RU2467069C2 - Система экспрессии компонентов ортогональной трансляции в эубактериальной клетке-хозяине - Google Patents

Система экспрессии компонентов ортогональной трансляции в эубактериальной клетке-хозяине Download PDF

Info

Publication number
RU2467069C2
RU2467069C2 RU2008133028/10A RU2008133028A RU2467069C2 RU 2467069 C2 RU2467069 C2 RU 2467069C2 RU 2008133028/10 A RU2008133028/10 A RU 2008133028/10A RU 2008133028 A RU2008133028 A RU 2008133028A RU 2467069 C2 RU2467069 C2 RU 2467069C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
trna
composition
nucleotide sequence
host cell
providing
Prior art date
Application number
RU2008133028/10A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2008133028A (ru
Inventor
Иоунга РИЮ (US)
Иоунга РИЮ
Питер Г. ШУЛЬЦ (US)
Питер Г. ШУЛЬЦ
Original Assignee
Зе Скрипс Ресеч Инститьют
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Зе Скрипс Ресеч Инститьют filed Critical Зе Скрипс Ресеч Инститьют
Publication of RU2008133028A publication Critical patent/RU2008133028A/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2467069C2 publication Critical patent/RU2467069C2/ru

Links

Images

Landscapes

  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

Настоящее изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано для получения белков с новыми свойствами, которые определяются включением в заранее заданное положение не встречающихся в природе аминокислот. В изобретении раскрывается композиция для коэкспрессии в эубактериальной клетке-хозяине ортогональной тРНК (О-тРНК) и ортогональной аминоацил-тРНК синтетазы (О-РС), которая предпочтительно аминоацилирует указанную О-тРНК интересующей неприродной аминокислотой. Композиция по изобретению состоит из двух конструкций нуклеиновой кислоты: первая конструкция содержит последовательности промотора и терминатора из гена пролин-тРНК Е coli. и происходящую из архей экспрессируемую последовательность, которая кодирует одну О-тРНК или представляет собой полицистронный оперон, а вторая конструкция содержит модифицированный промотор glnS E.coli и экспрессируемую нуклеотидную последовательность, кодирующую соответствующую О-РС. Описаны система трансляции, включающая векторные конструкции по изобретению, и способ получения представляющего интерес полипептида, содержащего не встречающуюся в природе аминокислоту в генетически определенном положении. 6 н. и 48 з.п. ф-лы, 8 ил., 7 пр.

Description

Текст описания приведен в факсимильном виде.
Figure 00000001
Figure 00000002
Figure 00000003
Figure 00000004
Figure 00000005
Figure 00000006
Figure 00000007
Figure 00000008
Figure 00000009
Figure 00000010
Figure 00000011
Figure 00000012
Figure 00000013
Figure 00000014
Figure 00000015
Figure 00000016
Figure 00000017
Figure 00000018
Figure 00000019
Figure 00000020
Figure 00000021
Figure 00000022
Figure 00000023
Figure 00000024
Figure 00000025
Figure 00000026
Figure 00000027
Figure 00000028
Figure 00000029
Figure 00000030
Figure 00000031
Figure 00000032
Figure 00000033
Figure 00000034
Figure 00000035
Figure 00000036
Figure 00000037
Figure 00000038
Figure 00000039
Figure 00000040
Figure 00000041
Figure 00000042
Figure 00000043
Figure 00000044
Figure 00000045
Figure 00000046
Figure 00000047
Figure 00000048
Figure 00000049
Figure 00000050
Figure 00000051
Figure 00000052
Figure 00000053
Figure 00000054
Figure 00000055
Figure 00000056
Figure 00000057
Figure 00000058
Figure 00000059
Figure 00000060
Figure 00000061
Figure 00000062
Figure 00000063
Figure 00000064
Figure 00000065
Figure 00000066
Figure 00000067
Figure 00000068
Figure 00000069
Figure 00000070
Figure 00000071
Figure 00000072
Figure 00000073
Figure 00000075
Figure 00000076
Figure 00000077
Figure 00000078
Figure 00000079
Figure 00000080
Figure 00000081
Figure 00000082
Figure 00000083
Figure 00000084
Figure 00000085
Figure 00000086
Figure 00000087
Figure 00000088
Figure 00000089
Figure 00000090
Figure 00000091
Figure 00000092
Figure 00000093
Figure 00000094
Figure 00000095
Figure 00000096
Figure 00000097
Figure 00000098
Figure 00000099
Figure 00000100
Figure 00000101
Figure 00000102
Figure 00000103
Figure 00000104
Figure 00000105
Figure 00000106
Figure 00000107
Figure 00000108
Figure 00000109
Figure 00000110
Figure 00000111
Figure 00000112
Figure 00000113
Figure 00000114
Figure 00000115
Figure 00000116
Figure 00000117
Figure 00000118
Figure 00000119
Figure 00000120
Figure 00000121
Figure 00000122

