RU2357248C1 - Autointoxication severity estimation procedure - Google Patents

Abstract

FIELD: medicine.

SUBSTANCE: invention refers to medicine, namely to surgery and resuscitation, and concerns autointoxication severity estimation procedure. Substance of the method: venous blood is tested for leukocyte count by CD 45 receptor antibodies. It is followed with counting the killed cells and calculating the absolute killed cells per unit of blood volume. Autointoxication severity proceeds from the obtained results. The method is to be applied in resuscitation departments as a screening-test.

EFFECT: application of the method improves autointoxication severity estimation reliability.

2 tbl, 1 dwg, 5 ex

Description

Изобретение относится к области медицины, а именно к хирургии и реаниматологии для оценки степени тяжести эндогенной интоксикации.The invention relates to medicine, namely to surgery and intensive care for assessing the severity of endogenous intoxication.

В современном понимании синдром эндогенной интоксикации - это совокупность симптомов, характеризующихся повреждением клеток и клеточных структур, вызванных избыточным содержанием в крови токсических продуктов и биологически активных веществ [Афанасьев А.Н., Одинцова И.Н., Удут В.В. Синдромы эндогенной интоксикации и системного воспалительного ответа: общность и различия // ж. Анестезиология и реаниматология, 2007, №4. С.67-71]. Содержащиеся в крови токсические продукты и биологически активные вещества оказывают свое повреждающее действие прежде всего на клетки крови, в том числе и на лейкоциты. Поэтому по увеличению относительного и абсолютного количества апоптотических, некротических и поврежденных лейкоцитов можно судит о степени тяжести интоксикации у больных. Своевременная и объективная оценка степени тяжести синдрома эндогенной интоксикации необходима для выбора стратегии и тактики детоксикационной терапии, включающей методы экстракорпоральной гемокоррекции и оценки эффективности проводимой терапии.In the modern sense, endogenous intoxication syndrome is a set of symptoms characterized by damage to cells and cellular structures caused by excessive levels of toxic products and biologically active substances in the blood [Afanasyev AN, Odintsova IN, Udut VV Syndromes of endogenous intoxication and systemic inflammatory response: generality and differences // f. Anesthesiology and Intensive Care, 2007, No. 4. S.67-71]. The toxic products and biologically active substances contained in the blood exert their damaging effect primarily on blood cells, including leukocytes. Therefore, by increasing the relative and absolute number of apoptotic, necrotic and damaged leukocytes, one can judge the severity of intoxication in patients. Timely and objective assessment of the severity of endogenous intoxication syndrome is necessary to select a strategy and tactics of detoxification therapy, including methods of extracorporeal hemocorrection and evaluate the effectiveness of the therapy.

В настоящее время для оценки уровня интоксикации существуют различные методы, в частности, основанные на исследовании белков плазмы и клеток крови. По уровню среднемолекулярных пептидов, концентрации альбумина, С-реактивного белка в плазме крови судят о выраженности эндогенной интоксикации [Габриэлян Н.И., Дмитриева А.А., Севастьянова О.А. Средние молекулы и уровень эндогенной интоксикации у реанимационных больных // Анестезиология и реаниматология. - 1985. - №1. - С.36-38; Грызунов Ю.А. Проведение измерений параметров ЭКА и ОКА на анализаторе АКЛ-01. // В кн.: Альбумин сыворотки крови в клинической практике. - М.: Геотар, 1998. - С.104-107]. Эти методы, основанные на изучении гуморальной составляющей, имеют невысокую чувствительность и не позволяют оценить степень тяжести эндогенной интоксикации.Currently, to assess the level of intoxication, there are various methods, in particular, based on the study of plasma proteins and blood cells. By the level of average molecular peptides, the concentration of albumin, C-reactive protein in blood plasma, the severity of endogenous intoxication is judged [Gabrielyan N.I., Dmitrieva A.A., Sevastyanova O.A. Medium molecules and the level of endogenous intoxication in resuscitation patients // Anesthesiology and intensive care. - 1985. - No. 1. - S. 36-38; Gryzunov Yu.A. Measurement of ECA and OKA parameters on the AKL-01 analyzer. // In the book: Serum albumin in clinical practice. - M .: Geotar, 1998. - P.104-107]. These methods, based on the study of the humoral component, have a low sensitivity and do not allow to assess the severity of endogenous intoxication.

Известны методы оценки степени интоксикации, основанные на исследовании спектра клеток крови, в частности состава лейкоцитов периферической крови, который изменяется под действием токсических метаболитов. К таким методам относят: определение количества лейкоцитов периферической крови, подсчет процентного содержания форм лейкоцитов (лейкоцитарная формула), расчет лейкоцитарного индекса интоксикации (ЛИИ).Known methods for assessing the degree of intoxication, based on the study of the spectrum of blood cells, in particular the composition of peripheral blood leukocytes, which changes under the influence of toxic metabolites. These methods include: determining the number of peripheral blood leukocytes, calculating the percentage of leukocyte forms (leukocyte formula), calculating the leukocyte intoxication index (LII).

