RU2681815C1 - Вакцина инактивированная сорбированная против ящура типа А - Google Patents
Вакцина инактивированная сорбированная против ящура типа А Download PDFInfo
- Publication number
- RU2681815C1 RU2681815C1 RU2017145756A RU2017145756A RU2681815C1 RU 2681815 C1 RU2681815 C1 RU 2681815C1 RU 2017145756 A RU2017145756 A RU 2017145756A RU 2017145756 A RU2017145756 A RU 2017145756A RU 2681815 C1 RU2681815 C1 RU 2681815C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- strain
- arriah
- virus
- vaccine
- foot
- Prior art date
Links
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims abstract description 81
- 241000710198 Foot-and-mouth disease virus Species 0.000 title claims abstract description 75
- 208000007212 Foot-and-Mouth Disease Diseases 0.000 title claims description 31
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims abstract description 79
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 claims abstract description 46
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims abstract description 42
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 37
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 claims abstract description 30
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 26
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 claims description 19
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 claims description 19
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 claims description 19
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 16
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 15
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 claims description 14
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 claims description 13
- 244000052769 pathogen Species 0.000 claims description 13
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 claims description 10
- 239000013543 active substance Substances 0.000 claims description 9
- 239000000654 additive Substances 0.000 claims description 8
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 claims description 8
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 6
- 239000002594 sorbent Substances 0.000 claims description 5
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 claims description 3
- 241000709664 Picornaviridae Species 0.000 claims description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 2
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 24
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 14
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 13
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 10
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 10
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 10
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 10
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 10
- 239000000047 product Substances 0.000 description 9
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 8
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 8
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 8
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 8
- 230000004727 humoral immunity Effects 0.000 description 6
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 5
- 238000010835 comparative analysis Methods 0.000 description 5
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 5
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 description 5
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 5
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 5
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 4
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 4
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 4
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 4
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 241000710202 Foot-and-mouth disease virus - type A Species 0.000 description 3
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 3
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 3
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 3
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 3
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 3
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 3
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 3
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 3
- AKHNMLFCWUSKQB-UHFFFAOYSA-L sodium thiosulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=S AKHNMLFCWUSKQB-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 235000019345 sodium thiosulphate Nutrition 0.000 description 3
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 3
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 3
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 2
- -1 Polyhexamethylene guanidine Polymers 0.000 description 2
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 2
- 230000000680 avirulence Effects 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 2
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 229960004279 formaldehyde Drugs 0.000 description 2
- 235000019256 formaldehyde Nutrition 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 2
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 2
- 230000000869 mutational effect Effects 0.000 description 2
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 2
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241001250090 Capra ibex Species 0.000 description 1
- 108090000565 Capsid Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241001481710 Cerambycidae Species 0.000 description 1
- 102100023321 Ceruloplasmin Human genes 0.000 description 1
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 102000004407 Lactalbumin Human genes 0.000 description 1
- 108090000942 Lactalbumin Proteins 0.000 description 1
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 1
- 241000699673 Mesocricetus auratus Species 0.000 description 1
- 108060004795 Methyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 101710093543 Probable non-specific lipid-transfer protein Proteins 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 241001493546 Suina Species 0.000 description 1
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 1
- 101150024766 VP1 gene Proteins 0.000 description 1
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000003044 adaptive effect Effects 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 238000002306 biochemical method Methods 0.000 description 1
- 239000013553 cell monolayer Substances 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 210000003850 cellular structure Anatomy 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 238000010908 decantation Methods 0.000 description 1
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000005189 flocculation Methods 0.000 description 1
- 230000016615 flocculation Effects 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000003067 hemagglutinative effect Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 229940031551 inactivated vaccine Drugs 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N methanone Chemical compound O=[14CH2] WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- 244000005706 microflora Species 0.000 description 1
- 238000004264 monolayer culture Methods 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 1
- 238000013081 phylogenetic analysis Methods 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 210000004777 protein coat Anatomy 0.000 description 1
- 239000003531 protein hydrolysate Substances 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 230000000601 reactogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 238000004879 turbidimetry Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/125—Picornaviridae, e.g. calicivirus
- A61K39/135—Foot- and mouth-disease virus
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии. Разработана вакцина, содержащая авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма вируса ящура А №2269/ВНИИЗЖ/2015. Антигенный материал представляет собой суспензию, содержащую преимущественно 146S и 75S иммуногенные компоненты вируса ящура. Вакцина способна обеспечить эффективную защиту от гомологичного возбудителя инфекции, циркулирующего в странах Закавказья, Центральной Азии, Среднего и Ближнего Востока. 8 з.п. ф-лы, 8 табл., 1 ил., 8 пр.
Description
Широкое распространение вируса ящура, равно как и сложности, возникающие при диагностике заболевания и подборе вакцинных штаммов во время противоэпизоотических мероприятий, обусловлены высокой мутационной изменчивостью генома и, как следствие, антигенным разнообразием вируса ящура [1, 2].
Профилактическая эффективность вакцин, определяемая по эпидемиологическим показателям, устанавливается в группах привитых животных при угрозе возникновения и распространения болезни. Вакцины должны обеспечивать создание массовой невосприимчивости и препятствовать распространению эпизоотических штаммов вируса ящура.
Так, для успешного проведения профилактической групповой иммунизации необходима информация о результатах сравнительного анализа нуклеотидных и аминокислотных последовательностей вакцинных штаммов и эпизоотических изолятов вируса ящура, циркулирующих в зоне профилактической вакцинации. При возникновении вспышек заболевания именно путем сравнительного анализа нуклеотидного и аминокислотного определения антигенного соответствия эпизоотического изолята производственному штамму можно наиболее оперативно подобрать необходимый штамм для производства вакцин, применяемых в угрожаемой зоне [3].
Возбудитель ящура обладает высокой антигенной вариабельностью штаммов в пределах одного серотипа, которая выявляется в различные временные промежутки и на разных территориях в зависимости от видового состава восприимчивого поголовья, иммунного статуса животных и множества других факторов. Мутационная изменчивость изолятов вируса ящура обусловлена заменами аминокислот в полипептидных фрагментах (антигенных эпитопах), локализованных на поверхности капсидных белков.
Сдвиги антигенного спектра, соответствующие обновлению структуры нового полевого изолята, могут варьировать от незначительных, улавливаемых моноклональными антителами, до существенных, регистрируемых с помощью традиционных поликлональных иммуноглобулинов. Существенные изменения антигенных характеристик природного штамма с большой вероятностью способствуют ослаблению специфического иммунитета, индуцированного негомологичным антигеном, и, кроме того, вызывают затруднения штаммоспецифической диагностики.
