RU2571496C2 - Новый стабилизатор для фармацевтических белков - Google Patents

Новый стабилизатор для фармацевтических белков Download PDF

Info

Publication number
RU2571496C2
RU2571496C2 RU2012149205/15A RU2012149205A RU2571496C2 RU 2571496 C2 RU2571496 C2 RU 2571496C2 RU 2012149205/15 A RU2012149205/15 A RU 2012149205/15A RU 2012149205 A RU2012149205 A RU 2012149205A RU 2571496 C2 RU2571496 C2 RU 2571496C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
stabilization
protein
factor
kda
human blood
Prior art date
Application number
RU2012149205/15A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2012149205A (ru
Inventor
Эльза ИВАРССОН
Йозефин ЭСТЕРБЕРГ
Брита РИППНЕР
Ульрика НИЛЬССОН
Ирене АГЕРКВИСТ
Original Assignee
Октафарма Аг
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Октафарма Аг filed Critical Октафарма Аг
Publication of RU2012149205A publication Critical patent/RU2012149205A/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2571496C2 publication Critical patent/RU2571496C2/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
    • C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/193—Colony stimulating factors [CSF]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/36—Blood coagulation or fibrinolysis factors
    • A61K38/37—Factors VIII
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/46—Hydrolases (3)
    • A61K38/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • A61K38/482—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • A61K38/4846—Factor VII (3.4.21.21); Factor IX (3.4.21.22); Factor Xa (3.4.21.6); Factor XI (3.4.21.27); Factor XII (3.4.21.38)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/19—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • C07K14/53—Colony-stimulating factor [CSF]
    • C07K14/535—Granulocyte CSF; Granulocyte-macrophage CSF
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/745—Blood coagulation or fibrinolysis factors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/745—Blood coagulation or fibrinolysis factors
    • C07K14/755—Factors VIII, e.g. factor VIII C (AHF), factor VIII Ag (VWF)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
    • C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
    • C12N9/6421—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from mammals
    • C12N9/6424—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • C12N9/644—Coagulation factor IXa (3.4.21.22)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
    • C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
    • C12N9/6421—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from mammals
    • C12N9/6424—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • C12N9/647—Blood coagulation factors not provided for in a preceding group or according to more than one of the proceeding groups
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/96—Stabilising an enzyme by forming an adduct or a composition; Forming enzyme conjugates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
    • C12Y304/21—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • C12Y304/21022—Coagulation factor IXa (3.4.21.22)

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)

Abstract

Группа изобретений относится к медицине и касается способа стабилизации белка плазмы крови человека с молекулярной массой более 10 кДа посредством добавления мелицитозы в раствор, содержащий белок плазмы крови человека с молекулярной массой более 10 кДа, который представляет собой фармацевтически или биологически значимый белок плазмы крови человека или рекомбинантно полученный белок плазмы крови человека, выбранный из группы, состоящей из FIX, FVIII или HES-G-CSF. Группа изобретений также касается применения мелицитозы для стабилизации белка плазмы крови человека с молекулярной массой более 10 КДа, где белок представляет собой фактор VIII, фактор IX или HES-G-CSF. Группа изобретений обеспечивает стабилизацию раствора, содержащего фактор VIII, фактор IX или HES-G-CSF. 3 н. и 23 з.п. ф-лы, 6 пр., 11 табл.

