RU2611362C1 - Water-soluble composition, possessing anti-tumour activity and method for obtaining thereof - Google Patents

Abstract

FIELD: medicine.

SUBSTANCE: composition contains, wt %: soloxolon methyl 4.0-40.0; PEG with molecular weight 4000 Da - 40.0-57.4; β-glycine - 10.0-56.0. The invention also deals with method for obtaining composition, the method includes dissolution of soloxolon methyl and PEG in tert-butyl alcohol with ultrasonic impact and simultaneous heating of mixture to 45-50°C for 5-30 minutes until components are completely dissolved, after that addition of β-glycine and re-exposure of mixture to ulrrasound for 7-10 min, freezing and exposure of the obtained suspension at temperature -20°C for 4 hours, with the following lyophilic drying first at temperature -20°C until pressure in chamber drops lower than 17 mtorr, then at temperature 30°C for 2 hours.

EFFECT: increase of water-solubility and anti-tumour activity of composition.

2 cl, 3 dwg, 2 tbl, 7 ex

Description

Группа изобретений относится к области химии и медицины, в частности, к водорастворимой композиции с повышенной фармакологической активностью, состоящей из малорастворимого в воде лекарственного средства солоксолон метила и водорастворимого наполнителя.The group of inventions relates to the field of chemistry and medicine, in particular, to a water-soluble composition with increased pharmacological activity, consisting of a drug which is poorly soluble in water, soloxolone methyl and a water-soluble filler.

В последние годы все

внимание химиков-синтетиков уделяется тритерпеновым соединениям, таким как бетулин, бетулоновая, олеаноловая, урсоловая и глицирретовая кислоты. Широкий спектр нативной биологической активности (противовоспалительная, противовирусная, противоопухолевая, иммуностимулирующая и т.д.), высокая энантиомерная чистота и ряд функциональных групп, определяющие направление синтетических превращений, делает данные соединения привлекательным стартовым материалом для получения новых биоактивных соединений, перспективных с точки зрения дальнейшего внедрения в медицинскую практику. Основной проблемой, которая ограничивает применение данных соединений в медицине, пищевой промышленности и сельском хозяйстве, является их низкая растворимость в воде и физиологических средах.In recent years all

the attention of synthetic chemists is given to triterpene compounds, such as betulin, betulonic, oleanolic, ursolic and glycyrrhetic acids. A wide range of native biological activity (anti-inflammatory, antiviral, antitumor, immunostimulating, etc.), high enantiomeric purity and a number of functional groups that determine the direction of synthetic transformations makes these compounds an attractive starting material for obtaining new bioactive compounds, promising from the point of view of further implementation in medical practice. The main problem that limits the use of these compounds in medicine, food industry and agriculture is their low solubility in water and physiological environments.

Известно малорастворимое средство тритерпеновой природы «солоксолон метил», представляющее собой метиловый эфир 2-циано-3,12-диоксо-18βН-олеан-1(2),11(9)-диен-30-овой кислоты формулы (1), полученное направленной комбинированной модификацией колец А и С природного тритерпенового остова доступного растительного метаболита 18βН-глицирретовой кислоты [Патент RU 2401273 C1, оп. 10.10.2010].Known poorly soluble triterpene nature "soloxolone methyl", which is a methyl ester of 2-cyano-3,12-dioxo-18βH-olean-1 (2), 11 (9) -diene-30-oic acid of the formula (1), obtained directed combined modification of rings A and C of the natural triterpene backbone of the available plant metabolite 18βH-glycyrrhetic acid [Patent RU 2401273 C1, op. 10/10/2010].

Солоксолон метил (1) показал высокую противоопухолевую активность in vitro по отношению к широкому спектру опухолевых культур, включая карциномную линию клеток, обладающую фенотипом множественной лекарственной устойчивости.Soloxolone methyl (1) showed a high in vitro antitumor activity in relation to a wide range of tumor cultures, including a carcinoma cell line with a multi-drug resistance phenotype.

Благодаря вышеперечисленным свойствам солоксолон метил является перспективным лекарственным агентом и может быть использован в разработке лекарственных средств для терапии онкозаболеваний.Due to the above properties, soloxolone methyl is a promising drug agent and can be used in the development of drugs for the treatment of cancer.

Основной проблемой, которая препятствует дальнейшему продвижению солоксолон метила на рынок медицинских агентов, является ограниченная растворимость данного соединения в воде и физиологических средах. В связи с предполагаемым широким использованием солоксолон метила в медицинской практике задача получения водорастворимой формы солоксолон метила с высокой фармакологической активностью и разработка способов получения его водорастворимой формы остается актуальной.The main problem that prevents the further promotion of soloxolone methyl on the market of medical agents is the limited solubility of this compound in water and physiological environments. In connection with the alleged widespread use of soloxolone methyl in medical practice, the task of obtaining a water-soluble form of soloxolone methyl with high pharmacological activity and the development of methods for producing its water-soluble form remains relevant.

Одним из способов создания водорастворимых форм лекарственных препаратов является получение композиций, состоящих из малорастворимых лекарственных агентов и водорастворимых компонентов природного или синтетического происхождения, например олиго- и полисахаридов, гликолей и др.One of the ways to create water-soluble forms of drugs is to obtain compositions consisting of sparingly soluble drugs and water-soluble components of natural or synthetic origin, for example, oligo- and polysaccharides, glycols, etc.

В литературе известны водорастворимые композиции лекарственных агентов с циклическими олигомерами глюкозы - циклодекстринами, преимущественно бета-циклодекстрином. В качестве малорастворимого лекарственного вещества композиции содержат нестероидное противовоспалительное средство (парацетамол, ибупрофен, кетопрофен, флуфенамовая и мефенамовая кислоты и др.), стероид, простагландин, простациклин, барбитурат, сульфонамид, сердечный гликозид. [J. Szejtli, Industrial Applications of cyclodextrins. - In Inclusion Compounds, v. 3. ed. Atwood J.L., Davies J.E., Mcnicob D.D., Academic Press, N-Y., 1984, p. 331-390].Water-soluble compositions of drug agents with cyclic glucose oligomers - cyclodextrins, mainly beta-cyclodextrin, are known in the literature. As a sparingly soluble drug substance, the compositions contain a non-steroidal anti-inflammatory drug (paracetamol, ibuprofen, ketoprofen, flufenamic and mefenamic acids, etc.), a steroid, prostaglandin, prostacyclin, barbiturate, sulfonamide, cardiac glycoside. [J. Szejtli, Industrial Applications of cyclodextrins. - In Inclusion Compounds, v. 3. ed. Atwood J.L., Davies J.E., Mcnicob D.D., Academic Press, N-Y., 1984, p. 331-390].

