RU2423136C2 - Antiviral medication of contact action based on "betadine" and endonuclease - Google Patents

Abstract

FIELD: medicine, pharmaceutics.

SUBSTANCE: invention relates to veterinary, agriculture, medicine, biotechnology and microbiological industry and can be applied for protection from infections, induced by DNA - and RNA- containing viruses. Antiviral combined medication of contact action based on "Betadine", represents mixture of medication "Betadine" with solution of bacterial endonuclease - product of gen nuc A (synonym nuc), in any ratio, and content of povidone-iodine in diluted medication "Betadine" constitutes 0.005 - 0.000005%, and pH of solution of bacterial endonuclease in buffer or salt solution, which contains magnesium cations, constitutes 7-9.

EFFECT: medication has simultaneously reduced irritating effect and high virulicidal activity.

2 tbl

Description

Заявленное техническое решение относится к ветеринарии, сельскому хозяйству, медицине, биотехнологии и микробиологической промышленности и может быть использовано для защиты от инфекций, вызываемых ДНК - и РНК- содержащими вирусами.The claimed technical solution relates to veterinary medicine, agriculture, medicine, biotechnology and the microbiological industry and can be used to protect against infections caused by DNA - and RNA-containing viruses.

Наиболее близким к заявляемому техническому решению по совокупности совпадающих признаков и достигаемому техническому результату является лекарственное средство «Бетадин» - одно из немногих антисептических и дезинфицирующих средств для местного и наружного применения, характеризующееся отсутствием типо- и видоспецифичности в отношении микроорганизмов. Например, «Бетадин», содержащий 10% активного вещества (повидон-йода), оказывает быстрое бактерицидное действие на грамположительные и грамотрицательные бактерии, а также эффективен в отношении грибов, простейших и вирусов [1-3], включая вирусы иммунодефицита человека [3]. Средство нетоксично и не вызывает мутагенного эффекта в отношении высших животных в силу особенностей их строения на клеточном уровне.The closest to the claimed technical solution according to the set of coinciding features and the achieved technical result is the drug "Betadin" - one of the few antiseptic and disinfectants for local and external use, characterized by the absence of type and species specificity for microorganisms. For example, Betadine, containing 10% of the active substance (povidone iodine), has a rapid bactericidal effect on gram-positive and gram-negative bacteria, and is also effective against fungi, protozoa and viruses [1-3], including human immunodeficiency viruses [3] . The tool is non-toxic and does not cause a mutagenic effect in relation to higher animals due to the peculiarities of their structure at the cellular level.

Недостатком «Бетадина» является то, что он может вызвать раздражение контактирующих с ним органов и тканей, что ограничивает сферы его применения. Например, «Бетадин» нежелательно применять при легочной астме, бронхите, заболеваниях слизистой оболочки глаз и повышенной чувствительности к йоду в целом [1, 2]. Между тем известно, что и микробоцидное действие, и раздражающий эффект «Бетадина» зависят от одного и того же показателя: содержания активного йода [3]. В связи с этим разбавление «Бетадина», снижающее его раздражающий эффект, одновременно приводит к уменьшению его микробоцидного эффекта, что сочетается с проявлением типо- и видоспецифичности. Например, снижение содержания активного вещества в 10-1000 раз не оказывало негативного влияния на уровень бактерицидной активности, при этом понижало его вирулицидную активность, особенно сильно в отношении вируса иммунодефицита человека [3]. Дальнейшее уменьшение содержания активного вещества понижало и его бактерицидный эффект [3].The disadvantage of "Betadine" is that it can cause irritation of organs and tissues in contact with it, which limits the scope of its application. For example, Betadine is undesirable for use in pulmonary asthma, bronchitis, diseases of the mucous membrane of the eyes and hypersensitivity to iodine in general [1, 2]. Meanwhile, it is known that both the microbicidal effect and the irritating effect of Betadine depend on the same indicator: the content of active iodine [3]. In this regard, the dilution of "Betadine", which reduces its irritating effect, simultaneously leads to a decrease in its microbicidal effect, which is combined with the manifestation of type and species specificity. For example, a 10-1000-fold decrease in the content of the active substance did not adversely affect the level of bactericidal activity, while lowering its virucidal activity, especially with respect to the human immunodeficiency virus [3]. A further decrease in the content of the active substance also lowered its bactericidal effect [3].

