RU2605543C1 - СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СПОРОВОЙ КУЛЬТУРЫ НА ОСНОВЕ БАКТЕРИАЛЬНОГО ШТАММА Bacillus sp. 1839 - Google Patents

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СПОРОВОЙ КУЛЬТУРЫ НА ОСНОВЕ БАКТЕРИАЛЬНОГО ШТАММА Bacillus sp. 1839 Download PDF

Info

Publication number
RU2605543C1
RU2605543C1 RU2015147736/10A RU2015147736A RU2605543C1 RU 2605543 C1 RU2605543 C1 RU 2605543C1 RU 2015147736/10 A RU2015147736/10 A RU 2015147736/10A RU 2015147736 A RU2015147736 A RU 2015147736A RU 2605543 C1 RU2605543 C1 RU 2605543C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
bacteria
spores
bacillus
spore
centrifugation
Prior art date
Application number
RU2015147736/10A
Other languages
English (en)
Inventor
Тимур Юсифович Магарламов
Ольга Андреевна Шокур
Original Assignee
Федеральное Государственное Автономное Образовательное Учреждение Высшего Профессионального Образования "Дальневосточный Федеральный Университет" (Двфу)
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Федеральное Государственное Автономное Образовательное Учреждение Высшего Профессионального Образования "Дальневосточный Федеральный Университет" (Двфу) filed Critical Федеральное Государственное Автономное Образовательное Учреждение Высшего Профессионального Образования "Дальневосточный Федеральный Университет" (Двфу)
Priority to RU2015147736/10A priority Critical patent/RU2605543C1/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2605543C1 publication Critical patent/RU2605543C1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
    • A01N63/10—Animals; Substances produced thereby or obtained therefrom
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/07—Bacillus

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

Изобретение относится к биотехнологии, микробиологии и может быть использовано для производства спорового материала из бактерий штамма Bacillus sp. 1839. Способ предусматривает засев питательной среды бактериями штамма Bacillus sp. 1839 с последующим культивированием на ней. Проводят отделение биомассы центрифугированием при 1000-1500 об/мин. В полученную биомассу бактерий добавляют гипертонический фосфатный буфер, содержащий хлорид калия, гидрофосфат натрия, дигидрофосфат калия и хлорид натрия при заданном соотношении компонентов. Ведут инкубирование бактерий Bacillus sp. 1839 до образования спор. Для очистки от оставшихся вегетативных клеток проводят термическую обработку путем нагрева полученного осадка спор на водяной бане не менее 10 мин при 70-90°С, центрифугируют и удаляют надосадочную жидкость. Изобретение позволяет упростить способ и получать споровую культуру в любой бактериологической или ветеринарной лаборатории. 2 з.п. ф-лы, 4 пр.

