RU2554797C1 - Complex antibacterial agent for animals - Google Patents
Complex antibacterial agent for animals Download PDFInfo
- Publication number
- RU2554797C1 RU2554797C1 RU2014109031/15A RU2014109031A RU2554797C1 RU 2554797 C1 RU2554797 C1 RU 2554797C1 RU 2014109031/15 A RU2014109031/15 A RU 2014109031/15A RU 2014109031 A RU2014109031 A RU 2014109031A RU 2554797 C1 RU2554797 C1 RU 2554797C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- drug
- animals
- group
- dose
- fluoroquinolones
- Prior art date
Links
Landscapes
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к области ветеринарии и может быть использовано с лечебной или лечебно-профилактической целью при респираторных и желудочно-кишечных заболеваниях бактериальной и микоплазменной этиологии, в том числе энзоотической пневмонии, плевропневмонии, сальмонеллезе, пастереллезе, микоплазмозе, колибактериозе и других инфекциях у животных, в частности, у свиней, кур и индеек.The invention relates to the field of veterinary medicine and can be used for therapeutic or therapeutic purposes in case of respiratory and gastrointestinal diseases of bacterial and mycoplasma etiology, including enzootic pneumonia, pleuropneumonia, salmonellosis, pasteurellosis, mycoplasmosis, colibacteriosis and other infections in animals, in particular in pigs, chickens and turkeys.
Свиноводство и птицеводство являются одними из особенно интенсивно развивающихся отраслей народного хозяйства. Отличительной особенностью данных отраслей являются средние или крупные сельхозпредприятия со сложной эпизоотической ситуацией. Факторы, действующие негативно в условиях комплексов, - это содержание большого поголовья животных на ограниченной площади, рост числа ослабленных животных с нарушениями обмена веществ и иммунодефицитами. Кроме того, ситуацию осложняют не всегда благоприятные экологические условия. Все это нередко приводит к появлению и быстрому распространению разнообразных заболеваний. Больное же животное - это источник дальнейшего распространения инфекции, даже если клинические признаки проявляются в стертой форме или латентно. Таким образом, в комплексе мер по борьбе с заразной патологией животных, наряду со специфической профилактикой и ветеринарно-санитарными мероприятиями, по-прежнему одно из ведущих мест должно отводиться применению эффективных антимикробных средств.Pig and poultry are some of the most intensively developing sectors of the economy. A distinctive feature of these sectors are medium or large agricultural enterprises with a difficult epizootic situation. Factors that act negatively in the conditions of the complexes are the content of a large number of animals in a limited area, the increase in the number of weakened animals with metabolic disorders and immunodeficiencies. In addition, the situation is complicated by not always favorable environmental conditions. All this often leads to the emergence and rapid spread of a variety of diseases. A sick animal is a source of further spread of infection, even if clinical signs appear in a worn out or latent form. Thus, in a package of measures to combat infectious animal pathology, along with specific prophylaxis and veterinary and sanitary measures, the use of effective antimicrobials should still be given one of the leading places.
Антибактериальная терапия является важнейшей составляющей комплексного эффективного лечения животных. Однако широкое бесконтрольное использование антибактериальных средств в предыдущие десятилетия привело к росту антибиотикорезистентности полевых штаммов различных возбудителей, формирующих ассоциации. Лечение инфекционных заболеваний, вызываемых такими микроорганизмами и их ассоциациями, остается проблемой как в отношении продуктивных, так и в отношении мелких домашних животных. Так как данные заболевания наносят ощутимый экономический ущерб, борьба с ними является актуальной задачей.Antibacterial therapy is an essential component of a comprehensive effective treatment of animals. However, the widespread uncontrolled use of antibacterial agents in previous decades led to an increase in the antibiotic resistance of field strains of various pathogens that form associations. The treatment of infectious diseases caused by such microorganisms and their associations remains a problem for both productive and small pets. Since these diseases cause significant economic damage, the fight against them is an urgent task.
В соответствии с изложенным, из-за широко распространенной резистентности инфекционных агентов ко многим применяемым антибиотикам постоянно ведется поиск новых химиотерапевтических антибактериальных препаратов, отличающихся по механизму действия.In accordance with the foregoing, due to the widespread resistance of infectious agents to many antibiotics used, a search is constantly underway for new chemotherapeutic antibacterial drugs that differ in their mechanism of action.
Исследования отечественных и зарубежных авторов свидетельствуют о том, что наиболее эффективными оказываются комплексные препараты на основе высокоактивных современных субстанций, сочетание которых обеспечивает эффект синергизма и широкий диапазон чувствительной к препарату микрофлоры.Studies of domestic and foreign authors indicate that complex preparations based on highly active modern substances turn out to be the most effective, the combination of which provides a synergistic effect and a wide range of microflora sensitive to the drug.
В настоящее время благодаря высокой частоте использования в лечебной практике и существенной роли в терапии инфекционных процессов в первых рядах «борцов с микробами» по праву находятся фторхинолоны. Хинолоны вообще, а фторхинолоны в частности не имеют аналогов в природной среде, что обеспечивает их высокую активность относительно полирезистентных штаммов микроорганизмов. Также не описаны случаи формирования резистентности у микроорганизмов после длительного применения фторхинолонов.Currently, due to the high frequency of use in medical practice and a significant role in the treatment of infectious processes, fluoroquinolones are rightfully in the forefront of the “fighters against microbes”. Quinolones in general, and fluoroquinolones in particular, have no analogues in the natural environment, which ensures their high activity with respect to multiresistant strains of microorganisms. Also, cases of the formation of resistance in microorganisms after prolonged use of fluoroquinolones are not described.
Известны препараты с широким спектром действия, в состав которых входят фторхинолоны (см., например, CN 102846615 A, 02.01.2013, WO 2009136408 A1, 12.11.2009, KR 20090102053 A, 30.09.2009, EP 1880722 A1, 23.01.2008, препарат Ципрокол - адрес в Интернете: http://vetsintez.com.ua/catalog/at2, ООО Ветсинтез, 18.10.2011).Known drugs with a wide spectrum of action, which include fluoroquinolones (see, for example, CN 102846615 A, 02.01.2013, WO 2009136408 A1, 11/12/2009, KR 20090102053 A, 09/30/2009, EP 1880722 A1, 01/23/2008, Ciprokol drug - Internet address: http://vetsintez.com.ua/catalog/at2, LLC Vetsintez, 10/18/2011).
Наиболее близким аналогом заявленного препарата является Ципрокол.The closest analogue of the claimed drug is Tsiprokol.
Препарат производится в Украине и содержит в своем составе соединение из группы фторхинолонов - ципрофлоксацин, а также полипептидный антибиотик - колистина сульфат и вспомогательные вещества.The drug is produced in Ukraine and contains a compound from the group of fluoroquinolones - ciprofloxacin, as well as a polypeptide antibiotic - colistin sulfate and excipients.
Недостатком препарата является неудобство его использования - препарат выпускают в ампулах, и его рекомендуется использовать в комплексе с аскорбиновой кислотой (витамином C), при этом сначала растворяют в воде аскорбиновую кислоту, затем - препарат.The disadvantage of the drug is the inconvenience of its use - the drug is produced in ampoules, and it is recommended to use it in combination with ascorbic acid (vitamin C), while ascorbic acid is first dissolved in water, then the drug.
Задачей изобретения является разработка отечественного антибактериального препарата с комбинированным механизмом действия, обладающего высокой эффективностью против смешанных антибиотикорезистентных инфекций у животных, малотоксичного и стабильного при хранении.The objective of the invention is to develop a domestic antibacterial drug with a combined mechanism of action, which is highly effective against mixed antibiotic-resistant infections in animals, low toxicity and storage stability.
Поставленная задача решается тем, что разработан комплексный антибактериальный препарат для животных, который содержит соединение из группы фторхинолонов, вспомогательные вещества и, согласно изобретению, дополнительно содержит соединение из группы плевромутилинов в эффективном количестве.The problem is solved in that a comprehensive antibacterial preparation for animals has been developed that contains a compound from the group of fluoroquinolones, excipients and, according to the invention, additionally contains a compound from the group of pleuromutilins in an effective amount.
Поставленная задача решается также тем, что препарат содержит соединения из группы фторхинолонов и из группы плевромутилинов в соотношении (в масс.ч.) 1:3.0-1:225.0The problem is also solved by the fact that the preparation contains compounds from the group of fluoroquinolones and from the group of pleuromutilins in the ratio (in parts by weight) of 1: 3.0-1: 225.0
Кроме того, поставленная задача решается тем, что в качестве фторхинолонов заявленный препарат содержит ципрофлоксацин, или пефлоксацин, или офлоксацин, или энрофлоксацин, или норфлоксацин, или ломефлоксацин, или левофлоксацин, или моксифлоксацин, или спарфлоксацин, или эноксацин.In addition, the task is solved in that the claimed preparation contains ciprofloxacin, or pefloxacin, or ofloxacin, or enrofloxacin, or norfloxacin, or lomefloxacin, or levofloxacin, or moxifloxacin, or sparfloxacin, or enoxacin as the fluoroquinolones.
Поставленная задача может быть решена тем, что в качестве плевромутилинов заявленный препарат содержит тиамулина гидроген фумарат или тиамулин.The problem can be solved by the fact that the claimed preparation contains thiamulin hydrogen fumarate or tiamulin as pleuromutilins.