Description

Настоящее изобретение относится к способу стабилизации белка крови человека или белка плазмы крови человека с молекулярной массой более 10 кДа, к композиции белка крови человека или белка плазмы крови человека с молекулярной массой более 10 кДа в твердом или жидком состоянии, а также к использованию мелицитозы для стабилизации белка крови человека или белка плазмы крови человека.
В настоящее время стабилизация фармацевтических белков является большой проблемой для специалистов по составлению составов в фармацевтической промышленности. Существует множество типов воздействий, которые вызывают как обратимые, так и необратимые изменения белков, такие как агрегация, осаждение и денатурация. Эти затруднения вызывают потребность в веществах, стабилизирующих эти чувствительные белки. Разработка составов представляет собой критический этап, требующий осторожного выбора эксципиентов для обеспечения высокого выхода активного белка в процессе очистки, а также при технологическом процессе и в качестве конечного продукта. В частности, это касается белков крови человека и белков плазмы крови человека.
Одним из наиболее широко используемых стабилизаторов для белковых составов являются углеводы, также называемые сахаридами. Углеводы построены из связанных между собой основных углеводных компонентов, называемых моносахаридами, и могут быть разной длины и, таким образом, обладать различными характеристиками.
Сахароза и трегалоза - два наиболее часто используемых стабилизатора, представляют собой дисахариды и, следовательно, состоят из двух моносахаридов.
По сравнению с двумя наиболее часто используемыми углеводными стабилизаторами сахарозой и трегалозой, представляющих собой дисахариды, мелицитоза представляет собой трисахарид. В основном, показано [Wang W, Lyophilisation and development of solid protein pharmaceuticals, Int. J. Pharm. 203, 1-60, 2000; Carpenter J.F., Chang B.S., Garzon-Rodriguez W., Randolph T.W., Rational design of stable lyophilized protein formulations: Theory and practice, chapter 5, ed Carpenter and Manning, Kluiwer Academic/Plenum Publishers, New York, 2002], что дисахариды представляет собой наилучший выбор для стабилизации белков в растворе и в лиофилизированном состоянии. Некоторые дисахариды, такие как лактоза или мальтоза, являются восстанавливающими сахарами, которые при хранении в твердом состоянии могут разрушать белки посредством реакции Майяра. По литературным данным, при применении в качестве стабилизаторов в лиофилизированных препаратах более крупных сахаров, эти сахара оказываются менее эффективными вследствие пространственного затруднения взаимодействия белок-стабилизатор [Carpenter J.F., Chang B.S., Garzon-Rodriguez W., Randolph T.W., Rational design of stable lyophilized protein formulations: Theory and practice, chapter 5, ed Carpenter and Manning, Kluiwer Academic/Plenum Publishers, New York, 2002].
В обзоре Wang, W., International Journal of Pharmaceutics, 203 (2000) 1-60, "Lyophilization and development of solid protein pharmaceuticals", среди прочего, описано, что глюкоза, мальтоза и мальтотриоза могли повышать восстановление каталазной активности при 1 мг∙мл-1, однако мальтопентоза, мальтогексоза и мальтогептоза не являлись такими эффективными. Неэффективность более крупных сахаридов позволяет предположить, что стабилизация белков сахарами может зависеть от длины глюкозидной боковой цепи сахара, которая может препятствовать образованию межмолекулярных водородных связей между стабилизирующими сахарами и белками. В этой обзорной статье в качестве стабилизаторов рекомендованы дисахариды (стр.9/10).
В WO-A-2003/086443 описано применение стахиозы, мелицитозы, а также различных моно- и дисахаридов при получении препаратов, вводимых интраназально. Сахара служат в качестве средств, снижающих действие механического раздражения при распылении.
В WO-A-86/04486, среди прочего, описана хроматографическая очистка фактора VIII, где мелицитозу применяют в качестве гидратирующей добавки в процессе хроматографии.
В WO-A-91/18091 описан способ предохранения биологических веществ или органических соединений (a) в сухом состоянии, и/или (b) при повышенных температурах, и/или (c) при облучении, включающий введение в систему, содержащую указанные вещества или соединения сахара или производного сахара, выбранного из (i) невосстанавливающего гликозида полигидроксисоединения, выбранного из сахарных спиртов и других полиспиртов с неразветвленной цепью, или (ii) из невосстанавливающего олигосахарида, выбранного из рафинозы, стахиозы и мелицитозы.
Mollmann, S. H. et al сообщает в Drug Dev. Ind. Pharm. 2006 Jul; (6): 765-78 о стабильности инсулина в твердых лекарственных формах, содержащих мелицитозу и крахмал.
Настоящее изобретение относится к способу стабилизации белка крови человека или белка плазмы крови человека с молекулярной массой более 10 кДа посредством добавления в раствор, содержащий белок крови человека или белок плазмы крови человека с молекулярной массой более 10 кДа, мелицитозы.
Предпочтительно молекулярная масса белка крови человека или белка плазмы крови человека составляет более 10 кДа. Более предпочтительно молекулярная масса белка крови человека или белка плазмы крови человека находится в диапазоне от 10 кДа до 300 кДа. Наиболее предпочтительно молекулярная масса белка крови человека или белка плазмы крови человека находится в диапазоне от 20 кДа до 200 кДа. Предпочтительным может являться, чтобы молекулярная масса белка крови человека или белка плазмы крови человека находилась в диапазоне от 50 кДа до 100 кДа или в диапазоне от 100 кДа до 150 кДа, или в диапазоне от 150 кДа до 200 кДа.
В частности, белок крови человека или белок плазмы крови человека с молекулярной массой более 10 кДа представляет собой фармацевтически или биологически значимый белок. Фармацевтически или биологически значимый белок крови человека или белок плазмы крови человека с молекулярной массой более 10 кДа, который можно стабилизировать по изобретению, может представлять собой рекомбинантно полученный белок крови человека или белок плазмы крови человека.
Термин "белок" включает химически синтезированные белки и синтезированные в природе белки, кодируемые генами культивируемых клеток, а также рекомбинантные белки, секретируемые клетками. Рекомбинантные белки представляют собой белки, кодируемые трансгенами, введенными в клетки способами молекулярной биологии. Белки могут являться модифицированными химическими способами или ферментами в посттрансляционных процессах.
По изобретению "белок" включает белки человека, в частности, белки, продуцируемые клеточными культурами, а также белки из других источников, таких как растения, насекомые и т.д., а также мутантные, искусственные, синтетические, слитые и химерные белки.
Термин "белок крови человека или белок плазмы крови человека с молекулярной массой более 10 кДа", в частности, включает факторы свертывания крови человека, включая фибриноген, мономер фибрина, протромбин, тромбин, факторы FV, FVa, FX, FXa, FIX, FIXa, FVII, FVIIa, FVIII, FXI, FXIa, FXII, FXIIa, FXIII, FXIIIa, фактор фон Виллебранда, ADAMTS13 и т.д., транспортные белки, такие как альбумин, трансферрин, церулоплазмин, гаптоглобин, гемоглобин, гемопексин и т.д., ингибиторы протеаз, такие как β-антитромбин, α-антитромбин, α2-макроглобулин, ингибитор C1, ингибитор тканевого фактора (TFPI), кофактор гепарина II, ингибитор белка C (PAI-3), белок C, белок S, белок Z и т.д., иммуноглобулины, такие как поликлональные антитела (IgG), моноклональные антитела, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, IgA1, IgA2, IgM, IgE, IgD, белок Бенс-Джонса, связанные с клетками белки плазмы крови, такие как тромбоглобулин, фибронектин, тромбоцитарный фактор 4 и т.д., аполипопротеины, такие как apo A-I, apo A-II, apo E, факторы комплемента, такие как фактор В, фактор D, фактор H, фактор I, инактиватор C3b, пропердин, белок, связывающий C4, и т.д., факторы роста, такие как фактор роста тромбоцитов (PDGF), эпидермальный фактор роста (EGF), трансформирующий фактор роста α (TGF-α), трансформирующий фактор роста β (TGF-β), фактор роста фибробластов (FGF), фактор роста гепатоцитов, антиангиогенные белки, такие как латентный антитромбин и прелатентный антитромбин, и т.д., высокогликозилированные белки, включающие кислый гликопротеин альфа-1, антихимотрипсин, интер-альфа-ингибитор трипсина, гликопротеин α-2-HS, C-реактивный белок и другие белки крови человека или белки плазмы крови человека с молекулярной массой более 10 кДа, такие как гликопротеин, богатый гистидином, маннан-связывающий лектин, связывающий C4 белок, фибронектин, GC-глобулин, плазминоген, α-1-микроглобулин, C-реактивный белок, факторы крови, такие как эритропоэтин, интерферон, опухолевые факторы, tPA, gCSF и их производные и мутеины. Особенный интерес представляют фактор IX, фактор VIII, G-CSF, vWF, антитромбин (АТ), фактор роста гепатоцитов (HGF), поликлональные IgG, α1-антитрипсин, фактор H, фактор I, ингибитор C1-эстеразы, фактор VII и их сочетания. Однако такие полипептиды, как инсулин, не охвачены термином "белок крови человека или белок плазмы крови человека с молекулярной массой более 10 кДа" просто потому, что молекулярная масса инсулина составляет приблизительно 5700 Да.