Description

Изобретение относится к биотехнологии, микробиологии и может быть использовано для производства спорового материала из бактерий Bacillus sp. 1839.
Известен способ получения спор из бактерий Bacillus weihenstephanensis KBAB4 (Baril Е., Coroller L., Postollec F. et al. The wet-heat resistance of Bacillus weihenstephanensis KBAB4 spores produced in a two-step sporulation process depends on sporulation temperature but not on previous cell history. International Journal of Food Microbiology. v. 146. 2011. P. 57-62). Способ включает засев жидкой питательной среды 0,1 мл бактерий в 100 мл среды Bacillus weihenstephanensis KBAB4 и культивирование вегетативных клеток бактерий на жидкой питательной среде от 6 до 100 часов при одной из указанных температур: 10°, 20° или 30°С до достижения концентрации 6×107 кл/мл, затем бактерии центрифугируют при 6000×g, 10 мин, 12°С, и для индукции спорообразования переносят полученную бактериальную массу в фосфатный буфер с добавлением минеральных солей следующего состава: K2HPO4·3H2O: 4.5 г/л; безводный KH2PO4: 1.8 г/л, с добавлением CaCl2·2H2O 8.0 мг/л, MnSO4·H2O 1.5 мг/л; рН 7.2, в котором выдерживают от 4 до 20 дней при постоянном перемешивании 100 об/мин при 10, 20 или 30°С до образования спор. Споры отделяют от минерального буфера центрифугированием при 6000×g в течение 10 мин, 12°С.
К недостаткам данного способа следует отнести:
1) переход культуры в споровое состояние занимает до 20 дней, длительное культивирование ведет к удорожанию процесса производства, в том числе увеличивает энергозатраты на электроэнергию, содержание оборудования, увеличивает риск контаминации сопутствующей микрофлорой;
2) использование фосфатного буфера с добавлением минеральных солей указанного состава не позволяет получить споры из морского штамма Bacillus sp. 1839;
3) скорость центрифугирования для отделения биомассы бактерий (6000×g) является жестким условием и не подходит для морского штамма Bacillus sp. 1839, так как при указанной скорости может произойти разрушение спор;
4) необходимость поддержания при культивировании предложенных температур (10°C или 30°C), в конечном результате, не только усложняет способ получения споровой культуры, но и требует дополнительных трудозатрат.
Задачей заявляемого технического решения является разработка способа получения спорового материала на основе морского штамма микроорганизмов Bacillus sp. 1839, снижение длительности процесса и трудозатрат.
Поставленная задача достигается новым способом получения спорового материала на основе штамма Bacillus sp. 1839, предусматривающим культивирование бактерий, отделение биомассы бактерий от жидкой питательной среды центрифугированием, добавление в полученную биомассу бактерий фосфатного буфера, в качестве которого используют гипертонический фосфатный буферный раствор следующего состава: хлорид калия 0,2 г/л, гидрофосфат натрия 3,3 г/л, дигидрофосфат калия 0,166 г/л, хлорид натрия от 46,334 до 56,334 г/л; инкубирование в нем бактерий до образования спор в течение 15-60 мин при комнатной температуре и осаждение полученных спор центрифугированием.
Использование в качестве источника для получения спорового материала бактерий штамма Bacillus sp. 1839 обеспечивает получение культуры продуцента-тетродотоксина с высоким содержанием эндоспор и свободных спор. Установлено, что эндоспоры накапливают большие количества токсина, что позволяет концентрировать ТТХ в спороносящих клетках и в свободных спорах. В связи с накоплением тетродотоксина в эндоспорах и свободных спорах при получении его из эндоспор и свободных спор отпадает необходимость дополнительной отчистки токсина от питательной среды.
Bacillus sp. 1839 - тетродотоксин-продуцирующие бактерии, выделенные из морских червей (Nemertea). Штамм Bacillus sp. 1839 является аэробной спорообразующей бактерией. Вегетативные клетки имеют форму прямых одиночных палочек, длиной 2.48-2.78 мкм и шириной 0.42-0.44 мкм. Под воздействием неблагоприятных факторов, а также при истощении питательных веществ в среде вегетативные клетки переходят в споровое состояние. Образующиеся споры имеют сферическую форму длиной 0.78-1.27 мкм, шириной 0.37-0.75 мкм. Существует большое количество токсинов, выделяемых спорообразующими бактериями, в том числе и веществ, действующих на клетки (фосфолипазы, гемолизины) и ткани (коллагеназы, эластазы) животных и человека. Было показано, что Bacillus sp. 1839 продуцирует тетродотоксин, который является сильнейшим ядом нервнопаралитического действия и может применяться в медицине в качестве анестетика и антиаритмика (Nieto F.R., Cobos E.J., Tejada М.
Figure 00000001
.,
Figure 00000002
С.,
Figure 00000003
R.,
Figure 00000004
С.М. Tetrodotoxin (ТТХ) as a Therapeutic Agent for Pain. Marine Drugs. 2012; 10(2):281-305;
Figure 00000005
C.O., Bredeloux P., Findlay I., Maupoil V. A TTX-Sensitive Resting Na(+) Permeability Contributes to the Catecholaminergic Automatic Activity in Rat Pulmonary Vein. J Cardiovasc Electrophysiol. 2014. Oct. 27). Установлено, что накопление токсина у Bacillus sp. 1839 происходит главным образом в эндоспорах и свободных спорах, т.е. количество токсина напрямую зависит от бактериальной биомассы (Magarlamov T.Yu., Beleneva I.A., Chernyshev A.V., Kukhlevsky A.D. Tetrodotoxin-producing Bacillus sp. from the ribbon worm (Nemertea) Cephalothrix simula (Iwata, 1952) // Toxicon. 2014. Vol. 85. P. 46-51).
