RU2675535C1 - Achs/vniizzh/cv-1 strain of african swine fever, with decreased virulence for pigs, for virologic, diagnostic, molecular-genetic and surveillance studies - Google Patents
Achs/vniizzh/cv-1 strain of african swine fever, with decreased virulence for pigs, for virologic, diagnostic, molecular-genetic and surveillance studies Download PDFInfo
- Publication number
- RU2675535C1 RU2675535C1 RU2018117990A RU2018117990A RU2675535C1 RU 2675535 C1 RU2675535 C1 RU 2675535C1 RU 2018117990 A RU2018117990 A RU 2018117990A RU 2018117990 A RU2018117990 A RU 2018117990A RU 2675535 C1 RU2675535 C1 RU 2675535C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- strain
- virus
- swine fever
- asf
- arriah
- Prior art date
Links
- 241000282887 Suidae Species 0.000 title claims abstract description 20
- 208000007407 African swine fever Diseases 0.000 title claims description 62
- 230000001018 virulence Effects 0.000 title abstract description 10
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 title description 6
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 title 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims abstract description 61
- 241000701386 African swine fever virus Species 0.000 claims abstract description 40
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims abstract description 23
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 13
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 13
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 13
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 claims abstract description 5
- 241000977261 Asfarviridae Species 0.000 claims abstract description 3
- 241001533466 Asfivirus Species 0.000 claims abstract description 3
- 241000282552 Chlorocebus aethiops Species 0.000 claims abstract 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 claims description 18
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 10
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 claims description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 6
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 claims description 5
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 claims description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 3
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 claims description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 2
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 claims 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 abstract description 10
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 4
- 210000002798 bone marrow cell Anatomy 0.000 abstract description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 3
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 abstract description 3
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 14
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 13
- 210000001132 alveolar macrophage Anatomy 0.000 description 11
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 8
- 238000000034 method Methods 0.000 description 6
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 5
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 5
- 230000000521 hyperimmunizing effect Effects 0.000 description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 5
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 5
- 230000001894 hemadsorption Effects 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 4
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 4
- 241000283160 Inia Species 0.000 description 3
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 3
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- AJDIZQLSFPQPEY-UHFFFAOYSA-N 1,1,2-Trichlorotrifluoroethane Chemical compound FC(F)(Cl)C(F)(Cl)Cl AJDIZQLSFPQPEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 2
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 2
- 241001430197 Mollicutes Species 0.000 description 2
- 241000255969 Pieris brassicae Species 0.000 description 2
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 2
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 2
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 2
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 2
- 238000003771 laboratory diagnosis Methods 0.000 description 2
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 2
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 2
- 230000033458 reproduction Effects 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010067484 Adverse reaction Diseases 0.000 description 1
- 108090000565 Capsid Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 102100023321 Ceruloplasmin Human genes 0.000 description 1
- 241000867607 Chlorocebus sabaeus Species 0.000 description 1
- 206010011409 Cross infection Diseases 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 description 1
- 208000032163 Emerging Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 206010023232 Joint swelling Diseases 0.000 description 1
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 1
- 206010029803 Nosocomial infection Diseases 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 241000092202 Ornithodoros erraticus Species 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- 230000006838 adverse reaction Effects 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 1
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 1
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 description 1
- 210000000234 capsid Anatomy 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000034303 cell budding Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000001934 delay Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012757 fluorescence staining Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 230000001295 genetical effect Effects 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 230000001759 immunoprophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 230000004130 lipolysis Effects 0.000 description 1
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 101150057545 p72 gene Proteins 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 1
- 238000013081 phylogenetic analysis Methods 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 239000012798 spherical particle Substances 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Virology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии, в частности, к штаммам вируса африканской чумы свиней (АЧС), и может быть использовано в научно-исследовательских институтах и диагностических центрах в качестве штамма для приготовления специфического антигена, для получения серотипоспецифической сыворотки при проведении вирусологических, диагностических, молекулярно-генетических и мониторинговых исследований.The invention relates to the field of veterinary virology, in particular, strains of African swine fever virus (ASF), and can be used in research institutes and diagnostic centers as a strain for the preparation of a specific antigen, to obtain serotype-specific serum during virological, diagnostic, molecular genetic and monitoring studies.
На настоящий момент выделено более 500 штаммов и изолятов вируса африканской чумы свиней, различающихся по культурально-биологическим, молекулярно-генетическим и серологическим свойствам.To date, more than 500 strains and isolates of the African swine fever virus have been isolated, differing in cultural, biological, molecular genetic and serological properties.
Для классификации имеющихся штаммов и изолятов вируса АЧС используют результаты филогенетического анализа нуклеотидной последовательности гена B646L (р72), которые позволили разделить их на 23 генотипа, подразделяющихся на подтипы [13].To classify ASFV strains and isolates, the results of phylogenetic analysis of the nucleotide sequence of the B646L gene (p72) are used, which allowed them to be divided into 23 genotypes, subdivided into subtypes [13].
Для сероиммунотиповой классификации используют перекрестное заражение свиней и реакцию задержки гемадсорбции (РЗГАд) в культуре клеток костного мозга свиньи (KMC) или альвеолярных макрофагов свиньи (АМС) [3, 15].For pig immunoassay classification, cross-infection of pigs and the reaction of delayed hemi-adsorption (RHCA) in a culture of pig bone marrow cells (KMC) or porcine alveolar macrophages (AMS) are used [3, 15].
Согласно разработанной во ВНИИВВиМ классификации, на настоящий момент изоляты вируса АЧС с четко выраженными антигенными свойствами объединены в девять самостоятельных сероиммунологических типов, в десятую группу включены новые нетипированные изоляты вируса АЧС [5, 6].According to the classification developed by VNIIVViM, currently ASF virus isolates with clearly defined antigenic properties are combined into nine independent seroimmunological types; the newest untyped ASF virus isolates are included in the tenth group [5, 6].