Известна водорастворимая композиция, обладающая противовоспалительной и ангиопротекторной активностью, содержащая малорастворимый тритерпеновый препарат дигидрокверцетин и арабиногалактан в соотношении 1:(3,3-96,8) по весу соответственно, а также воду. Способ получения композиции на основе дигидрокверцетина включает смешивание арабиногалактана с водой до полного растворения, затем добавление дигидрокверцетина в соотношении дигидрокверцетин : арабиногалактан, равном 1:(3-100), преимущественно 1:(50-100) по весу соответственно, нагревание раствора до 40-45°С, перемешивание в течение 0,5-1 часа с последующей сушкой полученного раствора методом распыления. Вышеописанная водорастворимая композиция обладает повышенной растворимостью в воде дигидрокверцетина [патент RU 2533231 С1, оп. 20.11.2014].A water-soluble composition is known having anti-inflammatory and angioprotective activity, containing a slightly soluble triterpene preparation dihydroquercetin and arabinogalactan in a ratio of 1: (3.3-96.8) by weight, respectively, as well as water. A method of obtaining a composition based on dihydroquercetin involves mixing arabinogalactan with water until completely dissolved, then adding dihydroquercetin in a ratio of dihydroquercetin: arabinogalactan equal to 1: (3-100), preferably 1: (50-100) by weight, respectively, heating the solution to 40- 45 ° C, stirring for 0.5-1 hours, followed by drying of the resulting solution by spraying. The above water-soluble composition has a high solubility in water of dihydroquercetin [patent RU 2533231 C1, op. 11/20/2014].

Известна водорастворимая композиция, обладающая противовоспалительными свойствами, содержащая малорастворимый пентациклический тритерпеноид - урсоловую кислоту и полиэтиленгликоль с мол. массой 6000 Да (ПЭГ-6000) или сополимер этиленгликоля и пропиленгликоля (Poloxamer 407) в соотношении 1:10 по весу соответственно. Способ получения композиции заключается в растворении урсоловой кислоты и соответствующего носителя (ПЭГ-6000 или Poloxamer 407) в метаноле и последующем удалении растворителя на ротационном испарителе. Полученный осадок оставляли стоять при температуре 20°С в течение 24 часов для полного удаления растворителя и затем измельчали при помощи пестика и ступки. Композиция значительно увеличивала концентрацию урсоловой кислоты в водных растворах: так, если концентрация урсоловой кислоты в водных растворах составляла менее 1 мкг/мл, то в случае композиции с ПЭГ-6000 концентрация составляла 8.21 мкг/мл [Eloy J.O., Marchetti J.M. Powder Technology 2014, V. 253, P. 98-106].Known water-soluble composition having anti-inflammatory properties, containing sparingly soluble pentacyclic triterpenoid - ursolic acid and polyethylene glycol with mol. weighing 6000 Da (PEG-6000) or a copolymer of ethylene glycol and propylene glycol (Poloxamer 407) in a ratio of 1:10 by weight, respectively. The method for preparing the composition consists in dissolving ursolic acid and the corresponding carrier (PEG-6000 or Poloxamer 407) in methanol and then removing the solvent on a rotary evaporator. The resulting precipitate was left to stand at a temperature of 20 ° C for 24 hours to completely remove the solvent and then crushed using a pestle and mortar. The composition significantly increased the concentration of ursolic acid in aqueous solutions: for example, if the concentration of ursolic acid in aqueous solutions was less than 1 μg / ml, then in the case of a composition with PEG-6000 the concentration was 8.21 μg / ml [Eloy J.O., Marchetti J.M. Powder Technology 2014, V. 253, P. 98-106].

Недостатками известной водорастворимой композиции и способа ее получения являются:The disadvantages of the known water-soluble composition and method for its preparation are:

1) использование токсичного растворителя (метанол), что накладывает жесткие требования к его остаточному содержанию в композиции;1) the use of a toxic solvent (methanol), which imposes stringent requirements on its residual content in the composition;

2) большая продолжительность процесса получения композиции, обусловленная необходимостью длительного выдерживания последней в сушильном шкафу для окончательного удаления метанола, поскольку присутствие даже сравнительно небольших количеств органического растворителя в композиции может существенно влиять на результаты экспериментов по определению растворимости.2) the long duration of the process of obtaining the composition, due to the need for prolonged curing of the latter in an oven for the final removal of methanol, since the presence of even relatively small amounts of organic solvent in the composition can significantly affect the results of solubility experiments.

Наиболее близкой к заявляемой композиции и способу ее получения (прототипом) является водорастворимая композиция, содержащая 0,1-15% таксифолина (дигидрокверцетин из коры лиственицы); 40-95% полимера, выбираемого из группы: арабиногалактан, полиэтиленгликоли, поливинилпирролидоны, или поливинолы различных молекулярных масс; 0-56% водорастворимого компонента, выбираемого из ряда возможных наполнителей: kollidon VA64 (сополимер винилпирролидона и винилацетата), kollidon 90F (высокомолекулярный поливинилпирролидон с м.м. 1000000-1500000), ludipress (гранулят для прямого прессования, состоящий из лактозы и коллидонов 30 и CL), сахарная пудра, изомальтоза; 0-6% гидрофобного или инертного полимера с целью достижения контролируемого высвобождения лекарственного вещества, где в качестве гидрофобного компонента композиция содержит compritol 888 АТО (композиция моно-, ди- и триглицеридов бегеновой кислоты), в качестве инертного - kollidon SR (смесь полимеров поливинилпирролидона и поливинилацетата).Closest to the claimed composition and the method of its production (prototype) is a water-soluble composition containing 0.1-15% of taxifolin (dihydroquercetin from larch bark); 40-95% of a polymer selected from the group: arabinogalactan, polyethylene glycols, polyvinylpyrrolidones, or polyvinyls of various molecular weights; 0-56% of a water-soluble component selected from a number of possible fillers: kollidon VA64 (a copolymer of vinyl pyrrolidone and vinyl acetate), kollidon 90F (high molecular weight polyvinylpyrrolidone with a concentration of 1,000,000-1,500,000 m), ludipress (granulate for direct compression, consisting of 30 lactose and collide and CL), icing sugar, isomaltose; 0-6% hydrophobic or inert polymer in order to achieve controlled release of the drug substance, where the composition contains compritol 888 ATO (a composition of mono-, di- and triglycerides of behenic acid) as a hydrophobic component, and kollidon SR (a mixture of polyvinylpyrrolidone polymers and polyvinyl acetate).