Использование предлагаемого гипертонического фосфатного буферного раствора стимулирует спорообразование в короткий промежуток времени, что значительно ускоряет процесс получения спор и одновременно позволяет дополнительно отмыть их от питательной среды, что не только повышает чистоту продукта, но и сокращает длительность процесса получения целевого продукта. Для достижения поставленной цели целесообразно использовать гипертонический фосфатный буфер: хлорид калия 0,2 г/л, гидрофосфат натрия 3,3 г/л, дигидрофосфат калия 0,166 г/л, хлорид натрия от 46,334 до 56,334 г/л. Приготовленный фосфатный буфер имеет рН 7,8, что соответствует оптимуму роста для морских бактерий штамма Bacillus sp. 1839.
Время выдерживания (инкубирования) бактерий в гипертоническом фосфатном буфере в течение 15-60 мин также способствует достижению заявленного технического результата, вследствие чего происходит значительное сокращение процесса получения целевого продукта. Уменьшение количества времени выдерживания менее 15 мин в буферном растворе не вызывает образования спор, а увеличение времени более 60 мин приводит к гибели вегетативных форм бактерий без перехода в споровую форму.
Для очистки от оставшихся вегетативных клеток дополнительно проводят термическую обработку одним из известных методов, в частности полученный осадок спор нагревают не менее 10 мин при 70-90°С на водяной бане, добавляют буферный раствор, центрифугируют и удаляют надосадочную жидкость, содержащую остатки вегетативных клеток.
Целесообразно, как для отделения биомассы бактерий от жидкой среды, так и для осаждения спор, центрифугирование вести не более 5 мин при 1000-1500 об/мин, это позволяет не только получить качественный споровый материал, но и снизить трудо- и энергозатраты.
Способ осуществляют следующим образом.
Выбор среды для культивирования не принципиален и зависит от доступности ингредиентов. Среды стерилизуются автоклавированием.
Культуру бактерий штамма Bacillus sp. 1839 брали из Коллекции культур морских гетеротрофных бактерий ИБМ ДВО РАН.
Для приготовления фосфатного буфера используют бидистиллированную или дистиллированную воду.
Пример 1
С соблюдением правил асептики производят засев жидкой питательной среды. Для этого вносят культуру бактерий Bacillus sp. 1839 в количестве 0,1% от объема засеваемой среды в жидкую питательную среду Йошимицу-Кимура (Youschimizu and Kimura, 1976) следующего состава: пептон (5,0 г), дрожжевой экстракт (2,5 г), глюкоза (1,0 г), К2НРО4 (0,2 г), MgSO4·7H2O (0,1 г), дистиллированная вода (500 мл), морская вода (500 мл), рН среды 7,8. Культивирование проводят при 21°С в течение 7 суток. Полученную биомассу бактерий отделяют от жидкой питательной среды центрифугированием: при 1500 об/мин в течение 5 мин. Надосадочную жидкость сливают и к чистому бактериальному осадку добавляют гипертонический фосфатный буферный раствор, приготовленный на бидистиллированной воде, следующего состава: хлорид калия 0,2 г/л, гидрофосфат натрия 3,3 г/л, дигидрофосфат калия 0,166 г/л, хлорид натрия 50 г/л, и выдерживают бактерии в течение 30 мин при комнатной температуре. Наличие спор определяют в мазках культуры, окрашенных по методу Пешкова. Для этих целей готовят мазок, высушивают. На стекло наносят щелочной раствор метиленового синего (1% NaOH) и нагревают в пламени горелки в течение 15 с. Препараты промывают дистиллированной водой и докрашивают 0,5% раствором нейтрального красного (Sigma, США). Анализ препаратов производят на световом микроскопе. При указанном способе культивирования переход вегетативных клеток в споры составляет 95%. Полученная споровая культура не содержит компонентов питательной среды.
Для очистки от оставшихся вегетативных клеток проводят термическую обработку следующим образом.
Полученный осадок спор нагревают 10 мин при 80°С на водяной бане, добавляют буферный раствор (хлорид калия 0,2 г/л, гидрофосфат натрия 3,3 г/л, дигидрофосфат калия 0,166 г/л, хлорид натрия 50 г/л), центрифугируют 1500 об/мин в течение 5 мин и удаляют надосадочную жидкость, содержащую остатки вегетативных клеток.
Пример 2
С соблюдением правил асептики производят засев жидкой питательной среды. Для этого вносят 0,1% культуры бактерий Bacillus sp. 1839 от объема среды в жидкую питательную среду Йошимицу-Кимура (Youschimizu and Kimura, 1976) следующего состава: пептон (5,0 г), дрожжевой экстракт (2,5 г), глюкоза (1,0 г), К2НРО4 (0,2 г), MgSO4·7H2O (0,1 г), дистиллированная вода (500 мл), морская вода (500 мл), рН среды 7,8. Культивирование проводят при 22°С в течение 5 суток. Полученную биомассу бактерий отделяют от жидкой питательной среды центрифугированием: при 1000 об/мин в течение 5 мин. Надосадочную жидкость сливают и к чистому бактериальному осадку добавляют гипертонический фосфатный буферный раствор, приготовленный на бидистиллированной воде, следующего состава: хлорид калия 0,2 г/л, гидрофосфат натрия 3,3 г/л, дигидрофосфат калия 0,166 г/л, хлорид натрия 46,334 г/л, и выдерживают бактерии в течение 60 мин при комнатной температуре. Наличие спор определяют в мазках культуры, окрашенных по методу Пешкова. Для этих целей готовят мазок, высушивают. На стекло наносят раствор метиленового синего с 1% NaOH и нагревают в пламени горелки в течение 15 с. Препараты промывают дистиллированной водой и докрашивают 0,5% раствором нейтрального красного (Sigma, США). Анализ препаратов производят на световом микроскопе. При указанном способе культивирования переход вегетативных клеток в споры составляет 80%. Полученная споровая культура не содержит компонентов питательной среды.
