RU2665818C1 - Method for stimulating granulocyte colony stimulating factor production by bone marrow cells in vitro - Google Patents
Method for stimulating granulocyte colony stimulating factor production by bone marrow cells in vitro Download PDFInfo
- Publication number
- RU2665818C1 RU2665818C1 RU2017117137A RU2017117137A RU2665818C1 RU 2665818 C1 RU2665818 C1 RU 2665818C1 RU 2017117137 A RU2017117137 A RU 2017117137A RU 2017117137 A RU2017117137 A RU 2017117137A RU 2665818 C1 RU2665818 C1 RU 2665818C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- bone marrow
- marrow cells
- vitro
- granulocyte colony
- stimulating factor
- Prior art date
Links
- 210000002798 bone marrow cell Anatomy 0.000 title claims abstract description 27
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 20
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 title claims abstract description 14
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 title claims abstract description 7
- 230000007085 granulocyte colony-stimulating factor production Effects 0.000 title description 2
- 102000004269 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 claims abstract description 20
- 108010017080 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 claims abstract description 20
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 17
- 229940043441 phosphoinositide 3-kinase inhibitor Drugs 0.000 claims abstract description 10
- 239000012828 PI3K inhibitor Substances 0.000 claims abstract description 9
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 claims abstract description 8
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims abstract description 7
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 claims abstract description 6
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 claims abstract description 6
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 claims abstract description 6
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 claims abstract description 6
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 claims abstract description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 6
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 claims description 20
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 7
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 6
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 4
- 239000003636 conditioned culture medium Substances 0.000 description 4
- 102000002574 p38 Mitogen-Activated Protein Kinases Human genes 0.000 description 4
- 108010068338 p38 Mitogen-Activated Protein Kinases Proteins 0.000 description 4
- 102000038030 PI3Ks Human genes 0.000 description 3
- 108091007960 PI3Ks Proteins 0.000 description 3
- 108090000430 Phosphatidylinositol 3-kinases Proteins 0.000 description 3
- 244000309464 bull Species 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 229940043355 kinase inhibitor Drugs 0.000 description 3
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 3
- 239000003909 protein kinase inhibitor Substances 0.000 description 3
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 3
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 3
- 102000007644 Colony-Stimulating Factors Human genes 0.000 description 2
- 108010071942 Colony-Stimulating Factors Proteins 0.000 description 2
- 102000018233 Fibroblast Growth Factor Human genes 0.000 description 2
- 108050007372 Fibroblast Growth Factor Proteins 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 2
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 2
- 230000001085 cytostatic effect Effects 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 229940126864 fibroblast growth factor Drugs 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- 230000004068 intracellular signaling Effects 0.000 description 2
- 210000002901 mesenchymal stem cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 2
- 239000000021 stimulant Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 108090000394 Erythropoietin Proteins 0.000 description 1
- 102000003951 Erythropoietin Human genes 0.000 description 1
- 101000997835 Homo sapiens Tyrosine-protein kinase JAK1 Proteins 0.000 description 1
- 101000997832 Homo sapiens Tyrosine-protein kinase JAK2 Proteins 0.000 description 1
- 101000934996 Homo sapiens Tyrosine-protein kinase JAK3 Proteins 0.000 description 1
- 101150024075 Mapk1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 102000003945 NF-kappa B Human genes 0.000 description 1
- 108010057466 NF-kappa B Proteins 0.000 description 1
- 239000012826 P38 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 102100033438 Tyrosine-protein kinase JAK1 Human genes 0.000 description 1
- 102100033444 Tyrosine-protein kinase JAK2 Human genes 0.000 description 1
- 102100025387 Tyrosine-protein kinase JAK3 Human genes 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 1
- 229940030225 antihemorrhagics Drugs 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000003915 cell function Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 229940047120 colony stimulating factors Drugs 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 239000000824 cytostatic agent Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 230000010437 erythropoiesis Effects 0.000 description 1
- 229940105423 erythropoietin Drugs 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000000633 hematostimulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000011132 hemopoiesis Effects 0.000 description 1
- 230000002607 hemopoietic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002874 hemostatic agent Substances 0.000 description 1
- 230000002439 hemostatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 230000031146 intracellular signal transduction Effects 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 239000003607 modifier Substances 0.000 description 1
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 1
- 239000002831 pharmacologic agent Substances 0.000 description 1
- 239000002935 phosphatidylinositol 3 kinase inhibitor Substances 0.000 description 1
- OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N potassium;[2-butyl-5-chloro-3-[[4-[2-(1,2,4-triaza-3-azanidacyclopenta-1,4-dien-5-yl)phenyl]phenyl]methyl]imidazol-4-yl]methanol Chemical compound [K+].CCCCC1=NC(Cl)=C(CO)N1CC1=CC=C(C=2C(=CC=CC=2)C2=N[N-]N=N2)C=C1 OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 230000007727 signaling mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002626 targeted therapy Methods 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000017423 tissue regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к области экспериментальной биологии и медицины и касается способа стимуляции выработки гранулоцитарного колониестимулирующего фактора in vitro.The invention relates to the field of experimental biology and medicine and relates to a method for stimulating the production of granulocyte colony stimulating factor in vitro.
