RU2399667C1 - Способ получения плюрипотентных клеток - Google Patents
Способ получения плюрипотентных клеток Download PDFInfo
- Publication number
- RU2399667C1 RU2399667C1 RU2009113457/13A RU2009113457A RU2399667C1 RU 2399667 C1 RU2399667 C1 RU 2399667C1 RU 2009113457/13 A RU2009113457/13 A RU 2009113457/13A RU 2009113457 A RU2009113457 A RU 2009113457A RU 2399667 C1 RU2399667 C1 RU 2399667C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- cells
- cell
- rna
- pluripotent
- vitro
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 17
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims abstract description 11
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 86
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 8
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 8
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 8
- 230000007704 transition Effects 0.000 claims description 6
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims description 6
- 210000001082 somatic cell Anatomy 0.000 claims description 4
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 claims description 3
- 238000003151 transfection method Methods 0.000 claims description 2
- 230000008672 reprogramming Effects 0.000 abstract description 13
- 238000001890 transfection Methods 0.000 abstract description 11
- 208000005623 Carcinogenesis Diseases 0.000 abstract description 6
- 230000036952 cancer formation Effects 0.000 abstract description 6
- 231100000504 carcinogenesis Toxicity 0.000 abstract description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 abstract description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 4
- 230000003169 placental effect Effects 0.000 abstract description 2
- 230000000392 somatic effect Effects 0.000 abstract description 2
- 230000009028 cell transition Effects 0.000 abstract 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract 1
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 25
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 15
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 9
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 9
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 8
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 8
- 210000001671 embryonic stem cell Anatomy 0.000 description 8
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 7
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 7
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 7
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 7
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 7
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 7
- 210000002304 esc Anatomy 0.000 description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 6
- 102100035423 POU domain, class 5, transcription factor 1 Human genes 0.000 description 5
- 101100247004 Rattus norvegicus Qsox1 gene Proteins 0.000 description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 5
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 5
- 210000003954 umbilical cord Anatomy 0.000 description 5
- 108700021430 Kruppel-Like Factor 4 Proteins 0.000 description 4
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 4
- 230000005868 ontogenesis Effects 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 4
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 3
- 101710135898 Myc proto-oncogene protein Proteins 0.000 description 3
- 101710126211 POU domain, class 5, transcription factor 1 Proteins 0.000 description 3
- 101710150448 Transcriptional regulator Myc Proteins 0.000 description 3
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 3
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 3
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 210000002242 embryoid body Anatomy 0.000 description 3
- 210000003725 endotheliocyte Anatomy 0.000 description 3
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 3
- 210000002510 keratinocyte Anatomy 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 3
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 3
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 2
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 2
- 108700014808 Homeobox Protein Nkx-2.2 Proteins 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 101001094700 Homo sapiens POU domain, class 5, transcription factor 1 Proteins 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 102100038895 Myc proto-oncogene protein Human genes 0.000 description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 230000006819 RNA synthesis Effects 0.000 description 2
- 101150086694 SLC22A3 gene Proteins 0.000 description 2
- 206010043276 Teratoma Diseases 0.000 description 2
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 2
- 210000004413 cardiac myocyte Anatomy 0.000 description 2
- 210000003855 cell nucleus Anatomy 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 230000013020 embryo development Effects 0.000 description 2
- 210000003038 endothelium Anatomy 0.000 description 2
- 238000012239 gene modification Methods 0.000 description 2
- 230000005017 genetic modification Effects 0.000 description 2
- 235000013617 genetically modified food Nutrition 0.000 description 2
- 210000001654 germ layer Anatomy 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 description 2
- JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N hydrocortisone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 2
- -1 liposomes Chemical class 0.000 description 2
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 2
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 2
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 239000012096 transfection reagent Substances 0.000 description 2
- 230000005740 tumor formation Effects 0.000 description 2
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 230000006820 DNA synthesis Effects 0.000 description 1
- 102100036912 Desmin Human genes 0.000 description 1
- 108010044052 Desmin Proteins 0.000 description 1
- 102000018233 Fibroblast Growth Factor Human genes 0.000 description 1
- 108050007372 Fibroblast Growth Factor Proteins 0.000 description 1
- 108090000379 Fibroblast growth factor 2 Proteins 0.000 description 1
- 102100024785 Fibroblast growth factor 2 Human genes 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 102100029087 Hepatocyte nuclear factor 6 Human genes 0.000 description 1
- 102100028098 Homeobox protein Nkx-6.1 Human genes 0.000 description 1
- 101000988619 Homo sapiens Hepatocyte nuclear factor 6 Proteins 0.000 description 1
- 101000578254 Homo sapiens Homeobox protein Nkx-6.1 Proteins 0.000 description 1
- 101000603702 Homo sapiens Neurogenin-3 Proteins 0.000 description 1
