RU2330664C2 - Medical product and method of rheumatic diseases treatment - Google Patents
Medical product and method of rheumatic diseases treatment Download PDFInfo
- Publication number
- RU2330664C2 RU2330664C2 RU2006114078/15A RU2006114078A RU2330664C2 RU 2330664 C2 RU2330664 C2 RU 2330664C2 RU 2006114078/15 A RU2006114078/15 A RU 2006114078/15A RU 2006114078 A RU2006114078 A RU 2006114078A RU 2330664 C2 RU2330664 C2 RU 2330664C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- methotrexate
- phospholipids
- nanoparticles
- drug
- glycyrrhizic acid
- Prior art date
Links
Images
Abstract
Description
Изобретение относится к медицине, в частности к лекарственному препарату для лечения воспалительных заболеваний суставов, содержащему метотрексат диспергированный в фосфолипидные наночастицы, а также к способу лечения ревматических заболеваний с помощью заявленного препарата.The invention relates to medicine, in particular to a medicament for the treatment of inflammatory joint diseases containing methotrexate dispersed in phospholipid nanoparticles, and also to a method for treating rheumatic diseases using the claimed preparation.
Наиболее распространенными ревматическими заболеваниями являются ревматоидный артрит (РА) и псориатический артрит (ПсА), которые регистрируются во всех странах мира с частотой от 0,6 до 1,3%. РА и ПсА - хронические системные соединительнотканные заболевания с прогрессирующим поражением периферических (синовиальных) суставов по типу эрозивно-деструктивного полиартрита, чаще болеют женщины, нередко молодого репродуктивного возраста. РА и ПсА являются причиной ранней инвалидизации пациентов не только из-за поражений кожи (ПсА), но и из-за повреждения крупных и опорных суставов, в частности, коленных. Частые обострения артрита коленных суставов сопровождаются производством большого количества синовиальной жидкости и пролиферацией синовии. Это затрудняет самостоятельное передвижение больных и требует внутрисуставных инъекций различных лекарственных средств. Наиболее часто используют стероидные гормоны, однако их применение бывает ограничено или невозможно из-за серьезных побочных реакций (повышение артериального давления, гипергликемия) или сопутствующих заболеваний (ишемический некроз суставных поверхностей). Практикующие ревматологи некоторое время назад возлагали большие надежды на локальную инъекционную терапию метотрексатом именно в тех случаях, когда стероидные гормоны неэффективны или неприемлемы. Однако в конце 90-х годов эти работы прекратились из-за короткого времени экспозиции метотрексата в полости сустава (ускоренная резорбция). Применение метотрексата в лечение больных воспалительными заболеваниями суставов связано с тем, что поражение соединительной ткани (преимущественно суставов) при РА и ПсА является следствием развивающихся иммунопатологических реакций (аутоагрессия), что имеет некоторое сходство с заболеваниями онкологической природы. В основе этих реакций лежит дисбаланс функции Т- и В-лимфоцитов, а именно иммунодефицит системы Т-лимфоцитов, что приводит к неконтролируемому синтезу В-лимфоцитами антител, в частности IgG. В результате этого при повреждении в синовии возникает местная иммунная реакция с образованием измененных IgG, обладающих аутореактивностью и способностью вступать в реакцию по типу антиген-антитело. В конечном счете в синовии запускаются сложные воспалительные реакции, которые приводят к разрушению тканей сустава, сосудов и внутренних органов. Эти механизмы оправдывают применение препаратов, в частности, метотрексата, с иммунодепрессивным и антипролиферативным действием.The most common rheumatic diseases are rheumatoid arthritis (RA) and psoriatic arthritis (PsA), which are recorded in all countries of the world with a frequency of 0.6 to 1.3%. RA and PsA are chronic systemic connective tissue diseases with progressive lesions of the peripheral (synovial) joints, such as erosive-destructive polyarthritis, women, often of young reproductive age, are more often affected. RA and PsA are the cause of early disability of patients not only due to skin lesions (PsA), but also because of damage to large and supporting joints, in particular, knee joints. Frequent exacerbations of arthritis of the knee joints are accompanied by the production of a large amount of synovial fluid and proliferation of synovia. This complicates the independent movement of patients and requires intra-articular injections of various drugs. Steroid hormones are most commonly used, but their use is limited or impossible due to serious adverse reactions (increased blood pressure, hyperglycemia) or concomitant diseases (ischemic necrosis of the articular surfaces). Practicing rheumatologists some time ago had high hopes for local injection therapy with methotrexate precisely in those cases when steroid hormones are ineffective or unacceptable. However, in the late 90s, these works stopped due to the short exposure time of methotrexate in the joint cavity (accelerated resorption). The use of methotrexate in the treatment of patients with inflammatory joint diseases is due to the fact that damage to the connective tissue (mainly joints) in RA and PsA is a consequence of developing immunopathological reactions (autoaggression), which has some similarities with oncological diseases. The basis of these reactions is an imbalance in the function of T- and B-lymphocytes, namely, immunodeficiency of the T-lymphocyte system, which leads to uncontrolled synthesis of antibodies, in particular IgG, by B-lymphocytes. As a result of this, in case of damage in the synovia, a local immune reaction occurs with the formation of altered IgGs with autoreactivity and the ability to react as an antigen-antibody. Ultimately, in the synovia, complex inflammatory reactions are triggered, which lead to the destruction of joint tissues, blood vessels and internal organs. These mechanisms justify the use of drugs, in particular methotrexate, with immunosuppressive and antiproliferative effects.
