RU2582965C9 - Pharmaceutical composition for treatment of endometriosis and method for preparation thereof - Google Patents
Pharmaceutical composition for treatment of endometriosis and method for preparation thereof Download PDFInfo
- Publication number
- RU2582965C9 RU2582965C9 RU2014115437/15A RU2014115437A RU2582965C9 RU 2582965 C9 RU2582965 C9 RU 2582965C9 RU 2014115437/15 A RU2014115437/15 A RU 2014115437/15A RU 2014115437 A RU2014115437 A RU 2014115437A RU 2582965 C9 RU2582965 C9 RU 2582965C9
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- endometriosis
- protein
- treatment
- inhibin
- immunospecificity
- Prior art date
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/48—Reproductive organs
- A61K35/54—Ovaries; Ova; Ovules; Embryos; Foetal cells; Germ cells
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Virology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Gynecology & Obstetrics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Description
Группа изобретений относится к фармацевтическим композициям и технологиям их получения из сырья животного происхождения и может быть использована для лечения и реабилитации различных видов эндометриоза и некоторых онкологических заболеваний.The group of inventions relates to pharmaceutical compositions and technologies for their preparation from raw materials of animal origin and can be used for the treatment and rehabilitation of various types of endometriosis and some oncological diseases.
В настоящее время в медицинской практике для лечения эндометриоза наиболее широко используется консервативный метод, включающий подавление клинически активного процесса эндометриоза введением гормонального препарата (см. Стрижаков А.Н., Давыдов А.И. (Эндометриоз: клинические и теоретические аспекты. - М.: Медицина, 1996. - С.206).Currently, in medical practice, the conservative method is most widely used for the treatment of endometriosis, including the suppression of the clinically active process of endometriosis by the introduction of a hormonal drug (see A. Strizhakov, A. Davydov (Endometriosis: clinical and theoretical aspects. - M .: Medicine, 1996 .-- P.206).
Общими недостатками традиционно используемых методов являются слабо выраженная эффективность гормональных препаратов у больных со средней и тяжелой формой эндометриоза, развитие рецидивов через короткое время после проведенного курса лечения, необходимость длительного применения препарата, что приводит к нежелательным осложнениям, а также недостаточная результативность, связанная со склонностью эндометриоза к развитию рецидивов, ведущих к увеличению частоты и обширности хирургических вмешательств без гарантии полного излечения.Common disadvantages of the traditionally used methods are the weakly pronounced effectiveness of hormonal drugs in patients with moderate and severe endometriosis, the development of relapses shortly after the course of treatment, the need for long-term use of the drug, which leads to undesirable complications, as well as insufficient effectiveness associated with the tendency of endometriosis to the development of relapses leading to an increase in the frequency and extent of surgical interventions without a guarantee of complete cure.
Известна фармацевтическая композиция для лечения эндометриоза или бесплодия или для повышения способности к воспроизведению потомства, включающая терапевтически эффективное количество β-адренергического агониста и фармацевтически приемлемый биоадгезивный носитель, в которой β-адренергическим агонистом является тербуталин, а биоадгезивный носитель включает сшитый водонерастворимый, но набухающий в воде полимер поликарбоновой кислоты, при этом концентрация тербуталина находится в интервале от менее чем 0,1 до около 0,4 вес.%, а в качестве полимера используют поликарбофил. Композиция, в которой β-адренергическим агонистом является тербуталин, предназначена для введения в дозировке от около 0,5 до 2,5 г и доставляет от менее чем 1 до около 8 мг тербуталина (см. патент РФ №2310474, кл. A61K 45/00, 2007 г.).A pharmaceutical composition is known for treating endometriosis or infertility or for increasing the ability to reproduce offspring, comprising a therapeutically effective amount of a β-adrenergic agonist and a pharmaceutically acceptable bioadhesive carrier, in which the β-adrenergic agonist is terbutaline and the bioadhesive carrier includes a crosslinked water-insoluble, but water insoluble, but water insoluble, but a polycarboxylic acid polymer, wherein the concentration of terbutaline is in the range from less than 0.1 to about 0.4 wt.%, and as Your polymer uses polycarbophil. A composition in which terbutaline is a β-adrenergic agonist is intended to be administered in a dosage of from about 0.5 to 2.5 g and delivers from less than 1 to about 8 mg of terbutaline (see RF patent No. 2310474, class A61K 45 / 00, 2007).
В результате анализа известного препарата необходимо отметить, что он не является препаратом прямого действия и все его эффекты опосредованы. Он имеет слабо выраженную эффективность у больных со средней и тяжелой формой эндометриоза, требует длительного применения препарата, что приводит к нежелательным осложнениям, свойственным всем адреномиметикам. Наиболее часто встречающиеся осложнения - это тахикардия и тремор. Иногда - гипергликемия, возбуждение ЦНС, снижение артериального давления.As a result of the analysis of a well-known drug, it should be noted that it is not a direct-acting drug and all its effects are indirect. It has poorly expressed effectiveness in patients with moderate and severe endometriosis, requires long-term use of the drug, which leads to undesirable complications inherent in all adrenomimetics. The most common complications are tachycardia and tremors. Sometimes - hyperglycemia, central nervous system agitation, lowering blood pressure.
Известен способ лечения эндометриоза матки, включающий подавление клинически активного процесса эндометриоза введением гормонального препарата, причем параллельно с гормональным препаратом больным дополнительно вводят препарат животного происхождения «Скваакан», внутримышечно ежедневно по 2,0 мл в течение 75 дней с семидневным перерывом через каждые 30 дней, а в качестве гормонального препарата используют, например, дюфастон (см. патент РФ №2211700, кл. A61K 35/60, 2003 г.).A known method for the treatment of uterine endometriosis, including the suppression of the clinically active process of endometriosis with the introduction of a hormonal drug, moreover, in parallel with the hormonal drug, the patient is additionally injected with animal preparation Squaacan, intramuscularly daily, 2.0 ml for 75 days with a seven-day break every 30 days, and as a hormonal drug, for example, duphaston is used (see RF patent No. 2211700, class A61K 35/60, 2003).