Термины "белок крови человека" и "белок плазмы крови человека" включают производные, особенно молекулы, модифицированные так, что они имеют большее время полужизни. Модификации с увеличением времени полужизни включают, но не ограничиваются перечисленными, слитые белки, белки, модифицированные посредством мутагенеза, и белки, связанные ковалентной или нековалентной связью с получением конъюгата. По изобретению белки крови человека и белки плазмы крови человека могут быть ковалентно связаны с молекулами гидроксиэтилкрахмала (HES), в частности с получением молекул с молекулярной массой от 20 до 200 кДа.
Когда дают указание молекулярной массы, она относится к молекулярной массе соединений (т.е. включая молекулярную массу любых химических соединений, ковалентно связанных с белком).
В частности, настоящее изобретение относится к способу, где раствор приводят в твердое состояние.
Настоящее изобретение относится к открытию нового стабилизатора для фармацевтического белка крови человека или белка плазмы крови человека с молекулярной массой более 10 кДа.
Неожиданно выявлено, что мелицитозу можно использовать в качестве стабилизатора белков крови человека и белков плазмы крови человека с молекулярной массой более 10 кДа, таких как рекомбинантный фактор VIII (170 кДа), фактор IX (55 кДа) и HES-илированный G-CSF (120 кДа). Полагают, что у белков крови человека и белков плазмы крови человека сходной молекулярной массы будут сходные требования к стабилизации. Например, фактор IX представляет собой зависимый от витамина K белок плазмы крови человека и обладает биохимическим сходством со всеми другими зависимыми от витамина K белками плазмы крови человека. Домен Gla является общим структурным элементом строения во всех этих зависимых от витамина K белках и непосредственно после домена Gla каждый из этих белков (за исключением протромбина) содержит один или более EGF-подобных доменов. Зависимым от витамина K белкам для проявления их физиологической функции необходимы ионы Ca2+, и участки связывания кальция включают по меньшей мере домен Gla и EGF-подобные домены. Связывание кальция позволяет этим белкам связываться с фосфолипидами/клеточными мембранами и, таким образом, проявлять все виды своей биологической активности. Известно, что в своем биосинтезе от витамина K зависят семь белков плазмы крови человека. Они представляют собой протромбин (фактор II, 72 кДа), фактор VII/фактор VIIa (50/50 кДа), фактор IX (55 кДа) или фактор IXa, фактор X (59 кДа) или фактор Xa, белок C (62 кДа), белок S (69 кДа) и белок Z (62 кДа).
Неожиданно выявлено, что белки крови человека и белки плазмы крови человека, ковалентно связанные с молекулой гидроксилэтилкрахмала (HES), с молекулярной массой в диапазоне 20-200 кДа подходят для стабилизации мелицитозой.
Мелицитоза продемонстрировала превосходную способность поддерживать активность белка в лиофилизированных составах и в растворе.
В соответствии с изобретением, этап приведения раствора в твердое состояние представляет собой лиофилизацию после добавления мелицитозы. Мелицитозу также можно использовать в комбинации с другими сахарами, такими как трегалоза или сахароза. Мелицитоза, которую также записывают как "мелицитоза", представляет собой невосстанавливающий трисахаридный сахар, продуцируемый посредством ферментативной реакции многими насекомыми, питающимися соком растений, включая тлей, таких как Cinara pilicornis. Название по ИЮПАК представляет собой (2R,3R,4S,5S,6R)-2-[[(2S,3S,4R,5R)-4-гидрокси-2,5-бис(гидроксиметил)-3-[[(2R,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-тригидрокси-6-(гидроксилметил)-2-тетрагидропиранил]окси]-2-тетрагидрофуранил]окси]-6-(гидроксилметил)тетрагидропиран-3,4,5-триол.
Молекулярная масса мелицитозы составляет 504,44 г/моль.
Соответствующая структура представлена формулой:
Figure 00000001
.
Как правило, мелицитоза содержится в количестве приблизительно до 1000 мМ. Нижний предел зависит от количества мелицитозы, приводящего к достаточному стабилизирующему действию на представляющий интерес белок. Специалист, применяющий методологию из примеров и свои общие знания, может легко определить подходящее количество. Допустимый диапазон представляет собой, например, от 10 мМ до приблизительно 200 мМ или приблизительно от 10 мМ до приблизительно 100 мМ в зависимости от конечного состава. Предпочтительно количество составляет более 20 мМ или более 30 мМ.
Предпочтительно, чтобы количество мелицитозы по отношению к количеству белка крови человека или белка плазмы крови человека находилось в диапазоне от 10: 1 до 5000: 1, предпочтительно в диапазоне от 50: 1 до 150:1 или от 1000:1 до 3000:1, рассчитанное в весовом соотношении, т.е. количество мелицитозы является большим, чем количество белка.
В предпочтительном варианте осуществления в одну фармацевтическую дозу белка включено от 10 до 100 мг мелицитозы.
Задачей настоящего изобретения является создание композиции, содержащей белок крови человека или белок плазмы крови человека с молекулярной массой более 10 кДа и мелицитозу. Смесь может находиться в жидком или твердом состоянии.
В одном из вариантов осуществления композиция по изобретению дополнительно содержит наполнитель, поверхностно-активное вещество, буферное средство, дополнительный стабилизатор и/или регулятор тоничности.
Поверхностно-активное вещество по изобретению представляет собой соединение, адсорбируемое на поверхностях и границах раздела фаз и, таким образом, препятствует потере активности белка вследствие адсорбции. Этот тип потери активности может происходить в течение всего процесса обработки фармацевтического средства, а также при манипуляциях с восстановленным продуктом перед введением и при введении пациенту. Широко используемыми поверхностно-активными веществами являются полисорбат 80, полисорбат 20, а также полоксамеры, в частности полоксамер 188. Также в качестве поверхностно-активного вещества можно использовать белки, такие как альбумин, в частности, рекомбинантный альбумин. Также рекомбинантный альбумин можно использовать по варианту осуществления изобретения.
Средством для буферирования pH называют соединение с буферной емкостью в оптимальном для формулируемого белка диапазоне pH. Настоящее изобретение, когда применимо, в качестве средства для буферирования pH включает цитрат натрия, малеиновую кислоту, гистидин, 2-(4-(2-гидроксиэтил)-1-пиперазинил)этансульфоновую кислоту (HEPES), 3-[N-морфолино]пропансульфоновую кислоту (MOPS), 2-(N-морфолино)этансульфоновую кислоту (MES), пиперазин-1,4-бис(2-этансульфоновую) кислоту (PIPES) и Tris (трис(гидроксиметил)аминометан). Буферное средство содержится в таком количестве, чтобы поддерживать pH в диапазоне, в котором белок остается функциональным. Это количество различно для разных белков. Специалист знает о диапазонах, предпочтительных для соответствующего белка, в частности, для белка крови человека или белка плазмы крови человека с молекулярной массой более 10 кДа. В качестве примера, цитрат натрия поддерживает диапазон pH в пределах от 6,5 до 7,5. Подходящей формой цитрата натрия является форма дигидрата. Как правило, смеси по изобретению могут находиться в лиофилизированной форме, но также могут представлять собой растворы, такие как раствор для лиофилизации и раствор, восстановленный из лиофилизированной композиции.