В 2015 году на территории Армении была отмечена вспышка ящура. Выделенный изолят значительно отличался от производственных штаммов вируса ящура. В связи с этим для обеспечения безопасности территории России и сопредельных государств от этого возбудителя возникла необходимость разработать вакцину на основе эпизоотического штамма вируса ящура серотипа А.
Известна вакцина инактивированная сорбированная против ящура типа А, содержащая активное вещество в виде авирулентного и очищенного антигенного материала из гомологичного возбудителю инфекции штамма А22 №550, полученного в чувствительной биологической системе, и целевые добавки в виде адъюванта и поддерживающей среды в эффективном соотношении [4].
Штамм А22 №550 вируса ящура выделен в 1964 году в Азербайджане и в настоящее время используется в Российской Федерации в качестве производственного при изготовлении средств специфической профилактики и диагностики, применяемых на всей территории России и в странах СНГ.
В качестве чувствительной биологической системы используют новорожденных крольчат, а поддерживающей средой служит фосфатно-буферный раствор (ФБР). Для очистки вируссодержащей суспензии от балластных примесей применяют хлороформ в количестве 2% от объема и последующее центрифугирование. Инактивацию вируса проводят с использованием формальдегида. В качестве адъюванта выступает гидроокись алюминия (ГОА) в смеси с сапонином.
Известна вакцина инактивированная сорбированная против ящура типа А, содержащая активное вещество в виде авирулентного и очищенного антигенного материала из гомологичного возбудителю инфекции штамма А22 Ирак 24/64, полученного в чувствительной биологической системе, и целевые добавки в виде адъюванта и поддерживающей среды в эффективном соотношении.
Штамм А22 Ирак 24/64 вируса ящура был передан в виде афтозного материала из института Рази (Иран) в 1967 году. В Российской Федерации используется в качестве производственного при изготовлении средств специфической профилактики и диагностики, применяемых на всей территории России и в странах СНГ. С целью очистки вируссодержащей суспензии от балластных примесей используют хлороформ в количестве 2% от общего объема и последующее центрифугирование. Для инактивации вируса применяют аминоэтилэтиленимин (АЭЭИ), а в качестве адъювантов - гидроокись алюминия с сапонином.
Известна вакцина инактивированная сорбированная против ящура типа А, содержащая активное вещество в виде авирулентного и очищенного антигенного материала из гомологичного возбудителю инфекции штамма А №2045/Киргизия/2007, полученного в чувствительной биологической системе, и целевые добавки в виде адъюванта и поддерживающей среды в эффективном соотношении.
Исходный вирус был выделен в 2007 году в Республике Киргизия. Вакцинный штамм получен путем многократных последовательных пассажей на чувствительных гетеро- и гомологичных культурах клеток.
Очистку вируссодержащей суспензии от балластных примесей проводят с помощью хлороформа в количестве 2% от общего объема с последующим центрифугированием. Для инактивации вируса используют аминоэтилэтиленимин, а из адъювантов - гидроокись алюминия с сапонином [5].
Известна вакцина инактивированная сорбированная против ящура типа А, содержащая активное вещество в виде авирулентного и очищенного антигенного материала из гомологичного возбудителю инфекции штамма А №2187/Кути/2013 [6].
Вирусный изолят, послуживший источником для получения штамма А №2187/Кути/2013 [7], был выделен в сентябре 2013 года от больных свиней в селе Кути Приаргунского района Забайкальского края (экспертиза №2187). Производственный штамм получен из данного изолята путем последовательных пассажей на чувствительных гетеро- и гомологичных культурах клеток. Для очистки вируссодержащей суспензии от балластных примесей используют хлороформ в количестве 2% от общего объема и последующее центрифугирование. Инактивацию вируса проводят с применением аминоэтилэтиленимина. В качестве адъюванта используют смесь гидроокись алюминия и сапонина.
Наиболее близкой предлагаемому изобретению по совокупности существенных признаков является вакцина инактивированная сорбированная против ящура типа А, содержащая активное вещество в виде авирулентного и очищенного антигенного материала из гомологичного возбудителю заболевания штамма А №2187/Кути/2013. Авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма А №2187/Кути/2013 представляет собой суспензию преимущественно из 146S и 75S иммуногенных компонентов вируса ящура и используется в качестве производственного штамма при изготовлении средств специфической профилактики и диагностики, применяемых на всей территории России и в странах СНГ.
Исходный вирус для получения штамма А №2187/Кути/2013 выделен в июле 2013 году в селе Нижний Куркужин Баксанского района Кабардино-Балкарской Республики. Штамм получен путем многократных последовательных пассажей в чувствительных гетеро- и гомологичных культурах клеток. Штамм адаптирован к первично-трипсинизированным клеткам из свиной почки (СП), а также к перевиваемым клеточным линиям из почки новорожденного сирийского хомячка (ВНК-21), почки свиньи (IB-RS-2) и почки сибирского горного козерога (ПСГК-30). Для изготовления вакцины в качестве чувствительной биологической системы используют предпочтительно суспензионную перевиваемую клеточную линию ВНК-21/2-17, а в качестве поддерживающей среды - раствор Эрла без сыворотки крови с добавлением ферментативных гидролизатов мышц сухого (ФГМС), гидролизатов белков крови сухого (ГБКС) и антибиотиков (рНсреды 7,4-7,6).
Для очистки вируссодержащей суспензии от балластных примесей применяют полигексаметиленгуанидин (ПГМГ). С целью инактивации вируса используют аминоэтилэтиленамин (АЭЭИ), который добавляют в вируссодержащую суспензию до концентрации 0,025-0,05%. По окончании инактивации АЭЭИ нейтрализуют внесением в суспензию тиосульфата натрия [8]. В качестве адъювантов используют ГОА с сапонином.
Данная вакцина характеризуется следующим качественным и количественным составом:
антигенный материал - не менее 3,0 мкг/см3,
ГОА - 11000,0-15000,0 мкг/см3,
сапонин - 500,0-1500,0 мкг/см3,
поддерживающая среда - до 1000000,0 мкг/см3.
Существенный недостаток известных вакцин, в том числе и вакцины-прототипа, заключается в их недостаточной иммуногенной активности. Они не обеспечивают надежной защиты восприимчивых животных от эпизоотического вируса ящура типа А, циркулирующего в странах Закавказья, Центральной Азии, Среднего и Ближнего Востока.