Данный способ позволит повысить степень подавления распространенности и роста очагов эндометриоза, сократить сроки лечения, сделать его более безопасным для больных эндометриозом матки, т.к. активируется противоопухолевый клеточный иммунитет, повышается антибактериальная активность нейтрофилов и фагоцитарная активность макрофагов.This method will increase the degree of suppression of the prevalence and growth of foci of endometriosis, reduce treatment time, make it safer for patients with uterine endometriosis, because antitumor cellular immunity is activated, the antibacterial activity of neutrophils and the phagocytic activity of macrophages increase.
Препарат «Скваакан», используемый для лечения, получают следующим образом. Первоначально осуществляют гомогенизацию сырья, его центрифугирование с последующей мембранной фильтрацией, причем в качестве сырья используют печень акулы катран, печень после гомогенизации обезжиривают путем холодного отстоя при 1-5°C в течение 20-24 ч, затем обезжиренный гомогенат направляют на термическую и химическую коагуляцию белков при pH 1,0-6,0, отстаивают при комнатной температуре в течение 5-6 ч с получением стабилизированного экстракта, который после центрифугирования и мембранной фильтрации ампулируют и автоклавируют (см. патент РФ №2336884, кл. A61K 35/407, 2008 г.). Препарат «Скваакан» является высокоактивным биоорганическим препаратом из стабилизированного экстракта клеток печени катрана, обладающим многоплановой биологической активностью: антитоксическими, антиметастатическими, иммуностимулирующими свойствами. Имеет длительный срок хранения (три года).The drug "Squaacan" used for treatment is obtained as follows. Initially, the raw materials are homogenized, centrifuged, followed by membrane filtration, and the katran shark liver is used as the raw material, the liver after homogenization is degreased by cold sedimentation at 1-5 ° C for 20-24 hours, then the fat-free homogenate is sent for thermal and chemical coagulation proteins at a pH of 1.0-6.0, stand at room temperature for 5-6 hours to obtain a stabilized extract, which after centrifugation and membrane filtration is amplified and autoclaved (see patent Russian Federation №2336884, cl. A61K 35/407, 2008). Squaacan is a highly active bioorganic preparation from a stabilized extract of catran liver cells with multifaceted biological activity: antitoxic, antimetastatic, immunostimulating properties. It has a long shelf life (three years).
В результате анализа препарата «Скваакан» можно сделать вывод, что ни одна из перечисленных его активностей не является специфичной в отношении эндометриоза, а иммуностимулирующий эффект можно отнести к противопоказаниям, т.к. эндометриоз имеет аутоиммунную компоненту (то есть существует опасность стимулирования заболевания). Кроме того, эффективность препарата «Скваакан» недостаточна для использования его при лечении эндометриоза в качестве самостоятельного лекарственного средства. Так же необходимо отметить, что препарат «Скваакан», полученный вышеописанным способом, содержит в своем составе много биологически активных веществ, количественное соотношение которых не контролируется. Качество сырья, а это печень катрана, будет зависеть от ареала обитания, от сезона вылова рыбы, от ее возраста и состояния. Все эти факторы приводят к нестабильности лекарственных свойств препарата от партии к партии.As a result of the analysis of the Squaacan preparation, it can be concluded that none of its listed activities is specific for endometriosis, and the immunostimulating effect can be attributed to contraindications, because endometriosis has an autoimmune component (that is, there is a danger of stimulating the disease). In addition, the effectiveness of the drug “Squaacan” is insufficient for its use in the treatment of endometriosis as an independent drug. It should also be noted that the Squaacan preparation obtained by the above method contains many biologically active substances, the quantitative ratio of which is not controlled. The quality of the raw material, and this is the Katran liver, will depend on the habitat, on the fishing season, on its age and condition. All these factors lead to instability of the medicinal properties of the drug from batch to batch.
Техническим результатом заявленной группы изобретений является повышение эффективности лечения эндометриоза за счет значительного уменьшения или полного отсутствия рецидивов после курса лечения, отсутствия значимых побочных эффектов, нормализации гормонального статуса.The technical result of the claimed group of inventions is to increase the effectiveness of treatment of endometriosis due to a significant reduction or complete absence of relapse after a course of treatment, the absence of significant side effects, normalization of hormonal status.
Указанный технический результат обеспечивается тем, что фармацевтическая композиция получена из фолликулярной жидкости крупного рогатого скота и содержит соль NaCl, сывороточный альбумин и белок семейства TGF-β, трансформирующий ростовой фактор, имеющий иммуноспецифичность ингибина βА, при следующем соотношении их компонентов, мас.%:The specified technical result is ensured by the fact that the pharmaceutical composition is obtained from the follicular fluid of cattle and contains NaCl salt, serum albumin and a protein of the TGF-β family, transforming growth factor having immunospecificity of βA inhibin, in the following ratio of their components, wt.%:
- белок семейства TGF-β, имеющий иммуноспецифичность ингибина βА: 0,0000015-0,3%;- a protein of the TGF-β family having immunospecificity of βA inhibin: 0.0000015-0.3%;
- сывороточный альбумин: 3-5%;- serum albumin: 3-5%;
- соль NaCl: остальное.- NaCl salt: the rest.
Для реализации способа получения фармацевтической композиции, отбирают фолликулярную жидкость крупного рогатого скота, охлаждают ее и после охлаждения центрифугируют, получая супернатант, смешивают его с охлажденным ацетоном, отстаивают полученную смесь, после чего ее лиофильно высушивают и очищают повторным центрифугированием, получая лиофилизированный продукт, который растворяют в буфере, полученную взвесь центрифугируют при 8000-10000 об/мин в течение 15-30 мин для получения супернатанта, который разделяют ионообменной хроматографией на DEAE-Сефарозе, собирают элюат, выходящий при концентрации NaCl в элюирующем растворе с 0,11 М по 0,19 М, который диализуют против воды не менее 8 часов, после чего в диализате определяют концентрацию белка по методу Брэдфорда, добавляют NaCl из расчета 9 мг соли на 0,3 мг белка, проводят стерилизующую фильтрацию, разливают во флаконы в количестве 0,3 мг белка и 9 мг соли на флакон и лиофильно высушивают.To implement the method of obtaining the pharmaceutical composition, the cattle follicular fluid is taken, cooled, and centrifuged after cooling to obtain the supernatant, mixed with cooled acetone, the mixture obtained is defended, then it is freeze-dried and purified by repeated centrifugation to obtain a lyophilized product, which is dissolved in buffer, the resulting suspension is centrifuged at 8000-10000 rpm for 15-30 minutes to obtain a supernatant, which is separated by ion exchange chromatography and DEAE-Sepharose, collect the eluate, leaving at a concentration of NaCl in an eluting solution from 0.11 M to 0.19 M, which is dialyzed against water for at least 8 hours, after which the protein concentration in the dialysate is determined by the Bradford method, NaCl is added from the calculation 9 mg of salt per 0.3 mg of protein, sterilized filtration is carried out, 0.3 mg of protein is poured into vials and 9 mg of salt per bottle and freeze-dried.
