RU2645093C1 - Prognostication of preterm delivery through the detection of catalase activity in peripheral blood plasma - Google Patents
Prognostication of preterm delivery through the detection of catalase activity in peripheral blood plasma Download PDFInfo
- Publication number
- RU2645093C1 RU2645093C1 RU2017111607A RU2017111607A RU2645093C1 RU 2645093 C1 RU2645093 C1 RU 2645093C1 RU 2017111607 A RU2017111607 A RU 2017111607A RU 2017111607 A RU2017111607 A RU 2017111607A RU 2645093 C1 RU2645093 C1 RU 2645093C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- peripheral blood
- activity
- catalase
- catalase activity
- probability
- Prior art date
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/483—Physical analysis of biological material
- G01N33/487—Physical analysis of biological material of liquid biological material
- G01N33/49—Blood
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Hematology (AREA)
- Ecology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к акушерству и предназначено для прогнозирования преждевременных родов путем определения в периферической крови беременных уровня активности каталазы модифицированным методом Рота и Дженсена, основанным на проведении полярографического теста в ячейке закрытого типа с электродом КларкаThe invention relates to obstetrics and is intended to predict premature birth by determining the level of catalase activity in the peripheral blood of pregnant women using the modified Roth and Jensen method, based on a polarographic test in a closed cell with a Clark electrode
После определения скорости разложения перекиси в ячейке закрытого типа с электродом Кларка, полученную величину ферментативной активности каталазы используют для расчета вероятности преждевременных родов, что позволяет своевременно начать комплекс лечебных мероприятий и снизить частоту акушерских и перинатальных осложнений. На сегодняшний день доказано, что в случае пролонгирования беременности на срок, равный или более 48 ч, возможно проведение полного курса профилактики РДС плода, а также токолитической терапии, улучшающих перинатальные исходы более чем на 5% [1, 2].After determining the rate of decomposition of peroxide in a closed cell with a Clark electrode, the obtained enzyme activity of catalase is used to calculate the likelihood of premature birth, which allows you to start a complex of therapeutic measures and reduce the frequency of obstetric and perinatal complications. To date, it has been proven that in the case of prolonging pregnancy for a period equal to or more than 48 hours, it is possible to conduct a full course of prevention of fetal RDS, as well as tocolytic therapy, improving perinatal outcomes by more than 5% [1, 2].
Предложен экспресс-метод прогнозирования преждевременных родов с 22 недель беременности путем определения уровня активности каталазы в периферической крови беременной.An express method for predicting preterm labor from 22 weeks of gestation by determining the level of catalase activity in the peripheral blood of a pregnant woman is proposed.
В частности, предложен способ прогнозирования преждевременных родов путем определения уровня активности каталазы в периферической крови у беременных женщин с угрожающими преждевременными родами. У данных пациенток достоверно выше уровень активности каталазы (р<0.05). Определено пороговое значение ферментативной активности каталазы, позволяющие с высокой вероятностью прогнозировать преждевременные роды у данной группы беременныхIn particular, a method is proposed for predicting preterm birth by determining the level of catalase activity in the peripheral blood of pregnant women with threatening preterm delivery. In these patients, the level of catalase activity was significantly higher (p <0.05). The threshold value of the enzymatic activity of catalase was determined, which allows a high probability to predict premature birth in this group of pregnant women
Для определения активности каталазы в периферической крови беременных женщин используются модифицированный метод Рота и Дженсена, основанный на проведении полярографического теста в ячейке закрытого типа с электродом Кларка.To determine the activity of catalase in the peripheral blood of pregnant women, the modified Roth and Jensen method is used, based on a polarographic test in a closed cell with a Clark electrode.
Использованный метод определения ферментативной активности каталазы основан на прямом измерении в ячейке полярографа содержания молекулярного кислорода - продукта реакции разложения перекиси водорода каталазой. В связи с применением метода прямого измерения содержания кислорода отсутствует необходимость использования реактантов, красителей и др. промежуточных соединений, содержание которых обычно измеряется методами непрямого определения в системе специфических реакций и нуждается в построении калибровочной кривой. Отсутствие необходимости использования дополнительных реактантов при прямом определении максимальной скорости реакции, катализируемой каталазой (Vmax), существенно упрощает исследование, минимизирует время определения и стоимости анализа. Расчет вероятности развития преждевременных родов проводится с помощью подстановки значений в уравнение логистической регрессии. Моделирование при помощи логистической регрессии в достаточной мере устойчиво к отклонениям в распределении предиктора, позволяет получать легко интерпретируемые результаты в явном виде значения вероятности отнесения к тому или иному классу. Совокупность этих факторов послужила причиной использования именно этой модели.The method used to determine the enzymatic activity of catalase is based on direct measurement in the cell of the polarograph of the molecular oxygen content - the product of the decomposition reaction of hydrogen peroxide by catalase. In connection with the application of the method of direct measurement of oxygen content, there is no need to use reactants, dyes, and other intermediate compounds, the content of which is usually measured by the methods of indirect determination of specific reactions in the system and requires the construction of a calibration curve. The absence of the need to use additional reactants in the direct determination of the maximum reaction rate catalyzed by catalase (Vmax) greatly simplifies the study, minimizes the determination time and cost of analysis. The calculation of the likelihood of preterm delivery is carried out by substituting the values in the logistic regression equation. Modeling with the help of logistic regression is sufficiently resistant to deviations in the distribution of the predictor, and it is possible to obtain easily interpreted results in the explicit form of the value of the probability of being assigned to one or another class. The combination of these factors was the reason for using this particular model.