В задачу создания настоящего изобретения входила разработка вакцины противоящурной инактивированной сорбированной, позволяющей обеспечить эффективную защиту восприимчивых животных против эпизоотического вируса ящура типа А.
Технический результат от использования предлагаемого изобретения заключается в расширении арсенала вакцин инактивированных сорбированных против ящура типа А. Указанный технический результат достигнут созданием вакцины инактивированной сорбированной против ящура типа А, характеризующейся совокупностью признаков, которые приведены ниже.
Предлагаемая вакцина в 1 см3 препарата содержит следующие компоненты: активное вещество в виде авирулентного и очищенного антигенного материала из гомологичного возбудителю инфекции штамма вируса ящура А №2269/ВНИИЗЖ/2015 [9], полученного предпочтительно в суспензионной перевиваемой клеточной линии ВНК-21/2-17, в количестве не менее 3,0 мкг и целевые добавки: ГОА предпочтительно в количестве 11000,0-15000,0 мкг, сапонин предпочтительно в количестве 500,0-1500,0 мкг.
Вирусный изолят, послуживший источником для получения штамма А №2269/ВНИИЗЖ/2015, был выделен в декабре 2015 года от больных свиней в Республике Армения (экспертиза №2269). Штамм А №2269/ВНИИЗЖ/2015 вируса ящура типа А получен путем последовательных пассажей на чувствительных гетеро- и гомологичных культурах клеток. Для изготовления вакцины в качестве чувствительной биологической системы использовали предпочтительно суспензионную перевиваемую клеточную линию ВНК-21/2-17, а в качестве поддерживающей среды - раствор Эрла без сыворотки с добавлением ФГМС, ГБКС и антибиотиков при рН 7,4-7,6.
Для инактивации вируса применяли АЭЭИ, который добавляли в вируссодержащую суспензию до концентрации 0,025-0,05% от общего объема. По окончании инактивации АЭЭИ нейтрализовали внесением в суспензию тиосульфата натрия [8]. Полученный антиген очищали от балластных примесей с помощью ПГМГ, который вносили в суспензию до концентрации 0,005-0,007% от общего объема [10].
Авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма А №2269/ВНИИЗЖ/2015 представлял собой суспензию, содержащую преимущественно 146S и 75 S иммуногенные компоненты вируса ящура. Качественное и количественное содержание вирусного сырья в полученном материале определяли методом турбидиметрии [11].
Для приготовления сорбированной вакцины используют вирусный материал, содержащий в 1 см3 не менее 0,5 мкг 146S и 75S иммуногенных компонентов вируса ящура.
Необходимую концентрацию иммуногенных компонентов вируса ящура в предлагаемой вакцине, составляющую не менее 3 мкг в 1 см3 готового препарата, получают путем добавления в авирулентный и очищенный антигенный материал расчетного количества адъюванта-сорбента ГОА. Оптимальным является содержание ГОА в 1 см3 готового препарата в диапазоне от 11000,0 мкг до 15000,0 мкг. К полученному концентрату дополнительно вносят 10%-ный водный раствор сапонина, достигая его содержание в диапазоне от 500,0 мкг до 1500,0 мкг в 1 см3 готового препарата.
Разработанная сорбированная вакцина представляет собой жидкость светло-желтого цвета с рыхлым осадком сорбента, который образуется на дне флакона при хранении и легко разбивается в гомогенную взвесь при встряхивании.
Предлагаемое изобретение включает следующую совокупность существенных признаков, обеспечивающих получение технического результата во всех случаях, на которые спрашивается правовая охрана.
1. Вакцина инактивированная сорбированная против ящура типа А.
2. Активное вещество в виде авирулентного и очищенного антигенного материала из гомологичного возбудителю инфекции штамма вируса ящура А №2269/ВНИИЗЖ/2015 в эффективном количестве.
3. Целевые добавки.
Признаками изобретения, характеризующими предлагаемую вакцину и совпадающими с признаками прототипа, в том числе родовое понятие, отражающее назначение, являются:
1. Вакцина инактивированная сорбированная против ящура типа А;
2. Активное вещество;
3. Целевые добавки.
По сравнению с вакциной-прототипом существенным отличительным признаком предлагаемой вакцины является то, что в качестве активного вещества готовый препарат содержит авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма А №2269/ВНИИЗЖ/2015 вируса ящура типа А в эффективном количестве.
Предлагаемое изобретение характеризуется также другими отличительными признаками, выражающими конкретные формы выполнения или особые условия его использования.
1. Авирулентный и очищенный антигенный материал из гомологичного возбудителю инфекции штамма А №2269/ВНИИЗЖ/2015, полученный в чувствительной биологической системе и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S и 75S иммуногенные компоненты вируса ящура типа А.
2. Авирулентный и очищенный антигенный материал из гомологичного возбудителю инфекции штамма А №2269/ВНИИЗЖ/2015, полученный предпочтительно в перевиваемой культуре клеток животного происхождения и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S и 75S иммуногенные компоненты вируса ящура типа А.
3. Авирулентный и очищенный антигенный материал из гомологичного возбудителю инфекции штамма А №2269/ВНИИЗЖ/2015, полученный предпочтительно в перевиваемой суспензионной клеточной линии ВНК-21/2-17 и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S и 75S иммуногенные компоненты вируса ящура типа А.
4. Авирулентный и очищенный антигенный материал из гомологичного возбудителю инфекции штамма А №2269/ВНИИЗЖ/2015, полученный предпочтительно в перевиваемой суспензионной клеточной линии ВНК-21/2-17 и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S и 75S иммуногенные компоненты вируса ящура типа А в количестве не менее 3,0 мкг в 1 см3 готового препарата.
5. В качестве целевой добавки вакцина содержит адъювант-сорбент ГОА.
6. ГОА предпочтительно в количестве 11000,0-15000,0 мкг в 1 см3 готового препарата.
7. В качестве целевой добавки вакцина содержит сапонин.
8. Сапонин предпочтительно в количестве 500,0-1500,0 в 1 см3 готового препарата.
9. Авирулентный и очищенный антигенный материал из гомологичного возбудителю инфекции штамма А №2269/ВНИИЗЖ/2015, полученный предпочтительно в перевиваемой суспензионной клеточной линии ВНК-21/2-17 и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S и 75 S иммуногенные компоненты вируса ящура типа А, ГОА, сапонин в соотношении, мкг/см3, готового препарата:
антигенный материал - не менее 3,0 мкг/см3,
ГОА - 11000,0-15000,0 мкг/см3,
сапонин - 500,0-1500,0 мкг/см3.