- 101000613495 Homo sapiens Paired box protein Pax-4 Proteins 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 108091092195 Intron Proteins 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 101100510267 Mus musculus Klf4 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100460498 Mus musculus Nkx2-2 gene Proteins 0.000 description 1
- 206010028400 Mutagenic effect Diseases 0.000 description 1
- 102100038553 Neurogenin-3 Human genes 0.000 description 1
- 101150114527 Nkx2-5 gene Proteins 0.000 description 1
- 102000043276 Oncogene Human genes 0.000 description 1
- 108700020796 Oncogene Proteins 0.000 description 1
- 102100040909 Paired box protein Pax-4 Human genes 0.000 description 1
- 102100041030 Pancreas/duodenum homeobox protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 101150075928 Pax4 gene Proteins 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 206010063493 Premature ageing Diseases 0.000 description 1
- 208000032038 Premature aging Diseases 0.000 description 1
- 101710183548 Pyridoxal 5'-phosphate synthase subunit PdxS Proteins 0.000 description 1
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 1
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 description 1
- 108020005202 Viral DNA Proteins 0.000 description 1
- 101100460507 Xenopus laevis nkx-2.5 gene Proteins 0.000 description 1
- 101001029301 Xenopus tropicalis Forkhead box protein D3 Proteins 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 230000035508 accumulation Effects 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 1
- 229920006318 anionic polymer Chemical class 0.000 description 1
- 210000000227 basophil cell of anterior lobe of hypophysis Anatomy 0.000 description 1
- 210000002459 blastocyst Anatomy 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical class 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000022131 cell cycle Effects 0.000 description 1
- 230000011712 cell development Effects 0.000 description 1
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 230000005757 colony formation Effects 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 239000000412 dendrimer Substances 0.000 description 1
- 229920000736 dendritic polymer Polymers 0.000 description 1
- 210000005045 desmin Anatomy 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 210000003981 ectoderm Anatomy 0.000 description 1
- 230000005684 electric field Effects 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 210000001900 endoderm Anatomy 0.000 description 1
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 1
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 210000004700 fetal blood Anatomy 0.000 description 1
- 229940126864 fibroblast growth factor Drugs 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 238000012252 genetic analysis Methods 0.000 description 1
- 230000002518 glial effect Effects 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000890 hydrocortisone Drugs 0.000 description 1
- 238000002991 immunohistochemical analysis Methods 0.000 description 1
- 230000002055 immunohistochemical effect Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 210000002490 intestinal epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 108010082117 matrigel Proteins 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000013028 medium composition Substances 0.000 description 1
- 210000002901 mesenchymal stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003716 mesoderm Anatomy 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 210000000663 muscle cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003505 mutagenic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000243 mutagenic effect Toxicity 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 210000004498 neuroglial cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 230000007420 reactivation Effects 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 229920002477 rna polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 210000002955 secretory cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000001626 skin fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000002123 temporal effect Effects 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 230000025366 tissue development Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0696—Artificially induced pluripotent stem cells, e.g. iPS
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/10—Growth factors
- C12N2501/105—Insulin-like growth factors [IGF]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/10—Growth factors
- C12N2501/11—Epidermal growth factor [EGF]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/10—Growth factors
- C12N2501/115—Basic fibroblast growth factor (bFGF, FGF-2)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/10—Growth factors
- C12N2501/165—Vascular endothelial growth factor [VEGF]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/30—Hormones
- C12N2501/38—Hormones with nuclear receptors
- C12N2501/39—Steroid hormones
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/60—Transcription factors
- C12N2501/602—Sox-2
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/60—Transcription factors
- C12N2501/603—Oct-3/4
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/60—Transcription factors
- C12N2501/604—Klf-4
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2506/00—Differentiation of animal cells from one lineage to another; Differentiation of pluripotent cells
- C12N2506/02—Differentiation of animal cells from one lineage to another; Differentiation of pluripotent cells from embryonic cells
- C12N2506/025—Differentiation of animal cells from one lineage to another; Differentiation of pluripotent cells from embryonic cells from extra-embryonic cells, e.g. trophoblast, placenta
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2510/00—Genetically modified cells
Abstract
Изобретение относится к биотехнологии, а именно к получению плюрипотентных клеток, и может быть использовано для получения всех типов тканей млекопитающих. В клетки пуповинно-плацентарного комплекса вводят очищенную РНК, синтезированную in vitro, используя невирусные методы трансфекции. В составе РНК имеется по меньшей мере одна последовательность, обеспечивающая переход клеток к плюрипотентному состоянию. Способ позволяет увеличить эффективность получения селектированных соматических плюрипотентных клеток до значения, превышающего 0,001%, при этом снижается вероятность возникновения онкогенеза и других негативных последствий репрограммирования клетки, а также исключается инвазивность на стадии получения клеточного материала. 10 ил.
Description
Изобретение относится к биотехнологии, а именно к получению плюрипотентных клеток из клеток, выделенных из пуповинно-плацентарного комплекса млекопитающего. Полученные в результате «репрограммирования» плюрипотентные клетки могут найти широкое применение в медицинской практике и в изучении механизмов «репрограммирования» и «трансдифференцировки».