На основании экспериментальных данных при сравнении женщин контрольной группы, родоразрешенных своевременно и наблюдаемой, с преждевременными родами была проведена подгонка параметров модели по методу наименьших квадратов и оценка эффективности предсказаний, полученных при использовании разработанной модели.Based on experimental data, when comparing women in the control group, timely and observed delivery, with premature birth, the model parameters were fitted using the least square method and the effectiveness of the predictions obtained using the developed model was evaluated.
Уровень техникиState of the art
В патогенезе осложнений беременности и раннего неонатального периода значимая роль отводится воспалительной реакции, приводящей к хроническому оксидативному стрессу на фоне дисбаланса нормальной продукции активных форм кислорода (АФК) и активности антиоксидантной защитной системы [1]. Известно, что преждевременные роды часто сопровождаются манифестацией симптомов, типичных для хронического оксидативного стресса, - накоплением продуктов перекисного окисления липидов, аддуктов ковалентной модификации белков, падением эффективности энергопреобразующих мембран митохондрий и ростом числа повреждений ядерной и митохондриальной ДНК [2]. Роль триггера ПР обычно выполняет инфекционная активность различного типа, при которой наблюдается нарушение механизмов активации фагоцитов и, как следствие, повышенный воспалительный ответ [4]. Критичным фактором является продолжительность и/или острота инфекции на фоне транзитного снижения активности антиоксидантных систем, приводящего к накоплению продуктов перекисного окисления липидов [3]. При достижении порогового значения содержания таких продуктов становится возможной протекание химических реакций, приводящих к модификации структуры белков, например, посредством образования внутримолекулярных ковалентных сшивок при участии альдегидной группы МДА, свободной аминогруппы лизина и других активных групп [4]. При этом если такая модификация затрагивает регуляторные белки, может быть инициирована последовательность событий, приводящих к формированию петли положительной обратной связи, негативной регуляции экспрессии элементов системы антиоксидантной защиты, а также к существенному снижению ее активности и емкости [5]. Наконец, долговременное воздействие АФК на клетки и ткани организма при дисбалансе защитных систем приводит к нарушению тканевого гомеостаза, дисфункции тканей и органов, системным нарушениям на уровне целого организма, а в некоторых случаях к полиорганной недостаточности [6].In the pathogenesis of pregnancy complications and the early neonatal period, an important role is played by the inflammatory reaction leading to chronic oxidative stress against the background of an imbalance in the normal production of reactive oxygen species (ROS) and the activity of the antioxidant defense system [1]. It is known that preterm delivery is often accompanied by a manifestation of symptoms typical of chronic oxidative stress - the accumulation of lipid peroxidation products, adducts of covalent modification of proteins, a decrease in the efficiency of energy-transforming mitochondrial membranes and an increase in the number of damage to nuclear and mitochondrial DNA [2]. The role of the PR trigger is usually performed by various types of infectious activity, in which there is a violation of the activation mechanisms of phagocytes and, as a result, an increased inflammatory response [4]. A critical factor is the duration and / or severity of the infection against the background of a transitory decrease in the activity of antioxidant systems, leading to the accumulation of lipid peroxidation products [3]. Upon reaching the threshold value of the content of such products, it becomes possible for chemical reactions to lead to modification of the protein structure, for example, through the formation of intramolecular covalent cross-links with the participation of the MDA aldehyde group, the free amino group of lysine and other active groups [4]. Moreover, if such a modification affects regulatory proteins, a sequence of events can be initiated leading to the formation of a positive feedback loop, negative regulation of the expression of elements of the antioxidant defense system, as well as a significant decrease in its activity and capacity [5]. Finally, the long-term effect of ROS on the cells and tissues of the body with an imbalance of protective systems leads to disruption of tissue homeostasis, dysfunction of tissues and organs, systemic disorders at the level of the whole organism, and in some cases to multiple organ failure [6].
Поскольку в основе молекулярного механизма окислительных повреждений лежит снижение активности антиоксидантных ферментов, нарушение структурно-функционального состояния клеточных мембран при патологии беременности, вероятно, опосредовано окислительной деструкцией как белков, так и липидов эндотелия сосудов, приводящей к активации клеток иммунной системы матери [7]. При этом на начальной стадии патологического состояния происходит накопление в периферической крови матери продуктов распада клеток и внутриклеточных органелл синцитиотрофобласта, в том числе в результате развития инфекции и/или асептического воспаления [8].Since the molecular mechanism of oxidative damage is based on a decrease in the activity of antioxidant enzymes, a violation of the structural and functional state of cell membranes during pregnancy pathology is probably mediated by oxidative destruction of both vascular endothelial proteins and lipids, leading to the activation of maternal immune system cells [7]. At the same time, at the initial stage of the pathological condition, accumulation in the peripheral blood of the mother of the decay products of cells and intracellular organelles of syncytiotrophoblast occurs, including as a result of the development of infection and / or aseptic inflammation [8].