Компенсировать снижение эффективности, вероятно, можно, дополнив действие одного препарата другим. Например, часто улучшения эффекта биологически активных веществ достигают комбинируя одно вещество с другим.It is probably possible to compensate for the decrease in effectiveness by supplementing the effect of one drug with another. For example, often improving the effect of biologically active substances is achieved by combining one substance with another.

Однако «Бетадин», согласно его описанию [1], несовместим с другими средствами, особенно содержащими щелочи, ферменты и ртуть, из-за, по-видимому, ухудшения условий для проявления его активности под влиянием щелочи или снижения содержания активного йода под действием ртути или биологических катализаторов - ферментов. Вопреки этому, в ходе исследования, результат которого стал предметом заявленного технического решения, заявителю удалось успешно совместить «Бетадин» с ферментом - бактериальной эндонуклеазой - и получить комбинированный препарат с пониженным эффектом раздражения, вирулицидная активность которого была выше, чем вирулицидная активность многократно разведенного «Бетадина». Последнее стало возможным, очевидно, потому, что эндонуклеаза, сама обладающая антивирусной активностью [4, 5], не являлась биологическим катализатором по отношению к активному йоду.However, “Betadine”, according to its description [1], is incompatible with other agents, especially those containing alkalis, enzymes and mercury, due to, apparently, worsening conditions for its activity to appear under the influence of alkali or a decrease in the content of active iodine under the action of mercury or biological catalysts - enzymes. Despite this, during the study, the result of which was the subject of the claimed technical solution, the applicant was able to successfully combine Betadine with an enzyme - bacterial endonuclease - and to obtain a combined preparation with a reduced irritation effect, the virucidal activity of which was higher than the virucidal activity of the repeatedly diluted Betadine ". The latter became possible, obviously, because endonuclease, itself possessing antiviral activity [4, 5], was not a biological catalyst with respect to active iodine.

Бактериальная эндонуклеаза - продукт структурного гена пис, исходно найденного в геноме бактерий S.marcescens и позднее клонированного и экспрессированного в клетках S.marcescens и E.coli [6], - представляет собой дезоксирибонуклеат (рибонуклеат) - 5'-нуклеотидогидролазу, благодаря чему не может проявлять каталитической активности по отношению к активному йоду. Бактериальная эндонуклеаза гидролизует нуклеиновые кислоты по эндонуклеолитическому механизму до моно-, ди-, три-, тетра- и олигонуклеотидов, с чем, вероятно, и связана ее антивирусная активность. Известно, что бактериальная эндонуклеаза ингибирует развитие РНК-геномных бактериофагов [4]. В составе препарата «Эндоглюкин» эндонуклеазу используют для лечения и профилактики вирусного паралича пчел [5]. Кроме этого, в качестве одного из активных компонентов бактериальная эндонуклеаза входит в состав антимикробного препарата, отличающегося широким спектром действия, включая антивирусный эффект без выраженной видо- и типоспецифичности [7]. Бактериальная эндонуклеаза нетоксична и безвредна для человека, животных и растений, так как она представляет собой фермент, то есть природный биологический катализатор, способный к самопроизвольной инактивации.Bacterial endonuclease, a product of the structural gene of genesis originally found in the bacterial genome of S. marcescens and later cloned and expressed in S. marcescens and E. coli cells [6], is a deoxyribonucleate (ribonucleate) - 5'-nucleotidohydrolase, which is why may exhibit catalytic activity with respect to active iodine. Bacterial endonuclease hydrolyzes nucleic acids by the endonucleolytic mechanism to mono-, di-, tri-, tetra- and oligonucleotides, with which its antiviral activity is probably associated. Bacterial endonuclease is known to inhibit the development of RNA genomic bacteriophages [4]. As part of the Endoglukin preparation, endonuclease is used for the treatment and prevention of bee viral paralysis [5]. In addition, as one of the active components, bacterial endonuclease is a part of an antimicrobial preparation, which has a wide spectrum of action, including an antiviral effect without pronounced species and type specificity [7]. Bacterial endonuclease is non-toxic and harmless to humans, animals and plants, as it is an enzyme, that is, a natural biological catalyst capable of spontaneous inactivation.