Вирус АЧС не встречался на территории Российской Федерации (РФ) до 2007 года, вследствие чего история патентования различных штаммов вируса АЧС в нашей стране начинается с 2010 года, когда был зарегистрирован патент на первый российский штамм АЧС «Ставрополь 01/08». Штамм выделен от свиньи на территории Ставропольского края в 2008 г. Он обладает высокой инфекционной активностью, накапливается в культурах клеток костного мозга свиней и лейкоцитов свиней в титре 6,0-7,0 lg ГАЕ50/см3. Титр вируса на свиньях составляет 7,0-7,5 lg ЛД50/см3. Гибель зараженных свиней наступает с признаками, характерными для острой формы африканской чумы свиней через 3-6 суток после проявления клинических признаков болезни. Летальность достигает 100% [4].ASFV virus did not occur on the territory of the Russian Federation (RF) until 2007, as a result of which the history of patenting various strains of ASFV virus in our country begins in 2010, when the patent for the first Russian
На настоящий момент одновременно отмечается как значительное изменение вирулентности циркулирующего среди диких кабанов вируса и появление животных вирусоносителей, в крови которых выявляются и антитела, и вирусный геном, так и распространение среди домашнего поголовья свиней в ряде областей Сибирского региона высоковирулентного варианта вируса АЧС, близкого по своим характеристикам к изоляту Georgia 2007/1 [7, 10, 12]. Изолят вируса АЧС Georgia 2007/1, исходный вариант вируса, положивший начало эпизоотии в Грузии и сопредельных странах, таких как Армения. По данным В.М. Балышева, а также согласно анализу генома Gallardo С. et al., циркулирующий на территории РФ вирус АЧС относится ко II генотипу VIII серотипу [2, 11, 16].At the moment, both a significant change in the virulence of the virus circulating among wild boars and the appearance of animal virus carriers in the blood of which both antibodies and the viral genome are detected, as well as the distribution of a highly virulent ASF virus that is similar in its number to several domestic regions of the Siberian region characteristics to isolate Georgia 2007/1 [7, 10, 12]. The ASFV virus isolate Georgia 2007/1, the original version of the virus that marked the beginning of the epizootic in Georgia and neighboring countries such as Armenia. According to V.M. Balysheva, as well as according to the analysis of the genome of Gallardo C. et al., ASF virus circulating in the territory of the Russian Federation belongs to the II genotype VIII serotype [2, 11, 16].
Вирулентные изоляты и штаммы вируса используются для детального изучения патогенеза болезни, биологических свойств вируса и наработки антигенного сырья при изготовлении диагностических наборов, но они имеют ограниченное использование при получении типоспецифических сывороток. Штаммы вируса АЧС, с отличающимися от изолята Georgia 2007/1 свойствами: вирулентность, контагиозность, выраженность клинических признаков [1], необходимы как для определения основ патогенности вируса АЧС, так и при разработке диагностических препаратов, в том числе на основе гипериммунных сывороток.Virulent isolates and strains of the virus are used for a detailed study of the pathogenesis of the disease, the biological properties of the virus and the production of antigenic materials in the manufacture of diagnostic kits, but they are of limited use in the preparation of type-specific sera. Strains of the ASF virus, with properties different from the Georgia 2007/1 isolate: virulence, contagiousness, severity of clinical signs [1], are necessary both for determining the basics of the pathogenicity of the ASF virus and for the development of diagnostic drugs, including those based on hyperimmune sera.
Все вышеперечисленные факты делают актуальным получение штаммов со сниженной вирулентностью.All of the above facts make it relevant to obtain strains with reduced virulence.
Наиболее близким аналогом (прототипом) предлагаемого штамма является естественно аттенуированный изолят OURT88/3, который обладает низкой вирулентностью и индуцирует защиту у животных при контрольном заражении гомологичным вирулентным вирусом. Однако, у некоторых свиней после инокуляции наблюдаются побочные реакции, включая лихорадку и опухлость суставов. Он был выделен более тридцати лет назад, генетически и антигенно отличается отныне существующих вариантов вируса АЧС, циркулирующего на территории Европы. Он принадлежит к I генотипу и IV серотипу, поэтому применение его в дальнейшем в качестве компонента диагностических систем является нецелесообразным [8, 14].The closest analogue (prototype) of the proposed strain is naturally attenuated isolate OURT88 / 3, which has low virulence and induces protection in animals during control infection with a homologous virulent virus. However, some pigs experience adverse reactions after inoculation, including fever and swollen joints. It was isolated more than thirty years ago; it is now genetically and antigenically different from existing variants of the ASF virus circulating in Europe. It belongs to genotype I and serotype IV; therefore, its further use as a component of diagnostic systems is impractical [8, 14].
В связи с этим возникла необходимость получить новый, обладающий стабильными культурально-биологическими свойствами, штамм АЧС, адаптированный к росту в перевиваемой культуре клеток CV-1, аттестованной и лицензированной для производства вакцин, т.е. разрешенной для использования в производстве иммунодиагностических и иммунопрофилактических средств и высокой продуктивностью антигена вируса АЧС.In this regard, the need arose to obtain a new ASF strain with stable cultural and biological properties, adapted to grow in CV-1 transplanted cell culture, certified and licensed for vaccine production, i.e. approved for use in the production of immunodiagnostic and immunoprophylactic agents and high productivity of ASF virus antigen.
Указанная задача решена путем получения штамма вируса африканской чумы свиней «АЧС/ВНИИЗЖ/CV-1», предназначенного для приготовления антигенсодержащих препаратов при выявлении антител в сыворотках крови домашних и диких животных для диагностики АЧС. Штамм также может быть использован при получении гипериммунной сыворотки для сероиммунотипирования изолятов вируса АЧС в РЗГАд, для определения сероиммунотипа вновь выделяемых природных вариантов вируса АЧС, а также может быть применен в качестве контрольного источника ДНК при проведении апробации тест-систем на основе ПЦР.This problem was solved by obtaining the strain of African swine fever virus "ASF / ARRIAH / CV-1", intended for the preparation of antigen-containing drugs for the detection of antibodies in the blood serum of domestic and wild animals for the diagnosis of ASF. The strain can also be used in the preparation of hyperimmune serum for seroimmunotyping ASFV isolates in RHCA, to determine the seroimmunotype of newly isolated natural variants of ASFV virus, and can also be used as a control DNA source for testing PCR-based test systems.
Изолят вируса АЧС, послуживший источником для получения штамма «АЧС/ВНИИЗЖ/CV-1», был выделен из селезенки дикого кабана на территории Таракановского лесничества, Одинцовского района, Московской области в 2014 году.The ASF virus isolate, which served as the source for the ASFV / ARRIAH / CV-1 strain, was isolated from the wild boar spleen in the Tarakanovsky forestry, Odintsovo district, Moscow region in 2014.
Полученный адаптированный к росту в перевиваемой культуре клеток CV-1 штамм вируса африканской чумы свиней «АЧС/ВНИИЗЖ/CV-1» депонирован в Коллекции штаммов микроорганизмов ФГБУ «ВНИИЗЖ» под регистрационным номером «Штамм вируса африканской чумы свиней - АЧС/ВНИИЗЖ/CV-1 (диагностический - Д)».The resulting strain of African swine fever virus adapted to growth in transplanted cell culture CV-1, ASF / ARRIAH / CV-1, was deposited in the Collection of microorganism strains of FSBI ARRIAH under registration number “African swine fever virus strain - ASF / ARRIAH / CV- 1 (diagnostic - D). "
По сравнению с известными штаммами, штамм вируса АЧС «АЧС/ВНИИЗЖ/CV-1» обладает способностью к репродукции в культуре клеток почки зеленой мартышки CV-1.Compared with the known strains, the strain of ASF virus "ASF / ARRIAH / CV-1" has the ability to reproduce in the cell culture of the kidney of the green monkey CV-1.
