RU2517209C2 - Medication, which produces nootropic action on organism - Google Patents

Abstract

FIELD: medicine, pharmaceutics.

SUBSTANCE: invention relates to pharmaceutical industry and represents medication, which has a nootropic action on an organism based on cyclic dipeptides, which contains a propyl-alanine sequence.

EFFECT: invention ensures extension of arsenal of medication with nootropic activity.

2 cl, 2 ex, 2 tbl

Description

Изобретение относится к области медицины, а именно к препаратам пептидного происхождения, обладающих ноотропным действием, а именно к циклическим пептидам (дикетопиперазинам) общей формулы:The invention relates to medicine, namely to preparations of peptide origin with a nootropic effect, namely to cyclic peptides (diketopiperazines) of the general formula:

, где X-аланин(Ala) или глютамин(Gln), а Pro-пролин.

where X-alanine (Ala) or glutamine (Gln), and Pro-proline.

Термин "ноотропы" (от греческих слов "ноос" - мышление и "тропос" - стремление) был принят в 1972 г., спустя два года после появления на мировом рынке препарата пирацетам (ноотрорпил), разработанного бельгийской фирмой UCB. В настоящее время под препаратами, обладающими ноотропным действием, понимают вещества, оказывающие специфическое влияние на высшие интегративные функции мозга, улучшающие память, облегчающие процесс обучения, стимулирующие интеллектуальную деятельность, повышающие устойчивость мозга к повреждающим факторам, улучшающие когнитивные (познавательные) функции как у здоровых людей, так и, в особенности, нарушенные при различных заболеваниях (Андреев Б.В. Ноотропные средства // Мир Медицины. - №8. - 1998. - С.25-28).The term "nootropics" (from the Greek words "noos" - thinking and "tropos" - aspiration) was adopted in 1972, two years after the appearance on the world market of the drug piracetam (nootorpil), developed by the Belgian company UCB. Currently, drugs that have a nootropic effect are understood to mean substances that have a specific effect on the higher integrative functions of the brain, improve memory, facilitate the learning process, stimulate intellectual activity, increase the brain's resistance to damaging factors, and improve cognitive (cognitive) functions in healthy people. , and, in particular, disturbed in various diseases (Andreev B.V. Nootropic drugs // World of Medicine. - No. 8. - 1998. - P.25-28).

Ноотропные препараты являются весьма динамично развивающейся группой лекарственных средств и в России, и за рубежом. Это, в частности, связано с тем, что продолжительность жизни в развитых странах постоянно увеличивается, причем наиболее быстро растет часть общей популяции, которая состоит из людей старше 65 лет. Следовательно, можно ожидать, что частота заболеваний, ассоциирующихся с возрастом, таких как деменция и других, значительно возрастет, и ноотропные препараты будут все более и более востребованы.Nootropic drugs are a very dynamically developing group of drugs in Russia and abroad. This, in particular, is due to the fact that life expectancy in developed countries is constantly increasing, with the fastest growing part of the general population, which consists of people over 65 years of age. Therefore, it can be expected that the incidence of diseases associated with age, such as dementia and others, will increase significantly, and nootropic drugs will be more and more in demand.

Разработкой новых ноотропных препаратов в настоящее время занимается около 60 ведущих фармацевтических компаний в различных странах. (Варпаховская И. Состояние производства и разработок ноотропных препаратов за рубежом и в России // Ремедиум. - №7. - 1997. - С.3-8). По оценке ежегодника Pharmaprojects, в 1995 г. на различных стадиях исследований, клинического изучения и внедрения на рынок находилось 132 ноотропных препарата, из них 79 на этапе доклинического исследования, 34 - на различных стадиях клинического изучения и 19 - на стадии регистрации и внедрения на рынок. В России зарегистрировано около 15 лекарственных средств, отнесенных к группе ноотропов.About 60 leading pharmaceutical companies in various countries are currently developing new nootropic drugs. (I. Varpakhovskaya State of production and development of nootropic drugs abroad and in Russia // Remedium. - No. 7. - 1997. - P.3-8). According to Pharmaprojects Yearbook, in 1995 there were 132 nootropic drugs at various stages of research, clinical study and market introduction, of which 79 were at the preclinical stage, 34 at various stages of the clinical study and 19 at the stage of registration and market introduction . In Russia, about 15 drugs are classified as nootropics.