Известен способ диагностики преждевременных родов по ряду биохимических маркеров. Данные вещества участвуют как в физиологических, так и патологических процессах во время беременности и родов.A known method for the diagnosis of preterm birth by a number of biochemical markers. These substances are involved in both physiological and pathological processes during pregnancy and childbirth.
Известен способ диагностики угрозы прерывания беременности в ранние сроки путем определения в периферической крови концентрации фактора угнетающего миграцию лейкоцитов до и после однократной иммунизации донорскими лейкоцитами (патент РФ №2014598, 1994). Данный способ является технологически сложным в исполнении, а также неизвестна его эффективность для прогнозирования прерывания беременности во II и III триметрах беременности.A known method for diagnosing the threat of termination of pregnancy in the early stages by determining in peripheral blood the concentration of a factor inhibiting the migration of leukocytes before and after a single immunization with donor leukocytes (RF patent No. 20144598, 1994). This method is technologically difficult to perform, and its effectiveness for predicting abortion in the second and third trimesters of pregnancy is unknown.
Известен способ прогнозирования угрозы прерывания беременности по определению концентрации эстриола, плацентарного лактогена и интерлейкина-6 в сыворотке крови (патент РФ №2285926, 2006).A known method for predicting the threat of termination of pregnancy by determining the concentration of estriol, placental lactogen and interleukin-6 in blood serum (RF patent No. 2285926, 2006).
Известен способ прогнозирования невынашивания беременности путем определения содержания периферических Т-лимфоцитов до и после инкубации с АМГФ (патент РФ №20077727, 1997).A known method for predicting miscarriage by determining the content of peripheral T-lymphocytes before and after incubation with AMHF (RF patent No. 20077727, 1997).
Известен способ прогнозирования преждевременных родов инфекционного генеза путем определения экспрессии гена Toll-подобного рецептора-2 (TLR-2) в слизистой цервикального канала (патент РФ №2334233, 2008), однако данный способ не имеет точных пороговых значений. Кроме того, имеется большой разброс абсолютных значений показателей экспрессии TLR-2. Чувствительность метода составляет 70%.There is a method for predicting preterm delivery of infectious genesis by determining the expression of the Toll-like receptor-2 (TLR-2) gene in the mucous membrane of the cervical canal (RF patent No. 2,333,233, 2008), however, this method does not have exact threshold values. In addition, there is a wide variation in the absolute values of TLR-2 expression indices. The sensitivity of the method is 70%.
Известен способ определения концентрации плодового фибронектина в цервико-вагинальном секрете и при значении выше 50 нг/мл, уровень интерлейкина-6 в амниотической жидкости ≥20 нг/мл и интерлейкина -8≥450 пг/мл, данные показатели являются диагностически значимыми [12]. Н. Leitich et al. [13] провел мета-анализ 40 исследований, посвященных фибронектину как предиктору ПР. По данным этих исследований повышение уровня фибронектина в цервикальной слизи было ассоциировано с риском развития ПР, причем наибольшая чувствительность теста проявлялась в отношении развития ПР в ближайшие 7-14 дней (около 71%), а в отношении ПР в ближайшие 21 день оказалась несколько ниже (59%). Также в качестве критерия оценки теста была рассмотрена его способность оценить вероятность ПР ранее 34 и ранее 37 недель, при этом его чувствительность оказалась еще ниже - 53% и 52% соответственно [13, 14]. Таким образом данный метод прогнозирования ПР не может быть использован у пациенток с начальными признаками угрозы прерывания беременности, в связи с его низкой чувствительностью. Это существенно снижает возможность своевременного начала терапии, направленной на пролонгирование беременности.A known method for determining the concentration of fetal fibronectin in cervico-vaginal secretion and with a value above 50 ng / ml, the level of interleukin-6 in the amniotic fluid ≥20 ng / ml and interleukin -8≥450 pg / ml, these indicators are diagnostically significant [12] . H. Leitich et al. [13] conducted a meta-analysis of 40 studies on fibronectin as a predictor of PR. According to these studies, an increase in the level of fibronectin in cervical mucus was associated with a risk of developing PR, and the greatest sensitivity of the test was manifested in relation to the development of PR in the next 7-14 days (about 71%), and in relation to PR in the next 21 days it was slightly lower ( 59%). Also, as a criterion for evaluating the test, its ability to assess the probability of PR before 34 and earlier than 37 weeks was considered, while its sensitivity was even lower - 53% and 52%, respectively [13, 14]. Thus, this method for predicting PR cannot be used in patients with initial signs of a threat of termination of pregnancy, due to its low sensitivity. This significantly reduces the possibility of timely initiation of therapy aimed at prolonging pregnancy.
Способ прогнозирования невынашиваня беременности при урогенитальной инфекции путем определения в биологической жидкости уровня ИЛ-12. В цервикальном канале определяют ИЛ-12 и при его значениях 102,0 пг/мл и выше прогнозируют высокий риск невынашивания беременности в I и II триместрах (патент РФ №234424, 2008).A method for predicting miscarriage during urogenital infection by determining the level of IL-12 in biological fluid. In the cervical canal, IL-12 is determined and with its values of 102.0 pg / ml and higher, a high risk of miscarriage in the I and II trimesters is predicted (RF patent No. 234424, 2008).
Недостатком данных способов является их трудоемкость в исполнении.The disadvantage of these methods is their complexity in execution.