Предлагаемая вакцина обладает высокой иммуногенной активностью и обеспечивает надежную защиту против вируса ящура серотипа А, циркулирующего в странах Закавказья, Центральной Азии, Среднего и Ближнего Востока.
Достижение технического результата от использования изобретения достигается тем, что в состав предлагаемой вакцины введен в качестве активного вещества антигенный материал из штамма А №2269/ВНИИЗЖ/2015 вируса ящура серотипа А, обладающего высокой биологической, антигенной и иммуногенной активностью в нативном виде и после инактивации и обеспечивающего получение противоящурной вакцины сорбированной инактивированной, создающей эффективную защиту восприимчивых животных против вируса ящура серотипа А, вызывающего вспышки заболевания в последние годы в странах Закавказья, Центральной Азии, Среднего и Ближнего Востока.
Штамм А №2269/ВНИИЗЖ/2015 вируса ящура типа А депонирован 01 февраля 2015 года в Коллекцию штаммов микроорганизмов Федерального государственного бюджетного учреждения «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГБУ «ВНИИЗЖ») под регистрационным номером (ссылкой): штамм ВЯ А №2269/ВНИИЗЖ/2015 (производственный), (контрольный КРС), (контрольный свиной).
По сравнению с известными штаммами А №2269/ВНИИЗЖ/2015 обладает более высокой инфекционной, антигенной и иммуногенной активностью в нативном виде и после инактивации.
Экспериментально подтверждена возможность использования вируса ящура А №2269/ВНИИЗЖ/2015 для контроля антигенной и иммуногенной активности, а также для изготовления биопрепаратов с целью диагностики и специфической профилактики ящура типа А.
Сущность изобретения пояснена на дендрограмме, отражающей филогенетические взаимоотношения штамма вируса ящура А №2269/ВНИИЗЖ/2015 с эпизоотическими и вакцинными штаммами вируса ящура серологического типа А. Дендрограмма основана на сравнении полных нуклеотидных последовательностей гена VP1.
Сущность изобретения пояснена в перечне последовательностей, в котором:
SEQ ID NO: 1 представляет последовательность нуклеотидов гена VP1 штамма А №2269/ВНИИЗЖ/2015 вируса ящура типа А;
SEQ ID NO: 2 представляет последовательность аминокислот белка VP1 штамма А №2269/ВНИИЗЖ/2015 вируса ящура типа А.
Штамм А №2269/ВНИИЗЖ/2015 вируса ящура типа А характеризуется следующими признаками и свойствами.
Морфологические признаки
Штамм А №2269/ВНИИЗЖ/2015 вируса ящура типа А относится к семейству Picornaviridae, роду Aphtovirus, серотипу А и обладает морфологическими признаками, характерными для возбудителя ящура: форма вириона икосаэдрическая, размер 23-25 нм. Вирион состоит из молекулы РНК, заключенной в белковую оболочку. Белковая оболочка состоит из 32 капсомеров, расположенных в кубической симметрии.
Антигенные свойства
По своим антигенным свойствам штамм А №2269/ВНИИЗЖ/2015 вируса ящура относится к серотипу А. Вирус стабильно нейтрализуется гомологичной антисывороткой. Вирус не проявляет гемагглютинирующей активности (ГА-активности). У переболевших животных в сыворотке крови образуются антитела, выявляемые в иммуноферментном анализе (ИФА) и реакции микронейтрализации (РМН).
При гипериммунизации морских свинок концентрированный антиген из инактивированного вируса ящура типа А №2269/ВНИИЗЖ/2015 индуцирует образование вирусспецифических антител, выявляемых в РСК в разведении 1:40.
Методом нуклеотидного секвенирования была определена первичная структура гена VP1 вируса ящура типа А №2269/ВНИИЗЖ/2015 и выведена первичная структура белка VP1. Сравнительный анализ нуклеотидных последовательностей показал, что штамм вируса ящура типа А №2269/ВНИИЗЖ/2015 значительно отличается от производственных штаммов типа А.
Степень нуклеотидных различий последовательностей штамма А №2269/ВНИИЗЖ/2015 со штаммами вируса ящура серологического типа А составило: А22№550 - 16,12%, А22/Ирак/64 - 15,78%, А/Иран/96 - 15,78%, А/Армения/98 - 15,34%, А/Турция/06 - 18,47%, А/Иран/05 - 18,62%.
Филогенетический анализ показал, что штамм А №2269/ВНИИЗЖ/2015 принадлежит к генетической линии G-VII топотипа Азия.
Антигенное родство штамма ВЯ А №2269/ВНИИЗЖ/2015 с имеющимися производственными штаммами ВЯ типа А исследовано серологическим методом в перекрестной реакции микронейтрализации (РМН). Штамм А №2269/ВНИИЗЖ/2015 антигенно отличается от производственных штаммов А22 №550, А/Ирак/64, А/Иран/97, А/Турция/06 (А/Иран/05), А №2187/Кути/13, А №2171/Кабардино-Балкарский/13.
Результаты исследований в РМН представлены в таблице 1. Антигенное соответствие (r1) составило для А22 №550 - 0,01, А/Ирак/64 - 0,01, А/Иран/97 - 0,05, А/Турция/06 - 0,02, А №2187/Кути/13 - 0,01, А №2171/Кабардино-Балкарский/13 - 0,06. При значении r1 ≥ 0,3 полевой изолят и производственный штамм являются близкородственными, и вакцина из производственного штамма будет защищать от эпизоотического вируса, при значении r1 < 0,3 полевой изолят отличается от производственного штамма, и вакцина из данного штамма не защищает от эпизоотического вируса [12, 13].
Биотехнологические характеристики
Штамм А №2269/ВНИИЗЖ/2015 репродуцируется в первично-трипсинизированной монослойной культуре клеток почки свиньи (СП), перевиваемых культурах клеток почки сибирского горного козерога (ПСГК-30), IB-RS-2, и в течение 17-24 часов инкубирования вируса в указанных культурах клеток накапливается от 6,75 до 7,25 1g ТЦД50/см3. При высокой множественности заражения (1-10 ТЦД/клетка) вызывает ЦПД через 24 часа. Сохраняет исходные характеристики при пассировании в клеточных культурах на протяжении 3 пассажей (срок наблюдения).
Гено- и хемотаксономическая характеристика
Штамм А №2269/ВНИИЗЖ/2015 вируса ящура типа А является РНК-содержащим вирусом с молекулярной массой 7×106Д.
Нуклеиновая кислота представлена одноцепочной линейной молекулой молекулярной массой 2,8×106Д. Вирион имеет белковую оболочку, состоящую из четырех основных белков VP1 VP2, VP3 и VP4. Липопротеиновая оболочка отсутствует.