Такой интерес к этой группе препаратов объясняется, в частности, тем, что в отличие от психостимуляторов мобилизующего типа, ноотропы не вызывают психомоторного возбуждения, истощения функциональных возможностей организма, привыкания и пристрастия.Such interest in this group of drugs is explained, in particular, by the fact that, in contrast to mobilizing-type psychostimulants, nootropics do not cause psychomotor agitation, depletion of the body's functional capabilities, addiction and addiction.

Согласно современным представлениям к ноотропным препаратам относятся (Воронина Т.А., Середенин С.Б. Ноотропные препараты, достижения и новые проблемы // Экспериментальная и клиническая фармакология. - №4. - 1998. - С.3-9; РЛС-Энциклопедия лекарств / Гл. ред. Крылов Ю.Ф. / М.: "РЛС-2001". - 2000. - 1504 с.; Справочник Видаль. Лекарственные препараты в России: Справочник. - М.: АстраФармСервис, 2000. - 1408 с.): пирацетам, его гомологи и аналоги (анирацетам, оксирацетам, прамирсцетам, нефирацетам и др.); производные диметиламиноэтанола: деанола ацеглюмат, меклофеноксат, центрофеноксин; препараты нейроаминокислот: гамма-аминомасляная кислота (ГАМК), производные гамма-аминомасляной кислоты (фенибут, никотиноил-гамма-аминомасляная кислота (пикамилон), гопантеновая кислота (пантогам), глицин, глутаминовая кислота; производные пиридоксина: пиритинол (пиридитол, энербол, энцефабол); холиномиметик центрального действия: холина альфосцерат; препараты Ginkgo biloba: билобил, мемоплант, ревайтл гинкго, танакан и др.According to modern concepts, nootropic drugs include (Voronina T.A., Seredenin SB, Nootropic drugs, achievements and new problems // Experimental and Clinical Pharmacology. - No. 4. - 1998. - P.3-9; Radar Encyclopedia Medications / Ch.edited by Krylov Yu.F. / M .: "RLS-2001." - 2000. - 1504 s .; Handbook of Vidal. Medications in Russia: Handbook. - M .: AstraFarmService, 2000. - 1408 s. .): piracetam, its homologues and analogues (aniracetam, oxiracetam, pramirscetam, nefiracetam, etc.); derivatives of dimethylaminoethanol: deanol aceglumate, meclofenoxate, centrophenoxin; preparations of neuroamino acids: gamma-aminobutyric acid (GABA), derivatives of gamma-aminobutyric acid (phenibut, nicotinoyl-gamma-aminobutyric acid (picamilon), hopantenic acid (pantogam), glycine, glutamic acid; pyridoxine derivatives, pyrinitolol piritinolabol (pyrinitolbol (pyrinitolbol ); central action cholinomimetic: choline alfoscerate; Ginkgo biloba preparations: bilobil, memoplant, ginkgo rewait, tanakan, etc.

Ноотропным действием обладают также ряд препаратов с широким спектром эффектов (Воронина Т.А., Середенин С.Б. Ноотропные препараты, достижения и новые проблемы // Экспериментальная и клиническая фармакология. - №4. - 1998. - С.3-9): препараты, усиливающие мозговое кровообращение, микроциркуляцию и метаболизм: винпоцетин, винкамин, винконат, ницерголин, циннаризин, флунаризин, нимодипин, ксантиновые производные пентоксифиллина, карнитин, фосфатидилсерин, натрия оксибат; витамины и их производные: пиридоксин, пантотеновая кислота, фолиевая кислота, витамин Е; промежуточные продукты метаболизма клетки: оротовая и янтарная кислоты; энергодающие субстраты: рибоксин, АТФ, РНК, глюкозо-1- и глюкозо-6-фосфат; комбинированные препараты: инстенон.A number of drugs with a wide range of effects also have nootropic effects (Voronina T.A., Seredenin SB, Nootropic drugs, achievements and new problems // Experimental and Clinical Pharmacology. - No. 4. - 1998. - P.3-9) : drugs that enhance cerebral circulation, microcirculation and metabolism: vinpocetine, vincamine, vinconate, nicergoline, cinnarizine, flunarizine, nimodipine, xanthine derivatives of pentoxifylline, carnitine, phosphatidylserine, sodium oxybate; vitamins and their derivatives: pyridoxine, pantothenic acid, folic acid, vitamin E; intermediate products of cell metabolism: orotic and succinic acids; energy-supplying substrates: riboxin, ATP, RNA, glucose-1- and glucose-6-phosphate; combined preparations: instenon.

