RU2567544C2 - Bir домен iap связывающие соединения - Google Patents

Bir домен iap связывающие соединения Download PDF

Info

Publication number
RU2567544C2
RU2567544C2 RU2012139033/04A RU2012139033A RU2567544C2 RU 2567544 C2 RU2567544 C2 RU 2567544C2 RU 2012139033/04 A RU2012139033/04 A RU 2012139033/04A RU 2012139033 A RU2012139033 A RU 2012139033A RU 2567544 C2 RU2567544 C2 RU 2567544C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
compound
mmol
added
saturated aqueous
solution
Prior art date
Application number
RU2012139033/04A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2012139033A (ru
Inventor
Ален ЛОРАН
Мелани ПРУЛ
Янник РОЗ
Ирина ДЕНИСОВА
Кенза ДАИРИ
Скотт ДЖАРВИС
Джеймс Б. ДЖАКУИТ
Original Assignee
Фармасайенс Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Фармасайенс Инк. filed Critical Фармасайенс Инк.
Publication of RU2012139033A publication Critical patent/RU2012139033A/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2567544C2 publication Critical patent/RU2567544C2/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/04—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/4353—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A61K31/437—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems the heterocyclic ring system containing a five-membered ring having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. indolizine, beta-carboline
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/06017—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/06026—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 0 or 1 carbon atom, i.e. Gly or Ala
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/06017—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/06034—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 2 to 4 carbon atoms

Abstract

Изобретение относится к соединениям формулы 1, где G представляет собой группу (1)
Figure 00000287
, где R9 представляет собой арил, необязательно замещенный C1-C3алкокси или галогеном; или (2) замещенное или незамещенное азольное или пиррольное кольцо, конденсированное с замещенным или незамещенным арилом, гетероарилом, C5-C6циклоалкилом или гетероциклилом, или к его фармацевтически приемлемым солям, способам его получения и применению при лечении пролиферативных расстройств, таких как рак. 5 н. и 27 з.п. ф-лы, 1 табл., 91 пр.

Description

ПЕРЕКРЕСТНЫЕ ССЫЛКИ НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ
По данной заявке испрашивается приоритет в соответствии с предварительными заявками США 61/303809, поданной 12 февраля 2010, и 61/415638, поданной 19 ноября 2010.
ПРЕДПОСЫЛКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Апоптоз или запрограммированная гибель клеток, как правило, происходит при нормальном развитии и содержании здоровых тканей в многоклеточных организмах. Он является сложным процессом, который приводит к удалению поврежденных, больных или избыточно образовавшихся клеток, в отсутствие симптомов воспаления или некроза.
Внутренние апоптозные пути, как известно, являются неуправляемыми при множестве расстройств, включая рак и лимфопролиферативные расстройства, нейродегенеративные заболевания и аутоиммунные и воспалительные состояния, такие как рассеянный склероз и ревматоидный артрит. Раковые клетки, например, приобретают способность преодолевать или избегать апоптоз и продолжают аномально пролифелировать, несмотря на сильные проапоптозные сигналы, такие как гипоксия, эндогенные цитокины, лучевая терапия и химиотерапия. Аномально резистентные к апоптозу клетки также связаны с аутоиммунным и воспалительным заболеванием. Например, резистентность к апоптозу наблюдали в фибробласто-подобных синовиоцитах в связи с ревматоидным артритом (RA), и в кератиноцитах в связи с псориазом. Аномально резистентные к апоптозу T-клетки также наблюдали при некоторых аутоиммунных или воспалительных заболеваниях, таких как рассеянный склероз, ревматоидный артрит, идиопатическая тромбоцитопеническая пурпура и гнездная алопеция. Патогенные эффекторные клетки могут также демонстрировать резистентность к нормальным апоптозным сигналам. Полагают, что резистентность к нормальному апоптозу вызывается, по крайней мере, частично, повышенной активностью антиапоптозных путей или экспрессией антиапоптозных генов.
Каспазы являются неотъемлемой частью апоптозного пути. Каспазы представляют собой семейство протеолитических ферментов из класса цистеиновых протеаз, которые, как известно, инициируют и осуществляют апоптоз. В нормальных клетках каспазы присутствуют в виде неактивных зимогенов, но каталитически активируются любым из нескольких внешних сигналов. Каспаза-активирующие сигналы включают, например, высвобождение цитокинов или иммунологических агентов, после управляемой лигандом активации рецептора апоптоза, или высвобождение митохондриальных факторов, таких как цитохром C, после генотоксического, хемотоксического или индуцированного облучением повреждения клетки.
Ингибиторы белков апоптоза (IAP) образуют семейство белков, которые ингибируют каспазы, таким образом подавляя апоптоз клеток. Ввиду их центральной роли в регуляции каспазной активности, IAP способны ингибировать программированную гибель клеток в результате действия различных пусковых механизмов. IAP, как полагают, играют роль в потере гомеостатических или эндогенных механизмов контроля клеточного роста, а также в резистентности к химиотерапевтическим препаратам и радиационной терапии.
IAP содержат от одного до трех гомологичных структурных доменов, известных как повторные домены бакуловирусных IAP (BIR). Они также могут содержать домен “цинкового пальца” RING-типа на C-конце с возможностью индукции убихитинилирования IAP-связывающих молекул через его E3 лигазную функцию. Человеческие IAP, известные как XIAP, HIAP1 (также обозначаемые как (cIAP2)) и HIAP2 (cIAP1), каждый, содержат три BIR домена и “цинковый палец” по карбокси-концу. Другой IAP, известный как NAIP, содержит три BIR домена (BIR1, BIR2 и BIR3), но RING домен отсутствует. Еще одни IAP, известные как Livin, TsIAP и MLIAP содержат только один BIR домен и один RING домен.
X хромосомасвязанный ингибитор апоптоза (XIAP) является примером IAP, который может ингибировать каспазу-инициатор, известную как каспаза-9, и эффекторные каспазы, Каспазу-3 и Каспазу-7, путем непосредственного связывания. BIR3 домен XIAP связывается с каспазой-9 и ингибирует ее. Линкер-BIR2 домена XIAP ингибирует активность каспазы-3 и каспазы-7. BIR домены также связывают с взаимодействиями IAP с фактором, ассоциированным с рецептором к фактору некроза опухоли (TRAF)-1 и -2, и с TAB1, в качестве адапторных белков, осуществляющих передачу сигнала выживания через активацию NFkB. XIAP также может индуцировать удаление каспазы через E3 лигазную активность домена “цинкового пальца” RING-типа, который индуцирует убихитинилирование - опосредованный протеасомный распад.
Таким образом, IAP выполняют функции непосредственного тормоза каскада апоптоза, ингибируя активные каспазы и перенаправляя клеточную передачу сигнала в режим провыживания. Соответствено, замедленная сверхэкспрессия одного или нескольких членов семейства белков IAP, позволяет пораженным клеткам, таким как раковые клетки и клетки, вовлеченные в аутоиммунное заболевание, избежать апоптоза. Фактически, сверхэкспрессия IAP продемонстрировала, что она является прогностическим признаком плохого исхода заболевания при множественных злокачественных образованиях. Кроме того, подавление IAP экспрессии посредством антисмысловых РНК или миРНК методов делает опухолевые клетки чувствительными к широкому ряду апоптозных повреждений, включая химиотерапию, лучевую терапию и лиганд-опосредованную активацию рецепторов смерти. В случае XIAP, это было продемонстрировано при злокачественных опухолях, таких различных, как лейкемия и рак яичника. Сверхэкспрессию cIAP1 и cIAP2 также наблюдали при разнообразном множестве злокачественных опухолей, включая медуллобластому, печечноклеточный рак, глиобластому и рак желудка. По этим причинам IAP представляют собой действительные терапевтические мишени, и соединения, которые ингибируют их экспрессию или функцию, как полагают, обладают значимой эффективностью при лечении пролиферативных заболеваний, связанных с неуправляемым апоптозом, включая злокачественную опухоль, аутоиммунные и воспалительные заболевания.
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
В данном документе предложено соединение формулы 1
Figure 00000001
или его соль, где
R1 представляет собой H или алкил;
R2 представляет собой метил или этил;
R3 представляет собой алкил, циклоалкил, гетероциклил, гетероарил или арил, любой из которых может быть необязательно дополнительно замещен амино, алкиламино или алкокси;
R4 и R5, каждый, независимо, представляют собой H или алкил;
R6 представляет собой H, галоген или алкокси;
X представляет собой O, S, CH2, -(CH2)2- или CH-R7, где R7 представляет собой NR8, OR8, NC(O)OR8, NHC(O)R8 или NHSO2R8, где R8 представляет собой алкил, циклоалкил, гетероциклил, арил, арилалкил или гетероарил, любой из которых может быть необязательно дополнительно замещен алкилом или галогеном;
и G представляет собой
(1)
Figure 00000002
, где R9 представляет собой замещенный или незамещенный алкил, циклоалкил, гетероциклил, арил или гетероарил; или
(2) замещенное или незамещенное азольное или пиррольное кольцо, необязательно конденсированное с замещенным или незамещенным арилом, гетероарилом, циклоалкилом или гетероциклилом. Также в данном документе предложены способы получения соединения формулы 1 или его соли, а также соединений, используемых в качестве промежуточных соединений при получении соединения формулы 1 или его соли.
В другом аспекте, изобретение касается фармацевтической композиции, содержащей соединение формулы 1 или его соль и фармацевтически приемлемый носитель, а также способа ее получения, включающего объединение соединения формулы 1 или его соли с фармацевтически приемлемым носителем.
Изобретение далее относится к способу усиления апоптоза в клетке, способу, включающему контактирование клетки с соединением формулы 1 или его солью. Также в настоящем документе предусмотрен способ лечения заболевания или расстройства, характеризуемого недостаточным апоптозом, способ, включающий введение субъекту, нуждающемуся в таком лечении, соединения или фармацевтической композиции, как описано выше, для лечения заболевания или расстройства.
Также в данном документе предложен зонд, содержащий соединение формулы 1 или его соль и детектируемую метку, а также способ с использованием зонда для идентификации соединения, которое связывается с BIR доменом IAP, способ, включающий: (a) контактирование BIR домена IAP с зондом с образованием комплекса зонд:BIR домен, при этом указанный зонд является замещаемым исследуемым соединением; b) измерение сигнала от зонда для установления контрольного уровня; c) инкубацию комплекса зонд:BIR домен с исследуемым соединением; d) измерение сигнала от зонда; и e) сравнение сигнала со стадии d) с контрольным уровнем, при этом модуляция сигнала (например, увеличение или уменьшается сигнала относительно контрольного уровня) является показателем того, что исследуемое соединение связывается с BIR доменом.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
В данном документе предложено соединение формулы 1:
Figure 00000003
или его соль. Изобретение охватывает все соединения, описываемые формулой 1 и их соли, без ограничений. Однако в целях дополнительной иллюстрации здесь обсуждаются предпочтительные аспекты и элементы изобретения.
В соответствии с формулой 1, G может представлять собой группу со структурой
Figure 00000004
,
где R9 представляет собой замещенный или незамещенный алкил, циклоалкил, гетероциклил, арил или гетероарил. Например, R9 может представлять собой фенильную группу, необязательно замещенную галогеном или алкокси.
Альтернативно, G может представлять собой замещенное или незамещенное азольное или пиррольное кольцо, необязательно конденсированное с замещенным или незамещенным арильным, гетероарильным, циклоалкильным или гетероциклическим кольцом. Например, G может представлять собой
Figure 00000005
где X1 представляет собой CH или N, R10 представляет собой H, галоген, гидроксил, алкил, алкокси, арил, амино или NHC(O)-алкил, и R11 представляет собой водород, алкил или NHC(O)CH3. G также может представлять собой
Figure 00000006
где X2 представляет собой NH, NR12, O или S, и каждый R12 независимо представляет собой, алкил, циклоалкил, гетероциклил, NHC(O)CH3 или фенил, необязательно замещенный одним или несколькими алкильной, алкокси или галоген группами.
В соответствии с одним вариантом осуществления изобертения G представляет собой:
Figure 00000007
или замещенный или незамещенный пиррол, конкретные примеры которого включают, без ограничений:
Figure 00000008
;
или замещенный или незамещенный имидазол, конкретные примеры которого включают, без ограничений:
Figure 00000009
или замещенный или незамещенный пиразол, конкретные примеры которого включают, без ограничений:
Figure 00000010
;
или замещенный или незамещенный триазол, конкретные примеры которого включают, без ограничений:
Figure 00000011
;
или замещенный или незамещенный тиазол, конкретные примеры которого включают, без ограничений:
Figure 00000012
или
Figure 00000013
, где R11 представляет собой NHC(O)CH3 или фенил;
или замещенный или незамещенный тетразол, конкретные примеры которого включают, без ограничений:
Figure 00000014
;
или замещенный или незамещенный оксазол, конкретные примеры которого включают, без ограничений:
Figure 00000015
;
или замещенный или незамещенный изоксазол, конкретные примеры которого включают, без ограничений:
Figure 00000016
;
или замещенный или незамещенный оксадиазол, конкретные примеры которого включают, без ограничений:
Figure 00000017
;
или замещенный или незамещенный индол, конкретные примеры которого включают, без ограничений:
Figure 00000018
;
или замещенный или незамещенный имидазо[1,2-a]пиридин, конкретные примеры которого включают, без ограничений:
Figure 00000019
или замещенный или незамещенный имидазо[1,2-a]пиримидин, конкретные примеры которого включают, без ограничений:
Figure 00000020
;
или замещенный или незамещенный индолизин, конкретные примеры которого включают, без ограничений:
Figure 00000021
;
или замещенный или незамещенный тетрагидроиндолизин, конкретные примеры которого включают, без ограничений:
Figure 00000022
;
или замещенный или незамещенный тетрагидроимидазо[1,2-a]пиридин, конкретные примеры которого включают, без ограничений:
Figure 00000023
;
или замещенный или незамещенный 1H-бензо[d]имидазол, конкретные примеры которого включают, без ограничений:
Figure 00000024
;
или замещенный или незамещенный 6,7-дигидро-5H-пирроло[1,2-a]имидазол, конкретные примеры которого включают, без ограничений:
Figure 00000025
;
или замещенный или незамещенный бензо[d]оксазол, конкретные примеры которого включают, без ограничений:
Figure 00000026
;
или замещенный или незамещенный имидазо[1,2-a]пиразин, конкретные примеры которого включают, без ограничений
Figure 00000027
.
R1 может представлять собой любой алкил, такой как C1-C3 алкил (например, метил, этил или пропил, включая изопропил), предпочтительно, метил, и R2 представляет собой метил или этил.
R3 может представлять собой алкил, циклоалкил, гетероциклил, гетероарил или арил, и может быть необязательно дополнительно замещен амино, алкиламино или алкокси. Неограничивающие примеры подходящей R3 группы включают C1-C6 или C1-C4 алкил (например, метил, этил, пропил, изопропил, бутил, изобутил, трет-бутил и так далее), циклогексил, циклопропил и тетрагидро-2H-пиранил. Например, R3 может представлять собой:
Figure 00000028
Figure 00000029
. Желательно, R3 представляет собой трет-бутил, циклогексил, тетрагидропиранил,
Figure 00000030
или
Figure 00000031
.
R4 и R5 независимо представляют собой водород или алкил, такой как C1-C6 алкил. R6 может представлять собой водород, галоген, или алкокси, такой как C1-C6 алкокси. Желательно, R6 представляет собой водород, фтор или C1-C3 алкокси, такой как метокси или этокси.
X может представлять собой O, S, CH2, -(CH2)2- или CH-R7, где R7 представляет собой NR8, OR8, NHC(O)OR8, NHC(O)R8 или NHSO2R8, и R8 представляет собой алкил, циклоалкил, гетероциклил, арил, арилалкил или гетероарил. R8 может быть дополнительно замещен алкилом, алкокси, галогеналкилом или галогеном. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления изобретения, X представляет собой CH2. В других вариантах осуществления изоберетения, X представляет собой CH-NHC(O)R8, и R8 представляет собой алкил, арил, арилалкил, алкокси или гетероарил, любой из которых может быть необязательно дополнительно замещен алкилом, алкокси, галогеналкилом или галогеном. В еще других вариантах осуществления, X представляет собой CH-OR8, и R8 представляет собой арил или арилалкил, который может быть необязательно дополнительно замещен галогеном. Конкретные примеры X включают, без ограничений:
Figure 00000032
или, более конкретно:
Figure 00000033
.
Любая вышеуказанная группа заместителя, как в общем, так и в предпочтительных аспектах, может быть использована в любом сочетании, чтобы обеспечить соединение формулы 1 или его соль. Конкретные примеры соединений формулы 1 или их солей представлены в таблице 1 и примерах.
Всякий раз, когда указан интервал числа атомов в структуре (например, C1-C8, C1-C6, C1-C4 или C1-C3 алкил, галогеналкил, алкиламино, алкенил и так далее), то, в частности, предполагается, что также могут быть использованы любой под-интервал или отдельное число атомов углерода, подпадающие под указанную область интервала. Так, например, указание интервала в 1-8 атомов углерода (например, C1-C8), 1-6 атомов углерода (например, C1-C6), 1-4 атомов углерода (например, C1-C4), 1-3 атомов углерода (например, C1-C3) или 2-8 атомов углерода (например, C2-C8), как здесь используется в отношении любой химической группы (например, алкил, галогеналкил, алкиламино, алкенил и так далее), упоминаемые в настоящем документе, охватывает и конкретно описывает 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 атомов углерода, по мере необходимости, а также его любой под-интервал (например, 1-2 атома углерода, 1-3 атома углерода, 1-4 атомов углерода, 1-5 атомов углерода, 1-6 атомов углерода, 1-7 атомов углерода, 1-8 атомов углерода, 2-3 атома углерода, 2-4 атома углерода, 2-5 атомов углерода, 2-6 атомов углерода, 2-7 атомов углерода, 2-8 атомов углерода, 3-4 атома углерода, 3-5 атомов углерода, 3-6 атомов углерода, 3-7 атомов углерода, 3-8 атомов углерода, 4-5 атомов углерода, 4-6 атомов углерода, 4-7 атомов углерода, 4-8 атомов углерода, 5-6 атомов углерода, 5-7 атомов углерода, 5-8 атомов углерода, 6-7 атомов углерода или 6-8 атомов углерода, по мере необходимости).
Как здесь используется, если не указано иного, термин "замещенный" обозначает группу, замещенную от одной до четырех или более заместителей. Примеры заместителей включают, например, алкил, алкенил, алкинил, циклоалкил, циклоалкенил, ароил, галоген, галогеналкил (например, трифторметил), галогеналкокси (например, трифторметокси), гидрокси, алкокси, алкилтиоэфир, циклоалкилокси, гетероциклоокси, оксо, алканоил, арил, арилалкил, алкиларил, гетероарил, гетероарилалкил, алкилгетероарил, гетероцикло, арилокси, алканоилокси, амино, алкиламино, ариламино, арилалкиламино, циклоалкиламино, гетероциклоамино, моно- и ди-замещенный амино (в котором два заместителя амино группы выбраны из алкила, арила или арилалкила), алканоиламино, ароиламино, аралканоиламино, замещенный алканоиламино, замещенный ариламино, замещенный аралканоиламино, тиол, алкилтио, арилтио, арилалкилтио, циклоалкилтио, гетероциклотио, алкилтионо, арилтионо, арилалкилтионо, алкилсульфонил, арилсульфонил, арилалкилсульфонил, сульфонамидо (например, SO2NH2), замещенный сульфонамидо, нитро, циано, карбокси, карбамил (например, CONH2), замещенный карбамил (например, CONH-алкил, CONH-арил, CONH-арилалкил или случаи, когда два заместителя на атоме азота выбраны из алкила или арилалкила), алкоксикарбонил, арил, замещенный арил, гуанидино, замещенный или незамещенный гетероциклоалкил, замещенный или незамещенный гетероарил (такой как индолил, имидазолил, фурил, тиенил, тиазолил, пирролидил, пиридил, пиримидил и тому подобное).
Как здесь используется, термин “азол” предназначен для включения пятичленного кольца, содержащего атом азота, который содержит, по меньшей мере, один другой составляющий кольцо атом азота, серы или кислород. Неограничивающие примеры азолов включают пиразол, имидазол, триазол, тетразол, пентазол, тиазол, изотиазол, оксазол и изооксазол.
Как здесь используется, термин “пиррол” предназначен для включения пятичленного ароматического гетероциклического кольца, содержащего один атом азота. Термин «пиррол», как здесь используется, также охватывает гидрированные производные, 1-, 2- и 3-пирролин.
Как здесь используется, термин “алкил” предназначен для включения насыщенных алифатических углеводородных групп как с прямой, так и с разветвленной цепью, содержащих установленное число атомов углерода (например, C1-C20 алкил, C1-C8 алкил, C1-C6 алкил и так далее). Например, C1-C6-алкил включает алкильные группы с 1, 2, 3, 4, 5 или 6 атомами углерода линейного или разветвленного строения. Подобным образом, C1-C4 алкил включает алкильные группы, содержащие 1, 2, 3 или 4 атомов углерода линейного или разветвленного строения, и C1-C20 алкил включает алкильные группы, содержащие 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20 атомов углерода линейного или разветвленного строения. Представительные насыщенные алкилы с прямой цепью включают -метил, -этил, -н-пропил, -н-бутил, -н-пентил, -н-гексил, -н-гептил, -н-октил, -н-нонил и -н-децил; тогда как представительные насыщенные алкилы с разветвленной цепью включают -изопропил, -втор-бутил, -изобутил, -трет-бутил, -изопентил, 2-метилбутил, 3-метилбутил, 2-метилпентил, 3-метилпентил, 4-метилпентил, 2-метилгексил, 3-метилгексил, 4-метилгексил, 5-метилгексил, 2,3-диметилбутил, 2,3-диметилпентил, 2,4-диметилпентил, 2,3-диметилгексил, 2,4-диметилгексил, 2,5-диметилгексил, 2,2-диметилпентил, 2,2-диметилгексил, 3,3-диметилпентил, 3,3-диметилгексил, 4,4-диметилгексил, 2-этилпентил, 3-этилпентил, 2-этилгексил, 3-этилгексил, 4-этилгексил, 2-метил-2-этилпентил, 2-метил-3-этилпентил, 2-метил-4-этилпентил, 2-метил-2-этилгексил, 2-метил-3-этилгексил, 2-метил-4-этилгексил, 2,2-диэтилпентил, 3,3-диэтилгексил, 2,2-диэтилгексил, 3,3-диэтилгексил и тому подобное. Алкильная группа может быть незамещенной или замещенной. Для целей описания изобретения, термин “алкил” охватывает “алкилен”, где это подходит.
Как здесь используется, термин, “алкенил” предназначен для обозначения ненасыщенных алифатических углеводородных групп как с прямой, так и с разветвленной цепью, содержащих установленное число атомов углерода, в которых по меньшей мере два атома углерода присоединены друг к другу двойной связью, и обладающих либо E, либо Z пространственной стереохимией или их сочетанием. Например, C2-C6 алкенильная группа включает углеводородные группы, содержащие 2, 3, 4, 5 или 6 атомов углерода линейного или разветвленного строения, по меньшей мере два атома углерода, соединенных вместе двойной связью. Примеры C2-C6 алкенила включают этенил (винил), 1-пропенил, 2-пропенил, 1-бутенил-2-бутенил, -изобутиленил, -1-пентенил, -2-пентенил, -3-метил-1-бутенил, -2-метил-2-бутенил, -2,3-диметил-2-бутенил, -1-гексенил, -2-гексенил, -3-гексенил, -1-гептенил, -2-гептенил, -3-гептенил, -1-октенил, -2-октенил, -3-октенил, -1-ноненил, -2-ноненил, -3-ноненил, -1-деценил, -2-деценил, -3-деценил и тому подобное. Алкенильная группа может быть незамещенной или замещенной. Для целей описания изобретения, термин “алкенил” охватывает “алкенилен”, где это подходит.
Как здесь используется, термин “алкинил” предназначен для обозначения ненасыщенных углеводородных групп с прямой цепью, содержащих установленное число атомов углерода, и в котором по меньшей мере два атома углерода связаны вместе тройной связью. Например, C2-C4, как в C2-C4 алкиниле, определен как включающий группы, содержащие в цепи 2, 3 или 4 атомов углерода, по меньшей мере два из атомов углерода соединены вместе тройной связью. Примеры таких алкинилов включают этинил, 1-пропинил, 2-пропинил, -1-бутинил, -2-бутинил, -1-пентинил, -2-пентинил, -3-метил-1-бутинил, -4-пентинил, -1-гексинил, -2-гексинил, -5-гексинил, -1-гептинил, -2-гептинил, -6-гептинил, -1-октинил, -2-октинил, -7-октинил, -1-нонинил, -2-нонинил, -8-нонинил, -1-децинил, -2-децинил, -9-децинил, и тому подобное. Алкинильная группа может быть незамещенной или замещенной. Для целей описания изобретения, термин “алкинил” охватывает “алкинилен.”
Как здесь используется, термин “циклоалкил” предназначен для обозначения моноциклический насыщенной алифатической углеводородной группы, содержащей установленное число атомов углерода, например, C3-C7, как в C3-C7 циклоалкиле, определен как включающий группы, содержащие 3, 4, 5, 6 или 7 атомов углерода в моноциклическом строении. Примеры C3-C7 циклоалкила, как определено выше, включают, но этим не ограничиваются, циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил и циклогептил. Для целей описания изобретения, термин “циклоалкил” охватывает “циклоалкилен.”
Как здесь используется, термин “циклоалкенил” предназначен для обозначения моноциклической ненасыщенной алифатической углеводородной группы, содержащей установленное число атомов углерода, например, C3-C7, как в C3-C7 циклоалкениле, определен как включающий группы, содержащие 3, 4, 5, 6 или 7 атомов углерода в моноциклическом строении. Примеры C3-C7 циклоалкенила, как определено выше, включают, но этим не ограничиваются, циклопентенил и циклогексенил. Для целей описания изобретения, термин “циклоалкенил” охватывает “циклоалкенилен”.
Как здесь используется, термин “галоген” или “гало” предназначен для обозначения фтора, хлора, брома и йода.
Как здесь используется, термин “галогеналкил” предназначен для обозначения алкила, как определено выше, в котором каждый водородный атом может быть последовательно заменен на атом галогена. Примеры галогеналкилов включают, но этим не ограничиваются, CH2F, CHF2 и CF3.
Как здесь используется, термин "арил", либо отдельно, либо в сочетании с другим радикалом, обозначает карбоциклическую ароматическую моноциклическую группу, содержащую 6 атомов углерода, которая может быть далее конденсирована со второй или третьей 5- или 6-членной карбоциклической группой, которая может быть ароматический, насыщенной или ненасыщенной. Арил включает, но этим не ограничивается, фенил, инданил, 1-нафтил, 2-нафтил, тетрагидронафтил, 1-антраценил, 2-антраценил, 9-антраценил, 1-фенантрил, 2-фенантрил, 3-фенантрил, 4-фенантрил и 5-фенантрил. Арилы могут быть связаны с другой группой, где каждая находится в подходящем положении циклоалкильного кольца или ароматического кольца. Например:
Figure 00000034
.
Линии, изображенные перпендикулярно связям между членами кольца, такие как стрелки выше, указывают на связь, которая может быть присоединена к любым подходящим атомам кольца (например, точка присоединения на любом подходящем члене кольца). Для целей описания изобретения, термин “арил” охватывает “арилен”, где это подходит.
Как здесь используется, термин “гетероарил” предназначен для обозначения моноциклической или бициклической кольцевой системы, где каждая содержит до десяти атомов, и где, по меньшей мере, одно кольцо является ароматическим и содержит от 1 до 4 гетероатомов, выбранных из группы, состоящей из O, N и S. Гетероарильный заместитель может быть присоединен либо через кольцевой атом углерода, либо через один из гетероатомов. Примеры гетероарильной группы включают, но этим не ограничиваются, тиенил, бензимидазолил, бензо[b]тиенил, фурил, бензофуранил, пиранил, изобензофуранил, хроменил, ксантенил, 2H-пирролил, пирролил, имидазолил, пиразолил, пиридил, пиразинил, пиримидинил, пиридазинил, индолизинил, изоиндолил, 3H-индолил, индолил, индазолил, пуринил, 4H-хинолизинил, изохинолил, хинолил, фталазинил, нафтиридинил, хиноксалинил, хиназолинил, циннолинил, птеридинил, изотиазолил, изохроманил, хроманил, изоксазолил, фуразанил, индолинил, изоиндолинил, тиазоло[4,5-b]-пиридин и флуоресцентные производные, такие как:
Figure 00000035
или
Figure 00000036
. Для целей описания изобретения, термин “гетероарил” охватывает “гетероарилен”.
Как здесь используется, термин “гетероциклил” предназначен для обозначения 5, 6 или 7-членной неароматической кольцевой системы, содержащей от 1 до 4 гетероатомов, выбранных из группы, состоящей из O, N и S. Примеры гетероциклов включают, но этим не ограничиваются, пирролидинил, тетрагидрофуранил, пиперидил, пирролинил, пиперазинил, имидазолидинил, морфолинил, имидазолинил, пиразолидинил, пиразолинил и
Figure 00000037
. Для целей описания изобретения, термин “гетероциклил” охватывает “гетероциклилен”.
Как здесь используется, термин “гетеробицикл”, либо самостоятельно, либо в сочетании с другим радикалом, предназначен для обозначения гетероцикла, как определено выше, конденсированного с другой циклической группой, которая представляет собой гетероцикл, арил или любую другую циклическую группу, определенную в данном документе. Примеры таких гетеробициклов включают, но этим не ограничиваются, кумарин, бензо[d][1,3]диоксол, 2,3-дигидробензо[b][1,4]диоксин и 3,4-дигидро-2H-бензо[b][1,4]диоксепин.
Как здесь используется, термин “гетероатом” предназначен для обозначения O, S или N.
В том случае, когда любой из указанных заместителей группы может быть несовместим со способами синтезов, описанных здесь, заместитель может быть защищен подходящей защитной группой (PG), которая является стабильной в условиях реакции, используемых в этих способах. Защитная группа может быть удалена в подходящей точке реакционной последовательности способа получения желаемого промежуточного соединения или целевого соединения. Подходящие защитные группы и способы введения и удаления защитных групп у различных заместителей с использованием таких подходящих защитных групп хорошо известны специалистам в данной области; примеры их могут быть найдены в обзоре T. Greene and P. Wuts, Protecting Groups in Chemical Synthesis (3rd ed.), John Wiley & Sons, NY (1999), который включен в данный документ в качестве ссылки в своем полном объеме. Примеры используемых здесь защитных групп включают, но этим не ограничиваются, Fmoc, Bn, Boc, CBz и COCF3. В некоторых случаях, заместитель может быть специально выбран, чтобы быть реакционно активным в условиях реакции, используемых в способах по данному изобретению. В этих случаях, условия реакции вызывают преобразование выбранного заместителя в другой заместитель, который является либо полезным в промежуточном соединении в способах по данному изобретению, либо является желаемым заместителем в целевом соединении.
Изобретение охватывает любую соль соединения, описанного в данном документе, особенно, фармацевтически приемлемые соли. Фармацевтически приемлемые соли включают соли добавления как кислот, так и оснований. Соли добавления кислот охватывают, например, соли, образованные с неорганическими кислотами, такими как хлористоводородная кислота, бромистоводородная кислота, серная кислота, азотная кислота, фосфорная кислота и тому подобное, или с органичсекими кислотами, такими как уксусная кислота, трифторуксусная кислота, пропионовая кислота, гликолевая кислота, пировиноградная кислота, щавелевая кислота, малеиновая кислота, малоновая кислота, янтарная кислота, фумаровая кислота, винно-каменная кислота, лимонная кислота, бензойная кислота, коричная кислота, миндальная кислота, метансульфоновая кислота, этансульфоновая кислота, п-толуолсульфоновая кислота, салициловая кислота и тому подобное. Соли добавления оснований включают те, которые получены добавлением неорганического основания или органического основания к свободной кислоте. Соли, полученные с неорганическими основаниями, включают, но этим не ограничиваются, соли натрия, калия, лития, аммония, кальция, магния, железа, цинка, меди, марганца, алюминия и тому подобное. Соли, полученные с органическими основаниями, включают, но этим не ограничиваются, соли первичного, вторичного и третичного аминов, замещенных аминов, включая природные замещенные амины, циклические амины и основные ионобменные смолы, такие как изопропиламин, триметиламин, диэтиламин, триэтиламин, трипропиламин, этаноламин, 2-диметиламиноэтанол, 2-диэтиламиноэтанол, дициклогексиламин, лизин, аргинин, гистидин, кофеин, прокаин, гидрабамин, холин, бетаин, этилендиамин, глюкозамин, метилглюкамин, теобромин, пурины, пиперазин, пиперидин, N-этилпиперидин, полиаминовые смолы и тому подобное. Предпочтительно, соль сохраняет желаемую биологическую эффективность и свойства формы свободной кислоты или основания соединения.
Соединение формулы 1 или его соли предпочтительно связываются с BIR доменом IAP. Примеры BIR связывающих белков включают, но этим не ограничиваются, каспазы и митохондриально полученные BIR связывающих белки, такие как Smac, Omi/WTR2A и тому подобное. Примеры IAP включают, но этим не ограничиваются, человеческие или мышиные NAIP (Birc 1), HIAP-1 (cIAP2, Birc 3), HIAP-2 (cIAP1, Birc 2), XIAP (Birc 4), сурвивин (Birc 5), ливин (ML-IAP, Birc 7), ILP-2 (Birc 8) и Apollon/BRUCE (Birc 6) (см., например, патенты США номер 6107041; 6133437; 6156535; 6541457; 6656704; 6689562; Deveraux и Reed, Genes Dev. 13, 239-252, 1999; Kasof and Gomes, J. Biol. Chem., 276, 3238-3246, 2001; Vucic et al., Curr. Biol. 10, 1359-1366, 2000; Ashab et al. FEBS Lett., 495, 56-60, 2001, содержание которых включено здесь в качестве ссылки). BIR домены IAP документально подтверждены в релевантной литературе, обычно характеризуются числом постоянного аминокислотного остатка, включая консервативные цистеины и один консервативный гистидиновый остаток в определенной последовательности. BIR домен остатков для некоторых человеческих IAP включает, например, остатки 21-93 (BIR1), 159-230 (BIR2) и 258-330 (BIR3) у XIAP (ссылка Swiss-Prot P98170), остатки 41-113 (BIR1), 179-250 (BIR2) и 264-336 (BIR3) у HIAP-1 (ссылка XP-006266), и остатки 24-96 (BIR1), 164-235 (BIR2) и 250-322 (BIR3) у HIAP-2 (ссылка XP-006267) (см., Verhagen et al., Genome Biology, 2(7): обзоры 3009.1-3009.10 (2001)).
Желательно, соединение формулы 1 или его соли связываются с BIR доменом на XIAP, более предпочтительно, человеческим XIAP. BIR доменное связывание может быть определено любым подходящим методом. Например, BIR доменное связывание может быть определено на основе способности исследуемого соединения конкурировать со связыванием известного BIR-домен связывающего белка (например, ингибируя или не допуская связывание известного BIR-доменного связывающего белка с получением BIR домена). Встречающиеся в природе и синтетические BIR доменные связывающие протеины известны в данной области. В некоторых вариантах осуществления, соединение формулы 1 или его соли связываются с одним или несколькими IAP (такими как NAIP, HIAP-1, HIAP-2, XIAP, сурвивин, ливин, ILP-2 или Apollon/BRUCE) с Ki или менее чем или около 500 мкМ, 250 мкМ, 100 мкМ, 50 мкМ, 25 мкМ, 10 мкМ, 1 мкМ, 500 нМ, 250 нМ, 100 нМ или 50 нМ (где меньшая величина Ki представляет большую связывающую аффинность). В некоторых вариантах осуществления, соединение формулы 1 или его соли связываются с одним или несколькими IAP со значением Ki в области между от около 500 мкМ до около 50 нМ, таким как от около 250 мкМ до около 50 нМ, от около 100 мкМ до около 1 мкМ или от около 1 мкМ до около 50 нМ. В некоторых вариантах осуществления, соединение формулы 1 или его соли связываются как с XIAP, так и с HIAP2 со значением Ki в одном из вышеуказанных интервале значений.
Соединения, описанные здесь, могут содержать один или несколько асимметрических центров, хиральные оси и хиральные плоскости. Указанные соединения могут, таким образом, иметь энантиомеры, диастереомеры и другие стереоизомерные формы и могут быть определены в терминах абсолютной стереохимии, таких как (R)- или (S)- или, как (D)- или (L)- для аминокислот, и/или оптической активности, такой как (+) и (-). Настоящее изобретение предназначено для включения любого и всех таких возможных стереоизомеров, будь то чистая или по существу чистая форма (например, оптически чистая форма) или в виде смеси изомеров в любом соотношении, включая рацемические смеси. Оптически активные (+) и (-), (R)- и (S)- или (D)- и (L)-изомеры могут быть получены путем хирального (асимметрического) синтеза с использованием оптически активных реагентов, субстратов, катализаторов или растворителей (хиральные синтоны или хиральные реагенты), или путем преобразования одного энантиомера в другой путем асимметрического преобразования. Альтернативно, изомеры могут быть разделены из смесей изомерных форм (например, рацемические смеси) с использованием общеизвестных методов, включая, без ограничений, обращенно фазовую ВЭЖХ, образование диастереизомерных солей, которые могут быть разделены с помощью кристаллизации, газо-жидкостной или жидкостной хроматографии, селективным взаимодействием одного стереоизомера с энантиомер-избирательным реагентом. Когда желаемый энантиомер преобразуют в другой химический объект с помощью разделительной методики, может потребоваться дополнительная стадия для образования желаемой энантиомерной формы.
Некоторые соединения по настоящему изобретению также могут существовать при некоторых условиях в анионной, катионной или цвиттер-ионной формах. Соединения формулы 1 и других формул, описанные здесь, в частности, охватывают такие альтернативные формы.
В соответствии с предпочтительным вариантом осуществления изобретения, соединение формулы 1 или его соли обеспечивают пероральную биодоступность при введении млекопитающему, в частности, человеку. Желательно, соединение формулы 1 или его соли проявляют пероральную биодоступность около 10% или более, около 15% или более, или около 20% или более. Более предпочтительно, соединение формулы 1 или его соли, проявляют пероральную биодоступность около 25% или более, около 30% или более, около 50% или более, или даже около 75% или более (например, около 80% или более, около 90% или более, или около 95% или более). В некоторых вариантах осуществления, соединение формулы 1 или его соли проявляют пероральную биодоступность в интервале от около 25% до около 50%, от около 50% до около 75% или от около 75% до около 100%.
Способы синтеза
Соединения по изобретению, описанные здесь, могут быть получены любым из множества способов. В соответствии с одним аспектом изобретения, соединения могут быть получены в соответствии с любым из способов A-C, проиллюстрированных на схемах 1-4.
Способ A относится к способу получения соединения формулы 1 или его соли, а также к способам получения связанных с ним промежуточных соединений, включающим одну или несколько следующих стадий: (1) объединение производного пролиналя (1-i) с амином, имеющим формулу
Figure 00000038
, последующее восстановление с помощью гидрида с получением промежуточного соединения 1-ii, где PG1 представляет собой защитную группу; (2) защиту аминогруппы промежуточного соединения 1-ii защитной группой (PG2), которая отличается от PG1, удаление защитной группы у PG1 с получением промежуточного соединения 1-iii; (3) конденсацию промежуточного соединения 1-iii с PG3(H)N(R3)CHCO2H с использованием аминокислотных конденсирующих агентов, где PG3 представляет собой защитную группу, которая отличается от PG2, удаление защитной группы у PG3 с получением промежуточного соединения 1-iv; (4) конденсацию промежуточного соединения 1-iv с PG4(R1)N(R2)CHCO2H с использованием аминокислотных конденсирующих агентов, где PG4 представляет собой защитную группу, которая отличается от PG2, с получением промежуточного соединения 1-v; (5) удаление защитных групп у PG2 промежуточного соединения 1-v с получением промежуточного соединения 1-vi; и (6) ацилирование промежуточного соединения 1-vi путем объединения промежуточного соединения 1-vi с соединением формулы LG-C(O)-G, где “LG” представляет собой удаляемую группу, удаление защитной группы у PG4 с получением соединения формулы 1 или его соли. Способ A проиллюстрирован на схеме 1, ниже. Каждое промежуточное соединение по способу A, а также каждая отдельная стадия способа получения промежуточного соединения, рассматриваются как дополнительный аспект изобретения. Таким образом, в данном документе предложено соединение любой из формул от 1-i до 1-v схемы 1, включая их соли. Также в данном документе предложен способ получения соединения формулы 1 или его соли, или промежуточное соединение любой из формул от 1-i до 1-vi схемы 1, включая их соли, состоящий из одной или нескольких стадий (1)-(6) способа A, описанного выше.
СХЕМА 1
Figure 00000039
Способ B относится к альтернативному способу получения соединения формулы 1 или его соли, а также к способам получения связанных с ним промежуточных соединений, и состоит из одной или нескольких стадий: (1) конденсации производного пролинола (промежуточное соединение 2-i) с соединением формулы PG3(H)N(R3)CHCO2H с использованием аминокислотных конденсирующих агентов, где PG3 представляет собой защитную группу, удаление защитной группы у PG3 с получением промежуточного соединения 2-ii; (2) конденсацию промежуточного соединения 2-ii с соединением формулы PG4(R1)N(R2)CHCO2H с получением промежуточного соединения 2-iii, где PG4 представляет собой защитную группу; (3) окисление промежуточного соединения 2-iii с получением соответствующего альдегида, промежуточного соединения 2-iv; (4) восстановительное аминирование соединения 2-iv, например, путем объединения соединения 2-iv с амином и последующим восстановлением с подходящим гидридом, с получением промежуточного соединения 1-vi; (5) ацилирование соединения 1-vi путем объединения соединения 1-vi с соединением формулы LG-C(O)-G, где LG представляет собой удаляемую группу, удаление защитной группы у PG4, с получением соединения формулы 1 или его соли. Способ B проиллюстрирован на схеме 2, ниже. Каждое промежуточное соединение по способу B, а также каждая отдельная стадия способа получения промежуточного соединения, рассматриваются как дополнительный аспект изобретения. Таким образом, в данном документе предложено соединение любой из формул от 2-i до 2-iv или формулы 1-vi схемы 2, включая их соли. Также в данном документе предложен способ получения соединения формулы 1 или его соли, или промежуточного соединения любой из формул от 2-i до 2-iv или формулы 1-vi схемы 2, включая их соли, состоящий из одной или нескольких стадий (1)-(5) способа B, описанного выше.
СХЕМА 2
Figure 00000040
Способ C относится к другому альтернативному способу получения соединения формулы 1 или его соли, а также к способам получения связанных с ним промежуточных соединений, и состоит из одной или нескольких стадий: (1) ацилирования промежуточного соединения 1-ii (получен как описано в способе A, или другими способами) путем объединения промежуточного соединения 1-ii с соединением формулы LG-C(O)-G, где PG1 представляет собой защитную группу, с последующим удалением защитной группы у PG1 с получением промежуточного соединения 4-i; (2) конденсации соединение 4-i с соединением, имеющим формулу PG3(H)N(R3)CHCO2H, с использованием аминокислотных конденсирующих агентов, где PG3 представляет собой защитную группу, с последующим удалением защитной группы у PG3 с получением промежуточного соединения 4-ii; (3) конденсацию промежуточного соединения 4-ii с соединением, имеющим формулу PG4(R1)N(R2)CHCO2H с использованием аминокислотных конденсирующих агентов с получением промежуточного соединения 1-vi, где PG4 представляет собой защитную группу, с последующим удалением защитной группы у PG4 с получением соединения формулы 1 или его соли. Способ C проиллюстрирован на схеме 3, ниже. Каждое промежуточное соединение по способу C, а также каждая отдельная стадия способа получения промежуточного соединения, рассматриваются как дополнительный аспект изобретения. Таким образом, в данном документе предложено соединение формулы 4-i или 4-ii схемы 3, включая их соли. Также в данном документе предложен способ получения соединения формулы 1 или его соли, или промежуточное соединение формулы 4-i или 4-ii схемы 3, включая их соли, состоящий из одной или нескольких стадий от (1) до (3) способа C, описанного выше.
СХЕМА 3
Figure 00000041
Полезность
Соединения по настоящему изобретению могут быть использованы для любой цели. Однако предполагается, что соединения формулы 1 и их соли, заявленные здесь, являются особенно полезными в качестве BIR доменных IAP связывающих соединений. Как таковые соединения формулы 1 и их соли, описанные здесь, могут быть использованы для усиления апоптоза в клетке или у субъекта, конкретно в клетках, которые проявляют аномально низкие уровни апоптоза или у субъектов, страдающих или имеющих предрасположенность к заболеванию или состоянию, связанному с недостаточным апоптозом. Недостаточный апоптоз означает уровень или степень апоптоза, которые являются аномальными в данных условиях, или, в ином случае, приводят или вызывают патологическое состояние. Таким образом, недостаточный апоптоз охватывает, например, состояние, когда заболевание вызвано или сохраняется, потому что клетки, вредные для субъекта, не обладают апоптозом. Состояния или заболевания, связанные с недостаточным апоптозом, охватывают клеточно-пролиферативные заболевания и расстройства, включая, без ограничений, рак, аутоиммунные заболевания, воспалительные расстройства и клеточную пролиферацию, вызванные медицинскими процедурами, включая, но этим не ограничиваясь, хирургию, пластическую операцию на сосудах и тому подобное.
Таким образом, в данном документе предложен способ повышения или индуцирования апоптоза в клетке, включающий введение соединение формулы 1 или его соли в клетку. Соединения формулы 1 или его соли могут быть введены в клетку любым подходящим способом, например, контактированием клетки с соединением формулы 1 или его солью или композицией, содержащей соединение формулы 1 или его соль. Целевые клетки могут включать клетки любого типа, которые проявляют недостаточный апоптоз, другими словами, характеризуются устойчивостью к апоптозу, или которые оказывают патологическое действие, которое может быть отменено с помощью апоптоза, включая, но не ограничиваясь, раковые и воспалительные клетки. Раковые клетки могут быть любого злокачественного вида, включая, но этим не ограничиваясь, овариальные, колоректальные, гематологические раковые клетки, раковые клетки грудной железы, легкого или поджелудочной железы. Воспалительные клетки могут быть любого типа, включая, но этим не ограничиваясь, B-клетки, T-клетки, макрофаг, дендритные клетки и гранулоциты. Дополнительные примеры целевых клеток включают эктопические клетки эндометрия и псориатические кератиноциты.
Апоптоз клетки или популяции клеток усиливается, если уровень апоптоза увеличивается на любую степень в присутствии соединения формулы 1 или его соли по сравнению с уровнем апоптоза, проявляемым в отсутствие соединения формулы 1 или его соли. Повышение апоптоза, таким образом, охватывает стимуляцию апоптоза в клетке, что, в противном случае, не было бы апоптозом, а также увеличение скорости, с которой клетка подвергается апоптозу, увеличение числа апоптозирующих клеток в клеточной популяции, или увеличивая чувствительность клетки к апоптозным стимулам. Когда измерения проводят в популяции клеток, предпочтительно, число клеток, подвергающихся апоптозу, увеличивается, по меньшей мере, до около 25%, более предпочтительно, по меньшей мере, до около 50%, по меньшей мере, до около 75%, или, по меньшей мере, до около 100% (например, по меньшей мере 1-кратное или 2-кратное увеличение). Для выявления повышения апоптоза может быть использован любой метод для измерения и сравнения уровня апоптоза в клетках. Такие методы могут базироваться, например, на изменениях в клеточной пролиферации, увеличении проницаемости клеточных мембран, снижении метаболической активности митохондрий, фрагментации ДНК (многоступенчатый анализ ДНК) или конденсации хроматина, изменениях в асимметрии мембран (например, перемещение фосфатоилсерина от цитоплазматического до экстрацеллюлярного участка мембраны), активации каспазы апоптоза, высвобождение цитохрома C или ингибиторующего апоптоза фактора (AIF) в цитоплазму с помощью митохондрия, или любой другой основой, известной как показатель апоптоза.
Соединения формулы 1 и их соли также могут быть использованы для изменения высвобождения воспалительных цитокинов из клеток имунной системы, уменьшая таким образом воспалительный потенциал клетки. Воспалительные цитокины включают про-воспалительные цитокины и анти-воспалительные цитокины. Высвобождение цитокинов изменяется, если количество или скорость высвобождения любого одного или нескольких цитокинов увеличивается или уменьшается в любой степени в присутствии соединения формулы 1 или его соли по сравнению с количеством или скоростью высвобождения тех же одного или нескольких цитокинов в отсутствие соединения формулы 1 или его соли. Желательно, количество или скорость высвобождения любого одного или нескольких цитокинов изменяется (уменьшается или увеличивается), по меньшей мере, на около 25%, более предпочтительно, по меньшей мере, на около 50%, по меньшей мере, на около 75%, или, по меньшей мере, на около 100% (например, по меньшей мере 1-кратное или 2-кратное увеличение). Для определения высвобождения воспалительных цитокинов может быть использован любой метод измерения и сравнения уровня высвобождения цитокинов в клетках. Такие методы могут основываться, например, напрямую на изменениях в количестве цитокина в образце или культуре клеток, или опосредованно путем определения клеточных ответов на повышение или уменьшение концентрации цитокинов.
Не желая быть связанным с какой-либо конкретной теорией или механизмом, полагают, что соединения формулы 1 связывают или каким-либо иным образом ингибируют XIAP, cIAP-1 и/или cIAP-2. Таким образом, в родственном аспекте, изобретение относится к способу снижения активности или уровней белка из XIAP, cIAP-1, и/или cIAP-2в клетке, включающему контактирование клетки с соединением формулы 1 или его солью. Активность и уровни белка XIAP, cIAP-1 и/или cIAP-2 могут быть измерены с помощью известных анализов и методов количественного определения белков. Все другие аспекты способа описаны ранее.
Соединения по изобретению, описанные здесь, могут быть введены в клетку in vitro. Как здесь используется, термин "in vitro" означает, что клетка не находится в живом организме. Соединения по изобретению также могут быть введены в клетку in vivo или ex vivo. Как здесь используется, термин "in vivo" означает, что клетка является частью живого организма, например, когда клетка находится в субъекте хозяина. Термин "ex vivo", как здесь используется, относится к введению соединения в клетку или в популяцию клеток in vitro, с последующим введением клетки или популяции клеток субъекту хозяину. Часто эти клетки являются аутологичными по отношению к субъекту.
Когда соединение вводят в клетку субъекту, субъект, желательно, представляет собой млекопитающее, особенно, человека. Способы в соответствии с данным аспектом изобретения, являются наиболее подходящими для применения в связи с субъектом, который страдает заболеванием или имеет риск развития заболевания, связанного с недостаточным апоптозом или аутоиммунным или воспалительным заболеванием. Когда клетка находится в субъекте, соединение формулы 1 или его соли могут быть введены в клетку путем введения субъекту соединения формулы 1 или его соли, или содержащей их композиции (например, фармацевтической композици). Предпочтительно, введение соединения формулы 1 или его соли в клетку субъекта, страдающего заболеванием, связанным с недостаточным апоптозом или аутоиммунным или воспалительным заболеванием, является эффективным для лечения заболевания. Таким образом, изобретение также относится к способу лечения заболевания, связанного с недостаточным апоптозом или аутоиммунным или воспалительным заболеванием, включающему введение субъекту, при необходимости этого, соединения формулы 1 или его соли. Как здесь используется, термин “лечить” предназначен для обозначения облегчения в любой степени, или недопущения проявления какого-либо симптома заболевания или состояния. Термин “лечить” также охватывает ингибирование, подавление или обратное развитие роста или пролиферации болезненных клеток или прогрессирования или распространения (метастазирование) заболевания или состояния, или изменение высвобождения воспалительных цитокинов. Лечение включает превентативное лечение, такое как лечение пациента после оперативного удаления раковых или опухолевых клеток для предупреждения повторного роста рака или опухоли, или лечение для предупреждения выживания патогенных клеток, например, в условиях, которые приводят к таким заболеваниям, как астма, рассеянный склероз и тому подобное.
Заболевания и состояния, связанные с недостаточным апоптозом, охватывают пролиферативные заболевания, характеризующиеся чрезмерно высокими уровнями деления клеток, чрезмерно низкими уровнями апоптоза или их обоими. Такие заболевания могут включать те, при которых имеется дефект в нормальном программировании гибели клеток или механизме апоптоза клеток (TRAIL, FAS, апоптосома).
Примеры аутоиммунных воспалительных расстройств, где устойчивость к апоптозу вносит вклад в патологию, или где повышенный апоптоз может быть терапевтически успешным, включают рассеянный склероз, атеросклероз, артрит (например, ревматоидный артрит (RA)) и тому подобное. Другой аспект настоящего изобретения относится к способу индуцирования апоптоза в клетке, такой как ревматоидный артритный фибропластоподобный синовиоцит, соединением формулы 1 или его солью, отдельно или в сочетании с цитокинами или лигандами рецепторов гибели, такими как Fas, TRAIL или антитела агониста TRAIL-рецептора.
Заболевания, при которых устойчивость к апоптозу способствует патологии, или где повышенный апоптоз может быть терапевтически успешным, включают все виды рака, включая рак легкого, колоректальный рак, рак груди и предстательной железы. Другие виды рака, которые могут быть подвергнуты лечению с помощью соединений, композиций и способов по изобретению включают, но этим не ограничиваются, перечисленные в следующей таблице.
Ткань Пример
Надпочечник нейробластома
Кость остеогенная саркома (остеосаркома), фибросаркома, злокачественная фиброзная гистиоцитома, хондросаркома, саркома Юинга, злокачественная лимфома (саркома ретикулярных клеток), множественная миелома, хордома гигантоклеточной саркомы, остеохронфрома (костно-хрящевые экзостозы), доброкачественная хондрома, хондробластома, хондромиксоидная фиброма, остеоида-остеома и гигантоклеточные опухоли
Сердце саркома (ангиосаркома, фибросаркома, рабдомиосаркома, липосаркома), миксома, рабдомиома, фиброма, липома и тератома
Желудочно-кишечный тракт пищевод (плоскоклеточный рак, аденокарцинома, леймиосаркома, лимфома), желудок (карцинома, лимфома, леймиосаркома), поджелудочная железа (протоковая аденокарцинома, инсулинома, глюкагонома, гастринома, карциноидные опухоли, випома), тонкий кишечник (аденокарцинома, лимфома, карциноидные опухоли, саркома Капоши, лейомиома, гемангиома, липома, нейрофиброма,
  фиброма), толстый кишечник (аденокарцинома, тубулярная аденома, аденома ворсинок, гамартома, лейомиома)
Мочеполовой тракт почки (аденокарцинома, опухоль [нефробластома] Вильма, лимфома, лейкемия), мочевой пузырь и мочеиспускательный канал (плоскоклеточный рак, переходно-клеточная карцинома, аденокарцинома), предстательная железа (аденокарцинома, саркома), семенник (семинома, тератома, эмбриональная карцинома, тератокарцинома, хориокарцинома, саркома, интерстициально-клеточная карцинома, фиброма, фиброаденома, аденоматоидные опухоли, липома)
Гинекология матки (карцинома эндометрия), шейка матки (цервикальная карцинома, предопухолевая дисплазия шейки матки), яичники (карцинома яичников [серозная цистаденокарцинома, муцинозная цистаденокарцинома, неклассифицируемая карцинома], гнойные гранулезоклеточные опухоли, опухоли Сертоли-Лейдига, дисгерминома, злокачественная тератома) вульва (плоскоклеточный рак, интраэпителиальная карцинома, аденокарцинома, фибросаркома, меланома), влагалище (прозрачноклеточная карцинома, плоскоклеточный рак, кистевидная саркома (эмбриональная
  рабдомиосаркома), фаллопиевы трубы (карцинома)
Гематология кровь (миелоидная лейкемия [острая и хроническая], острая лимфобластная лейкемия, хроническая лимфоцитарная лейкемия, миелопролиферативные заболевания, множественная миелома, миелодиспластический синдром), болезнь Ходжкина, неходжкинская лимфома [злокачественная лимфома]
Печень гепатома (гепатоцеллюлярная карцинома), холангиокарцинома, гепатобластома, ангиосаркома, гепатоцеллюлярная аденома, гемангиома
Легкое бронхогенная карцинома (плоскоклеточная, недифференцированная мелкоклеточная, недифференциированная крупноклеточная, аденокарцинома), альвеолярная (бронхиолярная) карцинома, бронхиальная аденома, саркома, лимфома, хондроматозная гамартома, мезотелиома
Нервная система череп (остеома, гемангиома, гранулома, ксантома, деформирующий остит), мягкие мозговые облочки (менингиома, менингиосаркома, глиоматоз), мозг (астроцитома, медуллобластома, глиома, эпендимома, гоноцитома [пинеалома], полиморфная глиобластома, олигодендроглиома, невринома, ретинобластома, наследственные опухоли), спинномозговая нейрофиброма,
  менингиома, глиома, саркома)
Кожа злокачественная меланома, базальноклеточная карцинома, плоскоклеточный рак, саркома Капоши, диспластический меланоцитарный невус, липома, ангиома, дерматофиброма, келоиды
Соединение формулы 1 или его соли могут быть использованы в чистом или по существу чистом виде, или как часть композиции, содержащей соединение формулы 1 или его соли и подходящий носитель. Когда композиция должна быть введена субъекту или пациенту, особенно субъекту или пациенту человеку, носитель должен быть фармацевтически приемлемым носителем. Как здесь используется, термины “субъект” и “пациент” предназначены для обозначения человека, а также других млекопитающих, таких как приматы, кошки, собаки, свиньи, крупный рогатый скот, овцы, козы, лошади, кролики, крысы, мыши и тому подобное.
Фармацевтические композиции по настоящему изобретению могут быть получены путем объединения соединения по настоящему изобретению с подходящим носителем. Носитель может быть любым из широко используемых и ограничивается только физико-химическими свойствами, такими как растворимость и отсутствие реакционной способности с активным соединением, и путем введения. Специалисту в данной области будет понятно, что, помимо следующей описанной фармацевтической композиции, активные соединения в способах по настоящему изобретению могут быть представлены в составе комплексов включения, таких как комплексы включения с циклодекстринома или липосомы.
Фармацевтически приемлемые носители, описанные здесь, например, основы, вспомогательные средства, инертные наполнители и разбавители, хорошо известны специалистам в данной области и являются легко доступными. Предпочтительно, чтобы фармацевтически приемлемый носитель был таким, который является химически инертным по отношению к активному(ым) агенту(ам), и таким, который не проявляет вредных побочных эффектов или токсичности в условиях использования.
Имеется множество подходящих препаратов на основе фармацевтической композиции по способам настоящего изобретения. Препарат может быть, например, твердым, полутвердым или жидким, включая таблетки, капсулы, порошки, гранулы, мази, растворы, суппозитории, инъекции, ингаляторы, гели, микросферы и аэрозоли.
Современные способы получения таких дозированных форм являются известными или будут понятны специалистам в данной области; например, см., Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed., (Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1990). Композиция, предназначенная для введения, будет, в любом случае, содержать терапевтически эффективное количество соединения по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой соли для лечения болезненного состояния, как описано выше.
Фармацевтическая композиция может быть составлена для любого пути введения, включая, например, пероральное, местное, трансдермальное, трансмукозальное, аэрозольное/ингаляционное, парентеральное (включая, без ограничений, подкожное, внутривенное, внутримышечное, внутригрудинное, интерперитонеальное, интрацеребральное, внутрикостное и интрадермальное), ректальное, сублингвальное, офтальмологическое, интраназальное и вагинальное введение. Специалисту в данной области будет понятно, что указанные пути введения соединения по изобретению являются известными, и, хотя может быть использован более чем один путь для введения конкретного соединения, конкретный путь может обеспечить более быстрый и более эффективный ответ, чем иной путь. Следующие препараты описаны с целью дополнительной иллюстрации, и не предназначены для ограничения изобретения.
Инъецируемые препараты относятся к числу тех препаратов, которые могут быть подходящими в соответствии с настоящим изобретением. Требования, предъявляемые к эффективным фармацевтическим носителям для инъецируемых композиций хорошо известны обычному специалисту в данной области (см., например, Pharmaceutics and Pharmacy Practice, J.B. Lippincott Company, Philadelphia, PA, Banker and Chalmers, eds., pages 238-250 (1982), и ASHP Handbook on Injectable Drugs, Toissel, 4th ed., pages 622-630 (1986)). Препараты, подходящие для парентерального введения, включают водный и не-водный, изотонические стерильные инъекционниые растворы, которые могут содержать антиоксиданты, буферы, бактериостаты и растворенные вещества, которые делают препарат изотоническим для крови предполагаемого реципиента, и водные и не-водные стерильные суспензии, которые могут содержать суспендирующие агенты, солюбилизаторы, загустители, стабилизаторы и консерванты. Соединения по изобретению могут быть введены в физиологически приемлемом разбавителе в фармацевтическом носителе, таком как стерильная жидкость или смесь жидкостей, включая воду, физиологический раствор, водную декстрозу и родственные растворы сахаров, спирт, такой как этанол, изопропанол или гексадециловый спирт, гликоли, такие как пропиленгликоль или полиэтиленгликоль, диметилсульфоксид, кетали глицерина, такие как 2,2-диметил-1,3-диоксолан-4-метанол, простые эфиры, такие как поли(этиленгликоль) 400, масло, жирная кислота, сложный эфир или глицерид жирной кислоты или глицерид ацетилированной жирной кислоты, с добавлением или без добавления фармацевтически приемлемого поверхностно-активного вещества, такого как мыло или детергент, суспендирующего агента, такого как пектин, карбомеры, метилцеллюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза или карбоксиметилцеллюлоза, или эмульгаторов и других фармацевтических вспомогательных веществ, включая глицериды и триглицериды пегилированных или жирных кислот.
Масла, которые могут быть использованы в парентеральных препаратах, включают нефтяные, животные, растительные или синтетические масла. Конкретные примеры масел включают арахисовое, соевое, кунжутное, хлопковое, кукурузное, оливковое, вазелиновое и минеральное. Подходящие жирные кислоты для применения в парентеральных препаратах включают олеиновую кислоту, стеариновую кислоту и изостеариновую кислоту. Этил олеат и изопропил миристат являются примерами подходящих сложных эфиров жирных кислот.
Подходящие мыла для применения в парентеральных препаратах включают жирные соли щелочных металлов, аммония и триэтаноламина, и подходящие детергенты включают (a) катионные детергенты, такие как, например, галогениды диметилдиалкиламмония и галогениды алкилпиридиния, (b) анионные детергенты, такие как, например, алкил, арил и олефин сульфонаты, алкил, олефин, простой эфир и моноглицерид сульфаты, и сульфосукцинаты, (c) неионные детергенты, такие как, например, оксиды жирных аминов, алканоламиды жирных кислот и сополимеры полиоксиэтилена и полипропилена, (d) амфотерные детергенты, такие как, например, алкил-b-аминопропионаты и соли четвертичного аммония 2-алкилимидазолина, и (e) их смеси.
Парентеральные препараты обычно содержат от около 0,01% до около 10% по массе активного ингредиента в растворе. Могут быть использованы консерванты и буферы. Для минимизирования или устранения раздражения на участке инъекции такие композиции могут содержать один или несколько неионных поверхностно-активных веществ, имеющих гидрофильно-липофильный баланс (HLB) от около 12 до около 17. Количество поверхностно-активного вещества в таких препаратах обычно находится в области от около 5% до около 15% по массе. Подходящие поверхностно-активные вещества включают сложные эфиры полиэтилен сорбитана и жирной кислоты, такие как моноолеат сорбитана и высокомолекулярные аддукты этиленоксида с гидрофобным основанием, полученные конденсацией пропиленоксида с пропиленгликолем. Парентеральные препараты могут быть представлены в виде герметичных контейнеров с одной дозой или несколькими дозами, такие как ампулы и пузырьки, и могут храниться в высушенном заморозкой (лиофилизированные) состоянии, что требует только добавления стерильный жидкости инертного наполнителя, например, воды для инъекции непосредственно перед использованием. Приготовленные для немедленного использования инъекционные растворы и суспензии могут быть получены из стерильных порошков, гранул и таблеток ранее описанного вида.
Местные препараты хорошо известны специалистам в данной области. Такие препараты являются особенно подходящими в контексте настоящего изобретения для нанесения на кожу. Носитель может подходящим образом включать основу в виде раствора, эмульсии, мази или геля. Основа, например, может включать одно или несколько из следующих: вазелиновое масло, ланолин, полиэтиленгликоли, пчелиный воск, минеральное масло, разбавители, такие как вода и спирт, и эмульгаторы и стабилизаторы. В фармацевтической композиции для местного введения могут присутствовать загустители. Если композиция предназначена для трансдермального введения, она может быть представлена в ввиде трансдермального пластыря или ионтофорезного устройства. В препаратах для местного введения концентрация соединения по настоящему изобретению может составлять от около 0,1% до около 10% масс./об. (масса на единицу объема).
Препараты, подходящие для перорального введения представляют собой (a) жидкие растворы, такие как эффективное количество активного соединения, растворенное в разбавителях, (b) капсулы, саше, таблетки, пастилки и лепешки, содержащие, каждое, заданное количество активного ингредиента, в виде твердых веществ или гранул; (c) порошки; (d) суспензии в подходящей жидкости; и (e) подходящие эмульсии. Жидкие препараты могут включать разбавители, такие как вода, физиологический раствор, и спирты, например, этанол, бензиловый спирт, и полиэтиленовые спирты, либо с добавлением, либо без добавления фармацевтически приемлемого поверхностно-активного вещества. Капсулы могут быть обычными, с твердой или мягкой оболочкой желатинового типа, содержащие, например, поверхностно-активные вещества, смазывающие агенты и инертные наполнители, такие как лактоза, сахароза, фосфат кальция и кукурузный крахмал. Таблетки могут включать одно или несколько веществ, выбранных из лактозы, сахарозы, маннита, кукурузного крахмала, альгиновой кислоты, микрокристаллической целлюлозы, камеди, желатина, гуаровой камеди, коллоидного диоксида кремния, кроскармелозы натрия, талька, стеарата магния, стеарата кальция, стеарата цинка, стеариновой кислоты и других инертных наполнителей, красителей, разбавителей, буферных агентов, разрыхлителей, увлажнителей, консервантов, ароматизаторов и фармакологически совместимые инертные наполнители. Пастилки могут представлять собой активный ингредиент в ароматизаторе, обычно в сахарозе и камеди или трагаканте, также как пастилки, содержащие активный ингредиент в инертной основе, такой как желатин и глицерин, или сахарозе и камеди, эмульсии, гели и тому подобное, содержащие, помимо активного ингредиента, такие инертные наполнители, которые являются известными в данной области. Пероральные препараты обычно содержат от около 0,1% до около 70% по массе активного ингредиента.
Соединения по изобретению, отдельно или в сочетании с другими подходящими компонентами, могут быть изготовлены в виде аэрозольных препаратов для введения путем ингаляций. Такие аэрозольные препараты могут быть помещены в находящиеся под давлением приемлемые пропелленты, такие как дихлордифторметан, пропан, азот и тому подобное. Они также могут входить в состав лекарственных препаратов для препаратов не под давлением, таких как в небулайзерах или атомайзерах. Такие спрей препараты также могут быть использованы для распыления на слизистые оболочки.
Кроме того, соединения по изобретению, или композиции, содержащие такие соединения, могут быть включены в состав суппозиториев путем смешивания с различными основами, такими как эмульгирующие основы или водо-растворимые основы. Препараты, подходящие для вагинального введения, могут быть представлены в составе вагинальных суппозиториев, тампонов, кремов, гелей, паст, пенок или спрея, содержащих, в дополнение к активному ингредиенту, такие носители, которые являются известными в данной области в качесте подходящих.
Альтернативно, соединения по изобретению, описанные здесь, могут быть модифицированы в форме депо, таким образом, что способ, по которому соединение по изобретению высвобождается в организме, в которое его вводят, был контролируемым по отношению ко времени и участку тела (см., например, патент США № 4450150). Депо формами активного соединения могут быть, например, имплантируемая композиция, содержащая соединение и пористый материал, такой как полимер, в котором соединение инкапсулировано или диффундировано в этом пористом материале. Депо затем имплантируют в желаемый участок тела, и соединение высвобождается из импланта с заданной скоростью путем диффузии из пористого материала.
В некоторых контекстах, соединения по изобретению могут быть успешно введены с помощью имплантированного насоса, что позволяет осуществить интратекальную доставку. Такой способ доставки особенно полезен для доставки лекарственных средств в ЦНС тогда, когда вводимые лекарственные средства недостаточно проникают через гематоэнцефалический барьер.
Существующие способы получения таких дозированных форм являются известными или будут понятны специалистам в данной области; например, см., Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed., (Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1990). Композиция, предназначенная для введения, в любом случае, должна содержать терапевтически эффективное количество соединения по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой соли для лечения болезненного состояния, как описано выше.
Обычному специалисту в данной области легко понять, что соединения по изобретению, описанные здесь, могут быть модифицированы любым количеством способов для повышения терапевтической эффективности соединения. Например, соединение или ингибитор могут быть сопряжены либо непосредственно, либо опосредованно через линкер с целевым фрагментом. Метод сопряжения соединений или ингибиторов к целевым фрагментам известен в данной области. Термин “целевой фрагмент”, как здесь используется, относится к любой молекуле или агенту, которые избирательно распознают и связываются с поверхностным рецептором клетки, таким образом, что целевой фрагмент направляет доставку соединения или ингибитора в популяцию клеток, на поверхности которых экспрессирован рецептор. Целевые фрагменты включают, но этим не ограничиваются, антитела или их фрагменты, пептиды, гормоны, факторы роста, цитокины и какие-либо другие природные или не существующие в природе лиганды, которые связываются с рецепторами на поверхности клеток. Термин "линкер", как здесь используется, относится к любому агенту или молекуле, которые образуют мостик между соединением или ингибитором и целевым фрагментом. Обычный специалист в данной области определит, что участки на соединениях или ингибиторах, которые не являются необходимыми для действия соединения или ингибитора, являются идеальными участками для присоединения линкера и/или целевого фрагмента, при условии, что линкер и/или целевой фрагмент, после присоединения к соединению или ингибитору, не вредит действию соединения или ингибитор.
Количество, рассматриваемое как терапевтически эффективное, будет меняться в зависимости от факторов, включая конкретное используемое соединение, точный вид и серьезность состояния, подвергаемого лечению, и возраста, массы тела, общего состояния здоровья, пола и питания пациента; и метода введения. Обычно, терапевтически эффективная суточная доза может составлять от около 0,1 мг до около 40 мг/кг массы тела в день или два раза в день.
Комбинированная терапия
Соединение формулы 1 или его соли, или содержащая их композиция, могут быть использованы в соответствии со способами, описанными здесь, отдельно или в сочетании с одним или несколькими дополнительными активными ингредиентами. Например, два или более различных соединений формулы 1 или их соли могут быть использованы вместе, или одно или несколько соединений формулы 1 или их соли могут быть использованы в сочетании с одним или несколькими другими терапевтически эффективными соединениями. Когда соединение формулы 1 или его соли используются в сочетании с одним или несколькими дополнительными активными соединениями (либо иное соединение формулы 1 или дугое соединение), одно или несколько дополнительных соединений могут быть введены одновременно, до или после введения соединения формулы 1 или его соли. Кроме того, когда они вводятся одновременно, одно или несколько дополнительных соединений могут быть введены в одну и ту же композицию в виде соединения формулы 1 или его соли, или в другую композицию.
Выбор дополнительных терапевтических агентов для применения в сочетании с соединением формулы 1 или его соли будет зависеть, по меньшей мере, частично, от конкретного заболевания или состояния, подвергаемого лечению. В соответствии с одним аспектом изобретения, соединение формулы 1 или его соли вводят в сочетании с агентом, который напрямую или опосредованно стимулирует рецептор смерти апоптоза. Не желая быть связанным с какой-либо конкретной теорией, полагают, что совместное использование соединения формулы 1 или его соли и агент, который стимулирует рецептор смерти апоптоза (например, агонист рецептора смерти) производит усиленный, и в некоторых случаях синергический, эффект.
Агонистом рецептора смерти может быть любой агент, способный стимулировать ответ про апоптоза опосредованный рецепторами смерти. Такие агенты включают растворимые агонисты рецепторов TRAIL, TRAIL, и любой агент, который увеличивает циркулирующий уровень TRAIL у субъекта, включая модуляторы имунной системы, такие как интерферон-альфа или ионизирующая радиация (например, UVB), которые индуцируют высвобождение цитокинов, таких как интерлейкины, или ФНО.
Агонисты рецепторов TRAIL включают любое соединение, которое симулирует TRAIL путем стимулирования рецептора смерти TRAIL. Такие соединения могут включать, например, небольшую молекуму или рецептор агониста антитела TRAIL. Антитела агонистов, направленные против рецепторов смерти TRAIL-R1 и/или TRAIL-R2, являются предпочтительными, в частности, антитела, известные как HGS-ETR1 и HGS-ETR2. Примеры агонистов антител включают описанные в патенте США № 7244429; в публикациях патентных заявок США №№ 2007/0179086, 2002/0004227, 2006/0269554, 2005/0079172, 2007/0292411, 2006/0270837 (тепеь патент США № 7361341), 2009/0026429, 2006/0269555, 2004/0214235 и 2007/0298039; и в Международных патентных публикациях WO2006/017961 и WO98/51793. Каждая из указанных публикаций включена в настоящий документ в виде ссылки во всей ее полноте. В предпочтительных вариантах осуществления изобретения соединения по изобретению используются в сочетании с одним или несколькими из указанных антител агониста TRAIL рецептора для лечения рака и других новообразований.
Другие агенты, используемые в сочетании с соединением формулы 1 или его солью, включают, например, модуляторы рецептора эстрогена, модуляторы рецептора андрогена, модуляторы рецептора ретиноида, цитотоксические агенты, антипролиферативные агенты, ингибиторы пренил-протеин трансферазы, ингибиторы HMG-CoA редуктазы, ингибиторы ВИЧ протеазы, ингибиторы обратной транскриптазы, ингибиторы ангиогенеза, агонисты PPAR-γ, агонисты PPAR-δ, ингибиторы врожденной множественной лекарственной устойчивости, противорвотные агенты, агенты, используемые для лечения анемии или нейропении, лекарственные средства, повышающие иммунитет, ингибиторы протеасомы, такие как Велкад и MG132 (7-Leu-Leu-альдегид) (см., He at al., Oncogene (2004) 23, 2554-2558), ингибиторы HDAC, такие как бутират натрия, фенил бутират, гидроамовые кислоты, тетрапептид циклина и тому подобное (см., Rosato et al., Molecular Cancer Therapeutics (2003), 1273-1284), ингибиторы химотрипсинподобной активности в протеасоме и ингибиторы E3 лигазы. Другие такие агенты описаны в WO 03/099211 (PCT/US03/15861).
Другие известные химиотерапевтические агенты могут быть использованы в сочетании с соединением формулы 1 или его солью, особенно для лечения злокачественных опухолей или другого пролиферативного заболевания, восприимчивого к химиотерапии. Любой химиотерапевтический агент может быть использован в сочетании с соединением формулы 1 или его солью. Выбор химиотерапевтического агента может зависеть, в частности, от конкретного вида рака или пролиферативного заболевания, подвергаемого лечению. Примеры химиотерапевтических агентов описаны в следующих параграфах. Химиотерапевтические агенты, описанные здесь, даны только для иллюстрации, и не предназначены для ограничения.
Алкалоиды Барвинка и разрушающие микротрубочки соединения: Алкалоиды Барвинка включают винкристин, винбластин, виндезин, винфлунин, винорелбин, и ангидровинбластин. Доластатины представляют собой олигопептиды, которые, в основном, препятствуют тубулину на связывающем домене алкалоида Барвинка. Доластатины включают доластатин-10 (NCS 376128), доластатин-15, ILX651, TZT-1027, симплостатин 1, симплостатин 3 и LU103793 (цемадотин). Криптофицины (например, криптофицин 1 и криптофицин 52 (LY355703)) связывают тубулин с алкалоид Барвинка-связывающим доменом и индуцируют подавление G2/M и апоптоз.
Другие разрушающие микротрубочки соединения описаны в патентах США №№ 6458765; 6433187; 6323315; 6258841; 6143721; 6127377; 6103698; 6023626; 5985837; 5965537; 5955423; 5952298; 5939527; 5886025; 5831002; 5741892; 5665860; 5654399; 5635483; 5599902; 5530097; 5521284; 5504191; 4879278; 4816444, и публикациях патентных заявок США №№ 2003/0153505 A1; 2003/0083263 A1; и 2003/0055002 A1.
Таксаны и другие стабилизирующие микротрубочки соединения: Таксаны включают паклитаксел, доцетаксел, RPR 109881A, SB-T-1213, SB-T-1250, SB-T-101187, BMS-275183, BRT 216, DJ-927, MAC-321, IDN5109 и IDN5390. Таксановые аналоги включают BMS-184476, BMS-188797, и функционально родственные не-таксаны включают эпотилоны (например, эпотилон A, эпотилон B (EPO906), деоксиэпотилон B и эпотилон B лактам (BMS-247550)), элеутеробин, дискодермолид, 2-эпи-дискодермолид, 2-дез-метилдискодермолид, 5-гидроксиметилдискодермолид, 19-дез-аминокарбонилдискодермолид, 9(13)-циклодискодермолид и лаулималид.
Другие стабилизирующие микротрубочки соединения описаны в патентах США №№ 6624317; 6610736; 6605599; 6589968; 6583290; 6576658; 6515017; 6531497; 6500858; 6498257; 6495594; 6489314; 6458976; 6441186; 6441025; 6414015; 6387927; 6380395; 6380394; 6362217; 6359140; 6306893; 6302838; 6300355; 6291690; 6291684; 6268381; 6262107; 6262094; 6147234; 6136808; 6127406; 6100411; 6096909; 6025385; 6011056; 5965718; 5955489; 5919815; 5912263; 5840750; 5821263; 5767297; 5728725; 5721268; 5719177; 5714513; 5587489; 5473057; 5407674; 5250722; 5010099; и 4939168; и U.S. patent application Publication Nos. 2003/0186965 A1; 2003/0176710 A1; 2003/0176473 A1; 2003/0144523 A1; 2003/0134883 A1; 2003/0087888 A1; 2003/0060623 A1; 2003/0045711 A1; 2003/0023082 A1; 2002/0198256 A1; 2002/0193361 A1; 2002/0188014 A1; 2002/0165257 A1; 2002/0156110 A1; 2002/0128471 A1; 2002/0045609 A1; 2002/0022651 A1; 2002/0016356 A1; 2002/0002292 A1, каждый из которых включен в данный документ в виде ссылки.
Другие химиотерапевтические агенты, которые могут быть введены с соединением по настоящему изобретению, перечислены в следующей таблице:
Алкилирующие агенты циклофосфамид меклоретамин
ломустин тиотепа
бусульфан стрептозоцин
прокарбазин клорамбуцил
ифосфамид темозоломид
альтретамин дакарбазин
мелфалан семустин
  эстрамустин фосфат кармустин
гексаметилмеламин  
 