Регулятором тоничности называют соединение, содержащееся в лекарственной форме для выравнивания тоничности. Настоящее изобретение, при необходимости, включает в качестве регуляторов тоничности хлорид натрия, аргинин, глицин, хлорид калия, сахара и сахарные спирты.
Хотя мелицитоза проявляет крио- и лиопротекторные свойства, также может присутствовать дополнительный крио- и лиопротектор (крио/лиопротектор). Оно представляет собой соединение, содержащееся в лекарственной форме для дополнительного снижения или предотвращения потери активности белка на этапах заморозки и высушивания в процессе лиофилизации и при последующем хранении лиофилизированного продукта. Настоящее изобретение, при необходимости, включает в качестве дополнительных крио- /лиопротекторов невосстанавливающие дисахариды, такие как сахароза и трегалоза, а также восстанавливающие дисахариды, такие как лактоза и мальтоза.
Наполнителем называют эксципиент, содержащийся в составе для механического поддержания лиофилизированной массы и для увеличения сухой массы. Наполнитель может находиться в кристаллическом состоянии, как хлорид натрия, или в аморфном состоянии, как аргинин. Количество наполнителя может составлять до 10% веса конечного состава. Настоящее изобретение, при необходимости, включает в качестве наполнителей хлорид натрия, глицин, маннитол, сахарозу и аргинин.
Дополнительной задачей настоящего изобретения является использование мелицитозы для длительной стабилизации белка в высушенном состоянии, как, например, в лиофилизированных составах, в течение по меньшей мере 6 месяцев, конкретно - по меньшей мере 12 месяцев, более конкретно - по меньшей мере 18 месяцев, еще более конкретно - 24 месяца.
Далее изобретение описано в приведенных ниже неограничивающих примерах.
Анализ активности - фактор VIII
Активность фактора VIII измеряли посредством хромогенного анализа или посредством одностадийного анализа, а единицу фактора VIII выражали в международных единицах (МЕ).
Хромогенный анализ представляет собой способ, предусмотренный в Европейской фармакопее. Способ представляет собой двухэтапный фотометрический способ, которым измеряют биологическую активность фактора VIII как кофактора. Фактор VIII активирует фактор X в фактор Xa, который, в свою очередь, ферментативно расщепляется до продукта, который можно определить спектрофотометрически.
Одноэтапный анализ свертывания основан на способности образца, содержащего фактор VIII, корректировать время свертывания плазмы с дефицитом фактора VIII в присутствии фосфолипида, контактного активатора и ионов кальция. Время появления сгустка фибрина измеряют за один этап.
Анализ активности - фактор IX
Биологическую активность фактора VIII измеряли посредством одноэтапного анализа свертывания и/или посредством хромогенного анализа, а единицу фактора IX выражали в международных единицах (МЕ), как определено текущим стандартом ВОЗ для концентрата фактора IX.
Одноэтапный анализ свертывания представляет собой способ, предусмотренный в Европейской фармакопее. Принцип анализа основан на способности образца, содержащего фактор IX, корректировать время свертывания плазмы с дефицитом фактора IX в присутствии фосфолипида, контактного активатора и ионов кальция. Время появления сгустка фибрина измеряют за один этап. Активность фактора IX обратнопропорциональна времени свертывания.
Хромогенный анализ представляет собой двухэтапный фотометрический метод. На первом этапе фактор IX активируется до фактора IXa активированным фактором XI (XIa) в присутствии тромбина, фосфолипидов и кальция. Фактор IXa образует ферментативный комплекс с активированным тромбином фактором VIII (VIIIa), который в присутствии фосфолипидов и кальция активирует фактор X в фактор Xa. На втором этапе фактор Xa гидролизует специфический для фактора Xa хромогенный субстрат, высвобождая, таким образом, хромофорную группу pNA, которую можно определить спектрофотометрически. Активность фактора IX прямопропорциональна количеству образующегося фактора Xa.
Анализ - рекомбинантный HES-илированный G-CSF
Анализ HES-G-CSF посредством ВЭЖХ на Resource S
Образцы разбавляют элюентом A до 1 мг/мл. 20 мкг инъецируют в 1 мл колонку Resource S (GE Healthcare, Munich, Germany).
Элюент A: 20 мМ ацетат Na, pH 4,0
Элюент B: 20 мМ ацетат Na, 0,5 M NaCl, pH 4,0
Скорость потока: 1 мл/мин
Градиент: 0%-8%
8%-52%
52%-100%		 1,8-2,0 мин
2,0-13,0 мин
13,0-13,6 мин
В качестве критерия качества берут ширину пика HES-G-CSF, так как показано, что у агрегированного HES-G-CSF выявляют наибольшую ширину пика. Приращение ширины пика определяют как разницу ширины пика HES-G-CSF до и после теплового стресса или механического напряжения.
ПРИМЕРЫ
Рекомбинантный фактор VIII
Фактор VIII, используемый в экспериментах, представляет собой рекомбинантный белок фактора VIII человека с удаленным доменом B, продуцируемый в линии клеток человека HEK293F способом, описанным в EP-A-1739179 (Schroder et al.). Способ очистки состоял из пяти этапов хроматографии и позволял получать высокочистый белковый препарат фактора VIII (Winge et al, WO-A-2009/156430) с профилем гликозилирования, сходным с профилем гликозилирования человека (Sandberg et al., PCT/EP2009/060829).
Плазматический фактор IX
Материал, используемый в данных экспериментах, происходит из коммерчески доступного продукта нанотив®, представляющего собой высокочистый, обработанный SD и очищенный посредством нанофильтра концентрат фактора IX. Перед использованием в этих экспериментах материал дополнительно очищали на колонке для гель-фильтрации, где для дальнейших экспериментов использовали пик мономера фактора IX.
Рекомбинантный HES-илированный G-CSF
Используемая клеточная линия представляет собой производное клетки эмбриональной почки человека 293 (HEK 293), адаптированной к росту без сыворотки. Этого хозяина, HEK293F, стабильно трансфицировали экспрессирующей кассетой, несущей последовательность кДНК, кодирующую последовательность G-CSF. Для кассеты использовали сильный промотор. Общий способ также описан в EP 1739179 (Schroder et al.).
Способ очистки состоял из четырех этапов хроматографии и позволял получать высокочистый белковый препарата G-CSF. Белок G-CSF связывали с производным гидроксиэтилкрахмала (HES) с молекулярной массой приблизительно 100 кДа. В заключение HES-G-CSF очищали от непрореагировавшего производного HES и G-CSF посредством одного этапа хроматографии с получением молекулы с общей молекулярной массой приблизительно 120 кДа.
Пример 1: Стабилизация rFVIII мелицитозой в растворе.
Получение
Рекомбинантный фактор VIII (rFVIII) получали в соответствии с описанием в экспериментальном разделе, приведенным выше. В эксперименте сравнивали стабилизирующее действие мелицитозы на rFVIII в растворе с действием обычно используемого стабилизатора трегалозы. Концентрация rFVIII составляла 100 МЕ/мл. Композиции составов, исследуемые в этом эксперименте, представлены в таблице 1.
Таблица 1
Композиции составов
  1A 1B
Мелицитоза, мМ - 48
Дигидрат трегалозы, мМ 63 -
NaCl, мг/мл 30 30
Дигидрат хлорида кальция, мг/мл 0,5 0,5
Полоксамер 188, мг/мл 2 2
Гистидин, мг/мл 3 3
Для оценки активности белка в зависимости от времени составы хранили до 7 суток при температуре +25°C. Образцы отбирали с регулярными интервалами и анализировали посредством хромогенного анализа, как описано выше в экспериментальном разделе. Результаты кратко изложены в таблице 2 в виде процента от исходного значения.
Таблица 2
Результаты
  Активность фактора VIII в зависимости от времени (сутки), (% от исходного значения)
0 1 7
1A +25°C 100 86 85
1B +25°C 100 82 86