Экспериментально подтверждена возможность использования вируса африканской чумы свиней штамма «АЧС/ВНИИЗЖ/CV-1» для накопления и получения специфического культурального антигена с целью проведения диагностических исследований, изучения биологических свойств вируса и получения типоспецифической сыворотки.The possibility of using the virus of African swine fever strain ASF / ARRIAH / CV-1 for the accumulation and production of a specific cultural antigen for the purpose of conducting diagnostic studies, studying the biological properties of the virus and obtaining type-specific serum has been experimentally confirmed.
Штамм вируса африканской чумы свиней «АЧС/ВНИИЗЖ/CV-1» характеризуется следующими признаками и свойствами:The strain of the African swine fever virus "ASF / ARRIAH / CV-1" is characterized by the following features and properties:
Морфологические свойства.Morphological properties.
Штамм «АЧС/ВНИИЗЖ/CV-1» вируса африканской чумы свиней относится к семейству Asfarviridae, род Asfivirus. Обладает морфологическими признаками, характерными для возбудителя африканской чумы свиней: при электронно-микроскопическом исследовании в вируссодержащем материале обнаруживают сферические частицы диаметром 185-220 нм.The strain "ASF / ARRIAH / CV-1" of the virus of African swine fever belongs to the family Asfarviridae, genus Asfivirus. It has morphological characteristics characteristic of the causative agent of African swine fever: electron microscopic examination reveals spherical particles with a diameter of 185-220 nm in virus-containing material.
Наружный слой вириона представлен липопротеидной оболочкой, приобретаемой почкованием в процессе выхода из клетки. Под ней находится икосаэдрический капсид, далее расположена внутренняя липидная оболочка, в которую заключен кор вируса. Кор окружает электронно-плотный нуклеоид, содержащий геном, который представлен двуспиральной, линейной ковалентно замкнутой на концах молекулой ДНК, состоящей из 170-190 тыс. пар нуклеотидов.The outer layer of the virion is represented by a lipoprotein membrane, acquired by budding in the process of leaving the cell. Below it is an icosahedral capsid, then the inner lipid membrane, in which the core of the virus is enclosed, is located. The core is surrounded by an electron-dense nucleoid containing the genome, which is a double-stranded, linear DNA molecule covalently closed at the ends, consisting of 170-190 thousand pairs of nucleotides.
Антигенные свойства.Antigenic properties.
В состав зрелых вирионов вируса АЧС входит более 50 белков. Основные антигенные свойства штамма «АЧС/ВНИИЗЖ/CV-1» соответствуют таковым вируса АЧС: штамм обладает гемадсорбирующей активностью, выявляемой в культуре клеток АМС, культуральный антиген, полученный на основании предложенного штамма, взаимодействует со специфическими моноклональными антителами к основному капсидному белку р72.More than 50 proteins are part of the mature ASF virus virions. The main antigenic properties of the strain “ASF / ARRIAH / CV-1” correspond to those of the ASF virus: the strain has hemadsorbing activity detected in the cell culture of AMS, the culture antigen obtained on the basis of the proposed strain interacts with specific monoclonal antibodies to the main capsid protein p72.
Вирусспецифические антигены выявляются в иммуноферментном анализе, в реакциях прямой иммунофлуоресценции и задержки гемадсорбции.Virus-specific antigens are detected in an enzyme-linked immunosorbent assay, in reactions of direct immunofluorescence and delayed hemadsorption.
Генотаксономическая характеристика.Genotaxonomic characteristic.
Методом нуклеотидного секвенирования фрагмента гена B646L штамм вируса африканской чумы свиней «АЧС/ВНИИЗЖ/CV-1» отнесен ко II генотипу вируса АЧС.By the method of nucleotide sequencing of the B646L gene fragment, the strain of the African swine fever virus “ASF / ARRIAH / CV-1” was assigned to the ASF virus genotype II.
Генетическая принадлежность изобретения представлена на дендрограмме, отражающей филогенетические взаимоотношения штамма «АЧС/ВНИИЗЖ/CV-1» с эпизоотическими штаммами вируса африканской чумы свиней II генотипа. Дендрограмма основана на сравнении полных нуклеотидных последовательностей гена р72 (B646L).The genetic affiliation of the invention is presented on a dendrogram reflecting the phylogenetic relationships of the strain “ASF / ARRIAH / CV-1” with epizootic strains of the African swine fever virus genotype II. The dendrogram is based on a comparison of the complete nucleotide sequences of the p72 gene (B646L).
Сероиммунотиповая принадлежность.Seroimmunotype identity.
По результатам реакции задержки гемадсорбции (РЗГАд) с использованием референс-сыворотки к вирусу АЧС штамма «Армения 07», штамм «АЧС/ВНИИЗЖ/CV-1», адаптированный к росту в перевиваемой культуре клеток CV-1, отнесен к вирусу АЧС VIII серотипа. Результаты исследования представлены в таблице 2.According to the results of the reaction of delayed hemi-adsorption (RHCA) using reference serum to the ASF virus of the strain Armenia 07, the strain ASF / ARRIAH / CV-1, adapted for growth in transplanted cell culture CV-1, was classified as ASF virus of VIII serotype . The results of the study are presented in table 2.
Культуральные свойства.Cultural properties.
Вирус штамма «АЧС/ВНИИЗЖ/CV-1» размножается в первичных культурах клеток АМС и KMC, причем, его репродукция сопровождается адсорбцией 10-30 эритроцитов свиней на одну инфицированную клетку (феномен гемадсорбции - ГАд). Накопление вируса на 5-6 сутки составляет 6,5-7,5 lg ГАдЕ50/см3. В течение 5 серийных пассажей (срок наблюдения) штамм сохраняет данные свойства. Основные характеристики вируса АЧС штамм «АЧС/ВНИИЗЖ/CV-1» в культурах клеток АМС и CV-1 в процессе пассирования представлены в таблице 1.The virus of strain “ASF / ARRIAH / CV-1” propagates in primary cultures of AMS and KMC cells, moreover, its reproduction is accompanied by the adsorption of 10-30 pig red blood cells per infected cell (hemi-adsorption phenomenon). The accumulation of the virus on the 5-6th day is 6.5-7.5 lg GADE50 / cm 3 . For 5 serial passages (observation period), the strain retains these properties. The main characteristics of the ASFV virus strain ASFV / ARRIAH / CV-1 in cell cultures of AMS and CV-1 in the process of passage are presented in table 1.
С меньшей эффективностью (4,0-5,0 lg ГАдЕ50/см3) вирус штамма «АЧС/ВНИИЗЖ/CV-1» размножается в перевиваемых культурах клеток почки поросенка (ППК), тестикул поросенка (ТП), а в клетках почки зеленой мартышки (CV-1) титры накопления вируса достигают значений 6,5-7,0 ГАдЕ50/см3.With less efficiency (4.0-5.0 lg GADE50 / cm 3 ), the virus of the ASF / ARRIAH / CV-1 strain propagates in transplanted cultures of piglet kidney cells (PPC), piglet testicles (TP), and in green kidney cells monkeys (CV-1) virus accumulation titers reach 6.5-7.0 GADE50 / cm 3 .