Задачей заявленного технического решения являлось создание нового препарата на основе средства «Бетадин», а именно препарата, обладающего одновременно пониженным раздражающим эффектом и высокой вирулицидной активностью.The objective of the claimed technical solution was the creation of a new drug based on Betadine, namely a drug with both reduced irritating effect and high virucidal activity.

Заявленная задача решена заявителем посредством применения широко известных из уровня техники, как таковых, препаратов «Бетадин» и бактериальной эндонуклеазы. Заявленное техническое решение обеспечивает возможность решения задачи (цели), которая не была разрешима в принципе для специалистов в заявленной области техники, так как полученные результаты не являются очевидными для специалистов, вследствие наличия противоречий, описанных в известном уровне техники [1-3].The claimed problem is solved by the applicant through the use of widely known from the prior art, as such, drugs "Betadine" and bacterial endonuclease. The claimed technical solution provides the possibility of solving a problem (goal), which was not solvable in principle for specialists in the claimed field of technology, since the results are not obvious to specialists, due to the contradictions described in the prior art [1-3].

Заявителем установлено, что время полуинактивации эндонуклеазы при контакте с «Бетадином» составляет 6 мин, в связи с чем для получения заявленного технического решения компоненты смешивают непосредственно перед использованием антивирусного препарата контактного действия с целью предотвращения уменьшения ферментативной активности эндонуклеазы за счет предварительного контакта с «Бетадином». Увеличение времени контакта с «Бетадином» ведет к дальнейшему снижению ферментативной активности эндонуклеазы, вплоть до полной ее утраты.The applicant has established that the half-inactivation time of the endonuclease upon contact with Betadine is 6 minutes, and therefore, to obtain the claimed technical solution, the components are mixed immediately before using an antiviral drug with a contact action in order to prevent a decrease in the enzymatic activity of the endonuclease due to preliminary contact with Betadine . An increase in the contact time with Betadine leads to a further decrease in the enzymatic activity of the endonuclease, up to its complete loss.

«Бетадин» - раствор для местного и наружного применения, содержащий 10% повидон-йода, а также вспомогательные вещества: глицерин, наноксинол 9, лимонную кислоту, динатрия гидрофосфат, едкий натр и очищенную воду [1]."Betadine" is a solution for local and external use containing 10% povidone-iodine, as well as excipients: glycerin, nanoxynol 9, citric acid, disodium hydrogen phosphate, caustic soda and purified water [1].

«Бетадин» с пониженным содержанием активного вещества (повидон-йода) и, соответственно, вспомогательных веществ, получали разбавлением дистиллированной водой. Предварительно определили эффект разбавления на вирулицидную активность в отношении фага λ bII, результаты чего представлены в таблице 1. Для оценки содержания активного йода использовали опубликованные данные [3]."Betadine" with a low content of active substance (povidone iodine) and, accordingly, auxiliary substances, was obtained by dilution with distilled water. The dilution effect on virucidal activity against phage λ bII was previously determined, the results of which are presented in Table 1. Published data were used to evaluate the content of active iodine [3].

Препарат эндонуклеазы представляет собой раствор с активностью не менее 5000 ед./мл, содержащий 0,01-0,10 М Трис-HCl буфер, рН 7,0-9,0, или 0,5-0,8% NaCl, и не менее 0,01 моль/л катионов магния. Заявителем установлено, что использование препарата эндонуклеазы с активностью менее 5000 ед./мл также будет приводить к достижению результата заявленного технического решения. Но этот результат будет хуже, чем результаты, представленные в таблице 2.An endonuclease preparation is a solution with an activity of at least 5000 units / ml, containing 0.01-0.10 M Tris-HCl buffer, pH 7.0-9.0, or 0.5-0.8% NaCl, and not less than 0.01 mol / l of magnesium cations. The applicant has established that the use of an endonuclease preparation with an activity of less than 5000 units / ml will also lead to the achievement of the result of the claimed technical solution. But this result will be worse than the results presented in table 2.