Платиновые
агенты		 цисплатин тетраплатин
карбоплатиний BBR-3464
оксалиплатин Ормиплатин
ZD-0473 SM-11355
спироплатиний ипроплатин
Лобаплатинкарбокси-фталат оплатиний AP-5280
сатраплатин  
 
Антиметаболиты азацитидин 6-меркаптопурин
томудекс гидроксимочевина
гемцитабин 6-тиогуанин
триметрексат децитабин
капецитабин цитарабин
деоксикоформицин слофарабин
5-фторурацил 2-фтордеокси
флударабин цитидин
флоксоридин ирофульвенметотрексат
пентостатин DMDC идатрексат
2-хлордеоксиаденозин этинилцитидин
ралтитрексед  
 
Ингибиторы топоизомеразы амсакрин TAS-103
  рубитекан Топотекан
эпирубицин Эльсамитруцин
эксатекан дексразоксанет
мезилат J-107088
этопозид пиксантрон
хинамед BNP-1350 ребеккамицина
тенипозид или митоксантрон аналоги
гиматекан CKD-602 (
иринотекан (CPT-11) BBR-3576
дифломотекан (Beaufour-Ipsen) KW-2170
7-этил-10-гидроксикапптотецин  
Противоопухолевые антибиотики дактиномицин (актиномицин D) блеомициновая кислота
амонафид идарубицин
доксорубицин (адриамицин) блеомицин A
азонафид рубидазон
деоксирубицин блеомицин B
антрапиразол пликамицинп
валрубицин митомицин C
оксантразол порфиромицин
даунорубицин MEN-10755
  (дауномицин)  
лозоксантрон Цианоморфолино-доксорубицин
эпирубицин GPX-100 митоксантрон
блеомицин сульфат (бленоксан) (новантрон)
терарубицин  
 
Антимитотические агенты паклитаксел RPR109881A
SB 408075 доцетаксел ZD 6126
E7010 TXD 258
Колхицины PEG-паклитаксел
PG-TXL винбластин эпотилон B
IDN 5109 AZ10992
Винкристин T 900607
A 105972 IDN-5109
Винорелбин T 138067
A 204197 AVLB
Виндезин криптофицин 52 азаэпотилон B
LU 223651 винфлунин
доластатин 10 BNP-7787
D 24851 ауристатин PE
ризоксин пролекарство CA-4
ER-86526 BMS 247550
мивобулин доластатин-10
  комбретастатин A4  
цемадотин BMS 184476
изогомогалихондрин-B CA-4
  BMS 188797
  таксопрексин
 
Ингибиторы ароматазы Аминоглютетимид анастразол
Экземестан YM-511
Летрозол форместан
атаместан  
Ингибиторы тимидилат синтазы пеметрексед ZD-9331
нолатрексед КоФакторТМ
Антагонисты ДНК трабектединмафосфа-мид альбумин + 32P
глюфосфамид O6 бензил гуанин тимектацин
апазихон эдотреотид
Ингибиторы фарнезилтрансфе-разы арглабин типифарниблонафарниб периллиловый спирт
 
