RU2618838C1 - Strain rhodococcus jialingiae b-m-1 vkpm as-1967 - destructor of oil and oil products - Google Patents
Strain rhodococcus jialingiae b-m-1 vkpm as-1967 - destructor of oil and oil products Download PDFInfo
- Publication number
- RU2618838C1 RU2618838C1 RU2016103374A RU2016103374A RU2618838C1 RU 2618838 C1 RU2618838 C1 RU 2618838C1 RU 2016103374 A RU2016103374 A RU 2016103374A RU 2016103374 A RU2016103374 A RU 2016103374A RU 2618838 C1 RU2618838 C1 RU 2618838C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- oil
- jialingiae
- strain
- rhodococcus
- products
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B09—DISPOSAL OF SOLID WASTE; RECLAMATION OF CONTAMINATED SOIL
- B09C—RECLAMATION OF CONTAMINATED SOIL
- B09C1/00—Reclamation of contaminated soil
- B09C1/10—Reclamation of contaminated soil microbiologically, biologically or by using enzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C02—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
- C02F—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
- C02F3/00—Biological treatment of water, waste water, or sewage
- C02F3/34—Biological treatment of water, waste water, or sewage characterised by the microorganisms used
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Environmental & Geological Engineering (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Water Supply & Treatment (AREA)
- Hydrology & Water Resources (AREA)
- Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Soil Sciences (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к области микробиологии и может быть использовано при очистке почвы и воды в случае аварийных разливов нефти и нефтепродуктов (газовый конденсат, бензин, мазут) на стадии проведения биологического этапа рекультивации при температуре окружающей среды от плюс 4 до 32°С.The invention relates to the field of microbiology and can be used in the purification of soil and water in the event of accidental spills of oil and oil products (gas condensate, gasoline, fuel oil) at the stage of the biological stage of reclamation at ambient temperature from + 4 to 32 ° C.
Проблема загрязнения окружающей среды нефтью и нефтепродуктами в настоящее время становится все более актуальной, в связи с изношенностью оборудования возникают значительные разливы данных продуктов. Наиболее эффективными способами очистки нефтезагрязненных территорий в настоящее время являются биологические методы, основанные на использовании микроорганизмов-нефтедеструкторов. Однако ситуация осложняется тем, что микроорганизмы обладают избирательностью в отношении определенных по составу нефтепродуктов.The problem of environmental pollution by oil and oil products is now becoming increasingly important, due to the deterioration of equipment there are significant spills of these products. The most effective methods of cleaning oil-contaminated areas are currently biological methods based on the use of microorganisms-oil destructors. However, the situation is complicated by the fact that microorganisms have selectivity in relation to the composition of petroleum products.
Известны штаммы Rhodococcus erythropolis, Rhodococcus luteus, Micrococcus flavus (S4 1493666), которые осуществляют деструкцию нефтепродуктов в ассоциации, что увеличивает трудозатраты на изготовление и стоимость конечного препарата.Known strains of Rhodococcus erythropolis, Rhodococcus luteus, Micrococcus flavus (S4 1493666), which carry out the destruction of petroleum products in the association, which increases labor costs for the manufacture and cost of the final drug.
Известны штаммы Acinetronacter sp. НВ-1 (RU 2077579); Acinetronacter sp. JN-2 (RU 2064017); Pseudomonas alcaligenes E-7 (RU 2134723); Pseudomonas putida 36 (SU 1076446), пригодные для очистки нефти. Однако данные о нефтедеструкции конкретных нефтепродуктов отсутствуют.Acinetronacter sp. HB-1 (RU 2077579); Acinetronacter sp. JN-2 (RU 2064017); Pseudomonas alcaligenes E-7 (RU 2134723); Pseudomonas putida 36 (SU 1076446), suitable for oil refining. However, data on the oil destruction of specific petroleum products are not available.
Большая эффективность в условиях низких положительных температур установлена для штаммов Rhodococcus erythropolis Е-17 (RU 2019527) при биодеградации нефти, без результатов утилизации нефтепродуктов.Great efficiency in conditions of low positive temperatures has been established for strains of Rhodococcus erythropolis E-17 (RU 2019527) in the biodegradation of oil, without the results of the disposal of oil products.