В 2006 г. в лаборатории Шинья Яманаки (Киото, Япония) в терминально дифференцированные клетки мыши (фибробласты) с помощью ретровирусов были введены гены четырех транскрипционных факторов (1). Через 16 дней исследователи обнаружили, что фибробласты меняют свою морфологию, меняется и поведение клеток в культуре. В результате проведенного отбора остались клетки, которые по своим свойствам и характеристикам напоминали ЭСК мыши. Они были способны дифференцироваться в клетки взрослого организма, а также колонизировать ткани животных после их введения в бластоцисту. По своему внешнему виду, свойствам и генетическому портрету они были близки, но не идентичны ЭСК, полученным естественным путем, поэтому они получили название iPS (induced pluripotency stem) стволовые клетки с индуцированной плюрипотентностью. Из 24 генов-кандидатов наилучшие результаты дала комбинация генов Oct3/4, Sox2, c-Myc и Klf4. Гены Oct3/4 и Sox2 кодируют транскрипционные факторы, которые функционируют на ранних стадиях эмбриогенеза, а в клетках взрослого организма они не работают. Ген c-Myc тоже кодирует транскрипционный фактор, но в отличие от двух предыдущих он не является специфичным, а участвует в контроле клеточного цикла и деления любой клетки и является протоонкогеном. Последний ген Klf4 также не имеет определенной временной или тканевой специфичности и кодирует транскрипционный фактор, может играть как роль активатора, так и репрессора транскрипции, однако функции его известны чрезвычайно мало. Если первые два гена являются весьма специфичными для ранних стадий эмбриогенеза, то два последних играют большую роль в процессах образования опухолей.
Использование протоонкогена c-Myc привело к повышенной частоте опухолеобразования у полученных животных, а эффективность процедуры получения изначальных клеток была очень низка.
В настоящее время уже получены iPS клетки из десятка специализированных тканей организма, в том числе и человека. Кроме эмбриональных и кожных фибробластов, в iPS были превращены нейрональные предшественники, эпителиальные клетки кишечника, гематопоэтические, мезенхимальные стволовые клетки, мышечные, кератиноциты, гепатоциты, герминальные и другие (2).
Несмотря на воспроизведение сходных экспериментов в различных лабораториях, наиболее работоспособной оказывается генетическая система первооткрывателя (1), все остальные не столь эффективны.
Сильное мутагенное воздействие (вирусы + гены транскрипционных факторов + онкогены), да еще отбор на среде для культивирования ЭСК приводит к тому, что появляются единичные клетки, которые преодолели процесс селекции. В исходных работах эффективность образования iPS составляла сотые доли процента. Скорее всего, именно по этой причине существует большой разброс, наблюдаемый для «репрограммированных» клонов. На самом деле эти рассуждения говорят в пользу того, что и во взрослом организме могут потенциально существовать клетки, которые ближе по своим свойствам к плюрипотентным, чем остальное большинство.
К недостаткам всех известных методов репрограммирования соматических клеток можно отнести следующее.
1. Введение в клетку гена в составе разнообразных векторов, особенно вирусных, приводит к трансгенному клеточному материалу, в котором гены и векторы, их содержащие, интегрируют в разные места геномы, тем самым модифицируя организм, что может привести к нежелательным последствия в будущем, в том числе и онкогенезу. Кроме онкогенеза за счет встраивания вирусной ДНК в геном существует значительная опасность реактивации трансгенов (генов, введенных в составе вирусов) в процессе жизнедеятельности клеток, их последующей дифференцировке. Это приведет к тому, что в отдельно взятой клетке опять может произойти репрограммирование, она может приобрести свойства плюрипотентности. При этом, находясь в окружении уже дифференцированных клеток организма, эти случайно репрограммированные клетки могут дать начало другим тканям, что приведет к появлению хористий и гамартий. Такое неправильное развитие ткани в конечном итоге опять может привести к возникновению опухоли. Генетическая модификация с помощью ДНК имеет также ряд недостатков в плане эффективности производства кодируемых ДНК белков. Во-первых, с молекулы ДНК должна быть синтезирована РНК. Синтез РНК происходит в ядре, поэтому из цитоплазмы молекула ДНК должна проникнуть в ядро. Большинство систем доставки ДНК, исключая вирусную, доставляют ДНК только в цитоплазму, откуда она должна случайным образом проникнуть в ядро. При этом количество молекул, которое проникло в ядро, неизвестно, не является стандартным, а разброс может привести к негативным последствиям в случае практического использования. Во-вторых, для синтеза РНК в клетке необходимо наличие промотора (последовательности, обеспечивающей посадку транскрипционных факторов клетки). Разные типы клеток имеют различный набор транскрипционных факторов, поэтому трудно подобрать промоторную последовательность, которая будет обеспечивать стандартную экспрессию с введенной конструкции в клеточном ядре. Например, промотор EF1 альфа не работает в фибробластах. Наиболее универсальными промоторными последовательностями, которые работают в большинстве типов клеток, но с разной эффективностью, являются вирусные промоторы, такие как CMV, RSV, SV40 и другие. При этом не обеспечивается стандартность работы в различных типах клеток и вводится ДНК фрагмент вирусного генома, что представляет собой определенную опасность в связи с возможным онкогенезом в случае интеграции промоторной последовательности в геном клетки. В-третьих, синтезированная в клеточном ядре РНК должна мигрировать в цитоплазму. При эндогенном синтезе РНК с геномной последовательностью, молекулы несут интроны и другие последовательности, обеспечивающие стабильность РНК и ее направленный транспорт в цитоплазму. В случае использования трансгена в большинстве случаев РНК лишены этих последовательностей, поэтому эффективность транспорта РНК из ядра в цитоплазму низкая, а незащищенные последовательности РНК подвергаются гидролизу РНКазами. Это приводит к существенному снижению эффективности и отсутствию стандартизации синтеза белкового продукта в цитоплазме.