Патогенные свойства.Pathogenic properties.
Вирус штамма африканской чумы свиней «АЧС/ВНИИЗЖ/CV-1» низкопатогенен для поросят при внутримышечном введении.The virus of the strain of African swine fever "ASF / ARRIAH / CV-1" is low pathogenic for piglets with intramuscular injection.
Контаминация бактериями, грибами, микоплазмами и посторонними вирусами.Contamination with bacteria, fungi, mycoplasmas and extraneous viruses.
Штамм не контаминирован бактериями, грибами, микоплазмами и гетерологичными вирусами.The strain is not contaminated by bacteria, fungi, mycoplasmas and heterologous viruses.
Способ получения и условия хранения.The method of preparation and storage conditions.
Штамм хранят при минус 40°С в виде лиофилизированной вируссодержащей суспензии, которую получают путем культивирования вируса в монослое клеток CV-1 при 37°С в течение 5-6 суток и смешивают с равным количеством обезжиренного молока. Периодичность освежения штамма один раз в 10 лет.The strain is stored at minus 40 ° C in the form of a lyophilized virus-containing suspension, which is obtained by culturing the virus in a monolayer of CV-1 cells at 37 ° C for 5-6 days and mixed with an equal amount of skim milk. The frequency of refreshment of the strain once every 10 years.
Дополнительные признаки и свойства.Additional features and properties.
Вирулентность - вирулентен для 37,5% естественно восприимчивых животных при контактном, аэрозольном и парентеральном заражении.Virulence - virulence for 37.5% of naturally susceptible animals with contact, aerosol and parenteral infection.
Антигенная активность - введение антигена свиньям индуцирует образование вирусспецифических антител, которые выявляются в иммуноферментном анализе и иммуноблоттинге.Antigenic activity - administration of antigen to pigs induces the formation of virus-specific antibodies, which are detected in enzyme immunoassay and immunoblotting.
Иммуногенная активность - контрольное заражение выживших свиней позволило определить, что 100% животных приобрели стойкий протективный иммунитет.Immunogenic activity - control infection of surviving pigs made it possible to determine that 100% of the animals acquired stable protective immunity.
Стабильность - стабильно активен при репродукции на первичных (KMC, АМС) и перевиваемой (CV-1) культурах клеток, сохраняет исходные биологические свойства при пассировании в чувствительных биологических системах в течение 10 последовательных пассажей (срок наблюдения).Stability - stably active during reproduction on primary (KMC, AMS) and transplantable (CV-1) cell cultures, preserves the original biological properties when passaged in sensitive biological systems for 10 consecutive passages (observation period).
Сущность предлагаемого изобретения пояснена примерами его использования, которые не ограничивают объем изобретения.The essence of the invention is illustrated by examples of its use, which do not limit the scope of the invention.
Пример 1.Example 1
Изучение репродукционных свойств вируса АЧС штамма «АЧС/ВНИИЗЖ/CV-1» и его накопление проводили в культуре клеток CV-1 в течение 25 последовательных пассажей. Наличие гемадсорбирующей активности определяли в культуре клеток АМС.The reproductive properties of the ASF virus of the ASFV / ARRIAH / CV-1 strain were studied and accumulated in a CV-1 cell culture for 25 consecutive passages. The presence of hemadsorbing activity was determined in the cell culture of AMS.
Основные характеристики вируса АЧС штамма «АЧС/ВНИИЗЖ/CV-1» в культурах клеток АМС и CV-1 в процессе пассирования представлены в таблице 1.The main characteristics of ASFV virus strain ASFV / ARRIAH / CV-1 "in cell cultures of AMS and CV-1 in the process of passage are presented in table 1.
Данные приведенные в таблице 1, свидетельствуют о том, что в течение 25 последовательных пассажей вирус штамма «АЧС/ВНИИЗЖ/CV-1» стабильно размножался в монослое культуры клеток CV-1 и сохранял способность к репродукции в культуре клеток АМС. Через 7 суток культивирования в культуре клеток CV-1 при температуре 37,0°С накопление вируса составляло 6,0-7,0 lg ГАдЕ 50/см3.The data presented in table 1 indicate that for 25 consecutive passages the virus strain "ASF / ARRIAH / CV-1" stably multiplied in a monolayer of cell culture CV-1 and retained the ability to reproduce in cell culture AMS. After 7 days of cultivation in a CV-1 cell culture at a temperature of 37.0 ° C., virus accumulation was 6.0-7.0 lg GADE 50 / cm 3 .
Размножение вируса в культуре клеток АМС сопровождалось феноменом гемадсорбции при внесении в питательную среду 0,01% эритроцитов свиньи.Virus propagation in the AMS cell culture was accompanied by the phenomenon of hemadsorption when 0.01% of pig erythrocytes were introduced into the nutrient medium.
При исследовании инфекционной активности образца штамма вируса «АЧС/ВНИИЗЖ/CV-1» было проведено заражение 8 голов свиней крупной белой породы массой ~ 18 кг/гол. Животных в количестве 6 голов заражали вируссодержащей суспензией внутримышечно в дозе 10 ГАдЕ/гол, а 2 головы оставляли совместно с инфицированными свиньями для контактного заражения.When studying the infectious activity of a sample of the strain ASFV / ARRIAH / CV-1, 8 pigs of large white breed weighing ~ 18 kg / goal were infected. Animals in the amount of 6 goals were infected with a virus-containing suspension intramuscularly at a dose of 10 GADE / goal, and 2 heads were left together with infected pigs for contact infection.
В ходе эксперимента 3 из 8 зараженных свиней пали с проявлением клинических признаков, характерных для АЧС.During the experiment, 3 out of 8 infected pigs fell with the manifestation of clinical signs characteristic of ASF.
От выживших животных отбирали сыворотку крови, которую исследовали на наличие вирусспецифических антител. В результате проведенной работы была установлена способность штамма вируса «АЧС/ВНИИЗЖ/CV-1» вызывать образование выявляемых в ИФА постинфекционных вирусспецифических антител, титры которых достигали 3,101g/см3.Blood serum was taken from surviving animals and examined for the presence of virus-specific antibodies. As a result of the work, the ability of the strain “ASF / ARRIAH / CV-1” to establish the formation of post-infectious virus-specific antibodies detected in ELISA was established, the titers of which reached 3,101g / cm 3 .
Таким образом, полученный вируссодержащий материал штамма обладает инфекционной активностью для культуры клеток и свиней, а штамм вируса «АЧС/ВНИИЗЖ/CV-1» может быть использован при проведении экспериментальных и прикладных научно-исследовательских работ.Thus, the obtained virus-containing material of the strain has an infectious activity for cell and pig culture, and the strain ASFV / ARRIAH / CV-1 can be used in experimental and applied research.