Метотрексат представляет собой N-[4-[[(2,4-диамино-6-птеридинил)метил]метиламине]бензоил]-L-глутаминовой кислоты иMethotrexate is N- [4 - [[(2,4-diamino-6-pteridinyl) methyl] methylamine] benzoyl] -L-glutamic acid and
относится к фармакологической группе антиметаболитов. Он является структурным аналогом фолиевой кислоты и в качестве такового ингибирует дигидрофолатредуктазу, играющую важную роль в синтезе пуриновых нуклеотидов и тимидилата, необходимых для синтеза ДНК, и соответственно подавляет синтез и репарацию ДНК. Обладает противоопухолевым (цитотоксическим) и иммунодепрессивным действием, тормозит пролиферативные и репаративные процессы. Основное преимущество метотрексата перед другими НПВС заключается в его выраженной способности (при применении в малых дозах) нормализовать измененный метаболизм костной ткани и костного мозга и тем самым устранять одно из самых тяжелых последствий прогрессирования РА. Однако при длительном применении в больших и средних терапевтических дозах метотрексат, как все цитостатики, проявляет значительную токсичность, что ограничивает его использование в клинике.refers to the pharmacological group of antimetabolites. It is a structural analogue of folic acid and, as such, inhibits dihydrofolate reductase, which plays an important role in the synthesis of purine nucleotides and thymidylate, which are necessary for DNA synthesis, and, accordingly, inhibits DNA synthesis and repair. It has antitumor (cytotoxic) and immunosuppressive effects, inhibits proliferative and reparative processes. The main advantage of methotrexate over other NSAIDs is its pronounced ability (when used in small doses) to normalize the altered metabolism of bone tissue and bone marrow and thereby eliminate one of the most serious consequences of RA progression. However, with prolonged use in large and medium therapeutic doses, methotrexate, like all cytostatics, exhibits significant toxicity, which limits its use in the clinic.
Терапия больных с ревматическими заболеваниями обычно проводится с использованием системного назначения большого числа разнообразных лекарственных средств. В связи с этим возникают проблемы их взаимодействия, переносимости, противопоказаний к применению. В клинической практике часто приходится отказываться от применения базисной и/или противовоспалительной терапии из-за сопутствующих заболеваний или из-за появления серьезных побочных эффектов. Это делает актуальной местную или локальную терапию, которая способна уменьшить дозу НПВП или базисного препарата, а также снизить общую стоимость лечения. К такой локальной противовоспалительной терапии относят внутрисуставные инъекции глюкокортикостероидов и метотрексата и доставку их к месту воспаления с помощью физиотерапевтических методик (фонорез или ультразвук с гидрокортизоном). Однако эти препараты обладают высокой скоростью резорбции, что значительно снижает эффективность их применения, а многократное введение стероидных препаратов в сустав приводит к развитию нежелательных побочных эффектов. Поэтому снижение скорости резорбции таких препаратов, повышение их эффективности и биодоступности являются актуальными научными проблемами.Therapy of patients with rheumatic diseases is usually carried out using the systemic administration of a large number of various drugs. In this regard, there are problems of their interaction, tolerance, contraindications. In clinical practice, it is often necessary to refuse the use of basic and / or anti-inflammatory therapy due to concomitant diseases or due to the appearance of serious side effects. This makes local or local therapy relevant, which can reduce the dose of NSAIDs or the basic drug, as well as reduce the total cost of treatment. Such local anti-inflammatory therapy includes intra-articular injections of glucocorticosteroids and methotrexate and their delivery to the site of inflammation using physiotherapeutic methods (phonoresis or ultrasound with hydrocortisone). However, these drugs have a high rate of resorption, which significantly reduces the effectiveness of their use, and repeated administration of steroid drugs to the joint leads to the development of undesirable side effects. Therefore, a decrease in the rate of resorption of such drugs, an increase in their effectiveness and bioavailability are actual scientific problems.
Разработка фосфолипидных наноформ внутрисуставных препаратов представляет существенный научный и практический интерес, т.к. применяемая технология позволит значительно повысить эффективность препарата за счет повышения его биодоступности, снижения возможных побочных эффектов и назначаемой дозы.The development of phospholipid nanoforms of intraarticular preparations is of significant scientific and practical interest, since the technology used will significantly increase the effectiveness of the drug by increasing its bioavailability, reducing possible side effects and the prescribed dose.
В RU 2223749 С2, 20.02.2004, описаны композиции и способы доставки аэрозолей с малым размером частиц путем ингаляции водных дисперсий фосфолипидных наночастиц, несущих противораковые лекарственные препараты, к дыхательным путям субъекта, нуждающегося в таком лечении.RU 2223749 C2, 02.20.2004, describes compositions and methods for delivering aerosols with a small particle size by inhalation of aqueous dispersions of phospholipid nanoparticles carrying anticancer drugs to the respiratory tract of a subject in need of such treatment.
В GB 2143433 А, 13.02.1985, описана дерматологическая мазь для лечения кожных заболеваний, например псориаза, включающая фосфолипидные наночастицы, содержащие «захваченный» метотрексат и дерматологически приемлемый носитель.GB 2143433 A, 02/13/1985, describes a dermatological ointment for the treatment of skin diseases, for example psoriasis, including phospholipid nanoparticles containing "captured" methotrexate and a dermatologically acceptable carrier.
Однако такие формы препаратов не могут быть использованы для локального лечения ревматических заболеваний.However, such forms of drugs cannot be used for local treatment of rheumatic diseases.