Известен способ прогнозирования невынашивания беременности путем определения в плазме крови содержания фибрин-мономерных комплексов. По их величине прогнозируют прерывание беременности в I, II, III триместрах (патент РФ №2123698, 1998). Известен способ прогнозирования невынашивания беременности путем определения в сыворотке крови прогестерона, хорионического гонадотропина и уровня альфа-2-микроглобулиина в сыворотке крови (патент РФ №2004135161, 2006). Известен способ прогнозирования исхода беременности, осуществляемый путем исследования в периферической крови относительное содержание СД16+и СД3+ клеток и при соотношении ≥0,11 прогнозируют наступление преждевременных родов и угрозу преждевременных родов (патент РФ №2132069, 1999).A known method for predicting miscarriage by determining the plasma content of fibrin-monomer complexes. By their size, termination of pregnancy in I, II, III trimesters is predicted (RF patent No. 2123698, 1998). A known method for predicting miscarriage by determining serum progesterone, chorionic gonadotropin and serum alpha-2-microglobulin level (RF patent No. 2004135161, 2006). A known method for predicting the outcome of pregnancy is carried out by examining the relative content of CD16 + and CD3 + cells in the peripheral blood and at a ratio of ≥0.11 predict the onset of preterm birth and the threat of preterm birth (RF patent No. 2132069, 1999).
Недостатками данных способов является их низкая специфичность и необходимость использования дорогостоящих реактантов и колорантов, а также коммерческих наборов, что удлиняет время исследования и ставит результат в зависимость от качества реагентов, определяемого соблюдением ТУ по условиям и срокам хранения как клинической лабораторией, так и поставщиком.The disadvantages of these methods are their low specificity and the need to use expensive reactants and colorants, as well as commercial kits, which lengthens the study time and makes the result dependent on the quality of the reagents, determined by compliance with the specifications for storage conditions and shelf life by both the clinical laboratory and the supplier.
Аналогом к заявленному способу является:An analogue to the claimed method is:
Способ прогнозирования преждевременных родов путем исследования определения относительного содержания CD 25+ и IL-2+ лимфоцитам в периферической и венозной крови (патент РФ №2344424, 2009). Технический результат в данном способе достигается за счет определения относительного содержания CD25+к ИЛ-2+ при значении соотношения равным или более 1,0 прогнозируют угрожающие преждевременные роды (патент РФ №2344424, 2009). Способ осуществляется следующим образом: к 3 мл гепаринизировнной крови из кубитальной вены добавляют 3 мл «Среды 199» и выделяют обогащенную популяцию мононуклеарных клеток стандартным методом скоростного центрифугирования. Скорость центрифугирования -1500 оборотов/мин в течение 40 мин. Суспензию мононуклеарных клеток дважды отмывают физраствором, доводят до концентрации клеток до 1×106 кл/мл. В одной пробирке полученной суспензии добавляют 20 мкл моноклональных антител анти-CD25, конъюгированных с флюоресцеин изотиоцианатом. Клетки инкубируют в течение 30 мин при комнатной температуре, отмывают и фиксируют в 0,5 мл фиксирующего раствора CellFixtm. Параллельно во второй пробирке проводят процедуру внутриклеточного окрашивания с моноклональными антителами к IL-2. К 0,05 мл клеточной суспензии добавляют 100 мкл фиксирующего буфера из набора «FIX$PERM cell permeabilization kit» для пермеабилизации клеточной мембраны. К 0,05 мл клеточной суспензии добавляют 100 мкл фиксирующего буфера из набора набора «FIX$PERM cell permeabilization kit» и инкубируют в течение 15 мин при комнатной температуре в темноте. Дале клетки отмывают от фиксирующего буфера и добавляют 100 мкл пермеабилизирующего буфера В и 1 мкл моноклональных антител к IL-2, меченных фикоэритрином, для внутриклеточного окрашивания. Инкубируют в течении 15 мин при комнатной температуре в темноте, отмывают и фиксируют в 0,5 мл фиксирующего раствора CellFixtm. Затем определяют относительное количество CD25+ к IL2+ лимфоцитов в лимфоцитарном гейте на проточном цитрометре и вычисляют индекс соотношения CD25+ к IL2+. содержания CD25+ к IL2+. При его значении соотношения равным или более 1,0 прогнозируют угрожающие преждевременные роды.A method for predicting preterm birth by examining the determination of the relative content of CD 25+ and IL-2 + lymphocytes in peripheral and venous blood (RF patent No. 2344424, 2009). The technical result in this method is achieved by determining the relative content of CD25 + to IL-2 + when the ratio is equal to or more than 1.0, threatening preterm delivery is predicted (RF patent No. 2344424, 2009). The method is as follows: to 3 ml of heparinized blood from a cubital vein, add 3 ml of “Medium 199” and an enriched population of mononuclear cells is isolated by the standard method of high-speed centrifugation. Centrifugation speed -1500 rpm for 40 min. The suspension of mononuclear cells is washed twice with saline, adjusted to a cell concentration of 1 × 10 6 cells / ml. In one tube of the resulting suspension, 20 μl of anti-CD25 monoclonal antibodies conjugated with fluorescein isothiocyanate are added. Cells are incubated for 30 minutes at room temperature, washed and fixed in 0.5 ml of CellFix ™ fixative solution. In parallel, in the second tube, an intracellular staining procedure is performed with monoclonal antibodies to IL-2. To 0.05 ml of cell suspension, 100 μl of fixation buffer from the FIX $ PERM cell permeabilization kit was added to permeabilize the cell membrane. To 0.05 ml of the cell suspension, 100 μl of fixation buffer from the FIX $ PERM cell permeabilization kit was added and incubated for 15 minutes at room temperature in the dark. Then the cells are washed from the fixation buffer and 100 μl of permeabilization buffer B and 1 μl of phycoerythrin-labeled monoclonal anti-IL-2 antibodies are added for intracellular staining. Incubated for 15 min at room temperature in the dark, wash and fix in 0.5 ml of CellFix ™ fixing solution. Then determine the relative number of CD25 + to IL2 + lymphocytes in the lymphocyte gate using a flow cytometer and calculate the ratio of CD25 + to IL2 +. the content of CD25 + to IL2 +. With its ratio value equal to or more than 1.0, threatening preterm delivery is predicted.