Выводы из примера 1: Этот эксперимент неожиданно демонстрирует, что мелицитоза, несмотря на ее более низкую молярную концентрацию, обладает стабилизирующим действием на rFVIII в растворе, эквивалентным действию трегалозы.
Пример 2: Стабилизация мелицитозой rFVIII в лиофилизированной форме.
Получение
Рекомбинантный фактор VIII ((rFVIII) получали в соответствии с описанием в экспериментальном разделе, приведенном выше. В этом эксперименте сравнивали стабилизирующее действие мелицитозы на rFVIII с действием обычно используемого стабилизатора трегалозы в процессе лиофилизации и в лиофилизированных составах. Концентрация rFVIII составляла 100 МЕ/мл. Композиции составов, исследуемые в этом эксперименте, представлены в таблице 3.
Таблица 3
Композиции составов
  2A 2B
Трегалоза, мМ 63 -
Мелицитоза, мМ - 48
NaCl, мг/мл 30 30
Дигидрат хлорида кальция, мг/мл 0,5 0,5
Полоксамер 188, мг/мл 2 2
Гистидин, мг/мл 3 3
1,5 мл аликвоты растворов лиофилизировали в лабораторных масштабах в лиофильной сушке. Выход белка на этапе лиофилизации составлял 93% для состава 2B и 86% для состава 2A. Для оценки активности белка в зависимости от времени лиофилизированные образцы хранили до четырех недель при +25°C и +40°C. Образцы восстанавливали в 1,5 мл воды для инъекций и анализировали посредством хромогенного анализа, описанного выше в экспериментальном разделе. Результаты кратко изложены в таблице 4.
Таблица 4
Результаты
  Активность фактора VIII в зависимости от времени (недели), (% от исходного значения)
0 1 2 4
2A +25°C 100 97 89 *
  +40°C 100 98 90 93
2B +25°C 100 117 95 *
  +40°C 100 104 97 99
* без значимого изменения
Выводы из примера 2: Неожиданно этот эксперимент продемонстрировал, что мелицитоза способна защищать rFVIII на этапе лиофилизации в более низких молярных концентрациях, чем трегалоза, и что при хранении она лучше стабилизирует rFVIII, чем трегалоза.
Пример 3: Стабилизация мелицитозой rFVIII в лиофилизированной форме.
Получение
Рекомбинантный фактор VIII (rFVIII) получали в соответствии с описанием в экспериментальном разделе, приведенным выше. В этом эксперименте сравнивали стабилизирующее действие мелицитозы на rFVIII с действием обычно используемого стабилизатора трегалозы в процессе лиофилизации и в лиофилизированных составах. Концентрация rFVIII составляла 100 МЕ/мл. Композиции составов, исследуемые в этом эксперименте, представлены в таблице 5.
Таблица 5
Композиции составов
  3A 3B 3C 3D
Мелицитоза, мМ 48 36 24 -
Стахиоза, мМ - - - 30
NaCl, мг/мл 30 30 30 30
Дигидрат хлорида кальция, мг/мл 0,5 0,5 0,5 0,5
Полоксамер 188, мг/мл 2 2 2 2
Цитрат натрия, мг/мл 2 2 2 2
1,5 мл аликвоты растворов лиофилизировали в лабораторных масштабах в лиофильной сушке. Выход белка на этапе лиофилизации для составов, содержащих мелицитозу, составлял от 91% до 100%, тогда как выход для состава 3D, содержащего в качестве стабилизатора стахиозу, составил 84%. Для оценки активности белка в зависимости от времени лиофилизированные образцы хранили до 12 месяцев при температурах +25°C и +40°C.
Образцы восстанавливали в 1,5 мл воды для инъекций и анализировали посредством хромогенного анализа, описанного выше в экспериментальном разделе. Результаты кратко изложены в таблице 6.
Таблица 6
Результаты
  Активность фактора VIII в зависимости от времени (месяцы), (% от исходного значения)
0 1 2 3 6 12
3A              
  25°C 100 * н.а. * * 91
  40°C 100 96 93 93 н.а. н.а.
3B              
  25°C 100 92 н.а. 96 95 78
  40°C 100 90 79 73 н.а. н.а.
3C              
  25°C 100 91 н.а. 86 86 67
  40°C 100 70 58 48 н.а. н.а.
3D              
  25°C 100 95 н.а. 79 65 н.а.
  40°C 100 74 н.а. 51 н.а. н.а.
н.а. = не анализировали; * без значимого изменения
Выводы из примера 3: Этот эксперимент демонстрирует, что мелицитоза на этапе лиофилизации и в лиофилизированной форме исключительно хорошо функционирует в качестве стабилизатора для rFVIII. Также он демонстрирует, что стахиоза не является предпочтительным стабилизатором для лиофилизированных составов, так как она по сравнению с составами, содержащими мелицитозу, демонстрирует очень неудовлетворительные результаты при хранении при +25°C и при +40°C.
Пример 4: Стабилизация мелицитозой плазматического фактора IX в лиофилизированной форме.
Получение
Плазматический фактор IX (pFIX) получали в соответствии с описанием в экспериментальном разделе, приведенным выше. В этом эксперименте исследуют стабилизирующее действие мелицитозы на pFIX. Концентрация pFIX составляла 100 МЕ/мл. Композиция состава, исследуемого в этом эксперименте, приведена в таблице 7.
Таблица 7
Композиция состава
4A
Мелицитоза, мМ 42
NaCl, мг/мл 30
Полисорбат 80, мг/мл 0,1
Цитрат натрия, мг/мл 2,35
1,5 мл аликвоты растворов лиофилизировали в лабораторных масштабах в лиофильной сушке. Для оценки активности белка в зависимости от времени лиофилизированные образцы хранили до 6 месяцев при +5°C, +25°C и +40°C. Образцы восстанавливали в 1,5 мл воды для инъекций и анализировали посредством хромогенного анализа, описанного выше в экспериментальном разделе.
Результаты
Выход белка на этапе лиофилизации составлял приблизительно 100%. Результаты исследования стабильности приведены в таблице 8.
Таблица 8
Результаты
  Активность фактора IX в зависимости от времени (месяцы), (% от исходного значения)
0 1 3 6
4A 5°C 100 88 87 85
  25°C 100 94 89 86
  40°C 100 93 92 н.а.
н.а. = не анализировали; * без значимого изменения
Выводы из примера 4: Этот эксперимент неожиданно демонстрирует, что мелицитоза хорошо функционирует в качестве стабилизатора фактора IX в лиофилизированной форме.
Пример 5: Стабилизация мелицитозой HES-илированного рекомбинантного G-CSF в лиофилизированной форме.
Получение
Рекомбинантный HES-илированный G-CSF (pHES-G-CSF) получали в соответствии с описанием в экспериментальном разделе, приведенному выше. В эксперименте сравнивали стабилизирующее действие мелицитозы на pHES-G-CSF в лиофилизированной форме с действием обычно используемого стабилизатора трегалозы. Концентрация pHES-G-CSF составляла 0,3 мг/мл, а композиции исследованных составов представлены в таблице 9.
Таблица 9
Композиции составов
  5A 5B
Мелицитоза, мМ 70 -
Трегалоза, мМ - 70
NaCl, мг/мл 30 30
Полисорбат 20, мг/мл 0,2 0,2
Гистидин, мг/мл 3 3
1,5 мл аликвоты растворов лиофилизировали в лабораторных масштабах в лиофильной сушке. Выход белка измеряли через 4 недели хранения при +40°C посредством способа на Resource S, описанного в экспериментальном разделе выше. Результаты кратко изложены в таблице 10.
Таблица 10
Результаты
    Приращение ширины пика (мин)
через 4 недели
5A +40°C 0,04
5B +40°C 0,06
Выводы из примера 5: Этот эксперимент демонстрирует, что мелицитоза обладает стабилизирующим действием на pHES-G-CSF, лучшим, чем действие обычно используемого стабилизатора трегалозы при равных молярных концентрациях.
Пример 6: Стабилизация плазматического фактора IX мелицитозой на этапе лиофилизации.
Получение
Плазматический фактор IX (pFIX) получали в соответствии с описанием в экспериментальном разделе, приведенным выше. В этом эксперименте исследуют стабилизирующее действие мелицитозы на pFIX на этапе лиофилизации по сравнению с тетрасахаридом стахиозой. Концентрация pFIX составляла 100 МЕ/мл. Композиции исследованных в данном эксперименте составов представлены в таблице 11.
Таблица 11
Композиции составов
  6A 6B
Мелицитоза, мМ 42 -
Стахиоза, мМ - 30
NaCl, мг/мл 30 30
Полисорбат 80, мг/мл 0,1 0,1
Цитрат натрия, мг/мл 2,35 2,35
1,5 мл аликвоты растворов лиофилизировали в лабораторных масштабах в лиофильной сушке. Образцы анализировали посредством хромогенного анализа, описанного выше в экспериментальном разделе, перед этапом лиофилизации и после этапа лиофилизации.
Результаты
Выход белка на этапе лиофилизации приблизительно составлял 100% для состава 6A, тогда как соответствующий выход для состава 6B составлял 84%.
Выводы из примера 6: Этот эксперимент демонстрирует, что мелицитоза хорошо функционирует в качестве стабилизатора для фактора IX на этапе лиофилизации. Однако стахиоза не является подходящим кандидатом в стабилизаторы, так как на этапе лиофильной сушки происходит значительная потеря активности.