Claims (54)

1. Композиция для совместной экспрессии О-тРНК И О-РС, включающая:
(a) конструкцию нуклеиновой кислоты, содержащую последовательности промотора и терминатора, полученные из гена пролин-тРНК Escherichia coli, и экспрессируемую нуклеотидную последовательность, причем обе указанные последовательности промотора и терминатора функционально соединены с указанной экспрессируемой последовательностью, а указанная экспрессируемая последовательность происходит из Архей и является гетерологичной по отношению к указанным последовательностям промотора и терминатора; и
(b) конструкцию нуклеиновой кислоты, содержащую нуклеотидную последовательность промотора, соответствующую модифицированному промотору glnS E.coli, которая имеет нуклеотидную последовательность, соответствующую SEQ ID NO:13, и экспрессируемую нуклеотидную последовательность, причем указанная модифицированная нуклеотидная последовательность промотора glnS E.coli функционально соединена с указанной экспрессируемой последовательностью; при этом конструкция (а) содержит экспрессируемые нуклеотидные последовательности, выбранные из: (c1) и (d), a (b) содержит экспрессируемую нуклеотидную последовательность (с2), где
(c1) представляет собой нуклеотидную последовательность, кодирующую ортогональную тРНК (О-тРНК);
(с2) представляет собой нуклеотидную последовательность, кодирующую ортогональную аминоацил-тРНК синтетазу (О-РС), где указанная О-РС предпочтительно аминоацилирует указанную О-тРНК путем присоединения к ней невстречающейся в природе аминокислоты;
(d) представляет собой один или более полицистронных оперонов, причем полицистронный оперон содержат множество нуклеотидных последовательностей генов тРНК, где по меньшей мере один ген тРНК отделен от по меньшей мере одного смежного с ним гена тРНК гетерологичным полинуклеотидным линкером, полученным из природного полинуклеотидного линкера от природного тРНК оперона.
2. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что указанный ген пролин-тРНК Е. coli выбран из генов тРНК Е.coli: proK, proL и proM.
3. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что указанные последовательности промотора и терминатора пролин-тРНК Е. coli получены из последовательностей промотора и терминатора proK E.coli, представленных в SEQ ID NOS:32 и 33, соответственно.
4. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что указанная в (а) экспрессируемая нуклеотидная последовательность представляет собой полицистронный оперон, содержащий множество из одной или более нуклеотидных последовательностей.
5. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что указанная в (а) экспрессируемая нуклеотидная последовательность кодирует тРНК.
6. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что указанная тРНК получена из одной или более тРНК Архей.
7. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что указанную тРНК кодирует нуклеотидная последовательность, соответствующая SEQ ID NO:1 (MjtRNA-Tyr (CUA)).
8. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что указанная экспрессируемая нуклеотидная последовательность представляет собой полицистронный оперон, содержащий множество нуклеотидных последовательностей, представленных в SEQ ID NO:1 (MjtRNA-Tyr (CUA)).
9. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что указанная экспрессируемая нуклеотидная последовательность содержит множество указанных полицистронных оперонов.
10. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что указанная О-РС получена из аминоацил-тРНК синтетазы Methanococcus jannaschii; предпочтительно, указанная О-РС получена из тирозил-тРНК синтетазы Methanococcus jannaschii.
11. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что в указанной О-РС присутствует замена аспарагиновой кислоты на аргинин в положении 286 или в положении, аналогичном положению 286, по сравнению с аминокислотной последовательностью тирозил-тРНК синтетазы Methanococcus jannaschii дикого типа, соответствующей SEQ ID NO:2 (MjtRNA-Tyr PC дикого типа).
12. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что указанный в (d) полицистронный оперон содержит множество идентичных гетерологичных полинуклеотидных линкеров.
13. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что указанный в (d) полицистронный оперон содержит множество гетерологичных полинуклеотидных линкеров, где по меньшей мере два гетерологичных полинуклеотидных линкера различаются.
14. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что указанный в (d) полицистронный оперон содержит нуклеотид тимидин на 5′-конце, нуклеотид аденозин на 3′-конце, или одновременно нуклеотид тимидин на 5′-конце и нуклеотид аденозин на 3′-конце.
15. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что указанный гетерологичный полинуклеотидный линкер получен из природного полинуклеотидного линкера, расположенного между эндогенными генами тРНК Escherichia coli, выбранными из: valU и valX; ileT и alaT; serV и argV; valV и valW; glyT и thrT; metT и leuW; glnW и metU; hisR и leuT; glnU и glnW; leuP и leuV; glnV и glnX; alaW и alaX; ileU и alaU; ileV и alaV; metU и glnV; glyW и cysT; argX и hisR; и argY и argZ.
16. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что указанный в (d) гетерологичный полинуклеотидный линкер получен из нуклеотидной последовательности, соответствующей SEQ ID NO:14 (valU/valX линкер) или 15 (ileT/alaT линкер).
17. Клетка-хозяин, экспрессирующая О-РС и O-tRNA, которая содержит композицию по п.1 в виде одного или двух векторов.
18. Клетка-хозяин по п.17, отличающаяся тем, что указанная клетка-хозяин представляет собой эубактериальную клетку-хозяин, которая предпочтительно представляет собой клетку Е. coli.
19. Система трансляции для экспрессии представляющего интерес полипептида, который содержит по меньшей мере одну невстречающуюся в природе аминокислоту в заданном положении, включающая:
(a) невстречающуюся в природе аминокислоту;
(b) композицию по п.1; и
(c) полинуклеотид, кодирующий указанный представляющий интерес полипептид, который содержит по меньшей мере один селекторный кодон, который распознается О-тРНК композиции, указанной в (b), причем положение указанного селекторного кодона в указанном полинуклеотиде определяет заданное положение указанной невстречающейся в природе аминокислоты в полипептиде, представляющем интерес, при экспрессии указанного полинуклеотида с получением указанного полипептида.
20. Система трансляции по п.19, отличающаяся тем, что в указанной в (b) композиции указанный ген пролин-тРНК Е. coli выбран из генов тРНК: proK, proL и proM.
21. Система трансляции по п.19, отличающаяся тем, что в указанной в (b) композиции указанные последовательности промотора и терминатора пролин-тРНК Е.coli получены из последовательностей промотора и терминатора proK Е. coli, представленных в SEQ ID NOS:32 (промотор) и 33 (терминатор), соответственно.
22. Система трансляции по п.19, отличающаяся тем, что в указанной в (b) композиции указанный полицистронный оперон содержит множество идентичных гетерологичных полинуклеотидных линкеров.
23. Система трансляции по п.19, отличающаяся тем, что в указанной в (b) композиции указанный полицистронный оперон содержит множество гетерологичных полинуклеотидных линкеров, причем по меньшей мере два гетерологичных полинуклеотидных линкера различаются.