Пример 2.Example 2
Штамм вируса «АЧС/ВНИИЗЖ/CV-1», благодаря сниженной вирулентности для свиней, имеет преимущества, выраженные в удобстве и быстроте получения типоспецифических сывороток, предназначенных для сероиммунотипирования вновь выделяемых на территории РФ изолятов вируса АЧС.The strain ASFV / ARRIAH / CV-1, due to the reduced virulence for pigs, has advantages expressed in the convenience and speed of obtaining type-specific sera intended for seroimmunotyping of ASFV virus isolates newly isolated on the territory of the Russian Federation.
Для получения типоспецифической сыворотки заражали 6 голов свиней крупной белой породы штаммом «АЧС/ВНИИЗЖ/CV-1» вируса АЧС внутримышечно в дозе 10 ГАдЕ/гол, 2 свиньи оставляли совместно с инфицированными животными для контактного заражения.To obtain type-specific serum, 6 heads of large white breed pigs were infected with ASFV / ARRIAH / CV-1 strain of ASFV virus intramuscularly at a dose of 10 GADE / goal, 2 pigs were left together with infected animals for contact infection.
В ходе эксперимента 5 из 8 свиней выжили. На 45 сутки после первичного внутримышечного введения вируса африканской чумы свиней штамма «АЧС/ВНИИЗЖ/CV-1», выживших свиней повторно заразили в дозе 1000 ГАдЕ/гол высоковирулентным вирусом штамма «Армения 07» II генотипа VIII серотипа. На 38 день после контрольного заражения свиней обескровливали с использованием полого ножа, кровь собрали в стерильные сосуды. После свертывания крови образовавшийся сгусток обводили стерильной спицей, выдерживали при температуре 37°С в течение 1-1,5 часа, для отделения сыворотки.During the experiment, 5 out of 8 pigs survived. On the 45th day after the initial intramuscular injection of the African swine fever virus of the strain “ASF / ARRIAH / CV-1”, the surviving pigs were re-infected at a dose of 1000 GADE / goal with the highly virulent virus of the strain “Armenia 07” II genotype VIII serotype. On day 38 after the challenge, pigs were bled using a hollow knife, and blood was collected in sterile vessels. After blood coagulation, the resulting clot was circled with a sterile needle, kept at a temperature of 37 ° C for 1-1.5 hours, to separate the serum.
Затем сыворотку помещали в холодильник и отстаивали 24 ч при +4°С. Далее отделившуюся сыворотку отбирали, дополнительно осветляли центрифугированием при 1000-15000 об/мин в течение 30 мин и расфасовывали по флаконам. Исследование полученных сывороток и определение титра вирусспецифических антител проводили методом ТФ ИФА.Then the serum was placed in the refrigerator and left to stand for 24 hours at + 4 ° С. Next, the separated serum was collected, further clarified by centrifugation at 1000-15000 rpm for 30 minutes and packaged in vials. The study of the obtained sera and the determination of the titer of virus-specific antibodies was carried out by TF ELISA.
Определение уровня вирусспецифических антител в полученной сыворотке показало, что после контрольного заражения наблюдалось увеличение титра до значений 4,01 lg/см3.Determination of the level of virus-specific antibodies in the obtained serum showed that after the challenge, an increase in titer to 4.01 lg / cm 3 was observed.
Таким образом, полученная гипериммунная сыворотка содержит специфические к вирусу АЧС антитела и может быть использована в серологических реакциях для диагностических исследований.Thus, the resulting hyperimmune serum contains antibodies specific for the ASF virus and can be used in serological reactions for diagnostic studies.
Пример 3.Example 3
Для определения серотиповой принадлежности штамма «АЧС/ВНИИЗЖ/CV-1» в РЗГАд использовали специфическую сыворотку VIII серотипа, полученную к референс-штамму «Армения 07»; специфическую сыворотку VIII серотипа, полученную до контрольного заражения на штамм «АЧС/ВНИИЗЖ/CV-1»; гипериммунную сыворотку VIII серотипа, полученную к штамму «АЧС/ВНИИЗЖ/CV-1»; нормальную сыворотку свиньи (контрольная) и референс-сыворотку CISA INIA (IV серотип), по разработанной во ВНИИВВиМ методике [6].To determine the serotypic affiliation of the strain “ASF / ARRIAH / CV-1”, a specific serotype VIII serotype obtained from the reference strain “Armenia 07” was used in the RShad; specific serotype VIII serotype obtained prior to infection control for strain "ASF / ARRIAH / CV-1"; hyperimmune serum of the VIII serotype obtained for the strain "ASF / ARRIAH / CV-1"; normal pig serum (control) and reference serum CISA INIA (IV serotype), according to the method developed in VNIIVViM [6].
Первичную культуру клеток (KMC, АМС) выращивали на 96-луночных панелях в посадочной концентрации 6-7×106/мл. После сорбции клеток неприкрепленные клетки и избыток эритроцитов удаляли, а в лунки вносили 200 мкл ростовой среды и инкубировали 48 часов при 37°С и 3-5%CO2. Реакцию ставили в объеме 250 мкл поддерживающей среды, из которой 200 мкл среда Дюльбекко MEM, 25 мкл вируссодержащей суспензии и 25 мкл специфической или контрольной сыворотки. Учет реакции проводили через 24-72 часа при хорошо выраженной ГАд в контроле. Результаты реакции представлены в таблице 2.The primary cell culture (KMC, AMS) was grown on 96-well panels at a planting concentration of 6-7 × 10 6 / ml. After sorption of the cells, unattached cells and excess red blood cells were removed, and 200 μl of growth medium was added to the wells and incubated for 48 hours at 37 ° C and 3-5% CO 2 . The reaction was delivered in a volume of 250 μl of support medium, of which 200 μl of Dulbecco's MEM medium, 25 μl of virus-containing suspension and 25 μl of specific or control serum. Accounting for the reaction was carried out after 24-72 hours with a pronounced GAD in the control. The reaction results are presented in table 2.
Из результатов, представленных в таблице 2, видно, что специфическая сыворотка, полученная на штамм «Армения 07» вируса АЧС VIII серотипа, вызывала задержку гемадсорбции, в то время, как нормальная сыворотка свиньи и референс-сыворотка CISA INIA (IV серотип) не вызывали задержки появления гемадсорбции.From the results presented in table 2, it is seen that the specific serum obtained for the strain “Armenia 07” of ASFV virus of the VIII serotype caused a delay in hemadsorption, while normal serum of the pig and reference serum CISA INIA (IV serotype) did not cause delays in the appearance of hemadsorption
Таким образом, полученный штамм «АЧС/ВНИИЗЖ/CV-1» относится к группе штаммов вируса АЧС VIII серотипа, полученная гипериммунная сыворотка может быть использована для сероиммунотипирования изолятов вируса АЧС в РЗГАд.Thus, the obtained strain “ASF / ARRIAH / CV-1” belongs to the group of ASFV virus strains of the VIII serotype, the obtained hyperimmune serum can be used for seroimmunotyping of ASFV isolates in the RGCA.