Целью изобретения является разработка новых лекарственных форм метотрексата, которые позволили бы снизить побочные эффекты препарата при сохранении его терапевтического потенциала при лечении ревматических заболеваний.The aim of the invention is the development of new dosage forms of methotrexate, which would reduce the side effects of the drug while maintaining its therapeutic potential in the treatment of rheumatic diseases.
Поставленная цель достигается путем создания лекарственного препарата для внутрисуставного введения при лечении ревматических заболеваний на основе натуральных фосфолипидов - препарата «Фосфоглив» и метотрексата.The goal is achieved by creating a drug for intraarticular administration in the treatment of rheumatic diseases based on natural phospholipids - the drug "Phosphogliv" and methotrexate.
Таким образом, описывается лекарственный препарат для внутрисуставного введения при лечении ревматических заболеваний, включающий включающий 35-90 мас.% метотрексата, фиксированного на фосфолипидные наночастицы, причем наночастицы состоят из фосфолипидов, глицирризиновой кислоты или ее соли и вспомогательных веществ при суммарном содержании фосфолипидов и глицирризиновой кислоты или ее соли 2-80 мас.% и массовом соотношении фосфолипидов и глицирризиновой кислоты или ее соли не более 4:1.Thus, a medicament for intra-articular administration in the treatment of rheumatic diseases is described, comprising 35-90 wt.% Methotrexate fixed on phospholipid nanoparticles, the nanoparticles being composed of phospholipids, glycyrrhizic acid or its salt and auxiliary substances with a total content of phospholipids and glycyrrhizic acid or its salt 2-80 wt.% and the mass ratio of phospholipids and glycyrrhizic acid or its salt is not more than 4: 1.
Использование фосфолипидных наноформ лекарственных препаратов имеет целый ряд преимуществ. Наиболее важные из них заключаются в том, что лекарственные вещества, включенные в наночастицы, значительно дольше циркулируют в крови, практически не взаимодействуют с компонентами крови и способны накапливаться в значительных концентрациях в опухолевых клетках. Все эти преимущества связаны с тем, что лекарственные вещества, включенные в наночастицу, не имеют непосредственного контакта с окружающими наночастицу компонентами крови и высвобождаются из наночастиц при разрушении последних. Это в значительной степени снижает отрицательное побочное действие лекарственных веществ. Возможно и значительное снижение концентрации лекарственных веществ, используемых при лечении того или иного заболевания.The use of phospholipid nanoforms of drugs has a number of advantages. The most important of them are that the medicinal substances included in the nanoparticles circulate much longer in the blood, practically do not interact with blood components and are able to accumulate in significant concentrations in tumor cells. All these advantages are related to the fact that the medicinal substances included in the nanoparticle do not have direct contact with the blood components surrounding the nanoparticle and are released from the nanoparticles upon destruction of the latter. This greatly reduces the negative side effects of drugs. A significant decrease in the concentration of drugs used in the treatment of a disease is also possible.
В качестве основы для получения фосфолипидных наночастиц используют препарат "Фосфоглив", который содержит фосфолипиды, глицирризиновую кислоту или ее соли и вспомогательные вещества, при этом суммарное содержание фосфолипидов и глицирризиновой кислоты или ее соли составляет 2-80 мас.% при массовом соотношении фосфолипидов и глицирризиновой кислоты или ее соли не более 4:1. «Фосфоглив» обладает свойством репарировать биологические мембраны и используется для лечения острых и хронических заболеваний печени, нарушения липидного обмена при атеросклерозе и сопутствующих заболеваниях, а также восстановления функции печени при интоксикации (RU 2133122 C1, 20.07.1999). Также "Фосфоглив" применяется в качестве средства для комплексного лечения хронических дерматозов: псориаза, атонического дерматита, экземы и кератодермий (RU 2196585 C1, 20.01.2003).As the basis for the preparation of phospholipid nanoparticles, the Phosphogliv preparation is used, which contains phospholipids, glycyrrhizic acid or its salts and auxiliary substances, while the total content of phospholipids and glycyrrhizic acid or its salt is 2-80 wt.% With a mass ratio of phospholipids and glycyrrhizin acid or its salt no more than 4: 1. “Phosphogliv” has the property of repairing biological membranes and is used to treat acute and chronic liver diseases, impaired lipid metabolism in atherosclerosis and concomitant diseases, and also to restore liver function during intoxication (RU 2133122 C1, 07.20.1999). Also, "Phosphogliv" is used as a tool for the complex treatment of chronic dermatoses: psoriasis, atonic dermatitis, eczema and keratoderma (RU 2196585 C1, 01.20.2003).
В качестве фосфолипидов "Фосфоглив" содержит фосфатидилхолин растительного или животного происхождения при содержании основного вещества в фосфатидилхолине 70-90 мас.%.As phospholipids "Phosphogliv" contains phosphatidylcholine of plant or animal origin with a content of the main substance in phosphatidylcholine of 70-90 wt.%.
Метотрексат содержит в своей молекуле как аминогруппы, так и карбоксильные группы. Отрицательно заряженные в слабощелочной среде карбоксильные группы метотрексата способны к взаимодействию с положительно заряженным азотом фосфатидилхолина. В результате в щелочной среде происходит направленное связывание метотрексата с гидрофильными поверхностями фосфолипидных наночастиц. Проведенные эксперименты по использованию полученных нами наноформ лекарственных препаратов в сравнении с лекарственными препаратами, не включенными в наночастицы, в экспериментах на животных показали, что фосфолипидные наноформы препаратов циркулируют в крови более длительный промежуток времени.Methotrexate contains both amino groups and carboxyl groups in its molecule. The carboxyl groups of methotrexate negatively charged in a slightly alkaline medium are capable of interacting with the positively charged nitrogen of phosphatidylcholine. As a result, directional binding of methotrexate to the hydrophilic surfaces of phospholipid nanoparticles occurs in an alkaline medium. Our experiments on the use of the obtained nanoforms of drugs in comparison with drugs that are not included in nanoparticles in animal experiments showed that phospholipid nanoforms of drugs circulate in the blood for a longer period of time.