Ингибиторы помпы CBT-1 тарихидар
зосухидартригидро-хлорид бирикодар дицитрат MS-209)
 
Ингибиторы Тацединалин депсипептид MS-275
гистон ацетилтранс-феразы пивалоилоксиметилбутират SAHA  
 
Ингибиторы металло-протеиназы Неовастат CMT-3 Маримастат BMS-275291
 
Ингибиторы рибонуклеозид редуктазы Мальтолат галлиятезацитабин Триапиндидокс
 
агонисты/анта-гонисты TNF альфа вирулизинревимид CDC-394
 
Endothelin A рецептор антагонист Антразентан YM-598 ZD-4054
 
Агонисты рецептора ретиноидной кислоты фенретинид алитретиноин LGD-1550
Иммуномодуляторы Интерферон норелин
дексозом терапевтический IRX-2
  онкофаг  
пентрикс BLP-25
GMK PEP-005
ISF-154 MGV
вакцина против аденокарциномы вакцины synchrovax
вакцина против рака (Intercell) бета-алетин
CTP-37 терапия меланомы вакциной CLL
  p21 RAS вакцина
Гормональные и антигормональные агенты эстрогены бикалутамид
Преднизон тестостеронпропионат;
конъюгированные эстрогены флуоксиместерон
метилпреднизолон флутамид
этинил эстрадиол метилтестостерон
преднизолон остреотид
клортрианизен диэтилстильбестрол
аминоглутетимид нилутамид
иденестрол мегестрол
лейпролид митотан тамоксифен
гидроксипрогестерон капроат P-04 (Новоген)
гозерелин Торемофин
медроксипрогестерон 2-метоксиэстрадиол
  лейпорелин дексаметазон
тестостерон арзоксифен
 
Фотодинамические агенты талапорфин мотексафин
Pd-бактериофефорбид гадолиний
Тералюкс лютеттия тексафирин гиперицин
 
Ингибиторы киназы иматиниб C225
кагалид F ZD4190
лефлуномид rhu-Mab
CEP-701 ZD6474
ZD1839 MDX-H210
CEP-751 ваталаниб
эрлотиниб MLN518 2C4
канертиниб PKI166
PKC412 MDX-447
скваламин GW2016
феноксодиол ABX-EGF
SU5416 EKB-509
трастузумаб IMC-1C11
SU6668 EKB-569
Сорафениб CI-1033
Цетуксимаб EKB-569
ZD 839 Семаксаниб
PKI 166 ZD 6474
    PTK-787
  INC-1C11
   