Заявителю известно, что эндонуклеаза проявляет ферментативную активность при рН 7-10, с наилучшим эффектом при рН 8,5. Заявителем установлено, что при смешивании разбавленного «Бетадина» с равным объемом 0,5-0,8% NaCl или 0,10 М Трис-HCl буфера, рН 8,5, удается получить композицию с рН 7,3 или 7,9, что является достаточным для достижения сверхсуммарного эффекта заявленного технического решения, что видно из результатов, представленных в таблице 2. Уменьшение концентрации NaCl до 0,2% ухудшает результат заявленного технического решения за счет понижения рН среды. Повышение концентрации NaCl до 17,5% не снижает результат заявленного технического решения, однако выводит композицию заявленного технического решения за рамки физиологических значений по содержанию NaCl. Дальнейшее увеличение содержания NaCl нецелесообразно, во-первых, в силу отмеченной выше причины, во-вторых, потому, что это приводит к снижению ферментативной активности эндонуклеазы. 0,01-0,10 М концентрация Трис-HCl буфера является оптимальной для достижения результата заявленного технического решения. Увеличение или уменьшение концентрации буфера будет также приводить к достижению результата заявленного технического решения. Но этот результат будет хуже, чем результаты, представленные в таблице 2.Applicant knows that endonuclease exhibits enzymatic activity at pH 7-10, with the best effect at pH 8.5. The applicant found that when mixing diluted Betadine with an equal volume of 0.5-0.8% NaCl or 0.10 M Tris-HCl buffer, pH 8.5, it is possible to obtain a composition with a pH of 7.3 or 7.9, which is sufficient to achieve the total effect of the claimed technical solution, which can be seen from the results presented in table 2. A decrease in the concentration of NaCl to 0.2% worsens the result of the claimed technical solution by lowering the pH of the medium. Increasing the concentration of NaCl to 17.5% does not reduce the result of the claimed technical solution, however, it takes the composition of the claimed technical solution beyond the physiological values for the content of NaCl. A further increase in the content of NaCl is impractical, firstly, for the reason noted above, and secondly, because it leads to a decrease in the enzymatic activity of endonuclease. 0.01-0.10 M concentration of Tris-HCl buffer is optimal to achieve the result of the claimed technical solution. Increasing or decreasing the concentration of the buffer will also lead to the achievement of the result of the claimed technical solution. But this result will be worse than the results presented in table 2.

Заявителю известно, что увеличение содержания катионов магния в заявленном техническом решении не окажет отрицательного действия на результат. Напротив, уменьшение содержания магния ухудшит результат вплоть до приближения к результату действия разбавленного «Бетадина». В отсутствии катионов магния достигаемый результат будет равен результату действия разбавленного «Бетадина» и обусловлен этим действием. Таким образом, заявителю удалось скомбинировать два препарата, относящихся к разным классам соединений, что в совокупности давало взаимное улучшение биологического эффекта - вирулицидной активности - и позволяло снизить раздражающее действие средства «Бетадин».The applicant is aware that the increase in the content of magnesium cations in the claimed technical solution will not have a negative effect on the result. On the contrary, a decrease in the magnesium content will worsen the result up to approaching the result of the action of diluted Betadine. In the absence of magnesium cations, the result achieved will be equal to the result of the action of diluted Betadine and is due to this action. Thus, the applicant was able to combine two drugs belonging to different classes of compounds, which together gave a mutual improvement in the biological effect - virucidal activity - and allowed to reduce the irritant effect of Betadine.

Заявленное техническое решение поясняется примерами и сведениями, приведенными в таблицах 1 и 2. В таблице 1 представлена вирулицидная активность «Бетадина», разбавленного дистиллированной водой в 10-1000000 раз, в отношении фага λ bII. В таблице 2 приведены результаты заявленного технического решения в сравнении с действием эндонуклеазы и разбавленного «Бетадина» в различных соотношениях.The claimed technical solution is illustrated by examples and information given in tables 1 and 2. Table 1 presents the virucidal activity of Betadine diluted with distilled water 10-1000000 times, in relation to phage λ bII. Table 2 shows the results of the claimed technical solution in comparison with the action of endonuclease and diluted "Betadine" in various ratios.

Заявленное техническое решение реализуется следующим образом.The claimed technical solution is implemented as follows.

Антивирусный препарат контактного действия, который содержал 0,005-0,000005% повидон-йод, 5,0 ммоль/л катионов магния, 25 мМ Трис-HCl буфер, рН 8,0, или 0,20% NaCl и бактериальную эндонуклеазу, готовили непосредственно перед использованием, смешивая в соотношении 1:1 «Бетадин» с пониженным содержанием повидон-йода и препарат эндонуклеазы (пример 1).A contact-action antiviral preparation that contained 0.005-0.000005% povidone iodine, 5.0 mmol / L magnesium cations, 25 mM Tris-HCl buffer, pH 8.0, or 0.20% NaCl and bacterial endonuclease, were prepared directly before use, mixing in a ratio of 1: 1 "Betadine" with a low content of povidone-iodine and the preparation of endonuclease (example 1).