Заявленный лекарственный препарат не имеет аналогов в практике зарубежного и отечественного здравоохранения и представляет собой лиофилизированный порошок стабильный при хранении. При растворении препарата в воде образуются стабильные фосфолипидные наночастицы размером 50-65 нм «нагруженные» метотрексатом.The claimed drug has no analogues in the practice of foreign and domestic health care and is a lyophilized powder stable during storage. When the drug is dissolved in water, stable phospholipid nanoparticles 50-65 nm in size are "loaded" with methotrexate.
Применение метотрексата, диспергированного в фосфолипидные наночастицы, способствует увеличению лечебной эффективности внутрисуставных инъекций за счет биодоступности препарата и снижению резорбтивного эффекта препарата при внутрисуставном введении. Кроме того, введение таких компонентов наночастиц как фосфолипиды и глицирризиновая кислота в сустав также способствует снижению воспалительных процессов и ускоряет восстановление тканей, поскольку эти компоненты обладают уже доказанной биологической активностью. Как показали исследования на животных, заявленный лекарственный препарат оказывает выраженное противоревматическое действие. Причем антиревматический эффект разработанного препарата был более значительным и превосходил антиревматический эффект свободного метотрексата.The use of methotrexate dispersed in phospholipid nanoparticles helps to increase the therapeutic efficacy of intra-articular injections due to the bioavailability of the drug and to reduce the resorptive effect of the drug upon intra-articular administration. In addition, the introduction of such components of nanoparticles as phospholipids and glycyrrhizic acid into the joint also helps to reduce inflammatory processes and accelerates tissue repair, since these components have already proven biological activity. As animal studies have shown, the claimed drug has a pronounced anti-rheumatic effect. Moreover, the anti-rheumatic effect of the developed drug was more significant and exceeded the anti-rheumatic effect of free methotrexate.
Изобретение относится также к способу лечения ревматических заболеваний путем назначения пациенту, нуждающемуся в этом, внутрисуставных инъекций лекарственного препарата, включающего терапевтически эффективное количество метотрексата, фиксированного на наночастицах, состоящих из фосфолипидов, глицирризиновой кислоты или ее соли и вспомогательных веществ при суммарном содержании фосфолипидов и глицирризиновой кислоты или ее соли 2-80 мас.% и массовом соотношении фосфолипидов и глицирризиновой кислоты или ее соли не более 4:1.The invention also relates to a method for treating rheumatic diseases by administering to a patient in need of an intra-articular injection of a drug comprising a therapeutically effective amount of methotrexate fixed on nanoparticles consisting of phospholipids, glycyrrhizic acid or its salt and excipients with a total content of phospholipids and glycyrrhizic acid or its salt 2-80 wt.% and the mass ratio of phospholipids and glycyrrhizic acid or its salt is not more than 4: 1.
Специалист (врач-ревматолог) в области лечения ревматических заболеваний легко определит эффективную дозу по результатам испытаний, представленных в настоящем описании, и в соответствии с другой информацией. Как правило, предполагается, что терапевтически эффективная доза будет составлять от 0,7 мг/кг до 2,1 мг/кг массы тела. Может оказаться подходящим введение терапевтически эффективной дозы, разделенной на две, три, четыре или более субдозы через подходящие интервалы во времени. Точная дозировка и частота введения зависят от активности синовита (артрита), возраста, общего физического состояния конкретного пациента, а также других лекарственных препаратов, которые принимает пациент, и хорошо известны врачу-ревматологу. Кроме того, является очевидным, что указанная эффективная доза может быть понижена или повышена в зависимости от реакции пациента, принимающего лечение и/или в зависимости от мнения врача, назначающего лекарственный препарат, являющегося предметом настоящего изобретения.The specialist (rheumatologist) in the field of treatment of rheumatic diseases can easily determine the effective dose according to the test results presented in the present description, and in accordance with other information. It is generally contemplated that a therapeutically effective dose would be from 0.7 mg / kg to 2.1 mg / kg body weight. It may be appropriate to administer a therapeutically effective dose divided into two, three, four or more sub-doses at suitable time intervals. The exact dosage and frequency of administration depends on the activity of synovitis (arthritis), age, general physical condition of a particular patient, as well as other medications that the patient is taking, and are well known to the rheumatologist. In addition, it is obvious that the indicated effective dose may be lowered or increased depending on the reaction of the patient taking the treatment and / or depending on the opinion of the prescribing drug of the invention.
Препарат предназначен для использования в больницах, поликлиниках, санитарно-курортных и лечебно-профилактических учреждений.The drug is intended for use in hospitals, clinics, health resorts and medical institutions.
Следующий пример иллюстрирует изобретение без ограничения его объема.The following example illustrates the invention without limiting its scope.
Пример.Example.
Приготовление лекарственной формы препарата метотрексат, фиксированный на липосомах.Preparation of the dosage form of methotrexate fixed on liposomes.
1. Приготовление раствора.1. Preparation of the solution.