Разнообразные агенты
SR-27897 (ингибитор CCK A), Sanofi-Synthelabo)
BCX-1777 (ингибитор PNP, BioCryst)
токладезин (агонист циклического AMP, Ribapharm)
ранпирназа (стимулятор рибонуклеазы, Alfacell)
алвоцидиб (ингибитор CDK, Aventis)
галарубицин (ингибитор синтеза РНК, Dong-A)
CV-247 (COX-2 ингибитор COX-2, Ivy Medical)
тирапазамин (восстанавливающий агент, SRI International)
P54 (ингибитор COX-2, Phytopharm)
N-ацетилцистеин (восстанавливающий агент, Zambon)		 гемтузумаб (антитело CD33, Wyeth Ayerst)
CCI-779 (ингибитор mTOR киназы, Wyeth)
PG2 (усилитель гематопоэза, Pharmagenesis)
эксисулинд (ингибитор PDE V, Cell Pathways)
ИммунолТМ (триклозановое пероральное полоскание, Endo)
CP-461 (ингибитор PDE V, Cell Pathways) триацетилуридин (уридиновое пролекарство, Wellstat)
AG-2037 (ингибитор GART, Pfizer)
SN-4071 (средство против саркомы, Signature BioScience) WX-UK1 (ингибитор активатора плазминогена, Wilex)
TransMID-107.TM.
CapCellTM (стимулятор CYP450, Bavarian Nordic)
R-флурбипрофен (ингибитор NF-kappaB, Encore)
GCS-100 (антагонист gal3, GlycoGenesys)
3CPA (ингибитор NF-kappaB, Active Biotech)
G17DT Иммуноген (ингибитор гастрина, Aphton)
сеокальцитол (агонист рецептора витамина D, Leo)
эфапроксирал (оксигенатор, Allos Therapeuticals)
131-I-TM-601 (антагонист ДНК, TransMolecular)
PI-88 (ингибитор гепараназы, Progen)
эфлорнитин (ингибитор ODC, ILEX Oncology)
Тесмилифен (антагонист гистамина, YM BioSciences)
минодроновая кислота (ингибитор остеокластов, Yamanouchi)
гистамин (агонист рецептора		 (Иммунотоксин, KS Biomedix)
PBI-1402 (стимулятор PMN, ProMetic LifeSciences)
PCK-3145 (промотор апоптоза, Procyon)
бортезомид (ингибитор протеасомы, Millennium)
доранидазол (промотор апоптоза, Pola)
SRL-172 (стимулятор T клеток, SR Pharma) CHS-828 (цитотоксический агент, Leo)
TLK-286 (ингибитор трансферазы глутатиона S, Telik)
транс-ретиноидная кислота (дифференциатор, NIH)
PT-100 (агонист фактора роста, Point Therapeutics)
MX6 (промотор апоптоза, MAXIA)
мидостаурин (ингибитор PKC, Novartis)
апомин (промотор апоптоза, ILEX Oncology)
бриостатин-1 (стимулятор PKC,
гистамин H2, Maxim)
индисулам (стимулятор p53, Eisai)
тиазофурин (ингибитор IMPDH, Ribapharm)
аплидин (ингибитор PPT, PharmaMar)
циленгитид (антагонист интегрина, Merck KGaA)
ритуксимаб (антитело CD20, Genentech)
SR-31747 (антагонист IL-1, Sanofi-Synthelabo)		 GPC Biotech)
уроцидин (промотор апоптоза, Bioniche)
CDA-II (промотор апоптоза, Everlife)
Ro-31-7453 (промотор апоптоза, La Roche)
SDX-101 (промотор апоптоза, Salmedix)
бросталлицин (промотор апоптоза, Pharmacia)
цефлатонин (промотор апоптоза, ChemGenex)
Герцептин
Когда заболевание или расстройство, подвергаемое лечению, представляет собой воспалительные или аутоиммунные расстройство, в частности, ревматоидный артрит (RA), соединение формулы 1 или его соли могут быть введены в сочетании с одним или несколькими нестероидными противовоспалительными лекарственными средствами (NSAID), анальгетиками, кортикостероидами и болезнь-модифицирующими противоревматическими лекарственными средствами. Других агенты, которые могут быть использованы в сочетании с формулой 1 или его солью для таких применений, включают http://www.hopkins-arthritis.org/arthritis-info/rheumatoid-arthritis/rheum_treat.html" \l "il1#il1" \o "http://www.hopkins-arthritis.org/arthritis-info/rheumatoid-arthritis/rheum_treat.html#il1#il1, такие как анакинра (Kineret™), тоцилизумаб (Actemra™), гидроксихлорохин (Plaquenil™), http://www.hopkins-arthritis.org/arthritis-info/rheumatoid-arthritis/rheum_treat.html" \l "sulfasalazine#sulfasalazine" \o "http://www.hopkins-arthritis.org/arthritis-info/rheumatoid-arthritis/rheum_treat.html#sulfasalazine#sulfasalazine (Azulfidine™), лефлуномид (Arava™), ингибиторы фактора некроза опухоли, такие как этанерцепт (Enbrel™), адалимумаб (Humira™) и инфликсимаб (Remicade™), агенты, блокирующие костимуляторы, такие как абатацепт (Orencia™), http://www.hopkins-arthritis.org/arthritis-info/rheumatoid-arthritis/rheum_treat.html" \l "bcell#bcell" \o "http://www.hopkins-arthritis.org/arthritis-info/rheumatoid-arthritis/rheum_treat.html#bcell#bcell, такие как ритуксимаб (Rituxan™), натализумаб (Tysabri™), http://www.hopkins-arthritis.org/arthritis-info/rheumatoid-arthritis/rheum_treat.html" \l "gold#gold" \o "http://www.hopkins-arthritis.org/arthritis-info/rheumatoid-arthritis/rheum_treat.html#gold#gold и http://www.hopkins-arthritis.org/arthritis-info/rheumatoid-arthritis/rheum_treat.html" \l "cytotoxic#cytotoxic" \o "http://www.hopkins-arthritis.org/arthritis-info/rheumatoid-arthritis/rheum_treat.html#cytotoxic#cytotoxic, такие как азатиоприн (Имуран™), циклофосфамид и циклоспорин A (Neoral™, Sandimmune™).
Еще другие агенты, которые могут быть использованы в сочетании с соединением формулы 1 или его солью для лечения RA. включают метотрексат, алемтузимаб (Кэмпас™), анти-RANKL MAb (denosumab), анти-Blys MAb белимумаб (LymphoStat-B™), цертолизумаб пегол (Cimzia™), ингибиторы p38, ингибиторы JAK, агенты анти-TNF, анти-CD20 MAbs, анти-IL/ILR целевые агенты, такие как целевые IL-1, IL-5, IL-6 (токлизумаб), IL-4, IL-13 и IL-23.
Дополнительные сочетания могут также включать агенты, которые уменьшают токсичность вышеуказанных агентов, такую как печеночную токсичность, нейрональную токсичность, нефротоксичность и тому подобное.
Скрининговые исследования
Соединения по настоящему изобретению также могут быть использованы в способе для скрининга других соединений, которые связываются с BIR доменом IAP. Вообще говоря, для применения соединений по изобретению в способе идентификации соединений, которые связываются с BIR доменом IAP, IAP присединен к подложке, и соединение по изобретению добавляется в анализе. Альтернативно, соединение по изобретению может быть присоединено к подложке и добавляется IAP.
Есть ряд способов, с помощью которых определяется связывание соединения по настоящему изобретению с BIR доменом. По одному способу, соединение по изобретению, например, может быть флуоресцентно или радиоактивно меченным и связывание определяется непосредственно. Например, это может быть осуществлено путем присоединения IAP к твердой подложке, добавлением поддающегося обнаружению меченого соединения по изобретению, промывка от избытка реагента и определение количества той обнаруживаемой метки, которая присутствует на твердой подложке. Могут быть использованы многочисленные стадии блокирования и промывки, которые являются известными специалистам в данной области.
В некоторых случаях, метят только один из компонентов. Например, могут быть мечены специфические остатки в домене BIR. Альтернативно, могут быть мечены более одного компонента с помощью различных меток; например, используя I125 для BIR домена, и флуоресцентную метку для зонда.
Соединения по изобретению также могут быть использованы в качестве конкурентов для скрининга дополнительных лекарственных кандидатов или исследуемых соединених. Как здесь используется, термины “лекарственный кандидат” или “исследуемые соединения” используются взаимозаменяемо и описывают любую молекулу, например, белок, олигопептид, небольшую органическую молекулу, полисахарид, полинуклеотид и тому подобное, исследуемые на биологическую активность. Соединения могут быть способны непосредственно или косвенно изменять биологическую активность IAP.
Лекарственные кандидаты могут включать различные классы химических веществ, хотя обычно они представляют собой небольшие органические молекулы, имеющие молекулярную массу более чем 100 и менее чем около 2500 Дальтон. Кандидатные агенты обычно включают функциональные группы, необходимые для структурного взаимодействия с белками, например, для образования водородной связи и липофильного связывания, и обычно включают, по меньшей мере, амино, карбонильную, гидроксильную, простую эфирную или карбоксильную группы. Лекарственные кандидаты часто включают циклические углеродные или гетероциклические структуры и/или ароматические или полиароматические структуры, замещенные одной или несколькими функциональными группами.
Лекарственные средства-кандидаты могут быть получены из любого количества источников, включая библиотеки синтетических или природных соединений. Например, доступны различные средства для произвольного и прямого синтеза широкого ряда органических соединений и биомолекул, включающие экспрессию рандомизированных олигонуклеотидов. Альтернативно, библиотеки природных соединений в виде бактериальных, грибковых, растительных и животных экстрактов являются доступными или могут быть легко получены. Кроме того, природные или синтетически полученные библиотеки и соединения можно легко модифицировать традиционными химическими, физическими и биохимическими средствами.
Конкурентные скрининговые анализы можно осуществить путем сочетания BIR домена IAP и зонда с образованием комплекса зонд:BIR домен в первом образце с последующим добавлением исследуемого соединения из второго образца. В этом анализе определяют связывание исследуемого соединения, и изменение или разница в связывании между двумя образцами показывают присутствие исследуемого соединения, способного к связыванию с BIR доменом и потенциальной модуляции активности IAP.
Таким образом, в качестве аспекта по настоящему изобретению предложен зонд, содержащий соединение по изобретению и детектируемую метку или аффинную метку. Детектируемые метки включают любую химическую группу, которая может быть связана с соединением по настоящему изобретению, таким образом, что, когда соединение, содержащее метку, связано с BIR доменом, метка обеспечивает либо прямое, либо косвенное обнаружение соединения. Предпочтительно, метка также позволяет осуществить количественный анализ. Аффинные метки представляют собой группы, которые облегчают выделение или очистку соединений, к которым они присоединены.
Как здесь используется, термин "зонд" означает соединение Формулы 1 или его соль, которое является меченным либо обнаруживаемой меткой, либо аффинной меткой, и которое способно к связыванию либо ковалентно, либо нековалентно с BIR доменом IAP. Когда, например, зонд связан нековалентно, он может быть заменен исследуемым соединением. Когда, например, зонд связан ковалентно, его можно использовать для образования поперечно-связанных аддуктов, которые могут количественно определяться и ингибироваться исследуемым соединением.
В одном случае связывание исследуемого соединения определяют, используя анализы конкурентного связывания. В этом варианте осуществления зонд метят флуоресцентной меткой. В некоторых случаях может иметь место конкурентное связывание между исследуемым соединением и зондом. Исследуемые соединения, которые выявляют зонд, приводя к изменению во флюоресценции по сравнению с контролем, как полагают, связываются с BIR областью.
В одном случае исследуемое соединение может быть меченым. Либо исследуемое соединение, либо соединение по настоящему изобретению, или оба добавляются сначала к BIR домену IAP в течение времени, достаточного для обеспечения связывания с образованием комплекса.
Для образования комплекса зонд:BIR домен обычно требуется инкубация при температуре в пределах от 4°C до 40°C в течение времени от 10 минут до около 1 часа, что делает возможным осуществление высокопроизводительного скрининга. Любое избыточное количество реагентов обычно удаляют или вымывают. Затем добавляют исследуемое соединение и отслеживают присутствие или отсутствие меченого компонента, что является показателем связывания с BIR доменом.
В одном случае сначала добавляют зонд, а затем исследуемое соединение. Вытеснение зонда является показателем того, что исследуемое соединение связывается с BIR доменом и, таким образом, способно к связыванию и потенциальной модуляции активности IAP. Любой компонент может быть меченым. Например, присутствие зонда в промывочном растворе указывает на вытеснение зонда исследуемым соединением. Альтернативно, если исследуемое соединение является меченым, присутствие зонда на носителе указывает на его вытеснение.
В одном случае сначала можно добавить исследуемое соединение, с инкубацией и промывкой, с последующим добавлением зонда. Отсутствие связывания с зондом может указывать на то, что исследуемое соединение связывается с BIR доменом с высокой аффиностью. Так, если зонд определяют на носителе, в сочетании с отсутствием связывания исследуемого соединения это может указывать на то, что исследуемое соединение способно к связыванию с BIR доменом.
Модуляцию исследуют путем скрининга на способность исследуемого соединения модулировать активность IAP, и этот метод включает объединение исследуемого соединения с BIR доменом IAP, как описано выше, и определение изменения биологической активности IAP. Поэтому в этом случае исследуемое соединение должно связываться с BIR доменом (хотя это может и не быть необходимым), а также изменять его биологическую активность, описанную в настоящей заявке.
В анализах можно использовать положительные контроли и отрицательные контроли. Все контрольные и исследуемые образцы анализируют несколько раз для получения статистически значимых результатов. После инкубации все образцы промывают для удаления из них неспецифически связанных веществ и определяют количество связанного зонда. Например, когда используют радиометку, образцы считывают в сцинтилляционном счетчике для определения количества связанного соединения.
Обычно сигналы, которые обнаруживают в этом анализе, могут включать флуоресценцию, передачу энергии резонанса, разделенную по времени флуоресценцию, радиоактивность, поляризацию флуоресценции, плазменный резонанс или хемилюминесценцию и т.п., в зависимости от природы метки. Детектируемые метки, используемые для осуществления скрининговых анализов в настоящем изобретении, включают флуоресцентную метку, такую как Флуоресцеин, Орегон зеленый, дансил, родамин, тетраметилродамин, техас красный, Eu3+; хемилюминесцентную метку, такую как люцифераза; колориметрические метки; ферментативные маркеры; или радиоизотопы, такие как тритий, I125 и т.п. Аффинные метки, которые могут быть использованы для осуществления скрининговых анализов по настоящему изобретению, включают биотин, полигистидин и т.п.
ПРИМЕРЫ
В примерах используются следующие термины и абревиатуры, конструкции и общие способы:
Аббревиатуры и термины
Boc: трет-бутоксикарбонил;
Boc-Chg-OH: Boc-L-2(циклогексил)глицин
Boc-N-MeAla-OH: N-Boc-N-метилаланин
CBz: бензилоксикарбонил;
DIPEA: диизопропилэтиламин;
DMAP: 4-(диметиламино)пиридин;
ДМФ: N,N-диметилформамид;
DTT: дитиотреитол;
EDC: гидрохлорид 3-(диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимида;
EDTA: этилендиаминтетрауксусная кислота;
Fmoc: N-(9-флуоренилметоксикарбонил);
HBTU: O-(бензотриазол-1-ил)-N,N,N',N'-тетраметилуроний гексафторфосфат;
HCl: хлористоводородная кислота;
HOAc: уксусная кислота;
HOBt: 1-гидроксибензотриазол;
ВЭЖХ: высокоэффективная жидкостная хроматография;
LCMS: жидкостная хроматография-масс спектрометрия;
MeOH: метанол;
MgSO4: сульфат магния;
MS: масс-спектр;
Ms: метансульфонил;
NaHCO3: гидрокарбонат натрия;
Pd/C: палладий на углероде;
TEA: триэтиламин;
ТФУ: трифторуксусная кислота;
ТГФ: тетрагидрофуран;
TMEDA: N,N,N,N-тетраметилэтилендиамин;
Ts: пара-толуолсульфонил;
IC50: количество, концентрация, или доза конкретного соединения, которая показывает 50% от максимального ответа;
EC50 количество, концентрация, или доза
  конкретного соединения, которая показывает 50% ингибирования клеточной выживаемости
Молекулярные конструкции для экспрессии
GST-XIAP связанный BIR 3RING: XIAP кодирующую последовательность из аминокислот 246-497 клонировали в PGEX4T3 через BamH1 и AVA I. Плазмиду трансформировали в DH5α E. coli для использования в экспрессии и очистке белка.
GST-HIAP2(cIAP-1) линкер BIR 3:HIAP2 кодирующую последовательность из аминокислот 251-363 клонировали в PGex4T3 через BamH1 и XhoI. Плазмиду трансформировали в DH5α E. coli для использования в экспрессии и очистке белка.
GST-HIAP1(cIAP-2) линкер BIR3:HIAP1 кодирующую последовательность из аминокислот 236-349 клонировали в PGex4T3 через BamH1 и XhoI. Плазмиду трансформировали в DH5α E. coli для использования в экспрессии и очистке белка.
GST-линкер BIR 2 BIR3Ring: XIAP кодирующую последовательность из аминокислот 93-497 клонировали в PGex4T1 через BamH1 и XhoI. Аминокислоты 93-497 амплифицировали из полноразмерной XIAP в pGex4t3 с использованием праймеров: TTAATAGGATCCATCAACGGCTTTTATC и GCTGCATGTGTGTCAGAGG, используя стандартные условия ПЦР. ПЦР фрагмент TA клонировали в pCR-2.1 (Invitrogen). Линкер BIR2 BIR 3Ring субклонировали в pGex4T1 посредством расщепления при помощи BamHI/XhoI. Плазмиду трансформировали в DH5α E. coli для использования в экспрессии и очистке белка.
Полноразмерную XIAP человека, AEG плазмида номер 23. XIAP кодирующую последовательность из аминокислот 1-497 клонировали в GST вектор гибридизации, PGEX4T1, через сайты рестрикции BamH1 и Xho I. Плазмиду трансформировали в DH5α E. coli для использования в экспрессии и очистке белка.
GST-XIAP линкер BIR 2:XIAP линкер BIR 2 кодирующую последовательность из аминокислот 93-497 клонировали в pGex4T3 через BamHI и Xhol. Плазмиду трансформировали в DH5α E. coli для использования в экспрессии и очистке белка.
Экспрессия рекомбинантных белков
Глутатион S-трансфераза(GST)-меченные белки экспрессировали в Escherichia coli штаммах DH5-альфа. Для экспрессии полноразмерного XIAP отдельные или комбинации XIAP- BIR доменов, cIAP-1, cIAP-2 и Livin трансформированных бактерий культивировали в течение ночи при 37°C в среде Luria Broth (LB), дополненной 50 мкг/мл ампициллином. Культуру после культивирования в течение ночи затем 25-кратно разбавляли в свежей дополненной ампициллином среде LB, и бактерии выращивали до A600=0,6, затем индуцировали при помощи 1 мМ изопропил-D-1-тиогалактопиранозида в течение 3 часов. После индукции клетки центрифугировали при 5000 об/мин в течение 10 минут и среду удаляли. Каждый осадок после центрифугирования, полученный из 1 литра культуры, к которому было добавлено 10 мл буфера для лизиса (50 мМ Tris-HCl, 200 мМ NaCl, 1 мМ DTT, 1 мМ PMSF, 2 мг/мл лизозима, 100 мкг/мл)), инкубировали при 4°C при осторожном встряхивании. После 20 минут инкубации клеточную суспензию выдерживали при -80°C в течение ночи или до тех пор, пока не потребуется.
Очистка рекомбинантных белков
Для очистки рекомбинантных белков осадок оттаивали на льду и ресуспендировали в 25 мл лизирующего буфера (50 мМ Tris-HCl pH 7,6, 0,1 мМ EDTA, 100 мМ NaCl, 100 мкг/мл лизозима)/500 мл оригинальной культуры и инкубировали на льду в течение 15 минут, и выполняли 5 циклов циклов замораживания/оттаивание в жидком азоте и при 37°C на водяной бане. Смесь диспергировали ультразвуком с использованием соникатора проб до тех пор, пока суспензия перестала быть вязкой, и центрифугировали при 13000 об/мин в течение 20 минут для сбора растворимой фракции (супернатант).
Полученный супернатант смешивали с 3 мл глутатион-сефарозных шариков (Pharmacia) на 500 мл клеточной культуры (на 1000 мл культуры для полноразмерного XIAP) в течение 20 мин при 4°C. Затем шарики промывали 3 раза 1X Tris-забуференным физиологическим раствором (TBS) для удаления несвязанных белков. Оставшиеся белки элюировали при помощи 2 промывок по 1 мл 50 мМ Tris pH 8,0, содержащего 10 мМ восстановленного глутатиона. Элюированные белки хранили раздельно, и к ним добавляли соответствующие реагенты для хранения при -80°C. Анализ SDS-PAGE показал, что очищенные белки имели чистоту >90%. Для определения концентрации белка в очищенных белках использовали метод Bradford.
Белки с His-tag (гистидиновый таг) экспрессировали в клетках E. coli штамм AD494 с использованием конструкции pet28ACPP32. Растворимую белковую фракции получали описанным выше способом. Для очистки белка супернатант очищали при помощи аффинной хроматографии с использованием хелатирующего агента-сефарозы (Pharmacia) с загрузкой NiSO4 в соответствии с инструкциями изготовителя. Вкратце, супернатант загружали в сефарозу с загрузкой NiSO4 с 2 мл сефарозы в течение 20 мин при 4°C. Затем шарики промывали 3 раза 10 мМ MOPS, pH 7,0, содержащим 500 мМ NaCl для удаления несвязанных белков. Оставшиеся белки элюировали 2 мл элюирующего буфера (500 мМ имидазол в Tris pH 8,0) и к ним добавляли соответствующие реагенты для хранения при -80°C. Чистота элюированного белка составила >90%, как было определено при помощи анализа SDS-PAGE. Для определения концентрации белка в очищенных белках использовали метод Bradford.
Синтез зондов P1 и P2
Флуоресценный пептидный зонд P1, Fmoc-Ala-Val-Pro-Phe-Tyr(t-Bu)-Leu-Pro-Gly(t-Bu)-Gly-OH, получали с использованием стандартной Fmoc химии на 2-хлортритилхлоридной смоле (Int. J. Pept. Prot. Res. 38:555-561, 1991). Отщепление от смолы осуществляли с использованием 20% уксусной кислоты в дихлорметане (DCM), при этом боковая цепь все еще оставалась блокированной. C-концевую защищенную карбоновую кислоту связывали с 4'-(аминометил)флуоресцеином (Molecular Probes, A-1351; Eugene, Oreg.) с использованием избыточного количества диизопропилкарбодиимида (DIC) в диметилформамиде (ДМФА) при комнатной температуре и очищали хроматографией на силикагеле (10% метанола в DCM). N-концевую защитную группу Fmoc удаляли с использованием пиперидина (20%) в ДМФА и очищали хроматографией на силикагеле (20% метанола в DCM, 0,5% HOAc). В конце трет-бутильные защитные группы боковой цепи удаляли с использованием 95% раствора трифторуксусной кислоты, содержащего 2,5% воды и 2,5% триизопропилсилана, с получением зонда P1 (чистота >95%, ВЭЖХ).
Зонд P2 получали, используя способы, описанные в WO 2007/131366.
Figure 00000042
ПРИМЕР 1
Следующий пример иллюстрирует получение соединения 5-e, которое может быть использовано в качестве промежуточного соединения при получении соединения формулы 1 или его соли.
Схема 5: Синтез промежуточного соединения 5-e
Figure 00000043
Figure 00000044
Стадия 1: К раствору Boc-Chg-OH (9,16 г, 35,6 ммоль) в ДМФ, охлажденному до температуры 0°C, последовательно добавляли DIPEA (10,33 мл, 59,3 ммоль), HOBt (4,81 г, 35,6 ммоль) и HBTU (13,50 г, 35,6 ммоль). После перемешивания в течение 10 минут добавляли (S)-пролинол (3,0 г, 29,7 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Добавляли воду и этилацетат, органический слой отделяли, промывали 10%-ной лимонной кислотой, водным NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала промежуточное соединение 5-a в виде бесцветного масла.
Стадия 2: 4н. HCl в 1,4-диоксане (30 мл) добавляли к промежуточному соединению 5-a (10,10 г, 29,7 ммоль), и раствор перемешивали в течение 1 часа при комнатной температуре. Легко летучие продукты удаляли при пониженном давлении и остаток растирали в диэтиловом эфире с получением промежуточного соединения 5-b·HCl в виде твердого продукта белого цвета. MS (m/z) M+1=240,2.
Стадия 3: К раствору Boc-N-Me-Ala-OH (6,02 г, 29,6 ммоль) в ДМФ, охлажденному до температуры 0°C, последовательно добавляли DIPEA (20,70 мл, 118 ммоль), HOBt (6,35 г, 41,5 ммоль) и HBTU (14,61 г, 38,5 ммоль). После перемешивания в течение 10 минут добавляли промежуточное соединение 5-b·HCl (8,20 г, 29,6 ммоль), и реакционную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Добавляли воду и этилацетат, органический слой отделяли, промывали 10%-ной лимонной кислотой, водным NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала промежуточное соединение 5-c в виде бесцветного масла.
Стадия 4: К раствору промежуточного соединения 5-c (1,20 г, 2,82 ммоль) в CH2Cl2, охлажденному до температуры 0°C, последовательно добавляли гидрокарбонат натрия (2,36 г, 28,2 ммоль) и перйодинан Десс-Мартина (1,49 г, 3,52 ммоль), и затем реакционную смесь перемешивали в течение 2 часов при температуре 10°C. Добавляли водный NaHCO3 и этилацетат, органический слой отделяли, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме с получением промежуточного соединения 5-d в виде бесцветного масла.
Стадия 5: К раствору промежуточного соединения 5-d (500 мг, 1,18 ммоль) в CH2Cl2 добавляли фенетиламин (283 мкл, 1,88 ммоль). После перемешивания в течение 2 часов при комнатной температуре добавляли триацетоксиборгидрид натрия (300 мг, 1,41 ммоль) и метанол, и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Добавляли насыщенный водный раствор NaHCO3 и этилацетат, органический слой отделяли, промывали насыщенным солевым раствором, сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме с получением промежуточного соединения 5-e в виде бесцветного масла. MS (m/z) M+1=528,4.
ПРИМЕР 2
Следующий пример иллюстрирует получение соединения 6-h, которое может быть использовано в качестве промежуточного соединения при получении соединения формулы 1 или его соли.
Схема 6: Синтез промежуточного соединения 6-h
Figure 00000045
Стадия 1: К раствору N-(трет-бутоксикарбонил)-L-пролиналя 6-a (10,0 г, 50,2 ммоль) в дихлорметане (300 мл) добавляли фенетиламин (6,52 мл, 50,2 ммоль). После перемешивания в течение 2 часов при комнатной температуре, реакционную смесь охлаждали до температуры 0°C, добавляли по частям триацетоксиборгидрид натрия (21,0 г, 100,3 ммоль), и реакционную смесь затем перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Добавляли 10% водный Na2CO3, органический слой отделяли, водную фазу экстрагировали дихлорметаном, объединенные органические экстракты промывали насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме с получением промежуточного соединения 6-b в виде бесцветного масла. Промежуточное соединение 6-b растворяли в диэтиловом эфире (125 мл), раствор охлаждали до температуры 0°C и добавляли 1н. HCl в диэтиловом эфире (50,0 мл, 50,0 ммоль). Образовавшийся осадок и промежуточное соединение 6-b·HCl собирали с помощью фильтрации в виде твердого продукта белого цвета. MS (m/z) M+1=305,2.
Стадия 2: К раствору промежуточного соединения 6-b (6,11 г, 20,08 ммоль) в 1,4-диоксане (50,0 мл) и воде (50 мл), охлажденному до температуры 0°C, добавляли NaHCO3 (8,43 г, 100,0 ммоль). После перемешивания в течение 15 минут добавляли бензил хлорформиат (3,43 мл, 24,10 ммоль), и затем реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. Добавляли воду и этилацетат, органический слой отделяли, промывали насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала промежуточное соединение 6-c в виде бесцветного масла.
Стадия 3: К промежуточному соединению 6-c (8,41 г, 19,18 ммоль) при температуре 0°C добавляли 4н. HCl в 1,4-диоксане (67,1 мл), и раствор перемешивали в течение 2 часов при комнатной температуре. Легко летучие продукты удаляли при пониженном давлении и остаток растирали в диэтиловом эфире с получением промежуточного соединения 6-d·HCl в виде твердого продукта бежевого цвета. MS (m/z) M+1=339,3.
Стадия 4: К раствору промежуточного соединения 6-d (394 мг, 1,05 ммоль) в ДМФ, охлажденному до температуры 0°C, последовательно добавляли (S)-2-Boc-2-(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)уксусную кислоту (300 мг, 1,15 ммоль), HATU (520 мг, 1,36 ммоль), HOAt (48 мкл, 0,21 ммоль) и DIPEA (733 мкл, 4,21 ммоль), и затем реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония и этилацетат; органический слой отделяли, промывали насыщенным водным раствором хлорида аммония, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала ожидаемое промежуточное соединение 6-e в виде желтоватого масла.
Стадия 5: К промежуточному соединению 6-e (610 мг, 1,05 ммоль) при температуре 0°C добавляли 4н. HCl в 1,4-диоксане (3,68 мл), и раствор перемешивали при температуре 0°C в течение 4 часов. Легко летучие продукты удаляли при пониженном давлении и остаток растирали в диэтиловом эфире с получением ожидаемого промежуточного соединения 6-f·HCl в виде твердого продукта белого цвета. MS (m/z) M+1=480,4.
Стадия 6: К раствору промежуточного соединения 6-f·HCl (271 мг, 0,52 ммоль) в ДМФ, охлажденному до температуры 0°C, последовательно добавляли Boc-N-Me-Ala-OH (117 мг, 0,58 ммоль), HATU (240 мг, 0,63 ммоль), HOAt (175 мкл, 0,10 ммоль) и DIPEA (366 мкл, 2,10 ммоль), и затем реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. Добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония и этилацетат; органический слой отделяли, промывали насыщенным водным раствором хлорида аммония, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала ожидаемое промежуточное соединение 6-g в виде масла светло-желтого цвета.
Стадия 7: К раствору промежуточного соединения 6-g (277 мг, 0,41 ммоль) в ТГФ и перемешивали в атмосфере N2 добавляли 10% Pd/C (50% масс/масс содержание воды) (89 мг). Реакционную смесь продували H2 и перемешивали в течение 3 часов. Затем реакционную смесь фильтровали через целит и фильтрат концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала промежуточное соединение 6-h в виде бесцветного масла. MS (m/z) M+1=531,5.
ПРИМЕР 3
Следующий пример иллюстрирует получение соединения 7-d, которое может быть использовано в качестве промежуточного соединения при получении соединения формулы 1 или его соли.
Схема 7: Синтез промежуточного соединения 7-d
Figure 00000046
Стадия 1: К раствору промежуточного соединения 6-d HCl (95,90 г, 256 ммоль) в ДМФ (1300 мл), охлажденному до температуры 0°C, последовательно добавляли Boc-tBu-gly-OH (65,10 г, 281 ммоль), HOAt (42,6 мл, 25,6 ммоль), HATU (107 г, 281 ммоль) и DIPEA (179 мл, 1023 ммоль), и затем реакционную смесь перемешивали при температуре 0°C в течение 30 мин. Добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония и этилацетат; органический слой отделяли, промывали насыщенным водным раствором хлорида аммония, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала ожидаемое промежуточное соединение 7-a в виде бесцветного масла.
Стадия 2: К промежуточному соединению 7-a (141,00 г, 256 ммоль) в метаноле (130 мл) при температуре 0°C добавляли 4н. HCl в 1,4-диоксане (480 мл, и раствор перемешивали в течение 30 минут при температуре 0°C, затем в течение 3 часов при комнатной температуре. Легко летучие продукты удаляли при пониженном давлении, и остаток растирали в диэтиловом эфире с получением промежуточного соединения 7-b HCl в виде твердого продукта белого цвета. MS (m/z) M+1=452,4.
Стадия 3: К раствору промежуточного соединения 7-b HCl (85,00 г, 174 ммоль) в ДМФ (870 мл), охлажденному до температуры 0°C, последовательно добавляли Boc-N-Me-Ala-OH (38,90 г, 192 ммоль), HOAt (37,70, 22,64 ммоль), HATU (72,80 г, 56,3 ммоль) и DIPEA (122 мл, 192 ммоль), и затем реакционную смесь перемешивали при температуре 0°C в течение 1 часа. Добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония и этилацетат; органический слой отделяли, промывали насыщенным водным раствором хлорида аммония, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала ожидаемое промежуточное соединение 7-c в виде белой пены.
Стадия 4: К раствору промежуточного соединения 7-c (1,56 г, 2,45 ммоль) в метаноле и при перемешивании в атмосфере N2 добавляли 10% Pd/C (50% масс/масс содержание воды) (500 мг). Реакционную смесь продували H2 и перемешивали в течение 3 часов. Затем реакционную смесь фильтровали через целит, и фильтрат концентрировали в вакууме с получением промежуточного соединения 7-d в виде бесцветного масла. MS (m/z) M+1=503,5.
ПРИМЕР 4
Следующий пример иллюстрирует получение соединения 5, которое является соединением формулы 1, или его соли.
Схема 8: Синтез соединения 5
Figure 00000047
Стадия 1: К раствору промежуточного соединения 5-e (150 мг, 0,28 ммоль) в ДМФ, охлажденному до температуры 0°C, последовательно добавляли имидазо[1,2-a]пиримидин-2-карбоновую кислоту (56 мг, 0,34 ммоль), HATU (162 мг, 0,42 ммоль) и DIPEA (500 мкл, 2,87 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 2 часов при комнатной температуре. Добавляли воду и этилацетат; органический слой отделяли, промывали насыщенным водным раствором хлорида аммония, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала промежуточное соединение 8-a в виде твердого продукта белого цвета.
Стадия 2: К промежуточному соединению 8-a (99 мг, 0,14 ммоль) в этилацетате (0,5 мл) добавляли 4н. HCl в 1,4-диоксане (1,8 мл), и раствор перемешивали в течение 1 часа при комнатной температуре. Легко летучие продукты удаляли при пониженном давлении и остаток растирали в диэтиловом эфире с получением соединения 5·2HCl в виде твердого продукта белого цвета. MS (m/z) M+1=574,4.
ПРИМЕР 5
Следующий пример иллюстрирует получение соединения 3, которое является соединением формулы 1, или его соли.
Схема 9: Синтез соединения 3
Figure 00000048
Стадия 1: К раствору промежуточного соединения 6-h (221 мг, 0,41 ммоль) в ДМФ, охлажденному до температуры 0°C, последовательно добавляли имидазо[1,2-a]пиримидин-2-карбоновую кислоту (74,7 мг, 0,45 ммоль), HATU (206 мг, 0,54 ммоль) и DIPEA (218 мкл, 1,24 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 2 часов при комнатной температуре. Добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония и этилацетат; органический слой отделяли, промывали насыщенным водным раствором хлорида аммония, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала промежуточное соединение 9-a в виде бесцветного масла.
Стадия 2: К промежуточному соединению 9-a (107 мг, 0,15 ммоль) в этилацетате (0,5 мл) при температуре 0°C добавляли 4н. HCl в 1,4-диоксане (554 мкл), и раствор перемешивали в течение 1 часа при температуре 0°C. Легко летучие продукты удаляли при пониженном давлении и остаток растирали в диэтиловом эфире с получением соединения 3·HCl в виде твердого продукта белого цвета. MS (m/z) M+1=576,4.
ПРИМЕР 6
Следующий пример иллюстрирует получение соединения 6, которое является соединением формулы 1, или его соли.
Схема 10: Синтез соединения 6
Figure 00000049
Стадия 1: К раствору промежуточного соединения 7-d (1,97 г, 3,94 ммоль) в ДМФ, охлажденному до температуры 0°C, последовательно добавляли имидазо[1,2-a]пиримидин-2-карбоновую кислоту (642 мг, 3,94 ммоль), HATU (1,94 г, 5,12 ммоль) и DIPEA (2,05 мл, 11,81 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 2 часов при комнатной температуре. Добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония и этилацетат; органический слой отделяли, промывали насыщенным водным раствором хлорида аммония, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала промежуточное соединение 10-a в виде твердого продукта белого цвета.
Стадия 2: К промежуточному соединению 10-a (1,74 г, 2,69 ммоль) в этилацетате (5 мл) при температуре 0°C добавляли 4н. HCl в 1,4-диоксане (9,40 мл), и раствор перемешивали в течение 3 часов при температуре 0°C. Легко летучие продукты удаляли при пониженном давлении и остаток растирали в диэтиловом эфире с получением соединения 6·2HCl в виде твердого продукта белого цвета. MS (m/z) M+1=548,4.
ПРИМЕР 7
Следующий пример иллюстрирует получение соединения 9, которое является соединением формулы 1, или его соли.
Схема 11: Синтез соединения 9
Figure 00000050
Figure 00000051
Стадия 1: К раствору промежуточного соединения 7-d (200 мг, 0,39 ммоль) в дихлорметане, охлажденному до температуры 0°C, последовательно добавляли DIPEA (174 мкл, 0,99 ммоль) и этил 2-хлор-2-оксоацетат (109 мг, 0,79 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 3 часов при комнатной температуре. Добавляли 1н. HCl и этилацетат; органический слой отделяли, промывали насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала промежуточное соединение 11-a в виде твердого продукта белого цвета.
Стадия 2: К раствору промежуточного соединения 11-a (215 мг, 0,35 ммоль) в ТГФ, охлажденному до температуры 0°C, добавляли 2н водный раствор LiOH (1,0 мл, 2,0 ммоль), и реакционную смесь перемешивали в течение 1 часа при комнатной температуре. Добавляли 1н. HCl и этилацетат; органический слой отделяли, промывали насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме с получением промежуточного соединения 11-b в виде твердого продукта белого цвета.
Стадия 3: К раствору промежуточного соединения 11-b (200 мг, 0,34 ммоль) в ДМФ, охлажденному до температуры 0°C, последовательно добавляли анилин (41 мкл, 0,45 ммоль), DIPEA (61 мкл, 0,34 ммоль) и HATU (172 мг, 0,45 ммоль), и реакционную смесь перемешивали в течение 2 часов при температуре 0°C. Добавляли воду и этилацетат; органический слой отделяли, промывали 1н. водной HCl, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала промежуточное соединение 11-c в виде твердого продукта белого цвета.
Стадия 4: К раствору промежуточного соединения 11-c (230 мг, 0,35 ммоль) в дихлорметане (2 мл), охлажденному до температуры 0°C, добавляли ТФУ (2 мл), и затем реакционную смесь перемешивали при температуре 0°C в течение 1 часа. Легко летучие продукты удаляли при пониженном давлении и остаток растирали в диэтиловом эфире с получением соединения 9·ТФУ в виде твердого продукта белого цвета. MS (m/z) M+1=550,1.
ПРИМЕР 8
Следующий пример иллюстрирует получение соединения 12-g, которое может быть использовано в качестве промежуточного соединения при получении соединения формулы 1, или его соли.
Схема 12: Синтез промежуточного соединения 12-g
Figure 00000052
Figure 00000053
Стадия 1: К раствору N-(трет-бутоксикарбонил)-L-пролиналя 6-a (30,0 г, 151,0 ммоль) в дихлорметане (1000 мл) добавляли 2-(4-фторфенил)этанамин (19,79 мл, 151,0 ммоль). После перемешивания в течение 2 часов при комнатной температуре реакционную смесь охлаждали до температуры 0°C, добавляли по частям триацетоксиборгидрид натрия (38,3 г, 181,0 ммоль), и реакционную смесь затем перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Добавляли 10% водный Na2CO3 (800 мл), органический слой отделяли, водную фазу экстрагировали дихлорметаном, объединенные органические экстракты промывали насыщенным солевым раствором, сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме с получением промежуточного соединения 12-a в виде бесцветного масла. Промежуточное соединение 12-a растворяли в диэтиловом эфире (400 мл), раствор охлаждали до температуры 0°C и добавляли 1н. HCl в диэтиловом эфире (151,0 мл, 151,0 ммоль). Образовавшийся осадок и промежуточное соединение 12-a·HCl собирали с помощью фильтрации в виде твердого продукта белого цвета. MS (m/z) M+1=323,3.
Стадия 2: К раствору промежуточного соединения 12-a·HCl (40,0 г, 111,0 ммоль) в 1,4-диоксане (300 мл) и воде (300 мл), охлажденному до температуры 0°C, добавляли NaHCO3 (46,8 г, 557,0 ммоль). После перемешивания в течение 15 минут добавляли бензил хлорформиат (17,50 мл, 123,0 ммоль), и затем реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1,5 часов. Добавляли воду и этилацетат, органический слой отделяли, промывали насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме с получением промежуточного соединения 12-b в виде бесцветного масла.
Стадия 3: К промежуточному соединению 12-b (50,7 г, 111,0 ммоль) при температуре 0°C добавляли 4н. HCl в 1,4-диоксане (139 мл), и раствор перемешивали в течение 2,5 часов при температуре 0°C. Легко летучие продукты удаляли при пониженном давлении и остаток растирали в диэтиловом эфире и гексане с получением промежуточного соединения 12-c·HCl в виде белой пены. MS (m/z) M+1=357,3.
Стадия 4: К раствору промежуточного соединения 12-c·HCl (38,9 г, 99,0 ммоль) в ДМФ, охлажденному до температуры 0°C, последовательно добавляли Boc-tBu-gly-OH (15,07 г, 65,1 ммоль), HATU (48,9 г, 129,0 ммоль), HOAt (24,75 мл, 14,85 ммоль) и DIPEA (69,0 мл, 396,0 ммоль) по каплям в течение периода 30 минут, и затем реакционную смесь перемешивали при температуре 0°C в течение 1 часа. Добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония и этилацетат; органический слой отделяли, промывали насыщенным водным раствором хлорида аммония, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала ожидаемое промежуточное соединение 12-d в виде белой пены.
Стадия 5: К раствору промежуточного соединения 12-d (49,0 г, 86,0 ммоль) в этилацетате (10 мл) при температуре 0°C добавляли 4н. HCl в 1,4-диоксане (108 мл), и реакционную смесь перемешивали в течение 4 часов при температуре 0°C. Легко летучие продукты удаляли при пониженном давлении и остаток растирали в диэтиловом эфире с получением промежуточного соединения 12-e·HCl в виде белой пены. MS (m/z) M+1=470,5.
Стадия 6: К раствору промежуточного соединения 12-e·HCl (10,4 г, 20,55 ммоль) в ДМФ, охлажденному до температуры 0°C, последовательно по каплям добавляли Boc-HMe-Ala-OH (5,01 г, 24,66 ммоль), HATU (10,94 г, 28,8 ммоль), HOAt (5,14 мл, 3,08 ммоль) и DIPEA (14,32 мл, 82,0 ммоль) в течение периода 30 минут, и затем реакционную смесь перемешивали при температуре 0°C в течение 1 часа. Добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония и этилацетат; органический слой отделяли, промывали насыщенным водным раствором хлорида аммония, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала ожидаемое промежуточное соединение 12-f в виде белой пены.
Стадия 7: К раствору промежуточного соединения 12-f (8,50 г, 16,32 ммоль) в MeOH (100 мл) в атмосфере N2 добавляли 10% Pd/C (50% масс/масс содержание воды) (3,4 г). Реакционную смесь продували H2 и перемешивали в течение 1 часа. Затем реакционную смесь фильтровали через целит и фильтрат концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала промежуточное соединение 12-g в виде бесцветного масла. MS (m/z) M+1=521,5.
ПРИМЕР 9
Следующий пример иллюстрирует получение соединения 40, которое является соединением формулы 1, или его соли.
Схема 13: Синтез соединения 40
Figure 00000054
Стадия 1: К раствору промежуточного соединения 12-g (610 мг, 1,17 ммоль) в ДМФ, охлажденному до температуры 0°C, последовательно добавляли 1-метил-1H-имидазол-4-карбоновую кислоту (177 мг, 1,40 ммоль), HATU (624 мг, 1,64 ммоль) и DIPEA (816 мкл, 4,69 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при температуре 0°C в течение 2 часов. Добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония и этилацетат; органический слой отделяли, промывали насыщенным водным раствором хлорида аммония, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала промежуточное соединение 13-a в виде белой пены.
Стадия 2: К раствору промежуточного соединения 13-a (590 мг, 0,93 ммоль) в этилацетате (0,5 мл) добавляли 4н. HCl в 1,4-диоксане (2,3 мл), и смесь перемешивали в течение 3 часов при температуре 0°C. Легко летучие продукты удаляли при пониженном давлении и остаток растирали в диэтиловом эфире с получением соединения 40·2HCl в виде твердого продукта белого цвета. MS (m/z) M+1=529,5.
ПРИМЕР 10
Следующий пример иллюстрирует получение соединения 50, которое является соединением формулы 1, или его соли.
Схема 14: Синтез соединения 50
Figure 00000055
Figure 00000056
Стадия 1: К раствору промежуточного соединения 12-g (400 мг, 0,76 ммоль) в ДМФ, охлажденному до температуры 0°C, последовательно добавляли литиевую соль 1-фенил-1H-1,2,3-триазол-4-карбоновой кислоты (226 мг, 1,15 ммоль), HATU (467 мг, 1,23 ммоль) и DIPEA (535 мкл, 3,07 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при температуре 0°C в течение 2 часов. Добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония и этилацетат; органический слой отделяли, промывали насыщенным водным раствором хлорида аммония, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала промежуточное соединение 14-a в виде белой пены.
Стадия 2: К промежуточному соединению 14-a (282 мг, 0,40 ммоль) в этилацетате (1,0 мл) добавляли 4н. HCl в 1,4-диоксане (1,0 мл), и раствор перемешивали в течение 5 часов при температуре 0°C. Легко летучие продукты удаляли при пониженном давлении и остаток растирали в диэтиловом эфире с получением соединения 50·2HCl в виде твердого продукта белого цвета. MS (m/z) M+1=592,5.
ПРИМЕР 11
Следующий пример иллюстрирует получение соединения 63, которое является соединением формулы 1, или его соли.
Схема 15: Синтез соединения 63
Figure 00000057
Стадия 1: К раствору промежуточного соединения 12-g (15,17 г, 29,1 ммоль) в ДМФ, охлажденному до температуры 0°C, последовательно добавляли 6-фторимидазо[1,2-a]пиримидин-2-карбоновую кислоту, соль с HBr (86-c) (9,16 г, 35,0 ммоль), HATU (13,29 г, 35,0 ммоль) и DIPEA (20,0 мл, 117 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при температуре 0°C в течение 2 часов. Добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония и этилацетат; органический слой отделяли, промывали насыщенным водным раствором хлорида аммония, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала промежуточное соединение 15-a в виде белой пены.
Стадия 2: К промежуточному соединению 15-a (14,96 г, 21,88 ммоль) в этилацетате (11 мл) добавляли 4н. HCl в 1,4-диоксане (82,0 мл), и раствор перемешивали в течение 3 часов при температуре 0°C. Добавляли диэтиловый эфир, образовавшийся осадок и соединение 63·2HCl собирали с помощью фильтрации в виде твердого продукта белого цвета. MS (m/z) M+1=584,5.
ПРИМЕР 12
Следующий пример иллюстрирует получение соединения 66, которое является соединением формулы 1, или его соли.
Схема 16: Синтез соединения 66
Figure 00000058
Стадия 1: К раствору промежуточного соединения 12-g (350 мг, 0,67 ммоль) в ДМФ, охлажденному до температуры 0°C, последовательно добавляли литиевую соль 1-(4-фторфенил)-1H-имидазол-4-карбоновой кислоты (88-e) (208 мг, 1,0 ммоль), HATU (435 мг, 1,14 ммоль) и DIPEA (468 мкл, 2,69 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при температуре 0°C в течение 1 часа. Добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония и этилацетат; органический слой отделяли, промывали насыщенным водным раствором хлорида аммония, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала промежуточное соединение 16-a в виде белой пены.
Стадия 2: К промежуточному соединению 16-a (515 мг, 0,78 ммоль) в MeOH (0,5 мл) добавляли 4н. HCl в 1,4-диоксане (1,0 мл), и раствор перемешивали в течение 2 часов при температуре 0°C. Легко летучие продукты удаляли при пониженном давлении и остаток растирали в диэтиловом эфире с получением соединения 66·2HCl в виде твердого продукта белого цвета. MS (m/z) M+1=609,5.
ПРИМЕР 13
Следующий пример иллюстрирует получение соединения 67, которое является соединением формулы 1, или его соли.
Схема 17: Синтез соединения 67
Figure 00000059
Стадия 1: К раствору промежуточного соединения 12-g (856 мг, 1,64 ммоль) в ДМФ, охлажденному до температуры 0°C, последовательно добавляли литиевую соль 6,7-дигидро-5H-пирроло[1,2-a]имидазол-2-карбоновой кислоты (87-e) (340 мг, 2,13 ммоль), HATU (875 мг, 2,30 ммоль) и DIPEA (859 мкл, 4,93 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при температуре 0°C в течение 30 минут. Добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония и этилацетат; органический слой отделяли, промывали насыщенным водным раствором хлорида аммония, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала промежуточное соединение 17-a в виде белой пены.
Стадия 2: К промежуточному соединению 17-a (515 мг, 0,78 ммоль) в этилацетате (0,5 мл) добавляли 4н. HCl в 1,4-диоксане (1,0 мл), и раствор перемешивали в течение 2 часов при температуре 0°C. Легко летучие продукты удаляли при пониженном давлении и остаток растирали в диэтиловом эфире с получением соединения 67·2HCl в виде твердого продукта белого цвета. MS (m/z) M+1=555,6.
ПРИМЕР 14