Существуют разные способы стимуляции выработки цитокинов, в том числе гранулоцитарного колониестимулирующего фактора, различными клетками костного мозга [1, 2].There are various ways to stimulate the production of cytokines, including granulocyte colony stimulating factor, by various bone marrow cells [1, 2].
Наиболее близким по технической сущности, механизму действия и техническому результату (прототипом) является способ стимуляции выработки гранулоцитарного колониестимулирующего фактора in vitro прилипающими клетками костного мозга in vitro с помощью ингибитора протеинкиназы р38, который добавляют в концентрации 300 мкМ в культуру ткани и инкубируют при 37°С, 5% СО2 и 100% влажности воздуха в течение 24 часов [2].The closest in technical essence, mechanism of action and technical result (prototype) is a method of stimulating the production of granulocyte colony stimulating factor in vitro by adherent bone marrow cells in vitro using a p38 protein kinase inhibitor, which is added at a concentration of 300 μM in tissue culture and incubated at 37 ° C , 5% CO 2 and 100% air humidity within 24 hours [2].
Недостатком данного способа является недостаточная стимуляция выработки колониестимулирующего фактора под действием данного ингибитора.The disadvantage of this method is the lack of stimulation of the production of colony stimulating factor under the action of this inhibitor.
Задачей, решаемой данным изобретением, является расширение арсенала способов стимуляции выработки гранулоцитарного колониестимулирующего фактора клетками костного мозга in vitro и повышение эффективности способа.The problem solved by this invention is to expand the arsenal of methods for stimulating the production of granulocyte colony stimulating factor in bone marrow cells in vitro and to increase the efficiency of the method.
Поставленная задача достигается тем, что in vitro культивируют фракцию непри-липающих миелокариоцитов в СO2-инкубаторе при 37°С, 5% СО2 и 100% влажности воздуха в течение 24 часов в полной культуральной среде следующего состава: 90% среды RPMI-1640, 10% ЭТС, 280 мг/л L-глутамина, 50 мг/л гентамицина, при добавлении ингибитора фосфатидилинозитол-3-киназы (PI3K) в концентрации 50 мкМ (микромоль).This object is achieved in that a non-adherent myelocaryocyte fraction is cultured in vitro in a CO 2 incubator at 37 ° C, 5% CO 2 and 100% air humidity for 24 hours in a complete culture medium of the following composition: 90% RPMI-1640 medium , 10% ETS, 280 mg / l L-glutamine, 50 mg / l gentamicin, with the addition of a phosphatidylinositol-3-kinase inhibitor (PI3K) at a concentration of 50 μM (micromol).
Новым в предлагаемом изобретении является использование в качестве клеток костного мозга, вырабатывающих гранулоцитарный колониестимулирующий фактор, неприлипающей фракции костного мозга и использование ингибитора PI3K в качестве стимулятора продукции гранулоцитарного колониестимулирующего фактора.New in the present invention is the use of bone marrow cells producing granulocyte colony stimulating factor, non-adherent fraction of bone marrow and the use of PI3K inhibitor as a stimulator of production of granulocyte colony stimulating factor.