Раствор А: 6,9 г динатриевой соли глицирризиновой кислоты растворяют в воде для инъекций и доводят объем до 90 мл. При интенсивном перемешивании в токе азота добавляют 2,25 мл 1 н. NaOH и 16,5 г измельченного фосфолипида.Solution A: 6.9 g of the glycyrrhizic acid disodium salt is dissolved in water for injection and the volume is adjusted to 90 ml. With vigorous stirring in a stream of nitrogen add 2.25 ml of 1 N. NaOH and 16.5 g of ground phospholipid.
Раствор Б: 59,4 г мальтозы растворяют в 90-100 мл воды для инъекций при интенсивном перемешивании до тех пор, пока раствор не станет прозрачным. Доводят конечный объем до 150 мл.Solution B: 59.4 g of maltose are dissolved in 90-100 ml of water for injection with vigorous stirring until the solution becomes clear. Bring the final volume to 150 ml.
Раствор В: 150 мг метотрексата (из расчета 10 мг на флакон) растворяют 10 мл 0.01М NaHCO3.Solution B: 150 mg of methotrexate (based on 10 mg per vial) was dissolved in 10 ml of 0.01 M NaHCO 3 .
Смешивают растворы А, Б и В и доводят водой для инъекций общий объем до 300 мл.Solutions A, B and C are mixed and the total volume is made up to 300 ml with water for injection.
2. Гомогенизация раствора.2. Homogenization of the solution.
Объединенный раствор гомогенизируют на гомогенизаторе (Mini-Lab 7/30 VH, Rannie, Дания) в течение 60 мин при давлении 800 барр. Охлаждение осуществляют через обратный холодильник. Светопропускание (прозрачность) раствора при 660 нм не менее 60-65%, что соответствует размеру липосом 40-60 нм.The combined solution is homogenized on a homogenizer (
3. Предфильтрация.3. Prefiltration.
Гомогенизированный раствор отфильтровывают под давлением азота 2 атм через мембрану «Владипор» 3-4 мкм. Прозрачность раствора при 660 нм должна быть не менее 65%.The homogenized solution is filtered off under a 2 atm nitrogen pressure through a Vladipor membrane of 3-4 microns. The transparency of the solution at 660 nm should be at least 65%.
4. Стерилизующая фильтрация.4. Sterilizing filtration.
Стерилизующую фильтрацию проводят в стерильной комнате под ламинаром (Ламинарбокс ЛБ-Г, Россия) на приборе напорного фильтрования ЗАО «Мембраны», Россия через фильтр «Владипор» диаметром 0,2 мкм под давлением 3 атм.Sterilizing filtration is carried out in a sterile room under a laminar (Laminarbox LB-G, Russia) on a pressure filter device of CJSC Membranes, Russia through a Vladipor filter with a diameter of 0.2 μm under a pressure of 3 atm.
5. Стерильный розлив во флаконы.5. Sterile bottling.
Дозатором под ламинаром разливают раствор в темные флаконы по 10 мл, предукупоривают пробками и замораживают при температуре -25°С.The solution is poured under a laminar into dark 10 ml vials, pre-corked with stoppers and frozen at a temperature of -25 ° С.
6. Лиофилизация раствора.6. Lyophilization of the solution.
Лиофилизируют замороженные образцы в сублимационной сушке LSL SECFROID, LYOLAB F, Германия в течение 21 часа до получения однородной таблетки с плотной консистенцией.Lyophilized frozen samples in a freeze dryer LSL SECFROID, LYOLAB F, Germany for 21 hours to obtain a homogeneous tablet with a dense consistency.
Флаконы закупоривают и закатывают алюминиевыми колпачками. Хранят при температуре не выше 20°С.Vials are corked and sealed with aluminum caps. Store at a temperature not exceeding 20 ° C.
Количественное определение включения метотрексата в липосомы.Quantitative determination of the inclusion of methotrexate in liposomes.
Принцип определения % включения метотрексата в фосфолипидные наночастицы заключается в определении общей концентрации метотрексата в препарате (С общ.), затем отделении фосфолипидных наночастиц, нагруженных метотрексатом от метотрексата, не включенного в наночастицы, методом гельфильтрации и дальнейшем анализе концентрации метотрексата в наночастицах (С лип.) методом ВЭЖХ на аппаратуре Милихром А-02. Для определения С общ. метотрексата из раствора с этим веществом отбирали 10 мкл и добавляли метанол. Из полученного раствора с разрушенными наночастицами отбирали аликвоту и определяли концентрацию метотрексата методом ВЭЖХ на аппаратуре Милихром А-02. Разделение наночастиц, нагруженных метотрексатом, от метотрексата, не включенного в наночастицы, проводили в хроматографической системе с использованием сефадекса G-25 уровновешенного 0.2% ацетатом аммония, рН 8 М. Собранный материал пика лиофилизировали, экстрагировали фосфолипиды хлороформом. К высушенному остатку добавляли 100 мкл буфера «А» для ВЭЖХ и тщательно перемешивали на вибрационном смесителе. Аликвоты этого раствора (1-10 мкл) анализировали на содержание метотрексата с помощью метода ВЭЖХ на аппаратуре Милихром А-02. Регистрацию (качественное и количественное определение) метотрексата проводили с помощью элюции в течение 12,5 мин градиентом ацетонитрила от 1% до 90% в 0,1% растворе трифторуксусной кислоте со скоростью 200 мкл/мин, детектирование в УФ при 258 нм. Разделение и время удерживание на колонке представлены на фиг.1. Вычисление % включения метотрексата в липосомы проводили по формуле:The principle of determining the% incorporation of methotrexate in phospholipid nanoparticles is to determine the total concentration of methotrexate in the preparation (C total), then separating the phospholipid nanoparticles loaded with methotrexate from methotrexate not included in the nanoparticles by gel filtration and further analysis of the concentration of methotrexate in nanoparticles (C lip. ) by HPLC using Milichrome A-02 equipment. To determine C total. methotrexate from the solution with this substance was taken 10 μl and methanol was added. An aliquot was taken from the obtained solution with the destroyed nanoparticles and the concentration of methotrexate was determined by HPLC using Milichrom A-02 equipment. The separation of methotrexate-loaded nanoparticles from methotrexate not included in the nanoparticles was carried out in a chromatographic system using Sephadex G-25 level with 0.2% ammonium acetate, pH 8 M. The collected peak material was lyophilized, phospholipids were extracted with chloroform. To the dried residue, 100 μl of HPLC buffer “A” was added and thoroughly mixed on a vibratory mixer. Aliquots of this solution (1-10 μl) were analyzed for the content of methotrexate using the HPLC method on a Milichrome A-02 apparatus. The registration (qualitative and quantitative determination) of methotrexate was carried out by elution for 12.5 min with a gradient of acetonitrile from 1% to 90% in a 0.1% solution of trifluoroacetic acid at a rate of 200 μl / min, detection in UV at 258 nm. Separation and retention time on the column are presented in figure 1. The calculation of the% inclusion of methotrexate in liposomes was carried out according to the formula:
(С лип.×100):С общ. = % включения.(With lime. × 100): With total. =% inclusion.