Следующий пример иллюстрирует получение соединения 68, которое является соединением формулы 1, или его соли.
Схема 18: Синтез соединения 68
Figure 00000060
Figure 00000061
Стадия 1: К раствору промежуточного соединения 12-g (300 мг, 0,57 ммоль) в ДМФ, охлажденному до температуры 0°C, последовательно добавляли индолизин-2-карбоновую кислоту (107 мг, 0,66 ммоль), HATU (285 мг, 0,75 ммоль) и DIPEA (301 мкл, 1,72 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при температуре 0°C в течение 30 минут. Добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония и этилацетат; органический слой отделяли, промывали насыщенным водным раствором хлорида аммония, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала промежуточное соединение 18-a в виде белой пены.
Стадия 2: К промежуточному соединению 18-a (360 мг, 0,54 ммоль) в этилацетате (0,5 мл) добавляли 4н. HCl в 1,4-диоксане (1,0 мл), и раствор перемешивали в течение 2 часов при температуре 0°C. Легко летучие продукты удаляли при пониженном давлении и остаток растирали в диэтиловом эфире с получением соединения 68·HCl в виде твердого продукта белого цвета. MS (m/z) M+1=564,5.
ПРИМЕР 15
Следующий пример иллюстрирует получение соединения 62, которое является соединением формулы 1, или его соли.
Схема 19: Синтез соединения 62
Figure 00000062
Стадия 1: К раствору промежуточного соединения 12-g (300 мг, 0,57 ммоль) в ДМФ, охлажденному до температуры 0°C, последовательно добавляли бензо[d]оксазол-2-карбоксилат натрия (139 мг, 0,74 ммоль), HATU (263 мг, 0,69 ммоль) и DIPEA (401 мкл, 2,30 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при температуре 0°C в течение 2 часов. Добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония и этилацетат; органический слой отделяли, промывали насыщенным водным раствором хлорида аммония, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала промежуточное соединение 19-a в виде белой пены.
Стадия 2: К промежуточному соединению 19-a (294 мг, 0,44 ммоль) добавляли 4н. HCl в 1,4-диоксане (1,20 мл), и раствор перемешивали в течение 2 часов при температуре 0°C. Легко летучие продукты удаляли при пониженном давлении и остаток растирали в диэтиловом эфире с получением соединения 62·HCl в виде твердого продукта белого цвета. MS (m/z) M+1=566,5.
ПРИМЕР 16
Следующий пример иллюстрирует получение соединения 53, которое является соединением формулы 1, или его соли.
Схема 20: Синтез соединения 53
Figure 00000063
Стадия 1: К раствору (2S,4S)-1-(трет-бутоксикарбонил)-4-феноксипирролидин-2-карбоновой кислоты 20-a (1,40 г, 4,56 ммоль) в ТГФ, охлажденному до температуры 0°C, добавляли комплекс боран тетрагидрофуран (18,22 мл, 18,2 ммоль), реакционную смесь перемешивали при температуре 0°C в течение 15 минут и при комнатной температуре в течение ночи. Добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония и этилацетат; органический слой отделяли, промывали насыщенным водным раствором хлорида аммония, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме с получением промежуточного соединения 20-b в виде бесцветного масла.
Стадия 2: К раствору промежуточного соединения 20-b (1,33 г, 4,53 ммоль) в ДМСО (5,24 мл, 73,9 ммоль) и дихлорметане (10 мл) добавляли TEA (2,53 мл, 18,13 ммоль) и комплекс пиридин-триоксид серы (1,44 г, 9,07 ммоль), затем реакционную смесь перемешивали при температуре 0°C в течение 30 минут и при комнатной температуре в течение 30 минут. Добавляли воду и этилацетат; органический слой отделяли, промывали 10%-ной водной лимонной кислотой, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме с получением промежуточного соединения 20-c в виде бесцветного масла.
Стадия 3: К раствору промежуточного соединения 20-c (1,32 г, 4,53 ммоль) в дихлорметане добавляли 2-(4-фторфенил)этанамин (595 мкл, 4,53 ммоль). После перемешивания в течение 30 минут при температуре 0°C добавляли триацетоксиборгидрид натрия (1,21 г, 5,44 ммоль), и реакционную смесь затем перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Добавляли воду и этилацетат; органический слой отделяли, промывали 1н. водным NaOH, водой и насыщенным солевым раствором, сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме с получением промежуточного соединения 20-d в виде бесцветного масла.
Стадия 4: К раствору промежуточного соединения 20-d (1,87 г, 4,51 ммоль) в ДМФ, охлажденному до температуры 0°C, последовательно добавляли имидазо[1,2-a]пиримидин-2-карбоновую кислоту (1,21 г, 4,96 ммоль), HATU (2,05 г, 5,41 ммоль) и DIPEA (2,36 мл, 13,53 ммоль), и реакционную смесь затем перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония и этилацетат; органический слой отделяли, промывали насыщенным водным раствором хлорида аммония, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала промежуточное соединение 20-e в виде белой пены.
Стадия 5: К промежуточному соединению 20-e (800 мг, 1,43 ммоль) добавляли 4н. HCl в 1,4-диоксане (1,0 мл), и раствор перемешивали при температуре 0°C в течение 1 часа. Легко летучие продукты удаляли при пониженном давлении, и остаток растирали в диэтиловом эфире с получением промежуточного соединения 20-f·2HCl в виде твердого продукта белого цвета. MS (m/z) M+1=460,4.
Стадия 6: К раствору промежуточного соединения 20-f·2HCl (709 мг, 1,43 ммоль) в ДМФ, охлажденному до температуры 0°C, последовательно добавляли Boc-tBu-gly-OH (397 мг, 1,71 ммоль), HOAt (357 мкл, 0,21 ммоль), HATU (707 мг, 1,85 ммоль) и DIPEA (1,0 мл, 5,72 ммоль), и затем реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. Добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония и этилацетат; органический слой отделяли, промывали насыщенным водным раствором хлорида аммония, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала ожидаемое промежуточное соединение 20-g в виде белой пены.
Стадия 7: К промежуточному соединению 20-g (651 мг, 0,96 ммоль) добавляли 4н. HCl в 1,4-диоксане (1,0 мл), и раствор перемешивали в течение 1 часа при температуре 0°C. Легко летучие продукты удаляли при пониженном давлении и остаток растирали в диэтиловом эфире с получением промежуточного соединения 20-h·2HCl в виде твердого продукта белого цвета. MS (m/z) M+1=573,5.
Стадия 8: К раствору промежуточного соединения 20-h·2HCl (300 мг, 0,49 ммоль) в ДМФ, охлажденному до температуры 0°C, последовательно добавляли Boc-HMe-Ala-OH (140 мг, 0,69 ммоль), HOAt (123 мкл, 0,07 ммоль), HATU (281 мг, 0,73 ммоль) и DIPEA (344 мкл, 1,97 ммоль), и затем реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония и этилацетат; органический слой отделяли, промывали насыщенным водным раствором хлорида аммония, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала ожидаемое промежуточное соединение 20-i в виде белой пены.
Стадия 9: К промежуточному соединению 20-i (348 мг, 0,45 ммоль) добавляли 4н. HCl в 1,4-диоксане (1,0 мл), и раствор перемешивали в течение 1 часа при температуре 0°C. Легко летучие продукты удаляли при пониженном давлении и остаток растирали в диэтиловом эфире с получением соединения 53·2HCl в виде твердого продукта белого цвета. MS (m/z) M+1=658,5.
ПРИМЕР 17
Следующий пример иллюстрирует получение соединения 21-k, которое может быть использовано в качестве промежуточного соединения при получении соединения формулы 1 или его соли.
Схема 21: Синтез промежуточного соединения 21-k
Figure 00000064
Стадия 1: К раствору промежуточного соединения 21-a·HCl (10,0 г, 35,6 ммоль) в 1,4-диоксане (89 мл) и воде (89 мл), охлажденному до температуры 0°C, последовательно добавляли натрия бикарбонат (8,98 г, 107,0 ммоль) и бензил хлорформиат (6,72 г, 37,4 ммоль), и затем реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов. Добавляли диэтиловый эфир (200 мл); органический слой отделяли, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме с получением промежуточного соединения 21-b в виде бесцветного масла.
Стадия 2: К промежуточному соединению 21-b (13,0 г, 34,4 ммоль) добавляли 4н. HCl в 1,4-диоксане (30,0 мл), и раствор перемешивали в течение 1 часа при температуре 0°C. Легко летучие продукты удаляли при пониженном давлении, и остаток растирали в диэтиловом эфире с получением промежуточного соединения 21-c·HCl в виде твердого продукта белого цвета. MS (m/z) M+1=279,3.
Стадия 3: К раствору промежуточного соединения 21-c·HCl (10,52 г, 33,4 ммоль) в ДМФ, охлажденному до температуры 0°C, последовательно добавляли Boc-tBu-gly-OH (8,50 г, 36,8 ммоль), HOAt (5,57 мл, 3,34 ммоль), HATU (13,98 г, 36,8 ммоль) и DIPEA (23,35 мл, 134,0 ммоль), и затем реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов. Добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония и этилацетат; органический слой отделяли, промывали насыщенным водным раствором хлорида аммония, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала ожидаемое промежуточное соединение 21-d в виде бесцветного масла.
Стадия 4: К промежуточному соединению 21-d (15,8 г, 32,1 ммоль) добавляли 4н HCl в 1,4-диоксане (30,0 мл), и раствор перемешивали в течение 1 часа при температуре 0°C. Легко летучие продукты удаляли при пониженном давлении, и остаток растирали в диэтиловом эфире с получением промежуточного соединения 21-e·HCl в виде твердого продукта белого цвета. MS (m/z) M+1=392,5.
Стадия 5: К раствору промежуточного соединения 21-e·HCl (15,2 г, 35,5 ммоль) в ДМФ, охлажденному до температуры 0°C, последовательно добавляли Boc-HMe-Ala-OH (7,58 г, 37,3 ммоль), HOAt (5,92 мл, 3,55 ммоль), HATU (14,86 г, 39,1 ммоль) и DIPEA (24,8 мл, 142,0 ммоль), и затем реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. Добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония и этилацетат; органический слой отделяли, промывали насыщенным водным раствором хлорида аммония, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала ожидаемое промежуточное соединение 21-f в виде белой пены.
Стадия 6: К раствору промежуточного соединения 21-f (20,2 г, 35,0 ммоль) в ТГФ, охлажденному до температуры 0°C, добавляли боргидрид лития (1,60 г, 73,6 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. Добавляли воду и этилацетат; органический слой отделяли, промывали 10%-ной водной лимонной кислотой, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала промежуточное соединение 21-g в виде белой пены.
Стадия 7: К раствору промежуточного соединения 21-g (10,1 г, 18,41 ммоль) в ДМСО (5,23 мл, 73,6 ммоль) и дихлорметане (184 мл), охлажденному до температуры 0°C, добавляли DIPEA (11,22 мл, 64,4 ммоль) и комплекс пиридин триоксид серы (8,79 г, 55,2 ммоль), затем реакционную смесь перемешивали при температуре 0°C в течение 2 часов. Добавляли воду и этилацетат; органический слой отделяли, промывали 10%-ной водной лимонной кислотой, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме с получением промежуточного соединения 21-h в виде белой пены.
Стадия 8: К раствору промежуточного соединения 21-h (10,60 г, 19,39 ммоль) в дихлорметане добавляли 2-(4-фторфенил)этанамин (2,70 г, 19,39 ммоль). После перемешивания при комнатной температуре в течение ночи порциями при температуре 0°C добавляли триацетоксиборгидрид натрия (4,93 г, 23,27 ммоль), и реакционную смесь затем перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. Добавляли насыщенный водный раствор NaHCO3; органический слой отделяли, промывали насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме с получением промежуточного соединения 21-i в виде белой пены. MS (m/z) M+1=670,6.
Стадия 9: К раствору промежуточного соединения 21-i (10,0 г, 14,93 ммоль) и имидазо[1,2-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты, соль с HBr (84-c) (3,64 г, 14,93 ммоль) в ДМФ, охлажденному до температуры 0°C, последовательно добавляли HATU (6,24 г, 16,42 ммоль) и DIPEA (10,43 мл, 59,70 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. Добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония и этилацетат; органический слой отделяли, промывали насыщенным водным раствором хлорида аммония, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала промежуточное соединение 21-j в виде пены бежевого цвета.
Стадия 10: К раствору промежуточного соединения 21-j (2,75 г, 3,37 ммоль) в TEA (4,0 мл, 28,7 ммоль) последовательно добавляли хлорид палладия(II) (60 мг, 0,34 ммоль) и триэтилсилан (1,34 мл, 8,45 ммоль). Реакционную смесь продували H2 и перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. Затем реакционную смесь фильтровали через целит и фильтрат концентрировали в вакууме с получением промежуточного соединения 21-k в виде твердого продукта бежевого цвета. MS (m/z) M+1=681,7.
ПРИМЕР 18
Следующий пример иллюстрирует получение соединения 55, которое является соединением формулы 1, или его соли.
Схема 22: Синтез соединения 55
Figure 00000065
Figure 00000066
Стадия 1: К раствору промежуточного соединения 21-k (420 мг, 0,61 ммоль) в дихлорметане (2,0 мл), охлажденному до температуры 0°C, последовательно добавляли DIPEA (385 мкл, 2,20 ммоль), DMAP (4,50 мг, 0,03 ммоль) и ацетил хлорид (63 мкл, 0,88 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 часов. Добавляли воду и этилацетат; органический слой отделяли, промывали 10%-ной водной лимонной кислотой, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме с получением промежуточного соединения 22-a в виде твердого продукта белого цвета.
Стадия 2: К промежуточному соединению 22-a (230 мг, 0,32 ммоль) добавляли 4н. HCl в 1,4-диоксане (2,0 мл), и раствор перемешивали в течение 1 часа при температуре 0°C. Легко летучие продукты удаляли при пониженном давлении, и остаток растирали в диэтиловом эфире с получением соединения 55·2HCl в виде твердого продукта белого цвета. MS (m/z) M+1=623,5.
ПРИМЕР 19
Следующий пример иллюстрирует получение соединения 59, которое является соединением формулы 1, или его соли.
Схема 23: Синтез соединения 59
Figure 00000067
Стадия 1: К раствору промежуточного соединения 21-k (420 мг, 0,61 ммоль) в пиридине (4,0 мл), охлажденному до температуры 0°C, последовательно добавляли DIPEA (323 мкл, 1,85 ммоль), DMAP (3,8 мг, 0,03 ммоль) и бензолсульфонил хлорид (79 мкл, 0,61 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Добавляли воду и этилацетат; органический слой отделяли, промывали 10%-ной водной лимонной кислотой, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме с получением промежуточного соединения 23-a в виде твердого продукта белого цвета.
Стадия 2: К промежуточному соединению 23-a (100 мг, 0,12 ммоль) добавляли 4н. HCl в 1,4-диоксане (2,0 мл), и раствор перемешивали в течение 1 часа при температуре 0°C. Легко летучие продукты удаляли при пониженном давлении, и остаток растирали в диэтиловом эфире с получением соединения 59·2HCl в виде твердого продукта белого цвета. MS (m/z) M+1=721,5.
ПРИМЕР 20
Следующий пример иллюстрирует получение соединения 24-d, которое может быть использовано в качестве промежуточного соединения при получении соединения формулы 1 или его соли.
Схема 24: Синтез промежуточного соединения 24-d
Figure 00000068
Стадия 1: К раствору промежуточного соединения 12-c HCl (13,7 г, 34,9 ммоль) в ДМФ, охлажденному до температуры -10°C, последовательно добавляли Boc-Thr(Me)-OH (8,1 г, 34,9 ммоль), HATU (14,6 г, 38,4 ммоль), HOAt (63,9 мл, 38,4 ммоль) и DIPEA (24,4 мл, 139,0 ммоль), и затем реакционную смесь перемешивали при температуре 0°C в течение 1 часа. Добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония и этилацетат; органический слой отделяли, промывали насыщенным водным раствором хлорида аммония, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала ожидаемое промежуточное соединение 24-a в виде белой пены.
Стадия 2: 4н. HCl в 1,4-диоксане (94,0 мл) добавляли к промежуточному соединению 24-a (10,8 г, 18,9 ммоль) в этилацетате (10 мл) при температуре 0°C, и раствор перемешивали в течение 3 часов при температуре 0°C. Легко летучие продукты удаляли при пониженном давлении и остаток растирали в диэтиловом эфире с получением промежуточного соединения 24-b·HCl в виде белой пены. MS (m/z) M+1=472,5.
Стадия 3: К раствору промежуточного соединения 24-b·HCl (25,0 г, 49,2 ммоль) в ДМФ, охлажденному до температуры 0°C, последовательно добавляли Boc-NMe-Ala-OH (12,0 г, 59,0 ммоль), HATU (26,2 г, 68,9 ммоль), HOAt (12,3 мл, 7,38 ммоль) и DIPEA (34,3 мл, 197 ммоль), и затем реакционную смесь перемешивали при температуре 0°C в течение 1 часа. Добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония и этилацетат; органический слой отделяли, промывали насыщенным водным раствором хлорида аммония, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала ожидаемое промежуточное соединение 24-c в виде белой пены.
Стадия 4: К раствору промежуточного соединения 24-c (15,88 г, 23,67 ммоль) в MeOH (118 мл) в атмосфере N2 добавляли 10% Pd/C (50% масс/масс содержание воды) (3,53 г). Реакционную смесь продували H2 и перемешивали в течение 5 часов. Затем реакционную смесь фильтровали через целит и фильтрат концентрировали в вакууме с получением промежуточного соединения 24-d в виде бесцветного масла. MS (m/z) M+1=537,5.
ПРИМЕР 21
Следующий пример иллюстрирует получение соединения 58, которое является соединением формулы 1, или его соли.
Схема 25: Синтез соединения 58
Figure 00000069
Стадия 1: К раствору промежуточного соединения 24-d (15,0 г, 28,7 ммоль) в ДМФ, охлажденному до температуры 0°C, последовательно добавляли литиевую соль имидазо[1,2-a]пиридин-2-карбоновой кислоты (85-d) (5,79 г, 34,40 ммоль), HATU (13,10 г, 34,40 ммоль) и DIPEA (20,0 мл, 115,0 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при температуре 0°C в течение 3 часов. Добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония и этилацетат; органический слой отделяли, промывали насыщенным водным раствором хлорида аммония, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала промежуточное соединение 25-a в виде белой пены.
Стадия 2: К промежуточному соединению 25-a (12,30 г, 18,45 ммоль) добавляли 4н. HCl в 1,4-диоксане (69,20 мл) в этилацетате (9,20 мл), и раствор перемешивали в течение 3 часов при температуре 0°C. Добавляли диэтиловый эфир, образовавшийся осадок и соединение 58·2HCl собирали с помощью фильтрации в виде твердого продукта белого цвета. MS (m/z) M+1=567,5.
ПРИМЕР 22
Следующий пример иллюстрирует получение соединения 72, которое является соединением формулы 1, или его соли.
Схема 26: Синтез соединения 72
Figure 00000070
Стадия 1: К раствору промежуточного соединения 24-d (400 мг, 0,76 ммоль) в ДМФ, охлажденному до температуры 0°C, последовательно добавляли литиевую соль 1-(4-фторфенил)-1H-имидазол-4-карбоновой кислоты (88-e) (212 мг, 1,0 ммоль), HATU (437 мг, 1,14 ммоль) и DIPEA (400 мкл, 2,29 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 минут. Добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония и этилацетат; органический слой отделяли, промывали насыщенным водным раствором хлорида аммония, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала промежуточное соединение 26-a в виде белой пены.
Стадия 2: К промежуточному соединению 26-a (385 мг, 0,54 ммоль) в этилацетате (0,5 мл) добавляли 4н. HCl в 1,4-диоксане (1,30 мл), и раствор перемешивали в течение 2 часов при температуре 0°C. Легко летучие продукты удаляли при пониженном давлении и остаток растирали в диэтиловом эфире с получением соединения 72·2HCl в виде твердого продукта белого цвета. MS (m/z) M+1=611,5.
ПРИМЕР 23
Следующий пример иллюстрирует получение соединения 73, которое является соединением формулы 1, или его соли.
Схема 27: Синтез соединения 73
Figure 00000071
Figure 00000072
Стадия 1: К раствору промежуточного соединения 24-d (580 мг, 1,11 ммоль) в ДМФ, охлажденному до температуры 0°C, последовательно добавляли 1-метил-1H-имидазол-4-карбоновую кислоту (168 мг, 1,33 ммоль), HATU (591 мг, 1,55 ммоль) и DIPEA (581 мкл, 3,33 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при температуре 0°C в течение 1 часа. Добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония и этилацетат; органический слой отделяли, промывали насыщенным водным раствором хлорида аммония, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала промежуточное соединение 27-a в виде белой пены.
Стадия 2: К промежуточному соединению 27-a (510 мг, 0,81 ммоль) в этилацетате (0,5 мл) добавляли 4н. HCl в 1,4-диоксане (2,0 мл), и раствор перемешивали в течение 3 часов при температуре 0°C. Легко летучие продукты удаляли при пониженном давлении и остаток растирали в диэтиловом эфире с получением соединения 73·2HCl в виде твердого продукта белого цвета. MS (m/z) M+1=531,5.
ПРИМЕР 24
Следующий пример иллюстрирует получение соединения 75, которое является соединением формулы 1, или его соли.
Схема 28: Синтез соединения 75
Figure 00000073
Стадия 1: К раствору промежуточного соединения 24-d (1,8 г, 3,44 ммоль) в ДМФ, охлажденному до температуры 0°C, последовательно добавляли литиевую соль 6,7-дигидро-5-H-пирроло[1,2-a]имидазол-2-карбоновой кислоты (87-e) (743 мг, 4,48 ммоль), HATU (2,0 г, 5,51 ммоль) и DIPEA (1,80 мл, 10,33 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при температуре 0°C в течение 1 часа. Добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония и этилацетат; органический слой отделяли, промывали насыщенным водным раствором хлорида аммония, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала промежуточное соединение 28-a в виде белой пены.
Стадия 2: К промежуточному соединению 28-a (1,62 г, 2,46 ммоль) в этилацетате (1,0 мл) добавляли 4н. HCl в 1,4-диоксане (6,17 мл), и раствор перемешивали в течение 2 часов при температуре 0°C. Добавляли диэтиловый эфир, образовавшийся осадок и соединение 75·2HCl собирали с помощью фильтрации в виде твердого продукта белого цвета. MS (m/z) M+1=557,4.
ПРИМЕР 25
Следующий пример иллюстрирует получение соединения 74, которое является соединением формулы 1, или его соли.
Схема 29: Синтез соединения 74
Figure 00000074
Стадия 1: К раствору промежуточного соединения 24-d (956 мг, 1,82 ммоль) в ДМФ, охлажденному до температуры 0°C, последовательно добавляли 6-фторимидазо[1,2-a]пиримидин-2-карбоновую кислоту, соль с HBr (86-c) (575 мг, 2,19 ммоль), HATU (1,04 г, 2,74 ммоль) и DIPEA (958 мкл, 5,49 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при температуре 0°C в течение 1 часа. Добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония и этилацетат; органический слой отделяли, промывали насыщенным водным раствором хлорида аммония, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала промежуточное соединение 29-a в виде белой пены.
Стадия 2: К промежуточному соединению 29-a (1,0 г, 1,45 ммоль) в этилацетате (1,0 мл) добавляли 4н. HCl в 1,4-диоксане (3,65 мл), и раствор перемешивали в течение 2 часов при температуре 0°C. Добавляли диэтиловый эфир, образовавшийся осадок и соединение 74·2HCl собирали с помощью фильтрации в виде твердого продукта белого цвета. MS (m/z) M+1=586,4.
ПРИМЕР 26
Следующий пример иллюстрирует получение соединения 30-d, которое может быть использовано в качестве промежуточного соединения при получении соединения формулы 1 или его соли.
Схема 30: Синтез промежуточного соединения 30-d
Figure 00000075
Стадия 1: К раствору промежуточного соединения 12-c·HCl (13,7 г, 34,9 ммоль) в ДМФ, охлажденному до температуры -10°C, последовательно добавляли Boc-Thr(Et)-OH (8,1 г, 34,9 ммоль), HATU (14,6 г, 38,4 ммоль), HOAt (63,9 мл, 38,4 ммоль) и DIPEA (24,4 мл, 139,0 ммоль), и затем реакционную смесь перемешивали при температуре 0°C в течение 1 часа. Добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония и этилацетат; органический слой отделяли, промывали насыщенным водным раствором хлорида аммония, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала ожидаемое промежуточное соединение 30-a в виде белой пены.
Стадия 2: К промежуточному соединению 30-a (10,8 г, 18,9 ммоль) в этилацетате (10 мл) при температуре 0°C добавляли 4н. HCl в 1,4-диоксане (94,0 мл), и раствор перемешивали в течение 3 часов при температуре 0°C. Легко летучие продукты удаляли при пониженном давлении, и остаток растирали в диэтиловом эфире с получением промежуточного соединения 30-b·HCl в виде белой пены. MS (m/z) M+1=486,5.
Стадия 3: К раствору промежуточного соединения 30-b·HCl (25,0 г, 49,2 ммоль) в ДМФ, охлажденному до температуры 0°C, последовательно добавляли Boc-NMe-Ala-OH (12,0 г, 59,0 ммоль), HATU (26,2 г, 68,9 ммоль), HOAt (12,3 мл, 7,38 ммоль) и DIPEA (34,3 мл, 197 ммоль), и затем реакционную смесь перемешивали при температуре 0°C в течение 1 часа. Добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония и этилацетат; органический слой отделяли, промывали насыщенным водным раствором хлорида аммония, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала ожидаемое промежуточное соединение 30-c в виде белой пены.
Стадия 4: К раствору промежуточного соединения 30-c (15,88 г, 23,67 ммоль) в MeOH (118 мл) в атмосфере N2 добавляли 10% Pd/C (50% масс/масс содержание воды) (3,53 г). Реакционную смесь продували H2 и перемешивали в течение 1 часа. Затем реакционную смесь фильтровали через целит и фильтрат концентрировали в вакууме с получением промежуточного соединения 30-d в виде бесцветного масла. MS (m/z) M+1=537,5.
ПРИМЕР 27
Следующий пример иллюстрирует получение соединения 76, которое является соединением формулы 1, или его соли.
Схема 31: Синтез соединения 76
Figure 00000076
Стадия 1: К раствору промежуточного соединения 30-d (2,0 г, 3,73 ммоль) в ДМФ, охлажденному до температуры 0°C, последовательно добавляли 1-метил-1H-имидазол-4-карбоновую кислоту (564 мг, 4,47 ммоль), HATU (1,70 г, 4,47 ммоль) и DIPEA (2,60 мл, 14,91 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при температуре 0°C в течение 2 часов. Добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония и этилацетат; органический слой отделяли, промывали насыщенным водным раствором хлорида аммония, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала промежуточное соединение 31-a в виде белой пены.
Стадия 2: К промежуточному соединению 31-a (1,90 г, 2,95 ммоль) добавляли 4н. HCl в 1,4-диоксане (11,05 мл), и раствор перемешивали в течение 3 часов при температуре 0°C. Легко летучие продукты удаляли при пониженном давлении и остаток растирали в диэтиловом эфире с получением соединения 76·2HCl в виде твердого продукта белого цвета. MS (m/z) M+1=545,5.
ПРИМЕР 28
Следующий пример иллюстрирует получение соединения 78, которое является соединением формулы 1, или его соли.
Схема 32: Синтез соединения 78
Figure 00000077
Figure 00000078
Стадия 1: К раствору промежуточного соединения 30-d (2,0 г, 3,73 ммоль) в ДМФ, охлажденному до температуры 0°C, последовательно добавляли литиевую соль имидазо[1,2-a]пиридин-2-карбоновой кислоты (85-d) (752 мг, 4,47 ммоль), HATU (1,70 г, 4,47 ммоль) и DIPEA (2,60 мл, 14,91 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при температуре 0°C в течение 2 часов. Добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония и этилацетат; органический слой отделяли, промывали насыщенным водным раствором хлорида аммония, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала промежуточное соединение 32-a в виде белой пены.
Стадия 2: К промежуточному соединению 32-a (1,60 г, 2,35 ммоль) в этилацетате (0,783 мл) добавляли 4н. HCl в 1,4-диоксане (8,81 мл), и раствор перемешивали в течение 3 часов при температуре 0°C. Легко летучие продукты удаляли при пониженном давлении и остаток растирали в диэтиловом эфире с получением соединения 78·2HCl в виде твердого продукта белого цвета. MS (m/z) M+1=581,4.
ПРИМЕР 29
Следующий пример иллюстрирует получение соединения 79, которое является соединением формулы 1, или его соли.
Схема 33: Синтез соединения 79
Figure 00000079
Стадия 1: К раствору промежуточного соединения 30-d (1,6 г, 2,98 ммоль) в ДМФ, охлажденному до температуры 0°C, последовательно добавляли литиевую соль 1-(4-фторфенил)-1H-имидазол-4-карбоновой кислоты (88-e) (632 мг, 2,98 ммоль), HATU (1,36 г, 3,58 ммоль) и DIPEA (2,10 л, 11,93 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при температуре 0°C в течение 2 часов. Добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония и этилацетат; органический слой отделяли, промывали насыщенным водным раствором хлорида аммония, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала промежуточное соединение 33-a в виде белой пены.
Стадия 2: К промежуточному соединению 33-a (1,28 г, 1,76 ммоль) добавляли 4н. HCl в 1,4-диоксане (6,62 мл), и раствор перемешивали в течение 3 часов при температуре 0°C. Легко летучие продукты удаляли при пониженном давлении и остаток растирали в диэтиловом эфире с получением соединения 79·2HCl в виде твердого продукта белого цвета. MS (m/z) M+1=625,5.
ПРИМЕР 30
Следующий пример иллюстрирует получение соединения 80, которое является соединением формулы 1, или его соли.
Схема 34: Синтез соединения 80
Figure 00000080
Стадия 1: К раствору промежуточного соединения 30-d (1,60 г, 2,98 ммоль) в ДМФ, охлажденному до температуры 0°C, последовательно добавляли 6-фторимидазо[1,2-a]пиримидин-2-карбоновую кислоту, соль с HBr (86-c) (937 мг, 3,58 ммоль), HATU (1,36 г, 3,58 ммоль) и DIPEA (2,07 мл, 11,93 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при температуре 0°C в течение 2 часов. Добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония и этилацетат; органический слой отделяли, промывали насыщенным водным раствором хлорида аммония, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала промежуточное соединение 34-a в виде белой пены.
Стадия 2: К промежуточному соединению 34-a (1,48 г, 2,11 ммоль) добавляли 4н. HCl в 1,4-диоксане (7,93 мл), и раствор перемешивали в течение 3 часов при температуре 0°C. Добавляли диэтиловый эфир, образовавшийся осадок и соединение 80·2HCl собирали с помощью фильтрации в виде твердого продукта белого цвета. MS (m/z) M+1=600,5.
ПРИМЕР 31
Следующий пример иллюстрирует получение соединения 81, которое является соединением формулы 1, или его соли.
Схема 35: Синтез соединения 81
Figure 00000081
Figure 00000082
Стадия 1: К раствору промежуточного соединения 30-d (1,6 г, 2,98 ммоль) в ДМФ, охлажденному до температуры 0°C, последовательно добавляли литиевую соль 6,7-дигидро-5-H-пирроло[1,2-a]имидазол-2-карбоновой кислоты (87-e) (566 мг, 3,58 ммоль), HATU (1,36 г, 3,58 ммоль) и DIPEA (2,0 мл, 11,93 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при температуре 0°C в течение 2 часов. Добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония и этилацетат; органический слой отделяли, промывали насыщенным водным раствором хлорида аммония, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала промежуточное соединение 35-a в виде белой пены.
Стадия 2: К промежуточному соединению 35-a (1,45 г, 2,16 ммоль) добавляли 4н. HCl в 1,4-диоксане (6,48 мл), и раствор перемешивали в течение 3 часов при температуре 0°C. Добавляли диэтиловый эфир, образовавшийся осадок и соединение 81·2HCl собирали с помощью фильтрации в виде твердого продукта белого цвета. MS (m/z) M+1=571,5.
ПРИМЕР 32
Следующий пример иллюстрирует получение соединения 36-h, которое может быть использовано в качестве промежуточного соединения при получении соединения формулы 1 или его соли.
Схема 36: Синтез промежуточного соединения 36-h
Figure 00000083
Стадия 1: К раствору промежуточного соединения 21-a·HCl (15,0 г, 53,4 ммоль) в дихлорметане, охлажденному до температуры 0°C, последовательно добавляли DIPEA (37,3 мл, 214,0 ммоль), DMAP (326 мг, 2,67 ммоль) и бензоилхлорид (6,82 мл, 58,8 ммоль), и затем реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Добавляли воду и этилацетат, органический слой отделяли, промывали 10%-ной водной лимонной кислотой, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала ожидаемое промежуточное соединение 36-a в виде твердого продукта белого цвета.
Стадия 2: К промежуточному соединению 36-a (19,6 г, 56,3 ммоль) добавляли 4н. HCl в 1,4-диоксане (141,0 мл), и раствор перемешивали в течение 1 часа при температуре 0°C. Легко летучие продукты удаляли при пониженном давлении, и остаток растирали в диэтиловом эфире с получением промежуточного соединения 36-b·HCl в виде твердого продукта белого цвета. MS (m/z) M+1=249,2.
Стадия 3: К раствору промежуточного соединения 36-b·HCl (14,7 г, 51,6 ммоль) в ДМФ, охлажденному до температуры 0°C, последовательно добавляли Boc-tBu-Gly-OH (13,13 г, 56,8 ммоль), HOAt (8,60 мл, 5,16 ммоль), HATU (21,59 г, 56,8 ммоль) и DIPEA (36,1 мл, 207,0 ммоль), и затем реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов. Добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония и этилацетат; органический слой отделяли, промывали насыщенным водным раствором хлорида аммония, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала ожидаемое промежуточное соединение 36-c в виде бесцветного масла.
Стадия 4: К промежуточному соединению 36-c (24,0 г, 52,0 ммоль) добавляли 4н. HCl в 1,4-диоксане (130,0 мл), и раствор перемешивали в течение 1 часа при температуре 0°C. Легко летучие продукты удаляли при пониженном давлении, и остаток растирали в диэтиловом эфире с получением промежуточного соединения 36-d·HCl в виде твердого продукта белого цвета. MS (m/z) M+1=362,2.
Стадия 5: К раствору промежуточного соединения 36-d·HCl (10,73 г, 52,8 ммоль) в ДМФ, охлажденному до температуры 0°C, последовательно добавляли Boc-NMe-Ala-OH (10,73 г, 52,8 ммоль), HOAt (8,80 мл, 5,28 ммоль), HATU (22,07 г, 58,1 ммоль) и DIPEA (36,9 мл, 211,0 ммоль), и затем реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов. Добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония и этилацетат; органический слой отделяли, промывали насыщенным водным раствором хлорида аммония, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала ожидаемое промежуточное соединение 36-e в виде белой пены.
Стадия 6: К раствору промежуточного соединения 36-e (29,0 г, 53,0 ммоль) в ТГФ, охлажденному до температуры 0°C добавляли боргидрид лития (2,42 г, 111,0 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. Добавляли воду и этилацетат; органический слой отделяли, промывали 10%-ной водной лимонной кислотой, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала промежуточное соединение 36-f в виде белой пены.
Стадия 7: К раствору промежуточного соединения 36-f (25,8 г, 49,7 ммоль) в ДМСО (14,13 мл, 199,0 ммоль) и дихлорметан (200 мл), охлажденному до температуры 0°C, добавляли DIPEA (30,3 мл, 174,0 ммоль) и комплекс пиридин триоксид серы (23,75 г, 149,0 ммоль), затем реакционную смесь перемешивали при температуре 0°C в течение 1 часа. Добавляли воду и этилацетат; органический слой отделяли, промывали 10%-ной водной лимонной кислотой, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме с получением промежуточного соединения 36-g в виде белой пены.
Стадия 8: К раствору промежуточного соединения 36-g (25,7 г, 49,7 ммоль) в дихлорметане добавляли 2-(4-фторфенил)этанамин (6,21 мл, 47,4 ммоль). После перемешивания при комнатной температуре в течение ночи добавляли порциями при температуре 0°C триацетоксиборгидрид натрия (21,14 г, 95,0 ммоль), и реакционную смесь затем перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. Насыщенный водный раствор NaHCO3 добавляли; органический слой отделяли, промывали насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме с получением промежуточного соединения 36-h в виде белой пены. К раствору промежуточного соединения 36-h (27,4 г, 42,8 ммоль) в диэтиловом эфире (500 мл) добавляли 1н. HCl в диэтиловом эфире (52,1 мл, 52,1 ммоль), образовавшийся осадок и промежуточное соединение 36-h·HCl собирали с помощью фильтрации в виде твердого продукта белого цвета. MS (m/z) M+1=640,6.
ПРИМЕР 33
Следующий пример иллюстрирует получение соединения 49, которое является соединением формулы 1, или его соли.
Схема 37: Синтез соединения 49
Figure 00000084
Стадия 1: К раствору промежуточного соединения 36-h·HCl (2,0 г, 2,96 ммоль) в ДМФ, охлажденному до температуры 0°C, последовательно добавляли имидазо[1,2-a]пиримидин-2-карбоновую кислоту (507 мг, 3,11 ммоль), HATU (1,23 г, 3,25 ммоль) и DIPEA (2,06 мл, 11,83 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. Добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония и этилацетат; органический слой отделяли, промывали насыщенным водным раствором хлорида аммония, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала промежуточное соединение 37-a в виде белой пены.
Стадия 2: К промежуточному соединению 37-a (1,0 г, 1,27 ммоль) добавляли 4н. HCl в 1,4-диоксане (3,19 мл), и раствор перемешивали в течение 1 часа при температуре 0°C. Легко летучие продукты удаляли при пониженном давлении и остаток растирали в диэтиловом эфире с получением соединения 49·2HCl в виде твердого продукта белого цвета. MS (m/z) M+1=685,5.
ПРИМЕР 34
Следующий пример иллюстрирует получение соединения 69, которое является соединением формулы 1, или его соли.
Схема 38: Синтез соединения 69
Figure 00000085
Стадия 1: К раствору промежуточного соединения 36-h·HCl (2,0 г, 2,96 ммоль) в ДМФ, охлажденному до температуры 0°C, последовательно добавляли литиевую соль имидазо[1,2-a]пиридин-2-карбоновой кислоты (85-d) (525 мг, 3,11 ммоль), HATU (1,23 г, 3,25 ммоль) и DIPEA (2,06 мл, 11,83 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов. Добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония и этилацетат; органический слой отделяли, промывали насыщенным водным раствором хлорида аммония, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала промежуточное соединение 38-a в виде белой пены.
Стадия 2: К промежуточному соединению 38-a (1,24 г, 1,58 ммоль) добавляли 4н. HCl в 1,4-диоксане (3,19 мл), и раствор перемешивали в течение 1 часа при температуре 0°C. Легко летучие продукты удаляли при пониженном давлении, и остаток растирали в диэтиловом эфире с получением соединения 69·2HCl в виде твердого продукта белого цвета. MS (m/z) M+1=684,4.
ПРИМЕР 35
Следующий пример иллюстрирует получение соединения 86, которое является соединением формулы 1, или его соли.
Схема 39: Синтез соединения 86
Figure 00000086
Figure 00000087
Стадия 1: К раствору промежуточного соединения 36-h·HCl (2,0 г, 2,96 ммоль) в ДМФ, охлажденному до температуры 0°C, последовательно добавляли 1-метил-1H-имидазол-4-карбоновую кислоту (448 мг, 3,55 ммоль), HATU (1,23 г, 3,25 ммоль) и DIPEA (2,06 мл, 11,83 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов. Добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония и этилацетат; органический слой отделяли, промывали насыщенным водным раствором хлорида аммония, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала промежуточное соединение 39-a в виде белой пены.
Стадия 2: К промежуточному соединению 39-a (1,40 г, 1,87 ммоль) добавляли 4н. HCl в 1,4-диоксане (4,68 мл), и раствор перемешивали в течение 1 часа при температуре 0°C. Легко летучие продукты удаляли при пониженном давлении, и остаток растирали в диэтиловом эфире с получением соединения 86·2HCl в виде твердого продукта белого цвета. MS (m/z) M+1=648,5.
ПРИМЕР 36
Следующий пример иллюстрирует получение соединения 87, которое является соединением формулы 1, или его соли.
Схема 40: Синтез соединения 87
Figure 00000088
Стадия 1: К раствору промежуточного соединения 36-h·HCl (2,0 г, 2,96 ммоль) в ДМФ, охлажденному до температуры 0°C, последовательно добавляли литиевую соль 1-(4-фторфенил)-1H-имидазол-4-карбоновой кислоты (88-e) (662 мг, 3,11 ммоль), HATU (1,23 г, 3,25 ммоль) и DIPEA (2,06 мл, 11,83 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов. Добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония и этилацетат; органический слой отделяли, промывали насыщенным водным раствором хлорида аммония, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала промежуточное соединение 40-a в виде белой пены.
Стадия 2: К промежуточному соединению 40-a (1,40 г, 1,87 ммоль) добавляли 4н. HCl в 1,4-диоксане (5,92 мл), и раствор перемешивали в течение 1 часа при температуре 0°C. Легко летучие продукты удаляли при пониженном давлении, и остаток растирали в диэтиловом эфире с получением соединения 87·2HCl в виде твердого продукта белого цвета. MS (m/z) M+1=728,5.
ПРИМЕР 37
Следующий пример иллюстрирует получение соединения 89, которое является соединением формулы 1, или его соли.
Схема 41: Синтез соединения 89
Figure 00000089
Figure 00000090
Стадия 1: К раствору промежуточного соединения 36-h·HCl (2,0 г, 2,96 ммоль) в ДМФ, охлажденному до температуры 0°C, последовательно добавляли литиевую соль 6,7-дигидро-5-H-пирроло[1,2-a]имидазол-2-карбоновой кислоты (87-e) (589 мг, 3,55 ммоль), HATU (1,23 г, 3,25 ммоль) и DIPEA (2,06 мл, 11,83 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов. Добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония и этилацетат; органический слой отделяли, промывали насыщенным водным раствором хлорида аммония, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала промежуточное соединение 41-a в виде белой пены.
Стадия 2: К промежуточному соединению 41-a (1,02 г, 1,32 ммоль) добавляли 4н. HCl в 1,4-диоксане (3,29 мл), и раствор перемешивали в течение 1 часа при температуре 0°C. Легко летучие продукты удаляли при пониженном давлении и остаток растирали в диэтиловом эфире с получением соединения 89·2HCl в виде твердого продукта белого цвета. MS (m/z) M+1=674,5.
ПРИМЕР 38
Следующий пример иллюстрирует получение соединения 42-h, которое может быть использовано в качестве промежуточного соединения при получении соединения формулы 1 или его соли.
Схема 42: Синтез промежуточного соединения 42-h
Figure 00000091
Стадия 1: К раствору (2S, 4R)-метил 4-гидроксипирролидин-2-карбоксилата, HCl соли 42-a (4,0 г, 22,02 ммоль) в ДМФ, охлажденному до температуры 0°C, последовательно добавляли Boc-tBu-Gly-OH (6,11 г, 26,4 ммоль), HOAt (5,51 мл, 3,30 ммоль), HATU (10,89 г, 28,6 ммоль) и DIPEA (15,39 мл, 88,0 ммоль), и затем реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов. Добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония и этилацетат; органический слой отделяли, промывали насыщенным водным раствором хлорида аммония, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала ожидаемое промежуточное соединение 42-b в виде твердого продукта бежевого цвета.
Стадия 2: К промежуточному соединению 42-b (7,89 г, 22,0 ммоль) добавляли 4н. HCl в 1,4-диоксане (80 мл), и раствор перемешивали в течение 3 часов при температуре 0°C. Легко летучие продукты удаляли при пониженном давлении, и остаток растирали в диэтиловом эфире с получением промежуточного соединения 42-c·HCl в виде белой пены. MS (m/z) M+1=259,1.
Стадия 3: К раствору Boc-NMe-Ala-OH (7,16 г, 35,2 ммоль) в ДМФ, охлажденному до температуры 0°C, последовательно добавляли HOBt (5,73 г, 37,4 ммоль), HBTU (14,19 г, 37,4 ммоль) и DIPEA (19,23 мл, 40,0 ммоль). После перемешивания в течение 10 минут добавляли промежуточное соединение 42-c (6,49 г, 25,1 ммоль), и затем реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Добавляли воду и этилацетат; органический слой отделяли, промывали 10%-ной водной лимонной кислотой, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала ожидаемое промежуточное соединение 42-d в виде твердого продукта белого цвета.
Стадия 4: К раствору промежуточного соединения 42-d (2,32 г, 5,23 ммоль), 4-фторфенола (704 мг, 6,28 ммоль) и трифенилфосфина (1,92 г, 7,32 ммоль) в ТГФ добавляли по каплям DIAD (1,42 мл, 7,32 ммоль) и затем реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 дней. Диэтиловый эфир и гексан добавляли, образовавшийся осадок и трифенил фосфин оксид удаляли путем фильтрации. Легко летучие продукты удаляли при пониженном давлении и остаток очищали путем хроматографии на силикагеле с получением ожидаемого промежуточного соединения 42-e в виде бесцветного масла.
Стадия 5: К раствору промежуточного соединения 42-e (4,6 г, 8,56 ммоль) в ТГФ, охлажденному до температуры 0°C, добавляли боргидрид лития (559 мг, 25,7 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов. Добавляли воду и этилацетат; органический слой отделяли, промывали 10%-ной лимонной кислотой, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала промежуточное соединение 42-f в виде бесцветного масла.
Стадия 6: К раствору промежуточного соединения 42-f (4,2 г, 8,24 ммоль) в ДМСО (2,33 мл, 33,0 ммоль) и дихлорметане (80 мл), охлажденному до температуры 0°C, добавляли DIPEA (5,04 мл, 28,8 ммоль) и комплекс пиридин триоксид серы (3,94 г, 24,72 ммоль), затем реакционную смесь перемешивали при температуре 0°C в течение 1 часа. Добавляли воду и этилацетат; органический слой отделяли, промывали 10%-ной лимонной кислотой, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме с получением промежуточного соединения 42-g в виде твердого продукта бежевого цвета.
Стадия 7: К раствору промежуточного соединения 42-g (3,8 г, 7,49 ммоль) в дихлорметане добавляли 2-(4-фторфенил)этанамин (935 мкл, 7,13 ммоль). После перемешивания при комнатной температуре в течение ночи, порциями при температуре 0°C добавляли триацетоксиборгидрид натрия (3,18 г, 14,26 ммоль) и реакционную смесь затем перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. Добавляли насыщенный водный раствор NaHCO3; органический слой отделяли, промывали насыщенным солевым раствором, сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме с получением промежуточного соединения 42-g в виде масла желтого цвета. К раствору промежуточного соединения 42-g в диэтиловом эфире (100 мл) добавляли 1н. HCl в диэтиловом эфире (7,84 мл, 7,84 ммоль), образовавшийся осадок и промежуточное соединение 42-h·HCl собирали с помощью фильтрации в виде твердого продукта бежевого цвета. MS (m/z) M+1=631,5.
ПРИМЕР 39
Следующий пример иллюстрирует получение соединения 82, которое является соединением формулы 1, или его соли.
Схема 43: Синтез соединения 82
Figure 00000092
Figure 00000093
Стадия 1: К раствору промежуточного соединения 42-h·HCl (1,50 г, 2,24 ммоль) в ДМФ, охлажденному до температуры 0°C, последовательно добавляли 1-метил-1H-имидазол-4-карбоновую кислоту (397 мг, 3,15 ммоль), HATU (1,19 г, 3,15 ммоль) и DIPEA (1,57 мл, 8,99 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. Добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония и этилацетат; органический слой отделяли, промывали насыщенным водным раствором хлорида аммония, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала промежуточное соединение 43-a в виде белой пены.
Стадия 2: К промежуточному соединению 43-a (1,10 г, 1,48 ммоль) добавляли 4н. HCl в 1,4-диоксане (4,50 мл), и раствор перемешивали в течение 2 часов при температуре 0°C. Легко летучие продукты удаляли при пониженном давлении и остаток растирали в диэтиловом эфире с получением соединения 82·2HCl в виде твердого продукта белого цвета. MS (m/z) M+1=639,5.
ПРИМЕР 40
Следующий пример иллюстрирует получение соединения 83, которое является соединением формулы 1, или его соли.
Схема 44: Синтез соединения 83
Figure 00000094
Стадия 1: К раствору промежуточного соединения 42-h·HCl (1,40 г, 2,01 ммоль) в ДМФ, охлажденному до температуры 0°C, последовательно добавляли литиевую соль 6,7-дигидро-5-H-пирроло[1,2-a]имидазол-2-карбоновой кислоты (87-e) (447 мг, 2,94 ммоль), HATU (1,12 г, 2,94 ммоль) и DIPEA (1,46 мл, 8,39 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. Добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония и этилацетат; органический слой отделяли, промывали насыщенным водным раствором хлорида аммония, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала промежуточное соединение 44-a в виде белой пены.