Способ получения композиции, содержащей таксифолин и полиэтиленгликоль с мол. массой 6000 Да (ПЭГ) в весовом соотношении 1:(7-10), включает следующие стадии: отдельно готовят раствор таксифолина путем растворения последнего (1 г) в 10 мл воды при перемешивании и при нагревании в термостатированном сосуде до полного растворения таксифолина; в сосуд с раствором ПЭГ при перемешивании и термостатировании добавляют раствор таксифолина до получения гомогенной среды с последующими заморозкой и лиофильной сушкой целевого продукта [Патент RU 2351352 С2, оп. 10.04.2009].A method of obtaining a composition containing taxifolin and polyethylene glycol with mol. weighing 6000 Da (PEG) in a weight ratio of 1: (7-10), includes the following stages: separately prepare a solution of taxifolin by dissolving the latter (1 g) in 10 ml of water with stirring and when heated in a thermostatic vessel until taxifolin is completely dissolved; in a vessel with a PEG solution with stirring and thermostating add a solution of taxifolin to obtain a homogeneous environment, followed by freezing and freeze drying of the target product [Patent RU 2351352 C2, op. 04/10/2009].

Недостатками известной водорастворимой композиции являются сложность состава композиции, использование большого количества импортных труднодоступных компонентов, высокая себестоимость целевого продукта, а также длительность и трудоемкость способа ее получения.The disadvantages of the known water-soluble composition are the complexity of the composition, the use of a large number of imported hard-to-reach components, the high cost of the target product, as well as the duration and complexity of the method for its preparation.

Задачей группы изобретений является создание водорастворимой композиции на основе солоксолон метила с повышенной растворимостью в воде и разработка способа ее получения.The objective of the group of inventions is to create a water-soluble composition based on soloxolone methyl with increased solubility in water and to develop a method for its preparation.

Технический результат: повышение водорастворимости и противоопухолевой активности композиции.Technical result: increased water solubility and antitumor activity of the composition.

Поставленная задача решается предлагаемой водорастворимой композицией на основе солоксолон метила, включающей следующие компоненты, масс. %:The problem is solved by the proposed water-soluble composition based on soloxolone methyl, including the following components, mass. %:

солоксолон метилsoloxolone methyl 4,0-40,04.0-40.0 полиэтиленгликоль-4kpolyethylene glycol-4k 40,0-57,440.0-57.4 β-глицинβ-glycine 10,0-56,010.0-56.0

Поставленная задача решается также способом получения водорастворимой композиции на основе солоксолон метила, заключающимся в растворении в трет-бутиловом спирте при ультразвуковом воздействии (УЗ-воздействии) последовательно солоксолон метила и полиэтиленгликоля с мол. массой 4000 Да (ПЭГ-4k), затем добавление β-глицина с последующей заморозкой и лиофильной сушкой полученной суспензии.The problem is also solved by the method of obtaining a water-soluble composition based on soloxolone methyl, which consists in dissolving in tert-butyl alcohol under ultrasonic action (ultrasound exposure) successively soloxolone methyl and polyethylene glycol with mol. mass of 4000 Da (PEG-4k), then the addition of β-glycine, followed by freezing and freeze drying of the resulting suspension.

Для этого в емкость, содержащую трет-бутиловый спирт (1 мл), добавляют солоксолон метил (1,5-5,0 мг) и ПЭГ-4k (6,25-15,0 мг), смесь подвергают воздействию ультразвука при одновременном нагревании до 45-50°С в течение 5-30 минут до полного растворения солоксолон метила и ПЭГ-4k, затем добавляют β-глицин (1,25-21,0 мг) и повторно подвергают смесь воздействию ультразвука в течение 7-10 минут. Полученную суспензию замораживают и выдерживают в течение 4-х часов при температуре -20°С, а затем лиофильно сушат сначала при температуре -20°С до падения давления менее 17 мТорр, а затем при температуре +30°С в течение 2-х часов.To do this, soloxolone methyl (1.5-5.0 mg) and PEG-4k (6.25-15.0 mg) are added to a container containing tert-butyl alcohol (1 ml), the mixture is subjected to ultrasound while heating to 45-50 ° C for 5-30 minutes until the soloxolone methyl and PEG-4k are completely dissolved, then β-glycine (1.25-21.0 mg) is added and the mixture is re-exposed to ultrasound for 7-10 minutes. The resulting suspension is frozen and incubated for 4 hours at a temperature of -20 ° C, and then freeze-dried first at a temperature of -20 ° C until the pressure drops below 17 mTorr, and then at a temperature of + 30 ° C for 2 hours .

Характеристика используемых реагентов.Characterization of the reagents used.

В качестве основного носителя для создания композиции используют полиэтиленгликоль с мол. массой 4000 Да (ПЭГ-4k), масс. % 40,0-57,4. При использовании ПЭГ-4k в концентрации ниже 40,0% возможно приготовление композиции только с малым (менее 4,0 масс %) содержанием солоксолон метила, что приводит к существенному увеличению массы композиции, содержащей требуемое количество солоксолон метила и, как следствие, к необходимости существенного увеличения объема раствора для инъекции.Polyethylene glycol with a mol. weighing 4000 Da (PEG-4k), mass. % 40.0-57.4. When using PEG-4k at a concentration below 40.0%, it is possible to prepare a composition with only a small (less than 4.0 mass%) soloxolone methyl content, which leads to a significant increase in the mass of the composition containing the required amount of soloxolone methyl and, as a consequence, the need a significant increase in the volume of solution for injection.

Использование ПЭГ-4k в концентрации выше 57,4% также приводит к существенному увеличению массы композиции, содержащей требуемое количество солоксолон метила, и приводит к необходимости существенного увеличения объема раствора для инъекции.The use of PEG-4k at a concentration above 57.4% also leads to a significant increase in the mass of the composition containing the required amount of soloxolone methyl, and leads to the need for a significant increase in the volume of the solution for injection.

В качестве второго носителя и инициатора процесса кристаллизации, ответственного за формирование водорастворимой композиции, используют высокодисперсный β-глицин в масс. % 10,0-56,0, не растворимый в выбранном органическом растворителе, который получают способом, описанным в [Патент RU 2425025, опубл. 27.07.2010].As the second carrier and initiator of the crystallization process responsible for the formation of the water-soluble composition, highly dispersed β-glycine in mass is used. % 10.0-56.0, insoluble in the selected organic solvent, which is obtained by the method described in [Patent RU 2425025, publ. 07/27/2010].

