RU2417056C1

RU2417056C1 - Способ диагностики злокачественного процесса в организме человека

Info

Publication number: RU2417056C1
Application number: RU2009133368/15A
Authority: RU
Inventors: Виктор Владимирович Кешелава (RU); Виктор Владимирович Кешелава; Галина Петровна Снигирева (RU); Галина Петровна Снигирева; Владимир Константинович Сологуб (RU); Владимир Константинович Сологуб
Original assignee: Виктор Владимирович Кешелава
Priority date: 2009-09-07
Filing date: 2009-09-07
Publication date: 2011-04-27

Abstract

Изобретение относится к области медицины, а именно к диагностике злокачественных процессов в организме человека. Способ диагностики злокачественного процесса в организме человека заключается в том, что берут живую ткань пациента, измельчают, перемешивают с физиологическим раствором до состояния суспензии, выдерживают и перемешивают при определенных условиях, затем центрифугируют, отбирают супернатант и иммунохемилюминесцентным методом определяют онкомаркеры. Вышеуказанный способ обладает простой и высокой степенью выявления злокачественных процессов в организме человека как на ранних стадиях заболевания, так и на более поздних. 1 табл.

Description

Изобретение относится к области медицины, а именно к диагностике злокачественных процессов в организме человека. Онкологические заболевания - одна из самых частых причин смерти, причем нередко в молодом возрасте. Успешное лечение возможно только на ранних стадиях, для чего необходимо их раннее выявление. Определение маркеров опухолей позволяет успешно предупреждать и лечить данную тяжелую патологию. Онкомаркеры представляют собой специфические вещества, которые образуются в результате жизнедеятельности раковых (а иногда и нормальных) клеток и обычно обнаруживаются в крови и/или моче у онкологических больных. Они чрезвычайно многообразны по своей структуре, хотя в большинстве случаев являются белками или их производными. Некоторые из них обладают высокой специфичностью, т.е. характерны для одного вида опухоли, но вместе с тем могут обнаруживаться при других формах рака. Ведется целенаправленный поиск специфичных и дешевых онкомаркеров. Новым онкомаркерам стали присуждать нумерованные названия, например, СА 19-9 для рака прямой кишки и поджелудочной железы, СА 15-3 - для рака молочной железы и СА 125 - для рака яичников. Множество других отрытых маркеров для диагностики этих типов рака не получили дальнейшего изучения, поскольку они не показали своего преимущества перед вышеназванными. Но, к сожалению, даже специфичность и чувствительность признанных онкомаркеров оставляет желать лучшего. Во-первых, почти у каждого человека можно обнаружить в крови небольшое количество онкомаркеров, что затрудняет диагностику на ранней стадии развития опухоли. Значительное повышение уровня онкомаркера нередко наблюдается на более поздних стадиях, когда опухоль уже достаточно развита. Во-вторых, даже при достаточно высоком уровне онкомаркеров в крови многие из них являются неспецифичными: СЕА, изначально открытый как маркер рака толстой кишки, может быть повышен у пациентов с раком легких и молочных желез, а высокий уровень СА 125 встречается у женщин с гинекологическими заболеваниями неопухолевой природы. Несмотря на то, что онкомаркеры разрабатывались именно для ранней (еще на бессимптомной стадии) диагностики рака, на практике только простато-специфический антиген (PSA) соответствует своему предназначению. Во всех остальных случаях достоверный диагноз рака устанавливается только по результатам изучения под микроскопом биоптата (кусочка ткани) опухоли. Основное применение онкомаркеров в клинической диагностике - мониторинг течения заболевания и эффективности проводимого лечения, получение прогностической информации. Одна из задач, решаемых при использовании онкомаркеров - это возможность, в комбинации с другими диагностическими методами, ранней дифференциальной диагностики опухоли и контроль за эффективностью лечения. Динамика повышения уровня опухолевого маркера обычно позволяет делать заключение о наличии и природе развития заболевания и метастазировании и представляет больший интерес, чем единичное значение уровня, взятое само по себе. При регулярном наблюдении за уровнем маркеров, информативных для опухоли конкретной локализации, можно обнаружить метастазы за 4-6 месяцев до их клинического выявления. В процессе лечения или после операции отсутствие снижения концентрации опухолевых маркеров означает неэффективность выбранного способа лечения. К сожалению, до сих пор не охарактеризован ни один опухолевый маркер, обладающий 100% специфичностью по отношению к какому-либо органу.

Наиболее близким к заявляемому является способ морфологической диагностики злокачественных процессов, который заключается в извлечении образца ткани пациента, сохранении ткани в фиксированном состоянии с помощью фиксаторов, обезвоживании и дальнейшей заливки парафином. После заливки парафином и затвердевания образца делают препарат с помощью микротома. Затем срезы с парафинового образца помещают на предметное стекло, удаляют парафин, производят окрашивание и накрывают покровным стеклом. Приготовленный препарат помещают под микроскоп для определения ультраструктуры клеток и их компонентов и диагностики злокачественных процессов (Елисеев В.Г. и др. 1972 г.).