24. Система трансляции по п.19, отличающаяся тем, что в композиции, указанной в (b) указанный гетерологичный полинуклеотидный линкер содержит нуклеотид тимидин на 5′-конце или нуклеотид аденозин на 3′-конце или одновременно нуклеотид тимидин на 5′-конце и нуклеотид аденозин на 3′-конце.
25. Система трансляции по п.19, отличающаяся тем, что в указанной в (b) композиции указанный гетерологичный полинуклеотидный линкер получен из природного полинуклеотидного линкера, расположенного между эндогенными генами тРНК Escherichia coli, выбранными из: valU и valX; ileT и alaT; serV и argV; valV и valW; glyT и thrT; metT и leuW; glnW и metU; hisR и leuT; glnU и glnW; leuP и leuV; glnV и glnX; alaW и alaX; ileU и alaU; ileV и alaV; metU и glnV; glyW и cysT; argX и hisR; и argY и argZ.
26. Система трансляции по п.19, отличающаяся тем, что в указанной в (b) композиции указанный гетерологичный полинуклеотидный линкер получен из нуклеотидной последовательности, соответствующей SEQ ID NO:14 (valU/valX линкер) или 15 (ileT/alaT линкер).
27. Система трансляции по п.19, отличающаяся тем, что в указанной в (b) композиции указанная О-тРНК получена из одной или более тРНК Архей.
28. Система трансляции по п.19, отличающаяся тем, что в указанной в (b) композиции указанная нуклеотидная последовательность, кодирующая О-тРНК, представляет собой полицистронный оперон, содержащий множество нуклеотидных последовательностей, кодирующих О-тРНК.
29. Система трансляции по п.19, отличающаяся тем, что в указанной в (b) композиции указанная нуклеотидная последовательность, кодирующая О-тРНК, содержит нуклеотидную последовательность, соответствующую SEQ ID NO:1 (MjtRNA-Tyr (CUA)).
30. Система трансляции по п.19, отличающаяся тем, что в указанной в (b) композиции указанная нуклеотидная последовательность, кодирующая О-тРНК, представляет собой полицистронный оперон, содержащий множество нуклеотидных последовательностей, представленных в SEQ ID NO:1 (MjtRNA-Tyr (CUA)).
31. Система трансляции по п.19, отличающаяся тем, что в указанной в (b) композиции указанная О-РС получена из аминоацил-тРНК синтетазы Methanococcus jannaschii.
32. Система трансляции по п.19, отличающаяся тем, что в указанной в (b) композиции указанная О-РС получена из тирозил-тРНК синтетазы Methanococcus jannaschii.
33. Система трансляции по п.19, отличающаяся тем, что в указанной в (b) композиции в указанной О-РС присутствует замена аспарагиновой кислоты на аргинин в положении 286 или в положении, аналогичном положению 286, по сравнению с аминокислотной последовательностью тирозил-тРНК синтетазы Methanococcus jannaschii дикого типа, соответствующей SEQ ID NO:2 (Mj-tRNA-Tyr PC дикого типа).
34. Система трансляции по п.19, включающая клетку-хозяина, содержащую (a), (b), (c1) и (с2) композиции, указанной в п.1.
35. Система трансляции по п.34, отличающаяся тем, что указанная клетка-хозяин представляет собой эубактериальную клетку-хозяина, предпочтительно, указанная клетка-хозяин представляет собой клетку Е.coli.
36. Способ получения в клетке-хозяине представляющего интерес полипептида, содержащего в заданном положении невстречающуюся в природе аминокислоту, включающий:
(a) обеспечение
(i) невстречающейся в природе аминокислоты;
(ii) композиции по п.1; и
(iii) полинуклеотида, кодирующего указанный представляющий интерес полипептид, который содержит по меньшей мере один селекторный кодон, который распознается указанной О-тРНК, причем положение селекторного кодона соответствует заданному положению указанной невстречающейся в природе аминокислоты в указанном представляющем интерес полипептиде;
(iv) клетки-хозяина, которая содержит (i), (ii) и (iii);
(b) культивирование указанной клетки-хозяина; и