В качестве вспомогательных веществ для решения поставленной задачи целесообразно использовать сахара, а в качестве сахаров - сахарную пудру, или глюкозу, или фруктозу, или декстрозу, или лактозу, или лактулозу.It is advisable to use sugars as auxiliary substances to solve the problem, and as powdered sugar or sugar, or glucose, or fructose, or dextrose, or lactose, or lactulose.
Технический результат, полученный в результате реализации заявленного изобретения, заключается в том, что препарат обладает выраженным антимикробным действием как на грамотрицательную, так и грамположительную микрофлору, при этом эффективно действует как на вегетативные, так и споровые формы бактерий, безвреден, позволяет эффективно лечить широкий спектр болезней бактериальной этиологии у животных в условиях отсутствия данных о возбудителе инфекции и его чувствительности к антибиотикам, не обладает аллергенными свойствами, оказывает стимулирующее влияние на показатели гуморального иммунного ответа и стабилен при хранении.The technical result obtained as a result of the implementation of the claimed invention is that the drug has a pronounced antimicrobial effect on both gram-negative and gram-positive microflora, while it effectively acts on both vegetative and spore forms of bacteria, it is harmless, allows you to effectively treat a wide range diseases of bacterial etiology in animals in the absence of data on the causative agent of infection and its sensitivity to antibiotics, does not have allergenic properties, rendering t stimulating effect on the humoral immune response and is stable during storage.
Механизм действия заявленного препарата основан на способности фторхинолонов ингибировать активность фермента гиразы, обеспечивающего репликацию ДНК в бактериальной клетке, а также нарушении мембраны бактериальной клетки и элиминации R-плазмиды, что препятствует развитию резистентности микроорганизмов к препарату, и подавлении плевромутилинами синтеза протеинов бактерий путем связывания с 70S-субъединицей рибосом микроорганизмов и нарушения процесса формирования комплекса «м-РНК-тРНК» у микробной клетки.The mechanism of action of the claimed drug is based on the ability of fluoroquinolones to inhibit the activity of the gyrase enzyme that ensures DNA replication in a bacterial cell, as well as a violation of the bacterial cell membrane and elimination of the R plasmid, which prevents the development of microorganism resistance to the drug and the inhibition of pleuromutilin synthesis of bacterial proteins by binding to 70S -subunit of ribosomes of microorganisms and violations of the process of formation of the complex "m-RNA-tRNA" in a microbial cell.
Фторхинолоны обладают широким спектром антибактериального и антимикоплазменного действия. Активны в отношении грамположительных и грамотрицательных бактерий, в том числе Echerichia coli, Salmonella spp., Shigella spp., Klebsiella spp., Enterobacter spp., Proteus spp., Yersinia spp, Haemophilus spp., Pseudomonas aeruginosa, Pasteurella multocida, Plesiomonas shigelloides, Campylobacter jejuni, Brucella spp., Chlamydia trachomatis, Listeria monocytogenes, Mycobacterium spp., Corynebacterium diphtheriase, Staphylococcus aureus и Streptococcus spp., а также Mycoplasma spp.Fluoroquinolones have a wide range of antibacterial and antimycoplasmic effects. Active against gram-positive and gram-negative bacteria, including Echerichia coli, Salmonella spp., Shigella spp., Klebsiella spp., Enterobacter spp., Proteus spp., Yersinia spp, Haemophilus spp., Pseudomonas aeruginosa, Pasteurei multlesida multocida Campylobacter jejuni, Brucella spp., Chlamydia trachomatis, Listeria monocytogenes, Mycobacterium spp., Corynebacterium diphtheriase, Staphylococcus aureus and Streptococcus spp., As well as Mycoplasma spp.
Максимальная концентрация фторхинолонов в сыворотке крови отмечается, как правило, через 1,5-2 часа, терапевтическая концентрация сохраняется в течение 24 часов после перорального применения лекарственного средства. Выводится из организма в основном в неизменном виде и частично в форме метаболитов с мочой и желчью.The maximum concentration of fluoroquinolones in the blood serum is noted, as a rule, after 1.5-2 hours, the therapeutic concentration is maintained for 24 hours after oral administration of the drug. It is excreted mainly in an unchanged form and partially in the form of metabolites with urine and bile.
По степени воздействия на организм фторхинолоны относятся к умеренно опасным веществам (3 класс опасности по ГОСТ 12.1.007-76).By the degree of exposure to the body, fluoroquinolones are classified as moderately hazardous substances (hazard class 3 according to GOST 12.1.007-76).
Плевромутилины оказывают бактериостатическое действие в отношении микоплазм, включая М.hyopneumoniae, М.hyosynoviae, М.hyorhinis, М.gallisepticum, М.synoviae, М.meleagridis, спирохет (В.huodysenteriae, В.pilosicoli), грамположительных аэробов, в том числе Staphylococcus spp., Streptococcus spp., Corynebacterium pyogenes и анаэробов (Clostridiym perfringens), грамотрицательных анаэробов, в том числе Lawsonia intracellularis, Bacteroides spp., Fusobacterium spp. и аэробов Actinobacillus pleuropneumoniae, Pasteurella multocida; не действуют на бактерии семейства Enterobacteriaceae, включая Salmonella spp. и Echerichia coli.Pleuromutilins have a bacteriostatic effect against mycoplasmas, including M. hyopneumoniae, M. hyosynoviae, M. hyorhinis, M. gallisepticum, M. sinoviae, M. meleagridis, spirochetes (B. hodysenteriae, B. pilosicoli), gram-positive aerobes, including Staphylococcus spp., Streptococcus spp., Corynebacterium pyogenes and anaerobes (Clostridiym perfringens), gram-negative anaerobes, including Lawsonia intracellularis, Bacteroides spp., Fusobacterium spp. and aerobes Actinobacillus pleuropneumoniae, Pasteurella multocida; do not affect bacteria of the Enterobacteriaceae family, including Salmonella spp. and Echerichia coli.
При пероральном введении плевромутилины быстро всасываются в желудочно-кишечном тракте и проникают в большинство органов и тканей, достигая максимальных концентраций в организме птиц через 4 часа, в организме свиней - через 2 часа, и сохраняются на терапевтическом уровне на протяжении 18-24 часов. Выводятся из организма преимущественно с фекалиями.When administered orally, pleuromutilins are rapidly absorbed in the gastrointestinal tract and penetrate into most organs and tissues, reaching maximum concentrations in the body of birds after 4 hours, in the body of pigs after 2 hours, and remain at the therapeutic level for 18-24 hours. Excreted mainly with feces.
Плевромутилины по степени воздействия на организм относятся к умеренно опасным веществам (3 класс опасности по ГОСТ 12.1.007-76): ЛД50 при пероральном введении белым мышам составляет 700 мг/кг массы животного.Pleuromutilins are classified as moderately hazardous substances according to the degree of exposure to the body (hazard class 3 according to GOST 12.1.007-76): LD50 when administered orally to white mice is 700 mg / kg of animal weight.
Изобретение характеризуется следующими примерами выполнения, которые, в свою очередь, не ограничивают объем притязаний заявителя.The invention is characterized by the following examples of execution, which, in turn, do not limit the scope of the claims of the applicant.
Пример 1. Получение препаратаExample 1. Getting the drug
Препарат получают путем смешивания компонентов. Состав композиции в одном из вариантов ее выполнения следующий (мг/г порошка):The drug is obtained by mixing the components. The composition in one of the options for its implementation is as follows (mg / g powder):
Пример 2. Исследование токсичности препаратаExample 2. The study of the toxicity of the drug
Экспериментальные исследования проводили на четырех видах животных: белых крысах, белых мышах, поросятах и цыплятах. Исходный вес лабораторных животных колебался в пределах: для крыс - 180-210 г; для мышей - 18-20 г. В опыт брали клинически здоровых животных, которых предварительно выдерживали на пятнадцатидневном карантине.Experimental studies were performed on four animal species: white rats, white mice, piglets and chickens. The initial weight of laboratory animals ranged from: for rats - 180-210 g; for mice - 18-20 g. Clinically healthy animals were taken into the experiment, which were previously kept in quarantine for fifteen days.
Исследования проводили в условиях острых, подострых и хронических экспериментов при введении препарата в желудок.Studies were carried out in acute, subacute and chronic experiments with the introduction of the drug into the stomach.
Опыт по определению острой токсичности проводили на белых крысах. За животными вели наблюдение в течение 2-х недель после введения, отмечая сроки гибели или выздоровления животных. Учитывали общее состояние животных, сохранение двигательных функций, аппетита, состояние шерстного покрова, дыхания, реакцию на внешние раздражители.An acute toxicity test was performed on white rats. The animals were monitored for 2 weeks after administration, noting the timing of the death or recovery of the animals. We took into account the general condition of the animals, the preservation of motor functions, appetite, the condition of the coat, respiration, and reaction to external stimuli.
Изучение переносимости препарата проводили в условиях однократного введения препарата в терапевтической и трех-пятикратно увеличенной дозах. Однократный эксперимент проводили на поросятах и цыплятах.The study of drug tolerance was carried out under conditions of a single injection of the drug in therapeutic and three to five times increased doses. A single experiment was performed on pigs and chickens.
Изучение субхронической токсичности проводили на крысах, поросятах и цыплятах при введении препарата в желудок.The study of subchronic toxicity was carried out in rats, piglets and chickens with the introduction of the drug into the stomach.