Для очистки от оставшихся вегетативных клеток проводят термическую обработку следующим образом.
Полученный осадок нагревают 10 мин при 80°С на водяной бане, добавляют буферный раствор (хлорид калия 0,2 г/л, гидрофосфат натрия 3,3 г/л, дигидрофосфат калия 0,166 г/л, хлорид натрия 50 г/л), центрифугируют 1500 об/мин в течение 5 мин и удаляют надосадочную жидкость, содержащую остатки вегетативных клеток.
Для очистки от оставшихся вегетативных клеток проводят термическую обработку следующим образом.
Полученный осадок нагревают 10 мин при 90°С на водяной бане, добавляют буферный раствор (хлорид калия 0,2 г/л, гидрофосфат натрия 3,3 г/л, дигидрофосфат калия 0,166 г/л, хлорид натрия 46,334 г/л), центрифугируют 1000 об/мин в течение 5 мин и удаляют надосадочную жидкость, содержащую остатки вегетативных клеток.
Пример 3
С соблюдением правил асептики вносят 0,1% культуры бактерий Bacillus sp. 1839, полученной в результате одного из предыдущих культивирований, в колбы с питательной средой: мясопептонный бульон (0,5% водный раствор мясного экстракта, 1,0% пептона, 0,5% натрия хлорида, рН среды 7,6). Бактерии выращивают при 23°С в течение 4 суток. Полученную биомассу бактерий отделяют от жидкой питательной среды центрифугированием: при 1200 об/мин в течение 5 мин. Надосадочную жидкость сливают и к чистому бактериальному осадку добавляют гипертонический фосфатный буферный раствор, приготовленный на дистиллированной воде, следующего состава: хлорид калия 0,2 г/л, гидрофосфат натрия 3,3 г/л, дигидрофосфат калия 0,166 г/л, хлорид натрия 56,334 г/л, и выдерживают бактерии в течение 15 мин при комнатной температуре. Наличие спор определяют в мазках культуры, окрашенных по методу Пешкова. Для этих целей готовят мазок, высушивают. На стекло наносят раствор метиленового синего с 1,0% NaOH и нагревают в пламени горелки в течение 15 с. Препараты промывают дистиллированной водой и докрашивают 0,5% раствором нейтрального красного (Sigma, США). Анализ препаратов производят на световом микроскопе. При указанном способе культивирования переход вегетативных клеток в споры составляет 82%. Полученная споровая культура не содержит компонентов питательной среды.
Для очистки от оставшихся вегетативных клеток проводят термическую обработку следующим образом.
Полученный осадок нагревают 10 мин при 70°С на водяной бане, добавляют буферный раствор (хлорид калия 0,2 г/л, гидрофосфат натрия 3,3 г/л, дигидрофосфат калия 0,166 г/л, хлорид натрия 56,334 г/л), центрифугируют 1200 об/мин в течение 5 мин и удаляют надосадочную жидкость, содержащую остатки вегетативных клеток.
Пример 4 по известному способу (Baril Е. et al., 2011)
Засев жидкой питательной среды 0,1 мл бактерий Bacillus sp. 1839 в 100 мл жидкой питательной среды и культивируют вегетативные клетки бактерий в течение 6 ч при 30°С, затем бактерии осаждают (6000×g, 10 мин, 12°С) и переносят в фосфатный буфер с добавлением минеральных солей следующего состава: 4,5 г/л K2HPO4·3H2O; 1,8 г/л безводного KH2PO4, с добавлением 8,0 мг/л CaCl2·2H2O, 1,5 мг/л MnSO4·H2O; рН 7,2. Инкубируют 4 дня при постоянном перемешивании до образования спор. Споры осаждают центрифугированием для отделения готового продукта от минерального буфера (6000 g, 10 мин, 12°С). На 4-е сутки культивирования спор в минеральном буфере культура представлена преимущественно вегетативными формами, много клеток с разрушенной клеточной стенкой, а концентрация спор не превышает 5%.
Для нейтрализации жизнедеятельности вегетативных клеток проводят термическую обработку: осадок нагревают 10 мин при 70°С на водяной бане.
Из результатов эксперимента примера 4, проведенного по условиям известного способа получения спорового материала, следует, что эти условия не подходят для штамма Bacillus sp. 1839, поскольку практически не обеспечивают получение спор.
В то же время из примеров 1-3 видно, что заявленное изобретение обеспечивает переход в споры до 95% популяции уже через полчаса после инкубации в предлагаемом гипертоническом фосфатном буфере, то есть значительно снижает длительность процесса образования спор. Способ прост в исполнении, имеет простую технологию и позволяет получать споровую культуру в любой бактериологической или ветеринарной лаборатории при минимальных производственных затратах. Предлагаемый способ не требует многокомпонентных питательных сред с дефицитными субстратами.
Заявленный способ получения спор по сравнению с известным способом менее длителен и подходит для штамма Bacillus sp. 1839, отделение бактерий от жидкой питательной среды в отличие от прототипа не требует использования жестких условий центрифугирования.
Исследование выполнено при поддержке ДВФУ, проект №14-08-06-19_и.