Использование высокодисперсного β-глицина в составе композиции позволяет провести процесс кристаллизации растворителя после замораживания суспензии (отжиг перед сублимационной сушкой) и предотвратить образование высоковязкой метастабильной жидкости при превышении так называемой «температуры стеклования». При отсутствии β-глицина в композиции проведение сублимационной сушки становится практически невозможным вследствие значительно более медленного удаления растворителя из высоковязкого жидкого «раствора». Чтобы избежать этого, необходимо провести процесс кристаллизации растворителя (в некоторых случаях - и растворенного вещества) [Oetjen G.-W., Haseley P. Freeze-Drying. Second Edition. WILEY-VCH, 2004, 395 c.; Milton N., Gopalrathnam G., Craig G.D., Mishra D.S., Roy M.L., Yu L. Correspondence - Vial breakage during freeze-drying: crystallization of sodium chloride in sodium chloride-sucrose frozen aqueous solutions. // J. Pharm. Sci., 2007, 96(7), P. 1848-1853].The use of finely dispersed β-glycine in the composition allows the solvent to crystallize after freezing the suspension (annealing before freeze-drying) and to prevent the formation of highly viscous metastable liquid when the so-called "glass transition temperature" is exceeded. In the absence of β-glycine in the composition, freeze-drying becomes practically impossible due to the much slower removal of the solvent from the highly viscous liquid “solution”. To avoid this, it is necessary to carry out the process of crystallization of the solvent (in some cases, and the dissolved substance) [Oetjen G.-W., Haseley P. Freeze-Drying. Second Edition. WILEY-VCH, 2004, 395 c .; Milton N., Gopalrathnam G., Craig G. D., Mishra D. S., Roy M. L., Yu L. Correspondence - Vial breakage during freeze-drying: crystallization of sodium chloride in sodium chloride-sucrose frozen frozen solutions. // J. Pharm. Sci., 2007, 96 (7), P. 1848-1853].

Определяющими отличиями предлагаемой водорастворимой композиции и способа ее получения по сравнению с прототипом являются:The defining differences of the proposed water-soluble composition and the method of its production in comparison with the prototype are:

1. Заявляемая водорастворимая композиция содержит, масс. %: солоксолон метил 4,0-40,0; ПЭГ-4k 40,0-57,4; β-глицин 10,0-56,0, что позволяет повысить растворимость солоксолон метила в воде в 10-25 раз и увеличить его фармакологическую активность.1. The inventive water-soluble composition contains, mass. %: soloxolone methyl 4.0-40.0; PEG-4k 40.0-57.4; β-glycine 10.0-56.0, which improves the solubility of soloxolone methyl in water by 10-25 times and increase its pharmacological activity.

2. Для получения композиции на основе солоксолон метила в емкость, содержащую трет-бутиловый спирт, последовательно добавляют солоксолон метил и ПЭГ-4k в соотношении трет-бутиловый спирт : солоксолон метил : ПЭГ-4k, равном 1:(1,5-5,0):(6,25-15,0) по весу соответственно, смесь подвергают воздействию ультразвука при одновременном нагревании до 45-50°С в течение 5-30 минут до полного растворения компонентов, затем добавляют β-глицин в соотношении солоксолон метил : β-глицин, равном 1:(0,25-14,0) по весу и повторно подвергают смесь воздействию ультразвука в течение 7-10 минут с последующим замораживанием и выдерживанием полученной суспензии в течение 4-х часов при температуре -20°С, что позволяет получить суспензию, в которой малорастворимое активное вещество (солоксолон метил) равномерно распределено по всему объему хорошо растворимых наполнителей (ПЭГ-4k и β-глицин), что способствует увеличению скорости растворения композиции.2. To obtain a composition based on soloxolone methyl in a container containing tert-butyl alcohol, methyl soloxolone and PEG-4k are successively added in a ratio of tert-butyl alcohol: methyl soloxolone: PEG-4k equal to 1: (1.5-5, 0) :( 6.25-15.0) by weight, respectively, the mixture is subjected to ultrasound while heating to 45-50 ° C for 5-30 minutes until the components are completely dissolved, then β-glycine in the ratio of soloxolone methyl is added: β-glycine equal to 1: (0.25-14.0) by weight and re-expose the mixture to ultrasound for 7 -10 minutes, followed by freezing and keeping the resulting suspension for 4 hours at a temperature of -20 ° C, which allows to obtain a suspension in which the sparingly soluble active substance (soloxolone methyl) is uniformly distributed throughout the volume of readily soluble fillers (PEG-4k and β-glycine), which increases the dissolution rate of the composition.

3. Лиофильную сушку замороженной суспензии осуществляют сначала при температуре -20°С до падения давления менее 17 мТорр, а затем при температуре +30°С в течение 2-х часов, что позволяет получить целевой продукт в виде высокодисперсного легкого пушистого порошка, растворимого в воде.3. Lyophilized drying of the frozen suspension is carried out first at a temperature of -20 ° C until the pressure drops below 17 mTorr, and then at a temperature of + 30 ° C for 2 hours, which allows to obtain the target product in the form of a highly dispersed light fluffy powder, soluble in water.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.The invention is illustrated by the following examples.

Пример 1. Получение водорастворимой композиции (1)Example 1. Obtaining a water-soluble composition (1)