Наиболее близким аналогом является штамм Rhodococcus sp. - деструктор нефтяных углеводородов, депонированный во Всероссийской коллекции микроорганизмов под номером Ас-2046 (патент РФ №2518349 от 11.04.2013). Недостатком данного штамма является отсутствие информации по нефтеокисляющей способности в отношении легких углеводородов (керосин, газовый конденсат), а также о его активности при низких положительных температурах окружающей среды.The closest analogue is a strain of Rhodococcus sp. - a petroleum hydrocarbon destructor deposited in the All-Russian collection of microorganisms under the number Ac-2046 (RF patent No. 2518349 from 04/11/2013). The disadvantage of this strain is the lack of information on oil-oxidizing ability in relation to light hydrocarbons (kerosene, gas condensate), as well as its activity at low positive ambient temperatures.
Задачей изобретения является расширение номенклатуры штаммов нефтедеструкторов, обладающих утилизирующей способностью по отношению к нефти и нефтепродуктам при широком диапазоне температур (от плюс 4 до плюс 32°С).The objective of the invention is to expand the range of strains of oil destructors with a utilizing ability in relation to oil and oil products over a wide temperature range (from plus 4 to plus 32 ° C).
Полученный штамм характеризуется следующими признаками:The resulting strain is characterized by the following features:
Культурально-морфологические признакиCultural and morphological features
При выращивании на FT-агаре формирует колонии округлые, слизистые, кремового цвета (с возрастом приобретают розовый оттенок), с ровным краем, диаметром 1-3 мм. В тиогликолевой среде и на бульоне Хоттингера наблюдается равномерное помутнение среды со слизистым осадком на 2 сутки, при этом среда приобретает розовый оттенок. При микроскопии мазков, окрашенных по Граму, в молодых культурах (12-16 часов) преобладают грамположительные прямые или слегка изогнутые палочки с закругленными краями, расположенные отдельно или короткими (по 2-3 особи) цепочками, которые с возрастом (18 и более часов) распадаются на кокки.When grown on FT-agar, it forms round, mucous, cream-colored colonies (they acquire a pink hue with age), with a smooth edge, with a diameter of 1-3 mm. In thioglycol medium and on Hottinger broth, a uniform turbidity of the medium with mucous sediment is observed for 2 days, while the medium acquires a pink hue. Microscopy of Gram stained smears in young cultures (12-16 hours) is dominated by gram-positive straight or slightly curved sticks with rounded edges, located separately or short (2-3 individuals) in chains that are older (18 or more hours) break up into cocci.
Физиолого-биохимические признакиPhysiological and biochemical characteristics
Штаммы обладают способностью к росту при температуре от плюс 4 до 32°С в аэробных условиях, оптимум при температуре 28-32°С и рН 6,0-8,0. Продолжительность культивирования на плотной питательной среде (FT-агар) - 48-72 часа, жидкой питательной среде (минимальная солевая среда Ворошиловой-Диановой) - 96…120 часов. Обладает способностью к росту при рН, равном 9,0, и в присутствии 6% NaCl.The strains have the ability to grow at temperatures from plus 4 to 32 ° C under aerobic conditions, the optimum at a temperature of 28-32 ° C and pH 6.0-8.0. The duration of cultivation in solid nutrient medium (FT-agar) is 48-72 hours, liquid culture medium (minimum salt medium Voroshilova-Dianova) - 96 ... 120 hours. It has the ability to grow at a pH of 9.0 and in the presence of 6% NaCl.
Штамм образует уреазу, фосфатазу, γ-глютамилтрансферазу и β-глюкозидазу.The strain forms urease, phosphatase, γ-glutamyl transferase and β-glucosidase.
Штамм не обладает патогенностью для человека и животных согласно классификации, приведенной в Санитарных правилах СП 1.3.2322-08.The strain does not have pathogenicity for humans and animals according to the classification given in the Sanitary rules SP 1.3.2322-08.
