martenson ME. "Extracellular protons both increase the activity and reduce the conductance of capsaicin-gated channels." J Neuroscl. 2000. 20:RC80.
Bergmeier W, Weidinger C, Zee I, Feske S. "Emerging roles of store-operated Ca (2+) entry through STIM and ORAI proteins in immunity, hemostasis and cancer" Channels (Austin). 2013 Mar 19;7(4).
Bramsen J.B., Laursen M.B., Nielsen A. F., et al. 2009 "A large-scale chemical modification screen identifies design rules to generate siRNAs with high activity, high stability and low toxicity" Nucleic Acids Res Vol. 37 Issue: 9 Pages:25 2867-81.
Caterina et al. "The capsaicin receptor: a heat-activated ion channel in the pain pathway." Nature. 1997 389(6653):816-24.
Caterina et al. "The vanilloid receptor: a molecular gateway to the pain pathway." Annual Rev Neuroscl. 2001 24:487-517.
Cerutti, L., N. Mian, et al. "Domains in gene silencing and cell differentiation proteins: the novel PAZ domain and redefinition of the Piwi domain." Trends Biochem Scl. 2000 25(10):481-2.
Collins, R. E. and X. Cheng. "Structural domains in RNAi." FEBS Lett 2005 579(26): 5841-9.
Chang C.I, Kim H.A, Dua P, et al. "Structural Diversity Repertoire of Gene Silencing Small Interfering RNAs" Nucleic Acid Ther. 2011. Vol. 21. 3. 125-31.
Deleavey G.F and Damha M.J. "Designing chemically modified oligonucleotides for targeted gene silencing". Chem Biol. 2012 Vol.19.8. 937-54.
Doench, J.G. Sharp, P.A. "Specificity of microRNA target selection in translational repression" Genes Dev. 2004 18, 504-511.
Elbashir, S. M., W. Lendeckel, et al. "RNA interference is mediated by 21- and 22-nucleotide RNAs." Genes Dev. 2001 15(2): 188-200.
Fire, A., S. Xu, et al. "Potent and specific genetic interference by double-stranded RNA in Caenorhabditis elegans." Nature. 1998 391(6669): 806-11.
Gonzalez, G. G., Garcia, P. et al. "Reduction of capsacin- induced ocular pain and neurogenic inflammation by calcium antagonists." Invest Ophthalmol Vis Scl. 1993 34 (12) :3329-3335.
Hoth M, Penner R. "Depletion of intracellular calcium stores activates a calcium current in mast cells". Nature. 1992;355:353-356.
Huang WC, Chai CY, Chen WC, et al. "Histamine regulates cyclooxygenase 2 gene activation through Orail-mediated NFkB activation in lung cancer cells" Cell Calcium. 2011 Jul; 50 (1):27-35
Hutvagner, G. and P. D. Zamore. "A microRNA in a multiple-turnover RNAi enzyme complex." Science. 2002.297(5589):2056-60.
Kari O. and Saari KM. "Updates in the treatment of ocular allergies". Journal of Asthma and Allergy 2010:3 149-158.
Key B. Allergy and allergic diseases. Part I. N. Engl J Med. 2001; 344:30-37.
Kim D.H., Behlke M.A., Rose S.D., et al. "Synthetic dsRNA Dicer substrates enhance RNAi potency and efficacy" Nat Biotechnol 2005. Vol. 23 Issue: 2 Pages: 222-6.
Kornbrust D, Cavagnaro J, Levin A, et al. "Oligo safety working group exaggerated pharmacology subcommittee consensus document" Nucleic Acid Ther 2013 Vol. 23, 1, Pag: 21-8.
La Rosa M, Lionetti E, Reibaldi M, et al. "Allergic conjunctivitis: a comprehensive review of the literature" Italian Journal of Pediatrics 2013, 39:18.
Lewis, B.P., Shih I. et al. "prediction of mammalian micro RNA targets." Cell. 2003 115:787-798.
Liu, J., M. A. Carmell, et al. "Argonaute2 is the catalytic engine of mammalian RNAi." Science. 2004 305 (5689):1437-41.
Livak K. J. and Schmittgen T. D., "Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2(-Delta Delta C(T)) Method" Methods. 2001; Vol: 25, Issue: 4, Pages: 402-8.