Пример 4.Example 4
Для изучения возможности использования штамма вируса АЧС «АЧС/ВНИИЗЖ/CV-1» при получении специфического культурального антигена для серологических реакций проводили заражение культуры клеток CV-1 указанным штаммом в дозе 10-3 ГАдЕ 50/см3 на клетку. После появления 40% ЦПД сливали культуральную жидкость и замораживали матрасы с оставшимся монослоем клеток при минус 70°С. После разморозки монослой снимали механическим способом и обмывали поверхность 5 см3 бидистиллированной воды для более полного разрушения клеток и осветляли центрифугированием в течение 30 минут при 3000 об/мин.To study the possibility of using the strain of ASF virus "ASF / ARRIAH / CV-1" in obtaining a specific culture antigen for serological reactions, the CV-1 cell culture was infected with the indicated strain at a dose of 10 -3 GADE 50 / cm 3 per cell. After the appearance of 40% CPD, the culture fluid was drained and mattresses were frozen with the remaining monolayer of cells at minus 70 ° С. After defrosting, the monolayer was removed mechanically and the surface was washed with 5 cm 3 of bidistilled water for more complete destruction of the cells and clarified by centrifugation for 30 minutes at 3000 rpm.
Вирус инактивировали добавлением 1% раствора теотропина («А-24») в соотношении 1:100, при экспозиции 12 часов и температуре 4°С.The virus was inactivated by the addition of a 1% solution of theotropin ("A-24") in a ratio of 1: 100, with an exposure of 12 hours and a temperature of 4 ° C.
Клетки, находящиеся в осадке ресуспендировали в 2 см3 дистиллированной воды и обрабатывали ультразвуком в течение 2 минут трехкратно при частоте звуковой волны 20 кГц.Cells in the sediment were resuspended in 2 cm 3 of distilled water and sonicated for 3 minutes three times at a sound wave frequency of 20 kHz.
Для липолиза внутриклеточных комплексов добавляли 1,1,2-трифтортрихлорэтан (фреон-113) в соотношении 1:1, центрифугировали при 6000 об/мин в течение 20 минут и отбирали водную фазу, которую концентрировали в 5 раз.For lipolysis of intracellular complexes, 1,1,2-trifluorotrichloroethane (Freon-113) was added in a 1: 1 ratio, centrifuged at 6000 rpm for 20 minutes, and the aqueous phase was concentrated, which was concentrated 5 times.
Полученным антигеном в разведениях на КББ сенсибилизировали плашки при 4°С в течение 12 часов, и определяли его рабочее разведение в непрямом твердофазном иммуноферментном анализе (ТФ ИФА) с референс-сывороткой к АЧС CISA INIA в рабочем разведении (1:80) (IV серотип). Результаты, полученные в ходе опыта, представлены в таблице 3.The obtained antigen in dilutions on KBB sensitized the plates at 4 ° C for 12 hours, and its working dilution was determined in indirect enzyme-linked immunosorbent assay (TF ELISA) with reference serum to ASA CISA INIA in working dilution (1:80) (IV serotype ) The results obtained during the experiment are presented in table 3.
Результаты исследований, приведенные в таблице 3, свидетельствуют о том, что полученный диагностический антиген может быть использован для серологических исследований.The results of the studies are shown in table 3, indicate that the resulting diagnostic antigen can be used for serological studies.
При изучении локализации вирусного антигена (штамм «АЧС/ВНИИЗЖ/CV-1») в инфицированных клетках CV-1 получены четкие сигналы иммунофлуоресценции при использовании ФИТЦ-конъюгата моноклональных антител к р72 вируса АЧС (Ингеназа). Наблюдалось характерное флуоресценцентное окрашивание, которое ограничивалась дискретными областями цитоплазмы, соответствующими локализации вирусных фабрик [10].When studying the localization of the viral antigen (strain "ASF / ARRIAH / CV-1") in infected CV-1 cells, clear immunofluorescence signals were obtained using the FITC conjugate of monoclonal antibodies to p72 of ASF virus (Ingenase). Characteristic fluorescence staining was observed, which was limited to discrete cytoplasmic regions corresponding to the localization of viral factories [10].
Источники информации, принятые во внимание при составлении описания изобретения к заявке на выдачу патента РФ на изобретение «Штамм «АЧС/ВНИИЗЖ/CV-1» вируса африканской чумы свиней, со сниженной вирулентностью для свиней, для вирусологических, диагностических, молекулярно-генетических и мониторинговых исследований»:Sources of information taken into account when drawing up the description of the invention to the application for the grant of a patent of the Russian Federation for the invention of the strain "ASFV / ARRIAH / CV-1" of the virus of African swine fever, with reduced virulence for pigs, for virological, diagnostic, molecular genetic and monitoring research ":
1. Белянин С.А. и др. Патоморфологические изменения у домашних свиней при остром и подостром течении африканской чумы свиней //Российский ветеринарный журнал. Сельскохозяйственные животные. - 2012. - №. 1.1. Belyanin S.A. et al. Pathomorphological changes in domestic pigs in the acute and subacute course of African swine fever // Russian Veterinary Journal. Farm animals. - 2012. - No. one.
2. Биологические свойства вируса африканской чумы свиней, выделенного в российской федерации / В.М. Балышев [и др.] // Ветеринария. - 2010. - №7. - С. 25-27.2. Biological properties of the African swine fever virus isolated in the Russian Federation / V.M. Balyshev [et al.] // Veterinary medicine. - 2010. - No. 7. - S. 25-27.
3. Диагностика африканской чумы свиней. И.Ф. Вишняков, Н.И. Митин, А.Н. Курносов, В.М. Колосов, Ф.А. Бадаев, И.В. Федортщев, В.А. Бурлаков // Материалы научной конференции ВНИИВВиМ. - Покров, 1992. - С. 57-70.3. Diagnosis of African swine fever. I.F. Vishnyakov, N.I. Mitin, A.N. Kurnosov, V.M. Kolosov, F.A. Badaev, I.V. Fedortchev, V.A. Burlakov // Materials of the scientific conference VNIIVViM. - Pokrov, 1992 .-- S. 57-70.
4. Патент РФ №2439152, C12N 7/00, G01N 33/53, 30.06.20104. RF patent No. 2439152,
5. Селянинов Ю.О. Вирус африканской чумы свиней: физическое картирование генома штаммов /Ю.О. Селянинов, В.М. Балышев, С.Ж. Цыбанов / Вестник Российской академии сельскохозяйственных наук. - 2000. - №5. - С. 75-76.5. Selyaninov Yu.O. African swine fever virus: physical mapping of the genome of strains / U.O. Selyaninov, V.M. Balyshev, S.Zh. Tsybanov / Bulletin of the Russian Academy of Agricultural Sciences. - 2000. - No. 5. - S. 75-76.