Поддержание и хранение штамма осуществляется в лиофилизированном состоянии при температуре 2…6°С в течение 12 месяцев. Для поддержания свойств штамма проводится пассаж хранившейся культуры на жидкой минимизированной среде Ворошиловой-Диановой с добавлением нефти и последующем пересеве на аналогичную плотную питательную среду, содержащую в своем составе 2% агара по методу Дригальского. В дальнейшем проводят последовательное накопление микробных клеток, отобранных с отдельных колоний, путем пересевов на плотной питательной среде FT-агар, скошенной в пробирках и матрацах. Культуру, выращенную на скошенной питательной среде в матрацах, смывают средой высушивания и подвергают лиофильной сушке. Полученную сухую культуру закладывают на последующее хранение. При необходимости приготовления микробной массы сухую культуру ресуспендируют физиологическим раствором и полученную суспензию микробных клеток используют для дальнейшего накопления биомассы в соответствии с разработанной технологией.Maintenance and storage of the strain is carried out in a lyophilized state at a temperature of 2 ... 6 ° C for 12 months. To maintain the properties of the strain, the passage of the stored culture is carried out on Voroshilova-Dianova liquid minimized medium with the addition of oil and subsequent subculture on a similar solid nutrient medium containing 2% agar in its composition according to the Drigalsky method. Subsequently, sequential accumulation of microbial cells taken from individual colonies is carried out by reseeding on solid nutrient medium FT-agar, beveled in test tubes and mattresses. The culture grown on a mowed nutrient medium in mattresses is washed off with a drying medium and freeze-dried. The resulting dry culture is laid for subsequent storage. If it is necessary to prepare the microbial mass, the dry culture is resuspended with physiological saline and the resulting suspension of microbial cells is used for further biomass accumulation in accordance with the developed technology.
Изобретение поясняется следующими примерами:The invention is illustrated by the following examples:
Пример 1. Выделение штамма Rhodococcus jialingiae Б-М-1 ВКПМ Ас-1967Example 1. The selection of the strain Rhodococcus jialingiae BM-1 VKPM Ac-1967
Штамм Rhodococcus jialingiae Б-М-1 ВКПМ Ас-1967 выделен из почвы Кировской области, загрязненной нефтепродуктами, следующим образом: 1,0 г исследуемого материала разводили в 9,0 см3 стерильного физиологического раствора и высевали на чашки с плотной питательной средой Ворошиловой-Диановой, содержащей 2% агара и 1% нефти. Смесь выросших на чашках с плотной питательной средой культур смывали 10,0 см3 физиологического раствора и засевали в колбы с жидкой питательной средой Ворошиловой- Диановой, содержащей 2% нефти. После инкубирования в течение 120 часов при температуре 32°С полученную культуру высевали на чашки с плотной питательной средой Ворошиловой-Диановой, содержащей 2% агара и 1% нефти. Высев проводили по методу Дригальского на 6 последовательных чашек. В результате проведенных операций была выделена культура Б-М-1, которая характеризовалась выраженной нефтедеструктивной активностью, культурально-морфологическими и биохимическими признаками, присущими роду Rhodococcus. Дальнейшие исследования были проведены совместно со специалистами ФГУП ГосНИИГенетика, в которое были отправлены для проведения токсонометрической идентификации на основании молекулярно-генетического анализа «чистые» агаризованные культуры выделенного изолята. Идентификация штамма Б-М-1 до вида с использованием анализа генов, кодирующих 16SpPHK, показала, что наиболее близкими по исследованному показателю для выделенного изолята являются виды Rhodococcus jialingiae и Rhodococcus gingshengii. Дифференциально-диагностическая оценка была проведена на основании рекомендованных методов оценки культурально-морфологических и физиологических свойств. Результаты исследований представлены в таблице 1.The strain Rhodococcus jialingiae B-M-1 VKPM As-1967 was isolated from the soil of the Kirov region contaminated with oil products, as follows: 1.0 g of the test material was diluted in 9.0 cm 3 of sterile physiological saline and plated on plates with a dense nutrient medium Voroshilova- Dianova containing 2% agar and 1% oil. A mixture of cultures grown on plates with a dense nutrient medium was washed off with 10.0 cm 3 of physiological saline and inoculated into flasks with a liquid nutrient medium Voroshilova-Dianova containing 2% oil. After incubation for 120 hours at a temperature of 32 ° C, the resulting culture was sown on cups with a dense nutrient medium Voroshilova-Dianova containing 2% agar and 1% oil. Sowing was carried out according to the Drigalski method for 6 consecutive cups. As a result of the operations, a B-M-1 culture was isolated, which was characterized by pronounced oil-destructive activity, cultural-morphological and biochemical characteristics inherent in the genus Rhodococcus. Further studies were carried out in conjunction with the specialists of the Federal State Unitary Enterprise GosNII Genetics, to which “pure” agarized cultures of the isolated isolate were sent based on molecular genetic analysis on the basis of molecular genetic analysis. Identification of strain B-M-1 to a species using analysis of genes encoding 16SpPHK showed that the species closest in the studied parameter to the isolated isolate are Rhodococcus jialingiae and Rhodococcus gingshengii. Differential diagnostic assessment was carried out on the basis of recommended methods for assessing cultural, morphological and physiological properties. The research results are presented in table 1.