2. В процессе индивидуального развития организма (онтогенеза) клетки проходят путь от состояния тотипотентности (зигота), через плюрипотентность (внутренняя клеточная масса, эмбриональные стволовые клетки in vitro), к терминальной дифференцировке (специализированные ткани). Специализированные ткани оргназма и региональные стволовые клетки, поддерживающие регенерацию этих тканей, не существуют бесконечно долго. Происходит процесс старения, который сопровождается смертью организма. Процесс старения организма связывают с целом рядом внутриклеточных событий, к основным относится накопление клетками биологического «мусора» (неразлагаемые белки, липиды и др) и генетического «мусора» (мутации, накопившиеся в клетках в процессе онтогенеза). Таким образом, клетки взрослого организма в процессе онтогенеза накапливают те или иные необратимые изменения, которые выражаются в процессе старения и приводят к смерти организма. Изменение генетической программы клетки взрослого организма возможно с использованием ряда методов, как репрограммирование с помощью переноса ядра (Вильмут), генетическое репрограммирование с использованием генов (Weintraub, Yamanaka). Однако в этих случаях происходит репрограммирование генома и клетки, уже накопивших необратимые изменения, поэтому последующее использование такого материала для целей терапии может привести к негативным последствиям в виде преждевременного старения, смерти или в лучшем случае развитию опухоли. Более того, клеточный материал млекопитающих и человека для репрограммирования не всегда бывает доступен, а процедура его взятия является инвазивной.
В результате проведенных исследований нами установлено, что плюрипотентные клетки могут быть эффективно получены из клеток пуповинно-плацентарного комплекса путем введения в них РНК, содержащих в своем составе последовательности, обеспечивающие переход клеток к плюрипотентному состоянию.
Предлагаемый нами метод репрограммирования соматических клеток основан на введении в клетку РНК, полученной в системе транскрипции in vitro, т.е. вне клетки. При этом используются безопасные прокариотические промоторные последовательности, например, SP6, Т7, Т3 и другие и соответствующие им полимеразы SP6, Т7, Т3. При этом синтезированная in vitro РНК перед введением в клетку очищается современными методами ионнобменной хроматографии от чужеродных белков и чужеродной ДНК. Получаемые in vitro количества РНК могут измеряться милиграммами и даже граммами, а система in vitro транскрипции может быть стандартизована. В этом случае можно с точность до молекулы рассчитать какое количество РНК, кодирующей тот или иной белковый продукт, может проникнуть в клетку млекопитающих in vitro или in vivo. Для доставки РНК в клетку могут быть использованы такие методы, как химическая трансфекция с использованием химических веществ, например дендример, биологическая трансфекция с использованием липидов и белков, например липосомы, электромеханическая трансфекция, например электорпорация. Также РНК можно вводить в составе бактерий, катионных, анионных полимеров, липосомальных комплексов, под действием электрического поля, инертных частиц или других способов, пригодных для введения нуклеиновых кислот в клетку. При этом РНК попадает в цитоплазму клетки, минуя стадию выхода из ядра и разрушения. Таким образом, с нее в цитоплазме сразу может начаться синтез соответствующих белков. Количество РНК, с которой будет происходить синтез, может быть при этом четко определено. Среднее время полураспада молекулы РНК в клетке составляет несколько часов (3-6), а вводимая молекула лишена последовательностей, с которых может произойти синтез ДНК. Таким образом, при введении РНК не происходит генетической модификации клетки, не изменяется клеточный геном и в клетку не попадают генетические элементы вирусов, которые могут привести к онкогенезу. Более того, не требуется дополнительного времени для попадания молекул в ядро, на синтез РНК и ее транспорт обратно в цитоплазму, а количество вводимой РНК может быть стандартизовано.
Также основным отличием от известных способов получения плюрипотентных клеток является то, что использованы клетки пуповинно-плацентарного комплекса млекопитающего, в которые вводят известные последовательности, обеспечивающие переход клеток к плюрипотентному состоянию, в составе РНК.