Антивирусное действие препарата контактного действия испытывали в непосредственном контакте с суспензией фага λ bII, смешивая их в соотношении 1:1 (пример 1) и инкубируя смесь при комнатной температуре в течение 6 мин. Аналогично и одновременно с антивирусным препаратом контактного действия испытывали вирулицидное действие раствора бактериальной эндонуклеазы, содержавшего 5,0 ммоль/л катионов магния, 25 мМ Трис-HCl буфер, рН 8,0, или 0,20% NaCl, и «Бетадина» с пониженным содержанием повидон-йода, взятых по отдельности. Вирулицидную активность оценивали, контролируя изменение числа стерильных пятен, определенных по методу Грациа, используя в качестве тест-культуры E.coli BL21(DE3)pLysS. Увеличение времени инкубации улучшало результаты, представленные в таблице 2. В частности, инкубация в течение 6 часов улучшала результат действия разбавленного «Бетадина» в 4,5 раза, раствора бактериальной эндонуклеазы, содержавшего 5,0 ммоль/л катионов магния, 25 мМ Трис-HCl буфер, рН 8,0, или 0,20% NaCl - в 3,5 раза, а антивирусного препарата контактного действия, который содержал 0,005-0,000005% повидон-йод, 5,0 ммоль/л катионов магния, 25 мМ Трис-HCl буфер, рН 8,0, или 0,20% NaCl - в 8,5 раз. Инкубация в течение 24 часов позволяла достичь 100% эффекта. Уменьшение времени инкубации ухудшало результат. Так, инкубация в течение 4 мин приводила к ухудшению результата в 1,5 раза, а в течение 2 мин - в 1,87 раза.The antiviral effect of the contact preparation was tested in direct contact with a suspension of phage λ bII, mixing them in a 1: 1 ratio (Example 1) and incubating the mixture at room temperature for 6 minutes. Similarly and simultaneously with an antiviral drug with a contact action, the virucidal effect of a bacterial endonuclease solution containing 5.0 mmol / L magnesium cations, 25 mM Tris-HCl buffer, pH 8.0, or 0.20% NaCl, and Betadine with a reduced the content of povidone iodine taken separately. Virucidal activity was evaluated by monitoring the change in the number of sterile spots determined by the Grazia method using E. coli BL21 (DE3) pLysS as a test culture. An increase in the incubation time improved the results presented in Table 2. In particular, incubation for 6 hours improved the result of the diluted Betadine by 4.5 times, the bacterial endonuclease solution containing 5.0 mmol / L magnesium cations, 25 mM Tris- HCl buffer, pH 8.0, or 0.20% NaCl - 3.5 times, and the contact-action antiviral drug, which contained 0.005-0.000005% povidone-iodine, 5.0 mmol / L magnesium cations, 25 mM Tris-HCl buffer, pH 8.0, or 0.20% NaCl - 8.5 times. Incubation for 24 hours allowed to achieve 100% effect. Reducing the incubation time worsened the result. So, incubation for 4 minutes led to a deterioration of the result by 1.5 times, and within 2 minutes - by 1.87 times.

Вирулицидная активность заявленного технического решения (антивирусный препарат контактного действия) и его активных составляющих представлена в таблице 2.Virucidal activity of the claimed technical solution (antiviral drug contact action) and its active components are presented in table 2.

Из приведенных примеров в таблице 2 видно, что изменения соотношений «Бетадин: с пониженным содержанием повидон-йода: препарат Эндонуклеазы» в 5 и 500 раз, а также « препарата Эндонуклеазы к Бетадину с пониженным содержанием повидон-йода» в 5 и 500 раз практически не влияет на результат - снижение жизнеспособности, при условии, что содержание повидон-йода в разбавленном средстве «Бетадин» составляет 0,005-0,000005%, а рН раствора составляет 7-9.From the above examples in table 2 it is seen that the changes in the ratios “Betadine: with a low content of povidone iodine: the preparation of Endonuclease” by 5 and 500 times, as well as the “preparation of Endonuclease to Betadine with a low content of povidone-iodine” by 5 and 500 times does not affect the result - a decrease in viability, provided that the content of povidone iodine in the diluted Betadine is 0.005-0.000005%, and the pH of the solution is 7-9.

