RU2588386C1 - Bacterial strain lactococcus lactis - component of lactic acid starter - Google Patents

Bacterial strain lactococcus lactis - component of lactic acid starter Download PDF

Info

Publication number
RU2588386C1
RU2588386C1 RU2015118880/10A RU2015118880A RU2588386C1 RU 2588386 C1 RU2588386 C1 RU 2588386C1 RU 2015118880/10 A RU2015118880/10 A RU 2015118880/10A RU 2015118880 A RU2015118880 A RU 2015118880A RU 2588386 C1 RU2588386 C1 RU 2588386C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
lactococcus lactis
strain
lactic acid
component
bacterial strain
Prior art date
Application number
RU2015118880/10A
Other languages
Russian (ru)
Inventor
Альфия Алиевна Бибарсова
Елена Федоровна Семенова
Инесса Яковлевна Моисеева
Антонина Петровна Степанова
Людмила Борисовна Ловцова
Original Assignee
Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Пензенский государственный университет" (ФГБОУ ВПО "Пензенский государственный университет")
Filing date
Publication date
Application filed by Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Пензенский государственный университет" (ФГБОУ ВПО "Пензенский государственный университет") filed Critical Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Пензенский государственный университет" (ФГБОУ ВПО "Пензенский государственный университет")
Application granted granted Critical
Publication of RU2588386C1 publication Critical patent/RU2588386C1/en

Links

Abstract

FIELD: microbiology.
SUBSTANCE: invention relates to microbiology and can be used in producing fermented milk products. Lactococcus lactis No. 1b-MI, capable of accumulation of biomass in conditions of minimum composition nutrient medium and high biological activity with respect to carbohydrates and alcohols, deposited in Departmental collection of microorganisms GNU ARRIAM for agricultural purposes, under number RCAM02909.
EFFECT: higher quality of starter preparations for fermented milk products.
1 cl, 4 tbl, 2 ex

Description

Изобретение относится к новому штамму Lactococcus lactis 1б-МИ и может быть использовано в производстве заквасочных препаратов и кисломолочных продуктов массового и лечебно-профилактического назначения.The invention relates to a new strain of Lactococcus lactis 1b-MI and can be used in the production of starter preparations and fermented milk products of mass and therapeutic purposes.

Штаммы бактерий вида L. lactis в современном производстве используют в составе поликомпонентных заквасок. С целью повышения эффективности и надежности производственного процесса сквашивания молока объединяемые в закваске штаммы подбирают таким образом, чтобы их технологически значимые свойства были взаимодополняемыми и обладали высокой активностью. Штаммы молочнокислых бактерий L. lactis являются продуцентами низина, который подавляет развитие грамположительных микроорганизмов: стрептококков, стафилококков, сарцин, спорообразующих бактерий, в том числе и термофильной микрофлоры, что является преимуществом при включении в консорциум заквасок.The bacterial strains of the species L. lactis in modern production are used as part of multicomponent starter cultures. In order to increase the efficiency and reliability of the production process of milk fermentation, strains to be combined in yeast are selected in such a way that their technologically significant properties are complementary and have high activity. The strains of lactic acid bacteria L. lactis are producers of nisin, which inhibits the development of gram-positive microorganisms: streptococci, staphylococci, sarcinomas, spore-forming bacteria, including thermophilic microflora, which is an advantage when starter cultures are included in the consortium.

Известен штамм Streptococcus lactis ВКПМ В-6793 - компонент молочнокислой закваски и продуцент бактериоцина низина [1]. Недостатками этого известного штамма является довольно узкий спектр сбраживания сахаров и спиртов. Наиболее близким к заявленному изобретению по техническому решению и производственным показателям является штамм Streptococcus lactis ВКПМ В-6795 [2]. Недостатками его использования в производстве является низкая продуктивность, невысокая способность сбраживания углеводов, отличных от лактозы.Known strain of Streptococcus lactis VKPM B-6793 - a component of lactic acid starter culture and producer of bacteriocin nisin [1]. The disadvantages of this known strain is a rather narrow spectrum of fermentation of sugars and alcohols. Closest to the claimed invention according to the technical solution and production indicators is a strain of Streptococcus lactis VKPM B-6795 [2]. The disadvantages of its use in production are low productivity, low ability to ferment carbohydrates other than lactose.