Вышеперечисленные перечисленные препараты обладают положительным влиянием на память (ноотропным действием) и у них отсутствуют ярко выраженные эффекты традиционных психотропных и кардиотропных препаратов. Для ноотропов также свойственна низкая токсичность и отсутствие выраженных побочных эффектов даже в субтоксических дозах (за исключением некоторых холинергических препаратов).The above listed drugs have a positive effect on memory (nootropic effect) and they do not have pronounced effects of traditional psychotropic and cardiotropic drugs. Nootropics are also characterized by low toxicity and the absence of pronounced side effects even in subtoxic doses (with the exception of some cholinergic drugs).

В настоящее время большой интерес вызывают ноотропные препараты на основе пептидов, такие как кортексин, церебролизин, дельтаран, селанк, ноопепт (РЛС-Энциклопедия лекарств / Гл. ред. Крылов Ю.Ф. / М.: "РЛС-2001". - 2000. - 1504 с.; Справочник Видаль. Лекарственные препараты в России: Справочник. - М.: АстраФармСервис, 2000. - 1408 с.).At present, peptide-based nootropic drugs, such as cortexin, cerebrolysin, deltaran, selank, noopept, are of great interest (Radar Encyclopedia of Medicines / Ed. Krylov Yu.F. / M.: Radar-2001. - 2000 - 1504 p .; Vidal Handbook. Medicines in Russia: Handbook. - M.: AstraFarmService, 2000. - 1408 p.).

В частности, показано (RU 2394836, 2010), что пептид общей формулы: Ac-X-Met-Pro-Arg-Gly-NH₂, где X-Met - L-Met или DL-Met перспективен для создания лекарственных препаратов с нейротропной активностью. Известны цистинсодержащие пептиды, являющиеся фрагментами C-концевой последовательности вазопрессина, стимулирующие обучаемость лабораторных животных в дозах, в 100-1000 раз превышающих дозы вазопрессина в аналогичных тестах, но лишенные его гормональных эффектов (3. Burbach J.P.H., Leboille J.L.M. // J. Biol. Chem. - 1983. - V.258, N 3. - P.1487-1489; Valter M.P., De Wied D., Van Ree J.M. // Neuropeptides. - 1997. - V.31, N 5. - P.489-494). Показано (Голубович В.П., Мартинович В.П., Усенко А.Б и др. //. Химико-фармацевтический журнал, 1888. №6. - С.675-679; Мартинович В.П., Слободчикова Л.К., Голубович В.П., Ахрем А.А., Титов С.А., Воскресенская О.Г. // Химико-фармацевтический журнал - 1989. №9. - С.1054-1057), что тетрапептид Cys-Pro-Arg-Gly-NH₂ является активным стимулятором памяти и обучаемости, эффективные дозы которого сопоставимы с дозами вазопрессина.In particular, it was shown (RU 2394836, 2010) that the peptide of the general formula: Ac-X-Met-Pro-Arg-Gly-NH ₂ , where X-Met - L-Met or DL-Met is promising for the creation of drugs with neurotropic activity. Known cystine-containing peptides that are fragments of the C-terminal sequence of vasopressin, stimulating the learning ability of laboratory animals at doses 100-1000 times higher than the dose of vasopressin in similar tests, but lacking its hormonal effects (3. Burbach JPH, Leboille JLM // J. Biol. Chem. - 1983. - V.258, N 3. - P.1487-1489; Valter MP, De Wied D., Van Ree JM // Neuropeptides. - 1997. - V.31, N 5. - P.489 -494). Shown (Golubovich V.P., Martinovich V.P., Usenko A.B. et al. //. Chemical-Pharmaceutical Journal, 1888. No. 6. - P.675-679; Martinovich V.P., Slobodchikova L. K., Golubovich V.P., Akhrem A.A., Titov S.A., Voskresenskaya O.G. // Chemical and Pharmaceutical Journal - 1989. No. 9. - S.1054-1057), that the tetrapeptide Cys- Pro-Arg-Gly-NH ₂ is an active stimulant of memory and learning, effective doses of which are comparable to doses of vasopressin.