Во флаконе прозрачного боросиликатного стекла к 4 мл трет-бутилового спирта добавляли последовательно 6 мг солоксолон метила и 60 мг ПЭГ-4k, смесь подвергали воздействию ультразвука (в герметично закрытом флаконе) в ультразвуковой ячейке (передающая среда: вода, температура +45°С) на базе прибора УЗДН-2Н в течение 5 минут до полного растворения компонентов, затем добавляли 84 мг высокодисперсного β-глицина и повторно подвергали смесь воздействию ультразвука в течение 7 минут. Полученную суспензию порциями по 1,000 мл (пипетка-дозатор) быстро помещали в предварительно нагретые до +50°С флаконы темного стекла (Sci/Spec, В75592), которые сразу же помещали на охлажденную до -20°С полку установки лиофильной сушки и выдерживали в течение 4 часов при этой температуре. Сушку (первая стадия сушки) проводили при -20°С до падения давления в камере менее 17 мТорр. Затем температуру полки повышали до +30°С с выдерживанием в течение 2 часов (вторая стадия сушки) при этой температуре. После этого давление в камере повышали до 1 атмосферы заполнением камеры сушки сухим азотом, камеру открывали, доставали флаконы и герметично закрывали их крышками с тефлоновым уплотнением.In a vial of transparent borosilicate glass, 4 mg of tert-butyl alcohol were successively added with 6 mg of soloxolone methyl and 60 mg of PEG-4k, the mixture was subjected to ultrasound (in a hermetically sealed vial) in an ultrasonic cell (transmission medium: water, temperature + 45 ° С) on the basis of the UZDN-2N device for 5 minutes until the components are completely dissolved, then 84 mg of finely dispersed β-glycine was added and the mixture was again subjected to ultrasound for 7 minutes. The resulting suspension in 1,000 ml portions (pipette-dispenser) was quickly placed in dark glass pre-heated to + 50 ° С bottles (Sci / Spec, В75592), which were immediately placed on the shelf of the freeze-drying unit cooled to -20 ° С and kept in for 4 hours at this temperature. Drying (first drying stage) was carried out at -20 ° C until the pressure drop in the chamber was less than 17 mTorr. Then the temperature of the shelf was increased to + 30 ° C with holding for 2 hours (second stage of drying) at this temperature. After that, the pressure in the chamber was increased to 1 atmosphere by filling the drying chamber with dry nitrogen, the chamber was opened, the bottles were taken out and hermetically sealed with lids with Teflon sealing.

В результате получили водорастворимую композицию (1) следующего состава, масс. %:The result was a water-soluble composition (1) of the following composition, mass. %:

солоксолон метилsoloxolone methyl 4,04.0 ПЭГ-4kPEG-4k 40,040,0 β-глицинβ-glycine 56,056.0

Композицию-контроль (1а) для композиции (1) получали аналогично примеру 1 за исключением того, что к 4 мл трет-бутилового спирта добавляли 66 мг ПЭГ-4k и 84 мг высокодисперсного β-глицина. В результате получили композицию следующего состава, масс. %:The control composition (1a) for composition (1) was obtained analogously to example 1 except that 66 mg of PEG-4k and 84 mg of finely dispersed β-glycine were added to 4 ml of tert-butyl alcohol. The result was a composition of the following composition, mass. %:

ПЭГ-4kPEG-4k 44,044.0 β-глицинβ-glycine 56,056.0

Пример 2. Получение водорастворимой композиции (2)Example 2. Obtaining a water-soluble composition (2)

Композицию (2) получали аналогично примеру 1 за исключением того, что к 6,0 мл трет-бутилового спирта добавляли последовательно 24,3 мг солоксолон метила и 42,7 мг ПЭГ-4k, смесь подвергали воздействию ультразвука (в герметично закрытом флаконе) в ультразвуковой ячейке (передающая среда: вода, температура +50°С) на базе прибора УЗДН-2Н в течение 30 минут до полного растворения компонентов, затем добавляли 7,5 мг высокодисперсного β-глицина и повторно подвергали смесь воздействию ультразвука в течение 10 минут.Composition (2) was obtained analogously to example 1 except that 24.3 mg of soloxolone methyl and 42.7 mg of PEG-4k were successively added to 6.0 ml of tert-butyl alcohol, the mixture was subjected to ultrasound (in a sealed bottle) in ultrasonic cell (transmission medium: water, temperature + 50 ° С) based on the UZDN-2N device for 30 minutes until the components are completely dissolved, then 7.5 mg of finely dispersed β-glycine was added and the mixture was again subjected to ultrasound for 10 minutes.

В результате получили водорастворимую композицию (2) следующего состава, масс. %:The result was a water-soluble composition (2) of the following composition, mass. %:

солоксолон метилsoloxolone methyl 32,632.6 ПЭГ-4kPEG-4k 57,457.4 β-глицинβ-glycine 10,010.0

Композицию-контроль (2а) для композиции (2) получали аналогично примеру 2 за исключением того, что к 6,0 мл трет-бутилового спирта добавляли 67,5 мг ПЭГ-4k и 7,5 мг высокодисперсного β-глицина и подвергали воздействию ультразвука. В результате получили композицию следующего состава, масс. %:Composition control (2a) for composition (2) was obtained analogously to example 2 except that to 6.0 ml of tert-butyl alcohol was added 67.5 mg of PEG-4k and 7.5 mg of finely dispersed β-glycine and was subjected to ultrasound . The result was a composition of the following composition, mass. %:

ПЭГ-4kPEG-4k 90,090.0 β-глицинβ-glycine 10,010.0

Пример 3. Получение водорастворимой композиции (3)Example 3. Obtaining a water-soluble composition (3)

Композицию (2) получали аналогично примеру 1 за исключением того, что к 6,0 мл трет-бутилового спирта добавляли последовательно 30 мг солоксолон метила, 37,5 мг ПЭГ-4k, смесь подвергали воздействию ультразвука (в герметично закрытом флаконе) в ультразвуковой ячейке (передающая среда: вода, температура +50°С) на базе прибора УЗДН-2Н в течение 30 минут до полного растворения компонентов, затем добавляли 7,5 мг высокодисперсного β-глицина и повторно подвергали смесь воздействию ультразвука в течение 10 минут. В результате получили композицию (3) следующего состава, масс. %:Composition (2) was obtained analogously to example 1 except that to 6.0 ml of tert-butyl alcohol was added successively 30 mg of methyl soloxolone, 37.5 mg of PEG-4k, the mixture was subjected to ultrasound (in a sealed bottle) in an ultrasonic cell (transmission medium: water, temperature + 50 ° С) on the basis of the UZDN-2N device for 30 minutes until the components are completely dissolved, then 7.5 mg of finely dispersed β-glycine was added and the mixture was again subjected to ultrasound for 10 minutes. The result was a composition (3) of the following composition, mass. %:

солоксолон метилsoloxolone methyl 40,040,0 ПЭГ-4kPEG-4k 50,050,0 β-глицинβ-glycine 10,010.0

Композицию-контроль (3а) для композиции (3) получали аналогично примеру 1 за исключением того, что к 6,0 мл трет-бутилового спирта добавляли 67,5 мг ПЭГ-4k и 7,5 мг высокодисперсного β-глицина и подвергали воздействию ультразвука. В результате получили композицию следующего состава, масс. %:The control composition (3a) for composition (3) was obtained analogously to Example 1 except that 67.5 mg of PEG-4k and 7.5 mg of finely dispersed β-glycine were added to 6.0 ml of tert-butyl alcohol and subjected to ultrasound . The result was a composition of the following composition, mass. %:

ПЭГ-4kPEG-4k 90,090.0 β-глицинβ-glycine 10,010.0

Пример 4. Исследование физико-химических свойств полученных композицийExample 4. The study of the physico-chemical properties of the obtained compositions