В отличие от прототипа предлагаемый штамм Lactococcus lactis 1б-МИ способен сбраживать более широкий спектр различных углеводов и спиртов и обладает оптимальными свойствами для включения в консорциум молочнокислой закваски.Unlike the prototype, the proposed strain of Lactococcus lactis 1b-MI is able to ferment a wider range of various carbohydrates and alcohols and has optimal properties for inclusion in the consortium of lactic acid starter culture.

Штамм выделен из коллекционных образцов способом прямого посева на жидкие питательные среды с последующим высевом на агаризованные среды. Идентификацию штамма проводили согласно определителю Берджи [3].The strain was isolated from collection samples by direct seeding on liquid nutrient media, followed by seeding on agar media. Identification of the strain was carried out according to the determinant of Bergey [3].

Lactococcus lactis 1б-МИ депонирован в Ведомственной коллекции полезных микроорганизмов сельскохозяйственного назначения (ВКСМ) ГНУ ВНИИСХМ под номером RCAM 02909.Lactococcus lactis 1b-MI is deposited in the Departmental collection of beneficial microorganisms for agricultural purposes (VKSM) GNU VNIISCHM under the number RCAM 02909.

Морфология Morphology

На поверхности агаризованных сред (МПА) через 24 часа при 37°С образует белые, выпуклые, гладкие колонии с ровными краями диаметром до 3 мм. Грамположительные бактерии, бесспоровые, неподвижные, клетки мелкие, сферической формы, образующие пары или цепочки до четырех кокков.On the surface of agarized media (MPA) after 24 hours at 37 ° C forms white, convex, smooth colonies with smooth edges with a diameter of up to 3 mm. Gram-positive bacteria, indisputable, motionless, small, spherical cells that form pairs or chains of up to four cocci.

Культуральные признаки Cultural signs

В мясо-пептонном бульоне с 2,5% и 4% хлористого натрия наблюдается рост, а с 6,5% хлористого натрия рост отсутствует; на энтерококковом агаре бактерии дают рост в виде бесцветных колоний; рост на агаре с 0,04% теллурита калия отсутствует, в гидролизате молока с рН 9,2 растет, а при рН 9,6 роста нет. Штамм при 45°С не растет, как и при температуре ниже 10°С (табл. 1).In meat-peptone broth with 2.5% and 4% sodium chloride, growth is observed, and with 6.5% sodium chloride there is no growth; on enterococcal agar, bacteria show growth in the form of colorless colonies; there is no growth on agar with 0.04% potassium tellurite, it grows in the milk hydrolyzate with a pH of 9.2, and there is no growth at a pH of 9.6. The strain at 45 ° C does not grow, as well as at a temperature below 10 ° C (Table 1).

Figure 00000001
Figure 00000001

Figure 00000002
Figure 00000002

С целью изучения принадлежности анализируемого штамма к серологическим группам по Лансфилду была проведена реакция латекс-агглютинации со специфическими сыворотками групп В, С, F, G, D. Lactococcus lactis показал групповую специфичность к D-антигену.In order to study the affiliation of the analyzed strain to serological groups according to Lansfield, a latex agglutination reaction was carried out with specific sera of groups B, C, F, G, D. Lactococcus lactis showed group specificity for the D antigen.

Физиолого-биохимические свойства Physiological and biochemical properties

Сбраживает из углеводов: глюкозу, фруктозу, галактозу, лактозу, сахарозу, мальтозу, арабинозу, маннозу, рамнозу, ксилозу; из спиртов - маннит, сорбит, глицерин (табл. 2). Не образует индол и сероводород.It is fermented from carbohydrates: glucose, fructose, galactose, lactose, sucrose, maltose, arabinose, mannose, rhamnose, xylose; of alcohols - mannitol, sorbitol, glycerin (table. 2). Does not form indole and hydrogen sulfide.

Figure 00000003
Figure 00000003

Молоко свертывает в течение 18 часов. Факультативный анаэроб, тип брожения - гомоферментативное. Оптимальная температура роста 20-32°С. Хорошо растет в гидролизованном молоке с рН 6,5-6,8. Кислотность 72°Т. Количество колониеобразующих единиц на грамм исследуемого материала (КОЕ/г) до 1·109 КОЕ/г.Milk coagulates within 18 hours. Optional anaerobic, type of fermentation - homoenzymatic. The optimum growth temperature is 20-32 ° C. It grows well in hydrolyzed milk with a pH of 6.5-6.8. Acidity 72 ° T. The number of colony forming units per gram of test material (CFU / g) up to 1 · 10 9 CFU / g.