Недостатками данных препаратов является недостаточно высокая активность при воздействии на высшие интегративные функции мозга.The disadvantages of these drugs is not high enough when exposed to higher integrative brain functions.

Наиболее близким по технической сущности и достигаемому эффекту является циклический пролил-глицин, используемый в качестве нейропротективного агента для лечения поражений нервной системы, включая инсульты, травмы мозга, болень Альгеймера, болезнь Паркинсона и иные поражения нервной системы человека (US 2007/0244039, 2007).The closest in technical essence and the achieved effect is cyclic prolyl glycine, used as a neuroprotective agent for the treatment of lesions of the nervous system, including strokes, brain injuries, Alheimer's disease, Parkinson's disease and other lesions of the human nervous system (US 2007/0244039, 2007) .

Недостатком препарата является его недостаточно высокая ноотропная активность, в частности, относительно невысокое стимулирующее воздействие на процессы обучения.The disadvantage of the drug is its not-so-high nootropic activity, in particular, the relatively low stimulating effect on the learning processes.

Задачей, решаемой авторами, являлось создание новых средств на основе пептидов, обладающих более высокой ноотропной активностью.The problem solved by the authors was the creation of new agents based on peptides with higher nootropic activity.

Для решения поставленной задачи были синтезированы и исследованы различные циклические пептиды, содержащие пролин. Сопоставление их свойств проводилось как с ближайшим аналогом - цикло (Pro-Gly), так и с наиболее широко используемым ноотропным препаратом Ноопепт® (таблетки 10 мг, ЗАО «Мастерклон», г. Москва).To solve this problem, various cyclic peptides containing proline were synthesized and studied. A comparison of their properties was carried out both with the closest analogue - cyclo (Pro-Gly), and with the most widely used nootropic drug Noopept® (10 mg tablets, ZAO Masterklon, Moscow).

Технический результат был достигнут созданием новых циклических пептидов общей формулы

где Х-аланин или глютамин, а Pro-пролин.The technical result was achieved by the creation of new cyclic peptides of the General formula

where X-alanine or glutamine, and Pro-proline.

Соединения получают по стандартной технологии пептидного синтеза на твердой фазе или в растворе (например, J.M. Steward and J.D. Young, "Solid Phase Peptide Synthesis", W.H. Freeman Co., San Francisco, 1969)The compounds are prepared by standard solid phase or solution peptide synthesis technology (e.g., J.M. Steward and J.D. Young, "Solid Phase Peptide Synthesis", W.H. Freeman Co., San Francisco, 1969)

Сущность изобретения иллюстрируется следующими примерами.The invention is illustrated by the following examples.

Пример 1. Синтез пептидовExample 1. The synthesis of peptides

В работе в качестве исходного сырья были использованы: оксим-полимер (IRIS, С=0.9 мМ/г), трет-бутилоксикарбонильные производные аминокислот (Boc-Aa-OH), 1-гидроксибензотриазол (HOBt), диметиламинопиридин (DMAP), диизопропилкарбодиимид (DIC), диизопропилэтиламин (DIPEA), трифторуксусная кислота (TFA), хлористый метилен (CH₂Cl₂), диметилформамид (DMF), уксусная кислота (AcOH).The following raw materials were used in the work: oxime polymer (IRIS, C = 0.9 mM / g), tert-butyloxycarbonyl derivatives of amino acids (Boc-Aa-OH), 1-hydroxybenzotriazole (HOBt), dimethylaminopyridine (DMAP), diisopropylcarbodiimide ( DIC), diisopropylethylamine (DIPEA), trifluoroacetic acid (TFA), methylene chloride (CH ₂ Cl ₂ ), dimethylformamide (DMF), acetic acid (AcOH).

Синтез пептидов cyclo(Pro-Gln) (DKP-5); cyclo(Pro-Ala) (DKP-9); cyclo(Pro-D-Ala) (DKP-10); cyclo(Pro-Gly) (DKP-40) проходил в несколько последовательных стадий в условиях традиционного пептидного синтеза..Synthesis of cyclo peptides (Pro-Gln) (DKP-5); cyclo (Pro-Ala) (DKP-9); cyclo (Pro-D-Ala) (DKP-10); cyclo (Pro-Gly) (DKP-40) passed in several successive stages under the conditions of traditional peptide synthesis ..