Наиболее близким техническим решением, принятым за прототип, является способ оценки степени интоксикации организма путем изучения и подсчета форменных элементов периферической крови, разработанный В.Н.Кидаловым и соавт. в 1997 году [RU 2082971 С1 (Кидалов В.Н. и др.), 27.06.1997].The closest technical solution adopted for the prototype is a method for assessing the degree of intoxication of the body by studying and counting the formed elements of peripheral blood, developed by V.N. Kidalov et al. in 1997 [RU 2082971 C1 (Kidalov V.N. et al.), 06/27/1997].

При этом способе проводят морфологическое исследование мазков крови больного, анализируют эритроциты и определяют индекс интоксикации (ИИ) по формуле:With this method, a morphological study of blood smears of the patient is carried out, red blood cells are analyzed and the intoxication index (II) is determined by the formula:

где Э - количество эхиноцитов, в %;where E is the number of echinocytes, in%;

П - количество пойкилоцитов, в %;P is the number of poikilocytes, in%;

Г - количество гемолизированных форм, в %;G is the number of hemolized forms, in%;

Д - количество дискоцитов, в %;D is the number of discocytes, in%;

Ст - количество стоматоцитов, в %.St - the number of stomatocytes, in%.

При значениях индекса интоксикации 0,16-0,30 полагают наличие интоксикации легкой степени, 0,31-1,0 - средней, 1,01-1,6 - тяжелой и более 1,6 - крайне тяжелой степени.When the values of the index of intoxication are 0.16-0.30, they suggest the presence of mild intoxication, 0.31-1.0 - moderate, 1.01-1.6 - severe and more than 1.6 - extremely severe.

Известный метод является субъективным, так как требует визуального подсчета и анализа клеток, трудоемким, и не позволяет проанализировать жизнеспособность форменных элементов крови.The known method is subjective, since it requires visual counting and analysis of cells, time-consuming, and does not allow to analyze the viability of blood cells.

Задачей изобретения является разработка способа оценки степени тяжести эндогенной интоксикации в зависимости от жизнеспособности лейкоцитов крови для выбора наиболее эффективной тактики лечения, а также повышения достоверности и снижения трудоемкости способа.The objective of the invention is to develop a method for assessing the severity of endogenous intoxication depending on the viability of blood leukocytes to select the most effective treatment tactics, as well as increase the reliability and reduce the complexity of the method.

Поставленная задача решается тем, что в венозной крови больного определяют количество лейкоцитов с помощью моноклональных антител к рецептору CD45, а затем в автоматическом режиме на проточном цитометре с помощью ДНК-специфического красителя 0,005% раствора 7 амино-актиномицина D (7AAD), определяют количество погибших клеток, рассчитывают абсолютное число погибших лейкоцитов (А) в единице объема крови по формуле:The problem is solved in that the number of leukocytes is determined in the patient’s venous blood using monoclonal antibodies to the CD45 receptor, and then automatically on a flow cytometer using a DNA-specific dye 0.005% solution of 7 amino-actinomycin D (7AAD), the number of dead is determined cells, calculate the absolute number of dead white blood cells (A) per unit volume of blood according to the formula:

и при значениях погибших клеток от 68 до 110 на мкл диагностируют легкую степень тяжести эндогенной интоксикации, от 111 до 400 кл/мкл - среднюю степень тяжести, от 401 до 1000 - тяжелую, а при более 1000 кл/мкл - крайне тяжелую степень тяжести эндогенной интоксикации. Проведение исследования лейкоцитов в автоматическом режиме позволяет анализировать до 10000 клеток (в 100 раз больше чем в прототипе), что снижает трудоемкость способа и повышает его достоверность. Проведенная нами математическая обработка воспроизводимости результатов исследования лейкоцитов (от 8 до 15 тыс. клеток в образце) показала, что оптимальным является подсчет 10 тыс. клеток (р<0,001).and with values of dead cells from 68 to 110 per μl, a mild degree of severity of endogenous intoxication is diagnosed, from 111 to 400 cells / μl - moderate severity, from 401 to 1000 - severe, and with more than 1000 cells / μl - extremely severe severity of endogenous intoxication. Conducting a study of white blood cells in automatic mode allows you to analyze up to 10,000 cells (100 times more than in the prototype), which reduces the complexity of the method and increases its reliability. Our mathematical processing of reproducibility of the results of the study of leukocytes (from 8 to 15 thousand cells in the sample) showed that the calculation of 10 thousand cells is optimal (p <0.001).