Таблица 1. Культурально-морфологические и физиологические свойства выделенного штамма Б-М-1 
Полученные результаты свидетельствуют о том, что выделенный штамм относится к виду Rhodococcus jialingiae.The results obtained indicate that the isolated strain belongs to the species Rhodococcus jialingiae.
Результаты проведенных экспериментальных исследований определили целесообразность депонирования штамма Rhodococcus jialingiae во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов под номером Ас-1967.The results of experimental studies determined the feasibility of depositing the strain Rhodococcus jialingiae in the All-Russian collection of industrial microorganisms under the number Ac-1967.
Пример 2. Приготовление посевного материала и препарата на основе микробных клеток Rhodococcus jialingiae штамма Б-М-1 ВКПМ Ас-1967Example 2. Preparation of seed and preparation based on microbial cells of Rhodococcus jialingiae strain B-M-1 VKPM As-1967
Лиофильно выделенную культуру Rhodococcus jialingiae ресуспендируют в 0,9%-ном растворе NaCl и высевают по 0,2 мл на плотную питательную среду FT-агар, скошенную в пробирках, содержащую (г/дм3):The lyophilically isolated culture of Rhodococcus jialingiae is resuspended in a 0.9% NaCl solution and 0.2 ml are plated on a solid FT-agar culture medium, beveled in tubes containing (g / dm 3 ):
Посевы выдерживают при температуре 30±2°С в течение 46…50 часов. Выращенную на скошенной плотной питательной среде в пробирках микробную культуру смывают 0,9%-ным раствором NaCl и готовят посевной материал с концентрацией 1⋅109 микробных тел по оптическому стандарту мутности ГИСК им. Л.А. Тарасевича.Crops are maintained at a temperature of 30 ± 2 ° C for 46 ... 50 hours. The microbial culture grown on a skewed solid nutrient medium in test tubes is washed off with a 0.9% NaCl solution and seed is prepared with a concentration of 1 × 10 9 microbial bodies according to the optical turbidity standard GISK im. L.A. Tarasevich.
Приготовленную бактериальную суспензию вносят в количестве 15 см3 в колбу емкостью 500,0 см3, содержащую 150,0 см3 жидкой питательной среды Ворошиловой-Диановой, включающую (г/дм):The prepared bacterial suspension is added in an amount of 15 cm 3 to a flask with a capacity of 500.0 cm 3 containing 150.0 cm 3 of a Voroshilova-Dianova liquid nutrient medium, including (g / dm):
и культивируют в течение 96…120 часов при температуре 30±2°С. Полученную нативную культуру, содержащую не менее 1⋅109 живых микробов в 1 см3, используют в качестве биологического препарата для оценки деструктивной активности в отношении нефти и нефтепродуктов при различных температурных режимах.and cultured for 96 ... 120 hours at a temperature of 30 ± 2 ° C. The resulting native culture containing at least 1 × 10 9 living microbes in 1 cm 3 is used as a biological preparation for evaluating the destructive activity against oil and oil products at various temperature conditions.