Во время рождения млекопитающего (человека) происходит отделение пуповинно-плацентарного комплекса, содержащего ряд клеточных популяций, например фибробласты, кератиноциты, эндотелиоциты, гемопоэтические и мезенхимальные клетки, которые могут быть изолированы, размножены и сохранены. Эти клетки являются самыми «молодыми» клетками организма, они еще не были экспонированы в окружающей среде, а получение их на этой стадии не инвазивно. Таким образом, все типы клеток, содержащиеся в пуповинно-плацентарном комплексе, являются наиболее доступными и безопасными для индивидуального репрограммирования, поскольку имеют минимально возможный набор дефектов, приобретаемых в процессе онтогенеза. Весь набор клеток, выделяемый из пуповинно-плацентарного комплекса, может быть использован для введения в них рибонуклеиновых кислот определенного состава для их перехода в плюрипотентное состояние.
В качестве последовательностей, обеспечивающих переход клеток к плюрипотентному состоянию, могут быть использованы (Reprogramming Factors), соответствующие белкам: Oct4 (POU5Fl),Sox2, HNF3b, PDX1, HNF6, ngn3, PAX4. NKX 2.2,FoxB3,HNF4a, Nkx2.5, Nkx2.2, Nkx6.1 и другие семейства Nkx, Pax4, Klf4, Ngn3, Pdxl, Mafa или другие, приводящие к желаемым изменениям свойств культуры. Они могут быть введены в клетки в составе РНК совместно или поодиночке.
Таким образом, изобретение может быть охарактеризовано следующей совокупностью существенных признаков «Способ получения плюрипотентных клеток с помощью введения в клетки млекопитающего нуклеиновых кислот, имеющих в своем составе по меньшей мере одну последовательность, обеспечивающую переход клеток к плюрипотентному состоянию, отличающийся тем, что используют соматические клетки пуповинно-плацентарного комплекса, а в качестве нуклеиновых кислот вводят очищенную РНК, синтезированную in vitro, используя невирусные методы трансфекции».
Полученные таким образом плюрипотентные клетки для дальнейшего их использования могут быть селектированы через 6-10 дней с использованием сред, поддерживающих рост эмбриональных стволовых клеток млекопитающих и человека (KnockOut ДМЕМ, заменитель сыворотки, mTeSR или другие), в отсутствии или при наличии фидерного слоя клеток. Для получения желаемого фенотипа клеток могут быть использованы среды, поддерживающие рост мышечных клеток, например кардиомиоцитов, секреторных клеток, например инсулин-продуцирующих, фильтрующих клеток, например гепатоцитов, нейрональных, глиальных и других. При культивировании плюрипотентных клеток на этих средах через 10-20 дней формируются клетки желаемого фенотипа. Полученные клеточные типы могут быть размножены in vitro для увеличения количества. Определенные количества клеток могут быть использованы для дальнейшего применения с целью терапии заболеваний и скрининга субстанций.
Возможность осуществления изобретения подтверждается следующими примерами.
Пример 1.
Эндотелиоциты, выделенные из пупочного канатика человека, культивировали в определенном составе среды, как Алфа MEM, 20% FBS, non-essensial aminiacids, 10-6 M гидрокортизона, IGF 5 нг/мл, bFGF 5 нг/мл, VEGF 10 нг/мл, EGF 5 нг/мл (фиг.1). На 2-3 пассаже культивирования проводили трансфекцию культуры эндотелиоцитов, синтезированной in vitro РНК. Для доставки использован реагент Turbofect (Fermentas) в соответствии с рекомендациями производителя. Были использованы РНК, содержащие последовательности, соответствующие белкам Oct4 (POU5F1), Sox2 и Klf4. Трансфекции проводились ежедневно на протяжении 3 дней. Через 6 дней после последней трансфекции клетки переносили на другие чашки, которые покрыты 0,1% желатином (Merck) и на которых находятся инактивированные эмбриональные фибробласты мыши в качестве фидера. При этом использовали культуральную среду следующего состава: 80% KnockOut DMEM, 20% FBS (ES qualified), 1 мМ глутамина, 1% заменимых аминокислот, 50 units/мл пенициллина, 50 µg/мл стрептомицина (все от Invitrogen), 0,1 мМ β-меркаптоэтанола (Sigma).
Через 17 дней сформировались колонии, идентичные тем, которые формируются эмбриональными стволовыми клетками человека (фиг.2).
Формирование колоний происходит и при применении другой среды, поддерживающей рост эмбриональных стволовых клеток, например, mTeSR (фиг.3).
Эти клетки можно обозначить как ССПК - селектированные соматические плюрипотентные клетки.
Эффективность получения ССПК составляет более 0,001%. Полученные клеточные популяции могут быть в соответствующих условия культивированы и размножены. При этом они сохраняют нормальный кариотип, соответствующий исходным клеткам (фиг.4), но их фенотип и свойства меняются. Использование последовательностей Oct4 (POU5F1), Sox2 и Klf4 приводит к появлению маркеров SSEA4, TRA1-60, экспрессии гена Nanog, FoxD3 и других, что свойственно эмбриональным стволовым клеткам человека.