Способ осуществляется следующим образом. У пациента забирают кровь из вены в стандартную стерильную пробирку с антикоагулянтом (K₃EDTA, или ACD, или гепарином 5 ед. в мл) и с помощью гематологического анализаторе определяют содержание лейкоцитов в крови. Консервированный образец крови хранят в течение 30-60 минут при комнатной температуре (18-25°С). Затем проводят подготовку образца для исследования количества и жизнеспособности лейкоцитов. Для этого 100 мкл консервированной венозной крови помещают в отдельную пробирку, добавляют к ней 20 мкл 0,005% раствора 7AAD и 20 мкл моноклональных антител CD45, меченных флуорохромом FITC, осуществляют перемешивание на мешалке - вортекс. Смесь инкубируют в темноте в течение 20 минут при комнатной температуре (18-25°С). Далее осуществляют лизис эритроцитов химическим путем. К исследуемому образцу добавляют 100 мкл лизирующего раствора (OptiLyse®C), смешивают на вортексе в течение 5 с и инкубируют смесь еще 10 минут при комнатной температуре. После чего в пробирку вносят 1,0 мл фосфатного буфера (PBS: 0,01 М натрия фосфат, 0,145 М натрия хлорид, рН=7,2) и переносят полученную смесь в аппарат - проточный цитометр - для анализа. Нами были проведены исследования 10000 лейкоцитов в образце венозной крови донора (см. чертеж). Результаты исследования регистрировались в автоматическом режиме в графическом и табличном вариантах. Было определено, что количество жизнеспособных лейкоцитов (сектор Н) составило 9966 клеток (т.е. относительное количество жизнеспособных клеток составило 99,7%), количество нежизнеспособных, погибших лейкоцитов (сектор G) составило 34 клетки (т.е. относительное количество погибших лейкоцитов составило 0,34%). По данным гематологического анализа концентрация лейкоцитов в венозной крови у донора составила - 7200 кл/мкл (7,2·10%). Следовательно, абсолютное число жизнеспособных и погибших лейкоцитов в образце венозной крови донора составило 7175 кл/мкл и 25 кл/мкл, соответственно. Абсолютное содержание погибших лейкоцитов в образце венозной крови обследуемого рассчитывают по формуле:The method is as follows. Blood is taken from a patient from a vein into a standard sterile tube with an anticoagulant (K ₃ EDTA, or ACD, or heparin 5 units in ml) and the content of leukocytes in the blood is determined using a hematological analyzer. Canned blood sample is stored for 30-60 minutes at room temperature (18-25 ° C). A sample is then prepared to study the number and viability of white blood cells. For this, 100 μl of canned venous blood is placed in a separate tube, 20 μl of a 0.005% 7AAD solution and 20 μl of CD45 monoclonal antibodies labeled with FITC fluorochrome are added to it, mixing is carried out on a vortex mixer. The mixture is incubated in the dark for 20 minutes at room temperature (18-25 ° C). Then carry out the lysis of red blood cells chemically. 100 μl of lysis solution (OptiLyse®C) was added to the test sample, mixed on a vortex for 5 s and the mixture was incubated for another 10 minutes at room temperature. Then, 1.0 ml of phosphate buffer (PBS: 0.01 M sodium phosphate, 0.145 M sodium chloride, pH = 7.2) was added to the test tube and the resulting mixture was transferred to an apparatus - flow cytometer - for analysis. We conducted studies of 10,000 leukocytes in a sample of venous blood from a donor (see drawing). The results of the study were recorded automatically in graphical and tabular versions. It was determined that the number of viable white blood cells (sector H) was 9966 cells (i.e., the relative number of viable cells was 99.7%), the number of non-viable, dead white blood cells (sector G) was 34 cells (i.e., the relative number of dead white blood cell count was 0.34%). According to the hematological analysis, the concentration of leukocytes in the venous blood of the donor was 7200 cells / μl (7.2 · 10%). Therefore, the absolute number of viable and dead leukocytes in the venous blood sample of the donor was 7175 cells / μl and 25 cells / μl, respectively. The absolute content of dead leukocytes in the sample of venous blood of the subject is calculated by the formula:

Установлено, что у здоровых доноров абсолютное и относительное содержание погибших лейкоцитов в венозной крови варьирует от 16 до 67 кл/мкл (в среднем - 38,3±5,3 кл/мкл) и от 0,23 до 0,90% (в среднем 0,6±0,03%), соответственно.It was found that in healthy donors, the absolute and relative content of dead leukocytes in venous blood varies from 16 to 67 cells / μl (average 38.3 ± 5.3 cells / μl) and from 0.23 to 0.90% (in average 0.6 ± 0.03%), respectively.