Основным антигенным белком является VP1. В вирионе содержится приблизительно 31,5% РНК и 68,5% белка. Вирионная РНК является инфекционной и участвует в образовании белков-предшественников в инфицированных клетках. Предшественники, в свою очередь, расщепляются с образованием более стабильных структурных и неструктурных полипептидов вируса. Из 8 неструктурных полипептидов, накапливающихся в инфицированных клетках, один (VP66a) является РНК-зависимой РНК-полимеразой, участвующей в репликации РНК новых вирионов.
Физические свойства
Масса вириона составляет 8,4×10-18 г. Коэффициент седиментации 146S в градиенте сахарозы. Плавучая плотность 1,45 г/см3.
Устойчивость к внешним факторам
Штамм А №2269/ВНИИЗЖ/2015 устойчив к эфиру, хлороформу, фреону, ацетону и другим органическим растворителям и детергентам.
Наиболее стабилен при pH 7,2-7,6. Сдвиги pH как в кислую, так и в щелочную сторону ведут к инактивации вируса. Чувствителен к формальдегиду, УФ-облучению, γ-облучению, высоким температурам. Дополнительные признаки и свойства
Иммуногенная активность - иммуногенен в составе инактивированной вакцины.
Антигенная активность - введение инактивированного антигена морским свинкам индуцирует образование вирусоспецифических антител.
Реактогенность - реактогенными свойствами не обладает.
Патогенность - патогенен для парнокопытных животных, новорожденных мышат, морских свинок.
Вирулентность - вирулентен для естественно-восприимчивых животных при контактном, аэрозольном и парентеральном заражении.
Стабильность - сохраняет исходные биологические свойства при пассировании в чувствительных биологических системах в течение 5 пассажей (срок наблюдения).
Исходя из полученных данных, можно утверждать, что штамм А №2269/ВНИИЗЖ/2015 по антигенному и иммунологическому спектрам является оригинальным, в таксономическом отношении новым, ранее неизвестным вариантом вируса ящура типа А, обладает более высокой протективной и иммуногенной активностью.
Для снижения эпизоотической опасности ящура типа А и предотвращения возникновения новых очагов болезни важна своевременная вакцинопрофилактика, что требует разработки высокоиммуногенной вакцины.
Получена высокоиммуногенная инактивированная сорбированная вакцина против ящура типа А из штамма А №2269/ВНИИЗЖ/2015.
Сущность предлагаемого изобретения пояснена также примерами его осуществления и использования, которые не ограничивают объем правовой охраны изобретения.
Пример 1. Получение и исследование биологических свойств штамма А№2269/ВНИИЗЖ/2015 вируса ящура.
Вирусный изолят, послуживший источником для получения штамма А №2269/ВНИИЗЖ/2015, был выделен в ФГБУ «ВНИИЗЖ» из проб афтозного материала, полученных в декабре 2015 года от подозреваемых в заболевании ящуром свиней из села Аразап, Армавирский марз, Республика Армения (экспертиза №2269/2015). Пробы афтозного материала поступили в ФГБУ «ВНИИЗЖ» 25 декабря 2015 года.
При выделении вируса с целью получения его однородной популяции, обладающей оптимальными биотехнологическими свойствами, использовали комплекс биологических, вирусологических и биохимических методов, предусмотренных методическими указаниями по выявлению и идентификации штаммов вируса ящура [14].
Биологические и вирусологические методы включали:
Выделение вируса проводили в культуре первично-трипсинизированных клеток СП, перевиваемых линиях клеток ПСГК-30, IB-RS-2 с последующей адаптацией в течение 3 пассажей. Применяемые клеточные линии выращивали с использованием требуемых питательных сред в стационарных условиях в культуральных флаконах с площадью поверхности 25 см2, отмывали от ростовой среды и заражали 10%-ной суспензией афтозного материала (множественность заражения составляла 1-10 ТЦД50 на клетку), приготовленной в растворе Хенкса с 0,5% гидролизата лактальбумина (ГЛА) и антибиотиками по стандартной рецептуре. Для удаления микрофлоры и балластных клеточных компонентов суспензию обрабатывали 10% хлороформа. После контакта с вирусом при температуре 37°С в течение 0,5 ч во флаконы вносили по 5 см3 поддерживающей среды и инкубировали при температуре 37°С до появления ЦПД вируса, характеризующегося округлением клеток, дегенерацией и отделением клеток от стекла, повышение оптической плотности суспензии. После развития ЦПД флаконы подвергали процессу замораживания-оттаивания, очистке клеточной взвеси хлороформом и центрифугированию при 3000 об/мин (1200 g) в течение 0,25 ч. Полученный вируссодержащий материал использовали для последующих пассажей и исследования в РСК на наличие вирусного антигена, применяя коммерческие типоспецифические сыворотки, хранящихся в музее ФГБУ «ВНИИЗЖ». Возбудитель ящура считали адаптированным к культурам клеток, если в течение 20-24 часов клеточный монослой деструктировал под влиянием вируса на 90-100%.
Вирус, адаптированный к клеткам линий ПСГК-3030, IB-RS-2 и ВНК-21/2-17, использовали с целью получения антигена для РСК. Результаты адаптации вируса к указанным клеточным культурам представлены в таблице 2, данные которой свидетельствуют о высокой адаптационной способности штамма А №2269/ВНИИЗЖ/2015 вируса ящура типа А к использованным линиям клеток.
Пример 2. Сравнительный анализ биологических свойств штамма А №2269/ВНИИЗЖ/2015 с производственными штамма вируса ящура типа А.
При изучении свойств штамма А №2269/ВНИИЗЖ/2015 выявлены значительные преимущества в сравнении с используемыми производственными штаммами.
В таблицах 3 и 4 приведены результаты культивирования штаммов А №2269/ВНИИЗЖ/2015 и А №2187/Кути/2013 вируса ящура типа А, из которых следует:
1) штаммы А №2187/Кути/2013 и А №2269/ВНИИЗЖ/2015 имеют разное время репродукции, 10,30±0,35 и 15,35±0,58 часов, соответственно;
2) процент выхода иммуногенных компонентов при культивировании штамма А №2269/ВНИИЗЖ/2015 вируса ящура выше, чем у штамма А №2187/Кути/2013.
Пример 3. Получение инактивированного антигена.