Claims (3)

1. Способ получения спорового материала на основе штамма Bacillus sp. 1839, предусматривающий культивирование бактерий, отделение биомассы бактерий от жидкой питательной среды центрифугированием, добавление в полученную биомассу бактерий фосфатного буфера, в качестве которого используют гипертонический фосфатный буферный раствор следующего состава: хлорид калия 0,2 г/л, гидрофосфат натрия 3,3 г/л, дигидрофосфат калия 0,166 г/л, хлорид натрия от 46,334 до 56,334 г/л; инкубирование в нем бактерий до образования спор в течение 15-60 мин при комнатной температуре и осаждением полученных спор центрифугированием.
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что центрифугирование ведут при 1000-1500 об/мин не более 5 мин.
3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что полученный осадок спор подвергают термической обработке путем нагревания на водяной бане не менее 10 мин при 70-90°С.
RU2015147736/10A 2015-11-09 2015-11-09 СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СПОРОВОЙ КУЛЬТУРЫ НА ОСНОВЕ БАКТЕРИАЛЬНОГО ШТАММА Bacillus sp. 1839 RU2605543C1 (ru)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2015147736/10A RU2605543C1 (ru) 2015-11-09 2015-11-09 СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СПОРОВОЙ КУЛЬТУРЫ НА ОСНОВЕ БАКТЕРИАЛЬНОГО ШТАММА Bacillus sp. 1839

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2015147736/10A RU2605543C1 (ru) 2015-11-09 2015-11-09 СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СПОРОВОЙ КУЛЬТУРЫ НА ОСНОВЕ БАКТЕРИАЛЬНОГО ШТАММА Bacillus sp. 1839

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2605543C1 true RU2605543C1 (ru) 2016-12-20

Family

ID=58697445

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2015147736/10A RU2605543C1 (ru) 2015-11-09 2015-11-09 СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СПОРОВОЙ КУЛЬТУРЫ НА ОСНОВЕ БАКТЕРИАЛЬНОГО ШТАММА Bacillus sp. 1839

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2605543C1 (ru)

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2076902C1 (ru) * 1993-06-15 1997-04-10 Александр Михайлович Мишульский Способ получения бактериального препарата из бактерий рода bacillus
RU2105562C1 (ru) * 1995-06-14 1998-02-27 Леляк Александр Иванович Способ получения бактериального препарата на основе bacillus subtilis
RU2128914C1 (ru) * 1998-03-30 1999-04-20 Байгузина Фаниля Абузаровна Способ получения препарата фитоспорин
RU2509151C1 (ru) * 2012-11-09 2014-03-10 Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов" (ФГУП "ГосНИИгенетика" Способ получения спорового материала бактерий рода clostridium