Claims (26)

1. Способ стабилизации белка плазмы крови человека с молекулярной массой более 10 кДа посредством добавления мелицитозы в раствор, содержащий белок плазмы крови человека с молекулярной массой более 10 кДа, который представляет собой фармацевтически или биологически значимый белок плазмы крови человека или рекомбинантно полученный белок плазмы крови человека, выбранный из группы, состоящей из FIX, FVIII или HES-G-CSF.
2. Способ по п. 1, где раствор приводят в твердое состояние.
3. Способ по п. 2, где раствор приводят в твердое состояние посредством лиофилизации.
4. Способ по п. 1, где мелицитоза содержится в количестве до 1000 мМ.
5. Способ по п. 4, где мелицитоза содержится в количестве приблизительно от 10 мМ до приблизительно 200 мМ.
6. Способ по п. 5, где мелицитоза содержится в количестве от приблизительно 10 мМ до приблизительно 100 мМ.
7. Способ по любому из пп. 1-6, где присутствует по меньшей мере одно поверхностно-активное вещество, такое как рекомбинантный альбумин, полисорбат 80, полисорбат 20 или полоксамеры.
8. Способ по п. 7, где полоксамер представляет собой полоксамер 188.
9. Способ по любому из пп. 1-6, где присутствует по меньшей мере одно буферное средство, такое как гистидин, цитрат натрия, HEPES, Tris, MOPS или PIPES.
10. Способ по любому из пп. 1-6, где дополнительно присутствует по меньшей мере один стабилизатор, такой как сахара, аминокислоты, полиолы, кофакторы или их сочетания, и/или где присутствует по меньшей мере один регулятор тоничности, такой как хлорид натрия, аргинин, глицин, хлорид калия, сахара или сахарные спирты, и/или где присутствует по меньшей мере один наполнитель, такой как глицин, маннит, хлорид натрия, аргинин или сахароза.
11. Композиция для терапевтических целей, содержащая белок плазмы крови человека с молекулярной массой более 10 КДа и мелицитозу, где белок представляет собой фактор VIII, фактор IX или HES-G-CSF.
12. Композиция по п. 7 в жидком или твердом состоянии.
13. Композиция по п. 7 или 8, дополнительно содержащая наполнитель, поверхностно-активное вещество, буферное средство, дополнительный стабилизатор и/или регулятор тоничности.
14. Применение мелицитозы для стабилизации белка плазмы крови человека с молекулярной массой более 10 КДа, где белок представляет собой фактор VIII, фактор IX или HES-G-CSF.
15. Применение по п. 14, где стабилизация представляет собой стабилизацию в ходе процесса.
16. Применение по п. 14, где стабилизация представляет собой стабилизацию в процессе лиофилизации.
17. Применение по п. 14, где стабилизация представляет собой стабилизацию в растворе.
18. Применение по п. 14, где стабилизация представляет собой стабилизацию при очистке.
19. Применение по п. 14, где стабилизация представляет собой стабилизацию при получении в клеточной культуре.
20. Применение по п. 14, где стабилизация представляет собой длительную стабилизацию.
21. Применение по п. 20, где длительная стабилизация увеличивает срок годности.
22. Применение по п. 20, где длительная стабилизация представляет собой стабилизацию в течение по меньшей мере 6 месяцев.
23. Применение по п. 20, где длительная стабилизация представляет собой стабилизацию в течение по меньшей мере 12 месяцев.
24. Применение по п. 20, где длительная стабилизация представляет собой стабилизацию в течение по меньшей мере 18 месяцев.
25. Применение по п. 20, где длительная стабилизация представляет собой стабилизацию в течение 24 месяцев.
26. Применение по п. 20, где длительная стабилизация представляет собой стабилизацию в течение 36 месяцев.
RU2012149205/15A 2010-04-20 2011-04-20 Новый стабилизатор для фармацевтических белков RU2571496C2 (ru)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US32597510P 2010-04-20 2010-04-20
EP10160470 2010-04-20
EP10160470.0 2010-04-20
US61/325,975 2010-04-20
PCT/EP2011/056326 WO2011131720A1 (en) 2010-04-20 2011-04-20 New stabilizing agent for pharmaceutical proteins