Таким образом, результатами опытов, приведенных в материалах таблицы 2, подтверждается факт, что заявленное техническое решение может быть достигнуто при разных количественных соотношениях составляющих заявленного препарата.Thus, the results of the experiments shown in the materials of table 2, confirms the fact that the claimed technical solution can be achieved with different quantitative ratios of the components of the claimed drug.

Соотношение « Бетадин: с пониженным содержанием повидон-йода: препарат Эндонуклеазы» может варьироваться в широких пределах.The ratio "Betadine: low in povidone iodine: Endonuclease preparation" can vary widely.

Поскольку эндонуклеаза является ингибитором РНК-геномных бактериофагов [4], а фаг λ bII относится к ДНК-геномным вирусам, антивирусный препарат контактного действия (заявленное техническое решение) эффективен в отношении ДНК- и РНК- содержащих вирусов.Since endonuclease is an inhibitor of RNA genomic bacteriophages [4], and phage λ bII refers to DNA genomic viruses, a contact-action antiviral drug (the claimed technical solution) is effective against DNA and RNA viruses.

Заявленное техническое решение (антивирусный препарат контактного действия) является принципиально новым препаратом и представляет собой нетоксичное экологически чистое вещество, проявляющее активность при мягких физиологических условиях. Таким образом, полученные данные показывают возможность применения препарата в качестве универсального средства защиты при инфекциях вирусной этиологии в различных областях народного хозяйства.The claimed technical solution (antiviral drug of contact action) is a fundamentally new drug and is a non-toxic environmentally friendly substance that is active under mild physiological conditions. Thus, the data obtained show the possibility of using the drug as a universal remedy for infections of viral etiology in various areas of the national economy.

Заявленное техническое решение (антивирусный препарат контактного действия) соответствует критерию «новизна», предъявляемому к изобретениям, так как из уровня техники не выявлены технические решения, обладающие заявленной совокупностью признаков.The claimed technical solution (antiviral drug of contact action) meets the criterion of "novelty", presented to the invention, since the prior art has not identified technical solutions that have the claimed combination of features.

Заявленное техническое решение соответствует критерию «изобретательский уровень», предъявляемому к изобретениям, так как заявленное технические решение не следует явным образом из уровня техники для специалиста в данной области техники, более того заявителю удалось скомбинировать в одном препарате два препарата, относящихся к разным классам соединений, в принципе несовместимых, что известно из исследованного уровня техники, при этом заявителями получены результаты, не являющиеся очевидными для специалиста из известного уровня техники, что является дополнительным доказательством соответствия заявленного решения критерию «изобретательский уровень», так как полученные результаты в совокупности дали взаимное улучшение биологического эффекта - вирулицидной активности - и позволяли снизить раздражающее действие средства «Бетадин».The claimed technical solution meets the criterion of "inventive step" for inventions, since the claimed technical solution does not follow explicitly from the prior art for a person skilled in the art, moreover, the applicant was able to combine two drugs in one preparation, belonging to different classes of compounds, basically incompatible, which is known from the studied prior art, while the applicants obtained results that are not obvious to a specialist from a known level of technology ki, which is additional proof of compliance of the claimed solution to the criterion "Inventive Step" since the results obtained were given in combination the relative improvement of the biological effect - virucidal activities - and allowed to reduce the irritant effect of the agent "Betadine".

Заявленное техническое решение соответствует критерию «промышленная применимость», так как оно может быть реализовано в народном хозяйстве с помощью стандартного оборудования и средств.The claimed technical solution meets the criterion of "industrial applicability", as it can be implemented in the national economy using standard equipment and tools.