(c) включение указанной невстречающейся в природе аминокислоты в заданное положение указанного полипептида в ходе трансляции указанного полипептида в указанной клетке-хозяина с получением, таким образом, указанного представляющего интерес полипептида, содержащего указанную невстречающуюся в природе аминокислоту в заданном положении.
37. Способ по п.36, отличающийся тем, что указанное обеспечение конструкции нуклеиновой кислоты в композиции, указанной в (ii), включает обеспечение нуклеотидной последовательности, кодирующей О-тРНК, полученную из одной или более тРНК Архей.
38. Способ по п.36, отличающийся тем, что указанное обеспечение конструкции нуклеиновой кислоты в композиции, указанной в (ii), включает обеспечение полицистронного оперона, который содержит множество нуклеотидных последовательностей, кодирующих одну или более разновидностей О-тРНК.
39. Способ по п.36, отличающийся тем, что указанное обеспечение конструкции нуклеиновой кислоты в композиции, указанной в (ii), включает обеспечение нуклеотидной последовательности, кодирующей О-тРНК, содержащей нуклеотидную последовательность, соответствующую SEQ ID NO:1 (MjtRNA-Tyr (CUA).
40. Способ по п.36, отличающийся тем, что указанное обеспечение конструкции нуклеиновой кислоты в композиции, указанной в (ii), включает обеспечение полицистронного оперона, содержащего множество нуклеотидных последовательностей, представленных в SEQ ID NO:1 (MjtRNA-Tyr (CUA)).
41. Способ по п.36, отличающийся тем, что указанное обеспечение конструкции нуклеиновой кислоты в композиции, указанной в (ii), включает обеспечение нуклеотидной последовательности, кодирующей О-РС, полученную из аминоацил-тРНК синтетазы Methanococcus jannaschii.
42. Способ по п.36, отличающийся тем, что указанное обеспечение конструкции нуклеиновой кислоты в композиции, указанной в (ii), включает обеспечение нуклеотидной последовательности, кодирующей О-РС, полученную из тирозил-тРНК синтетазы Methanococcus jannaschii.
43. Способ по п.36, отличающийся тем, что указанное обеспечение конструкции нуклеиновой кислоты в композиции, указанной в (ii), включает обеспечение нуклеотидной последовательности, кодирующей О-РС, которая содержит замену аспарагиновой кислоты на аргинин в положении 286 или в положении, аналогичном положению 286, по сравнению с аминокислотной последовательностью тирозил-тРНК синтетазы Methanococcus jannaschii дикого типа, соответствующей SEQ ID NO:2 (Mj-tRNA-Tyr PC дикого типа).
44. Способ по п.36, отличающийся тем, что указанное обеспечение конструкции нуклеиновой кислоты в композиции, указанной в (ii), включает обеспечение нуклеотидной последовательности, соответствующей последовательностям промотора и терминатора пролин-тРНК Escherichia coli, выбранной из тРНК Е.coli: proK, proL and proM tRNA.
45. Способ по п.36, отличающийся тем, что указанное обеспечение, конструкции нуклеиновой кислоты в композиции, указанной в (ii), включает обеспечение нуклеотидной последовательности, соответствующей последовательностям промотора и терминатора пролин- тРНК Escherichia coli, которые содержат последовательности промотора и терминатора proK E.coli, соответствующие SEQ ID NO:32 (промотор) и SEQ ID NO:33 (терминатор), соответственно.
46. Способ по п.36, отличающийся тем, что указанное обеспечение полицистронного оперона в композиции, указанной в (ii), включает обеспечение множества идентичных гетерологичных полинуклеотидных линкеров.
47. Способ по п.36, отличающийся тем, что указанное обеспечение полицистронного оперона в композиции, указанной в (ii), включает обеспечение множества гетерологичных полинуклеотидных линкеров, причем по меньшей мере два указанных гетерологичных полинуклеотидных линкера различаются.