Поддержание штаммаStrain maintenance

Методы хранения: культура хранится в лиофилизированном состоянии в ампулах при температуре - 4±2°С не менее 12 месяцев, на жидкой питательной среде при 5-6°С 2-4 месяца.Storage methods: the culture is stored in a lyophilized state in ampoules at a temperature of 4 ± 2 ° C for at least 12 months, in a liquid nutrient medium at 5-6 ° C for 2-4 months.

Среды хранения: обезжиренное и цельное молоко, мясо-пептонный бульон.Storage media: skim and whole milk, meat and peptone broth.

Среда культивирования: молоко коровье, цельное, нормализованное или обезжиренное.Cultivation medium: cow's milk, whole, normalized or skimmed.

Время инкубации: 5-7 ч в зависимости от температуры инкубации, количество закваски, вносимое в молоко 1,5-2%, частота пересевов 1 раз в месяц (табл. 3).Incubation time: 5-7 hours, depending on the incubation temperature, the amount of yeast introduced into milk 1.5-2%, the frequency of reseeding 1 time per month (table. 3).

Figure 00000004
Figure 00000004

Использование штамма Lactococcus lactis 1б-МИ иллюстрируется следующими примерами.The use of the strain Lactococcus lactis 1b-MI is illustrated by the following examples.

Пример 1. Штамм Lactococcus lactis 1б-МИ восстанавливают следующим образом: содержимое ампулы вносят в пробирку со стерильным обезжиренным молоком и инкубируют при температуре 32°С в течение 24 часов. Из восстановленной культуры выращивают инокулят на стерильном обезжиренном молоке.Example 1. The strain of Lactococcus lactis 1b-MI is restored as follows: the contents of the ampoule are introduced into a test tube with sterile skim milk and incubated at a temperature of 32 ° C for 24 hours. An inoculum is grown from the reconstituted culture in sterile skim milk.

Так как штамм 1б-МИ характеризуется повышенной способностью к сбраживанию различных углеводов, для него возможно введение в состав среды мелассы как компонента, богатого углеводами.Since strain 1b-MI is characterized by an increased ability to ferment various carbohydrates, it is possible for it to introduce molasses into the medium as a component rich in carbohydrates.

Условия ферментации Fermentation conditions

Состав питательной среды, %:The composition of the nutrient medium,%:

Сухая молочная сывороткаDry whey 4four Гидролизованное молокоHydrolyzed milk 55 МелассаMolasses 1one Вода дистиллированнаяDistilled water до 1 лup to 1 l

Температура культивирования - 30°С, рН 6,8. Регулирование рН производится путем непрерывной подачи 20%-ного раствора щелочи. В подготовленную среду вносят 5% инокулята и проводят процесс ферментации в периодических условиях в течение 9 ч.The cultivation temperature is 30 ° C, pH 6.8. The pH is adjusted by continuously supplying a 20% alkali solution. 5% of the inoculum is introduced into the prepared medium and the fermentation process is carried out under batch conditions for 9 hours.

Пример 2. Определение жизнеспособности заявляемого штамма в процессе длительного культивирования.Example 2. Determination of the viability of the claimed strain in the process of long-term cultivation.

Бактерии заявляемого штамма Lactococcus lactis 1б-МИ и контрольного штамма из коллекционных образцов МИ ПТУ выращивали в течение 24 часов при 37°С после посева штрихом на чашки Петри с обогащенной агаризованной средой МА20 (табл. 4). Из выросшей биомассы каждого штамма готовили бактериальную суспензию и разводили ее таким образом, чтобы при высеве на поверхность минимальной агаризованной среды МА4 можно было наблюдать сопоставимое количество отдельных колоний сравниваемых штаммов на одной чашке.Bacteria of the inventive strain of Lactococcus lactis 1b-MI and a control strain from collection samples of MI PTU were grown for 24 hours at 37 ° C after plating in Petri dishes with enriched agarized MA20 medium (Table 4). A bacterial suspension was prepared from the grown biomass of each strain and diluted in such a way that when plating on the surface of a minimal agarized medium MA4, a comparable number of individual colonies of the compared strains on one plate could be observed.