Использование в качестве сырья для получения композиции фолликулярной жидкости, выделенной из фолликулов яичников крупного рогатого скота, является весьма существенным, так как: во-первых - обеспечивает наличие доступного источника, а во-вторых, как показали исследования, использование в виде сырья фолликулярной жидкости других видов животных не позволяет получить продукт с необходимым количеством активных компонентов. Как показали эксперименты, использование для получения фолликулярного белкового препарата, например, фолликулярной жидкости свиней (патент США №5102867) не позволяет осуществить получение композиции заданного белкового состава.The use of follicular fluid isolated from cattle ovarian follicles as a raw material for obtaining a composition is very significant, because: firstly, it provides an accessible source, and secondly, studies have shown that the use of other follicular fluids as raw materials species of animals does not allow to obtain a product with the necessary amount of active components. As experiments have shown, the use to obtain follicular protein preparation, for example, pig follicular fluid (US patent No. 5102867) does not allow to obtain a composition of a given protein composition.
Охлаждение жидкости перед первичным центрифугированием позволяет сохранить белки в нативном состоянии и увеличить их выход.Cooling the liquid before primary centrifugation allows you to keep the proteins in their native state and increase their yield.
Центрифугирование (первичное и повторное) обеспечивает очистку растворимых белков от остатков клеток.Centrifugation (primary and secondary) purifies soluble proteins from cell debris.
Проведение осаждения в охлажденном ацетоне позволяет очистить препарат от небелковых компонентов.Carrying out the deposition in chilled acetone allows you to clean the drug from non-protein components.
Ионообменная хроматография на DEAE-Сефарозе приводит к получению фолликулярного белкового препарата определенного состава, состоящего из белка семейства TGF-β, имеющего иммуноспецифичность ингибина βА и бычьего сывороточного альбумина.Ion exchange chromatography on DEAE-Sepharose results in a follicular protein preparation of a certain composition, consisting of a protein of the TGF-β family, having immunospecificity of βA inhibin and bovine serum albumin.
Термин «ингибин βА» является общеупотребимым. В литературе также встречается его тождественное обозначение - ингибин А.The term "βA inhibin" is commonly used. In the literature, there is also its identical designation - inhibin A.
Лиофилизация фолликулярного белкового препарата, имеющего в своем составе NaCl в качестве стабилизирующего агента, позволяет хранить препарат достаточно длительное время.Lyophilization of the follicular protein preparation, containing NaCl as a stabilizing agent, allows the drug to be stored for a sufficiently long time.
Необходимо отметить, и это подтверждено экспериментально, что заявленный технический результат может быть достигнут только при безусловном выполнении всех действий, отраженных в материалах заявки при строгом соблюдении заявленной их последовательности и режимов, а также количественного соотношения компонентов препарата. Таким образом, признаки, изложенные в формуле изобретения, и последовательность их выполнения являются существенными.It should be noted, and this is confirmed experimentally, that the claimed technical result can be achieved only with the unconditional fulfillment of all the actions reflected in the application materials with strict adherence to their declared sequence and modes, as well as the quantitative ratio of the components of the drug. Thus, the features set forth in the claims, and the sequence of their implementation are essential.
Способ получения фармацевтической композиции осуществляют в несколько этапов.A method of obtaining a pharmaceutical composition is carried out in several stages.
Первоначально отбирают из яичников фолликулярную жидкость крупного рогатого скота. Отобранную жидкость центрифугируют при 8000-10000 g для получения супернатанта. Полученный в результате центрифугирования супернатант сливают в чистую емкость и охлаждают до 4-8°C для увеличения количества осажденного белка. Затем к супернатанту добавляют ацетон (градации ОСЧ), охлажденный до -18°C в соотношении от 1/1 до 2/3 по объему, перемешивают и центрифугируют 15-25 мин при 8000-10000 g (центрифуга Eppendorf 5804) для получения осадка. Супернатант отбрасывают. Осадок переносят в емкость, охлаждают до -18°C и сушат на лиофильной сушке (VirTis benchtop SLC) до его полного высушивания. В результате получают лиофилизированный продукт в виде гранулированного порошка от белого до темно-желтого цвета, плохо растворимого в воде.Initially, follicular cattle fluid is removed from the ovaries. The selected liquid is centrifuged at 8000-10000 g to obtain a supernatant. The supernatant obtained by centrifugation is poured into a clean container and cooled to 4-8 ° C to increase the amount of precipitated protein. Then, acetone (grades of special purity grade) was added to the supernatant, cooled to -18 ° C in a ratio of 1/1 to 2/3 by volume, stirred and centrifuged for 15-25 minutes at 8000-10000 g (Eppendorf 5804 centrifuge) to obtain a precipitate. The supernatant is discarded. The precipitate was transferred to a container, cooled to -18 ° C and dried by freeze drying (VirTis benchtop SLC) until it was completely dried. The result is a lyophilized product in the form of a granular powder from white to dark yellow, poorly soluble in water.
На следующем этапе лиофилизированный продукт растворяют в буфере pH 7,2 при постоянном помешивании в течение 15-30 мин. Полученную взвесь центрифугируют при 8000-10000 об/мин в течение 15-30 мин для получения супернатанта. Полученный супернатант сливают и наносят на колонку с DEAE-Сефарозой. Время набивания колонки 6-8 часов. Уравновешивают колонку буфером 12-24 часа до pH 7-7,2.In the next step, the lyophilized product is dissolved in a pH of 7.2 with constant stirring for 15-30 minutes. The resulting suspension is centrifuged at 8000-10000 rpm for 15-30 minutes to obtain a supernatant. The resulting supernatant is drained and applied to a DEAE-Sepharose column. Column filling time is 6-8 hours. Balance the column with buffer 12-24 hours to pH 7-7.2.