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2076902C1 (ru) * 1993-06-15 1997-04-10 Александр Михайлович Мишульский Способ получения бактериального препарата из бактерий рода bacillus
RU2105562C1 (ru) * 1995-06-14 1998-02-27 Леляк Александр Иванович Способ получения бактериального препарата на основе bacillus subtilis
RU2128914C1 (ru) * 1998-03-30 1999-04-20 Байгузина Фаниля Абузаровна Способ получения препарата фитоспорин
RU2509151C1 (ru) * 2012-11-09 2014-03-10 Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов" (ФГУП "ГосНИИгенетика" Способ получения спорового материала бактерий рода clostridium

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
BARIL E., COROLLER L. et al., The wet-heat resistance of Bacillus weihenstephanensis КBAB4 spores produced in a two-step sporulation process depends on sporulation temperature but not on previous cell history., Int.J. Food microbiol., 2011, mar 15;146(1), p.57-62. TIMUR YU MAGARLAMOV, IRINA A. BELENEVA et al., Tetrodotoxin-producing Bacillus sp. from the ribbon worm (Nemertea) Cephalothrix simula (Iwata, 1952), Toxicon. jan 2014,v.85, p. 46-51. *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Dubos et al. Decomposition of the capsular polysaccharide of pneumococcus type III by a bacterial enzyme
Neff Purification, axenic cultivation, and description of a soil amoeba, Acanthamoeba sp.
CN104928208B (zh) 一种植物乳杆菌Lp90及其筛选方法和应用
RU2482179C1 (ru) ШТАММ БАКТЕРИЙ Bacillus atropheus - ДЕСТРУКТОР НЕФТИ И НЕФТЕПРОДУКТОВ
RU2605543C1 (ru) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СПОРОВОЙ КУЛЬТУРЫ НА ОСНОВЕ БАКТЕРИАЛЬНОГО ШТАММА Bacillus sp. 1839
CN103114053A (zh) 产高光学纯度d-乳酸的棒状乳杆菌陕西亚种及其应用
RU2308485C1 (ru) Штамм бактерий serratia species - продуцент липазы
RU2310685C1 (ru) Штамм бактерий serratia marcescens, продуцирующий липолитические ферменты, для получения препарата для очистки сточных вод от жиров
Duval The cultivation of the leprosy bacillus and the experimental production of leprosy in the Japanese dancing mouse
CN105969743A (zh) 降解甲醛的微生物酶制剂的制备工艺
Schmitt-Slomska et al. Induction of L-variants in human diploid cells infected by group A streptococci
CN105754908B (zh) 一种铜绿假单胞菌菌株及其应用
RU2085584C1 (ru) Способ получения рекомбинантных туляремийных микроорганизмов - продуцентов факторов вирулентности, рекомбинантный штамм francisella tularensis subspecies, holarctica r5s - продуцент фактора вирулентности francisella tularensis nearctica shu, рекомбинантный штамм francisella tularensis holarctica rn4 - продуцент фактора вирулентности pseudomonas pseudomallei c 141, рекомбинантный штамм francisella tularensis subspecies holarctica r1a - продуцент фактора вирулентности francisella tularensis nearctica b 399 a cole
Hoogerheide Variability in morphological and biochemical properties of Clostridium histolyticum (Weinberg and Seguin)
Abzaeva et al. Studying the Effect of Experimental Bases on the Growth Quality of Liquid Nutritional Media for Submerged Cultivation of Plague Microbe Vaccine Strain
Raju et al. Isolation, Characterization and Sequencing of Lactobacillus from the Oral and Fecal Samples of Healthy Dogs
CN107974418A (zh) 一株海洋蛭弧菌及在氨苄青霉素下促进蛭质体形成的应用
SU823423A1 (ru) Штамм 122-АНТАгОНиСТ пОСТОРОННЕй МиКРОфлОРыСыРА
RU2572352C1 (ru) Способ получения тетродотоксина
RU2670054C1 (ru) Штамм бактерий Bifidobacterium bifidum ICIS-310 - продуцент ингибитора провоспалительного цитокина INF-γ
Srivastava Elementary Microbiology
Sushma et al. Isolation, production and purification of lipase from Aspergillus niger using gingerly oil cake as substrate
CN108102999B (zh) 吲哚在促进海洋蛭弧菌蛭质体形成中的应用
CN107974417B (zh) 钙离子在促进海洋蛭弧菌蛭质体形成中的应用
CN106834161B (zh) 一种枯草芽孢杆菌z12及应用

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20191110