На сегодняшний день среди различных фармакологических средств, применяемых в качестве гемостимуляторов, наиболее широко используются препараты на основе эндогенных стимуляторов кроветворения (колониестимулирующие факторы и эритропоэтин), которые, связываясь со специфическими рецепторами, запускают многочисленные сигнальные механизмы, участвующие в реализации ключевых функций клеток [1, 3, 4]. Особого внимания заслуживает препарат гранулоцитарного колониестимулирующего фактора (Г-КСФ) [3]. Исследование синтеза данного гемопоэтина клетками костного мозга - элементами гемопоэзиндуцирующего микроокружения, в системе in vitro является важным элементом методологии создания гемостимулирующих средств [4] с таргетным действием путем активации/ингибирования внутриклеточного сигналинга [5-8]. Указанные исследования проводятся в рамках нового направления таргетной терапии в регенеративной медицине, предложенного в НИИФиРМ им. Е.Д. Гольдберга (Томский НИМЦ) - «Стратегии фармакологической регуляции внутриклеточной сигнальной трансдукции в регенераторно-компетентных клетках» [5]. В связи с этим разработка эффективных способов продукции гранулоцитарного колониестимулирующего фактора с помощью модификаторов активности внутриклеточного сигналинга представляется актуальной.Today, among the various pharmacological agents used as hemostatic stimulants, the most widely used are preparations based on endogenous hemopoietic stimulants (colony-stimulating factors and erythropoietin), which, when bound to specific receptors, trigger numerous signaling mechanisms involved in the implementation of key cell functions [1, 3, 4]. Particularly noteworthy is the preparation of granulocyte colony stimulating factor (G-CSF) [3]. An in vitro study of the synthesis of this hematopoietin by bone marrow cells — elements of the hematopoietic-inducing microenvironment — is an important element of the methodology for creating hemostatic agents [4] with targeted action by activation / inhibition of intracellular signaling [5-8]. These studies are carried out as part of a new direction of targeted therapy in regenerative medicine, proposed at the NIIIFiRM them. E.D. Goldberg (Tomsk Scientific and Research Center) - “Strategies for the pharmacological regulation of intracellular signal transduction in regeneratively competent cells" [5]. In this regard, the development of effective methods for the production of granulocyte colony stimulating factor using modifiers of the activity of intracellular signaling seems relevant.
Известен ряд сигнальных молекул, участвующих в определении функциональной, в том числе секреторной, активности некоторых клеток костного мозга [1, 8]. Однако участие и роль фосфатидилинозитол-3-киназы (PI3K) в продукции гранулоцитарного колониестимулирующего фактора неприлипающими клетками костного мозга до сих пор не изучены.A number of signaling molecules are known to be involved in determining the functional, including secretory, activity of some bone marrow cells [1, 8]. However, the participation and role of phosphatidylinositol-3-kinase (PI3K) in the production of granulocyte colony stimulating factor by non-adherent bone marrow cells has not yet been studied.
Факт использования неприлипающей фракции костного мозга при добавлении в культуральную среду ингибитора PI3K с достижением нового технического результата, заключающегося в эффективной стимуляции выработки гранулоцитарного колониестимулирующего фактора in vitro, для специалиста является неочевидным. Эксперимент показал непредсказуемые результаты.The fact of using a non-adherent bone marrow fraction when a PI3K inhibitor is added to the culture medium to achieve a new technical result, which is to effectively stimulate the production of granulocyte colony stimulating factor in vitro, is not obvious for a specialist. The experiment showed unpredictable results.
Новые свойства не вытекают явным образом из уровня техники в данной области. Идентичной совокупности признаков не обнаружено при исследовании уровня техники по патентной и научно-медицинской литературе.New properties do not follow explicitly from the prior art in this field. An identical set of features was not found in the study of the prior art in patent and medical literature.
Предлагаемое изобретение может быть использовано в экспериментальной биологии и медицине.The present invention can be used in experimental biology and medicine.
Исходя из вышеизложенного, следует считать заявляемое техническое решение соответствующим критериям: «Новизна», «Изобретательский уровень», «Промышленная применимость».Based on the foregoing, the claimed technical solution should be considered relevant criteria: "Novelty", "Inventive step", "Industrial applicability".
Способ осуществляют следующим образом.The method is as follows.
Из клеток костного мозга получают неприлипающую фракцию клеток. Неприлипающие клетки костного мозга инкубируют в полной культуральной среде следующего состава: 90% среды RPMI-1640, 10% ЭТС, 280 мг/л L-глутамина, 50 мг/л гентамицина, 50 мкМ ингибитора PI3K, в СO2-инкубаторе при 370С, 5% СO2 и 100% влажности воздуха в течение 24 часов. По окончании инкубации кондиционные среды после центрифугирования при 1500 об/мин в течение 10 минут собирают с помощью пипетки.A non-adherent fraction of cells is obtained from bone marrow cells. Non-adherent bone marrow cells are incubated in a complete culture medium of the following composition: 90% RPMI-1640 medium, 10% ETS, 280 mg / l L-glutamine, 50 mg / l gentamicin, 50 μM PI3K inhibitor, in a CO 2 incubator at 37 ° C, 5% CO 2 and 100% air humidity for 24 hours. At the end of the incubation, the conditioned media after centrifugation at 1500 rpm for 10 minutes are collected using a pipette.