В первой серии опыта были задействованы самцы белых крыс массой 130-140 г. Во второй серии при испытании использовали поросят и цыплят.In the first series of experiments, male white rats weighing 130-140 g were involved. In the second series, pigs and chickens were used in the test.
Препарат задавали животным в течение 20 суток в дозах 0,136 г по ДВ на 1 кг массы животного (поросята) и 0,33 г на кг массы животного (цыплята), что, соответственно, в 3 раза больше однократной рекомендуемой дозы. Третья группа животных служила контролем, препарат не получала.The drug was given to the animals for 20 days in doses of 0.136 g of DV per 1 kg of animal weight (pigs) and 0.33 g per kg of animal weight (chickens), which, respectively, is 3 times more than a single recommended dose. The third group of animals served as a control, the drug did not receive.
Наблюдение за состоянием животных проводили в течение 20 суток.Monitoring the condition of the animals was carried out for 20 days.
При этом использовали показатели, характеризующие как общее, так и специфическое действие препарата.In this case, indicators characterizing both the general and specific action of the drug were used.
В качестве интегральных показателей использовали следующие: определение массы тела и оценка периферической крови животных.The following indicators were used as integral indicators: determination of body weight and assessment of the peripheral blood of animals.
Состояние периферической крови оценивали с помощью общепринятых методик. Определяли: количество гемоглобина, лейкоцитов и эритроцитов. Для вычисления лейкограммы кровь фиксировали спиртом на мазках и окрашивали по Романовскому. Специфическими можно считать оценку функционального состояния печени, почек и обменных процессов в организме (белковый и азотистый обмены).The state of peripheral blood was evaluated using conventional methods. Determined: the amount of hemoglobin, white blood cells and red blood cells. To calculate the leukogram, the blood was fixed with alcohol on smears and stained according to Romanovsky. Specific can be considered an assessment of the functional state of the liver, kidneys and metabolic processes in the body (protein and nitrogen metabolism).
Функциональное состояние печени оценивали, в основном, с помощью биохимических исследований.The functional state of the liver was evaluated mainly using biochemical studies.
О белковообразовательной функции печени судили по содержанию белка в сыворотке крови. Этот показатель определяли по цветовой реакции с ортотолуидином.The protein-forming function of the liver was judged by the protein content in the blood serum. This indicator was determined by the color reaction with ortotoluidine.
Изучение функционального состояния почек проводили по комплексу методов: измеряли диурез, определяли удельный вес мочи и pH, содержание в моче белка, сахара, ацетоновых тел и индикана.The study of the functional state of the kidneys was carried out according to a set of methods: diuresis was measured, the specific gravity of urine and pH, the content of protein, sugar, acetone bodies and indican in the urine were determined.
Определение белка в моче основывалось на взаимодействии белка с сульфосалициловой кислотой, в результате которого степень помутнения анализировали с помощью фотоколориметрического анализа.Determination of protein in the urine was based on the interaction of the protein with sulfosalicylic acid, as a result of which the degree of turbidity was analyzed using photocolorimetric analysis.
Содержание сахара определяли экспресс-методом.Sugar content was determined by express method.
Из всех продуктов белкового обмена наибольшее значение имеют содержащиеся в крови животных мочевина и креатинин.Of all the products of protein metabolism, urea and creatinine contained in the blood of animals are of the greatest importance.
При изучении препарата учитывали влияние на содержание в организме K, Na, Ca, которые, как известно, обеспечивают нормальное осуществление всех функций организма.When studying the drug, the effect on the content of K, Na, Ca in the body, which, as you know, ensure the normal implementation of all body functions, was taken into account.
Данные, полученные при вышеуказанных исследованиях, были проанализированы методом математической статистики с вычислением средней величины (M), ее ошибки (±m) и уровня значения величины Р.The data obtained in the above studies were analyzed by the method of mathematical statistics with the calculation of the average value (M), its error (± m) and the level of the value of R.
Изучение острой токсичности препаратаThe study of acute drug toxicity
Препарат вводили в желудок белых крыс в виде 50% водной суспензия. Были испытаны дозы - 4,0; 6,0; 10,0 и 12,0 г/кг м.т. (объем вводимой суспензии составлял 1,6; 2,4; 4,0; 4,8 мл на крысу массой 200 г соответственно).The drug was injected into the stomach of white rats in the form of a 50% aqueous suspension. Doses were tested - 4.0; 6.0; 10.0 and 12.0 g / kg bw (the volume of the injected suspension was 1.6; 2.4; 4.0; 4.8 ml per rat weighing 200 g, respectively).
В результате исследований установлено, что ЛД50 средства составляет 8,5±0,84 г/кг м.т. Согласно классификации (ГОСТ 12.1.007-76) заявленный препарат - малотоксичное соединение (4 класс).As a result of studies, it was found that the LD 50 of the drug is 8.5 ± 0.84 g / kg bw According to the classification (GOST 12.1.007-76), the claimed drug is a low-toxic compound (class 4).
Пример 3. Оценка функционального состояния печени после однократного применения препаратаExample 3. Assessment of the functional state of the liver after a single use of the drug
Для выявления токсического действия лекарственных веществ использовали гексеналовую пробу, основанную на определении длительности гексеналового сна, и провели опыт на белых мышах.To detect the toxic effects of drugs, a hexenal test was used, based on determining the duration of hexenal sleep, and an experiment was conducted on white mice.
Длительность гексеналового сна обусловлена, в первую очередь, функцией печени и зависит от времени, необходимого для концентрации гексенала в крови ниже уровня, вызывающего наркоз. При поражении печени какими-либо токсическими веществами обезвреживание гексенала замедляется, что приводит к увеличению длительности сна.The duration of hexenal sleep is due primarily to liver function and depends on the time required for the concentration of hexenal in the blood below the level causing anesthesia. When the liver is damaged by any toxic substances, the neutralization of hexenal slows down, which leads to an increase in the duration of sleep.
Определение функционального состояния печени у белых мышей при оральном введении заявленного препарата проводили по методике Розина на 90 нелинейных белых мышах массой 18 - 20 г, которых разделили на 9 групп по равному количеству мышей в каждой: 3 группы - контрольные, 6 групп - опытные. Контрольным животным перорально вводили физиологический раствор в дозе 1 мл на голову. Половине подопытных животных вводили заявленный препарат перорально в дозе, равной ЛД16 (15000 мг/кг), а второй половине - в дозе ЛД50 (20000 мг/кг) массы тела. Препарат мышам вводили натощак и через 1, 3 и 6 часов вводили гексенал внутрибрюшинно в дозе 60 мг/кг массы тела.Determination of the functional state of the liver in white mice by oral administration of the claimed preparation was carried out according to the Rosin method on 90 non-linear white mice weighing 18 - 20 g, which were divided into 9 groups according to the equal number of mice in each: 3 groups - control, 6 groups - experimental. Control animals were orally injected with saline at a dose of 1 ml per head. Half of the experimental animals were administered the claimed drug orally at a dose equal to LD16 (15000 mg / kg), and the second half - at a dose of LD50 (20,000 mg / kg) of body weight. The preparation was administered to mice on an empty stomach and after 1, 3 and 6 hours, hexenal was administered intraperitoneally at a dose of 60 mg / kg body weight.
Продолжительность гексеналового наркоза учитывали с момента принятия мышами бокового положения до первых попыток его изменить.The duration of hexenal anesthesia was taken into account from the moment the mice took a lateral position until the first attempts to change it.
При оценке функционального состояния печени белых мышей контрольных групп было отмечено, что через 1 час после введения физраствора продолжительность гексеналового наркоза составила 32,3±4,4 мин, через 3 часа - 30,3±4,6 мин и через 6 часов - 33,7±4,5 мин. Как видно из представленных данных, с увеличением времени исследования, после введения физраствора функция печени практически не изменилась.When assessing the functional state of the liver of white mice of the control groups, it was noted that 1 hour after the administration of saline, the duration of hexenal anesthesia was 32.3 ± 4.4 minutes, after 3 hours - 30.3 ± 4.6 minutes, and after 6 hours - 33 , 7 ± 4.5 min. As can be seen from the data presented, with an increase in the study time, after the introduction of saline, liver function has not changed.
При введении препарата в дозе ЛД16 было установлено, что продолжительность гексеналового сна через час после введения составила 31,8±4,1 мин, а через 3 часа - 30,2±3,8 мин и через 6 часов - 32,4±4,1 мин, хотя несколько и снижается, но достоверно не отличается (P>0,05) от контрольной группы.When the drug was administered in a dose of LD16, it was found that the duration of hexenal sleep one hour after administration was 31.8 ± 4.1 minutes, and after 3 hours - 30.2 ± 3.8 minutes and after 6 hours - 32.4 ± 4 , 1 min, although somewhat reduced, but not significantly different (P> 0.05) from the control group.