Пример 3. Исследование нефтеокисляющей активности штамма Rhodococcus jialingiae Б-М-1 ВКПМ Ас-1967 в отношении нефти, мазута, бензина и газового конденсатаExample 3. The study of the oil-oxidizing activity of the strain Rhodococcus jialingiae B-M-1 VKPM As-1967 in relation to oil, fuel oil, gasoline and gas condensate
Для определения биодеградационной активности штамма Rhodococcus jialingiae Б-М-1 ВКПМ Ас-1967 в отношении нефти, мазута, бензина и газового конденсата готовят минимальную солевую среду Ворошиловой-Диановой по прописи, приведенной в примере 2. Среду разливают в лабораторные колбы емкостью 500,0 см3 по 150,0 см3. Затем в отдельные колбы вносят нефть, газовый конденсат, бензин, мазут в количестве 0,5 г/л среды и нативную культуру штамма Rhodococcus jialingiae (по примеру 2) в количестве, обеспечивающем конечную биологическую концентрацию в смеси 1⋅107 живых микробных клеток. В качестве контроля параллельно ставят аналогичные пробы без внесения микробной культуры. Затем пробы выдерживали на шуттель-аппарате при температуре 18…22°С и постоянном перемешивании 180 об/мин в течение 7 сут. Определение нефтедеструктивной активности проводили с использованием прямого метода оценки снижения концентрации нефти и нефтепродуктов реакционной смеси. Метод заключается в выделении эмульгированных и растворенных нефтяных компонентов из воды экстракцией четыреххлористым углеродом, хроматографическом отделении нефтепродуктов от сопутствующих органических соединений других классов на колонке, заполненной оксидом алюминия, и количественном их определении по интенсивности поглощения С-Н-связей в инфракрасной области спектра (2930±70) см-1. Измерение количества нефтепродукта проводится с использованием прибора КН-2м в соответствии с ПНДФ.14.1:2:4.168-200.To determine the biodegradation activity of the strain Rhodococcus jialingiae B-M-1 VKPM As-1967 in relation to oil, fuel oil, gasoline and gas condensate, the minimum salt medium Voroshilova-Dianova is prepared according to the recipe shown in Example 2. The medium is poured into laboratory flasks with a capacity of 500.0 cm 3 to 150.0 cm 3 . Then, oil, gas condensate, gasoline, fuel oil in an amount of 0.5 g / l of medium and the native culture of the strain Rhodococcus jialingiae (according to Example 2) in an amount providing a final biological concentration in a mixture of 1 × 10 7 living microbial cells are added to separate flasks. As a control, similar samples are placed in parallel without introducing a microbial culture. Then the samples were kept on a shuttle machine at a temperature of 18 ... 22 ° C and with constant stirring 180 rpm for 7 days. The determination of oil destructive activity was carried out using the direct method for assessing the decrease in the concentration of oil and oil products of the reaction mixture. The method consists in isolating emulsified and dissolved oil components from water by extraction with carbon tetrachloride, chromatographic separation of oil products from other organic compounds of other classes on a column filled with alumina, and quantifying them by the intensity of absorption of C-H bonds in the infrared region of the spectrum (2930 ± 70) cm -1 . The measurement of the amount of oil is carried out using the device KN-2m in accordance with PNDF.14.1: 2: 4.168-200.
Биодеградационная активность штамма Rhodococcus jialingiae Ac-1967 рассчитывается по формуле 1:The biodegradation activity of the strain Rhodococcus jialingiae Ac-1967 is calculated by the formula 1:
где БА - биодеградационная активность;where BA is biodegradation activity;
mн.к. - масса нефтепродуктов в контроле, в мг, после 7 сут;m n.k. - the mass of petroleum products in the control, in mg, after 7 days;
mн.п. - масса нефтепродуктов в опыте, в мг, после 7 сут.m n.p. - the mass of petroleum products in the experiment, in mg, after 7 days.
Результаты, приведенные в таблице 2, свидетельствуют о том, что углеводородокисляющая активность штамма Rhodococcus jialingiae составляла в отношении, %:The results shown in table 2 indicate that the hydrocarbon-oxidizing activity of the strain Rhodococcus jialingiae was in the ratio,%:
Таблица 2 - Результаты оценки углеводородокисляющей активности штамма Rhodococcus jialingiae Б-М-1 ВКПМ Ас-1967 в отношении нефти и нефтепродуктов 
Пример 4. Определение биодеградационной активности штамма Rhodococcus jialingiae Б-М-1 ВКПМ Ас-1967 в отношении нефти и нефтепродуктов при загрязнении воды и различных температурных режимахExample 4. Determination of the biodegradation activity of the strain Rhodococcus jialingiae B-M-1 VKPM Ac-1967 in relation to oil and oil products during water pollution and various temperature conditions