Предлагаемый способ был изучен в экспериментах на мышах-самцах линии C57BI/6JY в количестве 14 шт., массой 20-22 г. Животные получены из отдела экспериментальных биологических моделей НИИФиРМ им. Е.Д. Гольдберга Томского НИМЦ. Исследования проводили в соответствии с правилами лабораторной практики (GLP), Приказом МЗСР РФ №708н от 23.08.2010 «Об утверждении правил лабораторной практики».The proposed method was studied in experiments on male mice of the C57BI / 6JY line in the amount of 14 pcs., Weighing 20-22 g. Animals were obtained from the Department of Experimental Biological Models of the NIIIFiRM im. E.D. Goldberg Tomsk Scientific and Technical Center. The studies were carried out in accordance with the rules of laboratory practice (GLP), Order of the Ministry of Health and Social Development of the Russian Federation No. 708n dated 08/23/2010 “On approval of the rules of laboratory practice”.
Пример 1.Example 1
Суспензию костномозговых клеток, полученную в стерильных условиях (боксе, оборудованном ламинаром), инкубировали в течение 45 мин в среде RPMI-1640 ("Sigma", США), содержащей 10% ЭТС («Sigma», США), в 90 мм пластиковых чашках Петри («Corning», США) диаметром 35 мм в течение 40-50 мин при 37°С, 5% СО2 и 100% влажности для выделения неадгезирующей фракции миелокариоцитов. После чего с помощью пипетки собирали неприлипающие миелокариоциты, которые (в концентрации 2×106 клеток/мл) инкубировались в течение 24 часов в полной культуральной среде следующего состава: 90% среды RPMI-1640 («Sigma», США), 10% ЭТС («Sigma», США), 280 мг/л L-глутамина («Sigma», США), 50 мг/л гентамицина («Sigma», США), 50 мкМ ингибитора PI3K («Calbiochem», США), при 37°С, 5% СО2 и 100% влажности [4]. Используемая концентрация ингибитора PI3K была отобрана в предварительных экспериментах в качестве наиболее эффективной.A suspension of bone marrow cells obtained under sterile conditions (a box equipped with a laminar) was incubated for 45 min in RPMI-1640 medium (Sigma, USA) containing 10% ETS (Sigma, USA) in 90 mm plastic cups Petri (Corning, USA) with a diameter of 35 mm for 40-50 minutes at 37 ° C, 5% CO 2 and 100% humidity to isolate a non-adherent fraction of myelokaryocytes. Then non-adherent myelokaryocytes were collected with a pipette, which (at a concentration of 2 × 10 6 cells / ml) were incubated for 24 hours in a complete culture medium of the following composition: 90% RPMI-1640 medium (Sigma, USA), 10% ETS (Sigma, USA), 280 mg / L L-glutamine (Sigma, USA), 50 mg / L gentamicin (Sigma, USA), 50 μM PI3K inhibitor (Calbiochem, USA), at 37 ° C, 5% CO 2 and 100% humidity [4]. The used concentration of the PI3K inhibitor was selected in preliminary experiments as the most effective.
При этом контролем №1 и №2 служили кондиционные среды от неприлипающих и прилипающих клеток костного мозга (соответственно) без добавления ингибитора соответственно, а группой сравнения - кондиционные среды от прилипающих клеток костного мозга с добавлением ингибитора протеинкиназы р38, полученные по способу-прототипу.In this case, control No. 1 and No. 2 were conditioned media from non-adherent and non-adherent bone marrow cells (respectively) without an inhibitor, respectively, and the comparison group — conditioned media from non-adherent bone marrow cells with the addition of a p38 protein kinase inhibitor, obtained by the prototype method.