48. Способ по п.36, отличающийся тем, что указанное обеспечение полицистронного оперона в композиции, указанной в (ii), включает обеспечение гетерологичного полинуклеотидного линкера, содержащего нуклеотид тимидин на 5′-конце, нуклеотид аденозин на 3′-конце или одновременно нуклеотид тимидин на 5′-конце и нуклеотид аденозин на 3′-конце.
49. Способ по п.36, отличающийся тем, что указанное обеспечение полицистронного оперона в композиции, указанной в (ii), включает обеспечение гетерологичного полинуклеотидного линкера, полученного из природного полинуклеотидного линкера, расположенного между эндогенными генами тРНК Escherichia coli, выбранными из: valU и valX; ileT и alaT; serV и argV; valV и valW; glyT и thrT; metT и leuW; glnW и metU; hisR и leuT; glnU и glnW; leuP и leuV; glnV и glnX; alaW и alaX; ileU и alaU; ileV и alaV; metU и glnV; glyW и cysT; argX и hisR; и argY и argZ.
50. Способ по n. 36, отличающийся тем, что указанное обеспечение полицистронного оперона в композиции, указанной в (и), включает обеспечение гетерологичного полинуклеотидного линкера, полученного из нуклеотидной последовательности, соответствующей SEQ ID NO:14 (valU/valX линкер) или SEQ ID NO:15 (ileT/alaT линкер).
51. Способ по п.36, отличающийся тем, что указанное обеспечение клетки-хозяина включает обеспечение эубактериальной клетки-хозяина, предпочтительно, указанное обеспечение клетки-хозяина включает обеспечение клетки-хозяина Escherichia coli.
52. Способ получения системы трансляции для экспрессии представляющего интерес полипептида, который в заданном положении содержит по меньшей мере одну невстречающуюся в природе аминокислоту, включающий обеспечение:
(a) невстречающейся в природе аминокислоты;
(b) композиции по п.1; и
(c) полинуклеотида, кодирующего указанный представляющий интерес полипептид, который содержит по меньшей мере один селекторный кодон, который распознается указанной О-тРНК, причем положение указанного селекторного кодона в указанном полинуклеотиде определяет указанное заданное положение указанной невстречающейся в природе аминокислоты в указанном представляющем интерес полипептиде при экспрессии указанного полинуклеотида с образованием полипептида.
53. Способ по п.52, согласно которому обеспечивают клетку-хозяина, которая содержит (а), (b) и (с).
54. Способ получения представляющего интерес полипептида, который в заданном положении содержит невстречающуюся в природе аминокислоту, включающий:
(а) обеспечение системы трансляции, включающей
(i) невстречающуюся в природе аминокислоту;
(ii) композицию по п.1;
(iii) полинуклеотид, кодирующий указанный представляющий интерес полипептид, который содержит по меньшей мере один селекторный кодон, который распознается указанной О-тРНК, причем положение указанного селекторного кодона соответствует указанному заданному положению указанной невстречающейся в природе аминокислоты в указанном представляющем интерес полипептиде;
(iv) клетку-хозяина, содержащую (i), (ii) и (iii);
(b) культивирование указанной клетки-хозяина; и
(c) включение указанной невстречающейся в природе аминокислоты в указанное заданное положение указанного полипептида в ходе трансляции указанного полипептида в указанной клетке-хозяина с получением, таким образом, указанного представляющего интерес полипептида, содержащего указанную невстречающуюся в природе аминокислоту в указанном заданном положении.
RU2008133028/10A 2006-03-09 2007-03-07 Система экспрессии компонентов ортогональной трансляции в эубактериальной клетке-хозяине RU2467069C2 (ru)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US78097306P 2006-03-09 2006-03-09
US60/780,973 2006-03-09
US78349706P 2006-03-17 2006-03-17
US60/783,497 2006-03-17
US60/855,336 2006-10-29