Определение метотрексата в сыворотке крови экспериментальных животных.Determination of methotrexate in the blood serum of experimental animals.
К образцам сыворотки крови по 100 мкл добавляли 3 мл метанола и тщательно перемешивали раствор на вибрационном смесителе. Полученную смесь центрифугировали при 5000 об/мин. Супернатант собирали в коническую колбу и высушивали досуха на роторном испарителе под вакуумом. К высушенному материалу добавляли 200 мкл стартового буфера для определения лекарственного препарата. Анализ проводили методом ВЭЖХ в условиях описанных выше.To blood serum samples of 100 μl was added 3 ml of methanol and the solution was thoroughly mixed with a vibrating mixer. The resulting mixture was centrifuged at 5000 rpm. The supernatant was collected in a conical flask and dried to dryness on a rotary evaporator under vacuum. To the dried material was added 200 μl of start buffer for drug determination. The analysis was performed by HPLC under the conditions described above.
Сравнительный анализ циркуляции в крови экспериментальных животных наноформы метотрексата и свободного метотрексатаComparative analysis of blood circulation in experimental animals of methotrexate nanoform and free methotrexate
Для определения времени циркуляции различных форм лекарственного препарата метотрексата проводили эксперименты на крысах. Препараты вводили внутривенно из расчета 6 мг на кг веса животного. Образцы крови получали через 5 мин, 15 мин, 30 мин, 60 мин, 120 мин. Определение концентрации метотрексата в сыворотке крови проводили так, как это описано выше. Было обнаружено, что концентрация препарата метотрексата, не включенного в фосфолипидные наночастицы, падает в 5 раз от 5 минуты к 15 минуте. Если измерение на 5 минуте условно принять за 100%, то к 15 минуте концентрация лекарственного препарата в крови падает до 20%, а через 60 минут падает до 10%. В случае введения животным фосфолипидной наноформы метотрексата падение концентрации до 20% происходит не к 15 минуте, а только через 60 минут. Таким образом, метотрексат, включенный в фосфолипидные наночастицы, циркулирует в крови более длительное время.To determine the circulation time of various forms of the methotrexate drug, experiments were performed on rats. The drugs were administered intravenously at the rate of 6 mg per kg of animal weight. Blood samples were obtained after 5 minutes, 15 minutes, 30 minutes, 60 minutes, 120 minutes. The concentration of methotrexate in serum was determined as described above. It was found that the concentration of the drug methotrexate, not included in the phospholipid nanoparticles, drops 5 times from 5 minutes to 15 minutes. If the measurement at 5 minutes is conventionally taken as 100%, then by 15 minutes the concentration of the drug in the blood drops to 20%, and after 60 minutes it drops to 10%. In the case of administration of phospholipid nanoform methotrexate to animals, the concentration drop to 20% does not occur by 15 minutes, but only after 60 minutes. Thus, methotrexate, included in phospholipid nanoparticles, circulates in the blood for a longer time.
Сравнительное изучение острой токсичности новой лекарственной формы препарата - «Фосфоглив»-метотрексат и свободного метотрексата, применяемого в медицинской практике, в эксперименте на животных.A comparative study of the acute toxicity of a new dosage form of the drug - Phosphogliv-methotrexate and free methotrexate, used in medical practice, in an animal experiment.
Изучение острой токсичности фосфоглив-метотрексата и свободного метотрексата проводилось в экспериментах на белых нелинейных мышах самцах массой тела 18-20 г.The acute toxicity of phosphogliv methotrexate and free methotrexate was studied in experiments on white non-linear mice weighing 18-20 g.