Недостатком известного способа является сложность процесса приготовления диагностического препарата, а также большая вероятность получения недостоверного результата, поскольку при диагностике исследуется не весь объем ткани, извлеченной из органа пациента, а только срезы, что затрудняет диагностику на ранних стадиях развития опухоли.

Наиболее близким к заявляемому является устройство диагностики злокачественных процессов, которое содержит последовательно соединенные блок фиксации, блок обезвоживания, термостат, микротом, блок окрашивания, микроскоп (Елисеев В.Г. и др. 1972 г.).

Недостатком известного устройства является сложность процесса приготовления диагностического препарата, а также ручной труд на некоторых его этапах, что снижает качество получаемого препарата и достоверность диагностики злокачественных процессов в организме человека.

Техническим результатом, который достигается в заявляемом способе диагностики злокачественного процесса, является простота и высокая степень вероятности выявления злокачественных процессов в организме человека как на ранних стадиях заболевания, так и на более поздних. Это достигается за счет того, что по уровню онкомаркера можно судить о наличии отклонений не только в области, из которой был взят образец ткани, но и об обширности распространения онкопроцесса.

Технический результат достигается тем, что в способе диагностики злокачественного процесса в организме человека берут живую ткань пациента, измельчают, перемешивают с 2 мл физиологического раствора до состояния суспензии, затем выдерживают 5 минут при температуре 20°С, после чего перемешивают и опять выдерживают 5 минут при температуре 20°С, при этом этапы выдерживания и перемешивания суспензии повторяют 3 раза, затем центрифугируют при 10000 об/мин в течение 2 мин, отбирают супернатант и иммунохемилюминесцентным методом определяют онкомаркеры.

Способ реализуется следующим образом.

Образец ткани пациента помещают в пробирку и измельчают с помощью стерильного наконечника или специального пестика. К измельченной ткани добавляют 2 мл физиологического раствора и перемешивают на вортексе до получения суспензии. Затем пробирку помещают в термостат на 20°С на 5 минут. Вынимают пробирку из холодильника, перемешивают на вортексе и опять помещают в термостат. Процедуры охлаждения, перемешивания и снова охлаждения повторяют 3 раза. Затем пробирку с тканью в физиологическом растворе центрифугируют при 10000 об/мин в течение 2 минут. В чистую пробирку отбирают супернатант, в котором проводят определение онкомаркера с помощью стандартного иммунохемилюминесцентного метода. В таблице приведены данные уровней онкомаркера при диагностики по крови и по заявляемому способу.

Уровень маркера в крови и в опухолевой ткани у онкологических больных в зависимости от стадии заболевания
Больная № ист./болезни	Диагноз заболевания	Уровень маркера в крови	Уровень маркера в опухолевой ткани
Б-ная А. №23	Рак молочной железы T1NoMo	СА15-3: 0.10 Е/мл	СА15-3: 73.82 Е/мл
Б-ная Р. №43	Рак молочной железы T1N1Mo	СА15-3: 6.10 Е/мл	СА15-3: 123.8 Е/мл
Б-ная К. №48	Рак молочной железы T3N2M1	СА15-3: 46.1 Е/мл	СА15-3: >200 Е/мл
Б-нойА. №13	Рак желудка T1NoMo	РЭА: 0.74 нг/мл	РЭА: 35.7 нг/мл
Б-нойЕ. №63	Рак желудка T2N1Mo	РЭА: 3.74 нг/мл	РЭА: 43.74 нг/мл
Б-ная К. №73	Рак желудка T3N1M1	РЭА: 23.74 нг/мл	РЭА: 146.74 нг/мл
Б-ная К. №48	Рак матки T3N1M1	РЭА: 23.74 нг/мл	РЭА: 223.84 нг/мл
Б-ная К. №48	Рак яичников T1NoMo	СА125: 2.0 Е/мл	СА 125: 56.10 Е/мл
Б-ная К. №48	Рак яичников T3N2M1	СА 125: 196.10 Е/мл	СА 125: >200 Е/мл

Нормальное содержание в сыворотке крови: СА15-3 и СА125 - менее 30 Е/мл; РЭА - 10 нг/мл.

Из таблицы видно, что диагностика заболевания по уровню онкомаркера в крови имеет очень низкий процент выявления заболеваний (фактически на стадии наличия появления метастазов).

Заявляемый же способ позволяет выявить заболевания на более ранних стадиях, при которых лечение бывает более эффективным и в зависимости от уровня маркера корригировать стадию заболевания.

Заявляемый способ диагностики злокачественного процесса в организме человека является высокотехнологичным, простым диагностическим тестом, что позволяет с высокой степенью достоверности выявлять злокачественные процессы в организме человека, как на ранних, так и на более поздних стадиях заболевания и корригировать лечение.

Claims

Способ диагностики злокачественного процесса в организме человека, заключающийся в том, что берут живую ткань пациента, измельчают, перемешивают в 2 мл физиологического раствора до состояния суспензии, затем выдерживают 5 мин при температуре 20°С, после чего перемешивают и опять выдерживают 5 мин при температуре 20°С, при этом этапы выдерживания и перемешивания повторяют 3 раза, затем центрифугируют при 10000 об/мин в течение 2 мин, отбирают супернатант и иммунохемилюминесцентным методом определение онкомаркера.