Получившиеся клетки по своему генотипу полностью соответствуют исходным, не исключая и комплекс иммуногистосовместимости 1 и 2 классов. Полученные плюрипотентные клетки могут формировать ткани всех трех зародышевых листков, что подтверждается формированием эмбриоидных телец (фиг.5А).
Эмбриоидные тела содержат клетки трех зародышевых листков, мезодерму (фиг.5В окрашивание антителами к CD 105 (зеленый) и МОС-31 (красный)), энтодерму (фиг.5В окрашивание антителами к альфа-фетапротенину), эктодерму (фиг.5С окрашивание антителами к десмину) и тератомы (фиг.5E, F гематоксилин-эозин окрашивание тератом).
Таким образом, полученные из эндотелия клетки являются плюрипотентными и из них могут быть получены все типы тканей млекопитающих (человека). Например, на фиг.6 показаны нейроглиальные клетки, полученные из ССПК. Также могут быть получены клетки другой специализации, включая эндотелий, кардиомиоциты, гепатоциты, бета-клетки, кератиноциты, нейросенсорные, пигментированные и другие типы клеток, составляющие организм млекопитающих. При этом они являются генетически идентичными организму, от которого были получены исходно эндотелиоциты.
Пример 2.
Получение клеток с индуцированной плюрипотентностью из фибробластов пупочного канатика.
Фибробласты пупочного канатика культивировались в среде DMEM/F12 15% сыворотки и 10 нг/мл основной фактор роста фибробластов (Peprotech) (фиг.7).
Для трансфекции нуклеиновыми кислотами использовался реагент Effecten (Qiagen) или XFect (Clontech), как описано производителем. Через 10 дней культивирования клетки пересевались на среду, как описано в примере 1. Через 28 дней культивирования в среде для ЭСК формировались колонии, аналогичные эмбриональным стволовым клеткам человека (фиг.8).
Проведенные иммуногистохимический и молекулярный анализы показали, что полученные колонии имеют стабильный кариотип и экспрессируют маркеры, характерные для эмбриональных стволовых клеток человека. Эффективность возникновения колоний не зависит от производителя трансфекционных реагентов.
Пример 3. Получение индуцированных плюрипотентных клеток из клеток крови пуповинно-плацентарного комплекса.
Пуповинная кровь, освобожденная от эритроцитарной массы центрифугированием, высевалась в питательную среду RPMI, 10% сыворотки. Клетки не разделялись на адгезионные или суспензионные (фиг.9). Трансфекция нуклеиновыми кислотами производилась с помощью реагентов Turbofect (Fermentas) или Effecten (Qiagen).
Через 7-10 дней после трансфекции клетки пересевались на среду для культивирования ЭСК, как описано в примере 1. Через 35 дней после пересева на Матригеле начинали формироваться колонии клеток, аналогичные по своей морфологии колониям ЭСК человека (фиг.10). Через 40 дней индивидуальные колонии можно было пересевать для последующего наращивания.
Проведенный молекулярно-генетический и иммуногистохимический анализ показал, что получившиеся культуры клеток имеют маркеры эмбриональных стволовых клеток человека, нормальный кариотип, а также формируют в культуре эмбриоидные тельца, что свидетельствует о функциональной плюрипотентности полученных клеток. При применении различных трансфекционных реагентов не отмечено разницы в эффективности формирования колоний, что свидетельствует о том, что для индукции плюрипотентного состояния может быть использован любой из липосомальных агентов трансфекции нуклеиновых кислот.
Данные примеры показывают только частный случай способа получения плюрипотентных клеток.
Предложенный способ позволяет эффективно получать плюрипотентные клетки из «молодых» клеток пуповинно-плацентарного комплекса, при этом снижается вероятность возникновения онкогенеза и других негативных последствий репрограммирования.
Источники информации
Claims (1)
- Способ получения плюрипотентных клеток с помощью введения в клетки млекопитающего нуклеиновых кислот, имеющих в своем составе по меньшей мере одну последовательность, обеспечивающую переход клеток к плюрипотентному состоянию, отличающийся тем, что используют соматические клетки пуповинно-плацентарного комплекса, а в качестве нуклеиновых кислот вводят РНК, синтезированную in vitro, используя невирусные методы трансфекции.