При увеличении дозы препарата до ЛД50 продолжительность гексеналового наркоза через час составила 32,6±4,1 мин, что достоверно не отличается (P>0,05) от контрольной группы. Однако через 3 часа после введения препарата было отмечено увеличение продолжительности гексеналового сна до 39,6±4,1 мин, а через 6 часов - уменьшение длительности гексеналового сна до 30,2±4,6 мин, что достоверно отличается (P<0,05) от контрольной группы. Видимо, большая доза заявленного препарата первоначально вызывает ингибирование активности митохондриальных ферментов, что приводит к резкому увеличению времени сна. Впоследствии из-за быстрого разрушения препарата количество ферментов остается в гепатоцитах в значительных количествах, быстро разрушает гексенал, и длительность сна снижается.With an increase in the dose of the drug to LD50, the duration of hexenal anesthesia after an hour was 32.6 ± 4.1 minutes, which did not significantly differ (P> 0.05) from the control group. However, 3 hours after drug administration, an increase in the duration of hexenal sleep was noted to 39.6 ± 4.1 minutes, and after 6 hours, a decrease in the duration of hexenal sleep to 30.2 ± 4.6 minutes, which was significantly different (P <0, 05) from the control group. Apparently, a large dose of the claimed drug initially causes inhibition of the activity of mitochondrial enzymes, which leads to a sharp increase in sleep time. Subsequently, due to the rapid destruction of the drug, the amount of enzymes remains in significant quantities in the hepatocytes, quickly destroys the hexenal, and the duration of sleep decreases.
Таким образом, заявленный препарат в дозах, близких к ЛД50, вызывает непродолжительное угнетение функции печени, восстанавливающееся через 6 часов после введения препарата. Меньшие дозы препарата (ЛД16) не вызывают функциональных изменений в печени.Thus, the claimed drug in doses close to LD50 causes a short inhibition of liver function, recovering 6 hours after drug administration. Smaller doses of the drug (LD16) do not cause functional changes in the liver.
Пример 4. Оценка местнораздражающего и кожно-резорбтивного действий заявленного препаратаExample 4. Evaluation of locally irritating and skin-resorptive actions of the claimed drug
Опыт провели на морских свинках и крысах, которым за сутки до начала опыта вогнутыми ножницами выстригли шерсть на участке кожи площадью 3×4 см2 в области спины.The experiment was conducted on guinea pigs and rats, which, one day before the start of the experiment, they cut their hair with concave scissors on a skin area of 3 × 4 cm 2 in the back.
Заявленный препарат в дозе 0,045 г/кг по ДВ на твине наносили на каждую поверхность и слегка втирали. После нанесения препарата каждое животное помещали отдельно на 4 часа во избежание потерь препарата. В дальнейшем животные содержались в обычных клетках.The claimed drug at a dose of 0.045 g / kg by DW on tween was applied to each surface and lightly rubbed. After application of the drug, each animal was placed separately for 4 hours to avoid drug losses. Subsequently, the animals were kept in ordinary cells.
В течение 30 суток после начала опыта вели визуальное наблюдение за внешним видом, состоянием и поведением животных. Отмечали время, степень проявления признаков токсикоза, а также падеж животных.Within 30 days after the start of the experiment conducted visual observation of the appearance, condition and behavior of animals. They noted the time, the degree of manifestation of signs of toxicosis, as well as the death of animals.
Реакцию кожи учитывали по шкале оценки кожных проб.The skin reaction was taken into account on the scale of assessment of skin samples.
В результате экспериментов, проведенных по стандартным методикам, было показано, что однократная аппликация препарата на кожу морских свинок в дозе 0,045 г/кг по ДВ в течение 4 часов не вызывала изменений состояния животных. Не выявлено гибели животных во всех группах, что свидетельствует об отсутствии местно-раздражающего действия препарата при его однократном применении.As a result of experiments carried out according to standard methods, it was shown that a single application of the drug to the skin of guinea pigs at a dose of 0.045 g / kg in DV for 4 hours did not cause changes in the state of the animals. There was no death of animals in all groups, which indicates the absence of a locally irritating effect of the drug with its single use.
Кожно-резорбтивное действие изучали на крысах. Крыс опытной группы фиксировали в специальных домиках, а их хвосты погружали на 2/3 длины в пробирки с препаратом, приготовленным на твине в соотношении 1:10. Время экспозиции - 4 часа в течение 5 дней. Хвосты крыс контрольной группы погружали на 2/3 длины в пробирки с твином.The skin-resorptive effect was studied in rats. Rats of the experimental group were fixed in special houses, and their tails were immersed 2/3 of the length in test tubes with a preparation prepared on tween in a ratio of 1:10. Exposure time - 4 hours for 5 days. The tails of rats of the control group were immersed 2/3 of the length in test tubes with tween.
Как показали исследования, опытные крысы на протяжении эксперимента практически не отличались от контрольных.As studies have shown, experimental rats during the experiment did not differ much from the control.
Наблюдение в течение двух недель после нанесения препарата не выявило каких-либо проявлений интоксикации, кожа покрывалась равномерным гладким шерстным покровом, животные были подвижны и хорошо ели.Observation for two weeks after applying the drug did not reveal any manifestations of intoxication, the skin was covered with a uniform smooth coat, the animals were mobile and ate well.
Следовательно, препарат не вызывает местно-раздражающего и кожно-резорбтивного действия при однократном нанесении на кожу в дозе 0,045 г/кг по ДВ и относится к 4 классу опасности.Therefore, the drug does not cause local irritating and skin-resorptive effects when applied once to the skin at a dose of 0.045 g / kg in terms of DV and belongs to hazard class 4.
Пример 5. Изучение субхронической токсичности препарата на лабораторных животных, поросятах и цыплятахExample 5. The study of subchronic toxicity of the drug in laboratory animals, pigs and chickens
КрысыRats
Опыты проводили на белых беспородных крысах-самцах с исходной массой 130-140 г. Животным в желудок ежедневно в течение 2-х месяцев через желудочный зонд вводили препарат в виде суспензии на крахмальном клейстере в дозах 1/10 и 1/100 от ЛД50, что соответствовало 200 и 20 мг/кг. Каждая подопытная и контрольная группы состояли из равного количества животных. Животным контрольной группы, при тех же условиях содержания и кормления, вводили равный объем крахмального клейстера.The experiments were carried out on white outbred male rats with an initial weight of 130-140 g. The animals were injected into the stomach daily for 2 months through a gastric tube in the form of a suspension on a starch paste in doses of 1/10 and 1/100 of LD50, which corresponded to 200 and 20 mg / kg. Each experimental and control group consisted of an equal number of animals. The animals of the control group, under the same conditions of feeding and feeding, were injected with an equal volume of starch paste.
Признаков токсикоза и гибели животных не наблюдали, что дает основание говорить об отсутствии у препарата в указанных дозах эффекта кумуляции по токсическому признаку.No signs of toxicosis and death of animals were observed, which suggests that the drug has no toxic effect of cumulation in the indicated doses.
Обследование с использованием клинико-биохимических методов животных, получавших в течение 2-х месяцев препарат в дозе 0,01 и 0,001 от ЛД50, не показало статистически значимых отличий опытных и контрольных групп. Анализы проводили на 60-й день опыта после декапитации животных.Examination using clinical and biochemical methods of animals that received the drug at a dose of 0.01 and 0.001 from LD50 for 2 months did not show statistically significant differences between the experimental and control groups. Analyzes were performed on the 60th day of the experiment after decapitation of the animals.
В результате исследований установлено, что препарат не влияет на прирост массы тела животных.As a result of studies, it was found that the drug does not affect the increase in body weight of animals.
Кровь для исследований брали из хвостовой вены, количество эритроцитов и лейкоцитов определяли в камере Горяева, уровень гемоглобина - фотометрическим методом.Blood for research was taken from the tail vein, the number of red blood cells and white blood cells was determined in the Goryaev chamber, and the hemoglobin level was determined by the photometric method.
Гематологические показатели крыс, получавших заявленный препарат, не отличались от таковых у животных контрольной группы (P≥0,05).Hematological parameters of rats treated with the claimed drug did not differ from those in animals of the control group (P≥0.05).
Биохимические показатели животных изучали также после введения препарата в дозах 1/100 и 1/1000 от ЛД50. Активность аланинаминотрансферазы (АлАТ) и аспартатаминотрансферазы (АсАТ) определяли по Райтману и Френселю, пировиноградную кислоту (ПВК) - по Фридману и Хаугену, молочную кислоту - по методу Баркера и Саммерсона.The biochemical parameters of animals were also studied after administration of the drug in doses of 1/100 and 1/1000 from LD 50 . The activity of alanine aminotransferase (AlAT) and aspartate aminotransferase (AcAT) was determined by Wright and Fresnel, pyruvic acid (PVA) was determined by Friedman and Haugen, and lactic acid was determined by the Barker and Summerson method.
Полученные результаты свидетельствуют об отсутствии разницы в показателях крови крыс разных групп (P≥0,05).The results obtained indicate the absence of differences in the blood indices of rats of different groups (P≥0.05).
Функциональное состояние почек после продолжительного введения препарата в дозах 0,01 и 0,001 от ЛД50 оценивали по показателям суточного диуреза, содержанию белка и мочевины. Мочу собирали в течение 24 часов в метаболические камеры при нормальной водной нагрузке. Определение мочевины и белка проводили общепринятыми методами.The functional state of the kidneys after prolonged administration of the drug at doses of 0.01 and 0.001 from LD 50 was evaluated by daily urine output, protein and urea. Urine was collected for 24 hours in metabolic chambers under normal water load. The determination of urea and protein was carried out by conventional methods.
В результате исследований установлено, что препарат не оказывает отрицательного влияния на функциональное состояние почек.As a result of studies, it was found that the drug does not adversely affect the functional state of the kidneys.