Инактивированную сорбированную вакцину против ящура типа А производят из штамма А №2269/ВНИИЗЖ/2015 вируса ящура, выращенного в суспензионной перевиваемой клеточной линии ВНК-21/2-17. В качестве поддерживающей среды используют раствор Эрла без внесения сыворотки крови с добавлением ФГМС, ГБКС и антибиотиков при pH 7,4-7,6. Культуру клеток заражают вирусом из расчета 0,005-0,200 ТЦД50/клетка.
Культивирование вируса проводят при температуре 36-37°С. Через 6-7 часов инкубирования определяют количество живых и мертвых клеток при окраске трипановым синим. Если количество живых клеток составляет 15-20%, то экспозицию продлевают еще 2-3 часа. При доле мертвых клеток, равной 90-95%, культивирование прекращают, и вируссодержащую суспензию контролируют на стерильность и содержание 146S и 75S компонентов. Количество 146S и 75S компонентов для сорбированной вакцины в суспензии должно составлять не менее 0,5 мкг/см3.
Пример 4. Исследование влияния инактивации и очистки антигенного материала с помощью АЭЭИ и ПГМГ на иммуногенные (146S и 75S) компоненты вируса ящура штаммов А №2269/ВНИИЗЖ/2015 и А №2187/Кути/2013.
По окончании цикла репродукции вируса ящура, не прекращая процесс термостатирования, в вируссодержащую суспензию добавляют 15-20%-ный раствор АЭЭИ, подкисленный ледяной уксусной кислотой, корректируя pH 8,0-8,5. Конечная концентрация АЭЭИ в вируссодержащей суспензии должна быть равной 0,025-0,050%. Инактивацию инфекционности вируса проводят в течение 12-24 часов при температуре 36-37°С и pH 7,2-7,6 с перемешиванием через 5-6 часов в течение 3-5 минут. Остаток АЭЭИ нейтрализуют добавлением тиосульфата натрия.
В теплую суспензию добавляют 10%-ный раствор ПГМГ до концентрации 0,005-0,007% для флокуляции балластных примесей и инактивации возможных контаминантов. Флокулированные балластные примеси подвергают седиментации с последующей декантацией.
В таблице 5 приведены результаты исследований по изучению влияния инактивации и очистки антигенного материала с помощью АЭЭИ и ПГМГ на иммуногенные (146S и 75 S) компоненты вируса ящура штаммов А №2269/ВНИИЗЖ/2015 и А №2187/Кути/2013. Из таблицы 5 следует, что иммуногенные компоненты штамма А №2269/ВНИИЗЖ/2015 вируса ящура не уступают в устойчивости к инактивации и очистке в условиях производства штамму А №2187/Кути/2013. Особенно важным является тот факт, что в процессе инактивации и очистки вируса из штамма А №2269/ВНИИЗЖ/2015 концентрация 146S и 75S компонентов, полученных при репродукции вируса, не снижается.
Пример 5. Изготовление сорбированной вакцины против вируса ящура из штамма А №2269/ВНИИЗЖ/2015.
Полученный антиген контролируют на содержание вирусспецифического белка, 146S и 75S компонентов вируса, авирулентность и стерильность. Необходимую концентрацию 146S и 75S компонентов в 1 см для сорбированной вакцины достигают путем концентрирования антигена ГОА.
В охлажденную суспензию антигена при работающей мешалке вносят 3% ГОА, перемешивают содержимое в течение 30 минут. После седиментации ГОА сливают расчетный объем оставшейся суспензии. Конечная концентрация ГОА должна находиться в пределах 1,750±0,300 (p<0,001 мкг/см3, n=10), а содержание 146S и 75S компонентов вируса ящура в готовом препарате - не менее 3,0 мкг/см3. Затем в суспензию добавляют дополнительно 10% раствор сапонина до конечной концентрации 0,075%, что соответствует 750,0 мкг сапонина в 1 см готовой вакцины. Вакцину расфасовывают в стеклянные или пластиковые флаконы и проводят контроль ее стерильности в соответствии с ГОСТ 28085-89.
Пример 6. Оценка авирулентности и безвредности сорбированной противоящурной вакцины из штамма А №2269/ВНИИЗЖ/2015.
Внешний вид и оптимальный компонентный состав вакцины. Авирулентность и безвредность вакцины оценивают на 5 головах КРС, вводя вакцину сначала под слизистую языка в дозе 2,0 см3, а затем подкожно в дозе 10,0 см3. Наблюдение за клиническим состоянием животных ведут в течение 10 суток. Авирулентную, безвредную и стерильную вакцину проверяют на иммуногенную активность на КРС или на морских свинках.
Полученная вакцина представляет собой жидкость светло-желтого цвета с рыхлым белым осадком сорбента, который образуется на дне флакона при хранении и легко разбивается в гомогенную взвесь при встряхивании. Оптимальный компонентный состав полученной сорбированной вакцины против ящура типа А отражен в таблице 6.
Пример 7. Оценка гуморального иммунитета у КРС при использовании сорбированной противоящурной вакцины из штамма
А №2187/Кути/2013 против гетерологичного штамма А №2269/ВНИИЗЖ/2015.
Изучен гуморальный иммунитет у КРС, привитого сорбированной вакциной из штамма А №2187/Кути/2013, против гетерологичного штамма А №2269/ВНИИЗЖ/2015 вируса ящура, оценивали уровень иммунного ответа против вакцинного штамма А №2187/Кути/2013 и против штамма А №2269/ВНИИЗЖ/ 2015. Испытание проводили с использованием 10 голов КРС. Сорбированную вакцину вводили подкожно в дозе 2,0 см3. Результаты исследований представлены в таблице 7, из которой видно, что сорбированная вакцина у КРС стимулировала выработку вируснейтрализующих антител (ВНА) против штамма А №2187/Кути/2013 в количестве от 5,05±0,12 log2, а против гетерологичного штамма А №2269/ВНИИЗЖ/2015 титр ВНА был более, чем в 2 раза меньше и составлял от 2,25±0,27 log2. Разница в титрах ВНА является существенной и статистически достоверной (p<0,001 log2, n=10). Из этого следует, что вакцина, изготовленная из производственного штамма А №2187/Кути/2013 не вызывает формирования гуморального иммунитета для защиты животных от заражения гетерологичным штаммом А №2269/ВНИИЗЖ/2015 вирусом ящура. По данным OIE (МЭБ) титр вируснейтрализующих антител против возбудителя ящура должен составлять не менее 5,00 log2 [15].