Водорастворимые композиции, полученные по предлагаемому способу, представляют собой чрезвычайно легкие пушистые порошки. На фиг. 1 проиллюстрировано сравнение насыпных объемов и морфологии порошков высокодисперсной формы солоксолон метила (слева) и высокодисперсной композиции (1) (справа) (массы солоксолон метила в виде высокодисперсного порошка и композиции (1) одинаковы). Объем флакона ~25 мл. На фиг. 1 видно, что в случае чистого солоксолон метила происходит электризация порошка и агломерация образующихся дисперсных частиц, что чрезвычайно затрудняет работу с такими объектами. Гидрофильные компоненты композиции, взятые в экспериментально полученных оптимальных концентрациях, позволяют перевести гидрофобный компонент (солоксолон метил) в водный раствор.Water-soluble compositions obtained by the proposed method are extremely light fluffy powders. In FIG. Figure 1 illustrates the comparison of bulk volumes and morphology of powders of finely divided soloxolone methyl form (left) and finely divided composition (1) (right) (masses of soloxolone methyl in the form of finely divided powder and composition (1) are the same). The volume of the bottle is ~ 25 ml. In FIG. Figure 1 shows that in the case of pure soloxolone methyl, the powder is electrified and the dispersed particles formed agglomerate, which makes it extremely difficult to work with such objects. The hydrophilic components of the composition, taken in experimentally obtained optimal concentrations, allow the hydrophobic component (soloxolone methyl) to be transferred into an aqueous solution.

На фиг. 2 представлены электронные микрофотографии (исследовательский сканирующий электронный микроскоп EVO МА10 (Carl Zeiss)) образцов высокодисперсной формы солоксолон метила (А-В) и высокодисперсной композиции (1) (Г-Е), а на фиг. 3 представлены микрофотографии образцов высокодисперсной композиции (3).In FIG. 2 shows electron micrographs (EVO MA10 scanning electron microscope (Carl Zeiss)) of highly dispersed soloxolone methyl (AB) samples and highly dispersed composition (1) (GE), and FIG. 3 shows microphotographs of samples of a finely dispersed composition (3).

Таким образом, по данным сканирующей электронной микроскопии полученные высокодисперсные композиции (1) и (3) состоят из двух типов частиц: перфорированных листов (толщина около 100 нм) с линейными размерами 10-100 мкм (ПЭГ-4k и солоксолон метил) и небольших (1-5 мкм) плоских частиц (частицы β-глицина, полученные воздействием ультразвука).Thus, according to scanning electron microscopy, the obtained finely divided compositions (1) and (3) consist of two types of particles: perforated sheets (thickness about 100 nm) with linear dimensions of 10-100 μm (PEG-4k and soloxolone methyl) and small ( 1-5 microns) flat particles (particles of β-glycine obtained by exposure to ultrasound).

Дифракционные исследования показали, что как в случаях высокодисперсных композиций (1), (2) и (3), так и в случаях композиций-контролей (1а), (2а) и (3а) происходит аморфизация как полимерного носителя, так и солоксолон метила. Глицин не претерпевает полиморфных превращений в процессе получения и присутствует во всех композициях в виде β-полиморфной модификации.Diffraction studies showed that both in the case of highly dispersed compositions (1), (2) and (3), and in the cases of control compositions (1a), (2a) and (3a), amorphization of both the polymer carrier and methyl soloxolone occurs . Glycine does not undergo polymorphic transformations during the preparation process and is present in all compositions as a β-polymorphic modification.

Анализ ИК-спектров композиций в сравнении с ИК-спектрами исходных компонентов (ИК-фурье спектрометр Digilab Excalibur 3100. Запись спектров неполного внутреннего отражения в диапазоне 600-4000 см^-1 с разрешением 2 см^-1. Пробоподготовка в виде предварительного растирания в ступке или прессования в таблетки с KBr отсутствовала) показывает, что частота валентных колебаний N-H связи в глицине, а также валентных колебаний С-Н в ПЭГ-4k и солоксолон метиле не изменяет своего положения при образовании указанной композиции, что говорит об отсутствии водородного связывания с участием указанных групп (частота валентных колебаний N-H связи 3179 и 3178 см^-1 в композиции и в чистом β-глицине соответственно; валентные колебания С-Н появляются в виде мультиплета при 2884 и 2883 см^-1 в композиции (3) и ПЭГ-4k соответственно). Наличие всех трех компонентов в композиции (3) отчетливо видно при рассмотрении области скелетных колебаний (600-1700 см^-1). Глицин присутствует в композициях в виде метастабильной β-полиморфной модификации, то есть не претерпевает фазовых переходов в процессе приготовления. В композициях-контролях наблюдается похожая картина: образования водородных связей между ПЭГ-4k и β-глицином не происходит, глицин содержится в виде β-формы. Таким образом, результаты исследований с использованием ИК-спектросокопии демонстрируют отсутствие химического связывания компонентов композиции друг с другом.Analysis of the IR spectra of the compositions in comparison with the IR spectra of the starting components (Digilab Excalibur 3100 IR Fourier spectrometer. Recording the spectra of incomplete internal reflection in the range of 600-4000 cm ^-1 with a resolution of 2 cm ^-1 . Sample preparation in the form of preliminary grinding in a mortar or compression in tablets with KBr was absent) shows that the frequency of stretching vibrations of the NH bond in glycine, as well as the stretching vibrations of CH in PEG-4k and soloxolone methyl do not change their position during the formation of this composition, which indicates the absence of hydrogen bonding calls with the participation of these groups (the frequency of stretching vibrations of the NH bond of 3179 and 3178 cm ^-1 in the composition and in pure β-glycine, respectively; stretching vibrations of CH appear in the form of a multiplet at 2884 and 2883 cm ^-1 in composition (3) and PEG -4k respectively). The presence of all three components in the composition (3) is clearly visible when considering the area of skeletal vibrations (600-1700 cm ^-1 ). Glycine is present in the compositions in the form of a metastable β-polymorphic modification, that is, it does not undergo phase transitions during preparation. A similar picture is observed in the control compositions: the formation of hydrogen bonds between PEG-4k and β-glycine does not occur, glycine is contained in the form of a β-form. Thus, the results of studies using IR spectroscopy demonstrate the absence of chemical bonding of the components of the composition to each other.

Калориметрические измерения, проведенные с образцом композиции (3), также демонстрируют отсутствие химического связывания компонентов композиции друг с другом.Calorimetric measurements taken with a sample of the composition (3) also demonstrate the absence of chemical bonding of the components of the composition to each other.