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2015148882A Division RU2707090C2 (ru) 2010-04-20 2011-04-20 Новый стабилизатор для фармацевтических белков

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2012149205A RU2012149205A (ru) 2014-05-27
RU2571496C2 true RU2571496C2 (ru) 2015-12-20

Family

ID=42697273

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2012149205/15A RU2571496C2 (ru) 2010-04-20 2011-04-20 Новый стабилизатор для фармацевтических белков
RU2015148882A RU2707090C2 (ru) 2010-04-20 2011-04-20 Новый стабилизатор для фармацевтических белков

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2015148882A RU2707090C2 (ru) 2010-04-20 2011-04-20 Новый стабилизатор для фармацевтических белков

Country Status (15)

Country Link
US (4) US20130116410A1 (ru)
EP (3) EP2561070B1 (ru)
JP (2) JP2013527843A (ru)
KR (2) KR101872203B1 (ru)
CN (1) CN103003422B (ru)
AU (1) AU2011244348B2 (ru)
BR (1) BR112012027055B1 (ru)
CA (2) CA2796729C (ru)
DK (2) DK2561070T3 (ru)
ES (2) ES2639641T3 (ru)
IL (3) IL222358A0 (ru)
MX (1) MX2012012091A (ru)
RU (2) RU2571496C2 (ru)
WO (1) WO2011131720A1 (ru)
ZA (1) ZA201207796B (ru)

Families Citing this family (29)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES2639641T3 (es) 2010-04-20 2017-10-27 Octapharma Ag Nuevo agente estabilizante para proteínas farmacéuticas
US9040675B2 (en) 2012-04-30 2015-05-26 General Electric Company Formulations for nucleic acid stabilization on solid substrates
US9480966B2 (en) * 2012-04-30 2016-11-01 General Electric Company Substrates and methods for collection, stabilization and elution of biomolecules
US9040679B2 (en) 2012-04-30 2015-05-26 General Electric Company Methods and compositions for extraction and storage of nucleic acids
US9044738B2 (en) 2012-04-30 2015-06-02 General Electric Company Methods and compositions for extraction and storage of nucleic acids
WO2014049073A1 (en) * 2012-09-27 2014-04-03 Octapharma Ag Test for hemolytic potential of pharmaceutical products and formulations for risk minimization
KR102125695B1 (ko) * 2012-10-03 2020-06-24 체에스엘 베링 아게 단백질 정제 방법
US9534029B2 (en) 2012-10-03 2017-01-03 Csl Behring Ag Method of purifying proteins
US9212357B2 (en) 2012-12-03 2015-12-15 Omrix Biopharmaceuticals Ltd. Thrombin solution and methods of use thereof
AU2013370928B2 (en) * 2012-12-28 2019-05-02 QIAGEN Australia Holding Pty. Ltd. A cell mediated immune response assay
US9534214B2 (en) * 2013-10-31 2017-01-03 General Electric Company Substrates and associated methods for elution of nucleic acids
KR102058864B1 (ko) * 2013-12-16 2019-12-24 주식회사 티움바이오 인자 vii의 융합 단백질을 포함하는 안정성이 개선된 약학적 조성물
SG11201608021TA (en) * 2014-04-25 2016-11-29 Gen Electric Substrates and methods for collection, stabilization and elution of biomolecules
MX2016017246A (es) * 2014-06-30 2017-04-10 Tate & Lyle Ingredients Americas Llc Composiciones de recubrimiento para articulos consumibles.
ES2814157T3 (es) * 2014-08-20 2021-03-26 Portola Pharm Inc Formulaciones liofilizadas para antídoto del factor Xa
US20170305976A1 (en) * 2014-10-23 2017-10-26 Qiagen Sciences, Llc Peptide composition and uses thereof
CN107249622B (zh) * 2014-12-19 2021-08-03 普罗米蒂克生物治疗有限公司 包含纤溶酶原的药物组合物和其用途
GB2547062B (en) 2015-09-09 2020-03-04 Drawbridge Health Inc Systems, methods, and devices for sample collection, stabilization and preservation
WO2017122114A1 (en) * 2016-01-12 2017-07-20 Intron Biotechnology, Inc. Freeze-dried formulations of antibacterial protein
WO2017147522A1 (en) 2016-02-24 2017-08-31 Portola Pharmaceuticals, Inc. Lyophilized formulations for factor xa antidote
WO2018112780A1 (en) * 2016-12-21 2018-06-28 Chung Chin Sun Novel method for blood plasma protein activity preservation
CN111295094A (zh) 2017-10-09 2020-06-16 泰尔茂比司特生物技术有限公司 冻干容器及使用冻干容器的方法
CA3130700A1 (en) 2019-03-14 2020-09-17 Terumo Bct Biotechnologies, Llc Lyophilization container fill fixture, system and method of use
WO2021032646A1 (en) * 2019-08-16 2021-02-25 Octapharma Ag Stabilizing buffer for factor viii and vwf
CN112798373B (zh) * 2020-12-30 2023-04-25 广州金域医学检验中心有限公司 一种血液本周氏蛋白的检测方法
CN112816595A (zh) * 2021-01-06 2021-05-18 海默斯（重庆）医学生物技术有限公司 一种重组角蛋白液体制剂及其纯度检测方法
WO2022261716A1 (en) * 2021-06-16 2022-12-22 Exopharm Limited Aqueous formulations for preservation of extracellular vesicles
WO2023119277A1 (en) 2021-12-21 2023-06-29 Omrix Biopharmaceuticals Ltd. Highly soluble fibrinogen compositions
WO2024151093A1 (ko) * 2023-01-11 2024-07-18 주식회사 녹십자 혈전성 질환의 예방 또는 치료를 위한 신규한 액상 제형물

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2370281C2 (ru) * 2003-08-08 2009-10-20 Фрезениус Каби Дойчланд Гмбх Конъюгаты гидроксиалкилкрахмала и g-csf