Апробация предложенного способа оценки интоксикации проведена у 52 пациентов (15 женщин и 37 мужчин) в возрасте от 15 до 76 лет. Из них у 18 человек диагностирован тяжелый острый панкреатит, у 11 - медиастинит, у 4 - сепсис, развившийся на фоне сочетанной травмы, у 3 - перитонит, у 5 - изолированная травма опорно-двигательного аппарата, у 5 - диффузные заболевания печени, у 3 - дисфункциональное маточное кровотечение, 3 пациентов обследованы в 1-е сутки после плановых хирургических вмешательств. Установлено, что концентрация погибших клеток в венозной крови больных и пострадавших возрастает по сравнению с нормой (38,5±5,3 кл/мкл), варьирует от 68 до 2154 кл/мкл и, следовательно, отражает степень тяжести интоксикации.The proposed method for assessing intoxication was tested in 52 patients (15 women and 37 men) aged 15 to 76 years. Of these, 18 people were diagnosed with severe acute pancreatitis, 11 had mediastinitis, 4 had sepsis that developed on the background of a combined injury, 3 had peritonitis, 5 had an isolated injury to the musculoskeletal system, 5 had diffuse liver diseases, and 3 - dysfunctional uterine bleeding, 3 patients were examined on the 1st day after planned surgical interventions. It was found that the concentration of dead cells in the venous blood of patients and victims increases compared with the norm (38.5 ± 5.3 cells / μl), varies from 68 to 2154 cells / μl and, therefore, reflects the severity of intoxication.

Таблица 1
Содержание погибших лейкоцитов в венозной крови пациентов с эндогенной интоксикацией различной степени тяжестиTable 1
The content of dead white blood cells in the venous blood of patients with endogenous intoxication of varying severity Градация степени тяжести эндогенной интоксикацииGrade of severity of endogenous intoxication Всего пациентовTotal patients Содержание погибших лейкоцитов в венозной кровиThe content of dead leukocytes in venous blood Исход заболеванияDisease outcome кл/мклcells / μl %% Количество умершихNumber of dead Летальность, %Mortality,% ЛегкаяEasy 18eighteen 48-11048-110 0,9-1,50.9-1.5 1one 5,55.5 Средней тяжестиModerate 18eighteen 111-400111-400 1,6-2,51.6-2.5 4four 22,222.2 ТяжелаяHeavy 99 401-1000401-1000 2,6-5,02.6-5.0 4four 44,444,4 Крайне тяжелаяExtremely heavy 77 >1000> 1000 >5,0> 5.0 55 71,471,4

Полученные данные позволили нам регламентировать степень тяжести эндогенной интоксикации в зависимости от абсолютного или относительного содержания погибших лейкоцитов в венозной крови: легкая степень тяжести эндогенной интоксикации - содержание погибших клеток в венозной крови варьирует от 68 до 110 кл/мкл или 0,9-1,5%, средняя степень тяжести эндогенной интоксикации - от 111 до 400 кл/мкл или 1,6-2,5%, тяжелая степень эндогенной интоксикации - от 401 до 1000 кл/мкл или 2,6-5,0%, крайне тяжелая степень эндогенной интоксикации - более 1000 кл/мкл или более 5% (таблица 1).The obtained data allowed us to regulate the severity of endogenous intoxication depending on the absolute or relative content of dead leukocytes in venous blood: mild severity of endogenous intoxication - the content of dead cells in venous blood varies from 68 to 110 cells / μl or 0.9-1.5 %, moderate severity of endogenous intoxication - from 111 to 400 cells / μl or 1.6-2.5%, severe degree of endogenous intoxication - from 401 to 1000 cells / μl or 2.6-5.0%, extremely severe endogenous intoxication - more than 1000 cells / μl or more than 5% (that 1 person).

Особо подчеркнем, что концентрация погибших лейкоцитов коррелирует с неблагоприятным исходом заболевания, так при легкой степени интоксикации (содержание погибших лейкоцитов 68-110 кл/мкл) летальность составила 5,5%, тогда как при тяжелой (401-1000 кл/мкл) и крайне тяжелой степени интоксикации (более 1000 кл/мкл) летальность была 44,4% и 71,4%, соответственно (таблица 1).We emphasize that the concentration of dead white blood cells correlates with an unfavorable outcome of the disease, so with a slight degree of intoxication (the content of dead white blood cells is 68-110 cells / μl), mortality was 5.5%, while with severe (401-1000 cells / μl) and extremely severe intoxication (more than 1000 cells / µl) mortality was 44.4% and 71.4%, respectively (table 1).

Таблица 2
Распределение пациентов по степени тяжести интоксикации на основании содержания погибших лейкоцитов в венозной кровиtable 2
The distribution of patients by the severity of intoxication based on the content of dead leukocytes in venous blood НозологияNosology Степень тяжести интоксикацииSeverity of intoxication легкаяlight средняяaverage тяжелаяheavy Крайне тяжелаяExtremely heavy 68-110 кл/мкл68-110 cells / μl 111-400 кл/мкл111-400 cells / μl 401-1000 кл/мкл401-1000 cells / μl >1000 кл/мкл> 1000 cells / μl Тяжелый острый панкреатитSevere acute pancreatitis 1one 77 55 55 МедиастинитMediastinitis 1one 77 33   ПеритонитPeritonitis 1one   1one 1one сепсисsepsis   33   1one Изолированная травма опорно-двигательного аппаратаIsolated musculoskeletal injury 55       Цирроз печениCirrhosis of the liver 4four 1one     Дисфункциональные маточные кровотеченияDysfunctional uterine bleeding 33       1-е сутки после плановых хирургических вмешательств1st day after planned surgical interventions 33       ВСЕГОTOTAL 18eighteen 18eighteen 99 77