Пример 8. Сравнительный анализ формирования гуморального иммунитета у КРС при использовании сорбированной противоящурной вакцины из штамма А №2269/ВНИИЗЖ/2015, изготовленной так, как описано в примерах 3, 4 и 5 и содержащей следующие компоненты, мкг в 1 см3 готового препарата:
авирулентный и очищенный | |
антигенный материал из штамма | |
А №2269/ВНИИЗЖ/2015 вируса ящура типа А | 3,0 |
ГОА | 1740,0 |
сапонин | 750,0. |
Изучен гуморальный иммунитет у КРС, привитого сорбированной вакциной из штамма А №2269/ВНИИЗЖ/2015 вируса ящура, против вакцинных штаммов вируса ящура типа А. Уровень гуморального иммунитета оценивали против вакцинных штаммов А №2171/Кабардино-Балкарский/2013, А №2187/ Кути/2013, А22 Ирак 24/64, А №2029 Турция/2006 и против гомологичного штамма А №2269/ВНИИЗЖ/2015. Результаты анализа отражены в таблице 8.
Титры антител на 21 сутки после вакцинации против гомологичного штамма А №2269/ВНИИЗЖ/2015 были в 1,30-3,46 раз выше, чем против производственных штаммов.
Таким образом, приведенная выше информация свидетельствует о том, что вакцина сорбированная инактивированная против ящура типа А, воплощающая предлагаемое изобретение, предназначена для использования в сельском хозяйстве, а именно в ветеринарной вирусологии и биотехнологии; подтверждена возможность осуществления представленного; вакцина, изготовленная из штамма А №2269/ВНИИЗЖ/2015 в соответствии с предлагаемым изобретением обладает высокой иммуногенной активностью и способна обеспечить эффективную защиту восприимчивых животных против эпизоотического вируса ящура типа А, циркулирующего в странах Закавказья, Центральной Азии, Среднего и Ближнего Востока.
Источники информации, принятые во внимание при составлении описания изобретения к заявке на выдачу патента РФ на изобретение «Вакцина сорбированная инактивированная против ящура типа А»:
1. Domingo, Е. Evolution of FMD virus / E. Domingo, C. Escarmis, E. Baranovski // Virus Res. - 2003. - Vol. 91. - P. 47-63.
2. Узюмов, В.Л. Ультраструктура и физико-химические свойства вируса ящура / В.Л. Узюмов: Фрунзе: Кыргызстан, 1970. - 246 с.
3. Дудников А.И., Борисов В.В., Дудников С.А. Противояшурный иммунитет и практические достижения в области противоящурной защиты // Пробл. зооiженерii та вет. Медицини: зб. наук. прац. - Харькiв, 2007. - Вип. 15(40). - Ч. 2, - т. 1. - С. 116-120.
4. Временная инструкция по изготовлению и контролю противоящурной концентрированной гидроокись алюминиевой формолвакцины из лапинизированного вируса А22. Утверждена ГУВ СССР 25.03.1971 г.
5. Патент РФ №2451745, С12 №7/00, 27.05.2010 г.
6. Патент РФ №2563345, А61К 39/135, 20.09.2015 г.
7. Патент РФ №2553219, С12 №7/00, 10.06.2015 г.
8. Заявка на изобретение №2016127971/10 от 12.07.2016 г.
9. Патент РФ №594771, А61К 39/12, 07.07.93 г.
10. Патент РФ №2054039, C12N 7/02, А61К 39/135, 10.02.1996 г.
11. Авт. свид. СССР №784335, C12Q 1/02, 20.03.2000 г.
12. OIE. Manual of diagnostic tests and vaccines for terrestrial animals - 7th Ed. -, Paris, 2012-Vol. 1, Chapter 2.1.5. - P. 166-169.
13. Selection of foot-and-mouth disease vaccine strains a review / D.J. Paton, J.F. Valacher, J. Bergman [et al.] // Rev. Sci. Tech. OIE. - 2005. - Vol. 24(3). - P. 981-983.
14. Методические указания по выявлению и идентификации штаммов вируса ящура / Гусев А.А., Захаров В.М., Шажко Ж.А. [и др.]. Владимир, 2002,31 с.
15. OIE. Manual of diagnostic tests and vaccines for terrestrial animals - 24th Ed. -, Paris, 2016 - Vol. 1, Chapter 2.1.5. - P. 166-169.
Примечание: *ВСБ - вирусспецифический белок
Примечание: *ВСБ - вирусспецифический белок
Примечание: *ВСБ - вирусспецифический белок
Примечание: А №2269 - штамм А №2269/ВНИИЗЖ/2015 культурального вируса ящура,
А Турция - штамм А №2029/Турция/2006 культурального вируса ящура,
А КБР - штамм А №2171/Кабардино-Балкарский/2013 культурального вируса ящура,
А Кути - штамм А №2187/Кути/2013 культурального вируса ящура,
А22 Ирак - штамм А22 Ирак 24/64 культурального вируса ящура
Примечание: А №2269 - штамм А №2269/ВНИИЗЖ/2015 культурального вируса ящура,
А Турция - штамм А №2029/Турция/2006 культурального вируса ящура,
А КБР - штамм А №2171/Кабардино-Балкарский/2013 культурального вируса ящура,
А Кути - штамм А №2187/Кути/2013 культурального вируса ящура,
А22Ирак - штамм А22 Ирак 24/64 культурального вируса ящура.
Claims (10)
1. Вакцина инактивированная сорбированная против ящура типа А штамма №2269/ВНИИЗЖ/2015, содержащая в эффективном количестве в качестве активного вещества авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма вируса ящура Aphtae epizooticae, сем. Picornaviridae, рода Aphtovirus, типа А, депонированного в Коллекцию штаммов микроорганизмов ФГБУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГБУ «ВНИИЗЖ») под регистрационным номером (авторским наименованием): штамм ВЯ А №2269/ВНИИЗЖ/2015 (производственный), (контрольный КРС), (контрольный свиной), и целевые добавки.
2. Вакцина по п. 1, отличающаяся тем, что она содержит авирулентный и очищенный антигенный материал из гомологичного возбудителю инфекции штамма ВЯ А №2269/ВНИИЗЖ/2015, полученный в чувствительной биологической системе и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S и 75S иммуногенные компоненты вируса ящура типа А.
3. Вакцина по п. 2, отличающаяся тем, что она содержит авирулентный и очищенный антигенный материал из гомологичного возбудителю инфекции штамма ВЯ А №2269/ВНИИЗЖ/2015, полученный предпочтительно в перевиваемой культуре клеток ВНК-21/2-17 и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S и 75S иммуногенные компоненты вируса ящура типа А.