Присоединение первого аминокислотного остатка. 1 мМ оксим-полимера помещают в реактор для твердофазного синтеза пептидов, добавляют 40 мл DMF и перемешивают в течение 1 часа. 5 мМ Вос-Аа-ОН (Boc-Gln-OH, Boc-Ala-OH, Boc-D-Ala-OH, Boc-Gly-OH) и 5 мМ HOBt растворяют в 10 мл DMF и после охлаждения до 4°С добавляют 5 мМ DIC. Полученный раствор выдерживают при 4°С 15 минут, затем при комнатной температуре 25 минут, переносят в реактор с полимером и добавляют 1 мМ DM АР в 1 мл DMF. Реакционную смесь перемешивают в течение 20 часов при комнатной температуре, отфильтровывают и полимер промывают 40 мл DMF 3 раза и 40 мл CH₂Cl₂ 2 раза.The addition of the first amino acid residue. 1 mM oxime polymer was placed in a solid-phase peptide synthesis reactor, 40 ml of DMF was added and stirred for 1 hour. 5 mM Boc-Aa-OH (Boc-Gln-OH, Boc-Ala-OH, Boc-D-Ala-OH, Boc-Gly-OH) and 5 mM HOBt are dissolved in 10 ml of DMF and after cooling to 4 ° C add 5 mm DIC. The resulting solution was kept at 4 ° C for 15 minutes, then at room temperature for 25 minutes, transferred to a polymer reactor and 1 mM DM AP in 1 ml DMF was added. The reaction mixture was stirred for 20 hours at room temperature, filtered and the polymer washed with 40 ml of DMF 3 times and 40 ml of CH ₂ Cl ₂ 2 times.

Деблокирование проводят, внося в реакционный сосуд 30 мл 25% раствора TFA в CH₂Cl₂ 2 раза на 2 и 30 минут. Полимер отфильтровывают и промывают 40 мл CH₂Cl₂ 3 раза и 40 мл DMF 3 раза.Release is carried out by introducing into the reaction vessel 30 ml of a 25% solution of TFA in CH ₂ Cl ₂ 2 times for 2 and 30 minutes. The polymer is filtered off and washed with 40 ml of CH ₂ Cl ₂ 3 times and 40 ml of DMF 3 times.

Присоединение второго аминокислотного остатка. 5 мМ Boc-Aa-OH (Boc-Pro-OH, Boc-(N-Me-Ala-OH) и 5 мМ HOBt растворяют в 10 мл DMF и после охлаждения до 4°C добавляют 5 мМ DIC. Полученный раствор выдерживают при 4°C 15 минут, затем при комнатной температуре 25 минут, переносят в реактор с аминоацилполимером и добавляют 6 мМ DIPEA в 1 мл DMF. Реакционную смесь перемешивают в течение 30 минут при комнатной температуре, отфильтровывают и полимер промывают 40 мл DMF 3 раза и 40 мл CH₂Cl₂ 2 раза.Joining the second amino acid residue. 5 mM Boc-Aa-OH (Boc-Pro-OH, Boc- (N-Me-Ala-OH) and 5 mM HOBt are dissolved in 10 ml of DMF and 5 mM DIC is added after cooling to 4 ° C. The resulting solution is kept at 4 ° C for 15 minutes, then at room temperature for 25 minutes, transferred to an aminoacyl polymer reactor and 6 mM DIPEA in 1 ml of DMF was added.The reaction mixture was stirred for 30 minutes at room temperature, filtered and the polymer was washed with 40 ml of DMF 3 times and 40 ml of CH ₂ Cl ₂ 2 times.

Деблокирование проводят, внося в реакционный сосуд 30 мл 25% раствора TFA в CH₂Cl₂ 2 раза на 2 и 30 минут. Полимер отфильтровывают и промывают 40 мл CH₂Cl₂ 3 раза и 40 мл DMF 3 раза.Release is carried out by introducing into the reaction vessel 30 ml of a 25% solution of TFA in CH ₂ Cl ₂ 2 times for 2 and 30 minutes. The polymer is filtered off and washed with 40 ml of CH ₂ Cl ₂ 3 times and 40 ml of DMF 3 times.