Стадия 2: К промежуточному соединению 44-a (1,02 г, 1,33 ммоль) добавляли 4н. HCl в 1,4-диоксане (6,69 мл), и раствор перемешивали в течение 2 часов при температуре 0°C. Легко летучие продукты удаляли при пониженном давлении и остаток растирали в диэтиловом эфире с получением соединения 83·2HCl в виде твердого продукта белого цвета. MS (m/z) M+1=665,5.
ПРИМЕР 41
Следующий пример иллюстрирует получение соединения 84, которое является соединением формулы 1, или его соли.
Схема 45: Синтез соединения 84
Figure 00000095
Стадия 1: К раствору промежуточного соединения 42-h·HCl (2,0 г, 2,96 ммоль) в ДМФ, охлажденному до температуры 0°C, последовательно добавляли литиевую соль имидазо[1,2-a]пиридин-2-карбоновой кислоты (85-d) (494 мг, 2,94 ммоль), HATU (1,11 г, 2,94 ммоль) и DIPEA (1,46 мл, 8,39 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов. Добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония и этилацетат; органический слой отделяли, промывали насыщенным водным раствором хлорида аммония, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала промежуточное соединение 45-a в виде белой пены.
Стадия 2: К промежуточному соединению 45-a (926 мг, 1,19 ммоль) добавляли 4н. HCl в 1,4-диоксане (5,97 мл), и раствор перемешивали в течение 2 часов при температуре 0°C. Легко летучие продукты удаляли при пониженном давлении и остаток растирали в диэтиловом эфире с получением соединения 84·2HCl в виде твердого продукта белого цвета. MS (m/z) M+1=675,5.
ПРИМЕР 42
Следующий пример иллюстрирует получение соединения 10, которое является соединением формулы 1, или его соли.
Схема 46: Синтез соединения 10
Figure 00000096
Figure 00000097
Стадия 1: К раствору промежуточного соединения 12-a·HCl (25,0 г, 69,7 ммоль) в ДМФ, охлажденному до температуры 0°C, последовательно добавляли по каплям в течение периода 45 минут имидазо[1,2-a]пиримидин-2-карбоновую кислоту (13,64 г, 84,0 ммоль), HATU (34,4 г, 91,0 ммоль) и DIPEA (48,5 мл, 279,0 ммоль), и затем реакционную смесь перемешивали при температуре 0°C в течение 30 минут. Добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония и этилацетат; органический слой отделяли, промывали насыщенным водным раствором хлорида аммония, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала промежуточное соединение 46-a в виде пены бежевого цвета.
Стадия 2: К промежуточному соединению 46-a (32,0 г, 68,4 ммоль) добавляли 4н. HCl в 1,4-диоксане (171 мл), и раствор перемешивали в течение 1 часа при температуре 0°C. Добавляли диэтиловый эфир и промежуточное соединение 46-b·2HCl собирали с помощью фильтрации в виде твердого продукта белого цвета. MS (m/z) M+1=368,3.
Стадия 3: К раствору промежуточного соединения 46-b·2HCl (25,0 г, 56,8 ммоль) в ДМФ, охлажденному до температуры 0°C, последовательно добавляли по каплям в течение периода 30 минут Boc-tBu-gly-OH (14,44 г, 62,5 ммоль), HATU (28,1 г, 73,8 ммоль), HOAt (14,19 мл, 8,52 ммоль) и DIPEA (39,6 мл, 227,0 ммоль), и затем реакционную смесь перемешивали при температуре 0°C в течение 45 минут. Добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония и этилацетат; органический слой отделяли, промывали насыщенным водным раствором хлорида аммония, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала ожидаемое промежуточное соединение 46-c в виде белой пены.
Стадия 4: К промежуточному соединению 46-c (14,5 г, 24,97 ммоль) добавляли 4н. HCl в 1,4-диоксане (62,4 мл), и раствор перемешивали в течение 2 часов при температуре 0°C. Добавляли диэтиловый эфир и промежуточное соединение 46-d·2HCl собирали с помощью фильтрации в виде твердого продукта белого цвета. MS (m/z) M+1=481,5.
Стадия 5: К раствору промежуточного соединения 46-d·2HCl (13,8 г, 26,7 ммоль) в ДМФ, охлажденному до температуры 0°C, последовательно добавляли по каплям в течение периода 30 минут Boc-HMe-Ala-OH (5,97 г, 29,4 ммоль), HATU (13,19 г, 34,7 ммоль), HOAt (6,67 мл, 4,0 ммоль) и DIPEA (18,6 мл, 107,0 ммоль), и затем реакционную смесь перемешивали при температуре 0°C в течение 30 минут. Добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония и этилацетат; органический слой отделяли, промывали насыщенным водным раствором хлорида аммония, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала ожидаемое промежуточное соединение 46-e в виде белой пены.
Стадия 6: К промежуточному соединению 46-e (15,5 г, 23,28 ммоль) в этилацетате (5 мл) добавляли 4н. HCl в 1,4-диоксане (58,2 мл), и раствор перемешивали в течение 1,5 часов при температуре 0°C. Добавляли диэтиловый эфир, и соединение 10·2HCl собирали с помощью фильтрации в виде твердого продукта белого цвета. MS (m/z) M+1=566,5.
ПРИМЕР 43
Следующий пример иллюстрирует получение соединения 47-d, которое может быть использовано в качестве промежуточного соединения при получении соединения формулы 1 или его соли.
Схема 47: Синтез промежуточного соединения 47-d
Figure 00000098
Figure 00000099
Стадия 1: К раствору промежуточного соединения 12-c·HCl (29,57 г, 75,0 ммоль) в ДМФ, охлажденному до температуры 0°C, последовательно добавляли Boc-Chg-OH (22,27 г, 87,0 ммоль), HATU (42,9 г, 113,0 ммоль), HOAt (18,82 мл, 11,29 ммоль) и DIPEA (41,4 мл, 226,0 ммоль) в течение периода 30 минут, и затем реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. Добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония и этилацетат; органический слой отделяли, промывали насыщенным водным раствором хлорида аммония, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала ожидаемое промежуточное соединение 47-a в виде белой пены.
Стадия 2: К промежуточному соединению 47-a (44,7 г, 75,0 ммоль) в этилацетате (10 мл) при температуре 0°C добавляли 4н. HCl в 1,4-диоксане (188 мл), и раствор перемешивали в течение 4 часов при температуре 0°C. Легко летучие продукты удаляли при пониженном давлении и остаток растирали в диэтиловом эфире с получением промежуточного соединения 47-b·HCl в виде белой пены. MS (m/z) M+1=596,4.
Стадия 3: К раствору промежуточного соединения 47-b·HCl (25,8 г, 48,50 ммоль) в ДМФ, охлажденному до температуры 0°C, последовательно по каплям в течение периода 30 минут добавляли Boc-HMe-Ala-OH (11,33 г, 55,8 ммоль), HATU (25,8 г, 67,9 ммоль), HOAt (8,08 мл, 4,85 ммоль) и DIPEA (33,8 мл, 194,0 ммоль), и затем реакционную смесь перемешивали при температуре 0°C в течение 1 часа. Добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония и этилацетат; органический слой отделяли, промывали насыщенным водным раствором хлорида аммония, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала ожидаемое промежуточное соединение 47-c в виде белой пены.
Стадия 4: К раствору промежуточного соединения 47-c (23,7 г, 34,8 ммоль) в MeOH (100 мл) в атмосфере N2 добавляли 10% Pd/C (50% масс/масс содержание воды) (7,4 г). Реакционную смесь продували H2 и перемешивали в течение 2 часов. Затем реакционную смесь фильтровали через целит и фильтрат концентрировали в вакууме с получением промежуточного соединения 47-d в виде белой пены. MS (m/z) M+1=547,4.
ПРИМЕР 44
Следующий пример иллюстрирует получение соединения 20, которое является соединением формулы 1, или его соли.
Схема 48: Синтез соединения 20
Figure 00000100
Figure 00000101
Стадия 1: К раствору промежуточного соединения 47-d (17,9 г, 32,7 ммоль) в ДМФ, охлажденному до температуры 0°C, последовательно добавляли в течение периода 30 минут имидазо[1,2-a]пиримидин-2-карбоновую кислоту, соль с HBr (84-c) (9,59 г, 39,3 ммоль), HATU (18,67 г, 49,1 ммоль) и DIPEA (17,11 мл, 98,0 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при температуре 0°C в течение 1 часа. Добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония и этилацетат; органический слой отделяли, промывали насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала промежуточное соединение 48-a в виде белой пены.
Стадия 2: К промежуточному соединению 48-a (12,32 г, 17,81 ммоль) в этилацетате (10 мл) при температуре 0°C добавляли 4н. HCl в 1,4-диоксане (44,5 мл), и раствор перемешивали в течение 4 часов при температуре 0°C. Легко летучие продукты удаляли при пониженном давлении и остаток растирали в диэтиловом эфире с получением соединения 20·2HCl в виде твердого продукта белого цвета. MS (m/z) M+1=592,4.
ПРИМЕР 45
Следующий пример иллюстрирует получение соединения 103, которое является соединением формулы 1, или его соли.
Схема 49: Синтез соединения 103
Figure 00000102
Стадия 1: К раствору промежуточного соединения 47-d (500 мг, 0,91 ммоль) в ДМФ, охлажденному до температуры 0°C, последовательно добавляли 6-фторимидазо[1,2-a]пиримидин-2-карбоновую кислоту, соль с HBr (86-c) (276 мг, 1,05 ммоль), HATU (522 мг, 1,37 ммоль) и DIPEA (478 мкл, 2,74 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при температуре 0°C в течение 1 часа. Добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония и этилацетат; органический слой отделяли, промывали насыщенным водным раствором хлорида аммония, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала промежуточное соединение 49-a в виде белой пены.
Стадия 2: К промежуточному соединению 49-a (250 мг, 0,35 ммоль) в этилацетате (500 мкл) добавляли 4н. HCl в 1,4-диоксане (882 мкл), и раствор перемешивали в течение 2 часов при температуре 0°C. Легко летучие продукты удаляли при пониженном давлении и остаток растирали в диэтиловом эфире с получением соединения 103·2HCl в виде твердого продукта белого цвета. MS (m/z) M+1=610,3.
ПРИМЕР 46
Следующий пример иллюстрирует получение соединения 18, которое является соединением формулы 1, или его соли.
Схема 50: Синтез соединения 18
Figure 00000103
Стадия 1: К раствору промежуточного соединения 47-d (303 мг, 0,55 ммоль) в ДМФ, охлажденному до температуры 0°C, последовательно добавляли DIPEA (483 мкл, 2,77 ммоль) и имидазо[1,2-a]пиримидин-2-карбонил хлорид (250 мг, 1,38 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 минут. Добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония и этилацетат; органический слой отделяли, промывали насыщенным водным раствором хлорида аммония, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала промежуточное соединение 50-a в виде белой пены.
Стадия 2: К промежуточному соединению 50-a (366 мг, 0,53 ммоль) в метаноле (200 мкл) добавляли 4н. HCl в 1,4-диоксане (1,85 мл), и раствор перемешивали в течение 2 часов при температуре 0°C. Легко летучие продукты удаляли при пониженном давлении и остаток растирали в диэтиловом эфире с получением соединения 18·2HCl в виде твердого продукта белого цвета. MS (m/z) M+1=591,4.
ПРИМЕР 47
Следующий пример иллюстрирует получение соединения 120, которое является соединением Формулы 1.
Схема 51: Синтез соединения 120
Figure 00000104
Figure 00000105
Стадия 1: К раствору промежуточного соединения 47-d (500 мг, 0,91 ммоль) в ДМФ, охлажденному до температуры 0°C, последовательно добавляли 1-метил-1H-имидазол-4-карбоновую кислоту (138 мг, 1,09 ммоль), HATU (522 мг, 1,37 ммоль) и DIPEA (478 мкл, 2,74 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при температуре 0°C в течение 1 часа. Добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония и этилацетат; органический слой отделяли, промывали насыщенным водным раствором хлорида аммония, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала промежуточное соединение 51-a в виде белой пены.
Стадия 2: К промежуточному соединению 51-a (240 мг, 0,37 ммоль) в этилацетате (500 мкл) добавляли 4н. HCl в 1,4-диоксане (918 мкл), и раствор перемешивали в течение 2 часов при температуре 0°C. Легко летучие продукты удаляли при пониженном давлении и остаток растирали в диэтиловом эфире с получением соединения 120·2HCl в виде твердого продукта белого цвета. MS (m/z) M+1=555,3.
ПРИМЕР 48
Следующий пример иллюстрирует получение соединения 113, которое является соединением Формулы 1.
Схема 52: Синтез соединения 113
Figure 00000106
Стадия 1: К раствору промежуточного соединения 47-d (500 мг, 0,91 ммоль) в ДМФ, охлажденному до температуры 0°C, последовательно добавляли литиевую соль 6,7-дигидро-5-H-пирроло[1,2-a]имидазол-2-карбоновой кислоты (87-e) (152 мг, 915 ммоль), HATU (522 г, 1,37 ммоль) и DIPEA (478 мкл, 2,74 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при температуре 0°C в течение 1 часа. Добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония и этилацетат; органический слой отделяли, промывали насыщенным водным раствором хлорида аммония, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала промежуточное соединение 52-a в виде белой пены.
Стадия 2: К промежуточному соединению 52-a (373 мг, 0,54 ммоль) в этилацетате (500 мкл) добавляли 4н. HCl в 1,4-диоксане (1,37 мл), и раствор перемешивали в течение 2 часов при температуре 0°C. Добавляли диэтиловый эфир, образовавшийся осадок и соединение 113·2HCl собирали с помощью фильтрации в виде твердого продукта белого цвета. MS (m/z) M+1=581,3.
ПРИМЕР 49
Следующий пример иллюстрирует получение соединения 104, которое является соединением Формулы 1.
Схема 53: Синтез соединения 104
Figure 00000107
Стадия 1: К раствору промежуточного соединения 47-d (500 мг, 0,91 ммоль) в ДМФ, охлажденному до температуры 0°C, последовательно добавляли литиевую соль 1-(4-фторфенил)-1H-имидазол-4-карбоновой кислоты (88-e) (224 мг, 1,05 ммоль), HATU (522 мг, 1,37 ммоль) и DIPEA (478 мкл, 2,74 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при температуре 0°C в течение 1 часа. Добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония и этилацетат; органический слой отделяли, промывали насыщенным водным раствором хлорида аммония, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала промежуточное соединение 53-a в виде белой пены.
Стадия 2: К промежуточному соединению 53-a (260 мг, 0,35 ммоль) в этилацетате (0,5 мл) добавляли 4н. HCl в 1,4-диоксане (886 мкл), и раствор перемешивали в течение 2 часов при температуре 0°C. Легко летучие продукты удаляли при пониженном давлении и остаток растирали в диэтиловом эфире с получением соединения 104·2HCl в виде твердого продукта белого цвета. MS (m/z) M+1=635,3.
ПРИМЕР 50
Следующий пример иллюстрирует получение соединения 91, которое является соединением Формулы 1.
Схема 54: Синтез соединения 91
Figure 00000108
Стадия 1: К раствору промежуточного соединения 12-g (1,50 г, 2,88 ммоль) в ДМФ, охлажденному до температуры 0°C, последовательно добавляли литиевую соль 1-циклопентил-1H-имидазол-4-карбоновой кислоты (831 мг, 4,47 ммоль), HATU (1,31 г, 3,46 ммоль) и DIPEA (2,0 мл, 11,52 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при температуре 0°C в течение 2 часов. Добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония и этилацетат; органический слой отделяли, промывали насыщенным водным раствором хлорида аммония, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала промежуточное соединение 54-a в виде белой пены.
Стадия 2: К промежуточному соединению 54-a (1,20 г, 1,75 ммоль) в этилацетате (500 мкл) добавляли 4н. HCl в 1,4-диоксане (8,79 мл), и раствор перемешивали в течение 1,5 часа при температуре 0°C. Легко летучие продукты удаляли при пониженном давлении и остаток растирали в диэтиловом эфире с получением соединения 91·2HCl в виде твердого продукта белого цвета. MS (m/z) M+1=583,5.
ПРИМЕР 51
Следующий пример иллюстрирует получение соединения 93, которое является соединением Формулы 1.
Схема 55: Синтез соединения 93
Figure 00000109
Стадия 1: К раствору промежуточного соединения 12-g (1,40 г, 2,69 ммоль) в ДМФ, охлажденному до температуры 0°C, последовательно добавляли 1-циклогексил-1H-имидазол-4-карбоновую кислоту (783 мг, 4,03 ммоль), HATU (1,23 г, 3,23 ммоль) и DIPEA (1,87 мл, 10,76 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при температуре 0°C в течение 1 часа. Добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония и этилацетат; органический слой отделяли, промывали насыщенным водным раствором хлорида аммония, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала промежуточное соединение 55-a в виде белой пены.
Стадия 2: К промежуточному соединению 55-a (960 мг, 1,37 ммоль) в этилацетате (1,0 мл) добавляли 4н. HCl в 1,4-диоксане (5,17 мл), и раствор перемешивали в течение 1,5 часов при температуре 0°C. Легко летучие продукты удаляли при пониженном давлении и остаток растирали в диэтиловом эфире с получением соединения 93·2HCl в виде твердого продукта белого цвета. MS (m/z) M+1=597,4.
ПРИМЕР 52
Следующий пример иллюстрирует получение соединения 94, которое является соединением Формулы 1.
Схема 56: Синтез соединения 94
Figure 00000110
Стадия 1: К раствору промежуточного соединения 12-g (1,60 г, 3,07 ммоль) в ДМФ, охлажденному до температуры 0°C, последовательно добавляли литиевую соль 1-изопропил-1H-имидазол-4-карбоновой кислоты (734 мг, 4,76 ммоль), HATU (1,40 г, 3,69 ммоль) и DIPEA (2,14 мл, 12,29 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при температуре 0°C в течение 1 часа. Добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония и этилацетат; органический слой отделяли, промывали насыщенным водным раствором хлорида аммония, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала промежуточное соединение 56-a в виде белой пены.
Стадия 2: К промежуточному соединению 56-a (850 мг, 1,10 ммоль) в этилацетате (1,0 мл) добавляли 4н. HCl в 1,4-диоксане (4,14 мл), и раствор перемешивали в течение 2 часов при температуре 0°C. Легко летучие продукты удаляли при пониженном давлении и остаток растирали в диэтиловом эфире с получением соединения 94·2HCl в виде твердого продукта белого цвета. MS (m/z) M+1=557,4.
ПРИМЕР 53
Следующий пример иллюстрирует получение соединения 95, которое является соединением Формулы 1.
Схема 57: Синтез соединения 95
Figure 00000111
Стадия 1: К раствору промежуточного соединения 12-g (1,30 г, 2,49 ммоль) в ДМФ, охлажденному до температуры 0°C, последовательно добавляли литиевую соль 1-(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)-1H-имидазол-4-карбоновой кислоты (89-d) (656 мг, 3,25 ммоль), HATU (1,23 г, 3,25 ммоль) и DIPEA (1,74 мл, 10,0 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при температуре 0°C в течение 2 часов. Добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония и этилацетат; органический слой отделяли, промывали насыщенным водным раствором хлорида аммония, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала промежуточное соединение 57-a в виде белой пены.
Стадия 2: К промежуточному соединению 57-a (960 мг, 1,18 ммоль) в этилацетате (1,0 мл) добавляли 4н. HCl в 1,4-диоксане (4,43 мл), и раствор перемешивали в течение 2 часов при температуре 0°C. Легко летучие продукты удаляли при пониженном давлении и остаток растирали в диэтиловом эфире с получением соединения 95·2HCl в виде твердого продукта белого цвета. MS (m/z) M+1=599,4.
ПРИМЕР 54
Следующий пример иллюстрирует получение соединения 61, которое является соединением Формулы 1.
Схема 58: Синтез соединения 61
Figure 00000112
Стадия 1: К раствору промежуточного соединения 12-g (350 мг, 0,67 ммоль) в ДМФ, охлажденному до температуры 0°C, последовательно добавляли литиевую соль 1-фенил-1H-имидазол-4-карбоновой кислоты (190 мг, 1,0 ммоль), HATU (435 мг, 1,14 ммоль) и DIPEA (468 мкл, 2,69 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при температуре 0°C в течение 1 часа. Добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония и этилацетат; органический слой отделяли, промывали насыщенным водным раствором хлорида аммония, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала промежуточное соединение 58-a в виде белой пены.
Стадия 2: К промежуточному соединению 58-a (345 мг, 0,50 ммоль) в метаноле (500 мкл) добавляли 4н. HCl в 1,4-диоксане (1,25 мл), и раствор перемешивали в течение 2 часов при температуре 0°C. Легко летучие продукты удаляли при пониженном давлении и остаток растирали в диэтиловом эфире с получением соединения 61·2HCl в виде твердого продукта белого цвета. MS (m/z) M+1=591,5.
ПРИМЕР 55
Следующий пример иллюстрирует получение соединения 122, которое является соединением Формулы 1.
Схема 59: Синтез соединения 122
Figure 00000113
Стадия 1: К раствору промежуточного соединения 12-g (213 мг, 0,41 ммоль) в ДМФ, охлажденному до температуры 0°C, последовательно добавляли 1-фенил-1H-пиррол-3-карбоновую кислоту (90-c) (100 мг, 0,53 ммоль), HATU (203 мг, 0,53 ммоль) и DIPEA (286 мкл, 1,64 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при температуре 0°C в течение 1 часа. Добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония и этилацетат; органический слой отделяли, промывали насыщенным водным раствором хлорида аммония, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала промежуточное соединение 59-a в виде белой пены.
Стадия 2: К промежуточному соединению 59-a (244 мг, 0,32 ммоль) в этилацетате (325 мкл) добавляли 4н. HCl в 1,4-диоксане (1,22 мл), и раствор перемешивали в течение 2 часов при температуре 0°C. Легко летучие продукты удаляли при пониженном давлении и остаток растирали в диэтиловом эфире с получением соединения 122·2HCl в виде твердого продукта белого цвета. MS (m/z) M+1=590,2.
ПРИМЕР 56
Следующий пример иллюстрирует получение соединения 109, которое является соединением Формулы 1.
Схема 60: Синтез соединения 109
Figure 00000114
Стадия 1: К раствору промежуточного соединения 12-g (229 мг, 0,44 ммоль) в ДМФ, охлажденному до температуры 0°C, последовательно добавляли 5-фенил-1H-имидазол-2-карбоновую кислоту (195 мг, 0,87 ммоль), HATU (220 мг, 0,57 ммоль) и DIPEA (310 мкл, 1,78 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при температуре 0°C в течение 1 часа. Добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония и этилацетат; органический слой отделяли, промывали насыщенным водным раствором хлорида аммония, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала промежуточное соединение 60-a в виде белой пены.
Стадия 2: К промежуточному соединению 60-a (307 мг, 0,44 ммоль) в этилацетате (445 мкл) добавляли 4н. HCl в 1,4-диоксане (2,22 мл), и раствор перемешивали в течение 2 часов при температуре 0°C. Легко летучие продукты удаляли при пониженном давлении и остаток растирали в диэтиловом эфире с получением соединения 109·2HCl в виде твердого продукта белого цвета. MS (m/z) M+1=591,2.
ПРИМЕР 57
Следующий пример иллюстрирует получение соединения 90, которое является соединением Формулы 1.
Схема 61: Синтез соединения 90
Figure 00000115
Стадия 1: К раствору промежуточного соединения 12-g (598 мг, 0,44 ммоль) в ДМФ, охлажденному до температуры 0°C, последовательно добавляли 1-фенил-1H-пиразол-4-карбоновую кислоту (217 мг, 1,15 ммоль), HATU (526 мг, 1,38 ммоль) и DIPEA (803 мкл, 4,61 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при температуре 0°C в течение 2 часов. Добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония и этилацетат; органический слой отделяли, промывали насыщенным водным раствором хлорида аммония, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала промежуточное соединение 61-a в виде белой пены.
Стадия 2: К промежуточному соединению 61-a (577 мг, 0,83 ммоль) в этилацетате (500 мкл) добавляли 4н. HCl в 1,4-диоксане (3,13 мл), и раствор перемешивали в течение 2 часов при температуре 0°C. Легко летучие продукты удаляли при пониженном давлении и остаток растирали в диэтиловом эфире с получением соединения 90·2HCl в виде твердого продукта белого цвета. MS (m/z) M+1=591,4.
ПРИМЕР 58
Следующий пример иллюстрирует получение соединения 88, которое является соединением Формулы 1.
Схема 62: Синтез соединения 88
Figure 00000116
Стадия 1: К раствору промежуточного соединения 12-g (1,2 г, 2,30 ммоль) в ДМФ, охлажденному до температуры 0°C, последовательно добавляли 5-фенил-1H-пиразол-3-карбоновую кислоту (455 мг, 2,42 ммоль), HATU (1,0 г, 2,77 ммоль) и DIPEA (1,60 мл, 9,22 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при температуре 0°C в течение 2 часов. Добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония и этилацетат; органический слой отделяли, промывали насыщенным водным раствором хлорида аммония, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала промежуточное соединение 62-a в виде твердого продукта белого цвета.
Стадия 2: К промежуточному соединению 62-a (850 мг, 1,23 ммоль) в этилацетате (500 мкл) добавляли 4н. HCl в 1,4-диоксане (6,15 мл), и раствор перемешивали в течение 1,5 часа при температуре 0°C. Легко летучие продукты удаляли при пониженном давлении и остаток растирали в диэтиловом эфире с получением соединения 88·2HCl в виде твердого продукта белого цвета. MS (m/z) M+1=591,4.
ПРИМЕР 59
Следующий пример иллюстрирует получение соединения 117, которое является соединением Формулы 1.
Схема 63: Синтез соединения 117
Figure 00000117
Стадия 1: К раствору промежуточного соединения 12-g (1,0 г, 1,92 ммоль) в ДМФ, охлажденному до температуры 0°C, последовательно добавляли натриевую соль 5-фенил-1,3,4-оксадиазол-2-карбоновой кислоты (91-c) (1,36 г, 6,41 ммоль), HATU (2,19 г, 5,76 ммоль) и DIPEA (1,34 мл, 7,68 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония и этилацетат; органический слой отделяли, промывали насыщенным водным раствором хлорида аммония, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала промежуточное соединение 63-a в виде твердого продукта белого цвета.
Стадия 2: К промежуточному соединению 63-a (453 мг, 0,65 ммоль) добавляли 4н. HCl в 1,4-диоксане (10,0 мл), и раствор перемешивали в течение 3 часов при температуре 0°C. Легко летучие продукты удаляли при пониженном давлении и остаток растирали в диэтиловом эфире с получением соединения 117·2HCl в виде твердого продукта белого цвета. MS (m/z) M+1=593,2.
ПРИМЕР 60
Следующий пример иллюстрирует получение соединения 115, которое является соединением Формулы 1.
Схема 64: Синтез соединения 115
Figure 00000118
Figure 00000119
Стадия 1: К раствору промежуточного соединения 12-g (847 г, 1,62 ммоль) в ДМФ, охлажденному до температуры 0°C, последовательно добавляли 5-фенилизоксазол-3-карбоновую кислоту (431 мг, 2,27 ммоль), HATU (1,05 г, 2,77 ммоль) и DIPEA (1,13 мл, 6,51 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония и этилацетат; органический слой отделяли, промывали насыщенным водным раствором хлорида аммония, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала промежуточное соединение 64-a в виде белой пены.
Стадия 2: К промежуточному соединению 64-a (356 мг, 0,51 ммоль) добавляли 4н. HCl в 1,4-диоксане (5,0 мл), и раствор перемешивали в течение 2 часов при температуре 0°C. Добавляли диэтиловый эфир, образовавшийся осадок и соединение 115·2HCl собирали с помощью фильтрации в виде твердого продукта белого цвета. MS (m/z) M+1=592,1.
ПРИМЕР 61
Следующий пример иллюстрирует получение соединения 65-i, которое может быть использовано в качестве промежуточного соединения при получении соединения формулы 1, или его соли.
Схема 65: Синтез промежуточного соединения 65-i
Figure 00000120
Стадия 1: К раствору (2S,4R)-1-Boc-2-метил-4-гидроксипирролидин-2-карбоксилата (18,0 г, 73,4 ммоль), 4-фторфенола (9,05 г, 81,0 ммоль) и трифенилфосфина (21,17 г, 81,0 ммоль) в ТГФ добавляли по каплям DIAD (17,07 г, 84,0 ммоль) в ТГФ (20 мл), и затем реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 дней. Добавляли диэтиловый эфир и гексан, образовавшийся осадок и трифенилфосфиноксид удаляли путем фильтрации. Легко летучие продукты удаляли при пониженном давлении, и остаток очищали путем хроматографии на силикагеле с получением ожидаемого промежуточного соединения 65-b в виде твердого продукта желтого цвета.
Стадия 2: К промежуточному соединению 65-b (21,2 г, 62,5 ммоль) добавляли 4н. HCl в 1,4-диоксане (78 мл, 312 ммоль), и раствор перемешивали в течение 1 часа при температуре 0°C и затем 30 минут при комнатной температуре. Добавляли диэтиловый эфир, образовавшийся осадок и промежуточное соединение 65-c·HCl собирали с помощью фильтрации в виде твердого продукта белого цвета. MS (m/z) M+1=240,0.
Стадия 3: К раствору промежуточного соединения 65-c·HCl (14,2 г, 51,5 ммоль) в ДМФ, охлажденному до температуры 0°C, последовательно добавляли Boc-Thr(Me)-OH (13,22 г, 56,7 ммоль), HATU (21,54 г, 56,7 ммоль), HOAt (8,58 мл, 5,15 ммоль) и DIPEA (36,0 мл, 206 ммоль), и затем реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов. Добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония и этилацетат; органический слой отделяли, промывали насыщенным водным раствором хлорида аммония, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала ожидаемое промежуточное соединение 65-d в виде белой пены.
Стадия 4: К промежуточному соединению 65-d (23,0 г, 50,6 ммоль) добавляли 4н. HCl в 1,4-диоксане (63,3 мл), и раствор перемешивали в течение 1 часа при температуре 0°C, и затем 30 минут при комнатной температуре. Добавляли диэтиловый эфир, образовавшийся осадок и промежуточное соединение 65-e·HCl собирали с помощью фильтрации в виде твердого продукта белого цвета. MS (m/z) M+1=355,2.
Стадия 5: К раствору промежуточного соединения 65-e·HCl (16,2 г, 41,4 ммоль) в ДМФ, охлажденному до температуры 0°C, последовательно добавляли Boc-HMe-Ala-OH (9,27 г, 45,6 ммоль), HATU (1734 г, 45,6 ммоль), HOAt (6,91 мл, 4,14 ммоль) и DIPEA (29,0 мл, 166,0 ммоль), и затем реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов. Добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония и этилацетат; органический слой отделяли, промывали насыщенным водным раствором хлорида аммония, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала ожидаемое промежуточное соединение 65-f в виде белой пены.
Стадия 6: К раствору промежуточного соединения 65-f (23,0 г, 42,6 ммоль) в ТГФ, охлажденному до температуры 0°C, добавляли боргидрид лития (1,95 г, 90,0 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Добавляли воду и этилацетат; органический слой отделяли, промывали 10%-ной водной лимонной кислотой, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала промежуточное соединение 65-g в виде белой пены.
Стадия 7: К раствору промежуточного соединения 65-g (8,7 г, 17,01 ммоль) в ДМСО (4,83 мл, 68,0 ммоль) и дихлорметане (150 мл), охлажденному до температуры 0°C, добавляли DIPEA (10,40 мл, 59,5 ммоль) и комплекс пиридин триоксид серы (8,12 г, 51,0 ммоль), затем реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Добавляли воду и этилацетат; органический слой отделяли, промывали 10%-ной лимонной кислотой, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме с получением промежуточного соединения 65-h в виде белой пены.
Стадия 8: К раствору промежуточного соединения 65-h (8,0 г, 15,70 ммоль) в дихлорметане добавляли 2-(4-фторфенил)этанамин (1,87 мл, 14,3 ммоль). После перемешивания при комнатной температуре в течение 2 часов, добавляли порциями триацетоксиборгидрид натрия (6,37 г, 28,5 ммоль), и реакционную смесь затем перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. Добавляли насыщенный водный раствор NaHCO3; органический слой отделяли, промывали насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме с получением промежуточного соединения 65-i в виде масла желтого цвета. К раствору промежуточного соединения 65-i в диэтиловом эфире (100 мл) добавляли 1н. HCl в диэтиловом эфире (15,7 мл), образовавшийся осадок и промежуточное соединение 65-i·HCl собирали с помощью фильтрации в виде твердого продукта бежевого цвета. MS (m/z) M+1=633,4.
ПРИМЕР 62
Следующий пример иллюстрирует получение соединения 100, которое является соединением Формулы 1.
Схема 66: Синтез соединения 100
Figure 00000121
Стадия 1: К раствору промежуточного соединения 65-i·HCl (1,5 г, 2,24 ммоль) в ДМФ, охлажденному до температуры 0°C, последовательно добавляли имидазо[1,2-a]пиримидин-2-карбоновую кислоту (464 мг, 2,84 ммоль), HATU (992 мг, 2,61 ммоль) и DIPEA (1,65 мл, 9,48 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония и этилацетат; органический слой отделяли, промывали насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала промежуточное соединение 66-a в виде белой пены.
Стадия 2: К промежуточному соединению 66-a (760 мг, 0,97 ммоль) при температуре 0°C добавляли 4н. HCl в 1,4-диоксане (2,0 мл), и раствор перемешивали в течение 1 часа при температуре 0°C и затем 30 минут при комнатной температуре. Добавляли этилацетат, образовавшийся осадок и соединение 100·2HCl собирали с помощью фильтрации в виде твердого продукта белого цвета. MS (m/z) M+1=678,5.
ПРИМЕР 63
Следующий пример иллюстрирует получение соединения 102, которое является соединением Формулы 1.
Схема 67: Синтез соединения 102
Figure 00000122
Figure 00000123
Стадия 1: К раствору промежуточного соединения 65-i·HCl (2,0 г, 2,98 ммоль) в ДМФ, охлажденному до температуры 0°C, последовательно добавляли литиевую соль имидазо[1,2-a]пиридин-2-карбоновой кислоты (85-d) (641 мг, 3,79 ммоль), HATU (1,32 г, 3,48 ммоль) и DIPEA (2,20 мл, 12,64 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония и этилацетат; органический слой отделяли, промывали насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала промежуточное соединение 67-a в виде белой пены.
Стадия 2: К промежуточному соединению 67-a (900 мг, 1,16 ммоль) при температуре 0°C добавляли 4н. HCl в 1,4-диоксане (3,0 мл), и раствор перемешивали в течение 1 часа при температуре 0°C и затем 30 минут при комнатной температуре. Добавляли этилацетат, образовавшийся осадок и соединение 102·2HCl собирали с помощью фильтрации в виде твердого продукта белого цвета. MS (m/z) M+1=677,5.
ПРИМЕР 64
Следующий пример иллюстрирует получение соединения 99, которое является соединением Формулы 1.
Схема 68: Синтез соединения 99
Figure 00000124
Стадия 1: К раствору промежуточного соединения 65-i·HCl (2,0 г, 2,98 ммоль) в ДМФ, охлажденному до температуры 0°C, последовательно добавляли 1-метил-1H-имидазол-4-карбоновую кислоту (478 мг, 3,79 ммоль), HATU (1,32 г, 3,48 ммоль) и DIPEA (2,20 мл, 12,64 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при температуре 0°C в течение 1 часа и при комнатной температуре в течение ночи. Добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония и этилацетат; органический слой отделяли, промывали насыщенным водным раствором хлорида аммония, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала промежуточное соединение 68-a в виде белой пены.
Стадия 2: К промежуточному соединению 68-a (900 мг, 1,16 ммоль) при температуре 0°C добавляли 4н. HCl в 1,4-диоксане (3,0 мл), и раствор перемешивали в течение 1 часа при температуре 0°C и затем 30 минут при комнатной температуре. Добавляли этилацетат, образовавшийся осадок и соединение 99·2HCl собирали с помощью фильтрации в виде твердого продукта белого цвета. MS (m/z) M+1=641,4.
ПРИМЕР 65
Следующий пример иллюстрирует получение соединения 114, которое является соединением Формулы 1.
Схема 69: Синтез соединения 114
Figure 00000125
Стадия 1: К раствору промежуточного соединения 65-i·HCl (600 мг, 0,90 ммоль) в ДМФ, охлажденному до температуры 0°C, последовательно добавляли литиевую соль 6,7-дигидро-5-H-пирроло[1,2-a]имидазол-2-карбоновой кислоты (87-e) (236 мг, 1,42 ммоль), HATU (397 мг, 1,04 ммоль) и DIPEA (662 мкл, 3,79 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при температуре 0°C в течение 1 часа и при комнатной температуре в течение 2 часов. Добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония и этилацетат; органический слой отделяли, промывали насыщенным водным раствором хлорида аммония, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала промежуточное соединение 69-a в виде белой пены.
Стадия 2: К промежуточному соединению 69-a (230 мг, 0,30 ммоль) при температуре 0°C добавляли 4н. HCl в 1,4-диоксане (750 мкл), и раствор перемешивали в течение 1 часа при температуре 0°C и затем 30 минут при комнатной температуре. Добавляли этилацетат, образовавшийся осадок и соединение 114·2HCl собирали с помощью фильтрации в виде твердого продукта белого цвета. MS (m/z) M+1=667,1.
ПРИМЕР 66
Следующий пример иллюстрирует получение соединения 107, которое является соединением Формулы 1.
Схема 70: Синтез соединения 107
Figure 00000126
Стадия 1: К раствору промежуточного соединения 65-i·HCl (600 мг, 0,87 ммоль) в ДМФ, охлажденному до температуры 0°C, последовательно добавляли 6-фторимидазо[1,2-a]пиримидин-2-карбоновую кислоту, соль с HBr (86-c) (298 мг, 1,13 ммоль), HATU (397 мг, 1,04 ммоль) и DIPEA (662 мкл, 3,79 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при температуре 0°C в течение 1 часа и при комнатной температуре в течение ночи. Добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония и этилацетат; органический слой отделяли, промывали насыщенным водным раствором хлорида аммония, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала промежуточное соединение 70-a в виде белой пены.
Стадия 2: К промежуточному соединению 70-a (450 мг, 0,56 ммоль) при температуре 0°C добавляли 4н. HCl в 1,4-диоксане (1,41 мл), и раствор перемешивали в течение 1 часа при температуре 0°C. Добавляли этилацетат, образовавшийся осадок и соединение 107·2HCl собирали с помощью фильтрации в виде твердого продукта белого цвета. MS (m/z) M+1=696,3.
ПРИМЕР 67
Следующий пример иллюстрирует получение соединения 108, которое является соединением Формулы 1.
Схема 71: Синтез соединения 108
Figure 00000127
Стадия 1: К раствору промежуточного соединения 65-i·HCl (600 мг, 0,87 ммоль) в ДМФ, охлажденному до температуры 0°C, последовательно добавляли литиевую соль 1-(4-фторфенил)-1H-имидазол-4-карбоновой кислоты (88-e) (303 мг, 1,42 ммоль), HATU (397 мг, 1,04 ммоль) и DIPEA (662 мкл, 3,79 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при температуре 0°C в течение 1 часа и при комнатной температуре в течение ночи. Добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония и этилацетат; органический слой отделяли, промывали насыщенным водным раствором хлорида аммония, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала промежуточное соединение 71-a в виде белой пены.
Стадия 2: К промежуточному соединению 71-a (220 мг, 0,26 ммоль) при температуре 0°C добавляли 4н. HCl в 1,4-диоксане (670 мкл), и раствор перемешивали в течение 1 часа при температуре 0°C. Добавляли этилацетат, образовавшийся осадок и соединение 108·2HCl собирали с помощью фильтрации в виде твердого продукта белого цвета. MS (m/z) M+1=721,1.
ПРИМЕР 68
Следующий пример иллюстрирует получение соединения 72-d, которое может быть использовано в качестве промежуточного соединения при получении соединения формулы 1, или его соли.
Схема 72: Синтез промежуточного соединения 72-d
Figure 00000128
Figure 00000129
Стадия 1: К раствору промежуточного соединения 42-d (18,0 г, 40,6 ммоль) в ДМФ, охлажденному до температуры 0°C, последовательно добавляли имидазол (3,32 г, 48,7 ммоль), DMAP (496 мг, 4,06 ммоль) и трет-бутилхлордиметилсилан (6,73 мл, 44,6 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Добавляли воду и этилацетат; органический слой отделяли, промывали насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала промежуточное соединение 72-a в виде бесцветного масла.
Стадия 2: К раствору промежуточного соединения 72-a (6,0 г, 10,76 ммоль) в ТГФ, охлажденному до температуры 0°C, добавляли боргидрид лития (1,17 г, 53,8 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония и этилацетат; органический слой отделяли, промывали 10%-ной водной лимонной кислотой, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала промежуточное соединение 72-b в виде белой пены.
Стадия 3: К раствору промежуточного соединения 72-b (5,6 г, 10,57 ммоль) в ДМСО (3,0 мл, 42,3 ммоль) и дихлорметане (80 мл), охлажденному до температуры 0°C, добавляли TEA (5,89 мл, 42,3 ммоль) и комплекс пиридин триоксид серы (5,05 г, 31,7 ммоль), затем реакционную смесь перемешивали при температуре 0°C в течение 30 минут и при комнатной температуре в течение 1 часа. Добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония и этилацетат; органический слой отделяли, промывали 10%-ной водной лимонной кислотой, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме с получением промежуточного соединения 72-c в виде белой пены.
Стадия 4: К раствору промежуточного соединения 72-c (3,0 г, 5,68 ммоль) в дихлорметане добавляли 2-(4-фторфенил)этанамин (746 мкл, 5,68 ммоль). После перемешивания при комнатной температуре в течение ночи реакционную смесь охлаждали до температуры -5°C, добавляли порциями триацетоксиборгидрид натрия (2,54 г, 11,37 ммоль), и реакционную смесь затем перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. Добавляли насыщенный водный раствор NaHCO3; органический слой отделяли, промывали насыщенным солевым раствором, сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме с получением промежуточного соединения 72-d в виде пены желтого цвета. К раствору промежуточного соединения 72-d в диэтиловом эфире (100 мл) добавляли 1н. HCl в диэтиловом эфире (5,68 мл), образовавшийся осадок и промежуточное соединение 72-d·HCl собирали с помощью фильтрации в виде твердого продукта бежевого цвета. MS (m/z) M+1=651,6.
ПРИМЕР 69
Следующий пример иллюстрирует получение соединения 73-b, которое может быть использовано в качестве промежуточного соединения при получении соединения формулы 1, или его соли.
Схема 73: Синтез промежуточного соединения 73-b
Figure 00000130
Стадия 1: К раствору промежуточного соединения 72-d·HCl (7,02 г, 10,78 ммоль) в ДМФ, охлажденному до температуры 0°C, последовательно добавляли литиевую соль имидазо[1,2-a]пиридин-2-карбоновой кислоты (85-d) (3,08 г, 18,33 ммоль), HATU (6,97 г, 18,33 ммоль) и DIPEA (7,53 мл, 43,1 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония и этилацетат; органический слой отделяли, промывали насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала промежуточное соединение 73-a в виде белой пены.
Стадия 2: К раствору промежуточного соединения 73-a (6,14 г, 7,72 ммоль) в ТГФ, охлажденному до температуры 0°C, добавляли 1,0 M раствор TBAF в ТГФ (10,04 мл, 10,04 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. Добавляли воду и этилацетат; органический слой отделяли, промывали насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала промежуточное соединение 73-b в виде белой пены.
ПРИМЕР 70
Следующий пример иллюстрирует получение соединения 111, которое является соединением Формулы 1.
Схема 74: Синтез соединения 111
Figure 00000131
Стадия 1: К раствору промежуточного соединения 73-b (1,95 г, 2,86 ммоль), 4-(трифторметокси)фенола (561 мг, 3,15 ммоль) и трифенилфосфина (901 мг, 3,44 ммоль) в ТГФ добавляли по каплям DIAD (724 мкл, 3,72 ммоль), и затем реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 дней. Добавляли диэтиловый эфир и гексан, образовавшийся осадок и трифенилфосфиноксид удаляли путем фильтрации. Легко летучие продукты удаляли при пониженном давлении и остаток очищали путем хроматографии на силикагеле с получением ожидаемого промежуточного соединения 74-a в виде бесцветного масла.
Стадия 2: К промежуточному соединению 74-a (921 мг, 1,09 ммоль) в этилацетате (500 мкл) добавляли 4н. HCl в 1,4-диоксане (6,85 мл), и раствор перемешивали в течение 2 часов при температуре 0°C. Добавляли диэтиловый эфир, образовавшийся осадок и соединение 111·2HCl собирали с помощью фильтрации в виде твердого продукта белого цвета. MS (m/z) M+1=741,3.
ПРИМЕР 71
Следующий пример иллюстрирует получение соединения 106, которое является соединением Формулы 1.
Схема 75: Синтез соединения 106
Figure 00000132
Figure 00000133
Стадия 1: К раствору промежуточного соединения 73-b (2,30 г, 3,38 ммоль), пиридин-4-ола (353 мг, 3,72 ммоль) и трифенилфосфина (1,06 г, 4,05 ммоль) в ТГФ добавляли по каплям DIAD (854 мкл, 4,39 ммоль), и затем реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 дней. Добавляли диэтиловый эфир и гексан, образовавшийся осадок и трифенилфосфиноксид удаляли путем фильтрации. Легко летучие продукты удаляли при пониженном давлении и остаток очищали путем хроматографии на силикагеле с получением ожидаемого промежуточного соединения 75-a в виде бесцветного масла.
Стадия 2: К промежуточному соединению 75-a (1,12 г, 1,47 ммоль) в этилацетате (500 мкл) добавляли 4н. HCl в 1,4-диоксане (9,24 мл), и раствор перемешивали в течение 2 часов при температуре 0°C. Добавляли диэтиловый эфир, образовавшийся осадок и соединение 106·3HCl собирали с помощью фильтрации в виде твердого продукта белого цвета. MS (m/z) M+1=658,1.
ПРИМЕР 72
Следующий пример иллюстрирует получение соединения 105, которое является соединением Формулы 1.
Схема 76: Синтез соединения 105
Figure 00000134
Стадия 1: К раствору промежуточного соединения 73-b (1,79 г, 2,63 ммоль), 4-метоксифенола (359 мг, 2,89 ммоль) и трифенилфосфина (828 мг, 3,16 ммоль) в ТГФ добавляли по каплям DIAD (665 мкл, 3,42 ммоль), и затем реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 дней. Добавляли диэтиловый эфир и гексан, образовавшийся осадок и трифенилфосфиноксид удаляли путем фильтрации. Легко летучие продукты удаляли при пониженном давлении и остаток очищали путем хроматографии на силикагеле с получением ожидаемого промежуточного соединения 76-a в виде бесцветного масла.
Стадия 2: К промежуточному соединению 76-a (510 мг, 0,64 ммоль) в этилацетате (500 мкл) добавляли 4н. HCl в 1,4-диоксане (4,05 мл), и раствор перемешивали в течение 2 часов при температуре 0°C. Добавляли диэтиловый эфир, образовавшийся осадок и соединение 105·2HCl собирали с помощью фильтрации в виде твердого продукта белого цвета. MS (m/z) M+1=687,1.
ПРИМЕР 73
Следующий пример иллюстрирует получение соединения 77-b, которое может быть использовано в качестве промежуточного соединения при получении соединения формулы 1, или его соли.
Схема 77: Синтез промежуточного соединения 77-b
Figure 00000135
Стадия 1: К раствору промежуточного соединения 72-d·HCl (3,0 г, 4,61 ммоль) в ДМФ, охлажденному до температуры 0°C, последовательно добавляли 1-N-метилимидазолкарбоновую кислоту (988 мг, 7,83 ммоль), HATU (2,98 г, 7,83 ммоль) и DIPEA (3,22 мл, 18,43 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония и этилацетат; органический слой отделяли, промывали насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала промежуточное соединение 77-a в виде белой пены.
Стадия 2: К раствору промежуточного соединения 77-a (570 мг, 0,75 ммоль) в ТГФ, охлажденному до температуры 0°C, добавляли 1,0M раствор TBAF в ТГФ (970 мкл, 0,97 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. Добавляли воду и этилацетат; органический слой отделяли, промывали насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала промежуточное соединение 77-b в виде белой пены.
ПРИМЕР 74
Следующий пример иллюстрирует получение соединения 97, которое является соединением Формулы 1.
Схема 78: Синтез соединения 97
Figure 00000136
Стадия 1: К раствору промежуточного соединения 77-b (700 мг, 1,08 ммоль), 4-(трифторметокси)фенола (445 мг, 2,49 ммоль) и трифенилфосфина (712 мг, 2,71 ммоль) в ТГФ добавляли DIAD (549 мкл, 2,82 ммоль), и затем реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 дней. Добавляли диэтиловый эфир и гексан, образовавшийся осадок и трифенилфосфиноксид удаляли путем фильтрации. Легко летучие продукты удаляли при пониженном давлении и остаток очищали путем хроматографии на силикагеле с получением ожидаемого промежуточного соединения 78-a в виде бесцветного масла.