Для получения прилипающих клеток костного мозга для контроля №2 и способа прототипа [2] суспензию костномозговых клеток, полученную в стерильных условиях (боксе, оборудованном ламинаром), инкубировали в течение 45 мин в среде RPMI-1640 ("Sigma", США), содержащей 10% ЭТС («Sigma», США), в 90 мм пластиковых чашках Петри («Corning», США) диаметром 35 мм в течение 40-50 мин при 37°С, 5% СО2 и 100% влажности для выделения адгезирующей фракции миелокариоцитов. После чего с помощью пипетки собирали неприлипающие миелокариоциты, а прилипающие клетки инкубировались в течение 24 часов в полной культуральной среде следующего состава: 90% среды RPMI-1640 («Sigma», США), 10% ЭТС («Sigma», США), 280 мг/л L-глутамина («Sigma», США), 50 мг/л гентамицина («Sigma», США), 300 мкМ ингибитора протеинкиназы р38 («Calbiochem», США), при 37°С, 5% СO2 и 100% влажности.To obtain adherent bone marrow cells for control No. 2 and the prototype method [2], a suspension of bone marrow cells obtained under sterile conditions (a box equipped with a laminar) was incubated for 45 min in RPMI-1640 medium (Sigma, USA) containing 10% ETS (Sigma, USA), in 90 mm plastic Petri dishes (Corning, USA) with a diameter of 35 mm for 40-50 minutes at 37 ° C, 5% CO 2 and 100% humidity to isolate the adhesive fraction myelocaryocytes. Then non-adherent myelokaryocytes were collected with a pipette, and adherent cells were incubated for 24 hours in a complete culture medium of the following composition: 90% RPMI-1640 medium (Sigma, USA), 10% ETS (Sigma, USA), 280 mg / L L-glutamine (Sigma, USA), 50 mg / L gentamicin (Sigma, USA), 300 μM p38 protein kinase inhibitor (Calbiochem, USA), at 37 ° C, 5% CO 2 and 100% humidity.
По окончании инкубации собирали кондиционные среды и определяли в них уровень Г-КСФ методом ИФА, с помощью набора фирмы «R&D systems» (USA) согласно методическим указаниям производителя.At the end of the incubation, conditioned media were collected and the level of G-CSF was determined in them by ELISA using a kit of R&D systems (USA) according to the manufacturer's guidelines.
В ходе эксперимента показано возрастание выработки гранулоцитарного колониестимулирующего фактора лишь при добавлении стимулятора выработки к прилипающим клеткам костного мозга (способ-прототип) и при реализации заявляемого способа. Причем при добавлении ингибитора PI3K в культуру неприлипающих клеток костного мозга уровень выработки гранулоцитарного колониестимулирующего фактора статистически значимо превосходил таковой способа прототипа (культивирование прилипающих клеток костного мозга с добавлением ингибитора р38) (табл. 1).During the experiment, an increase in the production of granulocyte colony-stimulating factor is shown only with the addition of a stimulator of production to adherent bone marrow cells (prototype method) and with the implementation of the proposed method. Moreover, when a PI3K inhibitor was added to the culture of non-adherent bone marrow cells, the level of production of granulocyte colony stimulating factor was statistically significantly higher than that of the prototype method (culturing adherent bone marrow cells with the addition of the p38 inhibitor) (Table 1).
Таким образом, инкубация неприлипающей фракции клеток костного мозга с ингибитором PI3K приводит к наиболее значительной стимуляции выработки Г-КСФ in vitro.Thus, incubation of the non-adherent fraction of bone marrow cells with a PI3K inhibitor leads to the most significant stimulation of G-CSF production in vitro.
Предлагаемый способ позволяет эффективно стимулировать выработку гранулоцитарного колониестимулирующего фактора неадгезирующими миелокариоцитами in vitro.The proposed method can effectively stimulate the production of granulocyte colony stimulating factor non-adherent myelocaryocytes in vitro.
* - отмечена достоверность различий с показателями с таковым в 1-й группе (контроль №1) при р<0,05;* - the significance of differences with indicators with those in the 1st group (control No. 1) was noted at p <0.05;
# - отмечена достоверность различий показателя с таковым во 2-й группе (контроль №2) при р<0,05;# - the significance of differences in the indicator with that in the 2nd group (control No. 2) was noted at p <0.05;
$ - отмечена достоверность различий показателя между 3-й и 4-й группами при р<0,05.$ - the significance of differences in the indicator between the 3rd and 4th groups was noted at p <0.05.