Дальнейшее выделение белкового препарата можно производить двумя путями, получая один и тот же результат:Further isolation of the protein preparation can be done in two ways, getting the same result:
1. Наносят на колонку супернатант, полученный из 3 г лиофилизированной фолликулярной жидкости, и прогоняют 180 мл буфера. С помощью хроматографической системы (BioRad BioLogic LP с УФ-детектором с длиной волны λ=280 нм) подают 112 мл 0,11 М раствора NaCl (приблизительно 2,6 объема колонки). Затем подают 120 мл 0,11-0,19 М раствора NaCl в буфере и одновременно начинают собирать элюат в емкость. После этого подают на колонку 40 мл 2М раствора NaCl для удаления с колонки остатков нанесенных веществ. Собранный элюат замораживают в морозилке (Sanyo MDF-436) при -18°C-35°C, затем лиофильно высушивают.1. Apply the supernatant obtained from 3 g of lyophilized follicular fluid to the column, and run 180 ml of buffer. Using a chromatographic system (BioRad BioLogic LP with a UV detector with a wavelength of λ = 280 nm), 112 ml of a 0.11 M NaCl solution (approximately 2.6 column volumes) is supplied. Then, 120 ml of a 0.11-0.19 M NaCl solution in the buffer are fed and at the same time they begin to collect the eluate in a container. After that, 40 ml of a 2M NaCl solution are fed onto the column to remove residues of the applied substances from the column. The collected eluate is frozen in a freezer (Sanyo MDF-436) at -18 ° C-35 ° C, then freeze-dried.
2. Наносят на колонку супернатант, полученный из 3 г лиофилизированной фолликулярной жидкости, и элюируют градиентом NaCl от 0 до 1 М в буфере pH 7,05-7,20 на хроматографической системе (например, BioRad). Отбирают элюат, смываемый концентрациями соли 0,11-0,19 М NaCl. Контроль по самописцу. Собранный элюат замораживают в морозилке (Sanyo MDF-436) при -18°C-35°C, затем лиофильно высушивают.2. Apply the supernatant obtained from 3 g of lyophilized follicular fluid to the column and elute with a NaCl gradient from 0 to 1 M in a pH 7.05-7.20 buffer on a chromatographic system (for example, BioRad). Select the eluate washed with salt concentrations of 0.11-0.19 M NaCl. Control by the recorder. The collected eluate is frozen in a freezer (Sanyo MDF-436) at -18 ° C-35 ° C, then freeze-dried.
В результате использования процесса 1 или процесса 2 получают один и тот же элюат, поэтому целесообразность использования одного или другого процесса определяется приборной базой и технологическими условиями.As a result of using process 1 or process 2, the same eluate is obtained, therefore, the feasibility of using one or the other process is determined by the instrument base and technological conditions.
В результате описанных манипуляций получают белковый препарат с буфером - легкий, воздушный порошок белого цветаAs a result of the described manipulations, a protein preparation with a buffer is obtained - a light, airy white powder
Для удаления из полученного препарата примесного буфера следующим этапом осуществляют диализ белкового препарата с буфером, для чего:To remove impurity buffer from the resulting preparation, the next step is the dialysis of the protein preparation with the buffer, for which:
- растворяют его в дистиллированной воде;- dissolve it in distilled water;
- проводят диализ через мембрану (ROTH) с объемом исключения 14 кДа против 2 литров дистиллированной воды со сменой дистиллята по схеме:- dialysis through a membrane (ROTH) is carried out with an exception volume of 14 kDa against 2 liters of distilled water with a change in the distillate according to the scheme:
- диализ 3 часа (2 литра дистиллята);- dialysis for 3 hours (2 liters of distillate);
- смена дистиллята;- change of distillate;
- диализ 3 часа (2 литра дистиллята);- dialysis for 3 hours (2 liters of distillate);
- смена дистиллята;- change of distillate;
- диализ 2 часа (2 литра дистиллята).- dialysis for 2 hours (2 liters of distillate).
Процесс осуществляют при температуре 4-8°C.The process is carried out at a temperature of 4-8 ° C.
Получают диализат. Мембрану надрезают и сливают раствор в стеклянный стакан, определяют количество общего белка в растворе, добавляют NaCl из расчета 9 мг соли на 0,3 мг белка, проводят стерилизующую фильтрацию, разливают во флаконы в количестве 0,3 мг белка и 9 мг соли на флакон и лиофильно высушивают.Get dialysate. The membrane is incised and the solution is poured into a glass beaker, the amount of total protein in the solution is determined, NaCl is added at the rate of 9 mg of salt per 0.3 mg of protein, sterilization filtration is carried out, 0.3 mg of protein and 9 mg of salt are poured into vials and freeze-dried.
Количественное содержание указанных в формуле изобретения компонентов контролируют общеизвестным иммунно-ферментным анализом, а активность белкового препарата контролируют стандартным методом определения биологической активности на культуре клеток VERO.The quantitative content of the components indicated in the claims is controlled by well-known enzyme-linked immunosorbent assay, and the activity of the protein preparation is controlled by the standard method for determining the biological activity in a VERO cell culture.
В результате реализации данного способа получают фолликулярный белковый препарат, содержащий NaCl, сывороточный альбумин и белок семейства TGF-β, имеющий иммуноспецифичность ингибина βА, при следующем соотношении их компонентов, мас.%:As a result of the implementation of this method, a follicular protein preparation containing NaCl, serum albumin and a protein of the TGF-β family having immunospecificity of βA inhibin is obtained in the following ratio of their components, wt.%:
- белок семейства TGF-β, имеющий иммуноспецифичность ингибина βА: 0,0000015-0,3%;- a protein of the TGF-β family having immunospecificity of βA inhibin: 0.0000015-0.3%;
- сывороточный альбумин: 3-5%;- serum albumin: 3-5%;
- соль NaCl: остальное.- NaCl salt: the rest.