Ma, J. B., Y. R. Yuan, et al. "Structural basis for 5'-end-specific recognition of guide RNA by the A. fulgidus Piwi protein." Nature. 2005 434(7033): 666-70.
Magone MT, Chan CC, Rizzo LV, Kozhich AT, Whitcup SM. "A novel murine model of allergic conjunctivitis". Clin Immunol Immunopathol. 1998;87:75-84.
Maniatis, T., et al., "Molecular Cloning: A Laboratory Manual". Cold Spring Harbor Laboratory, 1982, at pages 387-389.
Montell et al. "Short hairpin RNAs (shRNAs) induce sequence-specific silencing in mammalian cells." Genes Dev. 2002 16 (8):948-58.
Nykanen, A., B. Haley, et al. "ATP requirements and small interfering RNA structure in the RNA interference pathway." Cell 2001 107 (3):309-21.
Ono SJ, Abelson MB. "All ergic conjunctivitis: update on pathophysiology and prospects for future treatment" J. Allergy Clin. Immunol. 2005, 75(1), 1 18-122.
Orban, T. I. and E. Izaurralde. "Decay of mRNAs targeted by RISC requires XRN1, the Ski complex, and the exosome." Rna. 2005 11(4):459-69.
Parekh AB, Putney JW, Jr. "Store-operated calcium channels". Physiol Rev 2005; 85:757-810.
Parrish, S., J. Fleenor, et al. "Functional anatomy of a dsRNA trigger: differential requirement for the two trigger strands in RNA interference." Mol Cell. 2000 6(5): 1077-87.
Popescu FD. "Antisense- and RNA interference-based therapeutic strategies in allergy" J Cell Mol Med. 2005 Oct-Dec;9(4):840-53.
Rand, T. A., S. Petersen, et al. "Argonaute2 cleaves the anti-guide strand of siRNA during RISC activation." Cell. 2005 123 (4):621-9.
Reynolds, A., Leake, D., et al. "Rational siRNA design for RNA interference" Nat Biotechnol. 2004 22(3):326-30.
Sanghvi Y.S. "A status update of modified oligonucleotides for chemotherapeutics applications" Curr Protoc Nucleic Acid Chem. 2011 Vol. 4. 41 1-22.
Schubert, S. et al. "Local RNA target structure influences siRNA efficacy: systematic analysis of intentionally designed binding regions." J Mol Biol. 2005 348:883-893.
Smyth JT, Dehaven WI, Jones BF, et al. "Emerging perspectives in store-operated Ca2+ entry: roles of Orai, Stim and TRP". Blochlm Blophys Acta 2006;1763:1147-1160.
Song, J. J., S. K. Smith, et al. "Crystal structure of Argonaute and its implications for RISC slicer activity." Science. 2004 305(5689): 1434-7.
Suzuki M, Zheng X, Zhang X, et al. "Inhibition of allergic responses by CD40 gene silencing" Allergy. 2009 Mar;64(3):387-97.
Suzuki M, Zheng X, Zhang X, et al. "A novel allergen- specific therapy for allergy using CD40-silenced dendritic cells" J Allergy Clin Immunol. 2010 Mar;125(3):737-43.
Ui-Tei, K., Naito, Y., et al. "Guidelines for the selection of highly effective siRNA sequences for mammalian and chick RNA interference." Nucleic Acids Res. 2004 32(3): 936-48.
Vig M, DeHaven WI, Bird GS, et al. "A major defect in mast cell effector functions in CRACM1-/- mice" Nat Immunol. 2008 Jan;9(1):89-96.
Walton S.P, Wu M, Gredell J.A and Chan C. "Designing highly active siRNAs for therapeutic applications" FEBS J. 2010. Vol. 277. 23. 4806-13.
Wang Y, Lin L, Zheng C. "Downregulation of Orail expression in the airway alleviates murine allergic rhinitis" Exp Mol Med. 2012 Mar 31; 44 (3):177-90.
Yang I-H, Tsai Y-T et al. "Involvement of STIM1 and ORAI1 in EGF-mediated cell growth in retinal pigment epithelial cells" Journal of Biomedical Science. 2013; 20:41.
Zheng X, Ma P, de Paiva CS, et al. TSLP and downstream molecules in experimental mouse allergic conjunctivitis. Invest Ophthalmol Vis Scl 2010;51:3076-3082.