Priority Applications (7)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2009113457/13A RU2399667C1 (ru) | 2009-04-10 | 2009-04-10 | Способ получения плюрипотентных клеток |
| JP2012504647A JP2012523231A (ja) | 2009-04-10 | 2010-03-03 | 多能性幹細胞の製造方法 |
| CA2758299A CA2758299C (en) | 2009-04-10 | 2010-03-03 | Method of preparing pluripotent stem cells |
| PCT/RU2010/000099 WO2010117301A2 (ru) | 2009-04-10 | 2010-03-03 | Способ получения плюрипотентных клеток |
| EA201101288A EA019719B1 (ru) | 2009-04-10 | 2010-03-03 | Способ получения плюрипотентных клеток |
| EP10761921.5A EP2418273A4 (en) | 2009-04-10 | 2010-03-03 | METHOD FOR PRODUCING PLURIPOTENT CELLS |
| US13/263,451 US20120129256A1 (en) | 2009-04-10 | 2010-03-10 | Method of preparing pluripotent stem cells |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2009113457/13A RU2399667C1 (ru) | 2009-04-10 | 2009-04-10 | Способ получения плюрипотентных клеток |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2399667C1 true RU2399667C1 (ru) | 2010-09-20 |
Family
ID=42936760
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2009113457/13A RU2399667C1 (ru) | 2009-04-10 | 2009-04-10 | Способ получения плюрипотентных клеток |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20120129256A1 (ru) |
| EP (1) | EP2418273A4 (ru) |
| JP (1) | JP2012523231A (ru) |
| CA (1) | CA2758299C (ru) |
| EA (1) | EA019719B1 (ru) |
| RU (1) | RU2399667C1 (ru) |
| WO (1) | WO2010117301A2 (ru) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2458983C1 (ru) * | 2011-07-18 | 2012-08-20 | Российская Федерация, От Имени Которой Выступает Министерство Образования И Науки Российской Федерации | Способ получения индуцированных плюрипотентных стволовых клеток из фибробластов пациентов с болезнью хангингтона |
| RU2603731C2 (ru) * | 2010-10-26 | 2016-11-27 | Бак Инститьют Фор Эйдж Рисёрч | Понижающая регуляция трансктипции sine/alu ретротранспозонов для индукции или восстановления способности к пролиферации и/или плюрипотентности стволовой клетки |
| RU2614269C2 (ru) * | 2015-07-21 | 2017-03-24 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт химической физики им. Н.Н. Семёнова Российской академии наук (ИХФ РАН) | Способ введения диэлектрического микроконтейнера в клетку млекопитающего с использованием фемто-пикосекундных импульсов лазерного излучения |
| US9730959B2 (en) | 2011-12-29 | 2017-08-15 | “Nextgen” Company Limited | Biocomposite for regeneration of injured tissue and organs, a kit for making the biocomposite, a method of making the biocomposite and a method of treating injuries |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8802438B2 (en) | 2010-04-16 | 2014-08-12 | Children's Medical Center Corporation | Compositions, kits, and methods for making induced pluripotent stem cells using synthetic modified RNAs |
| US8940294B2 (en) | 2012-03-02 | 2015-01-27 | Tissuetech, Inc. | Methods of isolating and culturing stem cells |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE10335833A1 (de) * | 2003-08-05 | 2005-03-03 | Curevac Gmbh | Transfektion von Blutzellen mit mRNA zur Immunstimulation und Gentherapie |
| DE102005046490A1 (de) * | 2005-09-28 | 2007-03-29 | Johannes-Gutenberg-Universität Mainz | Modifikationen von RNA, die zu einer erhöhten Transkriptstabilität und Translationseffizienz führen |
| US20070087437A1 (en) * | 2005-10-14 | 2007-04-19 | Jifan Hu | Methods for rejuvenating cells in vitro and in vivo |
| US8278104B2 (en) * | 2005-12-13 | 2012-10-02 | Kyoto University | Induced pluripotent stem cells produced with Oct3/4, Klf4 and Sox2 |
| JP2008307007A (ja) * | 2007-06-15 | 2008-12-25 | Bayer Schering Pharma Ag | 出生後のヒト組織由来未分化幹細胞から誘導したヒト多能性幹細胞 |
| US20120282229A1 (en) * | 2007-08-01 | 2012-11-08 | Christian Kannemeier | Non-viral delivery of transcription factors that reprogram human somatic cells into a stem cell-like state |
| EP2072618A1 (en) * | 2007-12-14 | 2009-06-24 | Johannes Gutenberg-Universität Mainz | Use of RNA for reprogramming somatic cells |
| EP2192174B1 (en) * | 2008-11-21 | 2015-11-11 | Fraunhofer-Gesellschaft zur Förderung der angewandten Forschung e.V. | Reprogramming cells toward a pluripotent state |
-
2009
- 2009-04-10 RU RU2009113457/13A patent/RU2399667C1/ru not_active IP Right Cessation
-
2010
- 2010-03-03 WO PCT/RU2010/000099 patent/WO2010117301A2/ru active Application Filing
- 2010-03-03 EP EP10761921.5A patent/EP2418273A4/en not_active Withdrawn