Процесс получения композиции будет более понятен из приведенного примера. Первоначально отбирают фолликулярную жидкость крупного рогатого скота, для чего яичники в зоне фолликулярных пузырьков протирают 96% спиртом, затем прокалывают одноразовым стерильным шприцем и фолликулярную жидкость отбирают 10 мл в ополоснутую спиртом центрифужную пробирку, емкостью не менее 20 мл. Центрифугируют фолликулярную жидкость 25 мин при 8000 g (центрифуга Eppendorf 5804). Полученный супернатант сливают в чистую емкость и охлаждают до 6°C. Затем к супернатанту добавляют ацетон (градации ОСЧ), охлажденный до -18°C в соотношении 1/1 по объему, перемешивают и центрифугируют 15 мин при 8000 g (центрифуга Eppendorf 5804). Супернатант отбрасывают. Осадок переносят в емкость, охлаждают до -18°C и сушат на лиофильной сушке (VirTis benchtop SLC) до его полного высушивания.The process of obtaining the composition will be more clear from the above example. Initially, the follicular fluid of cattle is taken, for which the ovaries in the area of the follicular vesicles are wiped with 96% alcohol, then they are punctured with a disposable sterile syringe and 10 ml of follicular fluid is taken into a centrifuge tube rinsed with alcohol, with a capacity of at least 20 ml. Follicular fluid is centrifuged for 25 min at 8000 g (Eppendorf 5804 centrifuge). The resulting supernatant is poured into a clean container and cooled to 6 ° C. Then acetone was added to the supernatant (grades of special purity grade), cooled to -18 ° C in a ratio of 1/1 by volume, stirred and centrifuged for 15 min at 8000 g (Eppendorf 5804 centrifuge). The supernatant is discarded. The precipitate was transferred to a container, cooled to -18 ° C and dried by freeze drying (VirTis benchtop SLC) until it was completely dried.
Далее 1,3 г лиофилизированной фолликулярной жидкости растворяют в 40 мл буфера pH 7,2 в стеклянной колбе емкостью 50 мл с помощью ультразвуковой мешалки УЗМ 001 (Польша) при постоянном помешивании в течение 30 мин. Полученную взвесь центрифугируют на центрифуге Eppendorf 5804 при 8000 об/мин в течение 30 мин. Супернатант (прибл. 8 мл) сливают и наносят на колонку (кат. №57407-08-6 DFF100, Sigma, Diethylaminoethyl Sepharose с DEAE-Сефарозой. Колонка: стекло, размеры 1,5*30 см, рабочий объем колонки - 42 мл. Время набивания колонки 6 часов. Время уравновешивания колонки буфером - 12 часов до pH 7,2). Затем наносят на колонку супернатант, полученный из 1,3 г лиофилизированной фолликулярной жидкости, и промывают колонку 180 мл буфера. С помощью хроматографической системы (BioRad BioLogic LP с УФ-детектором с длиной волны λ=280 нм) подают 112 мл 0,11 М раствора NaCl (приблизительно 2,6 объема колонки). Затем подают 120 мл 0,19 М раствора NaCl в буфере и одновременно начинают собирать элюат в емкость (получают 120 мл раствора). После этого подают на колонку 40 мл 2 М раствора NaCl для удаления с колонки остатков нанесенных веществ. Собранный элюат замораживают в морозилке (Sanyo MDF-436) при -35°C, затем лиофильно высушивают (VirTis benchtop SLC).Next, 1.3 g of lyophilized follicular fluid was dissolved in 40 ml of pH 7.2 buffer in a 50 ml glass flask using an ultrasonic stirrer USM 001 (Poland) with constant stirring for 30 minutes. The resulting suspension was centrifuged in an Eppendorf 5804 centrifuge at 8,000 rpm for 30 minutes. The supernatant (approx. 8 ml) is drained and applied to a column (Cat. No. 57407-08-6 DFF100, Sigma, Diethylaminoethyl Sepharose with DEAE-Sepharose. Column: glass, dimensions 1.5 * 30 cm, column working volume - 42 ml Column filling time is 6 hours. Column balancing time with buffer is 12 hours to pH 7.2). The supernatant obtained from 1.3 g of lyophilized follicular fluid is then applied to the column, and the column is washed with 180 ml of buffer. Using a chromatographic system (BioRad BioLogic LP with a UV detector with a wavelength of λ = 280 nm), 112 ml of a 0.11 M NaCl solution (approximately 2.6 column volumes) is supplied. Then, 120 ml of a 0.19 M NaCl solution are fed in the buffer and at the same time they begin to collect the eluate in a container (120 ml of solution is obtained). After that, 40 ml of a 2 M NaCl solution are fed onto the column to remove residues of the applied substances from the column. The collected eluate is frozen in a freezer (Sanyo MDF-436) at -35 ° C, then freeze-dried (VirTis benchtop SLC).
Далее осуществляют диализ полученного лиофилизата, для чего:Next, dialysis of the obtained lyophilisate is carried out, for which:
- растворяют 0,26 г белка в 10 мл дистиллированной воды;- dissolve 0.26 g of protein in 10 ml of distilled water;
- подвергают диализу через мембрану (ROTH) с объемом исключения 14 кДа против 2 литров дистиллированной воды со сменой дистиллята по схеме:- subjected to dialysis through a membrane (ROTH) with an exception volume of 14 kDa against 2 liters of distilled water with a change in the distillate according to the scheme:
- диализ 3 часа (2 литра дистиллята);- dialysis for 3 hours (2 liters of distillate);
- смена дистиллята;- change of distillate;
- диализ 3 часа (2 литра дистиллята);- dialysis for 3 hours (2 liters of distillate);
- смена дистиллята;- change of distillate;
- диализ 2 часа (2 литра дистиллята).- dialysis for 2 hours (2 liters of distillate).
Процесс осуществляют при температуре 6°C.The process is carried out at a temperature of 6 ° C.