Figure 00000005
Figure 00000005

Figure 00000006
Figure 00000006

После длительного (в течение 96 часов) инкубирования при 37°С средняя площадь колоний заявляемого штамма превосходила таковую у контрольного штамма (3 и 1,5 мм2, соответственно). Это подтверждает способность заявляемого штамма 1б-МИ накапливать большее количество биомассы в условиях минимального состава питательной среды и длительного инкубирования.After prolonged (for 96 hours) incubation at 37 ° C, the average colony area of the claimed strain exceeded that of the control strain (3 and 1.5 mm 2 , respectively). This confirms the ability of the claimed strain 1b-MI to accumulate a greater amount of biomass in conditions of a minimum composition of the nutrient medium and long incubation.

Свойства заявляемого штамма свидетельствуют о целесообразности его использования в составе поликомпонентной закваски, так как при неблагоприятных условиях (понижении рН среды, повышении температуры, а также постепенного обеднения состава питательной среды по мере протекания технологического процесса) он способен осуществлять сквашивание молока. Повышенная жизнеспособность бактерий позволяет повысить содержание живых клеток в получаемом кисломолочном продукте.The properties of the claimed strain indicate the feasibility of its use as part of a multicomponent sourdough, since under unfavorable conditions (lowering the pH of the medium, increasing temperature, as well as the gradual depletion of the composition of the nutrient medium as the process proceeds), it is capable of fermenting milk. Increased bacterial viability allows to increase the content of living cells in the resulting fermented milk product.

Список литературыBibliography

1. Патент №2061042 Штамм Streptococcus lactis - продуцент бактериоцина низина / Литвинова М.Н., Красникова Л.В. и др. (РФ). Заявл. 13.09.1994; опубл.27.05.1996. Бюл. №15.1. Patent No. 2061042 The strain Streptococcus lactis - producer of bacteriocin nisin / Litvinova MN, Krasnikova LV and others (RF). Claim 09/13/1994; publ. May 27, 1996. Bull. No. 15.

2. Патент №2059716 Штамм Streptococcus lactis - продуцент бактериоцина низина / Литвинова М.Н., Красникова Л.В. и др. (РФ)//Заявл. 08.07.1994; опубл. 10.05.1996. Бюл. №13.2. Patent No. 2059716 The strain of Streptococcus lactis - producer of bacteriocin nisin / Litvinova MN, Krasnikova LV et al. (RF) // Decl. 07/08/1994; publ. 05/10/1996. Bull. No. 13.

3. Определитель бактерий Берджи: Справ. изд.: Пер. с англ.: В 2 т. Т. 2 / Под ред. Дж. Хоулта и др. - 9-е изд. - М.: Мир, 1997. - С. 538, 549.3. The determinant of bacteria Bergey: Ref. Edition: Per. from English: In 2 vol. T. 2 / Ed. J. Hoult et al. - 9th ed. - M.: Mir, 1997 .-- S. 538, 549.

Claims (1)

Штамм бактерий Lactococcus lactis, депонированный в Ведомственной коллекции полезных микроорганизмов сельскохозяйственного назначения ГНУ ВНИИСХМ под регистрационным номером RCAM02909 - компонент молочнокислой закваски для приготовления лечебно-диетических продуктов, обладающий высокой биохимической активностью в отношении углеводов и спиртов. The bacterial strain Lactococcus lactis, deposited in the Departmental collection of beneficial microorganisms for agricultural purposes, GNU VNIISCHM under registration number RCAM02909 is a component of lactic acid starter for the preparation of therapeutic and dietary products with high biochemical activity against carbohydrates and alcohols.
RU2015118880/10A 2015-05-19 Bacterial strain lactococcus lactis - component of lactic acid starter RU2588386C1 (en)

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2588386C1 true RU2588386C1 (en) 2016-06-27

Family

ID=

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SU507055A1 (en) * 1973-12-27 1979-02-28 Всесоюзный Научно-Исследовательский Институт Микробиологических Средств Защиты Растений И Бактериальных Препаратов Streptococcus lactis 24-24 strain as nisin producer
RU2059716C1 (en) * 1994-07-08 1996-05-10 Государственный научно-исследовательский институт биосинтеза белковых веществ Strain of streptococcus lactis - a producer of bacteriocin nisine
RU2061042C1 (en) * 1994-07-08 1996-05-27 Государственный научно-исследовательский институт биосинтеза белковых веществ Strain streptococcus lactis - a producer of bacteriocine nisine
RU2151796C1 (en) * 1999-02-08 2000-06-27 Государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт биосинтеза белковых веществ" Strain lactobacillus lactis as producer of bacteriocine nisin
RU2244002C1 (en) * 2003-07-03 2005-01-10 Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-иследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов" Strain of microorganism lactobacillus lactis for preparing curd from milk