6. Сероиммунологическая классификация природных изолятов вируса африканской чумы свиней. И.Ф. Вишняков, Н.И. Митин, Ю.И. Петров и др. // Актуальные вопросы ветеринарной вирусологии: материалы науч. - практ. конф. ВНИИВВиМ. - Покров, 1995. - С. 141-143.6. Seroimmunological classification of natural isolates of the virus of African swine fever. I.F. Vishnyakov, N.I. Mitin, Yu.I. Petrov et al. // Actual issues of veterinary virology: materials of scientific. - prakt. conf. VNIIVViM. - Pokrov, 1995 .-- S. 141-143.
7. Biological characterization of African swine fever (ASF) moderate virulent isolates associated to wild boar cases occurred in Southern Estonia in 2015 / Gallardo C. [et al]. // Workshop on Laboratory Diagnosis and Control of CSF and ASF” // Madrid, Spain- 19h June 2017.7. Biological characterization of African swine fever (ASF) moderate virulent isolates associated to wild boar cases occurred in Southern Estonia in 2015 / Gallardo C. [et al]. // Workshop on Laboratory Diagnosis and Control of CSF and ASF ”// Madrid, Spain- 19h June 2017.
8. Boinas,F.S., Hutchings, G.H., Dixon,L.K., Wilkinson,P.J., 2004. Characterizationof pathogenic and non-pathogenic African swine fever virus isolates from Ornithodoros erraticus in habiting pig premisesin Portugal.J.Gen.Virol. 85, 2177-2187.8. Boinas, F.S., Hutchings, G.H., Dixon, L.K., Wilkinson, P.J., 2004. Characterizationof pathogenic and non-pathogenic African swine fever virus isolates from Ornithodoros erraticus in habiting pig premisesin Portugal.J. Gen. Virol. 85, 2177-2187.
9. Breese, S.S., and C.J. De Boer. 1966. Electron microscope observations of ASFV in tissue culture cells. Virology 28:420-428.9. Breese, S.S., and C.J. De Boer. 1966. Electron microscope observations of ASFV in tissue culture cells. Virology 28: 420-428.
10. Current of ASF situation in Latvia / Cvetkova S. [et al] // Workshop on Laboratory Diagnosis and Control of CSF and ASF. Hannover, Germany, 2016. - P. 11.10. Current of ASF situation in Latvia / Cvetkova S. [et al] // Workshop on Laboratory Diagnosis and Control of CSF and ASF. Hannover, Germany, 2016 .-- P. 11.
11. Gallardo C. [et al]. Genetic Variation among African Swine Fever Genotype II Viruses, Eastern and Central Europe. Emerging Infectious Diseases. 2014; 9:1544-7.11. Gallardo C. [et al]. Genetic Variation among African Swine Fever Genotype II Viruses, Eastern and Central Europe. Emerging Infectious Diseases. 2014; 9: 1544-7.
12. Gallardo C. [et al]. Experimental Infection of Domestic Pigs with African Swine Fever Virus Lithuania 2014 Genotype II Field Isolate // Transboundary and Emerging Diseases.12. Gallardo C. [et al]. Experimental Infection of Domestic Pigs with African Swine Fever Virus Lithuania 2014 Genotype II Field Isolate // Transboundary and Emerging Diseases.
13. Genotyping fielstraing of African swine fever by partial p72 gene characterization. A.D.S. Bastos [et al.] // Arch. Virol - 2003, vol. 148, - P. 693-706.13. Genotyping fielstraing of African swine fever by partial p72 gene characterization. A.D.S. Bastos [et al.] // Arch. Virol - 2003, vol. 148, - P. 693-706.
14. King, K., Chapman,D., Argilaguet,J.M., Fishbourne,E., Hutet,E., Cariolet,R., Hutchings, G., Oura, C.A., Netherton,C.L., Moffat,K., Taylor,G., LePotier, M.F., Dixon,L.K., Takamatsu,H.H., 2011. Protection of European domestic pigs from virulent African isolates of African swine fever virus by experimental immunisation. Vaccine29, 4593-4600.14. King, K., Chapman, D., Argilaguet, JM, Fishbourne, E., Hutet, E., Cariolet, R., Hutchings, G., Oura, CA, Netherton, CL, Moffat, K., Taylor , G., LePotier, MF, Dixon, LK, Takamatsu, HH, 2011. Protection of European domestic pigs from virulent African isolates of African swine fever virus by experimental immunization. Vaccine29, 4593-4600.
15. Malmguist W.A. Serologic and immunologic studies with African swine fever virus / W.A. Malmguist // Amer. J. Vet. Res. 1963. - P. 24.15. Malmguist W.A. Serologic and immunologic studies with African swine fever virus / W.A. Malmguist // Amer. J. Vet. Res. 1963. - P. 24.
16. Rowlands R. J. et al. African swine fever virus isolate, Georgia, 2007 //Emerging infectious diseases. - 2008. - T. 14. - №. 12. - C. 1870.16. Rowlands R. J. et al. African swine fever virus isolate, Georgia, 2007 // Emerging infectious diseases. - 2008. - T. 14. - No. 12. - C. 1870.