Получают диализат в количестве 12 мл. Мембрану надрезают и сливают раствор в стеклянный стакан 50 мл. Определяют концентрацию белка по методу Брэдфорда, добавляют NaCl из расчета 9 мг соли на 0,3 мг белка, проводят стерилизующую фильтрацию, разливают во флаконы в количестве 0,3 мг белка и 9 мг соли на флакон и лиофильно высушивают.Receive dialysate in an amount of 12 ml. The membrane is incised and the solution is poured into a 50 ml glass beaker. The protein concentration is determined according to the Bradford method, NaCl is added at the rate of 9 mg of salt per 0.3 mg of protein, sterilization filtration is carried out, 0.3 mg of protein and 9 mg of salt are poured into vials and lyophilized.
Количественное содержание указанных в формуле изобретения компонентов контролируют иммунно-ферментным анализом, а активность белкового препарата контролируют методом определения биологической активности на культуре клеток VERO.The quantitative content of the components indicated in the claims is monitored by enzyme-linked immunosorbent assay, and the activity of the protein preparation is monitored by determining the biological activity in a VERO cell culture.
В результате получают 8,06 г фолликулярного белкового препарата, содержащего:The result is 8.06 g of follicular protein preparation containing:
- NaCl 7,8 г;- NaCl 7.8 g;
- бычий сывороточный альбумин 0,254813 г;- bovine serum albumin 0.254813 g;
- белок семейства TGF-β, имеющий иммуноспецифичность ингибина βА 0,000013 г;- a protein of the TGF-β family having an immunospecificity of βA inhibin 0.000013 g;
- примеси 0,005174 г, которые не оказывают существенного влияния на достижение указанного технического результата.- impurities of 0.005174 g, which do not significantly affect the achievement of the specified technical result.
Необходимо отметить, что указанный технический результат обеспечивается только в пределах указанных в формуле изобретения значений компонентов фолликулярного белкового препарата.It should be noted that the indicated technical result is provided only within the limits of the follicular protein preparation components indicated in the claims.
При меньших значениях белка семейства TGF-β, имеющего иммуноспецифичность ингибина βА, препарат утрачивает свою активность, при больших значениях возрастает риск возникновения патологических эффектов. Наличие сывороточного альбумина обуславливает стабильность ингибинов в белковом препарате.At lower values of the protein of the TGF-β family, which has the immunospecificity of βA inhibin, the drug loses its activity; at higher values, the risk of pathological effects increases. The presence of serum albumin determines the stability of inhibins in the protein preparation.
Данный препарат был проверен на крысиной модели эндометриоза. Введение внутрибрюшинно препарата в дозе 40 мкг на животное ежедневно по одной дозе в течение 10 дней крысам с хирургически индуцированным эндометриозом привело к уменьшению объема имплантов у крыс в 7,9 раз.This drug was tested on a rat model of endometriosis. Intraperitoneal administration of the drug at a dose of 40 μg per animal daily in a single dose for 10 days in rats with surgically induced endometriosis led to a decrease in implant volume in rats by 7.9 times.
Полученный данным способом и с вышеописанным составом препарат применялся при лечении эндометриоза у женщин.Obtained by this method and with the above composition, the drug was used in the treatment of endometriosis in women.
ПримерыExamples
Лечение проводилось препаратом (дозировкой 0,3 мг) следующего состава:The treatment was carried out with a drug (dosage of 0.3 mg) of the following composition:
- NaCl 9 мг;- NaCl 9 mg;
- бычий сывороточный альбумин 0,299 мг;- bovine serum albumin 0.299 mg;
- белок семейства TGF-β, имеющий иммуноспецифичность ингибина βА 0,000013 мг.- a protein of the TGF-β family having immunospecificity of βA inhibin 0.000013 mg.
Схема терапии:Therapy scheme:
- первый месяц - 10 инъекций по 0,3 мг с пятого дня месячного цикла каждый день;- the first month - 10 injections of 0.3 mg from the fifth day of the monthly cycle every day;
- второй месяц - 10 инъекций по 0,3 мг с пятого дня месячного цикла каждый день;- second month - 10 injections of 0.3 mg from the fifth day of the monthly cycle every day;
- третий месяц - 10 инъекций по 0,3 мг с пятого дня месячного цикла каждый день.- third month - 10 injections of 0.3 mg from the fifth day of the monthly cycle every day.
Пациентка У., 27 л. Клинический диагноз: эндометриоз матки, диффузная форма, поставлен в 2008 г. Жалобы на обильные, болезненные менструации.Patient U., 27 l. Clinical diagnosis: uterine endometriosis, diffuse form, made in 2008. Complaints of heavy, painful menstruation.
До начала лечения клинико-биохимические показатели: анализ мочи, клинический анализ крови, биохимия, коагулограмма, онкомаркеры - в пределах нормы. Гормоны крови: эстрадиол 0,618 нмоль/л, прогестерон 7,6 нмоль/л. УЗИ органов м/таза: эндометриоз матки. Морфологическое заключение: активный аденомиоз.Before treatment, clinical and biochemical parameters: urinalysis, clinical blood analysis, biochemistry, coagulation, tumor markers are within normal limits. Blood hormones: estradiol 0.618 nmol / L, progesterone 7.6 nmol / L. Ultrasound of the organs of the m / pelvis: endometriosis of the uterus. Morphological conclusion: active adenomyosis.
На фоне лечения положительная динамика: болей нет, менструации умеренные. Клинико-биохимические показатели в пределах нормы. В гормональном анализе крови отмечено увеличение уровня эстрадиола до 0,72 нмоль/л, снижение уровня прогестерона до 3,97 нмоль/л. УЗИ органов м/таза: положительная динамика. Морфологическое заключение: эндометриоз не обнаружен (положительная динамика).On the background of treatment, positive dynamics: there are no pains, menstruation is moderate. Clinical and biochemical parameters are within normal limits. In the hormonal analysis of blood, an increase in the level of estradiol to 0.72 nmol / L, a decrease in the level of progesterone to 3.97 nmol / L was noted. Ultrasound of the organs of the m / pelvis: positive dynamics. Morphological conclusion: endometriosis was not detected (positive dynamics).
Пациентка С., 39 л. Клинический диагноз: эндометриоз матки, очаговая форма, поставлен в 2002 г. Жалобы на обильные, болезненные менструации.Patient S., 39 l. Clinical diagnosis: uterine endometriosis, focal form, made in 2002. Complaints of heavy, painful menstruation.