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SU507055A1 (en) * 1973-12-27 1979-02-28 Всесоюзный Научно-Исследовательский Институт Микробиологических Средств Защиты Растений И Бактериальных Препаратов Streptococcus lactis 24-24 strain as nisin producer
RU2059716C1 (en) * 1994-07-08 1996-05-10 Государственный научно-исследовательский институт биосинтеза белковых веществ Strain of streptococcus lactis - a producer of bacteriocin nisine
RU2061042C1 (en) * 1994-07-08 1996-05-27 Государственный научно-исследовательский институт биосинтеза белковых веществ Strain streptococcus lactis - a producer of bacteriocine nisine
RU2151796C1 (en) * 1999-02-08 2000-06-27 Государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт биосинтеза белковых веществ" Strain lactobacillus lactis as producer of bacteriocine nisin
RU2244002C1 (en) * 2003-07-03 2005-01-10 Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-иследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов" Strain of microorganism lactobacillus lactis for preparing curd from milk

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN106047759B (en) One plant of Pediococcus pentosaceus and its application
CN113444664B (en) Lactobacillus brevis for producing gamma-aminobutyric acid and application thereof
CN104531587A (en) Lactobacillus plantarum (LP-ONLLY) and application thereof in active fermented milk
CN109536406A (en) Streptococcus thermophilus JMCC16, isolation and purification method and the application being acidified after weak
CN109825447A (en) A kind of fermentation manufacturing technique of high yield clostridium butyricum
CN109576175A (en) Streptococcus thermophilus JMCC0022, its isolation and purification method and application
RU2337953C1 (en) Strain of bacterium streptococcus thermophilic for milk souring in process of production of cultured milk foods, including yogurts
RU2567150C1 (en) Streptococcus thermophilus STRAIN USED FOR PRODUCTION OF FERMENTED MILK PRODUCTS
CN109234215A (en) A kind of Lactobacillus rhamnosus less salt culture medium and cultural method
RU2590716C1 (en) Strain of bacteria streptococcus thermophilus strain used for preparation of cultured milk product
RU2599432C1 (en) STRAIN OF LACTIC BACTERIA Enterococcus hirae - PRODUCER OF LACTIC ACID AND ANTIBIOTIC SUBSTANCES
RU2599430C1 (en) STRAIN OF LACTIC BACTERIA Enterococcus mundtii - PRODUCER OF LACTIC ACID AND ANTIBIOTIC SUBSTANCES
KR101156161B1 (en) Bacillus subtilis hj18-4 oligotrophic strain isolated from memil soksungjang and method for making fermentation food by using same
RU2567149C1 (en) Lactobacillus plantarum STRAIN USED FOR OBTAINING OF FERMENTED MILK PRODUCTS AND PROBIOTIC PREPARATIONS
RU2588386C1 (en) Bacterial strain lactococcus lactis - component of lactic acid starter
CN1793325A (en) Aromatic type direct putting type ferment agent for sour milk
RU2475535C1 (en) Method to produce probiotic preparation lacto-amylovorin
RU2599431C1 (en) LACTIC BACTERIA Enterococcus hirae VKPM V-11835 STRAIN - LACTIC ACID AND ANTIBIOTIC SUBSTANCES PRODUCER
RU2280464C2 (en) Method for preparing dry probiotic preparation "batsell"
RU2524117C1 (en) Bacterial strain lactobacillus acidophilus used to prepare fermented milk product
RU2059716C1 (en) Strain of streptococcus lactis - a producer of bacteriocin nisine
RU2567148C1 (en) Streptococcus salivarius VKPM V-11177 STRAIN USED FOR PRODUCTION OF FERMENTED MILK PRODUCTS AND PRO-BIOTIC PREPARATIONS
RU2567814C1 (en) Streptococcus salivarius STRAIN VKPM V-11174, OBTAINED ON AVAILABLE MEDIUM
Shapiro et al. Lactobacilli in the intestinal tract of the chicken
RU2786437C1 (en) Lactobacillus strain lacticaseibacillus paracasei 14-2020 vkpm - b-13841 used for the production of fermented milk products