Таким образом, плохо растворимое лекарственное вещество (солоксолон метил) не образует в композиции химических связей с ПЭГ-4k и β-глицином и равномерно распределено по всему объему хорошо растворимых наполнителей: (ПЭГ-4k) и β-глицина, за счет чего достигается высокая скорость высвобождения лекарственного вещества из композиции.Thus, a poorly soluble drug substance (soloxolone methyl) does not form chemical bonds with PEG-4k and β-glycine in the composition and is evenly distributed throughout the volume of readily soluble excipients: (PEG-4k) and β-glycine, due to which a high the rate of release of the drug from the composition.

Пример 5. Исследование водорастворимости полученных композицийExample 5. The study of water solubility of the obtained compositions

Проведен эксперимент по исследованию растворимости полученных композиций (1-3). Для этого образцы растворяли в 100 мл среды Opti MEM (улучшенная минимальная питательная среда) при температуре 20°С на магнитной мешалке (400 об/мин). Концентрацию солоксолон метила в растворе определяли фотометрическим методом ВЭЖХ. Результаты исследования представлены в таблице 1.An experiment was conducted to study the solubility of the obtained compositions (1-3). For this, the samples were dissolved in 100 ml of Opti MEM medium (improved minimum nutrient medium) at a temperature of 20 ° C on a magnetic stirrer (400 rpm). The concentration of soloxolone methyl in solution was determined by photometric HPLC. The results of the study are presented in table 1.

Из таблицы 1 видно, что растворимость солоксолон метила в воде увеличилась в 10-25 раз в зависимости от содержания последнего в композиции.From table 1 it is seen that the solubility of soloxolone methyl in water increased by 10-25 times depending on the content of the latter in the composition.

Пример 6. Исследование цитотоксической активности композиций в отношении опухолевых клеток человека in vitroExample 6. In vitro study of the cytotoxic activity of compositions against human tumor cells

Цитотоксичность композиций (1), (2) и (3) в отношении опухолевых клеток человека in vitro оценивали по снижению жизнеспособности клеток эпидермоидной карциномы КВ-3-1 после их инкубации в присутствии исследуемого препарата. С данной целью был проведен МТТ-тест, который основан на способности живых клеток превращать соединения на основе тетразола (МТТ) в ярко окрашенные кристаллы формазана, что позволяет спектрофотометрически оценивать количество живых клеток в лунке.The cytotoxicity of compositions (1), (2) and (3) in relation to human tumor cells in vitro was assessed by the decrease in the viability of the epidermoid carcinoma cells KV-3-1 after incubation in the presence of the studied drug. For this purpose, an MTT test was carried out, which is based on the ability of living cells to convert tetrazole-based compounds (MTTs) into brightly colored formazan crystals, which allows spectrophotometric estimation of the number of living cells in a well.

Композиции растворяли в среде ДМЕМ (минимальная эссенциальная среда Игла, модифицированная по способу Дульбекко) до концентрации 20 мкМ и использовали данный раствор в качестве стокового. Композиции-контроли (1а), (2а) и (3а) растворяли в том же объеме ДМЕМ, что и композиции (1), (2) и (3). В качестве референсного препарата использовали солоксолон метил, предварительно растворенный в диметилсульфоксиде (ДМСО) до концентрации 0.1 М. Клетки КВ-3-1 высаживали в 96-луночные планшеты для получения монослоя в среде DMEM, содержащей 10%-ную эмбриональную телячью сыворотку, и инкубировали при 37°С, 5% СО₂. Через 24 часа в лунках меняли среду на среду DMEM без сыворотки и вносили исследуемые композиции (1), (1а), (2), (2а), (3), (3а) или солоксолон метил в различных концентрациях. Клетки инкубировали в присутствии указанных препаратов в течение суток в тех же условиях. По окончании инкубации, без смены среды, к клеткам добавляли раствор МТТ (5 мг/мл) в фосфатно-солевом буфере до концентрации 0,5 мг/мл и инкубировали в течение 3 ч в тех же условиях. Среду удаляли, к клеткам добавляли по 100 мкл ДМСО, в котором происходит растворение образовавшихся в клетках кристаллов формазана, и измеряли оптическую плотность в лунках на многоканальном спектрофотометре MultiscanRC («ThermoLabSystems», Финляндия) на длинах волн 570 и 630 нм, где А₅₇₀ - поглощение формазана, а А₆₃₀ - фон клеток. По результатам теста определяли значение IC₅₀ - концентрацию соединения, при которой наблюдается гибель 50% клеток. За 100% принимали интактные клетки. Результаты исследования представлены в табл. 2.The compositions were dissolved in DMEM (Minimal Essential Medium Eagle, modified by the Dulbecco method) to a concentration of 20 μM and used this solution as a stock. The control compositions (1a), (2a) and (3a) were dissolved in the same volume of DMEM as the compositions (1), (2) and (3). Soloxolone methyl, previously dissolved in dimethyl sulfoxide (DMSO) to a concentration of 0.1 M, was used as a reference preparation. KV-3-1 cells were plated in 96-well plates to obtain a monolayer in DMEM containing 10% fetal calf serum and incubated at 37 ° C, 5% CO ₂ . After 24 hours in the wells, the medium was changed to serum-free DMEM and the studied compositions (1), (1a), (2), (2a), (3), (3a) or soloxolone methyl in various concentrations were added. Cells were incubated in the presence of these preparations for 24 hours under the same conditions. At the end of the incubation, without changing the medium, an MTT solution (5 mg / ml) in phosphate-buffered saline was added to the cells to a concentration of 0.5 mg / ml and incubated for 3 hours under the same conditions. The medium was removed, 100 μl of DMSO was added to the cells, in which the formazan crystals formed in the cells were dissolved, and the absorbance in the wells was measured on a MultiscanRC multichannel spectrophotometer (ThermoLabSystems, Finland) at wavelengths of 570 and 630 nm, where A ₅₇₀ - the absorption of formazan, and A ₆₃₀ - the background of the cells. According to the test results, the IC ₅₀ value was determined - the concentration of the compound at which 50% cell death was observed. Intact cells were taken as 100%. The results of the study are presented in table. 2.