Для определения биодеградационной активности штамма Rhodococcus jialingiae ВКПМ Aс-1967 в отношении нефти и нефтепродуктов при загрязнении воды и различных температурных режимах минимальную солевую среду Ворошиловой-Диановой (пропись среды изложена в примере 2) разливали в стаканы емкостью 500,0 см3 по 150,0 см3. Затем в стаканы вносили нефть в количестве 1 см3/дм3 и нативную культуру штамма Rhodococcus jialingiae (по примеру 2) в количестве, обеспечивающем конечную биологическую концентрацию в смеси 1⋅107 живых микробных клеток в 1 см3. Приготовленные пробы выдерживали в статических условиях с периодическим (2-3 раза в сутки) перемешиванием при температурах плюс 2…6, 18…22, 30 …32°С в течение 7 и 14 сут. Через указанные промежутки времени при выбранных температурных режимах измеряли концентрацию нефтепродуктов в пробах (в соответствии с методом, изложенным в примере 1). Полученные результаты проведенных исследований представлены в таблице 3.To determine the biodegradation activity of the strain Rhodococcus jialingiae VKPM As-1967 in relation to oil and oil products during water pollution and various temperature conditions, the minimum salt medium of Voroshilova-Dianova (the medium is described in Example 2) was poured into glasses with a capacity of 500.0 cm 3 at 150.0 cm 3 . Then, 1 cm 3 / dm 3 oil and a native culture of the strain Rhodococcus jialingiae (according to Example 2) were added to the glasses in an amount providing a final biological concentration in a mixture of 1 × 10 7 living microbial cells in 1 cm 3 . The prepared samples were kept under static conditions with periodic (2-3 times a day) stirring at temperatures plus 2 ... 6, 18 ... 22, 30 ... 32 ° C for 7 and 14 days. At the indicated time intervals at the selected temperature conditions, the concentration of oil products in the samples was measured (in accordance with the method described in example 1). The results of the studies are presented in table 3.
Таблица 3 - Результаты оценки биодеградационной активности штамма Rhodococcus jialingiae Б-М-1 ВКПМ Ас-1967 в отношении нефти и нефтепродуктов при загрязнении воды и различных температурных режимах
Пример 5. Определение биодеградационной активности штамма Rhodococcus jialingiae Б-М-1 ВКПМ Ас-1967 в отношении нефти и нефтепродуктов при загрязнении почвы и различных температурных режимахExample 5. Determination of the biodegradation activity of the strain Rhodococcus jialingiae B-M-1 VKPM Ac-1967 in relation to oil and oil products when soil is contaminated and at various temperature conditions
Определение биодеградационной активности штамма Rhodococcus jialingiae Б-М-1 ВКПМ Ас-1967 в отношении нефти и нефтепродуктов при загрязнении почвы и различных температурных режимах проводили следующим образом. Исходный материал (почву) доводили до 50-60% остаточной влажности путем внесения физиологического раствора и фасовали по 50,0 г в чашки Петри. Затем вносили нефть и нефтепродукты из расчета 10 г/кг почвы и культуру штамма Rhodococcus jialingiae из расчета конечной концентрации 1⋅107 живых микробов на 1 г загрязненной почвы. Приготовленные пробы выдерживали при температурах плюс 2…6; 18…22; 30…32°С в течение 7 и 14 сут. Остаточную влажность поддерживали орошением физиологическим раствором на протяжении срока наблюдения. Через указанные промежутки времени измеряли концентрацию нефтепродуктов в пробах методом спектрометрии, который заключается в экстракции нефтепродуктов из почвы, их хроматографическом отделении от сопутствующих органических соединений других классов и количественном определении нефтепродуктов по интенсивности поглощения в ИК-области спектра. Измерение количества нефтепродукта проводится с использованием прибора КН-2м в соответствии с «Методикой выполнения измерений массовой доли нефтепродуктов в минеральных, органогенных, органоминеральных почвах и донных отложениях методом спектрометрии» (ПНДФ.16.1:2.2.22-98). Полученные результаты представлены в таблице 4.The determination of the biodegradation activity of the strain Rhodococcus jialingiae B-M-1 VKPM Ac-1967 in relation to oil and oil products during soil contamination and various temperature conditions was carried out as follows. The source material (soil) was brought to 50-60% of residual moisture by adding physiological saline and packaged in 50.0 g in Petri dishes. Then, oil and oil products were added at a rate of 10 g / kg of soil and a culture of the strain Rhodococcus jialingiae at a final concentration of 1 × 10 7 living microbes per 1 g of contaminated soil. The prepared samples were kept at temperatures plus 2 ... 6; 18 ... 22; 30 ... 32 ° C for 7 and 14 days. Residual moisture was maintained by saline irrigation over the observation period. At the indicated time intervals, the concentration of oil products in the samples was measured by spectrometry, which consists in the extraction of oil products from the soil, their chromatographic separation from related organic compounds of other classes and the quantitative determination of oil products by the intensity of absorption in the infrared region of the spectrum. The measurement of the amount of oil product is carried out using the KN-2m instrument in accordance with the "Methodology for measuring the mass fraction of oil products in mineral, organogenic, organomineral soils and bottom sediments by spectrometry" (PNDF.16.1: 2.2.22-98). The results are presented in table 4.