Сравниваемые препараты вводили внутрибрюшинно. Для исследования каждой дозы препарата использовались группы по 6 животных, наблюдение за ними ввелось в течение двух недель. В течение указанного срока ежедневно наблюдали за общим состоянием и поведением животных, потреблением корма и воды; регистрировали летальность, время гибели животных, симптоматику отравления, макро- и микроскопическое описание погибших и всех выживших животных в конце исследования, гистологическое исследование почек, отличавшихся по окраске от почек контрольных животных; определение массовых коэффициентов внутренних органов. Полученные результаты представлены на фиг.2 и 3.Compared drugs were administered intraperitoneally. For the study of each dose of the drug, groups of 6 animals were used, monitoring was introduced for two weeks. During this period, the general condition and behavior of animals, feed and water intake were monitored daily; mortality, time of death of animals, symptoms of poisoning, macro- and microscopic descriptions of dead and all surviving animals at the end of the study, histological examination of kidneys that differed in color from the kidneys of control animals were recorded; determination of mass coefficients of internal organs. The results are presented in figure 2 and 3.
Вскрытие животных спустя 14 дней после острого введения обоих препаратов не показало наличия остаточных явлений, связанных с перенесенной интоксикацией, кроме изменений в почках, в которых степень выраженности патологического процесса идентична.The autopsy of animals 14 days after the acute administration of both drugs did not show the presence of residual phenomena associated with intoxication, except for changes in the kidneys, in which the severity of the pathological process is identical.
ЛД50 для свободного метотрексата составила 60,95, для фосфоглив-метотрексата - 57,35.The LD 50 for free methotrexate was 60.95, for phosphogliv methotrexate - 57.35.
На основании полученных данных можно сделать вывод об отсутствии значимых различий по показателям острой токсичности между сравниваемыми препаратами: фосфоглив-метотрексат и свободный метотрексат.Based on the data obtained, it can be concluded that there are no significant differences in acute toxicity between the compared drugs: phosphogliv-methotrexate and free methotrexate.
Сравнительное изучение противовоспалительной активности метотрексата, фиксированного на липосомах (MTX-LIPO), и свободного метотрексата (МТХ).Comparative study of the anti-inflammatory activity of methotrexate fixed on liposomes (MTX-LIPO) and free methotrexate (MTX).
Изучение противовоспалительной активности наноформы метотрексата (метотрексат, фиксированный на фосфолипидных наночастицах - MTX-LIPO) и свободного метотрексата проводилось в экспериментах на крысах Wistar самцах массой 200-220 г.The anti-inflammatory activity of methotrexate nanoform (methotrexate fixed on phospholipid nanoparticles - MTX-LIPO) and free methotrexate was studied in experiments on Wistar male rats weighing 200-220 g.
Адъювантный артрит у крыс моделировали с помощью живых микобактерий вакцинного штампа БЦЖ в группах животных: 1) интактный контроль, 2) плацебо 0,1 мл, 3) MTX-LIPO 3.6 мг/0,1 мл, 4) MTX-LIPO 0,72 мг/0.1 мл 5) МТХ-3.6 мг/0,1 мл. Лечение крыс начинали на фоне развившегося артрита, т.е. через 14-15 суток после введения БЦЖ, при наличии признаков полиартрита, т.е. кроме выраженного отека правой лапы увеличивался объем левой лапы, выявлялись утолщение хвоста, ушей и т.д. Контроль был представлен 2 группами: одна группа крыс после инъекции БЦЖ не получала никакого вещества, другая получала плацебо. Воспалительную реакцию на введение БЦЖ оценивали по степени увеличения объема правой и левой лап и голеностопных суставов, изменению массы тела животных, общему виду животных, состоянию волосяного покрова, хвоста и ушей.Adjuvant arthritis in rats was simulated using live BCG vaccine stamp in animals: 1) intact control, 2) placebo 0.1 ml, 3) MTX-LIPO 3.6 mg / 0.1 ml, 4) MTX-LIPO 0.72 mg / 0.1 ml 5) MTX-3.6 mg / 0.1 ml. Treatment of rats was started against the background of developed arthritis, i.e. 14-15 days after the introduction of BCG, in the presence of signs of polyarthritis, i.e. in addition to marked swelling of the right paw, the volume of the left paw increased, thickening of the tail, ears, etc. was revealed. The control was represented by 2 groups: one group of rats did not receive any substance after BCG injection, the other received placebo. The inflammatory response to BCG administration was assessed by the degree of increase in the volume of the right and left paws and ankle joints, changes in the body weight of animals, the general appearance of the animals, the condition of the hair, tail and ears.
Эффект терапевтического воздействия метотрексата оценивали по разнице в объемах лап у леченых (сравнение с исходным уровнем) и контрольных (нелеченых) животных, кроме того, оценивали процесс торможения адъювантного артрита в %, что и отражено в таблице 1.The effect of the therapeutic effect of methotrexate was evaluated by the difference in paw volumes in the treated (comparison with the initial level) and control (untreated) animals, in addition, the process of inhibition of adjuvant arthritis in% was evaluated, which is shown in table 1.
После забоя животных проводили морфологическое исследование голеностопных суставов. В результате было установлено, что внутрисуставное еженедельное введение метотрексата, фиксированного на фосфолипидных наночастицах, оказывает значительное подавление воспалительной реакции голеностопных суставов крыс, и в последующий период наблюдения (14-30 сутки) под действием препарата происходит заметное улучшение состояния патологически измененных голеностопных суставов, причем эффект был выявлен в обеих использованных дозах, но наиболее отчетливо он был выражен при использовании дозы 3,6 мг/0,1 мл.After slaughtering the animals, a morphological study of the ankle joints was performed. As a result, it was found that intra-articular weekly administration of methotrexate fixed on phospholipid nanoparticles significantly suppresses the inflammatory reaction of rat ankle joints, and in the subsequent observation period (14-30 days), under the influence of the drug, a noticeable improvement in the condition of pathologically changed ankle joints occurs, and the effect was detected in both doses used, but it was most clearly expressed when using a dose of 3.6 mg / 0.1 ml.