Таблица 1Table 1 Вирулицидный эффект «Бетадина» с различным содержанием повидон-йодаThe virucidal effect of Betadine with a different content of povidone iodine Разбавление «Бетадина»Dilution of Betadine Содержание при контакте с вирусамиVirus Contact Число стерильных пятен**The number of sterile spots ** Снижение жизнеспо-собности, %Decrease in viability,% повидон йода, %povidone iodine,% активного йода, мм*active iodine, mm * Без разбавленияNo dilution 5,05,0 0,0100.010 00 100one hundred         10¹ 10 ¹ 0,50.5 0,0650,065 00 100one hundred 10² 10 ² 0,050.05 0,0740,074 75±0,2575 ± 0.25 70±0,970 ± 0.9 10³ 10 ³ 0,0050.005 0,0130.013 125±0,75125 ± 0.75 50±0,750 ± 0.7 10⁴ 10 ⁴ 0,00050,0005 Меньше 0,001Less than 0.001 150±1,25150 ± 1.25 40±0,540 ± 0.5 10⁵ 10 ⁵ 0,000050.00005 Меньше 0,001Less than 0.001 187±0,5187 ± 0.5 25±0,825 ± 0.8 10⁶ 10 ⁶ 0,0000050.000005 Меньше 0,001Less than 0.001 220±0,75220 ± 0.75 12±0,712 ± 0.7 *[3], **0% - 250 стерильных пятен* [3], ** 0% - 250 sterile spots

Таблица 2table 2 Вирулицидный эффект антивирусного препарата контактного действия (заявленное техническое решение), полученный при разных соотношениях объемов «Бетадина» с пониженным содержанием повидон-йода и препарата эндонуклеазыVirucidal effect of an antiviral drug with a contact action (claimed technical solution) obtained at different ratios of Betadine volumes with a low content of povidone iodine and an endonuclease preparation Соотношение объемов «Бетадина» и препарата эндонуклеазыThe ratio of the volume of "Betadine" and the drug endonuclease Содержание в препаратеContent in the preparation Содержание повидон-йода в препарате, %The content of povidone iodine in the drug,% Эндонуклеолитическая активность в препарате, ед./млEndonucleolytic activity in the preparation, units / ml Снижение жизнеспособности, %Decrease in vitality,%         ОпытExperience КонтрольThe control 1one 22 33 4four 55 66 Пример 1Example 1           1:11: 1 25 мМ Трис-HCl буфер или25 mM Tris-HCl buffer or 0,0050.005 4000040,000 64±0,364 ± 0.3 00 0,00050,0005 4000040,000 52±0,152 ± 0.1 00 0,000050.00005 4000040,000 32±0,232 ± 0.2 00 0,0000050.000005 4000040,000 44±0,344 ± 0.3 00         0,000050.00005 50005000 51±0,651 ± 0.6 00 0,000050.00005 8000080,000 70±0,370 ± 0.3 00 0.2% NaCl0.2% NaCl 0,000050.00005 8000080,000 50±0,450 ± 0.4 00 1one 22 33 4four 55 66 Пример 2Example 2           5:15: 1 15 мМ Трис-HCl буфер или15 mM Tris-HCl buffer or 0,0050.005 4000040,000 60±0,460 ± 0.4 00 0,00050,0005 4000040,000 50±0,750 ± 0.7 00 0,000050.00005 4000040,000 31±0,731 ± 0.7 00 0,0000050.000005 4000040,000 39±0,539 ± 0.5 00         0,000050.00005 50005000 49±0,749 ± 0.7 00 0,000050.00005 8000080,000 68±0,268 ± 0.2 00 0.1% NaCl0.1% NaCl 0,000050.00005 8000080,000 46±0,746 ± 0.7 00 Пример 3Example 3 22 33 4four 55 66 1:51: 5 25 мМ Трис-HCl буфер или25 mM Tris-HCl buffer or 0,0050.005 4000040,000 66±0,766 ± 0.7 00 0,00050,0005 4000040,000 57±0,157 ± 0.1 00 0,000050.00005 4000040,000 33±0,433 ± 0.4 00 0,0000050.000005 4000040,000 46±0,446 ± 0.4 00         0,000050.00005 50005000 53±0,453 ± 0.4 00 0,000050.00005 8000080,000 71±0,571 ± 0.5 00 0.2% NaCl0.2% NaCl 0,000050.00005 8000080,000 51±0,351 ± 0.3 00 Пример 4Example 4 22 33 4four 55 66 500:1500: 1 0.2 мМ Трис-HCl буфер или0.2 mM Tris-HCl buffer or 0,0050.005 4000040,000 54±0,354 ± 0.3 00 0,00050,0005 4000040,000 45±0,445 ± 0.4 00 0,000050.00005 4000040,000 27±0,327 ± 0.3 00 0,0000050.000005 4000040,000 15±0,615 ± 0.6 00         0,000050.00005 50005000 25±0,625 ± 0.6 00 0,000050.00005 8000080,000 28±0,828 ± 0.8 00 0.0016% NaCl0.0016% NaCl 0,000050.00005 8000080,000 26±0,526 ± 0.5 00 Пример 5Example 5 22 33 4four 55 66 1:5001: 500 25 мМ Трис-HCl буфер или25 mM Tris-HCl buffer or 0,0050.005 4000040,000 68±0,868 ± 0.8 00 0,00050,0005 4000040,000 57±0,557 ± 0.5 00 0,000050.00005 4000040,000 34±0,134 ± 0.1 00 0,0000050.000005 4000040,000 49±0,249 ± 0.2 00         0,000050.00005 50005000 56±0,2456 ± 0.24 00   0,000050.00005 8000080,000 72±0,772 ± 0.7 00   0.2%0.2% 0,000050.00005 8000080,000 53±0,253 ± 0.2 00   NaClNaCl        