Таблица 4 - Результаты оценки биодеградационной активности штамма Rhodococcus jialingiae Б-М-1 ВКПМ Ас-1967 в отношении нефти и нефтепродуктов при загрязнении почвы и различных температурных режимахTable 4 - The results of the evaluation of the biodegradation activity of the strain Rhodococcus jialingiae B-M-1 VKPM Ac-1967 in relation to oil and oil products during soil pollution and various temperature conditions
Таким образом, заявляемый штамм утилизирует нефть и нефтепродукты (газовый конденсат, бензин, мазут) в воде и почве в широком диапазоне температур (от плюс 2…6 до 30…32°С).Thus, the claimed strain utilizes oil and oil products (gas condensate, gasoline, fuel oil) in water and soil in a wide temperature range (from plus 2 ... 6 to 30 ... 32 ° C).
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2016103374A RU2618838C1 (en) | 2016-02-02 | 2016-02-02 | Strain rhodococcus jialingiae b-m-1 vkpm as-1967 - destructor of oil and oil products |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2016103374A RU2618838C1 (en) | 2016-02-02 | 2016-02-02 | Strain rhodococcus jialingiae b-m-1 vkpm as-1967 - destructor of oil and oil products |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2618838C1 true RU2618838C1 (en) | 2017-05-11 |
Family
ID=58715837
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2016103374A RU2618838C1 (en) | 2016-02-02 | 2016-02-02 | Strain rhodococcus jialingiae b-m-1 vkpm as-1967 - destructor of oil and oil products |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2618838C1 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2759662C2 (en) * | 2021-07-19 | 2021-11-16 | Общество с ограниченной ответственностью "АВИАХИМ" (ООО "АВИАХИМ") | Strain of bacteria rhodococcus degradans h33 ac-2901d - petroleum and petroleum products destructor |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2019527C1 (en) * | 1993-04-30 | 1994-09-15 | Северный государственный научно-исследовательский и проектно-конструкторский геологический центр | Method of soil treatment from the oil pollution |
| RU2023686C1 (en) * | 1992-04-13 | 1994-11-30 | Научно-производственное объединение "Биотехинвест" | Consortium of microorganisms rhodococcus sp, rhodococcus maris, rhodococcus erythropolis, pseudomonas stutzeri, candida sp, used for treatment of soil subsaline-water ecosystems from oil products pollution |
| RU2133769C1 (en) * | 1998-03-25 | 1999-07-27 | Государственный научный центр прикладной микробиологии | Strain of bacterium rhodococcus species used for water and soil treatment from oil and petroleum products |
| RU2300561C1 (en) * | 2005-12-13 | 2007-06-10 | Автономная некоммерческая организация "Научно-техническое объединение "ИТИН" | Strain rhodococcus globerulus h-42 for decomposition of petroleum and petroleum products |
| RU2518349C1 (en) * | 2013-04-11 | 2014-06-10 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Кубанский государственный университет" (ФГБОУ ВПО "КубГТУ") | STRAIN OF Rhodococcus sp-DESTRUCTOR OF PETROLEUM HYDROCARBONS |
-
2016
- 2016-02-02 RU RU2016103374A patent/RU2618838C1/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2023686C1 (en) * | 1992-04-13 | 1994-11-30 | Научно-производственное объединение "Биотехинвест" | Consortium of microorganisms rhodococcus sp, rhodococcus maris, rhodococcus erythropolis, pseudomonas stutzeri, candida sp, used for treatment of soil subsaline-water ecosystems from oil products pollution |
| RU2019527C1 (en) * | 1993-04-30 | 1994-09-15 | Северный государственный научно-исследовательский и проектно-конструкторский геологический центр | Method of soil treatment from the oil pollution |
| RU2133769C1 (en) * | 1998-03-25 | 1999-07-27 | Государственный научный центр прикладной микробиологии | Strain of bacterium rhodococcus species used for water and soil treatment from oil and petroleum products |