До начала лечения клинико-биохимические показатели: анализ мочи, биохимия, коагулограмма, онкомаркеры - в пределах нормы. Клинический анализ крови: Нв - 110 г/л. Онкомаркеры СА 125 - 47,6 (норма - менее 35 Ед/мл). Гормоны крови: эстрадиол 0,56 нмоль/л, прогестерон 1,8 нмоль/л. УЗИ органов м/таза: эндометриоз матки. Морфологическое заключение: аденомиоз умеренной активности.Before treatment, clinical and biochemical parameters: urinalysis, biochemistry, coagulogram, tumor markers are within normal limits. Clinical blood test: HB - 110 g / l. Oncomarkers CA 125 - 47.6 (normal - less than 35 U / ml). Blood hormones: estradiol 0.56 nmol / L, progesterone 1.8 nmol / L. Ultrasound of the organs of the m / pelvis: endometriosis of the uterus. Morphological conclusion: moderate adenomyosis.
На фоне лечения отмечена положительная динамика: уменьшился болевой и синдром гиперполименореи. Клинико-морфологические показатели в пределах нормы. Клинический анализ крови: Нв - 102 г/л. В гормональном анализе крови отмечено увеличение уровня эстрадиола до 0,8 нмоль/л, снижение уровня прогестерона до 0,2 нмоль/л. УЗИ органов м/таза: положительная динамика. Морфологические исследования: аденомиоз слабой активности (положительная динамика).During treatment, positive dynamics were noted: pain and hyperpolymenorrhea syndrome decreased. Clinical and morphological indicators within normal limits. Clinical blood test: HB - 102 g / l. In a hormonal blood test, an increase in estradiol levels to 0.8 nmol / L, a decrease in progesterone levels to 0.2 nmol / L was noted. Ultrasound of the organs of the m / pelvis: positive dynamics. Morphological studies: adenomyosis of weak activity (positive dynamics).
Пациентка К., 33 г. Клинический диагноз: Эндометриоз матки, диффузная форма, поставлен в 2000 г. Жалобы на обильные менструации. Менструальный цикл нерегулярный.Patient K., 33. Clinical diagnosis: Endometriosis of the uterus, diffuse form, made in 2000. Complaints of heavy menstruation. The menstrual cycle is irregular.
До начала лечения клинико-биохимические показатели: анализ мочи, клинический анализ крови, биохимия, коагулограмма, онкомаркеры - в пределах нормы. Гормоны крови: эстрадиол - 0,538 нмоль/л, прогестерон - 3,7 нмоль/л. УЗИ органов м/таза: эндометриоз матки. Морфологическое заключение: аденомиоз слабой активности.Before treatment, clinical and biochemical parameters: urinalysis, clinical blood analysis, biochemistry, coagulation, tumor markers are within normal limits. Blood hormones: estradiol - 0.538 nmol / L, progesterone - 3.7 nmol / L. Ultrasound of the organs of the m / pelvis: endometriosis of the uterus. Morphological conclusion: adenomyosis of weak activity.
На фоне лечения отмечена положительная динамика: уменьшился синдром гиперполименореи. Клинико-биохимические показатели в пределах нормы. В гормональном анализе крови отмечено снижение эстрадиола до 0,218 нмоль/л, повышение прогестерона до 36,7 нмоль/л. УЗИ органов м/таза - положительная динамика. Морфологическое исследование: аденомиоз не выявлен (положительная динамика).During treatment, a positive trend was noted: hyperpolymenorrhea syndrome decreased. Clinical and biochemical parameters are within normal limits. A hormonal blood test showed a decrease in estradiol to 0.218 nmol / L, an increase in progesterone to 36.7 nmol / L. Ultrasound of the organs of the m / pelvis - positive dynamics. Morphological study: adenomyosis was not detected (positive dynamics).
Побочных эффектов в процессе лечения у пациенток не наблюдалось.Side effects during treatment in patients were not observed.
Применение препарата пациентками, страдающими эндометриозом, привело:The use of the drug by patients suffering from endometriosis led to:
к исчезновению гиперполименореи - в 8% случаев и ее снижении - в 92% случаев;to the disappearance of hyperpolymenorrhea - in 8% of cases and its decrease - in 92% of cases;
к исчезновению альгодисменореи - в 36% случаев и ее снижении - в 64% случаев.to the disappearance of algodismenorea in 36% of cases and its decrease in 64% of cases.
При оценке степени тяжести заболевания - к исчезновению симптомов в 32% случаев и снижению тяжести заболевания - в 68% случаев.When assessing the severity of the disease - to the disappearance of symptoms in 32% of cases and a decrease in the severity of the disease - in 68% of cases.
Исходя из заключений комплексного морфологического (гистологического и иммуноморфологического) исследования положительный эффект терапии выявлен в 80% случаев, а в остальных случаях выявлена тенденция к снижению активности очагов аденомиоза.Based on the conclusions of a comprehensive morphological (histological and immunomorphological) study, a positive effect of therapy was detected in 80% of cases, and in other cases, a tendency to a decrease in the activity of foci of adenomyosis was revealed.
Препарат также может быть использован для лечения некоторых онкологических заболеваний и в ветеринарии.The drug can also be used to treat certain cancers and in veterinary medicine.
Claims (1)
- белок семейства TGF-β, имеющий иммуноспецифичность ингибина βА: 0,0000015-0,3%;
- сывороточный альбумин: 3-5%;
- соль NaCl: остальное. A pharmaceutical composition for the treatment of endometriosis, including serum albumin and a protein of the TGF-β family having immunospecificity of inhibin βA and NaCl salt in the following ratio of their components, wt. %:
- a protein of the TGF-β family having immunospecificity of βA inhibin: 0.0000015-0.3%;
- serum albumin: 3-5%;
- NaCl salt: the rest.