Циклизация. В реакционный сосуд с дипептидил-полимером вносят 10 мл DMF, 6 мМ DIPEA и перемешивают в течение 30 минут. Затем добавляют 10 мМ AcOH и перемешивают реакционную смесь в течение 2 суток. Полимер отфильтровывают, собирая фильтрат, и промывают 20 мл DMF 2 раза. Объединенные фильтраты упаривают досуха. Остаток растворяют в 20 мл 0,1% водного раствора TFA, замораживают и лиофилизируют.Cyclization. 10 ml of DMF, 6 mM DIPEA are added to a dipeptidyl polymer reaction vessel and stirred for 30 minutes. Then add 10 mm AcOH and stir the reaction mixture for 2 days. The polymer is filtered to collect the filtrate and washed with 20 ml of DMF 2 times. The combined filtrates were evaporated to dryness. The residue was dissolved in 20 ml of a 0.1% TFA aqueous solution, frozen and lyophilized.

Полученная субстанция подвергается очистке с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) на колонке Waters Prep Nova-Pak HR С-18, 6µ, 60Å, 19×300 mm в градиенте ацетонитрила 5-75% за 30 минут. Детекция при 220 нм. Фракцию, соответствующую пику основного продукта, после лиофильной сушки подвергали аминокислотному, масс-спектральному и ВЭЖХ анализам:The resulting substance is purified by high performance liquid chromatography (HPLC) on a Waters Prep Nova-Pak HR C-18, 6µ, 60Å, 19 × 300 mm column in an acetonitrile gradient of 5-75% in 30 minutes. Detection at 220 nm. The fraction corresponding to the peak of the main product, after freeze drying, was subjected to amino acid, mass spectral and HPLC analyzes:

- условия ВЭЖХ анализа: аналитический хроматограф Gilson, Франция, колонка Purospher STARRP-18e, 5µm, 100Å, 4,6×150 mm; градиент (1-25)% ацетонитрила в 0,1% TFA за 20 минут;- conditions of HPLC analysis: analytical chromatograph Gilson, France, Purospher STARRP-18e column, 5µm, 100Å, 4.6 × 150 mm; gradient (1-25)% acetonitrile in 0.1% TFA in 20 minutes;

- условия аминослотного анализа: аминокислотный анализатор LKB Alpha Plus 4151, Швеция; гидролиз: 4M метансульфокислота, содержащая 0.2% триптамина, 110°C, 22 часа;- Amino-slot analysis conditions: LKB Alpha Plus 4151 amino acid analyzer, Sweden; hydrolysis: 4M methanesulfonic acid containing 0.2% tryptamine, 110 ° C, 22 hours;

- условия масс-спектрального анализа: массспектрометр Voyager-DE BioSpectrometry Workstation, Per Sepetive Biosystems, США.- conditions for mass spectral analysis: Voyager-DE BioSpectrometry Workstation mass spectrometer, Per Sepetive Biosystems, USA.

Все синтезированные пептиды имели аминокислотный состав и молекулярную массу, соответствующие теоретическим значениям. Чистота соединений по данным аналитической ОФ-ВЭЖХ составляла не менее 98%.All synthesized peptides had the amino acid composition and molecular weight corresponding to theoretical values. The purity of the compounds according to analytical RP-HPLC was at least 98%.

Характеристики полученных препаратов приведены в таблице 1.Characteristics of the preparations obtained are shown in table 1.

Таблица 1Table 1 ПептидPeptide ВЭЖХHPLC Мол. массаLike weight Аминокислотный составAmino Acid Composition Выход, %Exit, % градиентgradient чистотаpurity теор.theor. экспер.an expert. DKP-5DKP-5 1-251-25 >98%> 98% 225.25225.25 226.12226.12 Gln 1.00; Pro 0.96Gln 1.00; Pro 0.96 50fifty DKP-9DKP-9 1-251-25 >98%> 98% 168.19168.19 169.00169.00 Pro 0.98; Ala 1.00Pro 0.98; Ala 1.00 9090 DKP-10DKP-10 1-251-25 >98%> 98% 168.19168.19 169.00169.00 Pro 0.98; Ala 1.00Pro 0.98; Ala 1.00 7777 DKP-40 (прототип)DKP-40 (prototype) 1-251-25 >98%> 98% 154.16154.16 155.00155.00 Pro 0.98; Gly 1.00Pro 0.98; Gly 1.00 2525

Пример 2. Оценка биологической активности пептидовExample 2. Assessment of the biological activity of peptides