При этом отметим, что у больных в раннем послеоперационном периоде после плановых хирургических вмешательств, у пострадавших с изолированной травмой опорно-двигательного аппарата отмечалась легкая степень тяжести эндогенной интоксикации (таблица 2), у большинства больных с медиастинитом отмечалась интоксикация средней степени тяжести, у пациентов с тяжелым острым панкреатитом - средней и тяжелой степени, крайне тяжелая степень эндогенной интоксикации развивалась у больных, течение заболевания которых осложнилось развитием сепсиса и у пациентов с гнойно-деструктивными осложнениями тяжелого острого панкреатита.At the same time, we note that in patients in the early postoperative period after planned surgical interventions, in patients with isolated trauma of the musculoskeletal system, mild severity of endogenous intoxication was noted (table 2), in most patients with mediastinitis moderate intoxication was noted, in patients with severe acute pancreatitis - moderate and severe, an extremely severe degree of endogenous intoxication developed in patients whose disease was complicated by the development of sepsis and in patients with purulent-destructive complications of severe acute pancreatitis.

Для лучшего понимания использования способа оценки степени тяжести эндогенной интоксикации приводим следующие примеры:For a better understanding of the use of the method for assessing the severity of endogenous intoxication, we give the following examples:

1. Больная Ч., 49 л. Диагноз: Цирроз печени (HCV), Класс «В». На момент исследования крови состояние средней тяжести, ЧДД - 19 в мин, АД - 110/70 мм рт.ст., ЧСС - 78 уд./мин, температура тела - 36,6°С. В анализах крови: лейкоциты - 5,7·10⁹ кл/л, общий белок - 70 г/л, альбумин - 30,8 г/л, С-реактивный белок - 11,5 мг/л (норма 0-5,5 мг/л). Число критериев ССВР - 0. Оценка тяжести по шкале APACHE II - 2 балла, SAPS II - 6 баллов, SOFA - 2 балла, ЛИИ - 1,8 усл.ед. Содержание погибших лейкоцитов в венозной крови - 84 кл/мкл (1,47%). Легкая степень тяжести эндогенной интоксикации. Больной проводилась консервативная детоксикационная и симптоматическая терапия. Исход - выписана с улучшением.1. Patient Ch., 49 p. Diagnosis: Cirrhosis of the liver (HCV), Class "B". At the time of the blood test, the state of moderate severity, NPV - 19 per minute, blood pressure - 110/70 mm Hg, heart rate - 78 beats / min, body temperature - 36.6 ° C. In blood tests: white blood cells - 5.7 · 10 ⁹ cells / l, total protein - 70 g / l, albumin - 30.8 g / l, C-reactive protein - 11.5 mg / l (normal 0-5, 5 mg / l). The number of SSVR criteria is 0. The severity rating on the APACHE II scale is 2 points, SAPS II is 6 points, SOFA is 2 points, LII is 1.8 conventional units. The content of dead white blood cells in venous blood is 84 cells / μl (1.47%). Mild severity of endogenous intoxication. The patient underwent conservative detoxification and symptomatic therapy. Outcome - discharged with improvement.