Из вышеизложенного очевидно, что на сегодняшний день основными недостатками прогнозирования исхода беременности являются неспецифичность и трудоемкость методов, необходимость использования дорогостоящего оборудования и высококвалифицированного персонала, в то время как предложенный метод прост в использовании, не требует закупки дополнительных реактивов, обладает высокой специфичностью и достоверностью результатов, получаемых за короткий промежуток времени (менее часа).From the foregoing, it is obvious that today the main disadvantages of predicting the outcome of pregnancy are the non-specificity and laboriousness of the methods, the need to use expensive equipment and highly qualified personnel, while the proposed method is easy to use, does not require the purchase of additional reagents, has high specificity and reliability of the results, received in a short period of time (less than an hour).
Описание методаMethod Description
Измерение активности каталазы в плазме крови проводили полярографически с помощью электрода Кларка по модифицированому методу Рота и Дженсена на оксиграфе (Hansatech, UK)Measurement of plasma catalase activity was carried out polarographically using a Clark electrode according to the modified method of Roth and Jensen on an oxygraph (Hansatech, UK)
Прямым методом измерения напряжения определяли количество кислорода, образующегося при распаде перекиси в ходе реакции:The direct method of measuring the voltage was used to determine the amount of oxygen formed during the decomposition of peroxide during the reaction:
2H2O2 = 2H2O + O2 2H 2 O 2 = 2H 2 O + O 2
Все измерения проводили в термостатируемых условиях при постоянной температуре 25°С. В ячейку оксиграфа вносили 2 мл фосфатно-солевого буфера (рН=7.4). В буфер добавляли 100 мкл 6% Н2О2. После того как скорость образования кислорода выходила на стационарный уровень, в ячейку добавляли 1 мкл плазмы крови и регистрировали приращение скорости выделения O2 (нмоль/мл/мин). Активность каждого образца измерялась в трех повторностях. Исходя из полученных значений, рассчитывали среднее значение активности каталазы в плазме крови в «Единицах активности в 1 мл» (ЕД/мл), где одна единица активности соответствует количеству фермента, катализирующего превращение одного микромоля субстрата в минуту.All measurements were carried out under thermostatic conditions at a constant temperature of 25 ° C. 2 ml of phosphate-saline buffer (pH = 7.4) was added to the oxygraph cell. 100 μl of 6% H 2 O 2 was added to the buffer. After the oxygen production rate reached a stationary level, 1 μl of blood plasma was added to the cell and an increase in the rate of O 2 release (nmol / ml / min) was recorded. The activity of each sample was measured in triplicate. Based on the obtained values, the average plasma activity of catalase in the blood was calculated in “Units of activity in 1 ml” (U / ml), where one unit of activity corresponds to the amount of enzyme that catalyzes the conversion of one micromole of substrate per minute.
Величина ферментативной активности каталазы подставляется в уравнение, полученное после подгонки модели и используется для вычисления вероятности преждевременных родов у конкретной пациентки:The magnitude of the enzymatic activity of catalase is substituted into the equation obtained after fitting the model and is used to calculate the probability of premature birth in a particular patient:
где р - вероятность развития преждевременных родов, Katalaz - уровень активности каталазы в ЕД/мл;where p is the probability of premature birth, Katalaz is the level of catalase activity in units / ml;
е - константа Эйлера ≈2.718281,e is the Euler constant ≈2.718281,
при вероятности, большей или равной 0.5643984, прогнозируются преждевременные роды в ближайшие 7 дней.with a probability greater than or equal to 0.5643984, premature birth is predicted in the next 7 days.