Как видно из таблицы 2, все полученные композиции обладают цитотоксическим действием в отношении клеток КВ-3-1, причем уровень противоопухолевой активности данных композиций оказался выше активности референсного соединения - значение IC₅₀ солоксолон метила составило 0.70 мкМ, в то время как значение IC₅₀ композиций (1), (2), (3) было ниже и составило соответственно 0.55 мкМ, 0,27 и 0,37 мкМ. Композиции-контроли (1а), (2а), (3а), содержащие только ПЭГ-4k и β-глицин, цитотоксического действия на клетки не оказывали.As can be seen from table 2, all the obtained compositions have a cytotoxic effect on KV-3-1 cells, and the level of antitumor activity of these compositions was higher than the activity of the reference compound - the IC ₅₀ value of soloxolone methyl was 0.70 μM, while the IC ₅₀ value of the compositions (1), (2), (3) was lower and amounted to 0.55 μM, 0.27 and 0.37 μM, respectively. The control compositions (1a), (2a), (3a) containing only PEG-4k and β-glycine did not have a cytotoxic effect on the cells.

Пример 7. Исследование токсичности композиции (3) на мышиной модели in vivoExample 7. The toxicity study of the composition (3) in a mouse model in vivo

Мыши линии СВА были распределены на 8 групп, содержащих по 3 мыши в каждой. Композицию (3) растворяли в среде Opti-MEM (GIBCO™, LifeTechnologies, США) в концентрации 0.25 мг/мл и вводили мышам в дозе 5 мг/кг. Мыши группы 1 получали инъекции препарата внутривенно, группы 2 - внутрибрюшинно, группы 3 - подкожно, группы 4 - перорально. Группы 6-8 являлись соответствующими контролями для групп 1-4 и получали инъекции композиции, содержащей только ПЭГ и глицин (ПЭГ-4k - 90 масс. %, β-глицин - 10 масс. %). Композицию (3) вводили три раза с перерывом в 1 сутки, ежедневно контролируя вес подопытных животных. На 6 сутки мышей выводили из эксперимента и отбирали пробы крови.CBA mice were divided into 8 groups containing 3 mice each. Composition (3) was dissolved in Opti-MEM medium (GIBCO ™, LifeTechnologies, USA) at a concentration of 0.25 mg / ml and was administered to mice at a dose of 5 mg / kg. Group 1 mice received injections of the drug intravenously, group 2 - intraperitoneally, group 3 - subcutaneously, group 4 - oral. Groups 6-8 were the corresponding controls for groups 1-4 and received injections of a composition containing only PEG and glycine (PEG-4k - 90 wt.%, Β-glycine - 10 wt.%). Composition (3) was administered three times with an interval of 1 day, daily monitoring the weight of experimental animals. On day 6, mice were removed from the experiment and blood samples were taken.

Было показано, что трехкратное введение композиции (3) не оказывает токсического действия на лабораторных животных - в процессе эксперимента вес животных в опытных группах не снижался. Более того, проведенный анализ крови лабораторных животных показал отсутствие какого-либо влияния исследуемой композиции на состав форменных элементов крови.It was shown that a three-time administration of composition (3) does not have a toxic effect on laboratory animals - during the experiment, the weight of the animals in the experimental groups did not decrease. Moreover, the blood analysis of laboratory animals showed the absence of any influence of the studied composition on the composition of blood cells.

Таким образом, полученные композиции проявляют высокую активность в отношении ингибирования роста опухолевых клеток, являются низкотоксичными и обладают хорошей растворимостью в воде, пригодны для инъекционного введения в организм. Данные композиции могут быть использованы при разработке водорастворимых лекарственных форм препаратов, полученных из доступного растительного сырья, предназначенных для лечения опухолевых заболеваний.Thus, the resulting compositions are highly active in inhibiting the growth of tumor cells, are low toxic and have good solubility in water, suitable for injection into the body. These compositions can be used in the development of water-soluble dosage forms of preparations obtained from available plant materials intended for the treatment of tumor diseases.

Claims (3)

1. Водорастворимая композиция, обладающая противоопухолевой активностью, включающая активный компонент и физиологически приемлемый наполнитель, отличающаяся тем, что в качестве активного компонента она содержит солоксолон метил, а в качестве наполнителей - полиэтиленгликоль с мол. массой 4000 Да (ПЭГ-4k) и β-глицин при следующем содержании компонентов, масс. %:1. A water-soluble composition having antitumor activity, comprising an active component and a physiologically acceptable excipient, characterized in that it contains methyl soloxolone as the active component, and polyethylene glycol with mol. mass of 4000 Da (PEG-4k) and β-glycine in the following components, wt. %: солоксолон метилsoloxolone methyl 4,0-40,0,4.0-40.0, ПЭГ-4kPEG-4k 40,0-57,440.0-57.4 β-глицинβ-glycine 10,0-56,010.0-56.0 2. Способ получения водорастворимой композиции по п. 1, включающий смешивание исходных компонентов с последующей заморозкой и сушкой целевого продукта в камере установки лиофильной сушки, отличающийся тем, что к трет-бутиловому спирту последовательно добавляют солоксолон метил и ПЭГ-4k в соотношении трет-бутиловый спирт: солоксолон метил: ПЭГ-4k, равном 1:(1,5-5,0):(6,25-15,0) по весу, смесь подвергают воздействию ультразвука при одновременном нагревании до 45-50°С в течение 5-30 минут до полного растворения компонентов, затем добавляют β-глицин в соотношении солоксолон метил: β-глицин, равном 1:(0,25-14,0) по весу, и повторно подвергают смесь воздействию ультразвука в течение 7-10 минут, полученную суспензию замораживают и выдерживают в течение 4-х часов при температуре -20°С, а затем лиофильно сушат сначала при температуре -20°С до падения давления в камере менее 17 мТорр, а затем при температуре +30°С в течение 2 часов.2. A method of obtaining a water-soluble composition according to claim 1, comprising mixing the starting components, followed by freezing and drying the target product in the chamber of the freeze drying apparatus, characterized in that tert-butyl alcohol is sequentially added with methyl soloxolone and PEG-4k in the ratio of tert-butyl alcohol: soloxolone methyl: PEG-4k, equal to 1: (1.5-5.0) :( 6.25-15.0) by weight, the mixture is subjected to ultrasound while heating to 45-50 ° C for 5 -30 minutes until the components are completely dissolved, then β-glycine is added in the corresponding soloxolone methyl: β-glycine, equal to 1: (0.25-14.0) by weight, and re-expose the mixture to ultrasound for 7-10 minutes, the resulting suspension is frozen and kept for 4 hours at a temperature of 20 ° C, and then freeze-dried first at a temperature of -20 ° C until the pressure in the chamber drops below 17 mTorr, and then at a temperature of + 30 ° C for 2 hours.

Images