ПоросятаPiglets
Изучение субхронической токсичности заявленного препарата проводили на поросятах массой 28-32 кг, разделенных поровну по принципу аналогов на 3 группы. Препарат в течение 20 суток вводили животным ежедневно однократно с кормом в суточной дозе:The study of subchronic toxicity of the claimed drug was carried out on pigs weighing 28-32 kg, divided equally by the principle of analogues into 3 groups. The drug was administered to animals daily for 20 days once daily with food in a daily dose:
I группа - 0,135 г/кг массы тела (трехкратная терапевтическая доза);Group I - 0.135 g / kg body weight (three times the therapeutic dose);
II группа - 0,045 г/кг массы тела (терапевтическая доза);Group II - 0.045 g / kg body weight (therapeutic dose);
III группа - контрольная группа (препарат не получали).Group III - control group (the drug was not received).
Наблюдение за клиническим состоянием животных вели на протяжении 30 суток от начала опыта. Через сутки и через десять суток после последнего введения препарата проводили клиническое исследование крови (количество эритроцитов, лейкоцитов, гемоглобина, выводили лейкоцитарную формулу).Observation of the clinical condition of the animals was carried out for 30 days from the start of the experiment. A day and ten days after the last injection of the drug, a clinical blood test was performed (the number of red blood cells, white blood cells, hemoglobin, the leukocyte formula was derived).
В эти же сроки оценивали функциональное состояние почек по анализам мочи, в которой определяли содержание белка, углеводов, билирубина, уробилина, кетоновых тел, удельный вес, а также по определению в сыворотке крови содержания креатинина и мочевины.At the same time, the functional state of the kidneys was assessed by urine tests, which determined the content of protein, carbohydrates, bilirubin, urobilin, ketone bodies, specific gravity, as well as the determination of creatinine and urea in the blood serum.
О функциональном состоянии печени судили по изменению активности гепатоспецифических ферментов (холинэстеразы, аспартатаминотрансферазы, аланинаминотрансферазы), определению содержания билирубина в крови.The functional state of the liver was judged by a change in the activity of hepatospecific enzymes (cholinesterase, aspartate aminotransferase, alanine aminotransferase), determination of the bilirubin content in the blood.
Введение препарата в дозах 0,135 г и 0,045 г на кг массы тела в течение 20 дней не вызывало видимых клинических изменений в организме поросят. Животные активно двигались, хорошо и полностью поедали корм, адекватно реагировали на внешние раздражители.The introduction of the drug in doses of 0.135 g and 0.045 g per kg of body weight for 20 days did not cause visible clinical changes in the body of piglets. Animals actively moved, well and completely ate food, adequately responded to external stimuli.
В результате проведенных исследований установлено, что при введении препарата в дозах 0,135 г и 0,045 г на кг массы тела, картина крови у поросят практически не изменяется и находится в пределах физиологической нормы.As a result of the studies, it was found that with the introduction of the drug in doses of 0.135 g and 0.045 g per kg of body weight, the blood picture in piglets practically does not change and is within the physiological norm.
О функциональном состоянии печени судили по определению содержания гепатоспецифических ферментов и билирубина в сыворотке крови. У животных I и II групп активность аспартатаминотрансферазы и аланинаминотрансферазы и содержание билирубина находились в пределах физиологической нормы и достоверно не отличались (P>0,05) от показателей контрольной группы.The functional state of the liver was judged by determining the content of hepatospecific enzymes and bilirubin in the blood serum. In animals of groups I and II, the activity of aspartate aminotransferase and alanine aminotransferase and the bilirubin content were within the physiological norm and did not significantly differ (P> 0.05) from the control group.
Таким образом, 20-дневное применение заявленного препарата в дозах 0,135 г и 0,045 г на кг массы тела не влияет на функцию печени.Thus, a 20-day use of the claimed drug in doses of 0.135 g and 0.045 g per kg of body weight does not affect liver function.
Моча, взятая от животных всех групп, соответствовала физиологической норме: прозрачная, желтого цвета, специфического запаха, удельный вес 1,018-1,021, pH 8,6-8,7: белок, углеводы, билирубин. Содержание креатинина и мочевины в сыворотке крови поросят опытных групп находилось в пределах физиологической нормы и достоверно не отличалось (P<0,05) от показателей контрольной группы.Urine taken from animals of all groups corresponded to the physiological norm: clear, yellow, specific odor, specific gravity 1.018-1.021, pH 8.6-8.7: protein, carbohydrates, bilirubin. The content of creatinine and urea in the blood serum of piglets of the experimental groups was within the physiological norm and did not significantly differ (P <0.05) from the indices of the control group.
Отсутствие изменений в моче, нормальный уровень креатинина и мочевины в сыворотке крови свидетельствует о том, что заявленный препарат не обладает нефротоксическим действием у поросят во всех испытанных дозах.The absence of changes in the urine, the normal level of creatinine and urea in the blood serum indicates that the claimed drug does not have a nephrotoxic effect in piglets in all tested doses.
В результате проведенных исследований установлено, что 20- дневное введение заявленного препарата в терапевтической и трехкратной терапевтической дозе не оказывает функциональных изменений в организме поросят.As a result of the studies, it was found that a 20-day administration of the claimed drug in a therapeutic and triple therapeutic dose does not have functional changes in the body of piglets.
ЦыплятаChickens
Изучение субхронической токсичности препарата проводили на цыплятах массой 220-230 г, находящихся в одинаковых условиях кормления и содержания. Подопытных птиц по принципу аналогов разделили на 3 равные группы. Препарат задавали каждому цыпленку из первых двух групп ежедневно в течение 20 дней через зонд в зоб в следующих дозах:The study of subchronic toxicity of the drug was carried out on chickens weighing 220-230 g, which are under the same conditions of feeding and keeping. Experimental birds were divided into 3 equal groups according to the principle of analogues. The drug was given to each chicken from the first two groups daily for 20 days through a probe into the goiter in the following doses:
1 группа - 0,33 г/кг массы тела (трехкратная терапевтическая доза);Group 1 - 0.33 g / kg body weight (three times the therapeutic dose);
2 группа - 0,11 г/кг массы тела (терапевтическая доза);Group 2 - 0.11 g / kg body weight (therapeutic dose);
3 группа - контрольная группа (препарат не получала).Group 3 - control group (the drug was not received).
Наблюдение за клиническим состоянием птицы вели на протяжении 25 суток от начала опыта. Через сутки после последнего введения заявленного препарата проводили клиническое исследование крови (количество эритроцитов, лейкоцитов, гемоглобина, лейкоцитарная формула).Observation of the clinical condition of the birds was carried out for 25 days from the start of the experiment. A day after the last injection of the claimed drug, a clinical blood test was performed (the number of red blood cells, white blood cells, hemoglobin, white blood cell count).
В процессе опыта гибели птицы не отмечали. Клиническое состояние цыплят в период опыта не изменялось. В течение эксперимента подопытные цыплята были активны, подвижны, аппетит был сохранен. Потребление воды и корма в опытных и контрольных группах было одинаковое.In the course of the experiment, no birds died. The clinical condition of the chickens during the experiment did not change. During the experiment, experimental chickens were active, mobile, appetite was maintained. The consumption of water and feed in the experimental and control groups was the same.
В результате проведенных исследований установлено, что при 20- дневном введении препарата в трехкратно увеличенной дозе (1 группа) и терапевтической дозе (2 группа) все клинико-биохимические показатели крови у опытных групп находятся в пределах физиологической нормы и не отличаются (P<0,05) от показателей контрольной группы.As a result of the studies, it was found that with a 20-day administration of the drug in a threefold dose (group 1) and a therapeutic dose (group 2), all clinical and biochemical blood parameters in the experimental groups are within the physiological norm and do not differ (P <0, 05) from the indicators of the control group.
Пример 6. Переносимость заявленного препарата поросятами и цыплятамиExample 6. Tolerance of the claimed drug by piglets and chickens
Под опытами находились поросята и цыплята. Животных разделили на 3 группы (две подопытные и одну контрольную). В качестве контроля были использованы данные исследований, полученные в подопытных группах до дачи препарата. Препарат задавали через рот в двух вариантах: в первом - в терапевтической дозе: для поросят - 0,045 г на кг массы тела животного, для цыплят - 0,112 г на кг массы тела, и во втором варианте - в 5 раз увеличенной.Under the experiments were pigs and chickens. The animals were divided into 3 groups (two experimental and one control). As a control, we used research data obtained in experimental groups before giving the drug. The drug was administered by mouth in two versions: in the first - in a therapeutic dose: for piglets - 0.045 g per kg of body weight of the animal, for chickens - 0.112 g per kg of body weight, and in the second version - 5 times increased.
Данные, полученные при вышеуказанных исследованиях, были проанализированы методом математической статистики с вычислением средней арифметической величины (M), ее ошибки (+m) и уровня значения величины P. В связи с тем, что данные, полученные в результате гематологических исследований, находились в тех же пределах, что и у контрольных животных, был проведен статистический обсчет их суммированно по всем дням каждой дозы.The data obtained in the above studies were analyzed by the method of mathematical statistics with the calculation of the arithmetic mean value (M), its error (+ m) and the level of the value of P. Due to the fact that the data obtained as a result of hematological studies were in those within the same limits as in the control animals, a statistical calculation of them was carried out summarized for all days of each dose.
СвиньиPigs
В течение 10 дней за животными вели наблюдение, брали кровь и исследовали гематологические и биохимические показатели.For 10 days, animals were monitored, blood was taken, and hematological and biochemical parameters were examined.