Цитируемая литература:References cited:
1) Дыгай A.M., Жданов В.В., Мирошниченко Л.А., Удут Е.В., Зюзьков Г.Н., Симанина Е.В., Чайковский А.В., Ставрова Л.А., Трофимова Е.С., Бурмина Я.В. Участие сигнальных каскадов в регуляции эритропоэза при цитостатическом воздействии // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2014. №9. С. 282-286.1) Digay AM, Zhdanov V.V., Miroshnichenko L.A., Udut E.V., Zyuzkov G.N., Simanina E.V., Tchaikovsky A.V., Stavrova L.A., Trofimova E. S., Burmina Y.V. The participation of signaling cascades in the regulation of erythropoiesis with cytostatic effects // Bulletin of experimental biology and medicine. 2014. No9. S. 282-286.
2) Патент (RU) на изобретение №2527888 от 14.06.2014 г. Способ стимуляции выработки гранулоцитарного колониестимулирующего фактора клетками костного мозга in vitro. Авторы: Дыгай A.M., Жданов В.В., Зюзьков Г.Н., Мирошниченко Л.А., Удут Е.В., Симанина Е.В., Ставрова Л.А., Чайковский А.В., Хричкова Т.Ю., Бурмина Я.В.2) Patent (RU) for the invention No. 2527888 dated 06/14/2014. In vitro method for stimulating the production of granulocyte colony stimulating factor by bone marrow cells. Authors: Dygay AM, Zhdanov VV, Zyuzkov G.N., Miroshnichenko L.A., Udut E.V., Simanina E.V., Stavrova L.A., Tchaikovsky A.V., Khrichkova T. Yu., Burmina Ya.V.
3) Дыгай A.M., Жданов В.В. Гранулоцитарный колониестимулирующий фактор. Фармакологические аспекты. Москва, 2009, с. 18-19.3) Digay A.M., Zhdanov V.V. Granulocyte colony stimulating factor. Pharmacological aspects. Moscow, 2009, p. 18-19.
4) Дыгай A.M., Жданов В.В., Гольдберг В.Е., Зюзьков Г.Н., Удут Е.В., Хричкова Т.Ю., Симанина Е.В., Мирошниченко Л.А., Ставрова Л.А. Методические рекомендации по изучению гемостимулирующей активности фармакологических веществ // Руководство по проведению доклинических исследований новых лекарственных средств. Часть первая / Под ред. А.Н. Миронова. М.: Гриф и К, 2013. С. 759-766 (944 с.).4) Digay AM, Zhdanov V.V., Goldberg V.E., Zyuzkov G.N., Udut E.V., Khrichkova T.Yu., Simanina E.V., Miroshnichenko L.A., Stavrova L. BUT. Guidelines for the study of hemostimulating activity of pharmacological substances // Guidelines for preclinical studies of new drugs. Part One / Ed. A.N. Mironova. M .: Grif and K, 2013.S. 759-766 (944 p.).
5) Патент (RU) на изобретение №2599289 «Средства, стимулирующие регенерацию тканей» (опубл. 10.10.2016, Бюл. №28). Авторы: Зюзьков Г.Н., Жданов В.В., Данилец М.Г., Мирошниченко Л.А., Удут Е.В., Дыгай A.M.5) Patent (RU) for the invention No. 2599289 "Means that stimulate tissue regeneration" (publ. 10.10.2016, Bull. No. 28). Authors: Zyuzkov G.N., Zhdanov V.V., Danilets M.G., Miroshnichenko L.A., Udut E.V., Dygay A.M.
6) Зюзьков Г.Н., Жданов В.В., Данилец М.Г., Удут Е.В., Мирошниченко Л.А., Лигачева А.А., Симанина Е.В., Чайковский А.В., Трофимова Е.С., Минакова М.Ю., Удут В.В., Дыгай A.M. Участие цАМФ и IKK-2-зависимых сигнальных путей в реализации ростового потенциала мезенхимальных прогениторных клеток под влиянием основного фактора роста фибробластов // Бюл. эксперим. биол. и медицины. - 2014. - Т. 157, №2. - С. 186-189.6) Zyuzkov G.N., Zhdanov V.V., Danilets M.G., Udut E.V., Miroshnichenko L.A., Ligacheva A.A., Simanina E.V., Tchaikovsky A.V., Trofimova E.S., Minakova M.Yu., Udut V.V., Digay AM The participation of cAMP and IKK-2-dependent signaling pathways in realizing the growth potential of mesenchymal progenitor cells under the influence of the main fibroblast growth factor // Bull. an experiment. biol. and medicine. - 2014. - T. 157, No. 2. - S. 186-189.