Claims (10)
1. Молекула миРНК, где указанная молекула специфично действует по меньшей мере на одну последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO. 1 - SEQ ID NO. 111, и снижает экспрессию гена ORAI1 при введении в клетку, и где указанная миРНК содержит или состоит из по меньшей мере одной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO. 112, SEQ ID NO. 113, SEQ ID NO. 115-119, SEQ ID NO. 223-229, SEQ ID NO. 233 и SEQ ID NO. 235, и где указанная миРНК содержит 19-нуклеотидную двухцепочечную область.
2. Молекула миРНК по п.1, где указанная миРНК имеет тупые концы.
3. Молекула миРНК по п.1, где по меньшей мере один нуклеотид содержит химическую модификацию.
4. Молекула миРНК по п.3, где указанная химическая модификация нуклеотида выбрана из 2'-O-метилирования и замены урацилрибонуклеотидов дезокситимидиновыми нуклеотидами и их комбинаций.
5. Молекула миРНК по п.3, где указанная химическая модификация расположена в смысловой цепи, в антисмысловой цепи или в обеих цепях.
6. Молекула миРНК по п.3, где указанная миРНК выбрана по меньшей мере одной последовательности из группы, состоящей SEQ ID NO. 223 - SEQ ID NO. 229, SEQ ID NO. 233 и SEQ ID NO. 235.
7. Применение молекулы миРНК по п. 1 в получении лекарственного средства для лечения состояния глаза, характеризующегося повышенной экспрессией или активностью ORAI1.
8. Применение по п.7, где указанное состояние глаза является аллергическим заболеванием глаз и/или конъюнктивитом.
9. Применение по п.7, где указанное состояние глаза выбрано из сезонного аллергического конъюнктивита, круглогодичного аллергического конъюнктивита, весеннего кератоконъюнктивита, атопического кератоконъюнктивита, конъюнктивита с гиперплазией сосочков, синдрома сухости глаз и их комбинаций.
10. Фармацевтическая композиция для лечения и/или предотвращения состояния глаза, характеризующегося повышенной экспрессией или активностью ORAI1, где указанная композиция содержит по меньшей мере молекулу миРНК, описанную в п. 1, в фармацевтически эффективном количестве.
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
EP13382415.1 | 2013-10-22 | ||
EP20130382415 EP2865758A1 (en) | 2013-10-22 | 2013-10-22 | siRNA and their use in methods and compositions for inhibiting the expression of the ORAI1 gene |
PCT/EP2014/072514 WO2015059122A2 (en) | 2013-10-22 | 2014-10-21 | Sirna and their use in methods and compositions for inhibiting the expression of the orai1 gene |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2016119354A RU2016119354A (ru) | 2017-12-01 |
RU2016119354A3 RU2016119354A3 (ru) | 2018-04-28 |
RU2689607C2 true RU2689607C2 (ru) | 2019-05-28 |
Family
ID=49474353
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2016119354A RU2689607C2 (ru) | 2013-10-22 | 2014-10-21 | миРНК И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ В СПОСОБАХ И КОМПОЗИЦИЯХ ДЛЯ ИНГИБИРОВАНИЯ ЭКСПРЕССИИ ГЕНА ORAI1 |
Country Status (13)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US10167473B2 (ru) |
EP (2) | EP2865758A1 (ru) |
JP (1) | JP2016535592A (ru) |
KR (1) | KR20160078384A (ru) |
CN (1) | CN107223154A (ru) |
AU (1) | AU2014339035A1 (ru) |
BR (1) | BR112016008786A2 (ru) |
CA (1) | CA2928515A1 (ru) |
IL (1) | IL245123A0 (ru) |
MX (1) | MX2016005042A (ru) |
RU (1) | RU2689607C2 (ru) |
SG (2) | SG10201802865PA (ru) |
WO (1) | WO2015059122A2 (ru) |