2. Больная М., 61 г. Диагноз: Спонтанный разрыв пищевода, гнойный медиастинит, двухсторонняя пневмония, двухсторонняя эмпиема плевры, тяжелый сепсис. На момент исследования крови состояние тяжелое. ИВЛ, ЧДД - 22 в мин, Sat О₂ - 96%, АД - 227/106 мм рт.ст., ЧСС - 94 уд./мин, температура тела - 38,3°С. В анализах крови: лейкоциты - 15,2·10⁹ кл/л, Hb - 90 г/л, общий белок - 52 г/л, альбумин - 24 г/л, С-реактивный белок - 103,7 мг/л. Число критериев ССВР - 3. Оценка тяжести по шкале APACHE II - 16 баллов, SAPS II - 38 баллов, SOFA - 6 баллов. ЛИИ - 7,3 усл.ед. Содержание погибших лейкоцитов в венозной крови - 339 кл/млк (2,2%). Средняя степень тяжести эндогенной интоксикации. Больной начата комплексная терапия, включающая экстракорпоральные методы гемокоррекции. Проведено 3 процедуры плазмофильтрации и 4 процедуры постоянной веновенозной гемофильтрации. На 3 сутки абсолютное и относительное содержание погибших лейкоцитов в венозной крови имело тенденцию к увеличению - 389 кл/млк (3,3%) (средняя степень тяжести эндогенной интоксикации), ЛИИ - 7,6 усл.ед, SOFA - 5 баллов, на 7 сутки на фоне терапии отмечалось снижение степени тяжести эндогенной интоксикации: абсолютное и относительное содержание погибших лейкоцитов в венозной крови составило 104 кл/млк (1%) (легкая степень тяжести эндогенной интоксикации), С-реактивный белок - 53,6 мг/л, ЛИИ - 7,9 усл.ед. SOFA - 5 баллов. Исход - выздоровление.2. Patient M., 61 g. Diagnosis: Spontaneous rupture of the esophagus, purulent mediastinitis, bilateral pneumonia, bilateral pleural empyema, severe sepsis. At the time of the blood test, the condition is serious. Mechanical ventilation, NPV - 22 per min, Sat O ₂ - 96%, blood pressure - 227/106 mm Hg, heart rate - 94 beats / min, body temperature - 38.3 ° C. In blood tests: leukocytes - 15.2 · 10 ⁹ cells / l, Hb - 90 g / l, total protein - 52 g / l, albumin - 24 g / l, C-reactive protein - 103.7 mg / l. The number of SSVR criteria is 3. The severity rating on the APACHE II scale is 16 points, SAPS II - 38 points, SOFA - 6 points. LII - 7.3 conventional units The content of dead leukocytes in venous blood is 339 cells / ml (2.2%). The moderate severity of endogenous intoxication. The patient started complex therapy, including extracorporeal hemocorrection methods. Conducted 3 procedures for plasma filtration and 4 procedures for continuous venous hemofiltration. On the 3rd day, the absolute and relative content of dead leukocytes in venous blood tended to increase - 389 cells / ml (3.3%) (moderate severity of endogenous intoxication), LII - 7.6 srvc, SOFA - 5 points, On the 7th day of therapy, a decrease in the severity of endogenous intoxication was noted: the absolute and relative content of dead leukocytes in venous blood was 104 cells / ml (1%) (mild severity of endogenous intoxication), C-reactive protein - 53.6 mg / l, LII - 7.9 conventional units SOFA - 5 points. The outcome is recovery.

3. Больная Б. 55 лет. Диагноз: Перфорация глотки инородным телом. Флегмона окологлоточной и околопищеводной клетчатки. Задний медиастинит. Сепсис. На момент взятия клинического материала состояние больной тяжелое. В сознании ШКГ 15 баллов. Кожные покровы с сероватым оттенком. Дыхание спонтанное. ЧДД=36 в мин. Sat О₂=94% АД=180/100 мм рт.ст., ЧСС=130 уд/мин. Температура тела 35,9°С, в анализах крови выявлен лейкоцитоз - 13,5 10%. Отмечалось увеличение концентрации С-реактивного белка - 79,7 мг/л, гипергликемия - 22,7 ммоль/л, метаболический ацидоз рН - 7.223. Число критериев ССВР - 3. Оценка тяжести состояния больной по шкале APACHE II составила 14 баллов, SAPS II - 27 баллов, SOFA-4 балла, ЛИИ - 5,9 усл.ед. Содержание погибших лейкоцитов в венозной крови - 414 кл/млк, (3,1%). Тяжелая степень эндогенной интоксикации. Больной начата комплексная терапия, включающая экстракорпоральные методы гемокоррекции. Проведено 2 процедуры плазмофильтрации. На 5 сутки содержание погибших лейкоцитов в венозной крови - 119 кл/млк (1,6%), что соответствует средней степени тяжести эндогенной интоксикации, ЛИИ - 6,9 усл.ед, SOFA - 3 балла. На 7 сутки содержание погибших клеток - 97,3 кл/млк (1,1)%, легкая степень тяжести эндогенной интоксикации, ЛИИ - 3,9 усл.ед, SOFA - 2 балла. Исход - выздоровление3. Patient B. 55 years. Diagnosis: Perforation of the pharynx by a foreign body. Phlegmon of peri-pharyngeal and periophageal tissue. Posterior mediastinitis. Sepsis. At the time of taking the clinical material, the patient's condition is serious. In the mind of the SKH 15 points. Skin with a grayish tint. Spontaneous breathing. NPV = 36 per min. Sat O ₂ = 94% BP = 180/100 mmHg, heart rate = 130 beats / min. Body temperature is 35.9 ° C; leukocytosis was detected in blood tests - 13.5–10%. An increase in the concentration of C-reactive protein was noted - 79.7 mg / l, hyperglycemia - 22.7 mmol / l, metabolic acidosis pH - 7.223. The number of SSVR criteria is 3. The assessment of the severity of the patient's condition on the APACHE II scale was 14 points, SAPS II - 27 points, SOFA-4 points, LII - 5.9 conventional units. The content of dead white blood cells in venous blood is 414 cells / ml, (3.1%). Severe degree of endogenous intoxication. The patient started complex therapy, including extracorporeal hemocorrection methods. Conducted 2 plasma filtration procedures. On the 5th day, the content of dead white blood cells in venous blood was 119 cells / ml (1.6%), which corresponds to the moderate severity of endogenous intoxication, LII - 6.9 conventional units, SOFA - 3 points. On day 7, the content of dead cells was 97.3 cells / ml (1.1)%, mild severity of endogenous intoxication, LII - 3.9 conventional units, SOFA - 2 points. The outcome is recovery