Базисной моделью для оценки влияния веществ на формирование и воспроизведение памятного следа в норме и в условиях его экспериментального нарушения является методика условного рефлекса пассивного избегания (УРПИ) [Буреш Я. Методики и основные эксперименты по изучению мозга и поведения. - М.: Высш. шк., 1991. - 399 с.]. Метод основан на торможении врожденной деятельности или приобретенных навыков, приводящим к отрицательным последствиям для организма. В условиях пассивного избегания животное обучается избегать вредные факторы путем подавления определенных форм поведения, в данном исследовании - избегать предпочитаемого темного пространства.The basic model for assessing the effect of substances on the formation and reproduction of a commemorative trace in normal conditions and in the conditions of its experimental violation is the technique of the conditioned passive avoidance reflex (passive avoidance reaction) [Y. Buresh. - M .: Higher. school, 1991. - 399 p.]. The method is based on the inhibition of congenital activity or acquired skills, leading to negative consequences for the body. In conditions of passive avoidance, the animal learns to avoid harmful factors by suppressing certain forms of behavior, in this study - to avoid the preferred dark space.

Эксперименты проводили на беспородных белых крысах-самцах массой 180-200 г. Каждая экспериментальная и контрольная группа включала по 10 животных. Перед выработкой УРПИ экспериментальным животным на протяжении 10 дней вводили исследуемые препараты в дозах: от 0.01 мг/кг до 1 мг/кг в/б в объеме 0.2 мл на 100 г массы животного. Контрольным животным вводили в/б 0.9% раствор хлорида натрия в аналогичном объеме.The experiments were carried out on outbred white male rats weighing 180-200 g. Each experimental and control group included 10 animals. Before developing passive avoidance reaction, the test animals were administered experimental animals for 10 days in doses: from 0.01 mg / kg to 1 mg / kg ip in a volume of 0.2 ml per 100 g of animal weight. Control animals were injected with a 0.9% sodium chloride solution in a similar volume.

Препарат сравнения - «Ноопепт» вводили в/ж в виде водной взвеси также на протяжении 10 дней в дозе 5 мг/кг (адаптированная для грызунов максимальная терапевтическая доза для человека в расчете на активный компонент).The comparison drug “Noopept” was administered intravenously in the form of an aqueous suspension for 10 days at a dose of 5 mg / kg (the maximum therapeutic dose adapted for rodents for humans based on the active component).

На 11 день у крыс проводили выработку УРПИ в установке, запускающим стимулом которой было нахождение животного в ярко освещенном пространстве. Крысу помещали в светлый отсек двухсекционной камеры. После перехода крысы в темный отсек сразу же наносили неустранимое болевое воздействие 5 последовательными стимулами переменного тока (1 мА, длительностью 1 секунда каждый с интервалом 2 секунды).On day 11, rats underwent passive avoidance reaction in an installation, the triggering stimulus of which was the animal in a brightly lit space. The rat was placed in the bright compartment of a two-section chamber. After the rat went into the dark compartment, irreparable pain was immediately applied with 5 consecutive stimuli of alternating current (1 mA, each lasting 1 second with an interval of 2 seconds).

При тестировании (повторном помещении в освещенный отсек через 24 часа с целью определения сохранения УРПИ) наблюдение за животным велось в течение 180 секунд, регистрировалось время латентного периода перехода крысы в темную часть камеры, время пребывания в светлом и темном отсеках и число животных, не зашедших в темный отсек (число обученных животных).During testing (re-placement in the illuminated compartment after 24 hours in order to determine the preservation of passive avoidance reaction), the animals were monitored for 180 seconds, the latent period of the rat's transition to the dark part of the chamber, the time spent in the light and dark compartments, and the number of animals that did not enter were recorded into the dark compartment (number of trained animals).

Результаты эффекта исследуемых препаратов по влиянию на УРПИ представлены в таблице 2.The results of the effect of the studied drugs on the effect on passive avoidance reaction are presented in table 2.