- 2010-03-03 JP JP2012504647A patent/JP2012523231A/ja active Pending
- 2010-03-03 CA CA2758299A patent/CA2758299C/en active Active
- 2010-03-03 EA EA201101288A patent/EA019719B1/ru active IP Right Revival
- 2010-03-10 US US13/263,451 patent/US20120129256A1/en not_active Abandoned
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| KNUT WOLTJEN et al. Piggyback transposition reprograms fibroblast to induced pluropotent stem cells. Nature 458, 9 April 2009, published online 1 March 2009, p.766-770. KEISUKE KAJI et al. Virus-free induction of pluripotency and subsequent excision of reprogramming factors. Nature 458, 9 April 2009, published online 1 March 2009, p.771-775. * |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2603731C2 (ru) * | 2010-10-26 | 2016-11-27 | Бак Инститьют Фор Эйдж Рисёрч | Понижающая регуляция трансктипции sine/alu ретротранспозонов для индукции или восстановления способности к пролиферации и/или плюрипотентности стволовой клетки |
| RU2458983C1 (ru) * | 2011-07-18 | 2012-08-20 | Российская Федерация, От Имени Которой Выступает Министерство Образования И Науки Российской Федерации | Способ получения индуцированных плюрипотентных стволовых клеток из фибробластов пациентов с болезнью хангингтона |
| US9730959B2 (en) | 2011-12-29 | 2017-08-15 | “Nextgen” Company Limited | Biocomposite for regeneration of injured tissue and organs, a kit for making the biocomposite, a method of making the biocomposite and a method of treating injuries |
| RU2614269C2 (ru) * | 2015-07-21 | 2017-03-24 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт химической физики им. Н.Н. Семёнова Российской академии наук (ИХФ РАН) | Способ введения диэлектрического микроконтейнера в клетку млекопитающего с использованием фемто-пикосекундных импульсов лазерного излучения |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2010117301A3 (ru) | 2010-12-02 |
| EA019719B1 (ru) | 2014-05-30 |
| US20120129256A1 (en) | 2012-05-24 |
| JP2012523231A (ja) | 2012-10-04 |
| EP2418273A2 (en) | 2012-02-15 |
| EA201101288A1 (ru) | 2012-03-30 |
| CA2758299C (en) | 2015-09-29 |
| WO2010117301A2 (ru) | 2010-10-14 |
| CA2758299A1 (en) | 2010-10-14 |
| EP2418273A4 (en) | 2013-07-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP6937821B2 (ja) | 生体組織から単離できる多能性幹細胞 | |
| Sánchez-Danés et al. | Efficient generation of A9 midbrain dopaminergic neurons by lentiviral delivery of LMX1A in human embryonic stem cells and induced pluripotent stem cells | |
| US11261426B2 (en) | Pluripotent stem cell that can be isolated from body tissue | |
| RU2399667C1 (ru) | Способ получения плюрипотентных клеток | |
| KR20140050514A (ko) | 세포 배양 기재, 및 그것을 사용한 세포 배양 방법 및 만능 줄기 세포의 분화 유도 방법 | |
| JP2022513355A (ja) | 条件付き不死化に関する制御可能な導入遺伝子を含む人工多能性細胞 | |
| JP2022069552A (ja) | Ｒｎａでの幹細胞分化による肝細胞の誘導 | |
| JP2024045609A (ja) | ＲＮＡでの幹細胞分化による膵臓β細胞の誘導 | |
| WO2013011093A1 (en) | Novel method for generation of neural progenitor cells | |
| KR102137883B1 (ko) | 페닐부틸산나트륨을 포함하는 고효율 세포전환용 배지 첨가제 | |
| KR102137884B1 (ko) | 타우로우루소디옥시콜린산을 포함하는 고효율 세포전환용 배지 첨가제 | |
| WO2013124309A1 (en) | Direct reprogramming of somatic cells into neural stem cells | |
| KR102137885B1 (ko) | 부틸화하이드록시아니솔을 포함하는 고효율 세포전환용 배지 첨가제 | |
| WO2012071108A1 (en) | Somatic cell-derived pluripotent cells and methods of use therefor | |
| WO2015098111A1 (ja) | ｉＰＳ細胞の樹立方法および幹細胞の長期維持方法 | |
| Xu et al. | Road to future: iPSC clinical application in Parkinson’s disease treatment | |
| JP2023090959A (ja) | 幹細胞の製造方法、及び癌細胞化のリスク低減方法 | |
| JP2015123079A (ja) | ｉＰＳ細胞の樹立方法および幹細胞の長期維持方法 | |
| Palecek | Pluripotent stem cells: Sources and characterization | |
| Chung | Reprogramming of somatic cells: a tool for modelling neurodegenerative diseases | |
| Rajala | Development of human stem cell culture conditions for clinical cell therapy |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| HE4A | Change of address of a patent owner |
Effective date: 20180316 |
|
| PD4A | Correction of name of patent owner | ||
| QB4A | Licence on use of patent |
Free format text: LICENCE FORMERLY AGREED ON 20180327 Effective date: 20180327 |
|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20190411 |
|
| TK4A | Correction to the publication in the bulletin (patent) |
Free format text: CORRECTION TO CHAPTER -MM4A- IN JOURNAL 8-2020 |
|
| HE4A | Change of address of a patent owner |
Effective date: 20200609 |
|
| PC41 | Official registration of the transfer of exclusive right |
Effective date: 20220414 |