Источники информацииInformation sources

1. Инструкция к применению «Бетадина».1. Instructions for the use of Betadine.

2. Material Safety Data Sheet / 14-July-2005 // Purdue Products L.P.2. Material Safety Data Sheet / 14-July-2005 // Purdue Products L.P.

3. PVP-iodine (Povidone iodine antiseptic agent) / International speciality product, 2004.3. PVP-iodine (Povidone iodine antiseptic agent) / International specialty product, 2004.

4. Лещинская И.Б., Шарипова Ф.Р., Филимонова M.H., Штенц Э., Рокштро А., Клуге З. Ингибитор РНК-геномных бактериофагов. / Патент 1781295 Al, SU, С12N 9/14.4. Leshchinskaya IB, Sharipova FR, Filimonova M.H., Stents E., Rokshtro A., Kluge Z. Inhibitor of RNA genomic bacteriophages. / Patent 1781295 Al, SU, C12N 9/14.

5. Детиненко Л.Д., Клименко В.П., Подгорный В.Ф., Аликин Ю.С., Масычева В.И., Гробов О.Ф., Батуев Ю.М. /Патент РФ №2038776.5. Detinenko L. D., Klimenko V. P., Podgorny V. F., Alikin Yu.S., Masycheva V. I., Grobov O. F., Batuev Yu.M. / RF patent No. 2038776.

6. Ball Т.К., Saurugger P.N., Benedik M.J. The extracellular nuclease gene of Serratia marcescens and its secretion from Escherichia coli. // Gene. - 1987. - V.57. - P.183-192.6. Ball T.K., Saurugger P.N., Benedik M.J. The extracellular nuclease gene of Serratia marcescens and its secretion from Escherichia coli. // Gene. - 1987. - V.57. - P.183-192.

7. Филимонова M.H., Ершова E.В., Сафин Ю.И., Тойменцева А.А., Шабаева Ю.Д., Сусарова А.Н., Валеев А.Р., Угрюмова В.С, Равилов А.З., Каримуллина И.Г., Фаткуллова А.А., Шишко А.А., Каримов М.З. Антимикробный препарат. / Патент РФ №2337139.7. Filimonova MH, Ershova E.V., Safin Yu.I., Toymentseva A.A., Shabaeva Yu.D., Susarova A.N., Valeev A.R., Ugryumova V.S., Ravilov A.Z. ., Karimullina I.G., Fatkullova A.A., Shishko A.A., Karimov M.Z. Antimicrobial drug. / RF patent No. 2337139.

Claims (1)

Антивирусный комбинированный препарат контактного действия на основе средства «Бетадин», представляющий собой смесь препарата «Бетадин» с раствором бактериальной эндонуклеазы - продукта гена nucA (синоним nuc) в любом соотношении, при этом содержание повидон-йода в разбавленном средстве «Бетадин» составляет 0,005-0,000005%, а рН раствора бактериальной эндонуклеазы в буферном или солевом растворе, содержащем катионы магния, составляет 7-9. An antiviral combined drug of contact action based on Betadine, which is a mixture of Betadine with a solution of bacterial endonuclease - the nucA gene product (synonym for nuc) in any ratio, while the content of povidone iodine in the diluted Betadine is 0.005- 0.000005%, and the pH of the solution of bacterial endonuclease in a buffer or saline solution containing magnesium cations is 7-9.