Families Citing this family (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2016150723A1 (en) * | 2015-03-20 | 2016-09-29 | Unilever Plc | Antiperspirant composition |
MA44908A (fr) * | 2015-09-08 | 2018-07-18 | Sylentis Sau | Molécules d'arnsi et leur utilisation dans des procédés et des compositions pour inhiber l'expression du gène nrarp |
WO2017042239A1 (en) * | 2015-09-08 | 2017-03-16 | Sylentis Sau | siRNA and their use in methods and compositions for inhibiting the expression of the CHI3L1 gene |
US20200123499A1 (en) | 2015-12-02 | 2020-04-23 | Massachusetts Institute Of Technology | Method for efficient generation of neurons from non-neuronal cells |
CN105477637A (zh) * | 2015-12-16 | 2016-04-13 | 孙荣距 | Orai1基因沉默在血管内皮细胞钙超载损伤中的应用 |
WO2023067127A1 (en) * | 2021-10-22 | 2023-04-27 | Universite De Strasbourg | Method for treating tubular aggregate myopathy and stormorken syndrome |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2010122640A (ru) * | 2006-05-04 | 2011-12-10 | Новартис АГ (CH) | МАЛАЯ ИНТЕРФЕРИРУЮЩАЯ РИБОНУКЛЕИНОВАЯ КИСЛОТА (миРНК) ДЛЯ ПЕРОРАЛЬНОГО ВВЕДЕНИЯ |
Family Cites Families (20)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2322500C2 (ru) | 2000-12-01 | 2008-04-20 | Макс-Планк-Гезелльшафт Цур Фердерунг Дер Виссеншафтен Е.Ф. | Малые молекулы рнк, опосредующие интерференцию рнк |
ES2280826T5 (es) | 2002-08-05 | 2017-08-03 | Silence Therapeutics Gmbh | Nuevas formas adicionales de moléculas de ARN de interferencia |
US7250496B2 (en) * | 2002-11-14 | 2007-07-31 | Rosetta Genomics Ltd. | Bioinformatically detectable group of novel regulatory genes and uses thereof |
EP2305812A3 (en) * | 2002-11-14 | 2012-06-06 | Dharmacon, Inc. | Fuctional and hyperfunctional sirna |
WO2005062937A2 (en) | 2003-12-22 | 2005-07-14 | University Of Massachusetts | Methods and compositions for enhancing the efficacy and specificity of single and double blunt-ended sirna |
PL1781787T3 (pl) * | 2004-08-23 | 2018-01-31 | Sylentis Sau | Leczenie zaburzeń oka charakteryzowanych przez podwyższone ciśnienie wewnątrzgałkowe przy użyciu siRNA |
AU2007238225A1 (en) | 2006-04-10 | 2007-10-25 | Beth Israel Deaconess Medical Center | CRAC modulators and use of same for drug discovery |
TW201336514A (zh) * | 2006-04-13 | 2013-09-16 | Alcon Res Ltd | RNA干擾(RNAi)所媒介之與脾酪胺酸激酶相關之發炎症狀的抑制作用(二) |
JP2010507387A (ja) | 2006-10-25 | 2010-03-11 | クアーク・ファーマスーティカルス、インコーポレイテッド | 新規のsiRNAおよびその使用方法 |
WO2008104978A2 (en) | 2007-02-28 | 2008-09-04 | Quark Pharmaceuticals, Inc. | Novel sirna structures |
NZ580195A (en) * | 2007-03-05 | 2012-03-30 | Univ Queensland | Targeting crac for breast cancer therapy and/or diagnosis |
KR20100085951A (ko) | 2007-10-03 | 2010-07-29 | 쿠아크 파마수티칼스 인코퍼레이티드 | 신규 sirna 구조 |
GB0801888D0 (en) | 2008-02-01 | 2008-03-12 | Isis Innovation | Treatment of mast cell related disorders |
WO2010099401A1 (en) | 2009-02-26 | 2010-09-02 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Calcium signaling modulators involving stim and orai proteins |
WO2010148393A2 (en) | 2009-06-19 | 2010-12-23 | Immune Disease Institute, Inc. | Assay for orai calcium channel regulators |
US20140099666A1 (en) * | 2009-07-06 | 2014-04-10 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for enhancing production of a biological product |
US8377970B2 (en) * | 2009-10-08 | 2013-02-19 | Rhizen Pharmaceuticals Sa | Modulators of calcium release-activated calcium channel |