Примеры использования изобретенияExamples of the use of the invention
Пример №1Example No. 1
Беременная Н., 33 лет (7017/17) поступила в стационар с диагнозом: «Беременность 30 недель. Головное предлежание. Угроза преждевременных родов».Pregnant N., 33 years old (7017/17) was admitted to the hospital with a diagnosis: “Pregnancy 30 weeks. Head presentation. The threat of premature birth. "
Из анамнеза: Менструальная функция с 14 лет, регулярная через 26 дней, по 5 дней. При обследовании по экспресс-методу определения уровня активности каталазы, изменений не выявлено. Данная беременность 2-я, наступила самопроизвольно. В анамнезе 1 самопроизвольные роды в сроке 39 недель гестации. Беременность осложнилась ранним токсикозом легкой степени в I триместре, угрозой выкидыша в сроке 8-9 недель. II триместр - протекал без осложнений. В III триместре в связи угрозой преждевременных родов в 30 недель была госпитализирована, при поступлении взят биоматериал для оценки уровня активности каталазы в периферической кровиFrom the anamnesis: Menstrual function from 14 years old, regular after 26 days, 5 days each. Examination by the express method for determining the level of catalase activity showed no changes. This pregnancy is the 2nd, occurred spontaneously. A history of 1 spontaneous birth in a period of 39 weeks of gestation. Pregnancy was complicated by early mild toxicosis in the first trimester, the threat of miscarriage in the period of 8-9 weeks. II trimester - proceeded without complications. In the III trimester due to the threat of preterm birth, she was hospitalized at 30 weeks, on admission biomaterial was taken to assess the level of catalase activity in peripheral blood
Получены следующие результаты:The following results were obtained:
р=0.23624431, прогнозируется возможность пролонгирования беременности.p = 0.23624431, the possibility of prolongation of pregnancy is predicted.
Беременность удалось пролонгировать на 6 недель, что считается положительным результатом прогнозирования. Так как в случае пролонгирования беременности на срок, равный или более 48 ч, возможно проведение полного курса профилактики РДС плода, своевременно начать токолитическую терапию, что в свою очередь позволяет улучшить перинатальные исходы [1, 2].The pregnancy was prolonged for 6 weeks, which is considered a positive result of prediction. Since in the case of prolonging pregnancy for a period equal to or more than 48 hours, it is possible to conduct a full course of prophylaxis of fetal RDS, timely start of tocolytic therapy, which in turn improves perinatal outcomes [1, 2].
Пример №2Example No. 2
Беременная К., 28 лет (6804/15) поступила в стационар с диагнозом: «Беременность 28 недель. Головное предлежание. Угрожающие преждевременные роды».Pregnant K., 28 years old (6804/15), was admitted to the hospital with a diagnosis of “Pregnancy 28 weeks. Head presentation. Threatening premature birth. "
Из анамнеза: Менструальная функция с 14 лет, регулярная, через 30 дней, по 5 дней. Данная беременность 1-я, наступила самопроизвольно. Беременность осложнилась угрозой прерывания беременности, анемией. При поступлении осуществили взятие материала периферической крови на определение экспресс-методом активности каталазы, был определен уровень каталазы в периферической крови.From the anamnesis: Menstrual function from 14 years old, regular, after 30 days, 5 days each. This pregnancy is the 1st, occurred spontaneously. Pregnancy was complicated by the threat of abortion, anemia. On admission, peripheral blood material was taken for determination of catalase activity by the express method, the level of catalase in peripheral blood was determined.
Получены следующие результаты:The following results were obtained:
р=0.99787535, прогнозируются преждевременные роды.p = 0.99787535, preterm delivery is predicted.
У данной пациентки на следующий день после госпитализации произошли преждевременные роды в сроке 28 недель мертвым недоношенным мальчиком массой 1130 г длиной 38 см.In this patient, the day after hospitalization, premature birth occurred at 28 weeks of age by a dead premature baby boy weighing 1130 g and a length of 38 cm.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫBIBLIOGRAPHY
1. Goldenberg R.L., Culhane J.F., Iams J.D., Romero R. Epidemiology and causes of preterm birth. Lancet. 2008; 5; 371 (9606): 75-84.1. Goldenberg R. L., Culhane J. F., Iams J. D., Romero R. Epidemiology and causes of preterm birth. Lancet. 2008; 5; 371 (9606): 75-84.
2. Romero R., Miranda J., Chaemsaithong P., Chaiworapongsa Т., Kusanovic J.P., Dong Z., Ahmed A.I., Shaman M., Lannaman K., Yoon B.H., Hassan S.S., Kim C.J., Korzeniewski S.J., Yeo L., Kim Y.M. Sterile and microbial-associated intra-amniotic inflammation in preterm prelabor rupture of membranes. J Matern Fetal Neonatal Med. 2015; 28 (12): 1394-1409.2. Romero R., Miranda J., Chaemsaithong P., Chaiworapongsa T., Kusanovic JP, Dong Z., Ahmed AI, Shaman M., Lannaman K., Yoon BH, Hassan SS, Kim CJ, Korzeniewski SJ, Yeo L ., Kim YM Sterile and microbial-associated intra-amniotic inflammation in preterm prelabor rupture of membranes. J Maternal Fetal Neonatal Med. 2015; 28 (12): 1394-1409.
3. Romero R., Miranda J., Chaiworapongsa Т., Chaemsaithong P., Gotsch F., Dong Z., Ahmed A.I., Yoon B.H., Hassan S.S., Kim C.J., Korzeniewski S.J., Yeo L., Kim Y.M. Sterile intra-amniotic inflammation in asymptomatic patients with a sonographic short cervix: prevalence and clinical significance. J Matern Fetal Neonatal Med. 2014; 24: 1-17.3. Romero R., Miranda J., Chaiworapongsa T., Chaemsaithong P., Gotsch F., Dong Z., Ahmed A.I., Yoon B.H., Hassan S.S., Kim C.J., Korzeniewski S.J., Yeo L., Kim Y.M. Sterile intra-amniotic inflammation in asymptomatic patients with a sonographic short cervix: prevalence and clinical significance. J Maternal Fetal Neonatal Med. 2014; 24: 1-17.