7) Зюзьков Г.Н., Жданов В.В., Удут Е.В., Мирошниченко Л.А., Симанина Е.В., Полякова Т.Ю., Ставрова Л.А., Удут В.В., Минакова М.Ю., Дыгай A.M. Участие JAK1, JAK2 и JAK3 в стимуляции функций мезенхимных клеток-предшественников фактором роста фибробластов // Бюл. эксперим. биол. и медицины, 2016. №8. С. 206-209.7) Zyuzkov G.N., Zhdanov V.V., Udut E.V., Miroshnichenko L.A., Simanina E.V., Polyakova T.Yu., Stavrova L.A., Udut V.V., Minakova M.Yu., Digay AM The participation of JAK1, JAK2, and JAK3 in the stimulation of the functions of mesenchymal progenitor cells by fibroblast growth factor // Bull. an experiment. biol. and medicine, 2016. No. 8. S. 206-209.
8) Dygai A.M., Zhdanov V.V., Zyuzkov G.N., Udut E.V., Miroshnichenko L.A., Simanina E.V., Chaikovskii A.V., Stavrova L.A., Danilets M.G. Role of NF-κB-dependent signaling and p38 mapk signaling pathway in the control of hemopoiesis during cytostatic administration // Bulletin of Experimental Biology and Medicine. 2014. T. 157. №1. C. 32-36.8) Dygai A.M., Zhdanov V.V., Zyuzkov G.N., Udut E.V., Miroshnichenko L.A., Simanina E.V., Chaikovskii A.V., Stavrova L.A., Danilets M.G. Role of NF-κB-dependent signaling and p38 mapk signaling pathway in the control of hemopoiesis during cytostatic administration // Bulletin of Experimental Biology and Medicine. 2014. T. 157. No. 1. C. 32-36.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2017117137A RU2665818C1 (en) | 2017-05-16 | 2017-05-16 | Method for stimulating granulocyte colony stimulating factor production by bone marrow cells in vitro |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2017117137A RU2665818C1 (en) | 2017-05-16 | 2017-05-16 | Method for stimulating granulocyte colony stimulating factor production by bone marrow cells in vitro |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2665818C1 true RU2665818C1 (en) | 2018-09-04 |
Family
ID=63459951
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2017117137A RU2665818C1 (en) | 2017-05-16 | 2017-05-16 | Method for stimulating granulocyte colony stimulating factor production by bone marrow cells in vitro |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2665818C1 (en) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2713122C1 (en) * | 2019-02-19 | 2020-02-03 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Томский национальный исследовательский медицинский центр Российской академии наук" (Томский НИМЦ) | Method for stimulation of erythropoietin production by bone marrow cells in vitro |
| RU2741784C1 (en) * | 2020-03-23 | 2021-01-28 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Томский национальный исследовательский медицинский центр Российской академии наук" (Томский НИМЦ) | Method for stimulation of granulocyte colony-stimulating factor production by bone marrow cells in vitro |
| RU2770784C1 (en) * | 2021-03-24 | 2022-04-21 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Томский национальный исследовательский медицинский центр Российской академии наук" (Томский НИМЦ) | Method for stimulating production of granulocyte colony-stimulating factor by bone marrow cells in vitro |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2527888C1 (en) * | 2013-10-30 | 2014-09-10 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научно-исследовательский институт фармакологии" Сибирского отделения Российской академии медицинских наук | Method of stimulating production of granulocyte colony stimulating factor by bone marrow cells in vitro |
| RU2599289C2 (en) * | 2013-12-20 | 2016-10-10 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научно-исследовательский институт фармакологии имени Е.Д. Гольдберга" Сибирского отделения Российской академии медицинских наук ФГБУ "НИИ фармакологии имени Е.Д. Гольдберга" СО РАМН | Tissue regeneration stimulating agent |
-
2017
- 2017-05-16 RU RU2017117137A patent/RU2665818C1/en active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2527888C1 (en) * | 2013-10-30 | 2014-09-10 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научно-исследовательский институт фармакологии" Сибирского отделения Российской академии медицинских наук | Method of stimulating production of granulocyte colony stimulating factor by bone marrow cells in vitro |