US8993612B2 (en) | 2009-10-08 | 2015-03-31 | Rhizen Pharmaceuticals Sa | Modulators of calcium release-activated calcium channel and methods for treatment of non-small cell lung cancer |
KR101237036B1 (ko) | 2009-11-04 | 2013-02-25 | 성균관대학교산학협력단 | 안티센스 가닥에 의한 오프-타겟 효과를 최소화한 신규한 siRNA 구조 및 그 용도 |
CN102827843A (zh) * | 2012-09-25 | 2012-12-19 | 陈志南 | 一种针对Orai1基因、抑制肿瘤增殖和转移的shRNA及其应用 |
-
2013
- 2013-10-22 EP EP20130382415 patent/EP2865758A1/en not_active Withdrawn
-
2014
- 2014-10-21 JP JP2016525603A patent/JP2016535592A/ja active Pending
- 2014-10-21 BR BR112016008786A patent/BR112016008786A2/pt not_active Application Discontinuation
- 2014-10-21 WO PCT/EP2014/072514 patent/WO2015059122A2/en active Application Filing
- 2014-10-21 AU AU2014339035A patent/AU2014339035A1/en not_active Abandoned
- 2014-10-21 EP EP14802816.0A patent/EP3060663A2/en not_active Withdrawn
- 2014-10-21 SG SG10201802865PA patent/SG10201802865PA/en unknown
- 2014-10-21 KR KR1020167013215A patent/KR20160078384A/ko not_active Application Discontinuation
- 2014-10-21 SG SG11201603113WA patent/SG11201603113WA/en unknown
- 2014-10-21 CA CA2928515A patent/CA2928515A1/en not_active Abandoned
- 2014-10-21 CN CN201480058269.3A patent/CN107223154A/zh active Pending
- 2014-10-21 MX MX2016005042A patent/MX2016005042A/es unknown
- 2014-10-21 RU RU2016119354A patent/RU2689607C2/ru active
- 2014-10-21 US US15/030,176 patent/US10167473B2/en active Active
-
2016
- 2016-04-14 IL IL245123A patent/IL245123A0/en unknown
-
2018
- 2018-12-14 US US16/220,865 patent/US20190106700A1/en not_active Abandoned
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2010122640A (ru) * | 2006-05-04 | 2011-12-10 | Новартис АГ (CH) | МАЛАЯ ИНТЕРФЕРИРУЮЩАЯ РИБОНУКЛЕИНОВАЯ КИСЛОТА (миРНК) ДЛЯ ПЕРОРАЛЬНОГО ВВЕДЕНИЯ |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
I-HUI YANG et al. "Involvement of STIM1 and Orai1 inEGF-mediated cell growth in retinal pigment epithelial cells", Journal of biomedical science, vol.20, no.1, 25.06.2013. * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
WO2015059122A2 (en) | 2015-04-30 |
IL245123A0 (en) | 2016-06-30 |
WO2015059122A3 (en) | 2015-08-20 |
CA2928515A1 (en) | 2015-04-30 |
JP2016535592A (ja) | 2016-11-17 |
US20190106700A1 (en) | 2019-04-11 |
EP2865758A1 (en) | 2015-04-29 |
MX2016005042A (es) | 2016-08-17 |
KR20160078384A (ko) | 2016-07-04 |
RU2016119354A (ru) | 2017-12-01 |
SG11201603113WA (en) | 2016-05-30 |
RU2016119354A3 (ru) | 2018-04-28 |
US10167473B2 (en) | 2019-01-01 |
EP3060663A2 (en) | 2016-08-31 |
AU2014339035A1 (en) | 2016-05-12 |
CN107223154A (zh) | 2017-09-29 |
US20160304880A1 (en) | 2016-10-20 |
BR112016008786A2 (pt) | 2017-10-03 |
SG10201802865PA (en) | 2018-05-30 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2689607C2 (ru) | миРНК И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ В СПОСОБАХ И КОМПОЗИЦИЯХ ДЛЯ ИНГИБИРОВАНИЯ ЭКСПРЕССИИ ГЕНА ORAI1 | |
JP6742362B2 (ja) | 眼の状態を処置および/または防止するためのsiRNAならびに方法および組成物におけるそれらの使用 | |
JP6008845B2 (ja) | 眼の状態の治療および/または予防のための方法および組成物におけるsiRNAおよびそれらの使用 | |
US10017766B2 (en) | SiRNA and their use in methods and compositions for inhibiting the expression of the FLAP gene | |
US9951338B2 (en) | siRNA and their use in methods and compositions for inhibiting the expression of the PDK1 gene | |
US8372817B2 (en) | Small interfering RNA for gene knockdown of the subcutaneous N-methyl-D-aspartate receptor NR1 subunit, and it's application on pharmaceutics |