4. Больной М., 26 л. Диагноз: тяжелый острый панкреатит, субтотальный смешанный панкреонекроз, парапанкреатит, оментобурсит, мезоэнтерит, паранефрит слева, параколит слева, паранефральный абсцесс, абсцесс брыжейки тонкой кишки, абсцесс в области головки поджелудочной железы, абсцесс забрюшинной клетчатки, сепсис. На момент исследования крови состояние тяжелое, ИВЛ, ЧДД - 22 в мин, Sat O₂ - 93%, ФД - 102/56 мм рт.ст. на фоне введения вазопрессоров (дофамин 11 мкг/кг в мин), ЧСС - 119 уд./мин, температура тела - 39°С. В анализах крови - лейкоциты - 4. Patient M., 26 l. Diagnosis: severe acute pancreatitis, subtotal mixed pancreatic necrosis, parapancreatitis, amentobursitis, mesoenteritis, paranephritis on the left, paracolitis on the left, perinephric abscess, mesenteric abscess of the small intestine, abscess in the head of the pancreas, abscess of retroperitoneal tissue, seps. At the time of the blood test, the condition was serious, mechanical ventilation, NPV - 22 per min, Sat O ₂ - 93%, PD - 102/56 mm Hg. against the background of the introduction of vasopressors (dopamine 11 μg / kg per minute), heart rate - 119 beats / min, body temperature - 39 ° C. In blood tests - white blood cells -

9,0·10⁹ кл/л, Hb - 89 г/л, общий белок - 69 г/л, альбумин - 37 г/л, С-реактивный белок -125 мг/л. Число критериев ССВР - 3. Оценка тяжести по шкале APACHE II - 11 баллов, SOFA - 7 баллов, ЛИИ - 3,1 усл.ед. Содержание погибших лейкоцитов в венозной крови - 1998 кл/млк (22,2%). Крайне тяжелая степень интоксикации. Больному проводилось комплексное лечение, включающее экстракорпоральные методы гемокоррекции. Проведено 6 процедур плазмофильтрации и 17 процедур постоянной веновенозной гемофильтрации. На фоне проводимой комплексной терапии отмечалось кратковременное улучшение состояния больного (средняя степень тяжести эндогенной интоксикации) содержание погибших лейкоцитов в венозной крови снизилось до 264 кл/мкл (2,4%), ЛИИ - 10 усл.ед, SOFA - 8 баллов. Однако, в дальнейшем, продолжался гнойно-септический процесс, отмечалось прогрессирование полиорганной недостаточности, содержание погибших клеток в венозной крови вновь возросло до 804 кл/мкл (5,3%) - тяжелая степень эндогенной интоксикации. Исход - смерть.9.0 · 10 ⁹ cells / l, Hb - 89 g / l, total protein - 69 g / l, albumin - 37 g / l, C-reactive protein -125 mg / l. The number of SSVR criteria is 3. The severity rating on the APACHE II scale is 11 points, SOFA - 7 points, LII - 3.1 conventional units. The content of dead white blood cells in venous blood is 1998 cells / ml (22.2%). Extremely severe intoxication. The patient underwent complex treatment, including extracorporeal hemocorrection methods. Conducted 6 plasma filtration procedures and 17 procedures of continuous venous hemofiltration. Against the background of the complex therapy, there was a short-term improvement in the patient's condition (moderate severity of endogenous intoxication), the content of dead white blood cells in venous blood decreased to 264 cells / μl (2.4%), LII - 10 conventional units, SOFA - 8 points. However, in the future, a purulent-septic process continued, progression of multiple organ failure was noted, the content of dead cells in venous blood again increased to 804 cells / μl (5.3%) - a severe degree of endogenous intoxication. The end is death.