| RU2599289C2 (en) * | 2013-12-20 | 2016-10-10 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научно-исследовательский институт фармакологии имени Е.Д. Гольдберга" Сибирского отделения Российской академии медицинских наук ФГБУ "НИИ фармакологии имени Е.Д. Гольдберга" СО РАМН | Tissue regeneration stimulating agent |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| ДЫГАЙ А.М. и др. Роль NF-kB и p38-опосредованных сигнальных путей в регуляции кроветворения при иммобилизационном стрессе. Патогенез, т. 13, N3, с.26-30, найдено в Интернет 10.04.2018, адрес сайта https://elibrary.ru/contents.asp?issueid=1580644. * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2713122C1 (en) * | 2019-02-19 | 2020-02-03 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Томский национальный исследовательский медицинский центр Российской академии наук" (Томский НИМЦ) | Method for stimulation of erythropoietin production by bone marrow cells in vitro |
| RU2741784C1 (en) * | 2020-03-23 | 2021-01-28 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Томский национальный исследовательский медицинский центр Российской академии наук" (Томский НИМЦ) | Method for stimulation of granulocyte colony-stimulating factor production by bone marrow cells in vitro |
| RU2770784C1 (en) * | 2021-03-24 | 2022-04-21 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Томский национальный исследовательский медицинский центр Российской академии наук" (Томский НИМЦ) | Method for stimulating production of granulocyte colony-stimulating factor by bone marrow cells in vitro |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Malyshev et al. | Current concept and update of the macrophage plasticity concept: intracellular mechanisms of reprogramming and M3 macrophage “switch” phenotype | |
| Hutchings et al. | The proliferation and differentiation of adipose-derived stem cells in neovascularization and angiogenesis | |
| Takami et al. | Stimulation by toll-like receptors inhibits osteoclast differentiation | |
| Dang et al. | Autophagy regulates the therapeutic potential of mesenchymal stem cells in experimental autoimmune encephalomyelitis | |
| Chen et al. | Extracellular heat shock protein 70 promotes osteogenesis of human mesenchymal stem cells through activation of the ERK signaling pathway | |
| RU2665818C1 (en) | Method for stimulating granulocyte colony stimulating factor production by bone marrow cells in vitro | |
| Kulesza et al. | The role of COX-2 and PGE2 in the regulation of immunomodulation and other functions of mesenchymal stromal cells | |
| CN103756961B (en) | A kind of method of external evoked amplification NKT cell | |
| US20220290104A1 (en) | Methods for generating hematopoietic stem cells | |
| Selich et al. | Umbilical cord as a long-term source of activatable mesenchymal stromal cells for immunomodulation | |
| Montazersaheb et al. | Cytokines and signaling pathways involved in differentiation potential of hematopoietic stem cells towards natural killer cells | |
| TW201809269A (en) | Cell culture medium and method for culturing cells | |
| Bindal et al. | Angiogenic effect of platelet-rich concentrates on dental pulp stem cells in inflamed microenvironment | |
| RU2527888C1 (en) | Method of stimulating production of granulocyte colony stimulating factor by bone marrow cells in vitro | |
| Moore et al. | Tethered growth factors on biocompatible scaffolds improve stemness of cultured rat and human neural stem cells and growth of oligodendrocyte progenitors | |
| Pang et al. | Peripheral blood‐derived mesenchymal stem cells modulate macrophage plasticity through the IL‐10/STAT3 pathway | |
| Lim et al. | Chitin from cuttlebone activates inflammatory cells to enhance the cell migration | |
| Lou et al. | Retinoic acid inhibits tumor-associated mesenchymal stromal cell transformation in melanoma | |
| US20190060406A1 (en) | Il-1ra based compositions and treatments | |
| RU2439147C1 (en) | Method of stimulation in vitro pluripotent hemopoetic stem cells | |
| Dutta et al. | Evaluation of the sensing potential of stem cell-secreted proteins via a microchip device under electromagnetic field stimulation | |
| RU2713122C1 (en) | Method for stimulation of erythropoietin production by bone marrow cells in vitro | |
| RU2770784C1 (en) | Method for stimulating production of granulocyte colony-stimulating factor by bone marrow cells in vitro | |
| RU2589288C1 (en) | METHOD FOR STIMULATING PRODUCTION OF ERYTHROPOIETIN IN A CELL CULTURE in vitro | |
| RU2628882C1 (en) | Method for stimulating production of erythropoetin by bone marrow cells in vitro |