Таблица 2table 2 Влияние природы сравниваемых препаратов на выработку УРПИ крысThe influence of the nature of the compared drugs on the production of passive avoidance reaction of rats Экспериментальные группыExperimental groups ПоказателиIndicators Латентный период реакции перехода, сLatent period of transition reaction, s Время пребывания в светлой камере, сThe time spent in the light chamber, s Время пребывания в темной камере, сStay in a dark chamber, s Число обученных животных (% ко всей группе)The number of trained animals (% of the whole group) Контроль, физиологический растворControl, saline 80±580 ± 5 79±579 ± 5 24.5±2.524.5 ± 2.5 5 (50)5 (50) DKP-5DKP-5 0.01 мг/кг0.01 mg / kg 138±9*138 ± 9 * 118±7*118 ± 7 * 5.0±0.5*5.0 ± 0.5 * 10 (100)10 (100) 0.1 мг/кг0.1 mg / kg 140±12*140 ± 12 * 120±11*120 ± 11 * 4.5±0.5*4.5 ± 0.5 * 10 (100)10 (100) 1 мг/кг1 mg / kg 142±11*142 ± 11 * 123±14*123 ± 14 * 4.5±0.5*4.5 ± 0.5 * 10 (100)10 (100) DKP-9DKP-9 0.01 мг/кг0.01 mg / kg 122±6*122 ± 6 * 103±5*103 ± 5 * 7.0±0.5*7.0 ± 0.5 * 8 (80)8 (80) 0.1 мг/кг0.1 mg / kg 129±8*129 ± 8 * 107±5*107 ± 5 * 6.5±0.5*6.5 ± 0.5 * 9 (90)9 (90) 1 мг/кг1 mg / kg 132±9*132 ± 9 * 113±4*113 ± 4 * 7.0±0.5*7.0 ± 0.5 * 9 (90)9 (90) DKP-10DKP-10 0.01 мг/кг0.01 mg / kg 135±9*135 ± 9 * 114±8*114 ± 8 * 6.5±0.5*6.5 ± 0.5 * 9 (90)9 (90) 0.1 мг/кг0.1 mg / kg 138±10*138 ± 10 * 117±6*117 ± 6 * 7.0±0.5*7.0 ± 0.5 * 9 (90)9 (90) 1 мг/кг1 mg / kg 140±11*140 ± 11 * 120±4*120 ± 4 * 6.5±0.5*6.5 ± 0.5 * 10 (100)10 (100) DKP-40 (прототип)DKP-40 (prototype) 0.01 мг/кг0.01 mg / kg 110±8*110 ± 8 * 88±488 ± 4 9.0±0.5*9.0 ± 0.5 * 7 (70)7 (70) 0.1 мг/кг0.1 mg / kg 115±7*115 ± 7 * 96±596 ± 5 7.5±0.5*7.5 ± 0.5 * 7 (70)7 (70) 1 мг/кг1 mg / kg 120±9*120 ± 9 * 100±3*100 ± 3 * 8.5±0.5*8.5 ± 0.5 * 8 (80)8 (80) НоопептNoopept 115±10*115 ± 10 * 95±595 ± 5 7.5±0.5*7.5 ± 0.5 * 7 (70)7 (70) * - достоверные отличия от контрольных животных при p<0.05* - significant differences from control animals at p <0.05

Рассматривая данные, представленные в таблице, можно отметить, что препараты улучшают мнестические функции ЦНС животных, причем для каждого препарата его положительный эффект не зависит от дозы в рассматриваемом диапазоне доз.Considering the data presented in the table, it can be noted that the drugs improve the mnemonic functions of the central nervous system of animals, and for each drug its positive effect does not depend on the dose in the considered dose range.

По эффективности препараты можно расположить в следующем ряду по убыванию активности: DKP-5 > DKP-9 = DKP-10 > DKP-40 - Ноопепт®, т.е. заявляемые пептиды по показателям УРПИ превосходили препараты сравнения.According to their effectiveness, the drugs can be arranged in the following order of decreasing activity: DKP-5> DKP-9 = DKP-10> DKP-40 - Noopept®, i.e. The claimed peptides exceeded the comparison drugs in terms of passive avoidance reaction.

Claims (2)

1. Средство, обладающее ноотропным воздействием на организм на основе циклических дипептидов, содержащее последовательность пролин-аланин.1. The tool has a nootropic effect on the body based on cyclic dipeptides containing the proline-alanine sequence. 2. Средство по п.1, представляющее собой циклический дипептид, содержащее последовательность пролин-D-аланин. 2. The tool according to claim 1, which is a cyclic dipeptide containing the sequence of proline-D-alanine.