Стадия 2: К промежуточному соединению 78-a (450 мг, 0,56 ммоль) в этилацетате (500 мкл) добавляли 4н. HCl в 1,4-диоксане (6,0 мл), и раствор перемешивали в течение 2 часов при температуре 0°C. Добавляли диэтиловый эфир, образовавшийся осадок и соединение 97·2HCl собирали с помощью фильтрации в виде твердого продукта белого цвета. MS (m/z) M+1=705,4.
ПРИМЕР 75
Следующий пример иллюстрирует получение соединения 96, которое является соединением Формулы 1.
Схема 79: Синтез соединения 96
Figure 00000137
Стадия 1: К раствору промежуточного соединения 77-b (484 мг, 0,75 ммоль), 4-метоксифенола (214 мг, 1,72 ммоль) и трифенилфосфина (492 мг, 1,87 ммоль) в ТГФ добавляли DIAD (379 мкл, 195 ммоль), и затем реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 дней. Добавляли диэтиловый эфир и гексан, образовавшийся осадок и трифенилфосфиноксид удаляли путем фильтрации. Легко летучие продукты удаляли при пониженном давлении и остаток очищали путем хроматографии на силикагеле с получением ожидаемого промежуточного соединения 79-a в виде твердого продукта бежевого цвета.
Стадия 2: К промежуточному соединению 79-a (420 мг, 0,56 ммоль) в этилацетате (500 мкл) добавляли 4н. HCl в 1,4-диоксане (2,80 мл), и раствор перемешивали в течение 2 часов при температуре 0°C. Добавляли диэтиловый эфир, образовавшийся осадок и соединение 96·2HCl собирали с помощью фильтрации в виде твердого продукта белого цвета. MS (m/z) M+1=651,4.
ПРИМЕР 76
Следующий пример иллюстрирует получение соединения 123, которое является соединением Формулы 1.
Схема 80: Синтез соединения 123
Figure 00000138
Figure 00000139
Стадия 1: К раствору промежуточного соединения 12-g (0,478 г, 0,919 ммоль) в ДМФ при температуре 0°C, последовательно добавляли 5-фенилоксазол-2-карбоновую кислоту, натриевая соль (92-d) (0,194 г, 0,919 ммоль), HATU (1,05 г, 2,76 ммоль) и DIPEA (0,642 мл, 3,68 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Добавляли этилацетат и насыщенный водный раствор хлорида аммония; органический слой отделяли, промывали насыщенным водным раствором хлорида аммония, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала промежуточное соединение 80-a в виде твердого продукта белого цвета.
Стадия 2: к промежуточному соединению 80-a (390 мг, 0,564 ммоль) при температуре 0°C добавляли 4н. HCl в 1,4-диоксане (5 мл, 20,0 ммоль), и раствор перемешивали в течение 3 часов при температуре 0°C. Добавляли диэтиловый эфир, образовывался осадок и соединение 123·2HCl собирали с помощью фильтрации в виде твердого продукта белого цвета. MS m/z M+1=592,2.
ПРИМЕР 77
Следующий пример иллюстрирует получение соединения 125, которое является соединением Формулы 1.
Схема 81: Синтез соединения 125
Figure 00000140
Стадия 1: К раствору промежуточного соединения 12-g (316 мг, 0,608 ммоль) в ДМФ при температуре 0°C, последовательно добавляли 1-(4-фторфенил)-1H-1,2,3-триазол-4-карбоновую кислоту, соль натрия (93-c) (0,2 г, 0,790 ммоль), HATU (0,347 г, 0,912 ммоль) и DIPEA (0,423 мл, 2,431 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Добавляли этилацетат и насыщенный водный раствор хлорида аммония; органический слой отделяли, промывали насыщенным водным раствором хлорида аммония, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала промежуточное соединение 81-a в виде твердого продукта белого цвета.
Стадия 2: К раствору промежуточного соединения 81-a (0,43 г, 0,606 ммоль) в этилацетате (1,2 мл) добавляли 4н. HCl в 1,4-диоксане (1,5 мл, 6,06 ммоль), и раствор перемешивали в течение 2 часов при температуре 0°C. Легко летучие продукты удаляли при пониженном давлении и остаток растирали в диэтиловом эфире с получением соединения 125·2HCl в качестве твердого продукта не совсем белого цвета. MS m/z M+1=610,1.
ПРИМЕР 78
Следующий пример иллюстрирует получение соединения 119, которое является соединением Формулы 1.
Схема 82: Синтез соединения 119
Figure 00000141
Стадия 1: К раствору промежуточного соединения 42-h (250 мг, 0,396 ммоль) в ДМФ при температуре 0°C, последовательно добавляли 2-(4-фторфенил)-2H-1,2,3-триазол-4-карбоновую кислоту (94-d) (130 мг, 0,630 ммоль), HATU (271 мг, 0,713 ммоль) и DIPEA (207 мкл, 1,189 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 3 часов при температуре 0°C и при комнатной температуре в течение ночи. Добавляли этилацетат и насыщенный водный раствор хлорида аммония; органический слой отделяли. Водную фазу экстрагировали этилацетатом; объединенные органические экстракты промывали насыщенным водным раствором хлорида аммония, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала промежуточное соединение 82-a в виде твердого продукта белого цвета.
Стадия 2: К промежуточному соединению 82-a (303 мг, 0,370 ммоль) добавляли 4н. HCl в 1,4-диоксане (924 мкл, 3,70 ммоль), и раствор перемешивали в течение 1 часа при температуре 0°C. Легко летучие продукты удаляли при пониженном давлении и остаток растирали в диэтиловом эфире с получением соединения 119·2HCl в виде твердого продукта белого цвета. MS m/z M+1=720,1.
ПРИМЕР 79
Следующий пример иллюстрирует получение соединения 126, которое является соединением Формулы 1.
Схема 83: Синтез соединения 126
Figure 00000142
Figure 00000143
Стадия 1: К раствору промежуточного соединения 12-g (300 мг, 0,576 ммоль) в ДМФ при температуре 0°C, последовательно добавляли 2-(4-фторфенил)-2H-тетразол-5-карбоновую кислоту, соль натрия (95-d) (190 мг, 0,749 ммоль), HATU (329 мг, 0,864 ммоль) и DIPEA (400 мкл, 2,305 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при температуре 0°C в течение 1 часа. Добавляли этилацетат и насыщенный водный раствор хлорида аммония; органический слой отделяли. Водную фазу экстрагировали этилацетатом; объединенные органические экстракты промывали насыщенным водным раствором хлорида аммония, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме с получением промежуточного соединения 83-a.
Стадия 2: К раствору промежуточного соединения 83-a (303 мг, 0,370 ммоль) добавляли 4н. HCl в 1,4-диоксане (1,76 мл, 7,03 ммоль), и раствор перемешивали при температуре 0°C в течение 2 часов. Легко летучие продукты удаляли при пониженном давлении. Очистка путем обращенно фазовой хроматографии давала соединение 126·2HCl в виде твердого продукта белого цвета. MS m/z M+1=611,1.
ПРИМЕР 80
Следующий пример иллюстрирует получение имидазо[1,2-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты, соль с HBr (84-c).
Схема 84: Синтез 84-c
Figure 00000144
Стадия 1: К раствору 2-аминопиримидина 84-a (50,00 г, 526 ммоль) в ДМФ (375 мл), охлажденному до температуры 0°C, добавляли 3-бром-2-оксопропановую кислоту (88,00 г, 526 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при температуре 0°C в течение 2 часов и затем нагревали до комнатной температуры в течение 2 часов и перемешивали в течение 18 часов. Добавляли ацетонитрил (650 мл); образовывался осадок, и его собирали с помощью фильтрации. Осадок промывали ацетонитрилом и диэтиловым эфиром и сушили в вакууме с получением промежуточного соединения 84-b·HBr в виде твердого продукта белого цвета. MS m/z M+1=182,0.
Стадия 2: К суспензии промежуточного соединения 84-b·HBr (98,80 г, 377 ммоль) в ТГФ (600 мл) добавляли N,N-диметилацетамид (48 мл). Реакционную смесь перемешивали при температуре 80°C в течение 48 часов, охлаждали до комнатной температуры и выливали в ацетонитрил (700 мл). Образовывался осадок, и его собирали путем фильтрации, промывали ацетонитрилом и диэтиловым эфиром и сушили в вакууме с получением имидазо[1,2-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты, соль с HBr (84-c) в виде твердого продукта бежевого цвета. MS m/z M+1=164,2.
ПРИМЕР 81
Следующий пример иллюстрирует получение литиевой соли имидазо[1,2-a]пиридин-2-карбоновой кислоты (85-d)
Схема 85: Синтез 85-d
Figure 00000145
Стадия 1: К раствору 2-аминопиридина 85-a (20,00 г, 213 ммоль) в ТГФ (417 мл) добавляли этил бромпируват (30,0 мл, 215 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 часов. Образовался осадок, и его собирали с помощью фильтрации и промывали с помощью ТГФ с получением промежуточного соединения 85-b.HBr в виде твердого продукта желтого цвета.
Стадия 2: К суспензии промежуточного соединения 85-b·HBr в этаноле (550 мл) добавляли AcOH (5 мл), и смесь нагревали при температуре кипения с обратным холодильником в течение 3 часов, давая прозрачный раствор. Раствор концентрировали в вакууме, образовывался осадок, и его растирали в диэтиловом эфире; промежуточное соединение 85-c·HBr собирали с помощью фильтрации в виде твердого продукта бежевого цвета, растворяли в воде (0,5 л) и подщелачивали до pH 8 с использованием гранулированного NaOH. Данный раствор экстрагировали этилацетатом четыре раза; объединенные органические слои промывали насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме с получением промежуточного соединения 85-c в виде твердого продукта не совсем белого цвета.
Стадия 3: К раствору промежуточного соединения 85-c (26,40 г, 0,139 ммоль) в этаноле (140 мл) добавляли 2M водный раствор LiOH (70 мл, 140 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5 часов. Реакционную смесь охлаждали до температуры 0°C, образовывался осадок, его собирали путем фильтрации и промывали диэтиловым эфиром с получением литиевой соли имидазо[1,2-a]пиридин-2-карбоновой кислоты (85-d) в виде твердого продукта белого цвета. 1H HMR (200 МГц, CD3OD), δ м.д. 8,41 (д, J=6,6 Гц, 1H), 8,11 (с, 1H), 7,53 (д, J=9,2 Гц, 1H), 7,29 (дд, J=8,0 Гц, J=7,3 Гц, 1H), 6,90 (дд, J=6,7 Гц, 1H).
ПРИМЕР 82
Следующий пример иллюстрирует получение 6-фторимидазо[1,2-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты, соли с HBr (86-c)
Схема 86: Синтез 86-c
Figure 00000146
Стадия 1: К раствору 5-фторпиримидин-2-амина 86-a (3,17 г, 28,0 ммоль) в ДМФ (14 мл) при температуре 0°C добавляли бромпировиноградную кислоту (7,73 г, 53,4 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 2 часов при температуре 0°C и затем в течение 2 дней при комнатной температуре. Реакционную смесь промывали ацетоном; образовывался осадок и промежуточное соединение 86-b·HBr собирали с помощью фильтрации в виде твердого продукта бежевого цвета.
Стадия 2: Суспензию промежуточного соединения 86-b·HBr (8,40 г, 30,0 ммоль) в ТГФ (100 мл) и AcOH (10 мл) перемешивали при температуре 70°C в течение 72 часов. Добавляли ТГФ и осадок собирали с помощью фильтрации, промывали с помощью ТГФ и диэтилового эфира и сушили в вакууме с получением 6-фторимидазо[1,2-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты, соль с HBr, (86-c) в виде твердого вещества бледно-бежевого цвета. MS m/z M+1=182,0.
ПРИМЕР 83
Следующий пример иллюстрирует получение литиевой соли 6,7-дигидро-5H-пирроло[1,2-a]имидазол-2-карбоновой кислоты (87-e)
Схема 87: Синтез 87-e
Figure 00000147
Стадия 1: К раствору промежуточного соединения 87-a (5,00 г, 70,3 ммоль) в ТГФ при температуре 10°C добавляли этил пропиолат (6,90 г, 70,3 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 1 часа при комнатной температуре и концентрировали в вакууме с получением промежуточного соединения 87-b в виде масла желтого цвета.
Стадия 2: К раствору промежуточного соединения 87-b (11,90 г, 70,3 ммоль) в ацетонитриле (1400 мл) добавляли тетрафторборат 4-нитробензолдиазония (16,66 г, 70,3 ммоль), и реакционную смесь перемешивали в течение 1 часа при комнатной температуре с получением раствора промежуточного соединения 87-c.
Стадия 3: К раствору промежуточного соединения 87-c добавляли TEA (19,0 мл, 141 ммоль), и реакционную смесь нагревали при температуре кипения с обратным холодильником в течение 2 часов, охлаждали до комнатной температуры и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала промежуточное соединение 87-d в виде твердого продукта коричневого цвета. MS m/z M+Na=202,9.
Стадия 4: К раствору промежуточного соединения 87-d (5,36 г, 29,7 ммоль) в ТГФ добавляли 2н водный раствор LiOH (32,7 мл, 65,4 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 48 часов и концентрировали в вакууме с получением литиевой соли 6,7-дигидро-5H-пирроло[1,2-a]имидазол-2-карбоновой кислоты (87-e), в виде твердого вещества бледно-бежевого цвета. MS m/z M+1=153,0.
ПРИМЕР 84
Следующий пример иллюстрирует получение литиевой соли 1-(4-фторфенил)-1H-имидазол-4-карбоновой кислоты (88-e)
Схема 88: Синтез 88-e
Figure 00000148
Figure 00000149
Стадия 1: К раствору оксида цинка (7,32 г, 90 ммоль) в муравьиной кислоте (20,7 мл, 540 ммоль) при температуре 0°C добавляли 4-фторанилин 88-a (20,00 г, 180 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при температуре 70°C в течение 1 часа, охлаждали до комнатной температуры, разбавляли этилацетатом и фильтровали через слой из целита. Фильтрат промывали водой, 10% водным Na2CO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме с получением промежуточного соединения 88-b в виде твердого продукта бежевого цвета. MS m/z M+1=140,0.
Стадия 2: К раствору промежуточного соединения 88-b (8,35 г, 60,0 ммоль) в дихлорметане (111 мл) последовательно добавляли трифенилфосфин (17,79 г, 67,8 ммоль), TEA (8,32 мл, 60,0 ммоль) и тетрахлорид углерода (6,21 мл, 64,2 ммоль). После перемешивания в течение 72 часов при комнатной температуре реакционную смесь охлаждали до температуры 0°C. Образовывался осадок, его собирали путем фильтрации и отбрасывали. Фильтрат концентрировали и суспендировали в холодном диэтиловом эфире. Нерастворимый остаток собирали с помощью фильтрации и отбрасывали. Фильтрат концентрировали в вакууме с получением промежуточного соединения 88-c в виде масла коричневого цвета.
Стадия 3: Суспензию оксида меди (1,20 г, 8,40 ммоль) и 1,10-фенантролина (3,03 г, 16,80 ммоль) в ТГФ (400 мл) продували азотом и затем добавляли промежуточное соединение 88-c (7,27 г, 60,0 ммоль) и этил изоцианоацетат (9,2 мл, 84 ммоль). После перемешивания при температуре 70°C в течение 18 часов реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и фильтровали через слой из целита. Фильтрат концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала промежуточное соединение 88-d в виде твердого продукта светло-желтого цвета. MS m/z M+1=235,0.
Стадия 4: К раствору промежуточного соединения 88-d (10,47 г, 44,7 ммоль) в ТГФ добавляли 2н. водный раствор LiOH (24,6 мл, 49,2 ммоль). После перемешивания при комнатной температуре в течение ночи реакционную смесь концентрировали в вакууме. Образовавшийся остаток разбавляли водой и экстрагировали дихлорметаном. Органические фракции отбрасывали, и водный слой концентрировали в вакууме с получением литиевой соли 1-(4-фторфенил)-1H-имидазол-4-карбоновой кислоты (88-e) в виде твердого продукта светло-желтого цвета. MS m/z M+1=207.
ПРИМЕР 85
Следующий пример иллюстрирует получение литиевой соли 1-(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)-1H-имидазол-4-карбоновой кислоты (89-d)
Схема 89: Синтез 89-d
Figure 00000150
Стадия 1: К раствору этил 2-изоцианоацетата 89-a (5 г, 44,2 ммоль) в безводном этаноле (50 мл) при температуре 0°C добавляли 1,1-диметокси-N,N-диметилметанамин (10,53 г, 88 ммоль). После перемешивания при комнатной температуре в течение ночи реакционную смесь концентрировали в вакууме. Очистка с помощью хроматографии на нейтральном оксиде алюминия давала промежуточное соединение 89-b в виде масла желтого цвета.
Стадия 2: В герметически закрываемую пробирку добавляли промежуточное соединение 89-b (1,00 г, 5,95 ммоль) и тетрагидро-2H-пиран-4-амин (1,80 г, 17,84 ммоль). Пробирку наполняли азотом, герметически закрывали и нагревали при температуре 70°C в течение 2 часов. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь очищали путем хроматографии на силикагеле с получением промежуточного соединения 89-c в виде твердого продукта бежевого цвета.
Стадия 3: К раствору промежуточного соединения 89-c (0,72 г, 3,22 ммоль) в смеси 3:1 метанол/вода добавляли LiOH (0,116 г, 4,83 ммоль). После перемешивания при комнатной температуре в течение 18 часов реакционную смесь концентрировали в вакууме с получением литиевой соли 1-(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)-1H-имидазол-4-карбоновой кислоты (89-d) в виде белой пены. MS m/z M+1=197,0.
ПРИМЕР 86
Следующий пример иллюстрирует получение литиевой соли 1-фенил-1H-пиррол-3-карбоновой кислоты (90-c)
Схема 90: Синтез 90-c
Figure 00000151
Figure 00000152
Стадия 1: В высушенную герметически закрываемую пробирку добавляли метил 1H-пиррол-3-карбоксилат 90-a (150 мг, 1,199 ммоль), йодид меди(I) (11,4 мг, 0,060 ммоль), K3PO4 (534 мг, 2,52 ммоль), йодбензол (160 мкл, 1,439 ммоль) и толуол (1,2 мл). В смесь барботировали азот в течение 5 мин с последующим добавлением N1,N2-диметилэтан-1,2-диамина (21 мг, 0,240 ммоль). Пробирку герметически закрывали, и реакционную смесь перемешивали в течение ночи при температуре 100°C. Затем разбавляли этилацетатом и фильтровали через слой из целита. Фильтрат промывали насыщенным водным раствором хлорида аммония и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме с получением промежуточного соединения 90-b. MS m/z M+1=202,2.
Стадия 2: К раствору промежуточного соединения 90-b (241 мг, 1,198 ммоль) в смеси 2:1 ТГФ/вода добавляли LiOH (92 мг, 3,832 ммоль). Реакционную смесь нагревали при температуре 50°C в течение ночи и концентрировали в вакууме. Остаток растворяли в воде, экстрагировали дихлорметаном и диэтиловым эфиром и органические экстракты отбрасывали. Водную фазу подкисляли до pH 2, используя 37% водную HCl, и дважды экстрагировали дихлорметаном. Объединенные органические экстракты сушили над безводным MgSO4 и концентрировали в вакууме с получением литиевой соли 1-фенил-1H-пиррол-3-карбоновой кислоты (90-c), в виде твердого продукта белого цвета. MS m/z M+Na=210,2.
ПРИМЕР 87
Следующий пример иллюстрирует получение натриевой соли 5-фенил-1,3,4-оксадиазол-2-карбоновой кислоты (91-c)
Схема 91: синтез 91-c
Figure 00000153
Стадия 1: К раствору этил 2-хлор-2-оксоацетата 91-a (5,61 г, 41,1 ммоль) в толуоле добавляли 5-фенил-1H-тетразол (6,00 г, 41,1 ммоль). После перемешивания при кипении с обратным холодильником в течение 2 часов, реакционную смесь разбавляли этилацетатом и водой. Органический слой два раза промывали 1н. водной HCl, водой и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала промежуточное соединение 91-b в виде твердого продукта желтого цвета. MS m/z M+1=219,1.
Стадия 2: К раствору промежуточного соединения 91-b (1,40 г, 6,42 ммоль) в ТГФ добавляли 1н. водный NaOH (6,7 мл, 6,74 ммоль) при температуре 0°C. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов и концентрировали в вакууме с получением натриевой соли 5-фенил-1,3,4-оксадиазол-2-карбоновой кислоты (91-c) в виде твердого продукта белого цвета. MS m/z M+1=191,1.
ПРИМЕР 88
Следующий пример иллюстрирует получение натриевой соли 5-фенилоксазол-2-карбоновой кислоты (92-d)
Схема 92: Синтез 92-d
Figure 00000154
Стадия 1: К раствору гидрохлорида этилового эфира глицина 92-a (4,64 г, 33,2 ммоль) в дихлорметане при температуре 0°C, последовательно добавляли бензоилхлорид (3,22 мл, 27,7 ммоль) и TEA (11,49 мл, 83 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при температуре 0°C в течение 2 часов и при комнатной температуре в течение ночи. Добавляли этилацетат и воду; органический слой отделяли, два раза промывали 1н. водной HCl, затем водой и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме с получением промежуточного соединения 92-b в виде масла.
Стадия 2: К раствору промежуточного соединения 92-b (1,10 г, 4,68 ммоль) в толуоле (5,0 мл) добавляли оксихлорид фосфора (2,18 мл, 23,38 ммоль). Реакционную смесь нагревали при температуре кипения с обратным холодильником в течение ночи и охлаждали до комнатной температуры. Добавляли этилацетат и насыщенный водный раствор NaHCO3; органический слой отделяли, промывали насыщенным водным раствором NaHCO3, водой и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала промежуточное соединение 92-c в виде твердого продукта белого цвета. MS m/z M+1=218,1.
Стадия 2: К раствору промежуточного соединения 92-c (200 мг, 0,921 ммоль) в ТГФ добавляли 1н. водный NaOH (1,1 мл, 1,105 ммоль) при температуре 0°C. После перемешивания при комнатной температуре в течение 3 часов, реакционную смесь концентрировали в вакууме с получением натриевой соли 5-фенилоксазол-2-карбоновой кислоты (92-d), в виде твердого продукта белого цвета. MS m/z M+1=190,2.
ПРИМЕР 89
Следующий пример иллюстрирует получение натриевой соли 1-(4-фторфенил)-1H-1,2,3-триазол-4-карбоновой кислоты (93-c)
Схема 93: Синтез 93-c
Figure 00000155
Стадия 1: К раствору 1-фтор-4-йодбензола 93-a (0,926 г, 4,17 ммоль) в ДМСО (4,0 мл) и воде (0,44 мл) последовательно добавляли азид натрия (0,325 г, 5,01 ммоль), карбонат натрия (0,088 г, 0,833 ммоль), L-пролин (0,096 г, 0,833 ммоль), этил пропиолат (0,409 г, 4,17 ммоль), L-аскорбат натрия (0,207 г, 1,043 ммоль) и сульфат меди(II) (0,052 г, 0,208 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при температуре 65°C в течение 18 часов и охлаждали до комнатной температуры. Добавляли водный аммиак (1 мл), этилацетат (25 мл) и воду (20 мл). Фазы разделяли, и водную фазу экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические экстракты промывали насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем обращенно фазовой хроматографии давала промежуточное соединение 93-b. MS m/z M+1=236,1.
Стадия 2: К раствору промежуточного соединения 93-b (200 мг, 0,850 ммоль) в ТГФ добавляли 2н. водный NaOH (0,425 мл, 0,850 ммоль). После перемешивания при комнатной температуре в течение 18 часов реакционную смесь концентрировали в вакууме с получением натриевой соли 1-(4-фторфенил)-1H-1,2,3-триазол-4-карбоновой кислоты (93-c), в виде твердого продукта желтого цвета. MS m/z M+Na=230,0.
ПРИМЕР 90
Следующий пример иллюстрирует получение натриевой соли 2-(4-фторфенил)-2H-1,2,3-триазол-4-карбоновой кислоты (94-d)
Схема 94: Синтез 94-d
Figure 00000156
Стадия 1: К раствору 94-a (1,75 г, 15,08 ммоль) в этаноле (16 мл) добавляли 4-фторфенилгидразин (1,90 г, 15,08 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при температуре 70°C в течение 30 минут. Добавляли воду (16 мл), реакционную смесь нагревали до температуры 85°C, упаривали на одну треть и охлаждали на ледяной бане. Образовывался осадок желтого цвета, и его собирали с помощью фильтрации. Осадок растворяли в смеси 25% этанол/толуол (40 мл). Колбу снабжали обратным холодильником и насадкой Дина-Старка и реакционную смесь нагревали при температуре кипения с обратным холодильником до тех пор, пока весь этанол не был собран в насадке Дина-Старка. Смесь охлаждали до комнатной температуры; образовывался осадок и промежуточное соединение 94-b собирали с помощью фильтрации в виде твердого продукта коричневого цвета.
Стадия 2: Раствор промежуточного соединения 94-b (1,64 г, 7,32 ммоль) в уксусном ангидриде (13,8 мл, 146 ммоль) перемешивали при комнатной температуре в течение 30 минут. Реакционную смесь промывали водой (60 мл), перемешивали в течение 30 мин и полученный осадок собирали с помощью фильтрации. Твердый продукт распределяли между этилацетатом и водой. Слои разделяли; органический слой сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток растворяли в ТГФ и добавляли карбонат цезия (2,62 г, 8,05 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 минут и фильтровали. Фильтрат концентрировали в вакууме; остаток растворяли в диэтиловом эфире и промывали водой, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Полученный твердый продукт растворяли в 2M водной HCl (50 мл), добавляли параформальдегид (0,433 г, 14,41 ммоль) и реакционную смесь нагревали при температуре кипения с обратным холодильником в течение 2 часов. После охлаждения до комнатной температуры, смесь экстрагировали с диэтиловый эфир. Органический слой отделяли и промывали водой, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала промежуточное соединение 94-c в виде твердого продукта бледно-желтого цвета.
Стадия 3: К раствору промежуточного соединения 94-c (300 мг, 1,569 ммоль) в метаноле (15 мл) при температуре 0°C добавляли цианид калия (171 мг, 2,62 ммоль) и оксид марганца (IV) (1078 мг, 12,40 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 часов, фильтровали через слой из целита и слой на фильтре промывали метанолом. Фильтрат концентрировали в вакууме. Очистка путем хроматографии на силикагеле давала натриевую соль 2-(4-фторфенил)-2H-1,2,3-триазол-4-карбоновой кислоты (94-d) в виде твердого продукта бледно-желтого цвета. MS m/z M+1=244,2.
ПРИМЕР 91
Следующий пример иллюстрирует получение натриевой соли 2-(4-фторфенил)-2H-тетразол-5-карбоновой кислоты (95-e)
Схема 95: синтез 95-e
Figure 00000157
Figure 00000158
Стадия 1: К раствору 4-фторанилина 95-a (2,00 г, 18,00 ммоль) в этаноле (5,7 мл) и воде (2,0 мл) добавляли 37% водную HCl (3,7 мл, 45,0 ммоль), и реакционную смесь охлаждали до температуры -5°C. В смесь добавляли по каплям 5н водный раствор нитрита натрия (3,96 мл, 19,80 ммоль), затем добавляли 6н водный ацетат натрия (9,0 мл, 54,0 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 10 минут при температуре 0°C, затем добавляли этил 2-хлор-3-оксобутаноат (2,96 г, 18,00 ммоль), и перемешивание продолжали в течение ночи при температуре 27°C. Добавляли ТГФ (20 мл), и реакционную смесь нагревали до температуры 40°C и переносили в делительную воронку. Водный слой отделяли и отбрасывали. Органический слой содержал промежуточное соединение 95-b в виде раствора в ТГФ. MS m/z M+Na=267,1.
Стадия 2: К раствору промежуточного соединения 95-b (4,40 г, 18 ммоль) в ТГФ добавляли 25% водный NH4OH (16 мл, 108 ммоль) при температуре 0°C. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов и переносили в делительную воронку. Водный слой отделяли и отбрасывали. Органический слой концентрировали и остаток растирали в смеси диэтиловый эфир/гексан; образовывался осадок и промежуточное соединение 95-c собирали в виде твердого продукта кирпично-красного цвета.
Стадия 3: К раствору промежуточного соединения 95-c (1,36 г, 6,04 ммоль) в ТГФ (27 мл) добавляли уксусную кислоту (1,1 мл, 18,12 ммоль), и реакционную смесь нагревали до температуры 85°C. В реакционную смесь добавляли 2,6н. водный раствор нитрита натрия (2,8 мл, 7,25 ммоль), смесь перемешивали при температуре 85°C в течение 4 часов и концентрировали в вакууме. Остаток растворяли в этилацетате и промывали насыщенным водным раствором NaHCO3, слои разделяли и водную фазу экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои промывали насыщенным солевым раствором, сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка с помощью флеш хроматографии на силикагеле давала промежуточное соединение 95-d в виде твердого продукта желтого цвета. MS m/z M+Na=258,9.
Стадия 4: К раствору промежуточного соединения 95-d (840 мг, 3,56 ммоль) в ТГФ добавляли 2н. водный NaOH (1,78 мл, 3,56 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при температуре 50°C в течение 18 часов и концентрировали в вакууме с получением натриевой соли 2-(4-фторфенил)-2H-тетразол-5-карбоновой кислоты (95-e), в виде твердого продукта желтого цвета. MS m/z M+1=209,1
Соединения, полученные в соответствии с вышеприведенными способами, или с их незначительными изменениями, представлены в таблице 1. Незначительные изменения в описанных выше способах и применениях соответствующих исходных продуктов, что необходимо для получения соединений таблицы 1, будут очевидны специалистам в данной области.
ТАБЛИЦА 1
Соед.№ Структура MS
1
Figure 00000159
 M+1=588,5
2
Figure 00000160
 M+1=588,4
3
Figure 00000161
 M+1=576,4
4
Figure 00000162
 M+1=590,4
5
Figure 00000163
 M+1=574,4
6
Figure 00000164
 M+1=548,4
7
Figure 00000165
 M+1=547,5
8
Figure 00000166
 M+1=546,5
9
Figure 00000167
 M+1=550,1
10
Figure 00000168
 M+1=566,4
11
Figure 00000169
 M+1=566,4
12
Figure 00000170
 M+1=566,4
13
Figure 00000171
 M+1=573,5
14
Figure 00000172
 M+1=562,4
15
Figure 00000173
 M+1=551,5
16
Figure 00000174
 M+1=547,4
17
Figure 00000175
 M+1=565,4
18
Figure 00000176
 M+1=591,4
19
Figure 00000177
 M+1=593,4
20
Figure 00000178
 M+1=592,4
21
Figure 00000179
 M+1=497,2
22
Figure 00000180
 M+1=497,2
23
Figure 00000181
 M+1=496,4
24
Figure 00000182
 M+1=546,2
25
Figure 00000183
 M+1=560,4
26
Figure 00000184
 M+1=560,4
27
Figure 00000185
 M+1=546,2
28
Figure 00000186
 M+1=548,5
29
Figure 00000187
 M+1=573,4
30
Figure 00000188
 M+1=561,4
31
Figure 00000189
 M+1=561,4
32
Figure 00000190
 M+1=565,4
33
Figure 00000191
 M+1=560,4
34
Figure 00000192
 M+1=511,4
35
Figure 00000193
 M+1=548,5
36
Figure 00000194
 M+1=568,5
37
Figure 00000195
 M+1=552,5
38
Figure 00000196
 M+1=566,5
39
Figure 00000197
 M+1=583,4
40
Figure 00000198
 M+1=529,5
41
Figure 00000199
 M+1=598,5
42
Figure 00000200
 M+1=586,5
43
Figure 00000201
 M+1=622,6
44
Figure 00000202
 M+1=715,5
45
Figure 00000203
 M+1=580,5
46
Figure 00000204
 M+1=582,5
47
Figure 00000205
 M+1=672,5
48
Figure 00000206
 M+1=641,5
49
Figure 00000207
 M+1=685,5
50
Figure 00000208
 M+1=592,5
51
Figure 00000209
 M+1=595,5
52
Figure 00000210
 M+1=621,5
53
Figure 00000211
 M+1=658,5
54
Figure 00000212
 M+1=619,6
55
Figure 00000213
 M+1=623,5
56
Figure 00000214
 M+1=699,5
57
Figure 00000215
 M+1=566,6
58
Figure 00000216
 M+1=567,5
59
Figure 00000217
 M+1=721,5
60
Figure 00000218
 M+1=553,5
61
Figure 00000219
 M+1=591,5
62
Figure 00000220
 M+1=566,5
63
Figure 00000221
 M+1=584,5
64
Figure 00000222
 M+1=592,5
65
Figure 00000223
 M+1=676,6
66
Figure 00000224
 M+1=609,5
67
Figure 00000225
 M+1=555,6
68
Figure 00000226
 M+1=564,5
69
Figure 00000227
 M+1=684,5
70
Figure 00000228
 M+1=622,5
71
Figure 00000229
 M+1=668,5
72
Figure 00000230
 M+1=611,5
73
Figure 00000231
 M+1=531,5
74
Figure 00000232
 M+1=586,4
75
Figure 00000233
 M+1=557,5
76
Figure 00000234
 M+1=545,5
77
Figure 00000235
 M+1=594,4
78
Figure 00000236
 M+1=581,4
79
Figure 00000237
 M+1=625,5
80
Figure 00000238
 M+1=600,5
81
Figure 00000239
 M+1=571,5
82
Figure 00000240
 M+1=639,5
83
Figure 00000241
 M+1=665,5
84
Figure 00000242
 M+1=675,5
85
Figure 00000243
 M+1=531,5
86
Figure 00000244
 M+1=648,5
87
Figure 00000245
 M+1=728,5
88
Figure 00000246
 M+1=591,4
89
Figure 00000247
 M+1=674,5
90
Figure 00000248
 M+1=591,4
91
Figure 00000249
 M+1=583,5
92
Figure 00000250
 M+1=529,4
93
Figure 00000251
 M+1=597,4
94
Figure 00000252
 M+1=557,4
95
Figure 00000253
 M+1=599,4
96
Figure 00000254
 M+1=651,4
97
Figure 00000255
 M+1=705,4
98
Figure 00000256
 M+1=530,3
99
Figure 00000257
 M+1=641,4
100
Figure 00000258
 M+1=678,5
101
Figure 00000259
 M+1=543,4
102
Figure 00000260
 M+1=677,5
103
Figure 00000261
 M+1=610,3
104
Figure 00000262
 M+1=635,3
105
Figure 00000263
 M+1=687,1
106
Figure 00000264
 M+1=658,1
107
Figure 00000265
 M+1=696,3
108
Figure 00000266
 M+1=721,1
109
Figure 00000267
 M+1=591,2
110
Figure 00000268
 M+1=556,3
111
Figure 00000269
 M+1=741,3
112
Figure 00000270
 M+1=703,1
113
Figure 00000271
 M+1=581,3
114
Figure 00000272
 M+1=667,1
115
Figure 00000273
 M+1=592,1
116
Figure 00000274
 M+1=694,0
117
Figure 00000275
 M+1=593,2
118
Figure 00000276
 M+1=636,2
119
Figure 00000277
 M+1=720,1
120
Figure 00000278
 M+1=555,3
121
Figure 00000279
 M+1=653,1
122
Figure 00000280
 M+1=590,2
123
Figure 00000281
 M+1=592,2
124
Figure 00000282
 M+1=658,5
125
Figure 00000283
 M+1=610,1
126
Figure 00000284
 M+1=611,1
ПРИМЕР 9
Следующий пример иллюстрирует применение соединения формулы 1 или его соли.
Конкурентный анализ на основе флуоресцентной поляризации
Связывание соединений Формулы 1 с целевыми доменами BIR измеряли с помощью анализа флуоресцентной поляризации (FP). Флуоресцентную поляризацию оценивали, используя микропланшетный ридер GENios (TECAN) Pro instrument с фильтром возбуждения и фильтром эмиссии, установленными на 485 нм 535 нм. Конечное количество белка, используемого в анализе, соответствует количеству белка, необходимого для получения 80% максимального значения FP в эксперименте насыщения с использованием флуоресцентного (FITC) зонда P1 или P2. Активность соединений (IC50) и селективность определяли в присутствии фиксированного определенного количества целевого белка, флуоресцентного зонда и 10-точечного серийного разведения выбранных соединений в аналитическом буфере (50 мМ Hepes, pH 7,5, γ-глобулин на 250 мкг/мл, 2 мМ DTT, 1% ДМСО).
Исследования выполняли дважды, используя необработанные черные 96-луночные планшеты (Corning #3915) с суммарным объемом 100 мкл, содержащие 25 мкл флуоресцентного зонда при конечной концентрации 2 нМ в аналитическом буфере, 25 мкл разбавленного соединения, 25 мкл белка BIR в аналитическом буфере и 25 мкл аналитического буфера. В качестве контролей для калибровки использовали только буфер (контроль) или только зонд в буфере (G-фактор). Планшет инкубировали при комнатной температуре в темноте в течение одного часа, и значения FP регистрировали в единицах миллиполяризации (mP), используя ридер Genios Pro FP.
Измеренные значения FP (mP) наносили на график против концентрации соединения, и значения IC50 вычисляли исходя из построенной сигмоидальной кривой доза-ответ (с переменным наклоном), используя программное обеспечение GraphPad Prism version 4.02 for Windows, GraphPad Software, San Diego California USA и/или CambridgeSoft BioAssay Enterprise Version 10,1. Значение IC50 представляет собой концентрацию исследуемого соединения, при котором происходит смещение 50% метки. Значения ki выводили из рассчитанного значения IC50, как описано выше, и в соответствии с уравнением, описанным в Nikolovska-Coleska, Z. (2004) Anal Biochem 332, 261-273. Результаты представлены в таблице 2, где A = меньше чем 25 нМ; B = меньше чем 250 нМ; C =меньше чем 1000 нМ; и D = больше чем 1000 нМ. Соединения идентифицированы в таблице 3 в соответствии с номерами соединений, представленными в таблице 1. Как показали результаты, соединения формулы 1 демонстрируют хорошую аффинность связывания.
Таблица 2
Соеди-нение № XIAP
ki (нМ)		 c-IAP1
ki (нМ)		 cIAP2
ki (нМ)		 Соеди-нение № XIAP
ki (нМ)		 c-IAP1
ki (нМ)		 cIAP2
ki (нМ)
1 C A - 44 B A A
2 D B B 45 A A -
3 B A - 46 B A -
4 C B B 47 B A A
5 B A - 48 B A -
6 B A A 49 C A A
7 B A A 50 B A A
8 A A - 51 B A -
9 B A - 52 B A -
10 B A A 53 B A A
11 B A - 54 B A -
12 C A B 55 B A A
13 B A - 56 C A A
14 C A B 57 C A -
15 B A - 58 B A A
16 B A - 59 B A A
17 B A A 60 C A -
18 B A A 61 B A A
19 B A - 62 B A -
20 B A A 63 B A A
21 B A - 64 B A -
22 B A - 65 A A A
23 A A - 66 B A A
24 B A - 67 B A A
25 B A - 68 B A A
26 B A - 69 B A A
27 B A - 70 C A B
28 B A - 71 C A A
29 C A - 72 B A A
30 B A - 73 B A A
31 B A - 74 B A A
32 B A A 75 B A A
33 B A - 76 B A A
34 B A - 77 B A A
35 A A - 78 B A A
36 B A A 79 B A A
37 B A A 80 B A A
38 - - - 81 B A A
39 B A - 82 A A A
40 B A A 83 A A A
41 B A - 84 A A A
42 B A - 85 C A A
43 B A - 86 B A A
87 B A A 107 B A A
88 B A A 108 B A A
89 B A A 109 B A A
90 B A A 110 B A A
91 B A A 111 A A A
92 C A B 112 B A A
93 B A A 113 B A A
94 B A A 114 A A A
95 B A A 115 B A A
96 B A A 116 A A A
97 B A A 117 C A A
98 B A A 118 - - -
99 B A A 119 - - -
100 B A A 120 B A A
101 - - - 121 - - -
102 B A A 122 B A A
103 B A A 123 B A A
104 B A A 124 B A A
105 A A A 125 B A A
106 B A A 126 B A A
Клеточная культура и анализы клеточной гибели
Клетки колоректальной карциномы HCT116 культивировали в виде монослоев в 96 луночных планшетах с плотностью 2000 клеток на лунку в среде МкКоя 5a (HyClone), дополненной 2,2 г/л бикарбонатом натрия, 10% FBS (HyClone) и 1% пинициллин/стрептомицин (HyClone). Через 24 часа лунки, в трех экземплярах, обрабатывали HGS ETR1 (30 нг/мл) вместе с соединением. Клетки инкубировали в присутствии соединения и HGS - агонистического антитела к рецептору Trail, ETR1 (Mapatumamab, 30 нг/мл) в течение 72 часов. Метаболическую жизнеспособность оставшихся клеток оценивали с помощью MTT анализа (триазолил голубой тетразолий бромистый, Sigma).
Значения EC50 (50% клеточная выживаемость в присутствии соединения по сравнению с необработанными контролями) вычисляли по кривым выживаемости, используя программное обеспечение BioAssay (CambridgeSoft) и GraphPad Prism (Graph Pad Software Inc.). Результаты представлены в таблице 3, ниже, где A = меньше чем 50 нМ; B = меньше чем 250 нМ; C = меньше чем 1000 нМ; и D = больше чем 1000 нМ. Соединения идентифицированы в таблице 3 в соответствии с номерами соединений, представленных в таблице 1. Как показали результаты, соединения формулы 1 демонстрируют высокую эффективность.
Таблица 3
Соеди-
нение №		 HCT116+мапату-бимап EC50 (нМ) Соеди-
Нение №		 HCT116+мапату-
бимап EC50 (нМ)
1 B 41 C
2 C 42 C
3 C 43 B
4 D 44 B
5 A 45 A
6 B 46 C
7 B 47 B
8 B 48 A
9 B 49 B
10 A 50 B
11 B 51 B
12 B 52 B
13 B 53 A
14 B 54 A
15 B 55 D
16 C 56 C
17 A 57 C
18 A 58 A
19 A 59 C
20 A 60 C
21 C 61 B
22 B 62 C
23 B 63 A
24 B 64 B
26 C 65 A
27 C 66 A
28 C 67 A
29 D 68 B
30 B 69 B
31 B 70 C
32 B 71 C
33 B 72 A
34 B 73 B
35 B 74 A
36 B 75 A
37 D 76 A
38 B 77 A
39 B 78 A
40 A 79 A
80 A 103 A
81 A 104 A
82 A 105 A
83 A 106 A
84 A 107 A
85 A 108 B
86 A 109 A
87 B 110 A
88 B 111 A
89 A 112 B
90 B 113 A
91 A 114 A
92 B 115 B
93 A 116 A
94 A 117 B
95 A 118 B
96 A 119 B
97 A 120 A
98 B 121 A
99 A 122 B
100 B 123 A
101 A 124 A
102 A -- --
Модель артрита, индуцированная адъювантом (AIA)
Самцов крыс линии Lewis (Charles River, 125-150 г) адаптировали к виварию в течение одной недели до дня испытания с помощью с синтетического адъюванта липоидального амина (LA). В день эксперимента (d)=0, когда средний вес тела (BW) в группе составлял 165-200 г, крыс анестезировали изофлураном, выбривали нижний отдел спины и протирали спиртом, и затем подкожно инъецировали 0,1 мл LA, растворенного в Complete Freunds Adjuvant (CFA) (полный адъювант Фрейнда) (50 мг/мл LA в CFA), у основания хвоста. В день эксперимента d=7 регистрировали BW для каждого животного и измеряли размер голеностопного сустава с помощью электронного циркуля (QuantuMike micrometer; Mitutoyo). Формировали соразмерные группы в зависимости от размера голеностопного сустава и начинали обработку. Животным перорально вводили (PO) один раз в день (QD) или дважды в день (BID) исследуемые соединения 5, 6, 7 или 10 (смотри таблицу 1) при 10, 30 и 60 мг/кг, PO, дексаметазон (0,15 мг/кг, PO) или только носитель (5 мл/кг, PO), начиная с d=7 и до d=14, BW и размер голеностопного сустава регистрировали ежедневно.
Исследуемые соединения в самых высоких дозах демонстрировали больше чем 50% снижение опухания лапы по сравнению с контрольными. Некоторые соединения показали аналогичную эффективность при более низких тестируемых дозах. Эти результаты подтверждают эффективность исследуемых соединений для этого показания.
Коллаген-индуцированный артрит (CIA): полутерапевтическое дозирование
Самцов мышей B10 RIII (7-8 недельного возраста, Jackson Labs) адаптировали к обстановке вивария в течение одной недели. Затем их подвергали исследованию с помощью коллагена, который эмульгировали в CFA, дополненном микобактериями туберкулеза, в день эксперимента 0°C 15. Начиная с 12 дня эксперимента, далее животным вводили дозы исследуемого соединения 6, 7 или 10 (смотри таблицу 1) при 3, 10, 30 мг/кг (PO BID), или дексаметазон (0,2 мг/кг, положительный контроль). Клиническую тяжесть артрита оценивали с использованием установленной системы оценки во время исследования.
Исследуемые соединения показали более чем 50% снижение оценки артрита при самых высоких дозах. Некоторые соединения показали аналогичную эффективность при низких дозах исследуемого соединения. Эти результаты подтверждают эффективность исследуемых соединений для этого показания.
CIA: терапевтическое дозирование
Самцов мышей B10 RIII (7-8 недельного возраста, Jackson Labs) адаптировали к обстановке вивария в течение одной недели. Затем их подвергали исследованию с помощью коллагена, который эмульгировали в CFA, дополненном микобактериями туберкулеза, в день эксперимента 0°C 15. Начиная с 15 дня эксперимента далее животным вводили дозы исследуемого соединения 10, 40, 45 или 66 (смотри таблицу 1) при 3, 10, 30 мг/кг (PO BID), или дексаметазон (0,2 мг/кг, положительный контроль). Клиническую тяжесть артрита оценивали с использованием установленной системы оценки во время исследования.
Исследуемые соединения понизили среднюю оценку артрита у обработанных животных по сравнению с контрольными животными, обработанными носителем (вода), при самых высоких дозах.
Исследование ксенотрансплантата клеточной линии MDA-MB-231 с использованием соединения + Мапатубамаб
Самкам бестимусных мышей подкожно вводили 5×106 клетки MDA-MB-231 (CD) в правый бок (объем 0,1 мл) в день 0 эксперимента. Когда средний размер опухоли достиг ~100 мм3, формировали группы, используя сбалансированный план, основанный на размере опухоли, и начинали введение доз. Ежедневно вводили исследуемое соединение 10 или 7 (см. таблицу 1) (или только одно соответствующее транспортное средство) и дважды в неделю вводили мапатубамаб (или только одно соответствующее транспортное средство). Размер опухоли и вес тела измеряли дважды в неделю в течение исследования.
Соединения 10 и 7, при введении дозами (30 и 60 мг/кг, PO, QD) в сочетании с мапатубамабом (10 мг/кг, IV) уменьшали объем опухоли на 50% по сравнению с контролем, демонстрируя комбинационную эффективность между проверенными соединениями и мапатубамабом.
Исследование ксенотрансплантата клеточной линии MDA-MB-231 с использованием соединения + Таксол
Самкам бестимусных мышей CD-1 подкожно вводили 5×106 клетки MDA-MB-231 (CD) в правый бок (объем 0,1 мл, клетки суспендировали в бессывороточной среде) в день 1 эксперимента. Когда средний размер опухоли достиг ~100 мм3, формировали группы, используя сбалансированный план, основанный на размере опухоли. Затем дважды в неделю вводили соединения 10, 7, 20, 40, 45, 58, 63 и 66 в дозе 30 и 100 мг/кг, PO, в течение двух недель. Совместно с первым введением исследуемого соединения вводили Таксол (20 мг/кг, IP), и затем один раз в неделю в течение исследования. Размер опухоли и вес тела измеряли дважды в неделю.
С помощью исследуемых соединений достигали задержку или регресс развития опухоли в исследовании ксенотрансплантата.
Исследование максимально переносимой дозы (MTD):
Самцов мышей CD-1 (20-25 г по прибытию, Charles River) адаптировали к обстановке вивария в течение четырех дней и затем случайным образом распределяли в группы для обработки. Животным вводили перорально посредством желудочного зонда дважды в неделю, в течение в общей сложности шести введений, дозы соединения 63, 58, 45, 10, 20, 40 и 66 при 15, 70 или 350 мг/кг в воде, PO, или только воду (5 мл/кг, PO). Массу тела и общее состояние здоровья контролировали в течение всего эксперимента. Через двадцать четыре часа после введения последней дозы (день 19) животных анестезировали изофлураном и собирали кровь для биохимического анализа сыворотки. Биохимические параметры сыворотки включали выборочно глюкозу, мочевину, креатинин, общий белок, альбумин, глобулин, отношение A:G, общий билирубин, AST, ALT, щелочную фосфатазу, GGT и амилазу. После того как обескровленных животных подвергали полной аутопсии, регистрировали вес органов: мозга, сердца, печени, селезенки, почек, желудка (пустого) и кишечника (пустой, от желудка до слепой кишки). Поскольку некоторые обработки подавляли увеличение массы (см. ниже), массу органа нормировали к массе мозга, и затем выражали в виде процентного изменения от контрольной группы, обработанной носителем.
Мыши показали положительные кривые роста, и минимальные или отсутствие клинических признаков в результате обработки с небольшой потерей массы, наблюдаемой для соединений 63 и 40 в дозе 350 мг/кг.
Фармакокинетика (PK) соединения в плазме
Мышам CD-1 вводили дозами соединения 5, 6, 7, 10, 17, 34, 58, 63, 66, 77, 78, 80, 81, 86, 87, 99 и 114 посредством внутривенного или перорального введения. После введения концентрацию лекарственного средства в плазме подвергаемых обработке мышей определяли посредством ВЭЖХ-масс-спектрометрии, и концентрацию лекарственного средства оценивали относительно стандартных кривых исследуемых соединений. Область под кривой время-концентрация (AUC) определяли исходя из концентраций плазмы, и подсчитывали пероральную биодоступность (%F).
Исследуемые соединения формулы 1 показали хорошую пероральную биодоступность (19%-100% F) у мышей CD-1. Кроме того, соединения, выбранные из тестируемой группы соединений, показали положительное аллометрическое масштабирование к человеческим эквивалентным дозам.
Все ссылки, включая публикации, патентные заявки и патенты, приведенные в настоящем документе включены посредством ссылок, до той степени, как если бы каждая ссылка была индивидуально и конкретно включена и изложена здесь в полном объеме.
Применение терминов “a” и “an” и “the” и подобные референты в контексте описания изобретения (особенно в контексте следующих пунктов формулы изобретения) охватывает как форму единственного числа, так и множественного число, если не оговорено противное или явно противоречит контексту. Термины "содержащий", "имеющий", "включающий" и "охватывающий" должны быть истолкованы как открытые термины (то есть, означая “включая, но не ограничиваясь”), если не указано иное. Перечисление диапазонов значений в настоящем документе служит только способом сокращения ссылки индивидуально к каждому отдельному значению, попадающему в пределы диапазона, если в настоящем документе не указано иначе, и каждое отдельное значение включено в описание, как если бы оно было индивидуально изложено в настоящем документе. Все способы, описанные в настоящем документе, могут быть выполнены в любом подходящем порядке, если не указано иное или явно противоречит контексту. Использование любого и всех примеров или типичной формулировки (например, “такой как”), предложенной в настоящем документе, предназначено только для лучшего освещения изобретения и не ограничивает объем изобретения, если не заявлено иное. Ни одна формулировка в описании не должена быть истолкована как указание на какой-либо не заявленный элемент как обязательный для осуществления изобретения. В настоящем документе описаны варианты осуществления настоящего изобретения, включая наилучший способ, известный авторам, для выполнения изобретения. Изменения этих предпочтительных вариантов осуществления могут стать очевидными для рядового специалиста в данной области после прочтения вышеприведенного описания. Изобретатели ожидают, что специалисты в данной области будут использовать такие изменения в зависимости от ситуации, и изобретатели подразумевают иное осуществление изобретения, чем конкретно описаное в настоящем документе. Соответственно, настоящее изобретение включает все модификации и эквиваленты объекта изобретения, изложенные в пунктах формулы, приложенных к настоящему документу, как это разрешено действующим законом. Кроме того, любое сочетание вышеописанных элементов во всех его возможных вариантах охвачено изобретением, если не указано иное или иным образом явно не противоречит контексту настоящего документа.