Отклонений в поведении и состоянии животных первой и второй групп не отмечали, за исключением угнетенного состояния у одной свиньи из группы в течение 24 часов. В гематологической картине отмечали незначительные сдвиги у свиней второй группы в лейкоформуле (эозинофилия достигала до 4,4% через сутки). Однако эти изменения не выходили за рамки физиологической нормы.Deviations in the behavior and condition of the animals of the first and second groups were not observed, with the exception of the depressed state in one pig from the group within 24 hours. In the hematological picture, insignificant changes were observed in pigs of the second group in the leukoformula (eosinophilia reached 4.4% in a day). However, these changes did not go beyond the physiological norm.
ЦыплятаChickens
Препарат задавали однократно натощак при введении в зоб. Наблюдения проводили в течение 10 дней. Кровь брали до дачи препарата, через 1, 5 и 10 дней, при этом подсчитывали гемоглобин, эритроциты, лейкоциты и выводили лейкоформулу.The drug was given once on an empty stomach when introduced into the goiter. Observations were carried out for 10 days. Blood was taken before the drug was given, after 1, 5 and 10 days, while hemoglobin, red blood cells, white blood cells were counted and the leukoformula was removed.
Однократное применение препарата в рекомендуемой дозе не вызывало клинических изменений в состоянии цыплят: животные активно двигались и реагировали на внешние раздражители, аппетит был сохранен. При увеличении рекомендуемой дозы в 5 раз у подопытных животных также не было отмечено отклонений от физиологической нормы.A single use of the drug in the recommended dose did not cause clinical changes in the condition of the chickens: the animals actively moved and responded to external stimuli, the appetite was maintained. With an increase in the recommended dose by a factor of 5, experimental animals also showed no deviations from the physiological norm.
Гематологические показатели крови у животных опытных групп находились в пределах физиологической нормы и не отличались от показателей контрольной группы.Hematological blood parameters in animals of the experimental groups were within the physiological norm and did not differ from the control group.
Пример 7. Изучение аллергенных свойств препаратаExample 7. The study of the allergenic properties of the drug
Опыты по изучению аллергенных свойств препарата проводили на морских свинках методом гистаминового шока и на мышах по непрямой дегрануляции тучных клеток. Сущность метода гистаминового шока заключается в том, что у морских свинок подкожное введение гистамина в дозе 5 мг/кг вызывает гистаминовый шок, оканчивающийся смертью. Если изучаемый препарат обладает антигистаминным действием, то предварительное его введение должно предотвратить смерть животного от гистамина, в противном случае смерть животного наступает в более короткие сроки и от меньших доз гистамина.Experiments on the study of the allergenic properties of the drug were carried out on guinea pigs using the histamine shock method and in mice by indirect mast cell degranulation. The essence of the method of histamine shock is that in guinea pigs, subcutaneous administration of histamine at a dose of 5 mg / kg causes a histamine shock, resulting in death. If the studied drug has an antihistamine effect, then its preliminary administration should prevent the death of the animal from histamine, otherwise the death of the animal occurs in a shorter time and from lower doses of histamine.
В опыте использовали клинически здоровых морских свинок массой 180-220 г. Подопытным свинкам задавали препарат перорально в дозе 0,045 г на кг массы тела животного. Контрольным животным препарат не вводили. Гистамин вводили подкожно в дозе 5 мг/кг одновременно как подопытным, так и контрольным морским свинкам через 6 и 12 часов после введения препарата.In the experiment, clinically healthy guinea pigs weighing 180-220 g were used. The guinea pigs were given the drug orally at a dose of 0.045 g per kg of animal body weight. The control animals were not injected with the drug. Histamine was administered subcutaneously at a dose of 5 mg / kg at the same time both experimental and control guinea pigs at 6 and 12 hours after administration of the drug.
Результаты опыта указывают на то, что заявленный препарат в терапевтической дозе не обладает антигистаминной активностью, т.к. не предотвращает смерть животных от введенной дозы гистамина, а также и не ускоряет ее, что указывало бы на гистаминное аллергенное действие.The experimental results indicate that the claimed drug in a therapeutic dose does not have antihistamine activity, because it does not prevent the death of animals from the administered dose of histamine, nor does it accelerate it, which would indicate a histamine allergenic effect.
Все животные подопытной и контрольной групп пали приблизительно в одни и те же сроки. Так, при введении гистамина морским свинкам через 6 часов после введения препарата время наступления гистаминового шока равнялось 18,9±0,12 мин, через 12 часов - 18,8±0,15 мин, а у контрольных животных соответственно 18,8±0,15 и 19,0±0,12. Разница в показателях животных подопытных и контрольных групп оказалась несущественной (P>0,05).All animals of the experimental and control groups fell at approximately the same time. So, when histamine was administered to guinea pigs 6 hours after drug administration, the time of onset of histamine shock was 18.9 ± 0.12 minutes, after 12 hours - 18.8 ± 0.15 minutes, and in control animals, respectively, 18.8 ± 0 , 15 and 19.0 ± 0.12. The difference in the indices of the animals of the experimental and control groups was insignificant (P> 0.05).
Реакция подопытных и контрольных групп животных на введение гистамина была одинаковой. У всех морских свинок наблюдали симптомы развития шока: выраженная депрессия, сонливость, беспокойство, учащение дыхания, боковое положение, судороги, одышка и смерть.The reaction of experimental and control groups of animals to the introduction of histamine was the same. Symptoms of shock development were observed in all guinea pigs: severe depression, drowsiness, anxiety, rapid breathing, lateral position, cramps, shortness of breath, and death.
Реакцию дегрануляции тучных клеток провели на мышах линии СВА, которым задавали препарат, разведенный в крахмальном клейстере 1:10 в дозе 0,045 г на кг массы тела животного по ДВ. Через 2 дня мышей убили, собрали сыворотку крови. Тучные клетки выделяли из перитонеальной жидкости крыс-самцов массой 180-200 г после внутрибрюшинного введения физраствора с гепарином в количестве 10 мл.The mast cell degranulation was carried out on CBA mice, which were given a preparation diluted in 1:10 starch paste at a dose of 0.045 g per kg of animal body weight in DV. After 2 days, the mice were killed and blood serum was collected. Mast cells were isolated from the peritoneal fluid of male rats weighing 180-200 g after intraperitoneal administration of saline with heparin in an amount of 10 ml.
Затем на предметные стекла, покрытые 0,3% нейтральротом на абсолютном спирте, наносили по 1 капле тучных клеток, сыворотки крови от подопытных мышей и препарата в разведении 1:10. В контрольную пробу брали тучные клетки и сыворотку крови от тех же мышей (по 1 капле) и по разнице процента дегрануляции тучных клеток в опыте и в контроле судили о сенсибилизации организма. Для контроля достоверности полученных данных подсчитывали процент дегрануляции тучных клеток в перитонеальной жидкости (10%) и с комплементом (8%).Then, 1 drop of mast cells, blood serum from experimental mice and a 1:10 dilution were applied to slides coated with 0.3% neutral alcohol absolute alcohol. Mast cells and blood serum from the same mice (1 drop each) were taken into the control sample and the sensitization of the body was judged by the difference in the percentage of mast cell degranulation in the experiment and in the control. To control the reliability of the data obtained, the percentage of mast cell degranulation in the peritoneal fluid (10%) and with complement (8%) was calculated.
Согласно полученным данным процент дегрануляции тучных клеток составил 7,6±0,12, что свидетельствует о том, что препарат не обладает сенсибилизирующими свойствами.According to the data obtained, the percentage of mast cell degranulation was 7.6 ± 0.12, which indicates that the drug does not have sensitizing properties.
Пример 8. Иммунотоксические свойства препаратаExample 8. Immunotoxic properties of the drug
Иммунотоксические свойства препарата изучены в 4 опытах на мышах линии СВА массой 18-20 г.The immunotoxic properties of the drug were studied in 4 experiments on mice of the CBA line weighing 18-20 g.
О влиянии препарата на клеточный иммунитет судили по индукции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) и по изменению количества ауторозеткообразующих клеток (ауто-РОК) по методу Jondal М. et al. (1972), в качестве эритроцитарного маркера в этом тесте применяли 1,5%-ную взвесь аутологичных эритроцитов.The effect of the drug on cellular immunity was judged by the induction of delayed-type hypersensitivity (HRT) and by the change in the number of autosocket-forming cells (auto-ROCK) by the method of Jondal M. et al. (1972), a 1.5% suspension of autologous red blood cells was used as an erythrocyte marker in this test.
Влияние препарата на антителообразование изучали методом локального гемолиза и в реакции гемагглютинации при иммунизации мышей эритроцитами барана (ЭБ). Титры агглютининов определяли в микроварианте прямой реакции гемагглютинации, вычисляли супрессивный индекс (СИ).The effect of the drug on antibody formation was studied by local hemolysis and in the hemagglutination reaction during immunization of mice with sheep erythrocytes (EB). Agglutinin titers were determined in the microvariant of a direct hemagglutination reaction, and the suppressive index (SI) was calculated.
Достоверность результатов исследований оценивали по критерию Стьюдента.The reliability of the research results was evaluated by student's criterion.