4. Левит Д.А., Лейдерман И.Н. Острое катаболическое состояние при синдроме системного воспалительного ответа различной этиологии. Попытка клинического анализа // Вестник интенсивной терапии 2006; 2: 9-14.4. Levit D.A., Leiderman I.N. An acute catabolic state with a systemic inflammatory response syndrome of various etiologies. Attempted clinical analysis // Bulletin of Intensive Care 2006; 2: 9-14.
5. Singer М., Biomarkers in sepsis. Curr Opin Pulm Med. 2013, May; 19(3): 305-9.5. Singer M., Biomarkers in sepsis. Curr Opin Pulm Med. 2013, May; 19 (3): 305-9.
6. Сухих Г.Т., Ванько Л.В. Иммунные факторы в этиологии и патогенезе осложнений беременности // Акушерство и гинекология. 2012: №1. - С. 128-136.6. Sukhikh G.T., Vanko L.V. Immune factors in the etiology and pathogenesis of pregnancy complications // Obstetrics and gynecology. 2012: No. 1. - S. 128-136.
7. Иммунология. Практикум. Учебное пособие. Под ред. Л.В. Ковальчука, Г.А. Игнатьевой, Л.В. Ганковской. М.: ГЭОТАР-Медиа, 2012; 176 с. 1. Jiang G., Liu X., Wang М., Chen Н., Chen Z., Qiu Т. Oxymatrine ameliorates renal ischemia-repermsion injury from oxidative stress through Nrf2/HO-1 pathway. Acta Cir Bras. 2015; 30 (6): 422-429.7. Immunology. Workshop Tutorial. Ed. L.V. Kovalchuk, G.A. Ignatieva, L.V. Gankovskoy. M .: GEOTAR-Media, 2012; 176 p. 1. Jiang G., Liu X., Wang M., Chen N., Chen Z., Qiu T. Oxymatrine ameliorates renal ischemia-repermsion injury from oxidative stress through Nrf2 / HO-1 pathway. Acta Cir Bras. 2015; 30 (6): 422-429.
8. Ayaz A., Agarwal A., Sharma R., Arafa M., Elbardisi H., Cui Z. Impact of precise modulation of reactive oxygen species levels on spermatozoa proteins in infertile men. Clin Proteomics. 2015; 12 (1): 4.8. Ayaz A., Agarwal A., Sharma R., Arafa M., Elbardisi H., Cui Z. Impact of precise modulation of reactive oxygen species levels on spermatozoa proteins in infertile men. Clin Proteomics. 2015; 12 (1): 4.
9. Menon R Oxidative stress damage as a detrimental factor in preterm Birth pathology. Front Immunol. 2014 Nov 12; 5: 567.9. Menon R Oxidative stress damage as a detrimental factor in preterm Birth pathology. Front Immunol. 2014 Nov 12; 5: 567.
10. Auten R.L., Davis J.M. Oxygen toxicity and reactive oxygen species: the devil is in the details. Pediatr Res. 2009; 66(2): 121-127.10. Auten R.L., Davis J.M. Oxygen toxicity and reactive oxygen species: the devil is in the details. Pediatr Res. 2009; 66 (2): 121-127.
11. Knuppel R.A, Hassan M.I., Mc Dermott J.J., Tucker M., Morrison J.C. Oxidative stress and antioxidants: preterm birtb and preterm infants. In: Morrison J., ed. Preterm Birth - Mother and Child. InTech 2012; 125-150.11. Knuppel R.A., Hassan M.I., Mc Dermott J.J., Tucker M., Morrison J.C. Oxidative stress and antioxidants: preterm birtb and preterm infants. In: Morrison J., ed. Preterm Birth - Mother and Child. InTech 2012; 125-150.
12. Siddiqui I.A., Jaleel A., Tamimi W., Al Kadri H.M. Role of oxidative stress in the pathogenesis of preeclampsia. Am J Obstet Gynecol. 2010; 282(5): 469-74.12. Siddiqui I.A., Jaleel A., Tamimi W., Al Kadri H.M. Role of oxidative stress in the pathogenesis of preeclampsia. Am J Obstet Gynecol. 2010; 282 (5): 469-74.
13. Ruder E.H., Hartman Т.J., Goldman M.B. Impact of oxidative stress on female fertility. Curr Opin Obstet Gynecol 2009; 21 (3): 219-222.13. Ruder E.H., Hartman T.J., Goldman M.B. Impact of oxidative stress on female fertility. Curr Opin Obstet Gynecol 2009; 21 (3): 219-222.
14. Mert I., Oruc A.S., Yuksel S., Cakar E.S., Buyukkagnici U., Karaer A., Danwan N. Role of oxidative stress in preeclampsia and intrauterine growth restriction. Obstet Gynecol Res. 2012. 38 (4): 658-664.14. Mert I., Oruc A.S., Yuksel S., Cakar E.S., Buyukkagnici U., Karaer A., Danwan N. Role of oxidative stress in preeclampsia and intrauterine growth restriction. Obstet Gynecol Res. 2012.38 (4): 658-664.