Таким образом, изучение на модели адъювантного артрита у крыс наноформы метотрексата, вводимого внутрь сустава, показало его эффективность в отношении воспалительных изменений голеностопных суставов, индуцированных введением БЦЖ. Терапевтическое действие МТХ-LIPO выражалось в существенном торможении артрического процесса у крыс. При этом антиартрический эффект MTX-LIPO был более значительным при использовании большей дозы -3,6 мг/0,1 мл и превосходил противовоспалительный эффект свободного метотрексата.Thus, the study on a model of adjuvant arthritis in rats of the methotrexate nanoform introduced into the joint showed its effectiveness against inflammatory changes in the ankle joints induced by BCG. The therapeutic effect of MTX-LIPO was expressed in significant inhibition of the arthritic process in rats. Moreover, the anti-arthritic effect of MTX-LIPO was more significant when using a larger dose of -3.6 mg / 0.1 ml and exceeded the anti-inflammatory effect of free methotrexate.
Claims (4)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2006114078/15A RU2330664C2 (en) | 2006-04-26 | 2006-04-26 | Medical product and method of rheumatic diseases treatment |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2006114078/15A RU2330664C2 (en) | 2006-04-26 | 2006-04-26 | Medical product and method of rheumatic diseases treatment |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2006114078A RU2006114078A (en) | 2007-11-20 |
| RU2330664C2 true RU2330664C2 (en) | 2008-08-10 |
Family
ID=38958973
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2006114078/15A RU2330664C2 (en) | 2006-04-26 | 2006-04-26 | Medical product and method of rheumatic diseases treatment |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2330664C2 (en) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2010128889A1 (en) * | 2009-05-05 | 2010-11-11 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Экoбиoфapм" | Pharmaceutical composition containing arbidol in the form of phospholipid nanoparticles |
| CN102716463A (en) * | 2012-06-19 | 2012-10-10 | 北京中海康医药科技发展有限公司 | Glycyrrhizic acid organic salt phospholipid ligand and preparation thereof |
-
2006
- 2006-04-26 RU RU2006114078/15A patent/RU2330664C2/en not_active IP Right Cessation
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2010128889A1 (en) * | 2009-05-05 | 2010-11-11 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Экoбиoфapм" | Pharmaceutical composition containing arbidol in the form of phospholipid nanoparticles |
| CN102413829A (en) * | 2009-05-05 | 2012-04-11 | 埃科比奥法姆有限公司 | Pharmaceutical composition containing arbidol in the form of phospholipid nanoparticles |
| CN102716463A (en) * | 2012-06-19 | 2012-10-10 | 北京中海康医药科技发展有限公司 | Glycyrrhizic acid organic salt phospholipid ligand and preparation thereof |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2006114078A (en) | 2007-11-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Tran et al. | Overview of the manufacturing methods of solid dispersion technology for improving the solubility of poorly water-soluble drugs and application to anticancer drugs | |
| US8367116B2 (en) | Buoyant polymer particles for delivery of therapeutic agents to the central nervous system | |
| RU2411942C2 (en) | Pharmaceutic composition including arbidol in composition of phospholipid nanoparticles | |
| US20240000945A1 (en) | Co-amorphous form of a substance and a protein | |
| Allam et al. | Bioavailability: A pharmaceutical review | |
| ES2207639T3 (en) | IMMUNOLOGICAL MODULAR COMPOSITIONS FROM THE BILIS. | |
| CN105101950A (en) | Pharmaceuticals for oral delivery | |
| CN1997383A (en) | Aequorin-containing compositions and methods of using same | |
| RU2330664C2 (en) | Medical product and method of rheumatic diseases treatment | |
| US20210177824A1 (en) | Extended release formulations for intra-articular applications | |
| CN101480404B (en) | Medicinal product of oryzanol and preparation method thereof | |
| RU2299741C1 (en) | Peptide normalizing metabolism in osseous and cartilage tissue, pharmaceutical composition based on thereof and method for its using | |
| UA61955C2 (en) | Novel salts of bpc-peptides with organoprojective activity, a process for preparing and use thereof in therapy | |
| RU2290922C1 (en) | Agent for treatment of joint diseases | |
| Bao et al. | Hydroxy-safflower yellow A composites: An effective strategy to enhance anti-myocardial ischemia by improving intestinal permeability | |
| CN110339169A (en) | Coat nano vesicle preparations and its application of vitamin D and vitamin K | |
| RU2292203C1 (en) | Means for treating patients for articulation diseases | |
| CN106507666A (en) | 1,3 third disulfonic acid or its pharmaceutically acceptable salt are used for the purposes for treating sarcoidosis | |
| RU2496511C1 (en) | Pharmaceutical composition, agent (versions) and method of preventing and treating arthritis, osteoarthrosis and vertebral osteochondrosis (versions) | |
| CN107802632B (en) | Traditional Chinese medicine effective component composition for treating rheumatic arthritis and rheumatoid arthritis and application thereof | |
| RU2535054C1 (en) | Method for preparing phospholipid nanoparticle enclosed chlorine e6 composition for photodynamic therapy | |
| RU2763761C1 (en) | Hepatoprotective humic agent | |
| RU2694221C1 (en) | Anti-inflammatory preparation based on ketoprofen and a method for production thereof | |
| US20240108685A1 (en) | Oral liposomal compositions | |
| RU2448715C1 (en) | Phospholipid therapeutic composition with nano-sized particles for lipid storage disease and comatose states and method for preparing it |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20160427 |