| RU2300561C1 (en) * | 2005-12-13 | 2007-06-10 | Автономная некоммерческая организация "Научно-техническое объединение "ИТИН" | Strain rhodococcus globerulus h-42 for decomposition of petroleum and petroleum products |
| RU2518349C1 (en) * | 2013-04-11 | 2014-06-10 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Кубанский государственный университет" (ФГБОУ ВПО "КубГТУ") | STRAIN OF Rhodococcus sp-DESTRUCTOR OF PETROLEUM HYDROCARBONS |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2759662C2 (en) * | 2021-07-19 | 2021-11-16 | Общество с ограниченной ответственностью "АВИАХИМ" (ООО "АВИАХИМ") | Strain of bacteria rhodococcus degradans h33 ac-2901d - petroleum and petroleum products destructor |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Yunos et al. | Harvesting of microalgae (Chlorella sp.) from aquaculture bioflocs using an environmental-friendly chitosan-based bio-coagulant | |
| Rheims et al. | Molecular monitoring of an uncultured group of the class Actinobacteria in two terrestrial environments | |
| Heng et al. | Streptomyces ambofaciens S2—a potential biological control agent for colletotrichumgleosporioides the causal agent for anthracnose in red chilli fruits | |
| RU2482179C1 (en) | Bacillus atropheus BACTERIA STRAIN - OIL AND OIL PRODUCT DECOMPOSER | |
| JP6975701B2 (en) | Bacillus subtilis isolation method, Bacillus subtilis, microbial preparation containing Bacillus subtilis, medium set for Bacillus subtilis isolation | |
| RU2300561C1 (en) | Strain rhodococcus globerulus h-42 for decomposition of petroleum and petroleum products | |
| Khan et al. | Plant growth promoting Rhizobacteria from rhizospheres of wheat and chickpea | |
| JP2010252700A (en) | New asticcacaulis excentricus strain, method for culturing microalgae by using the same, and method for producing hydrocarbon | |
| RU2618838C1 (en) | Strain rhodococcus jialingiae b-m-1 vkpm as-1967 - destructor of oil and oil products | |
| RU2257409C1 (en) | Strain rhodococcus erythropolis for decomposition of petroleum and petroleum products | |
| RU2720199C1 (en) | Strain of microorganisms staphylococcus warneri s1 as destructor of hydrocarbons contained in soils contaminated with oil and oil products | |
| RU2299239C1 (en) | Strain rhodococcus globerulus for destruction of oil and petroleum products | |
| Ei-Hendawy et al. | Characterization of two antagonistic strains of Rahnella aquatilis isolated from soil in Egypt | |
| RU2257410C1 (en) | Strain rhodococcus erythropolis for decomposition of petroleum and petroleum products | |
| RU2687155C1 (en) | STRAIN OF THE MICROBACTERIUM PARAOXYDANS BKM Ac-2619D BACTERIA - OIL AND OIL PRODUCTS DECOMPOSER | |
| Rasouli-Nasab et al. | Comparison of various methods for isolation of Nocardia from soil | |
| RU2687131C1 (en) | STRAIN OF THE MICROCOCCUS LUTEUS VKM Ac-2627D BACTERIA - OIL AND OIL PRODUCTS DECOMPOSER | |
| RU2675940C1 (en) | Bacillus species vkm b-2815d bacteria strain - oil and petroleum product decomposer | |
| RU2142996C1 (en) | Strain arthrobacter sp for degradation of crude oil and petroleum products | |
| RU2320715C2 (en) | Method for selection of petroleum-oxidizing microorganisms as producers of biosurfactants | |
| RU2564105C1 (en) | STRAIN OF BACTERIA Exiguobacterium sp. - DECOMPOSER OF CRUDE OIL AND PETROLEUM PRODUCTS | |
| RU2676850C1 (en) | Lisinibacillus species vkm b-2814d bacteria strain - oil and petroleum product decomposer | |
| LU500639B1 (en) | METHOD FOR SCREENING ENDOPHYTIC BACTERIA RESISTANT TO GARLIC ROOT-KNOT NEMATODES | |
| Kirthi et al. | Isolation and Identification of Bacterial Strains with Fatty Acid Methyl Ester (FAME) Analysis | |
| RU2675938C1 (en) | Lisinibacillus fusiformis vkm b-2816d bacteria strain - oil and petroleum product decomposer |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20180203 |