Claims (32)

1. Соединение формулы 1:
Figure 00000285

или его фармацевтически приемлемая соль, где
R1 представляет собой Н, метил или этил;
R2 представляет собой метил или этил;
R3 представляет собой C1-C6алкил, C5-C6циклоалкил, или C5-C6гетероциклил, содержащий один атом кислорода, любой из которых может быть необязательно дополнительно замещен амино, C1-C6алкиламино или C1-C6алкокси;
R4 и R5 оба представляют собой H;
R6 представляет собой H или галоген;
X представляет собой CH2 или CH-R7, где R7 представляет собой NR8, OR8, NC(O)OR8, NHC(O)R8 или NHSO2R8, где R8 представляет собой C1-C6алкил, C3-C7циклоалкил, гетероциклил, арил, арил-C1-C6алкил или гетероарил, любой из которых может быть необязательно дополнительно замещен C1-C6алкилом, C1-C6алкокси, C1-C6галогеналкилом, или галогеном; или
X представляет собой
Figure 00000286

и G представляет собой
(1)
Figure 00000287
, где R9 представляет собой арил, необязательно замещенный C1-C3алкокси или галогеном; или
(2) замещенное или незамещенное азольное или пиррольное кольцо, конденсированное с замещенным или незамещенным арилом, гетероарилом, C5-C6циклоалкилом или гетероциклилом.
2. Соединение по п. 1, где G представляет собой
Figure 00000288
, и R9 представляет собой арил, необязательно замещенный C1-C3алкокси или галогеном.
3. Соединение по п. 1, где G представляет собой
Figure 00000289

Figure 00000290

Figure 00000291

и X1 представляет собой CH или N, R10 представляет собой H, галоген, гидроксил, C1-C6алкил, C1-C6алкокси, арил, амино или NHC(O)-C1-C6алкил, и R11 представляет собой водород, C1-C6алкил или NHC(O)CH3.
4. Соединение по п. 1, где G представляет собой
Figure 00000292

Figure 00000293

Figure 00000294

Figure 00000295

Figure 00000296

Figure 00000297

Figure 00000298

Figure 00000299

Figure 00000300

Figure 00000301

Figure 00000302

Figure 00000303
где R11 представляет собой H или C1-C6алкил.
5. Соединение по п. 1, где R6 представляет собой H или F.
6. Соединение по п. 1, где X представляет собой -СН2-.
7. Соединение по п. 1, где X представляет собой CH-NHC(O)R8, и R8 представляет собой C1-C6алкил, арил, арил-C1-C6алкил, C1-C6алкокси или гетероарил, любой из которых может быть необязательно дополнительно замещен C1-C6алкилом или галогеном.
8. Соединение по п. 1, где X представляет собой CH-OR8, и R8 представляет собой арил или арил-C1-C6алкил, который может быть необязательно дополнительно замещен галогеном.
9. Соединение по п. 1, где X представляет собой:
Figure 00000304

Figure 00000305

Figure 00000306
10. Соединение по п. 1, где R1 и R2 оба представляют собой метил.
11. Соединение по п. 1, где R3 представляет собой трет-бутил, циклогексил, тетрагидропиранил,
Figure 00000307
или
Figure 00000308
12. Соединение по п. 1, где соединение представляет собой:
Figure 00000309

Figure 00000310

Figure 00000311

Figure 00000312

Figure 00000313

Figure 00000314

Figure 00000315

Figure 00000316

Figure 00000317

Figure 00000318

Figure 00000319

Figure 00000320

Figure 00000321

Figure 00000322

Figure 00000323

Figure 00000324

Figure 00000325

Figure 00000326

Figure 00000327

Figure 00000328

Figure 00000329

или его фармацевтически приемлемая соль.
13. Способ усиления апоптоза в раковой клетке, включающий контактирование клетки с соединением по любому из пп. 1-12.
14. Способ изменения высвобождения цитокинов воспаления из клетки, включающий контактирование клетки с соединениями по любому из пп. 1-12.
15. Способ по п. 14, где клетка представляет собой лимфоцит, гранулоцит или антигенпредставляющую клетку.
16. Способ по п. 13 или 14, где клетка находится в субъекте, и клетка контактирует с соединением по любому из пп. 1-12 при введении соединения субъекту.
17. Способ по п. 16, дополнительно включающий введение субъекту хемотерапевтического вещества до, одновременно с или после введения соединения по любому из пп. 1-12.
18. Способ по п. 16, дополнительно включающий введение субъекту агониста рецепторов смерти до, одновременно с или после введения соединения по любому из пп. 1-12.
19. Способ по п. 18, где агонист рецепторов смерти представляет собой TRAIL.
20. Способ по п. 18, где агонистом рецепторов смерти является антитело к рецептору TRAIL.
21. Способ по п. 18, в котором агонист рецепторов смерти вводят в количестве, которое продуцирует синергический эффект.
22. Способ по п. 16, в котором субъектом является человек.
23. Способ по п. 22, где субъект страдает от пролиферативного заболевания.
24. Способ по п. 23, где пролиферативным заболеванием является рак.
25. Способ по п. 23, где пролиферативным заболеванием является аутоиммунное заболевание или воспалительное расстройство.
26. Соединение по п. 1 для усиления апоптоза в раковой клетке в соответствии со способом по любому из пп. 13-25.
27. Соединение по п. 1 для применения в качестве лекарственного средства для лечения пролиферативного заболевания.
28. Применение соединения по любому из пп. 1-12 для получения лекарственного средства для лечения пролиферативного заболевания.
29. Соединение любой из формул 1-vii, 4-ii или 4-i:
Figure 00000330

где PG4 представляет собой защитную группу, X, G, R1, R2, R3, R4, R5 и R6 имеют значения, определенные в п. 1.
30. Способ получения соединения по п. 1, включающий
объединение соединения 1-vi с соединением формулы LG-C(O)-G, где LG представляет собой удаляемую группу, и PG4 представляет собой защитную группу, удаление защитной группы у PG4 с получением соединения формулы 1:
Figure 00000331

где способ необязательно дополнительно включает
(a) удаление защитных групп у PG2 соединения 1-v с получением соединения 1-vi, где PG2 представляет собой защитную группу;
Figure 00000332

где способ необязательно дополнительно включает
(b) конденсацию соединения 1-iv с PG4(R1)N(R2)CHCO2H, где PG4 представляет собой защитную группу, которая отличается от PG2, с получением соединения 1-v;
Figure 00000333

где способ необязательно дополнительно включает
(c) конденсацию соединения 1-iii с PG3(Н)N(R3)CHCO2H, где PG3 представляет собой защитную группу, которая отличается от PG2, удаление защитной группы у PG3 с получением соединения 1-iv;
Figure 00000334

где способ необязательно дополнительно включает
(d) защиту аминогруппы соединения 1-ii защитной группой (PG2), которая отличается от PG1, удаление защитной группы PG1 с получением соединения 1-iii;
Figure 00000335

где способ необязательно дополнительно включает
(е) объединение соединение 1-i с амином, имеющим формулу
Figure 00000336
, последующее восстановление с помощью гидрида, с получением соединения 1-ii, где PG1 представляет собой защитную группу:
Figure 00000337

где
R1 представляет собой H, метил или этил;
R2 представляет собой метил или этил;
R3 представляет собой C1-C6алкил, C5-C6циклоалкил, или C5-C6гетероциклил, содержащий один атом кислорода, любой из которых может быть необязательно дополнительно замещен амино, C1-C6алкиламино или C1-C6алкокси;
R4 и R5 оба представляют собой H;
R6 представляет собой H или галоген;
X представляет собой CH2 или CH-R7, где R7 представляет собой NR8, OR8, NC(O)OR8, NHC(O)R8 или NHSO2R8, где R8 представляет собой C1-C6алкил, C3-C7циклоалкил, гетероциклил, арил, арил-C1-C6алкил или гетероарил, любой из которых может быть необязательно дополнительно замещен C1-C6алкилом, C1-C6алкокси, C1-C6галогеналкилом, или галогеном; или
X представляет собой
Figure 00000338
;
и G представляет собой замещенное или незамещенное азольное или пиррольное кольцо, конденсированное с замещенным или незамещенным арилом, гетероарилом, C5-C6циклоалкилом или гетероциклилом.
31. Способ получения соединения по п. 1, включающий объединение соединения 1-vi с соединением формулы LG-C(O)-G, где LG представляет собой удаляемую группу, удаление защитной группы PG4, с получением соединения формулы 1:
Figure 00000339

где способ необязательно дополнительно включает
(a) восстановительное аминирование соединения 2-iv с получением соединения 1-vi:
Figure 00000340

где способ необязательно дополнительно включает
(b) окисление соединения 2-iii с получением соединения 2-iv:
Figure 00000341

где способ необязательно дополнительно включает
(c) конденсацию соединения 2-ii с соединением формулы PG4(R1)N(R2)CHCO2H с получением соединения 2-iii, где PG4 представляет собой защитную группу:
Figure 00000342

где способ необязательно дополнительно включает
(d) конденсацию соединения 2-i с соединением формулы PG3(Н)N(R3)CHCO2H, где PG3 представляет собой защитную группу, удаление защитной группы у PG3 с получением промежуточного соединения 2-ii:
Figure 00000343

где
R1 представляет собой Н, метил или этил;
R2 представляет собой метил или этил;
R3 представляет собой C1-C6алкил, C5-C6циклоалкил, или C5-C6гетероциклил, содержащий один атом кислорода, любой из которых может быть необязательно дополнительно замещен амино, C1-C6алкиламино или C1-C6алкокси;
R4 и R5 оба представляют собой Н;
R6 представляет собой Н или галоген;
X представляет собой CH2 или CH-R7, где R7 представляет собой NR8, OR8, NC(O)OR8, NHC(O)R8 или NHSO2R8, где R8 представляет собой C1-C6алкил, C3-C7циклоалкил, гетероциклил, арил, арил-C1-C6алкил или гетероарил, любой из которых может быть необязательно дополнительно замещен C1-C6алкилом, C1-C6алкокси, C1-C6галогеналкилом, или галогеном; или
X представляет собой
Figure 00000344
;
и G представляет собой замещенное или незамещенное азольное или пиррольное кольцо, конденсированное с замещенным или незамещенным арилом, гетероарилом, C5-C6циклоалкилом или гетероциклилом.
32. Способ получения соединения по п. 1, включающий удаление защитной группы у соединения 1-vi с получением соединения формулы 1:
Figure 00000345

где способ необязательно представляет собой
(a) конденсацию соединения 4-ii с соединением, имеющим формулу PG4(R1)N(R2)CHCO2H с получением соединения 1-vii, где PG4 представляет собой защитную группу:
Figure 00000346

где способ необязательно дополнительно включает
(b) конденсацию соединения 4-i с соединением, имеющим формулу PG3(Н)N(R3)CHCO2H, где PG3 представляет собой защитную группу, удаление защитной группы у PG3 с получением соединения 4-ii:
Figure 00000347

где способ необязательно дополнительно включает
(с) объединение соединения 1-ii с соединением формулы LG-C(O)-G, где PG1 представляет собой защитную группу, удаление защитной группы у PG1 с получением промежуточного соединения 4-i:
Figure 00000348

где
R1 представляет собой H, метил или этил;
R2 представляет собой метил или этил;
R3 представляет собой C1-C6алкил, C5-C6циклоалкил, или C5-C6гетероциклил, содержащий один атом кислорода, любой из которых может быть необязательно дополнительно замещен амино, C1-C6алкиламино или C1-C6алкокси;
R4 и R5 оба представляют собой H;
R6 представляет собой H или галоген;
X представляет собой CH2 или CH-R7, где R7 представляет собой NR8, OR8, NC(O)OR8, NHC(O)R8 или NHSO2R8, где R8 представляет собой C1-C6алкил, C3-C7циклоалкил, гетероциклил, арил, арил-C1-C6алкил или гетероарил, любой из которых может быть необязательно дополнительно замещен C1-C6алкилом, C1-C6алкокси, C1-C6галогеналкилом, или галогеном; или
X представляет собой
Figure 00000349
;
и G представляет собой замещенное или незамещенное азольное или пиррольное кольцо, конденсированное с замещенным или незамещенным арилом, гетероарилом, C5-C6циклоалкилом или гетероциклилом.
RU2012139033/04A 2010-02-12 2011-02-11 Bir домен iap связывающие соединения RU2567544C2 (ru)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US30380910P 2010-02-12 2010-02-12
US61/303,809 2010-02-12
US41563810P 2010-11-19 2010-11-19
US61/415,638 2010-11-19
PCT/IB2011/000264 WO2011098904A1 (en) 2010-02-12 2011-02-11 Iap bir domain binding compounds

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2012139033A RU2012139033A (ru) 2014-03-20
RU2567544C2 true RU2567544C2 (ru) 2015-11-10

Family

ID=44367332

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2012139033/04A RU2567544C2 (ru) 2010-02-12 2011-02-11 Bir домен iap связывающие соединения

Country Status (14)

Country Link
US (1) US9284350B2 (ru)
EP (2) EP2534170B1 (ru)
KR (1) KR20120140658A (ru)
CN (1) CN102985439B9 (ru)
AU (1) AU2011214057B2 (ru)
BR (1) BR112012020113A2 (ru)
ES (1) ES2625637T3 (ru)
IL (1) IL221069A0 (ru)
MX (1) MX340870B (ru)
NZ (1) NZ602368A (ru)
RU (1) RU2567544C2 (ru)
SG (2) SG182724A1 (ru)
WO (1) WO2011098904A1 (ru)
ZA (1) ZA201206802B (ru)

Families Citing this family (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2534170B1 (en) * 2010-02-12 2017-04-19 Pharmascience Inc. Iap bir domain binding compounds
UY33794A (es) 2010-12-13 2012-07-31 Novartis Ag Inhibidores diméricos de las iap
WO2013049350A1 (en) 2011-09-30 2013-04-04 Tetralogic Pharmaceuticals Corporation Smac mimetic (birinapant) for use in the treatment of proliferative diseases (cancer)
CN112957365A (zh) 2013-06-25 2021-06-15 沃尔特和伊利莎豪医学研究所 治疗细胞内感染的方法
CN103360367A (zh) * 2013-07-31 2013-10-23 西北大学 一种脯氨酸衍生的手性胺及其制备方法
MA39145B1 (fr) 2013-12-20 2018-05-31 Esteve Labor Dr Dérivés de pipérazine ayant une activité multimode contre la douleur
EP3083601B1 (en) 2013-12-20 2020-09-09 Esteve Pharmaceuticals, S.A. Piperidine derivatives having multimodal activity against pain
MX2016006603A (es) 2013-12-20 2016-09-06 Esteve Labor Dr Compuestos piperidinicos con actividad multimodal contra el dolor.
WO2016079527A1 (en) 2014-11-19 2016-05-26 Tetralogic Birinapant Uk Ltd Combination therapy
WO2016097773A1 (en) 2014-12-19 2016-06-23 Children's Cancer Institute Therapeutic iap antagonists for treating proliferative disorders
US11639354B2 (en) 2018-07-31 2023-05-02 Fimecs, Inc. Heterocyclic compound
WO2020160295A1 (en) 2019-01-30 2020-08-06 Montelino Therapeutics, Llc Bi-functional compounds and methods for targeted ubiquitination of androgen receptor
CN112142823B (zh) * 2019-06-28 2022-08-05 深圳翰宇药业股份有限公司 一种zp-1609的合成方法
US20220402935A1 (en) 2019-07-31 2022-12-22 Fimecs, Inc. Heterocyclic compound
CA3234317A1 (en) 2021-10-22 2023-12-14 Wa Xian Methods and compositions for treating chronic inflammatory injury, metaplasia, dysplasia and cancers of epithelial tissues

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2006122408A1 (en) * 2005-05-18 2006-11-23 Aegera Therapeutics Inc. Bir domain binding compounds
RU2401840C2 (ru) * 2004-07-02 2010-10-20 Дженентек, Инк. Ингибиторы iap

Family Cites Families (172)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4450150A (en) 1973-05-17 1984-05-22 Arthur D. Little, Inc. Biodegradable, implantable drug delivery depots, and method for preparing and using the same
JPH0680077B2 (ja) 1985-02-08 1994-10-12 サントリー株式会社 プロリンエンドペプチダ−ゼインヒビタ−活性を有する新規ペプチド化合物
US4816444A (en) 1987-07-10 1989-03-28 Arizona Board Of Regents, Arizona State University Cell growth inhibitory substance
US5750646A (en) 1987-09-24 1998-05-12 The Administrators Of The Tulane Educational Fund Bradykinin analogs with non-peptide bond
US4879278A (en) 1989-05-16 1989-11-07 Arizona Board Of Regents Isolation and structural elucidation of the cytostatic linear depsipeptide dolastatin 15
US4939168A (en) 1989-08-11 1990-07-03 Harbor Branch Oceanographics Institution, Inc. Discodermolide compounds, compositions containing same and methods of preparation and use
US5010099A (en) 1989-08-11 1991-04-23 Harbor Branch Oceanographic Institution, Inc. Discodermolide compounds, compositions containing same and method of preparation and use
GB9016810D0 (en) 1990-07-31 1990-09-12 Wellcome Found Peptides
JPH04208299A (ja) 1990-11-30 1992-07-29 Ajinomoto Co Inc プロリルエンドペプチターゼ阻害ペプチド
US5387671A (en) 1990-12-27 1995-02-07 Abbott Laboratories Hexa- and heptapeptide anaphylatoxin-receptor ligands
DK0598129T3 (da) 1991-08-09 2000-07-03 Teikoku Hormone Mfg Co Ltd Nye tetrapeptidderivater
US5399726A (en) 1993-01-29 1995-03-21 Florida State University Process for the preparation of baccatin III analogs bearing new C2 and C4 functional groups
US5728725A (en) 1991-09-23 1998-03-17 Florida State University C2 taxane derivaties and pharmaceutical compositions containing them
US5721268A (en) 1991-09-23 1998-02-24 Florida State University C7 taxane derivatives and pharmaceutical compositions containing them
US5990325A (en) 1993-03-05 1999-11-23 Florida State University Process for the preparation of 9-desoxotaxol, 9-desoxobaccatin III and analogs thereof
US5714513A (en) 1991-09-23 1998-02-03 Florida State University C10 taxane derivatives and pharmaceutical compositions
US6011056A (en) 1991-09-23 2000-01-04 Florida State University C9 taxane derivatives and pharmaceutical compositions containing them
IT1254515B (it) 1992-03-06 1995-09-25 Indena Spa Tassani di interesse oncologico, loro metodo di preparazione ed uso
US5831002A (en) 1992-05-20 1998-11-03 Basf Aktiengesellschaft Antitumor peptides
US5635483A (en) 1992-12-03 1997-06-03 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Tumor inhibiting tetrapeptide bearing modified phenethyl amides
IT1261667B (it) 1993-05-20 1996-05-29 Tassano ad attivita' antitumorale.
US5952298A (en) 1993-12-21 1999-09-14 The University Of Hawaii Cryptophycins
US5955423A (en) 1993-12-21 1999-09-21 The University Of Hawaii Cryptophycins
US5504191A (en) 1994-08-01 1996-04-02 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Human cancer inhibitory pentapeptide methyl esters
US5521284A (en) 1994-08-01 1996-05-28 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Human cancer inhibitory pentapeptide amides and esters
US5530097A (en) 1994-08-01 1996-06-25 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Human cancer inhibitory peptide amides
JPH10508022A (ja) 1994-10-28 1998-08-04 ザ リサーチ ファウンデーション オブ ステート ユニバーシティ オブ ニューヨーク タキソイド誘導体、それらの製造、およびそれらの抗腫瘍薬としての使用
US6100411A (en) 1994-10-28 2000-08-08 The Research Foundation Of State University Of New York Taxoid anti-tumor agents and pharmaceutical compositions thereof
US6458976B1 (en) 1994-10-28 2002-10-01 The Research Foundation Of State University Of New York Taxoid anti-tumor agents, pharmaceutical compositions, and treatment methods
US6500858B2 (en) 1994-10-28 2002-12-31 The Research Foundation Of The State University Of New York Taxoid anti-tumor agents and pharmaceutical compositions thereof
US5719177A (en) 1994-11-04 1998-02-17 Pharmacia S.P.A. Taxane derivatives
US5473057A (en) 1994-11-09 1995-12-05 The Regents Of The University Of California Eleutherobin and analogs thereof
US5599902A (en) 1994-11-10 1997-02-04 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Cancer inhibitory peptides
US5580899A (en) 1995-01-09 1996-12-03 The Liposome Company, Inc. Hydrophobic taxane derivatives
US6156535A (en) 1995-08-04 2000-12-05 University Of Ottawa Mammalian IAP gene family, primers, probes, and detection methods
FI101923B1 (fi) 1995-12-05 1998-09-15 Nokia Telecommunications Oy Puheenvuorojen jakaminen suorakanavalla liikennöiville matkaviestimille
US5681847A (en) 1995-12-05 1997-10-28 Harbor Branch Oceanographic Institution, Inc. Methods of using discodermolide compounds
US5767297A (en) 1997-02-05 1998-06-16 Ensuiko Sugar Refining Co., Ltd. Taxoid derivative and method of producing thereof
US6441025B2 (en) 1996-03-12 2002-08-27 Pg-Txl Company, L.P. Water soluble paclitaxel derivatives
EP0932399B1 (en) 1996-03-12 2006-01-04 PG-TXL Company, L.P. Water soluble paclitaxel prodrugs
US6133437A (en) 1997-02-13 2000-10-17 Apoptogen, Inc. Modulation of IAPs for the treatment of proliferative diseases
IT1283633B1 (it) 1996-05-10 1998-04-23 Indena Spa Derivati tassanici loro sintesi e formulazioni che li contengono
US5919815A (en) 1996-05-22 1999-07-06 Neuromedica, Inc. Taxane compounds and compositions
AU710156B2 (en) 1996-07-15 1999-09-16 Kabushiki Kaisha Yakult Honsha Taxane derivatives and drugs containing the same
US5741892A (en) 1996-07-30 1998-04-21 Basf Aktiengesellschaft Pentapeptides as antitumor agents
US5939527A (en) 1996-07-30 1999-08-17 Basf Aktiengesellschaft Tetrapeptides as antitumor agents
WO1998008833A1 (en) 1996-08-26 1998-03-05 Bristol-Myers Squibb Company Sulfenamide taxane derivatives
JP4579351B2 (ja) 1996-12-03 2010-11-10 スローン−ケッタリング インスティトュート フォア キャンサー リサーチ エポチロンの合成とその中間体及びその類似物並びにその使用
US6441186B1 (en) 1996-12-13 2002-08-27 The Scripps Research Institute Epothilone analogs
US6380394B1 (en) 1996-12-13 2002-04-30 The Scripps Research Institute Epothilone analogs
EP1201666A3 (de) 1997-02-25 2003-03-05 Gesellschaft für biotechnologische Forschung mbH (GBF) Seitenkettenmodifizierte Epothilone
US5886025A (en) 1997-03-06 1999-03-23 Baylor University Anti-mitotic agents which inhibit tubulin polymerization
US5965537A (en) 1997-03-10 1999-10-12 Basf Aktiengesellschaft Dolastatin 15 derivatives with carbonyl and heterocyclic functionalities at the C-terminus
US6103698A (en) 1997-03-13 2000-08-15 Basf Aktiengesellschaft Dolastatin-15 derivatives in combination with taxanes
FR2761990B1 (fr) 1997-04-10 1999-06-25 Pf Medicament Derives halogenes antimitotiques d'alcaloides de vinca
ATE370232T1 (de) 1997-05-15 2007-09-15 Genentech Inc Anti-apo-2 antikörper
US6605599B1 (en) 1997-07-08 2003-08-12 Bristol-Myers Squibb Company Epothilone derivatives
US6143721A (en) 1997-07-18 2000-11-07 Basf Aktiengesellschaft Dolastatin 15 derivatives
JP2001512723A (ja) 1997-08-09 2001-08-28 シエーリング アクチエンゲゼルシヤフト 新規エポチロン誘導体、その製法およびその薬学的使用
JPH1192468A (ja) 1997-09-17 1999-04-06 Yakult Honsha Co Ltd 新規なタキサン誘導体
WO1999018113A1 (fr) 1997-10-08 1999-04-15 Bio Research Corporation Of Yokohama Derives taxoides et leur procede de production
US5965718A (en) 1997-10-24 1999-10-12 The Scripps Research Institute Analogs of sarcodictyin and eleutherobin
KR100551945B1 (ko) 1997-12-19 2006-02-20 가부시키가이샤 야쿠루트 혼샤 택산 유도체
US6423689B1 (en) 1997-12-22 2002-07-23 Warner-Lambert Company Peptidyl calcium channel blockers
US6302838B1 (en) 1998-02-25 2001-10-16 Novartis Ag Cancer treatment with epothilones
US6498257B1 (en) 1998-04-21 2002-12-24 Bristol-Myers Squibb Company 2,3-olefinic epothilone derivatives
US6380395B1 (en) 1998-04-21 2002-04-30 Bristol-Myers Squibb Company 12, 13-cyclopropane epothilone derivatives
US6252050B1 (en) 1998-06-12 2001-06-26 Genentech, Inc. Method for making monoclonal antibodies and cross-reactive antibodies obtainable by the method
US6258841B1 (en) 1998-06-29 2001-07-10 Parker Hughes Institute Tubulin binding compounds (COBRA)
US5985837A (en) 1998-07-08 1999-11-16 Basf Aktiengesellschaft Dolastatin 15 derivatives
DE19843730A1 (de) 1998-09-24 2000-03-30 Sueddeutsche Kalkstickstoff Stabilisierte, wasserlösliche Polymerpulver auf Basis von Polyoxyalkylenglykol-Carboxylaten und Verfahren zu deren Herstellung
US6127406A (en) 1998-10-09 2000-10-03 Harbor Branch Oceanographic Institution, Inc. Discodermolide compounds and methods of use
CA2350189A1 (en) 1998-11-20 2000-06-02 Kosan Biosciences, Inc. Recombinant methods and materials for producing epothilone and epothilone derivatives
US6433187B1 (en) 1998-12-17 2002-08-13 Tularik Inc. Certain polycyclic compounds useful as tubulin-binding agents
DE69910831T2 (de) 1998-12-22 2004-07-15 Novartis Ag Epothilonderivate und ihre verwendung als antitumormittel
EE200100431A (et) 1999-02-18 2002-12-16 Schering Aktiengesellschaft 16-halogenoepotilooni derivaadid, nende valmistamismeetod ja farmatseutiline kasutamine
HUP0200076A3 (en) 1999-02-22 2003-01-28 Bristol Myers Squibb Co C-21 modified epothilones, process for their preparation, pharmaceutical compositions containing them
US6291684B1 (en) 1999-03-29 2001-09-18 Bristol-Myers Squibb Company Process for the preparation of aziridinyl epothilones from oxiranyl epothilones
US6323315B1 (en) 1999-09-10 2001-11-27 Basf Aktiengesellschaft Dolastatin peptides
US6110691A (en) 2000-01-06 2000-08-29 Board Of Regents, The University Of Texas System Activators of caspases
US6414015B1 (en) 2000-01-28 2002-07-02 Utah State University Laulimalide microtubule stabilizing agents
EP1259245A2 (en) 2000-02-24 2002-11-27 Harbor Branch Oceanographic Institution, Inc. Novel compositions and uses of dictyostatin compounds
WO2001064663A2 (en) 2000-03-01 2001-09-07 Harbor Branch Oceanographic Institution, Inc. Biologically active analogs of discodermolide
US6362217B2 (en) 2000-03-17 2002-03-26 Bristol-Myers Squibb Company Taxane anticancer agents
US6489314B1 (en) 2001-04-03 2002-12-03 Kosan Biosciences, Inc. Epothilone derivatives and methods for making and using the same
US6589968B2 (en) 2001-02-13 2003-07-08 Kosan Biosciences, Inc. Epothilone compounds and methods for making and using the same
TWI318983B (en) 2000-05-02 2010-01-01 Uab Research Foundation An antibody selective for a tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand receptor and uses thereof
WO2001092255A2 (en) 2000-05-26 2001-12-06 Kosan Biosciences, Inc. Epothilone derivatives and methods for making and using the same
UA75365C2 (en) 2000-08-16 2006-04-17 Bristol Myers Squibb Co Epothilone analog polymorph modifications, a method for obtaining thereof (variants), a pharmaceutical composition based thereon
US6608026B1 (en) 2000-08-23 2003-08-19 Board Of Regents, The University Of Texas System Apoptotic compounds
US6624317B1 (en) 2000-09-25 2003-09-23 The University Of North Carolina At Chapel Hill Taxoid conjugates as antimitotic and antitumor agents
US7718600B2 (en) 2000-09-29 2010-05-18 The Trustees Of Princeton University IAP binding compounds
AU2001293189A1 (en) 2000-09-29 2002-04-08 Trustees Of Princeton University Compositions and methods for regulating apoptosis
WO2002096930A2 (en) 2001-05-31 2002-12-05 The Trustees Of Princeton University Iap binding peptides and assays for identifying compounds that bind iap
US6992063B2 (en) 2000-09-29 2006-01-31 The Trustees Of Princeton University Compositions and method for regulating apoptosis
WO2002030959A2 (en) 2000-10-13 2002-04-18 Abbott Laboratories Peptides derived from smac (diablo) and methods of use therefor
US20070292411A1 (en) 2000-11-08 2007-12-20 Human Genome Sciences, Inc. Antibodies That Immunospecifically Bind to TRAIL Receptors
EP1358186A1 (en) 2001-02-09 2003-11-05 Kosan Biosciences, Inc. Laulimalide derivatives
US6893859B2 (en) 2001-02-13 2005-05-17 Kosan Biosciences, Inc. Epothilone derivatives and methods for making and using the same
EP1368030A1 (en) 2001-02-20 2003-12-10 Bristol-Myers Squibb Company Epothilone derivatives for the treatment of refractory tumors
US20030083263A1 (en) 2001-04-30 2003-05-01 Svetlana Doronina Pentapeptide compounds and uses related thereto
US20030023082A1 (en) 2001-05-15 2003-01-30 Gary Ashley Epothilone derivatives and methods for making and using the same
KR100932577B1 (ko) 2001-05-18 2009-12-17 기린 홀딩스 가부시키가이샤 항 ｔｒａｉｌ-ｒ 항체
US7361341B2 (en) 2001-05-25 2008-04-22 Human Genome Sciences, Inc. Methods of treating cancer using antibodies that immunospecifically bind to trail receptors
EP1392664A4 (en) 2001-06-01 2005-01-26 Bristol Myers Squibb Co EPOTHILONE DERIVATIVES
US6737409B2 (en) 2001-07-19 2004-05-18 Hoffmann-La Roche Inc. Dolastatin 10 derivatives
US20060258581A1 (en) 2001-11-21 2006-11-16 Reed John C Methods and composition for derepressions of IAP-inhibited caspase
AU2002360430A1 (en) 2001-11-26 2003-06-10 Kosan Biosciences, Inc. 14-methyl-epothilones
US20030180296A1 (en) 2001-12-20 2003-09-25 Theodora Salcedo Antibodies that immunospecifically bind to trail receptors
DE10164592A1 (de) 2001-12-21 2003-07-03 Schering Ag C1-C6-Epothilon-Fragmente und Verfahren für die Herstellung von C1-C6-Fragmenten von Epothilonen und deren Derivaten
AU2003212457A1 (en) 2002-03-01 2003-09-16 University Of Notre Dame Derivatives of epothilone b and d and synthesis thereof
WO2003077903A1 (en) 2002-03-12 2003-09-25 Bristol-Myers Squibb Company C12-cyano epothilone derivatives
WO2003086470A2 (en) 2002-04-17 2003-10-23 Deutsches Krebsforschungszentrum Smac-peptides as therapeutics against cancer and autoimmune diseases
CA2483627A1 (en) 2002-05-23 2003-12-04 Merck & Co., Inc. Mitotic kinesin inhibitors
WO2004005248A1 (en) 2002-07-02 2004-01-15 Novartis Ag Peptide inhibitors of smac protein binding to inhibitor of apoptosis proteins (iap)
AU2003297579A1 (en) 2002-11-27 2004-06-23 Irm Llc Methods and compositions for inducing apoptosis in cancer cells
WO2004066958A2 (en) 2003-01-30 2004-08-12 The Trustees Of Princeton University Caspase-9:bir3 domain of xiap complexes and methods of use
CA2553871A1 (en) 2004-01-16 2005-08-04 The Regents Of The University Of Michigan Smac peptidomimetics and the uses thereof
US20110251134A1 (en) 2004-02-05 2011-10-13 Leigh Zawel Combination of (a) a dna toposomerase inhibitor and (b) an iap inhibitor
AU2005218555B2 (en) 2004-03-01 2008-01-03 Board Of Regents, The University Of Texas System Dimeric small molecule potentiators of apoptosis
US7345081B2 (en) 2004-03-23 2008-03-18 Genentech, Inc. Azabicyclo-octane inhibitors of IAP
ES2394441T3 (es) 2004-04-07 2013-01-31 Novartis Ag Inhibidores de IAP
US7674787B2 (en) 2004-07-09 2010-03-09 The Regents Of The University Of Michigan Conformationally constrained Smac mimetics and the uses thereof
EP1773348A4 (en) 2004-07-12 2009-05-20 Idun Pharmaceuticals Inc TETRA PEPTIDE ANALOGS
EP1773766B1 (en) 2004-07-15 2014-04-02 Tetralogic Pharmaceuticals Corporation Iap binding compounds
CN100427505C (zh) 2004-08-19 2008-10-22 中国医学科学院基础医学研究所 抗人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的受体dr5单克隆抗体（ad5-10）及其制法与用途
WO2006069063A1 (en) 2004-12-20 2006-06-29 Genentech, Inc. Pyrrolidine inhibitors of iap
US8029783B2 (en) 2005-02-02 2011-10-04 Genentech, Inc. DR5 antibodies and articles of manufacture containing same
JP5198880B2 (ja) 2005-02-25 2013-05-15 テトラロジック ファーマシューティカルズ コーポレーション 二量体ｉａｐ阻害剤
US20070003535A1 (en) 2005-03-17 2007-01-04 Reed John C Methods and compositions for derepression of IAP-inhibited caspase
GB0506589D0 (en) 2005-03-31 2005-05-04 British Telecomm Optical fibre installation apparatus
DE102005017116A1 (de) 2005-04-13 2006-10-26 Novartis Ag Hemmstoffe für Inhibitoren von Apoptose Proteinen (IAP)
EP1888619B1 (en) 2005-05-25 2013-04-17 2cureX ApS Compounds modifying apoptosis
CN101193908B (zh) 2005-06-08 2012-04-11 诺瓦提斯公司 有机化合物
WO2007021825A2 (en) 2005-08-09 2007-02-22 Tetralogic Pharmaceuticals Corporation Treatment of proliferative disorders
PE20071101A1 (es) 2005-08-31 2007-12-21 Amgen Inc Polipeptidos y anticuerpos
BRPI0617751A2 (pt) * 2005-10-25 2011-08-02 Aegera Therapeutics Inc compostos de ligação do domìnio iap bir
CN101360728A (zh) * 2005-10-25 2009-02-04 艾吉拉医疗股份有限公司 Iap bir结构域结合化合物
NZ594746A (en) 2005-12-19 2013-03-28 Genentech Inc Inhibitors of iap
CN101340947B (zh) 2005-12-20 2012-09-05 诺瓦提斯公司 Iap-抑制剂和紫杉烷7的组合
WO2007101347A1 (en) 2006-03-07 2007-09-13 Aegera Therapeutics Inc. Bir domain binding compounds
TWI543988B (zh) 2006-03-16 2016-08-01 科學製藥股份有限公司 結合於細胞凋亡抑制蛋白（ｉａｐ）之桿狀病毒ｉａｐ重複序列（ｂｉｒ）區域之化合物
CN101443309B (zh) * 2006-03-16 2013-04-24 埃格拉医疗公司 Iap bir域结合化合物
MX2008012053A (es) 2006-03-21 2008-12-17 Joyant Pharmaceuticals Inc Promotores de apoptosis de molecula pequeña.
AU2007248473B2 (en) 2006-05-05 2011-01-27 The Regents Of The University Of Michigan Bivalent Smac mimetics and the uses thereof
NZ572836A (en) * 2006-05-16 2011-12-22 Pharmascience Inc Iap bir domain binding compounds
EP2049524A2 (en) 2006-07-24 2009-04-22 Tetralogic Pharmaceuticals Corporation Iap inhibitors
MX2009000824A (es) 2006-07-24 2009-02-04 Tetralogic Pharmaceuticals Cor Antagonistas dimericos de las proteinas inhibidoras de la apoptosis.
WO2008014236A1 (en) 2006-07-24 2008-01-31 Tetralogic Pharmaceuticals Corporation Dimeric iap inhibitors
US20100143499A1 (en) 2006-07-24 2010-06-10 Tetralogic Pharmaceuticals Corporation Dimeric iap inhibitors
US20100113326A1 (en) 2006-07-24 2010-05-06 Tetralogic Pharmaceuticals Corporation Dimeric iap inhibitors
WO2008014229A2 (en) 2006-07-24 2008-01-31 Tetralogic Pharmaceuticals Corporation Dimeric iap inhibitors
PE20110224A1 (es) 2006-08-02 2011-04-05 Novartis Ag PROCEDIMIENTO PARA LA SINTESIS DE UN PEPTIDOMIMETICO DE Smac INHIBIDOR DE IAP, Y COMPUESTOS INTERMEDIARIOS PARA LA SINTESIS DEL MISMO
CN101595121A (zh) 2006-10-12 2009-12-02 诺瓦提斯公司 作为iap抑制剂的吡咯烷衍生物
WO2008057172A2 (en) 2006-10-19 2008-05-15 Novartis Ag Organic compounds
AU2007342225A1 (en) 2006-11-28 2008-07-17 Novartis Ag Use of IAP inhibitors for the treatment of acute myeloid leukemia
RU2456983C2 (ru) 2006-11-28 2012-07-27 Новартис Аг Комбинация ингибиторов iap и flt3
AU2007332862A1 (en) 2006-12-07 2008-06-19 Novartis Ag Organic compounds
JP2010513561A (ja) 2006-12-19 2010-04-30 ジェネンテック， インコーポレイテッド Ｉａｐのイミダゾピリジンインヒビター
CA2684169C (en) 2007-04-12 2012-06-19 Joyant Pharmaceuticals, Inc. Smac mimetic dimers and trimers useful as anti-cancer agents
CA2683318C (en) 2007-04-13 2012-10-30 The Regents Of The University Of Michigan Diazo bicyclic smac mimetics and the uses thereof
KR20100024923A (ko) 2007-04-30 2010-03-08 제넨테크, 인크. Ｉａｐ의 억제제
US20100203012A1 (en) 2007-05-30 2010-08-12 Aegera Therapeutics, Inc. Iap bir domain binding compounds
EP2058312A1 (en) 2007-11-09 2009-05-13 Universita' degli Studi di Milano SMAC mimetic compounds as apoptosis inducers
WO2009136290A1 (en) 2008-05-05 2009-11-12 Aegera Therapeutics, Inc. Functionalized pyrrolidines and use thereof as iap inhibitors
EP2296650B1 (en) 2008-05-16 2020-05-06 Novartis AG Immunomodulation by iap inhibitors
TW201011006A (en) 2008-06-16 2010-03-16 Nuevolution As IAP binding compounds
WO2009155709A1 (en) 2008-06-27 2009-12-30 Aegera Therapeutics Inc. Bridged secondary amines and use thereof as iap bir domain binding compounds
US20120009141A1 (en) 2008-08-07 2012-01-12 Pharmascience Inc. Functionalized pyrrolidines and use thereof as iap inhibitors
NL2001882C2 (nl) 2008-08-12 2010-02-15 Heineken Supply Chain Bv Tapkop, tapinrichting en werkwijze voor gebruik van een tapinrichting.
WO2010031171A1 (en) 2008-09-19 2010-03-25 Aegera Therapeutics, Inc. Iap bir domain binding compounds
EP2534170B1 (en) * 2010-02-12 2017-04-19 Pharmascience Inc. Iap bir domain binding compounds

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2401840C2 (ru) * 2004-07-02 2010-10-20 Дженентек, Инк. Ингибиторы iap
WO2006122408A1 (en) * 2005-05-18 2006-11-23 Aegera Therapeutics Inc. Bir domain binding compounds

Also Published As

Publication number Publication date
EP2534170A1 (en) 2012-12-19
MX2012009342A (es) 2012-11-29
SG182724A1 (en) 2012-08-30
US20130040892A1 (en) 2013-02-14
NZ602368A (en) 2014-10-31
ZA201206802B (en) 2013-05-29
BR112012020113A2 (pt) 2016-06-07
EP3263583A1 (en) 2018-01-03
AU2011214057A1 (en) 2012-10-04
WO2011098904A1 (en) 2011-08-18
ES2625637T3 (es) 2017-07-20
RU2012139033A (ru) 2014-03-20
CN102985439B9 (zh) 2016-08-03
SG10201501095WA (en) 2015-04-29
CN102985439B (zh) 2016-06-15
EP2534170B1 (en) 2017-04-19
AU2011214057B2 (en) 2016-11-17
US9284350B2 (en) 2016-03-15
IL221069A0 (en) 2012-09-24
EP2534170A4 (en) 2014-04-30
KR20120140658A (ko) 2012-12-31
CN102985439A (zh) 2013-03-20
MX340870B (es) 2016-07-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2567544C2 (ru) Bir домен iap связывающие соединения
US7795298B2 (en) IAP BIR domain binding compounds
US9365614B2 (en) IAP BIR domain binding compounds
EP1883627B1 (en) Bir domain binding compounds
US20120009141A1 (en) Functionalized pyrrolidines and use thereof as iap inhibitors
US20100203012A1 (en) Iap bir domain binding compounds
US20110117081A1 (en) Functionalized pyrrolidines and use thereof as iap inhibitors
US20090192140A1 (en) Iap bir domain binding compounds
US20110171171A1 (en) Bridged secondary amines and use thereof as iap bir domain binding compounds
CN101360728A (zh) Iap bir结构域结合化合物
US20120141496A1 (en) Iap bir domain binding compounds
MX2008014502A (es) Compuestos de union a dominio de repeticion de proteinas inhibidoras de apoptosis baculovirales de las proteinas inhibidoras de apoptosis.

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20180212