Family Cites Families (24)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4743680A (en) 1985-02-01 1988-05-10 New York University Method for purifying antihemophilic factor
GB9010742D0 (en) * 1990-05-14 1990-07-04 Quadrant Bioresources Ltd Stabilization of biological macromolecular substances
SE9404468D0 (sv) 1994-12-22 1994-12-22 Astra Ab Powder formulations
SE9501189D0 (sv) * 1995-03-31 1995-03-31 Pharmacia Ab Protein formulation
JP2002542183A (ja) * 1999-04-16 2002-12-10 ノボ ノルディスク アクティーゼルスカブ 成形可能な乾燥した医薬製剤
DE60025019T2 (de) 1999-10-29 2006-08-24 Nektar Therapeutics, San Carlos Trockenpulverzusammensetzungen mit verbesserter dispersivität
AU2001287550B2 (en) 2000-09-13 2007-03-22 Novo Nordisk Health Care Ag Human coagulation factor VII variants
WO2003035051A2 (en) * 2001-10-19 2003-05-01 Inhale Therapeutic Systems, Inc. The use of proton sequestering agents in drug formulations
WO2003086443A1 (en) 2002-04-11 2003-10-23 Medimmune Vaccines, Inc. Spray freeze dry of compositions for intranasal administration
KR101085375B1 (ko) * 2003-02-26 2011-11-21 넥타르 테라퓨틱스 중합체-인자 ⅷ 부분 콘쥬게이트
CA2516314C (en) * 2003-03-18 2012-01-03 Ares Trading Sa Liquid growth hormone formulation and process of preparation thereof
CN1946742A (zh) * 2004-03-11 2007-04-11 弗雷泽纽斯卡比德国有限公司 通过还原氨基化制备的羟烷基淀粉和蛋白质的偶联物
PT1748781E (pt) * 2004-05-27 2013-01-22 Baxter Int Processos para o tratamento de distúrbios de hemorragias utilizando polissacarídeos sulfatados
WO2006069388A2 (en) * 2004-12-21 2006-06-29 Nektar Therapeutics Al, Corporation Stabilized polymeric thiol reagents
EP1739179A1 (en) 2005-06-30 2007-01-03 Octapharma AG Serum-free stable transfection and production of recombinant human proteins in human cell lines
US20070092482A1 (en) * 2005-08-04 2007-04-26 Bossard Mary J Conjugates of a G-CSF moiety and a polymer
US20080090278A1 (en) * 2006-03-31 2008-04-17 Toyo Boseki Kabushiki Kaisha Method for enhancing stability of a composition comprising soluble glucose dehydrogenase (gdh)
CA2671676C (en) * 2006-12-27 2014-04-22 Baxter Healthcare Sa Von willebrand factor-and factor viii-polymer conjugates having a releasable linkage
EP2070950A1 (en) * 2007-12-14 2009-06-17 Fresenius Kabi Deutschland GmbH Hydroxyalkyl starch derivatives and process for their preparation
EP2249809A1 (en) * 2008-01-15 2010-11-17 Abbott GmbH & Co. KG Powdered protein compositions and methods of making same
PL2300497T3 (pl) 2008-06-24 2013-02-28 Octapharma Ag Sposób oczyszczania czynnika krzepnięcia VIII
AU2009284113B2 (en) 2008-08-21 2015-05-14 Octapharma Ag Recombinantly produced human factor VIII and IX
JP2012503637A (ja) 2008-09-24 2012-02-09 スタビリテック リミテッド 糖およびポリエチレンイミンを使用するポリペプチドの保存方法
ES2639641T3 (es) 2010-04-20 2017-10-27 Octapharma Ag Nuevo agente estabilizante para proteínas farmacéuticas

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2370281C2 (ru) * 2003-08-08 2009-10-20 Фрезениус Каби Дойчланд Гмбх Конъюгаты гидроксиалкилкрахмала и g-csf

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
MOLLMANN SH., et al., The stability of insulin in solid formulations containing melezitose and starch. Effects of processing and excipients. Drug Dev Ind Pharm. 2006 Jul;32(6):765-78. *

Also Published As

Publication number Publication date
AU2011244348B2 (en) 2015-02-12
DK2947148T3 (en) 2017-09-18
RU2015148882A (ru) 2019-01-15
KR20130065658A (ko) 2013-06-19
US9943600B2 (en) 2018-04-17
CA2796729A1 (en) 2011-10-27
CN103003422A (zh) 2013-03-27
US20160256555A1 (en) 2016-09-08
US20140221290A1 (en) 2014-08-07
JP2013527843A (ja) 2013-07-04
ES2639641T3 (es) 2017-10-27
RU2012149205A (ru) 2014-05-27
JP6457445B2 (ja) 2019-01-23
BR112012027055A2 (pt) 2017-07-11
IL222358A0 (en) 2012-12-31
DK2561070T3 (en) 2015-08-17
IL259921A (en) 2018-07-31
RU2015148882A3 (ru) 2019-06-10
KR101872203B1 (ko) 2018-08-02
IL243264B (en) 2018-06-28
KR102049254B1 (ko) 2019-11-28
EP3269805A1 (en) 2018-01-17
EP2947148B1 (en) 2017-06-07
MX2012012091A (es) 2012-11-29
JP2017014245A (ja) 2017-01-19
CN103003422B (zh) 2015-02-11
EP2947148A1 (en) 2015-11-25
EP2561070B1 (en) 2015-06-03
IL259921B (en) 2020-03-31
RU2707090C2 (ru) 2019-11-22
AU2011244348A1 (en) 2012-11-01
EP2561070A1 (en) 2013-02-27
ES2545893T3 (es) 2015-09-16
KR20180075681A (ko) 2018-07-04
US10098956B2 (en) 2018-10-16
BR112012027055B1 (pt) 2019-09-17
WO2011131720A1 (en) 2011-10-27
ZA201207796B (en) 2013-07-31
BR112012027055A8 (pt) 2018-06-26
US20130116410A1 (en) 2013-05-09
CA3078259A1 (en) 2011-10-27
US20190030169A1 (en) 2019-01-31
CA2796729C (en) 2020-06-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2571496C2 (ru) Новый стабилизатор для фармацевтических белков
KR100491281B1 (ko) 저당함량을가지는안정한알부민무함유재조합인자Vlll의제제
AU743531B2 (en) Activated protein C formulations
US6630137B1 (en) Activated protein C formulations
US5919908A (en) Protein formulation comprising coagulation factor VIII or factor IX in an aqueous solution
SK65994A3 (en) Composition comprising coagulation factor viii formulation, process for its preparation and use of a surfactant as stabilizer
CN104224705A (zh) 稳定化的液体和冻干的adamts13制剂
US20160287709A1 (en) Stabilized factor ix formulations containing trehalose
JP2019043961A (ja) 医薬タンパク質の新規な安定化剤
AU2017203673B2 (en) New stabilizing agent for pharmaceutical proteins
KR20040065277A (ko) 인자 ⅶ 폴리펩티드의 액체 조성물