Claims (5)
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2017111607A RU2645093C1 (en) | 2017-04-06 | 2017-04-06 | Prognostication of preterm delivery through the detection of catalase activity in peripheral blood plasma |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2017111607A RU2645093C1 (en) | 2017-04-06 | 2017-04-06 | Prognostication of preterm delivery through the detection of catalase activity in peripheral blood plasma |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2645093C1 true RU2645093C1 (en) | 2018-02-15 |
Family
ID=61226990
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2017111607A RU2645093C1 (en) | 2017-04-06 | 2017-04-06 | Prognostication of preterm delivery through the detection of catalase activity in peripheral blood plasma |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2645093C1 (en) |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2408014C2 (en) * | 2009-03-10 | 2010-12-27 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Российский государственный медицинский университет им. Н.И. Пирогова Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации" | Method for prediction of preterm delivery of infectious genesis |
RU2485896C1 (en) * | 2012-02-07 | 2013-06-27 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Уральский научно-исследовательский институт охраны материнства и младенчества" Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации (ФГБУ "НИИ ОММ" Минздравсоцразвития России) | Method of predicting pre-term labour in patients with primary recurrent miscarriage |
RU2486519C1 (en) * | 2011-11-15 | 2013-06-27 | Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Российский национальный исследовательский медицинский университет им. Н.И. Пирогова" Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации (ГБОУ ВПО РНИМУ им. Н.И. Пирогова Минздравсоцразви | Method for predicting premature birth and intrauterine infection |
-
2017
- 2017-04-06 RU RU2017111607A patent/RU2645093C1/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2408014C2 (en) * | 2009-03-10 | 2010-12-27 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Российский государственный медицинский университет им. Н.И. Пирогова Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации" | Method for prediction of preterm delivery of infectious genesis |
RU2486519C1 (en) * | 2011-11-15 | 2013-06-27 | Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Российский национальный исследовательский медицинский университет им. Н.И. Пирогова" Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации (ГБОУ ВПО РНИМУ им. Н.И. Пирогова Минздравсоцразви | Method for predicting premature birth and intrauterine infection |
RU2485896C1 (en) * | 2012-02-07 | 2013-06-27 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Уральский научно-исследовательский институт охраны материнства и младенчества" Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации (ФГБУ "НИИ ОММ" Минздравсоцразвития России) | Method of predicting pre-term labour in patients with primary recurrent miscarriage |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Henkel et al. | DNA fragmentation of spermatozoa and assisted reproduction technology | |
Kimura et al. | Synchrony of telomere length among hematopoietic cells | |
Hawrylyshyn et al. | Premature rupture of membranes: the role of C-reactive protein in the prediction of chorioamnionitis | |
Nasri et al. | T helper cells profile and CD4+ CD25+ Foxp3+ regulatory T cells in polycystic ovary syndrome | |
Lee et al. | Global gene expression changes induced in the human placenta during labor | |
Nemeth et al. | Fetal membrane distention: II. Differentially expressed genes regulated by acute distention in vitro | |
Purwosunu et al. | Cell‐free mRNA concentrations of CRH, PLAC1, and selectin‐P are increased in the plasma of pregnant women with preeclampsia | |
Brubel et al. | Serum galectin-9 as a noninvasive biomarker for the detection of endometriosis and pelvic pain or infertility-related gynecologic disorders | |
Ebina et al. | Natural killer cell activity in women with recurrent miscarriage: Etiology and pregnancy outcome | |
Pacora et al. | The diagnostic performance of the beta-glucan assay in the detection of intra-amniotic infection with Candida species | |
Romero et al. | Placental bed disorders in the genesis of the great obstetrical syndromes | |
Zolfaghari et al. | A new approach to the preeclampsia puzzle; MicroRNA-326 in CD4+ lymphocytes might be as a potential suspect | |
Giannella et al. | Nitric oxide metabolite levels and assessment of cervical length in the prediction of preterm delivery among women undergoing symptomatic preterm labor | |
Lyubomirskaya et al. | Preterm premature rupture of membranes: prediction of risks in women of Zaporizhzhia region of Ukraine | |
Bhatti et al. | The amniotic fluid cell-free transcriptome in spontaneous preterm labor | |
Prearo Moço et al. | Toll-like receptor-2 and-4 expression by maternal neutrophils in preterm labor | |
Woon et al. | Uterine NK cells underexpress KIR2DL1/S1 and LILRB1 in reproductive failure | |
RU2645093C1 (en) | Prognostication of preterm delivery through the detection of catalase activity in peripheral blood plasma | |
Torbé et al. | Are vaginal fluid procalcitonin levels useful for the prediction of subclinial infection in patients with preterm premature rupture of membranes? | |
Soydinç et al. | Maternal plasma prolidase, matrix metalloproteinases 1 and 13, and oxidative stress levels in pregnancies complicated by preterm premature rupture of the membranes and chorioamnionitis | |
Gardó et al. | Cytogenetic analysis of spontaneous abortions with direct analysis of chorionic villi | |
Fujii et al. | Decrease in activated regulatory T cell populations in the endometrium during ovulation in endometriosis | |
RU2646505C1 (en) | Method is proposed for revealing the hereditary predisposition to the development of fetal growth retardation among the women smokers | |
Sari et al. | Increased level of malondialdehyde in preterm labor | |
RU2741500C1 (en) | Method for prediction of pregnancy outcome in threatening preterm delivery |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20190407 |