Priority Applications (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2014115437/15A RU2582965C9 (en) | 2014-04-18 | 2014-04-18 | Pharmaceutical composition for treatment of endometriosis and method for preparation thereof |
| EA201500227A EA032297B1 (en) | 2014-04-18 | 2015-02-26 | Pharmaceutical composition for treatment of endometriosis |
| PCT/RU2015/000249 WO2015160284A1 (en) | 2014-04-18 | 2015-04-16 | Pharmaceutical composition for treating endometriosis and method of producing same |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2014115437/15A RU2582965C9 (en) | 2014-04-18 | 2014-04-18 | Pharmaceutical composition for treatment of endometriosis and method for preparation thereof |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2014115437A RU2014115437A (en) | 2015-10-27 |
| RU2582965C2 RU2582965C2 (en) | 2016-04-27 |
| RU2582965C9 true RU2582965C9 (en) | 2016-09-27 |
Family
ID=54324358
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2014115437/15A RU2582965C9 (en) | 2014-04-18 | 2014-04-18 | Pharmaceutical composition for treatment of endometriosis and method for preparation thereof |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| EA (1) | EA032297B1 (en) |
| RU (1) | RU2582965C9 (en) |
| WO (1) | WO2015160284A1 (en) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2660587C1 (en) * | 2017-09-19 | 2018-07-06 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт биологии развития им. Н.К. Кольцова РАН (ИБР РАН) | Protein-peptide complex increasing the viability of follicules in mammal ovarians |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2201241C2 (en) * | 2001-06-06 | 2003-03-27 | Закрытое акционерное общество "СКАЙ ЛТД" | Method of purification of protein of family of growth transforming factors prepared from follicular fluid |
| EA200501217A1 (en) * | 2005-07-27 | 2007-02-27 | Закрытое Акционерное Общество "Скай Лтд." | METHOD OF CLEANING PROTEIN OF FAMILY TRANSFORMING GROWTH FACTORS |
| RU2388819C2 (en) * | 2008-06-25 | 2010-05-10 | Федеральное государственное учреждение науки Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии (ФГУН ГНЦ ПМБ) | Method for production of horseradish peroxidase |
-
2014
- 2014-04-18 RU RU2014115437/15A patent/RU2582965C9/en active
-
2015
- 2015-02-26 EA EA201500227A patent/EA032297B1/en not_active IP Right Cessation
- 2015-04-16 WO PCT/RU2015/000249 patent/WO2015160284A1/en active Application Filing
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2201241C2 (en) * | 2001-06-06 | 2003-03-27 | Закрытое акционерное общество "СКАЙ ЛТД" | Method of purification of protein of family of growth transforming factors prepared from follicular fluid |
| EA200501217A1 (en) * | 2005-07-27 | 2007-02-27 | Закрытое Акционерное Общество "Скай Лтд." | METHOD OF CLEANING PROTEIN OF FAMILY TRANSFORMING GROWTH FACTORS |
| RU2388819C2 (en) * | 2008-06-25 | 2010-05-10 | Федеральное государственное учреждение науки Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии (ФГУН ГНЦ ПМБ) | Method for production of horseradish peroxidase |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| В.В. СОВА, М.И. КУСАЙКИН. Выделение и очистка белков, Методическое пособие по курсу "Химия и биохимия белков и ферментов", Владивосток, 2006, стр.10-11. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2015160284A1 (en) | 2015-10-22 |
| RU2014115437A (en) | 2015-10-27 |
| RU2582965C2 (en) | 2016-04-27 |
| EA201500227A1 (en) | 2015-11-30 |
| EA032297B1 (en) | 2019-05-31 |
| EA201500227A9 (en) | 2016-08-31 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Garcia-Velasco et al. | Elevated soluble Fas ligand levels may suggest a role for apoptosis in women with endometriosis | |
| RU2139085C1 (en) | Agent stimulating reparative processes and method of its use | |
| CN107266551B (en) | MG53 mutant and preparation method and application thereof | |
| CN110724203B (en) | Short peptide for promoting TFEB (T-Epstein-Barr) nuclear translocation, linear short peptide based on short peptide and application of short peptide in relieving cerebral ischemic injury | |
| CN102325789A (en) | Visfatin therapeutic agents for treatment of acne and other conditions | |
| WO2021244010A1 (en) | Use of heat shock factor 2 binding protein in liver ischemia reperfusion injuries and drug-induced liver injuries | |
| BR112020013033A2 (en) | pharmaceutical composition, use of pharmaceutical composition, and method for treating an inflammatory disease. | |
| JP2021533820A (en) | Methods and compositions for promoting cell proliferation and tissue remodeling | |
| Wang et al. | Netrin‐1 regulates ERK1/2 signaling pathway and autophagy activation in wear particle‐induced osteoclastogenesis | |
| Li et al. | Over-expression of TRPC6 via CRISPR based synergistic activation mediator in BMSCs ameliorates brain injury in a rat model of cerebral ischemia/reperfusion | |
| RU2582965C9 (en) | Pharmaceutical composition for treatment of endometriosis and method for preparation thereof | |
| JPH03503530A (en) | Human tumor therapeutic drug and its manufacturing method | |
| US20230021803A1 (en) | Placental tissue particulate compositions and methods of use | |
| WO2016018761A1 (en) | Mesenchymal stem cells expressing biomarkers that predict the effectiveness of the mesenchymal stem cells for treating diseases and disorders | |
| AU2013236975B2 (en) | Peptides for management of lactation | |
| US4888172A (en) | Pharmaceutical for treating tumors and methods for making it | |
| EA039314B1 (en) | Polypeptide pharmaceutically acceptable salts and use thereof | |
| KR20020000143A (en) | Treatment of Trauma | |
| RU2400241C1 (en) | Method of obtaining placental medication | |
| CN110711244B (en) | Application of nerve guidance factor Sema in preparation of liniment for treating osteoarthritis | |
| JP6397122B2 (en) | Use of peptides to treat angiogenesis-related diseases | |
| RU2591819C2 (en) | Method of producing follicular protein preparation and preparation produced by said method | |
| CN112142856B (en) | Specific degradation NDRG2 targeting peptide for improving cerebral stroke excitotoxic injury and application thereof | |
| RU2717674C1 (en) | Therapeutic agent for enhancing tissue oxygenation in diabetic foot, and a method for use thereof | |
| CN117720664A (en) | Artificial peptidomimetic dimer, preparation method thereof and application thereof in preparation of anti-gouty arthritis drugs |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| TH4A | Reissue of patent specification | ||
| TH4A | Reissue of patent specification |