Для определения антителообразующих клеток (АОК) в селезенке мышам перорально вводили в терапевтической дозе препарат одновременно с внутрибрюшинной иммунизацией их эритроцитами барана (ЭБ) - 2% взвесь в объеме 0,5 мл/мышь. На 4-е сутки извлекали селезенки, получали лимфоциты и проводили исследование. Вокруг каждой антителообразующей клетки возникает зона гемолиза, которая видна на агаре в виде прозрачной точки. Увеличение числа продуцентов антител в селезенке мышей, которым введен препарат, свидетельствует о стимулирующем действии препарата на антителообразование, снижение их числа по сравнению с контролем (ЭБ) - об его угнетении. Индекс стимуляции (ИС) определяли как отношение числа АОК в опыте к числу АОК в контроле (введение только ЭБ). ИС 1,5 и выше - стимулятор, ниже 0,7 - иммунодепрессант.To determine antibody-forming cells (AOK) in the spleen, mice were orally administered at a therapeutic dose simultaneously with intraperitoneal immunization with ram erythrocytes (EB) - 2% suspension in a volume of 0.5 ml / mouse. On the 4th day, spleens were removed, lymphocytes were obtained and a study was performed. Around each antibody-forming cell, a hemolysis zone appears, which is visible on the agar as a transparent dot. An increase in the number of antibody producers in the spleen of mice administered with the drug indicates a stimulating effect of the drug on antibody formation, a decrease in their number compared to control (EB) indicates its inhibition. The stimulation index (IS) was determined as the ratio of the number of AOK in the experiment to the number of AOK in the control (the introduction of only EB). IP 1.5 and above - stimulant, below 0.7 - immunosuppressant.
Судя по полученным данным, введение препарата приводит к активизации трансформации В-лимфоцитов в АОК по сравнению с контролем, что выражается в статистически достоверном увеличении количества АОК в селезенке. ИС увеличился в 3,85 раза, что говорит о стимулирующем воздействии препарата на антителогенез, т.е. заявленный препарат усиливает гуморальный иммунный ответ у животных. Увеличение содержания АОК предшественников B-лимфоцитов связано с активизацией функциональной активности T-лимфоцитов.Judging by the data obtained, the administration of the drug leads to activation of the transformation of B-lymphocytes into AOK as compared to the control, which is expressed in a statistically significant increase in the number of AOK in the spleen. IS increased by 3.85 times, which indicates the stimulating effect of the drug on antibody production, i.e. The claimed preparation enhances the humoral immune response in animals. An increase in the AOK content of B-lymphocyte precursors is associated with an activation of the functional activity of T-lymphocytes.
Установлено, что заявленный препарат оказывает стимулирующее воздействие на гуморальный иммунный ответ, что выражается повышением индекса стимуляции до 5,2.It was found that the claimed drug has a stimulating effect on the humoral immune response, which is expressed by increasing the stimulation index to 5.2.
Изучение действия иммуномодуляторов на клеточное звено иммунного ответа предполагает использование модельных систем, дающих представление о функциональной активности лимфоцитов T-ряда. К таким тестам относится реакция гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) и определение изменения количества ауторозеткообразующих клеток, которые у мышей аналогичны Т-лимфоцитам.The study of the effect of immunomodulators on the cellular component of the immune response involves the use of model systems that provide an idea of the functional activity of T-series lymphocytes. Such tests include a delayed-type hypersensitivity reaction (HRT) and the determination of changes in the number of autosocket-forming cells, which in mice are similar to T-lymphocytes.
Одновременно с внутрижелудочным введением тестируемого препарата мышей внутрибрюшинно иммунизировали 2% взвесью ЭБ. На 5-е сутки вводили разрешающую дозу ЭБ - 10% взвесь в объеме 0,02 мл в подушечки правых лап, в коллатеральную лапу вводили 0,9% раствор NaCl. Через 24 часа определяли сдвиг ИС.Simultaneously with the intragastric administration of the test drug, mice were immunized intraperitoneally with a 2% suspension of EB. On the 5th day, a resolving dose of EB was introduced - 10% suspension in a volume of 0.02 ml into the pads of the right paws, a 0.9% NaCl solution was introduced into the collateral paw. After 24 hours, the IP shift was determined.
Установлено, что препарат в терапевтической дозе вызывает индукцию ГЗТ у мышей, т.е. местную воспалительную реакцию, которая обусловлена инфильтрацией клетками воспалительного очага, а не сосудистой реакцией. У мышей это полиморфноядерные лейкоциты, мононуклеары, которые через несколько дней превращаются в тканевые макрофаги. Введение препарата вызывало сдвиг ИС на 32,4%, что достоверно отличалось от показателей контрольных животных - 8,8%. Усиление РГЗТ под влиянием препарата указывает на его способность стимулировать продукцию лимфокинов-медиаторов клеточного иммунитета. Интенсивность синтеза и секреции лимфоцитами факторов клеточного иммунитета соответствует степени выраженности воспалительной реакции в месте введения разрешающей дозы антигена (ЭБ) и характеризует активность популяции хелперных клеток, ответственных за проявление реакции гиперчувствительности замедленного типа.It was found that the drug in a therapeutic dose induces HRT in mice, i.e. local inflammatory reaction, which is caused by cell infiltration of the inflammatory focus, and not a vascular reaction. In mice, these are polymorphonuclear leukocytes, mononuclear cells, which in a few days turn into tissue macrophages. The introduction of the drug caused a shift in IP by 32.4%, which significantly differed from the indices of control animals - 8.8%. The enhancement of RGT under the influence of the drug indicates its ability to stimulate the production of lymphokines-mediators of cellular immunity. The intensity of the synthesis and secretion of cellular immunity factors by lymphocytes corresponds to the severity of the inflammatory reaction at the injection site of the resolving dose of antigen (EB) and characterizes the activity of the population of helper cells responsible for the manifestation of a delayed hypersensitivity reaction.
Пример 9. Оценка антимикробной активности заявленного лекарственного препаратаExample 9. Evaluation of the antimicrobial activity of the claimed drug
В работе использовали в качестве тест-штаммов культуры S. aureus АТСС 6538Р (FDA 209Р), Ps. aeruginosa АТСС 9027, Е.coli АТСС 25922, Вас.subtilis АТСС 6633 из Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов ФГУП «ГосНИИГенетика» и культуру Salmonella abony №103/39, полученную из Коллекции ЦЭК МИБП ФГБУ «НЦ ЭСМП» Минздрава России.We used S. aureus ATCC 6538P (FDA 209P), Ps as test strains. aeruginosa ATCC 9027, E. coli ATCC 25922, Vas.subtilis ATCC 6633 from the All-Russian collection of industrial microorganisms FSUE GosNIIGenetika and culture Salmonella abony No. 103/39, obtained from the CEC Collection MIBP FSBI NTs ESMP of the Russian Ministry of Health.
Исследования проводили на питательных средах производства ФБУН «ГНЦ прикладной микробиологии и биотехнологии» №8 ГРМ, рег. уд. № ФСР 2007/00839 от 27.12.2011 г. и №1 ГРМ, рег. уд. № ФСР 2011/11415 от 27.12.2011 г.The studies were carried out on nutrient media produced by the Federal State Budget Scientific Institution “SSC of Applied Microbiology and Biotechnology” No. 8 of the State Russian Museum, reg. beats No. FSR 2007/00839 dated 12/27/2011 and No. 1 of the State Russian Museum, reg. beats FSR No. 2011/11415 dated 12/27/2011
Навески препарата (20-30 мг) растворяли в стерильной воде и готовили серийные разведения на жидкой питательной среде №8 ГРМ.Samples of the drug (20-30 mg) were dissolved in sterile water and serial dilutions were prepared on a liquid nutrient medium No. 8 GRM.
Для инокуляции использовали свежие 24-часовые культуры микроорганизмов, выращенные в среде №8, с определением инокулирующей дозы титрованием на среде №1 поверхностным методом. Инокулирующие дозы микроорганизмов составляли от 1,0×105 до 2,5×106 КОЕ.For inoculation used fresh 24-hour cultures of microorganisms grown in medium No. 8, with the determination of the inoculating dose by titration on medium No. 1 by the surface method. Inoculating doses of microorganisms ranged from 1.0 × 10 5 to 2.5 × 10 6 CFU.
В результате проведенных исследований установлено, что препарат обладает выраженным антимикробным действием как на грамотрицательную (Ps. aeruginosa, E.coli, Salmonella abony), так и грамположительную (S.aureus, Вас.subtilis) микрофлору. При этом препарат эффективно действует как на вегетативные, так и споровые формы бактерий.As a result of the studies, it was found that the drug has a pronounced antimicrobial effect on both gram-negative (Ps. Aeruginosa, E. coli, Salmonella abony) and gram-positive (S.aureus, Vas.subtilis) microflora. Moreover, the drug effectively acts both on the vegetative and spore forms of bacteria.
Препарат стабилен в течение трех лет со дня производства при хранении при температуре от 5°C до 25°C.The drug is stable for three years from the date of production when stored at a temperature of 5 ° C to 25 ° C.
Следует также отметить, что в качестве соединения ряда фторхинолонов в составе препарата были испытаны следующие соединения: пефлоксацин, офлоксацин, энрофлоксацин, норфлоксацин, ломефлоксацин, левофлоксацин, моксифлоксацин, спарфлоксацин, эноксацин. В качестве соединения плевромутилинов в составе препарата был испытан также тиамулин, а в качестве вспомогательных веществ - глюкоза, фруктоза, декстроза, лактоза, лактулоза.It should also be noted that as a compound of a number of fluoroquinolones in the preparation, the following compounds were tested: pefloxacin, ofloxacin, enrofloxacin, norfloxacin, lomefloxacin, levofloxacin, moxifloxacin, sparfloxacin, enoxacin. Tiamulin was also tested as a compound of pleuromutilins in the composition of the drug, and glucose, fructose, dextrose, lactose, lactulose as auxiliary substances.