Claims (4)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2018117990A RU2675535C1 (en) | 2018-05-15 | 2018-05-15 | Achs/vniizzh/cv-1 strain of african swine fever, with decreased virulence for pigs, for virologic, diagnostic, molecular-genetic and surveillance studies |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2018117990A RU2675535C1 (en) | 2018-05-15 | 2018-05-15 | Achs/vniizzh/cv-1 strain of african swine fever, with decreased virulence for pigs, for virologic, diagnostic, molecular-genetic and surveillance studies |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2675535C1 true RU2675535C1 (en) | 2018-12-19 |
Family
ID=64753501
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2018117990A RU2675535C1 (en) | 2018-05-15 | 2018-05-15 | Achs/vniizzh/cv-1 strain of african swine fever, with decreased virulence for pigs, for virologic, diagnostic, molecular-genetic and surveillance studies |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2675535C1 (en) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2760399C1 (en) * | 2021-04-26 | 2021-11-24 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") | Attenuated asfv/cv60/2020 strain of african swine fever virus of the asfarviridae family, genus asfivirus for the study of immunological reactions, molecular genetic analysis, genetic modification and creation of a prototype vaccine against asf |
| CN114410587A (en) * | 2021-09-23 | 2022-04-29 | 中国农业科学院兰州兽医研究所 | Method for improving infection titer of African swine fever virus non-target cell MA-104 cell line |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2439152C1 (en) * | 2010-06-30 | 2012-01-10 | Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной вирусологии и микробиологии | Strain "stavropol 01/08" of african swine plague virus for virological, molecular-genetic and monitoring research |
| RU2452511C1 (en) * | 2010-11-16 | 2012-06-10 | Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной вирусологии и микробиологии | Attenuated strain of serotype 2 african swine fever virus for developing diagnostic and vaccine preparations |
| RU2577997C1 (en) * | 2015-04-01 | 2016-03-20 | Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной вирусологии и микробиологии Российской академии сельскохозяйственных наук | Strain of "kaluga 2014" african swine fever virus for monitoring research and study of pathogenesis |
| RU2607791C1 (en) * | 2016-01-21 | 2017-01-10 | Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной вирусологии и микробиологии Российской академии сельскохозяйственных наук | ATTENUATED STRAIN "MSC-2015 VNIIVViM" OF AFRICAN SWINE FEVER VIRUS SEROTYPE VIII FOR VIROLOGY AND MOLECULAR-GENETIC ANALYSIS |
| RU2645263C1 (en) * | 2017-04-05 | 2018-02-19 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Кубанский государственный аграрный университет имени И.Т. Трубилина" | Test system of detecting dna of african swine fever virus by real-time polymerase chain reaction |
| RU2645262C1 (en) * | 2017-04-04 | 2018-02-19 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Кубанский государственный аграрный университет имени И.Т. Трубилина" | Method of detecting dna of african swine fever virus by real-time polymerase chain reaction |
-
2018
- 2018-05-15 RU RU2018117990A patent/RU2675535C1/en active
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2439152C1 (en) * | 2010-06-30 | 2012-01-10 | Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной вирусологии и микробиологии | Strain "stavropol 01/08" of african swine plague virus for virological, molecular-genetic and monitoring research |
| RU2452511C1 (en) * | 2010-11-16 | 2012-06-10 | Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной вирусологии и микробиологии | Attenuated strain of serotype 2 african swine fever virus for developing diagnostic and vaccine preparations |
| RU2577997C1 (en) * | 2015-04-01 | 2016-03-20 | Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной вирусологии и микробиологии Российской академии сельскохозяйственных наук | Strain of "kaluga 2014" african swine fever virus for monitoring research and study of pathogenesis |
| RU2607791C1 (en) * | 2016-01-21 | 2017-01-10 | Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной вирусологии и микробиологии Российской академии сельскохозяйственных наук | ATTENUATED STRAIN "MSC-2015 VNIIVViM" OF AFRICAN SWINE FEVER VIRUS SEROTYPE VIII FOR VIROLOGY AND MOLECULAR-GENETIC ANALYSIS |
| RU2645262C1 (en) * | 2017-04-04 | 2018-02-19 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Кубанский государственный аграрный университет имени И.Т. Трубилина" | Method of detecting dna of african swine fever virus by real-time polymerase chain reaction |
| RU2645263C1 (en) * | 2017-04-05 | 2018-02-19 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Кубанский государственный аграрный университет имени И.Т. Трубилина" | Test system of detecting dna of african swine fever virus by real-time polymerase chain reaction |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Алипер Т.И. и др, Африканская чума свиней в Российской Федерации. Вопросы вирусологии. - 2012. С. 127-136. * |
| Першин А. С. и др, Моноклональные антитела к рекомбинантному белку p30 вируса африканской чумы свиней для диагностики АЧС. Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии. - 2013. С. 30-34. * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2760399C1 (en) * | 2021-04-26 | 2021-11-24 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") | Attenuated asfv/cv60/2020 strain of african swine fever virus of the asfarviridae family, genus asfivirus for the study of immunological reactions, molecular genetic analysis, genetic modification and creation of a prototype vaccine against asf |
| CN114410587A (en) * | 2021-09-23 | 2022-04-29 | 中国农业科学院兰州兽医研究所 | Method for improving infection titer of African swine fever virus non-target cell MA-104 cell line |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Jackwood et al. | Characteristics and serologic studies of two serotypes of infectious bursal disease virus in turkeys | |
| TWI508974B (en) | Porcine circovirus type 2, immunogenic composition containing the same, test kit, and application thereof | |
| Chen et al. | Isolation and characterization of a distinct duck-origin goose parvovirus causing an outbreak of duckling short beak and dwarfism syndrome in China | |
| US8277814B2 (en) | Avian Astrovirus | |
| Hinze | New member of the herpesvirus group isolated from wild cottontail rabbits | |
| Porter et al. | Isolation of Aleutian disease virus of mink in cell culture | |
| CN102712930B (en) | The vaccine of the thin circovirus virus of pig and diagnosis | |
| JPH02291277A (en) | Production of recombinant gene using attenuated marek's disease virus vector and recombinant of the same virus | |
| JP3950500B2 (en) | Iridovirus infectious disease vaccine and diagnostic agent for fish and production method thereof | |
| RU2675535C1 (en) | Achs/vniizzh/cv-1 strain of african swine fever, with decreased virulence for pigs, for virologic, diagnostic, molecular-genetic and surveillance studies | |
| WO2023045426A1 (en) | Coxsackie virus a16 strain and immunogenic composition and application thereof | |
| RU2439152C1 (en) | Strain "stavropol 01/08" of african swine plague virus for virological, molecular-genetic and monitoring research | |
| CN112379105A (en) | Method for detecting IPMA (ionic polymer antigen) neutralizing antibody of PRRSV (porcine reproductive and respiratory syndrome Virus) | |
| JP2007197454A (en) | Vaccine and diagnostic agent for iridovirus infection of fish, and method for producing those | |
| RU2708335C1 (en) | Strain "privolzhsky" of a virus of nodular dermatitis in cattle dermatitis nodularis bovum, a genus capripoxvirus for manufacturing biopreparations for diagnostics and specific prevention of infectious dermatitis of bovine animals | |
| Worwa et al. | Detection of neutralizing antibodies against bluetongue virus serotype 8 by an optimized plasma neutralization test | |
| RU2760399C1 (en) | Attenuated asfv/cv60/2020 strain of african swine fever virus of the asfarviridae family, genus asfivirus for the study of immunological reactions, molecular genetic analysis, genetic modification and creation of a prototype vaccine against asf | |
| EP1543113B1 (en) | Chicken astrovirus type 2 | |
| RU2603255C9 (en) | Strain a №2155/baikal/2013 of murrain virus aphtae epizooticae type a for control of antigenic and immunogenic activity and to produce biopreparations for diagnostics and specific prevention of murrain type a | |
| KR101618577B1 (en) | Methods for isolation and propagation of PEDV, preparations of low temperature adapted and serum resistant PEDV strains, extraction of PEDV envelope proteins, and methods for antibody tests to PEDV in swine serum | |
| El-Kenawy et al. | Isolation and identification of Bovine coronavirus (BCoV) from diarrheatic calves in Dakahlia Governorate, Egypt | |
| RU2801949C1 (en) | Classical swine fever virus pestivirus strain "ck" for the manufacture of biological products for the specific prevention of classical swine fever | |
| RU2399668C1 (en) | Swine transmissible gastroenteritis "t=-96" virus strain used for manufacturing of diagnostic and vaccine preparations | |
| RU2640261C1 (en) | A n2269/vniizzh/2015 strain of type a aphtae epizooticae foot-and-mouth disease virus for control of antigenic and immunogenic activity and for manufacture of biopreparations for diagnosis and specific prevention of type a foot-and-mouth disease | |
| Saini et al. | Diagnosis and molecular characterization of chicken anaemia virus |