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2008133028A RU2008133028A (ru) 2010-04-20
RU2467069C2 true RU2467069C2 (ru) 2012-11-20

Family

ID=46274785

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2008133028/10A RU2467069C2 (ru) 2006-03-09 2007-03-07 Система экспрессии компонентов ортогональной трансляции в эубактериальной клетке-хозяине

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2467069C2 (ru)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2704981C2 (ru) * 2013-07-10 2019-11-01 Президент Энд Фэллоуз Оф Харвард Коллидж Ортогональные белки cas9 для рнк-направляемой регуляции и редактирования генов

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3696189A1 (en) * 2019-02-14 2020-08-19 European Molecular Biology Laboratory Means and methods for preparing engineered target proteins by genetic code expansion in a target protein selective manner

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20050272121A1 (en) * 2004-05-25 2005-12-08 The Scripps Research Institute Site specific incorporation of heavy atom-containing unnatural amino acids into proteins for structure determination

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20050272121A1 (en) * 2004-05-25 2005-12-08 The Scripps Research Institute Site specific incorporation of heavy atom-containing unnatural amino acids into proteins for structure determination

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
HSU L. et al. Bacteriol J. 158(3), 934-942, 1984. *
WANG L. et al. Chemistry and Biology, 8, 883-890, 2001. *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2704981C2 (ru) * 2013-07-10 2019-11-01 Президент Энд Фэллоуз Оф Харвард Коллидж Ортогональные белки cas9 для рнк-направляемой регуляции и редактирования генов

Also Published As

Publication number Publication date
RU2008133028A (ru) 2010-04-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP2009529328A5 (ru)
Armbruster et al. The Arabidopsis thylakoid protein PAM68 is required for efficient D1 biogenesis and photosystem II assembly
US7083970B2 (en) Methods and compositions for the production of orthogonal tRNA-aminoacyl tRNA synthetase pairs
KR102022662B1 (ko) 식물 세포에서의 목적 단백질 발현을 위한 재조합 벡터
Lee et al. Both the hydrophobicity and a positively charged region flanking the C-terminal region of the transmembrane domain of signal-anchored proteins play critical roles in determining their targeting specificity to the endoplasmic reticulum or endosymbiotic organelles in Arabidopsis cells
WO2006019876A2 (en) Production of fusion proteins by cell-free protein synthesis
RU2008135114A (ru) Генетически запрограммированная экспрессия белков, содержащих не встречающуюся в природе аминокислоту фенилселеноцистеин
JP2009529877A5 (ru)
RU2473690C2 (ru) Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
JP2010504096A5 (ru)
US20240209039A1 (en) Novel polypeptide exhibiting fluorescent properties and use for same
Eichmann et al. Selection of high producers from combinatorial libraries for the production of recombinant proteins in Escherichia coli and Vibrio natriegens
CN113699124B (zh) 一种含非天然氨基酸蛋白的制备方法
JP2009538136A5 (ru)
AU2021222340A1 (en) Archaeal pyrrolysyl tRNA synthetases for orthogonal use
RU2467069C2 (ru) Система экспрессии компонентов ортогональной трансляции в эубактериальной клетке-хозяине
WO2010114615A2 (en) A facile system for encoding unnatural amino acids in mammalian cells
US20100035300A1 (en) Producing a Target Protein Using Intramolecular Cleavage by TEV Protease
ES2254044T1 (es) Proteinas fluorescentes de la especie copepoda y metodos para su uso.
JP2011211983A (ja) タンパク質分子対、タンパク質分子対をコードする遺伝子および遺伝子導入ベクターとタンパク質分子対を産生する細胞
US9321816B2 (en) Expression systems and methods of producing spider silk proteins
WO2020235692A1 (ja) 組換えミノムシ絹糸タンパク質の大量生産システム
CN110551193B (zh) 用于蛋白富集表达、胞内定位的新型标签蛋白及其应用
US10465220B2 (en) Expression process
Williams et al. Recombinant glycoprotein production in the slime mould Dictyostelium discoideum

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20140308