Результаты исследований композиций с перечисленными выше ингредиентами при условии соотношений соединения из группы фторхинолонов и из группы плевромутилинов (в масс.ч.) в диапазоне от 1:3.0 до 1:225.0 достоверно схожи с результатами исследований препарата по примеру 1 и поэтому не отражены в настоящем описании.The results of studies of compositions with the above ingredients, provided the ratios of the compounds from the group of fluoroquinolones and from the group of pleuromutilins (in parts by weight) in the range from 1: 3.0 to 1: 225.0 are significantly similar to the results of studies of the drug according to example 1 and therefore are not reflected in this description.
Таким образом, проведенные исследования позволяют сделать следующие выводы:Thus, the studies allow us to draw the following conclusions:
- ЛД50 заявленного препарата составляет 8,5±0,84 г/кг м.т. - малотоксичное соединение (4 класс) - согласно классификации (ГОСТ 12.1.007-76);- LD 50 of the claimed drug is 8.5 ± 0.84 g / kg bw - low toxicity compound (4 class) - according to the classification (GOST 12.1.007-76);
- препарат не вызывает функциональных изменений в печени (по гексеналовой пробе);- the drug does not cause functional changes in the liver (hexenal sample);
- препарат не обладает аллергенными свойствами;- the drug does not have allergenic properties;
- при однократной даче в пятикратно увеличенной дозе (для поросят - 0,225 г на 1 кг массы животного и для цыплят - 0,55 г на 1 кг массы животного) препарат не вызывает каких-либо изменений со стороны гематологических и биохимических показателей крови организма свиней и птиц;- in a single dose in a five-fold increased dose (for piglets - 0.225 g per 1 kg of animal weight and for chickens - 0.55 g per 1 kg of animal weight), the drug does not cause any changes in the hematological and biochemical parameters of the blood of the pig’s body and birds
- двадцатидневная дача препарата (субхроническая токсичность) свиньям и птице не вызывает изменений в гематологических и биохимических показателях крови и мочи;- a twenty-day giving of the drug (subchronic toxicity) to pigs and birds does not cause changes in the hematological and biochemical parameters of blood and urine;
- препарат в терапевтической дозе 0,045 г на 1 кг массы животного оказывает стимулирующее влияние на показатели гуморального иммунного ответа, повышая ИС в АОК в 4,88 раза, и реакциях гетерофильных агглютининов в 5,22 раза и особенно Т-систему иммунитета, что выражается в повышении активности иммунокомпетентных клеток, взаимодействие которых и обуславливает развитие иммунного ответа у животных (ИСгзт 32,4%);- the drug in a therapeutic dose of 0.045 g per 1 kg of animal weight has a stimulating effect on the humoral immune response, increasing the IS in the AOK by 4.88 times, and the reactions of heterophilic agglutinins by 5.22 times, and especially the T-system of immunity, which is expressed in increased activity of immunocompetent cells, the interaction of which determines the development of the immune response in animals (IS HRT 32.4%);
- препарат обладает выраженным антимикробным действием как на грамотрицательную (Ps.aeruginosa, Е.coli, Salmonella abony), так и грамположительную (S.aureus, Вас.subtilis) микрофлору;- the drug has a pronounced antimicrobial effect on both gram-negative (Ps.aeruginosa, E. coli, Salmonella abony) and gram-positive (S.aureus, Vas.subtilis) microflora;
- препарат эффективно действует как на вегетативные, так и споровые формы бактерий;- the drug effectively affects both vegetative and spore forms of bacteria;
- позволяет эффективно лечить широкий спектр болезней бактериальной этиологии у животных в условиях отсутствия данных о возбудителе инфекции и его чувствительности к антибиотикам;- allows you to effectively treat a wide range of diseases of bacterial etiology in animals in the absence of data on the causative agent of infection and its sensitivity to antibiotics;
- препарат стабилен при хранении.- the drug is stable during storage.
Claims (6)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2014109031/15A RU2554797C1 (en) | 2014-03-11 | 2014-03-11 | Complex antibacterial agent for animals |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2014109031/15A RU2554797C1 (en) | 2014-03-11 | 2014-03-11 | Complex antibacterial agent for animals |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2554797C1 true RU2554797C1 (en) | 2015-06-27 |
Family
ID=53498659
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2014109031/15A RU2554797C1 (en) | 2014-03-11 | 2014-03-11 | Complex antibacterial agent for animals |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2554797C1 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2814246C1 (en) * | 2023-03-20 | 2024-02-28 | Белгородский филиал Федерального государственного бюджетного научного учреждения "Федеральный Научный Центр - Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии имени К.И. Скрябина и Я.Р. Коваленко Российской академии наук" | Method of treating experimental staphylococcosis in chickens |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2005072644A1 (en) * | 2004-02-02 | 2005-08-11 | Bimeda Research & Development Limited | Method and device for treating a teat canal of an animal |
| RU2287989C2 (en) * | 2004-02-25 | 2006-11-27 | Общество с ограниченной ответственностью "ВИК-здоровье животных" | Preparation for preventing and treating diseases in animals and poultry caused by mycoplasmas or serpulines in association with bacteria |
-
2014
- 2014-03-11 RU RU2014109031/15A patent/RU2554797C1/en active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2005072644A1 (en) * | 2004-02-02 | 2005-08-11 | Bimeda Research & Development Limited | Method and device for treating a teat canal of an animal |
| RU2287989C2 (en) * | 2004-02-25 | 2006-11-27 | Общество с ограниченной ответственностью "ВИК-здоровье животных" | Preparation for preventing and treating diseases in animals and poultry caused by mycoplasmas or serpulines in association with bacteria |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| формула. * |
| формула. ХМЕЛЕВСКАЯ Ю.В. Применение макролидов и фторхинолонов для коррекции нарушений иммунитета при экспериментальном панкреатите// Успехи современного естествознания, 2003, N12, с.71. Инструкция по применению ветеринарного препарата Тиамулин 45% ВК. Одобрено Ветбиофармсоветом "12" июля 2012 г. Протокол N63. [Найдено 11.09.2014] [он-лайн], Найдено из Интернет: * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2814246C1 (en) * | 2023-03-20 | 2024-02-28 | Белгородский филиал Федерального государственного бюджетного научного учреждения "Федеральный Научный Центр - Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии имени К.И. Скрябина и Я.Р. Коваленко Российской академии наук" | Method of treating experimental staphylococcosis in chickens |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN106727578A (en) | Compound Sulfachorpyrdazine Sodium Powder and preparation method thereof | |
| RU2521369C1 (en) | Agent or stimulation of metabolic processes, prevention and treatment of gastrointestinal diseases in calves in early postnatal period | |
| RU2554797C1 (en) | Complex antibacterial agent for animals | |
| RU2570389C1 (en) | Antibacterial pharmaceutical composition for treatment of farm animals and poultry | |
| BG64369B1 (en) | Veterinary use of a pleuromutilin derivative | |
| EP0482133B1 (en) | Use of lactoferrin to counter the toxic effects of endotoxins | |
| Kyuchukova et al. | Levofloxacin residues in chicken meat and giblets | |
| RU2677220C1 (en) | Method treatment of broiler chickens with associative intestinal infection | |
| KR20120140453A (en) | Complex antibiotic composition for animal | |
| RU2602303C1 (en) | Method for prevention of intestinal infections in broiler chickens | |
| van Saene et al. | Gut decontamination by oral ofloxacin and ciprofloxacin in healthy volunteers | |
| RU2786335C1 (en) | Method for the treatment of diseases of bacterial etiology in animals | |
| Olentsova et al. | Silver-based drug effect on the body of calves with diarrhea | |
| RU2563826C1 (en) | Injection antibacterial pharmaceutical composition | |
| RU2800585C1 (en) | Method for treatment of bordetella pneumonia in piglets | |
| RU2295330C2 (en) | Pharmaceutical composition for prophylaxis and additional chemotherapy of tuberculosis | |
| RU2619859C1 (en) | Method for prevention and treatment of newborns calves diarrheal diseases | |
| RU2757329C1 (en) | Method for therapy of cow catarral mastitis with complex preparation containing silver nanoparticles argovit and dimexide | |
| RU2812897C1 (en) | METHOD OF REDUCING CONCENTRATION OF TOXIC ELEMENTS Al, As, Pb, Cd, Sn IN FISH MUSCLE TISSUE | |
| RU2676326C1 (en) | Complex antibacterial antihelminthic composition for treatment of farm animals and birds | |
| Al-Kheraije | Studies on the antibacterial activity of ceftiofur sodium in vitro and birds | |
| RU2753606C1 (en) | Antibacterial humic agent | |
| RU2684902C1 (en) | Method of treatment and prevention of streptococcal infection of piglets and pigs, complicated by gastrointestinal and respiratory diseases | |
| KR102208837B1 (en) | Composition for inhibiting adhesion, invasion of bacteria or antibacterial resistance comprising methyl gallate and fluoroquinolone antibacterial agent | |
| HU198843B (en) | Process for producing veterinary compositions with disinfecting and antiinflammatory action, comprising natural active ingredient and suitable particularly for treating mastitis |