4. Вакцина по п. 3, отличающаяся тем, что она содержит авирулентный и очищенный антигенный материал из гомологичного возбудителю инфекции штамма ВЯ А №2269/ВНИИЗЖ/2015, полученный предпочтительно в перевиваемой культуре клеток ВНК-21/2-17 и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S и 75S иммуногенные компоненты вируса ящура типа А в количестве не менее 3,0 мкг в 1 см3 готового препарата.
5. Вакцина по п. 1, отличающаяся тем, что в качестве целевой добавки она содержит сорбент гидроокись алюминия (ГОА).
6. Вакцина по п. 5, отличающаяся тем, что она содержит ГОА предпочтительно в количестве 11000,0-15000,0 мкг в 1 см3 готового препарата.
7. Вакцина по п. 1, отличающаяся тем, что в качестве целевой добавки она содержит сапонин.
8. Вакцина по п. 7, отличающаяся тем, что она содержит сапонин предпочтительно в количестве 500,0-1500,0 мкг в 1 см3 готового препарата.
9. Вакцина по любому из пп. 1-8, отличающаяся тем, что она содержит авирулентный и очищенный антигенный материал из гомологичного возбудителю инфекции штамма ВЯ А №2269/ВНИИЗЖ/2015, полученный предпочтительно в перевиваемой культуре клеток ВНК-21/2-17 и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S и 75S иммуногенные компоненты вируса ящура типа А, ГОА, сапонин в соотношении, мкг в 1 см3 готового препарата:
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2017145756A RU2681815C1 (ru) | 2017-12-25 | 2017-12-25 | Вакцина инактивированная сорбированная против ящура типа А |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2017145756A RU2681815C1 (ru) | 2017-12-25 | 2017-12-25 | Вакцина инактивированная сорбированная против ящура типа А |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2681815C1 true RU2681815C1 (ru) | 2019-03-12 |
Family
ID=65805821
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2017145756A RU2681815C1 (ru) | 2017-12-25 | 2017-12-25 | Вакцина инактивированная сорбированная против ящура типа А |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2681815C1 (ru) |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2563345C1 (ru) * | 2014-04-16 | 2015-09-20 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") | Вакцина инактивированная сорбированная против ящура типа а |
-
2017
- 2017-12-25 RU RU2017145756A patent/RU2681815C1/ru active
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2563345C1 (ru) * | 2014-04-16 | 2015-09-20 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") | Вакцина инактивированная сорбированная против ящура типа а |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
OIE. Manual of diagnostic tests and vaccines for terrestrial animals, Chapter 2.1.8 version adopted in May 2017. * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN106661102A (zh) | 作为对抗肠病毒感染之免疫原的病毒颗粒及其制造 | |
RU2593718C1 (ru) | Вакцина инактивированная эмульсионная против ящура типов а, о, азия-1 | |
RU2603003C1 (ru) | Вакцина инактивированная сорбированная против ящура типов а, о, азия-1 | |
RU2451745C2 (ru) | ШТАММ А 2045/КИРГИЗИЯ/2007 ВИРУСА ЯЩУРА Aphtae epizooticae ТИПА А ДЛЯ КОНТРОЛЯ АНТИГЕННОЙ И ИММУНОГЕННОЙ АКТИВНОСТИ ПРОТИВОЯЩУРНЫХ ВАКЦИН И ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ БИОПРЕПАРАТОВ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ И СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКИ ЯЩУРА ТИПА А | |
RU2699671C1 (ru) | Вакцина для ранней защиты против ящура типа О инактивированная эмульсионная | |
RU2665849C1 (ru) | Вакцина инактивированная эмульсионная против ящура типа О | |
RU2682876C1 (ru) | Вакцина инактивированная эмульсионная против ящура типа О | |
RU2563522C1 (ru) | ШТАММ О №2102/Забайкальский/2010 ВИРУСА ЯЩУРА Aphtae epizooticae ТИПА О ДЛЯ КОНТРОЛЯ АНТИГЕННОЙ И ИММУНОГЕННОЙ АКТИВНОСТИ ПРОТИВОЯЩУРНЫХ ВАКЦИН И ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ БИОПРЕПАРАТОВ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ И СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКИ ЯЩУРА ТИПА О | |
RU2681815C1 (ru) | Вакцина инактивированная сорбированная против ящура типа А | |
RU2143921C1 (ru) | Вакцина против ящура типа а и способ ее изготовления | |
RU2242513C1 (ru) | Штамм а (грузия) 1999/№1721 вируса ящура типа а для изготовления диагностических и вакцинных препаратов | |
RU2603255C9 (ru) | ШТАММ А №2155/Забайкальский/2013 ВИРУСА ЯЩУРА Aphtae epizooticae ТИПА А ДЛЯ КОНТРОЛЯ АНТИГЕННОЙ И ИММУНОГЕННОЙ АКТИВНОСТИ И ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ БИОПРЕПАРАТОВ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ И СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКИ ЯЩУРА ТИПА А | |
RU2665850C1 (ru) | Вакцина инактивированная эмульсионная против ящура типа А | |
WO2014167582A2 (en) | Vaccine composition for prophylaxis in ruminants | |
RU2212895C2 (ru) | Вакцина против ящура типа о и способ ее изготовления | |
RU2526570C2 (ru) | Вакцина против ящура типа а инактивированная сорбированная | |
RU2563345C1 (ru) | Вакцина инактивированная сорбированная против ящура типа а | |
RU2294760C2 (ru) | Вакцина инактивированная сорбированная против ящура типа а | |
RU2297452C2 (ru) | Штамм азия-1/таджикистан/2004(1960) вируса ящура типа азия-1 для изготовления диагностических и/или вакцинных препаратов | |
RU2220744C1 (ru) | Вакцина против ящура типа азия-1 и способ ее изготовления | |
RU2204599C1 (ru) | Штамм № 1734 "приморский-2000" вируса ящура типа о для изготовления диагностических и вакцинных препаратов | |
RU2640261C1 (ru) | Штамм А N2269/ВНИИЗЖ/2015 вируса ящура Aphtae epizooticae типа А для контроля антигенной и иммуногенной активности и для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики ящура типа А | |
RU2658608C1 (ru) | Штамм О N 2311/Забайкальский/2016 вируса ящура Aphtae epizooticae типа О для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики ящура типа О | |
RU2140452C1 (ru) | Штамм n 1707 "армения-98" вируса ящура типа a для изготовления диагностических и вакцинных препаратов | |
RU2708326C1 (ru) | Штамм О N2344/Монголия/2017 вируса ящура Aphtae epizooticae типа О для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики ящура типа О |