5. Больной Б. 31 года. Диагноз: Острый тяжелый панкреатит. Субтотальный геморрагический панкреонекроз в стадии гнойно-септических осложнений. На момент взятия клинического материала состояние больного тяжелое. В сознании. Кожные покровы бледные. Дыхание спонтанное, тахипноэ до 27 в мин. Гипертермия до 40°С, с потрясающими ознобами. АД 96/56 мм рт ст. ЧСС до 143 в мин. В анализах крови - лейкоцитоз до 19,2·10⁹/л, Нв 96 г/л, Ht 27%, общий белок 61 г/л, альбумин 27,9 г/л. Гипоксемия РО₂ - 64,3 мм рт.ст., гипокапния РСО₂ - 23,3 мм рт.ст., Sat. 95,6% на фоне дыхания атмосферным воздухом. Число критериев ССВР - 4, APACHE II 12 баллов, SOFA 1 балл, ЛИИ - 4,5 усл.ед. Содержание погибших лейкоцитов в венозной крови - 634 кл/млк (3,3%). Тяжелая степень эндогенной интоксикации. Больному проводилось комплексное лечение, включающее экстракорпоральные методы гемокоррекции. Проведено 4 процедуры плазмофильтрации и 6 процедур постоянной веновенозной гемофильтрации. Несмотря на проводимое лечение содержание погибших лейкоцитов в венозной крови не имело тенденции к снижению (621 кл/млк, 2,9%), ЛИИ - 6,6 усл.ед, SOFA - 12 баллов. Отмечалось прогрессирование полиорганной недостаточности на фоне тяжелого сепсиса. Исход - смерть.5. Patient B. 31 years. Diagnosis: Acute severe pancreatitis. Subtotal hemorrhagic pancreatic necrosis in the stage of purulent-septic complications. At the time of taking the clinical material, the patient's condition is serious. In the mind. The skin is pale. Spontaneous breathing, tachypnea up to 27 per min. Hyperthermia up to 40 ° C, with amazing chills. HELL 96/56 mm Hg Heart rate up to 143 per min. In blood tests - leukocytosis up to 19.2 · 10 ⁹ / l, HB 96 g / l, Ht 27%, total protein 61 g / l, albumin 27.9 g / l. Hypoxemia PO ₂ - 64.3 mm Hg, hypocapnia RSO ₂ - 23.3 mm Hg, Sat. 95.6% against the background of breathing atmospheric air. The number of SSVR criteria is 4, APACHE II is 12 points, SOFA is 1 point, LII is 4.5 conv. The content of dead leukocytes in venous blood is 634 cells / ml (3.3%). Severe degree of endogenous intoxication. The patient underwent complex treatment, including extracorporeal hemocorrection methods. Conducted 4 procedures of plasma filtration and 6 procedures of constant venous hemofiltration. Despite the treatment, the content of dead leukocytes in the venous blood did not tend to decrease (621 cells / ml, 2.9%), LII - 6.6 conventional units, SOFA - 12 points. There was a progression of multiple organ failure with severe sepsis. The end is death.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет определить степень тяжести эндогенной интоксикации у больных, что влияет на выбор лечебной тактики, обосновывает использование того или иного метода экстракорпоральной гемокоррекции или их комплексного применения. Позволяет оценить эффективность проведенных процедур экстракорпоральной гемокоррекции и комплексного лечения больных. Кроме того, способ оценки степени тяжести эндогенной интоксикации может быть использован в реанимационных отделениях как скрининг-тест, позволяющий выделить контингент больных с неблагоприятным прогнозом течения и исхода заболевания. Таким образом, использование данного способа оценки степени тяжести эндогенной интоксикации приведет к улучшению результатов лечения больных.Thus, the proposed method allows to determine the severity of endogenous intoxication in patients, which affects the choice of therapeutic tactics, justifies the use of one or another method of extracorporeal hemocorrection or their complex application. Allows you to evaluate the effectiveness of the procedures of extracorporeal hemocorrection and complex treatment of patients. In addition, a method for assessing the severity of endogenous intoxication can be used in intensive care units as a screening test that allows you to select a contingent of patients with an unfavorable prognosis of the course and outcome of the disease. Thus, the use of this method of assessing the severity of endogenous intoxication will lead to improved treatment outcomes for patients.

Claims (1)

Способ оценки степени тяжести эндогенной интоксикации путем исследования форменных элементов периферической крови, отличающийся тем, что в венозной крови больного определяют количество лейкоцитов с помощью моноклональных антител к рецептору CD45, а затем в автоматическом режиме на проточном цитометре с помощью ДНК-специфического красителя 0,005%-ного раствора 7 амино-актиномицина D (7AAD) определяют количество погибших клеток, рассчитывают абсолютное число погибших лейкоцитов (А) в единице объема крови по формуле

и при значениях погибших клеток от 68 до 110 кл/мкл диагностируют легкую степень тяжести эндогенной интоксикации, от 111 до 400 кл/мкл - среднюю степень тяжести, от 401 до 1000 кл/мкл - тяжелую, а при более 1000 кл/мкл - крайне тяжелую степень тяжести эндогенной интоксикации. A method for assessing the severity of endogenous intoxication by examining the formed elements of peripheral blood, characterized in that the patient’s venous blood count is determined by the number of leukocytes using monoclonal antibodies to the CD45 receptor, and then automatically in a flow cytometer using a DNA-specific dye of 0.005% solution of 7 amino-actinomycin D (7AAD) determine the number of dead cells, calculate the absolute number of dead white blood cells (A) per unit volume of blood according to the formula

and with values of dead cells from 68 to 110 cells / μl, a mild severity of endogenous intoxication is diagnosed, from 111 to 400 cells / μl - moderate, from 401 to 1000 cells / μl - severe, and with more than 1000 cells / μl - extremely severe severity of endogenous intoxication.

Images