RU2322091C1 - Composition of biologically active substances and method for preparing its nanodispersion - Google Patents
Composition of biologically active substances and method for preparing its nanodispersion Download PDFInfo
- Publication number
- RU2322091C1 RU2322091C1 RU2006127735/13A RU2006127735A RU2322091C1 RU 2322091 C1 RU2322091 C1 RU 2322091C1 RU 2006127735/13 A RU2006127735/13 A RU 2006127735/13A RU 2006127735 A RU2006127735 A RU 2006127735A RU 2322091 C1 RU2322091 C1 RU 2322091C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- composition
- betulin
- active substances
- biologically active
- water
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Description
Область техникиTechnical field
Изобретение относится к композиции биологически активных веществ, которая может использоваться как биологическая добавка к пище, а также в профилактике и лечении ряда заболеваний людей и животных. Более конкретно оно относится к биоактивным композициям, полученным из натуральных продуктов растительного происхождения.The invention relates to a composition of biologically active substances, which can be used as a biological food supplement, as well as in the prevention and treatment of a number of diseases in humans and animals. More specifically, it relates to bioactive compositions obtained from natural products of plant origin.
Уровень техникиState of the art
Ценность, в том числе и терапевтическая, питательных добавок (нутрицевтиков или биологически активных добавок БАД) неопровержимо доказана большим количеством научных данных. Благодаря содержанию в малом объеме комплекса ежедневно необходимых человеку веществ растительного, животного и минерального происхождения, они не только служат средством балансировки рациона, но и становятся безопасной заменой многих лекарств либо защитниками организма от побочных воздействий лекарств.The value, including therapeutic, of nutritional supplements (nutraceuticals or dietary supplements) is conclusively proven by a large amount of scientific data. Due to the content in a small volume of the complex daily of human-necessary substances of plant, animal and mineral origin, they not only serve as a means of balancing the diet, but also become a safe substitute for many drugs or protect the body from the side effects of drugs.
В народной медицине с незапамятных времен в качестве источников растительного происхождения биологически активных веществ использовалась береза, а со второй половины 19 века началось научное изучение, в частности, таких содержащихся в белой части коры березы (бересте) веществ как бетулин и бетулиновая кислота.From time immemorial, traditional medicine used birch as a source of plant origin of biologically active substances, and in the second half of the 19th century a scientific study began, in particular, of substances such as betulin and betulinic acid contained in the white part of the birch bark (birch bark).
К настоящему времени опубликованы положительные результаты по более чем 20 видам биологической активности бетулина и более 10 бетулиновой кислоты.To date, positive results have been published on more than 20 types of biological activity of betulin and more than 10 betulinic acid.
Наиболее близким аналогом (прототипом) настоящего изобретения является патент Российской Федерации №2254032. Он относится к композиции - смеси биологически активных веществ, полученных экстракцией бересты, включающей, в мас.%: бетулин в количестве 71-78%, бетулиновую кислоту в количестве 3-10% и сопутствующие вещества в количестве 12-26%. В качестве сопутствующих веществ в композиции могут присутствовать лупеол, овеол, ацетат бетулина, олеаноновая кислота, а также смеси указанных веществ.The closest analogue (prototype) of the present invention is the patent of the Russian Federation No. 2254032. It relates to a composition - a mixture of biologically active substances obtained by extraction of birch bark, including, in wt.%: Betulin in an amount of 71-78%, betulinic acid in an amount of 3-10% and related substances in an amount of 12-26%. As concomitant substances in the composition may be present lupeol, oveol, betulin acetate, oleanonic acid, as well as mixtures of these substances.
Недостатком известной композиции является низкая растворимость в воде, обусловленная склонностью входящих в нее веществ, в первую очередь бетулина, к образованию в насыщенном растворе крупных кристаллов (растворимость бетулина в воде не превышает 1 мкг/мл). Плохая растворимость влечет за собой пониженную биодоступность композиции.A disadvantage of the known composition is its low solubility in water, due to the tendency of its constituent substances, primarily betulin, to form large crystals in a saturated solution (the solubility of betulin in water does not exceed 1 μg / ml). Poor solubility entails reduced bioavailability of the composition.
Сущность изобретения.SUMMARY OF THE INVENTION
Задачей настоящего изобретения является создание композиции биологически активных веществ, получаемых экстракцией бересты, лишенной указанного недостатка, то есть переводимой в водорастворимую форму. В данном случае термин «водорастворимая форма» означает нанодисперсию с таким размером частиц, который приемлем для внутрисосудистого введения.The objective of the present invention is to provide a composition of biologically active substances obtained by extraction of birch bark, devoid of this drawback, that is, convertible to a water-soluble form. In this case, the term "water-soluble form" means nanodispersion with a particle size that is acceptable for intravascular administration.
Другой задачей настоящего изобретения является создание композиции биоактивных веществ, которая ввиду указанного преимущества может использоваться для последующего изготовления на ее основе лекарственных средств, которые могут вводиться не только перорально, но и иным путем, например инъекционно.Another objective of the present invention is the creation of a composition of bioactive substances, which, in view of the indicated advantage, can be used for subsequent manufacture on its basis of drugs that can be administered not only orally, but also by other means, for example, by injection.
Другим аспектом настоящего изобретения является создание способа получения композиции биологически активных веществ в виде наносуспензии.Another aspect of the present invention is to provide a method for producing a composition of biologically active substances in the form of nanosuspension.
Композиция биологически активных веществ согласно настоящему изобретению включает в себя, мас.%:The composition of biologically active substances according to the present invention includes, in wt.%:
Основным отличием композиции согласно настоящему изобретению от прототипа является наличие в ней соединения 3-O-кофеата бетулина (далее для краткости «кофеат бетулина», другие менее употребляемые названия этого вещества - 3-O-кофеоилбетулин и 3-O-(3,4-дигидроксициннамоил)бетулин. Как показали исследования авторов настоящего изобретения (описываемые далее), именно наличие этого вещества в композиции позволило получить ее в водорастворимой форме, в форме нанодисперсий.The main difference between the composition according to the present invention from the prototype is the presence of a compound of 3-O-betulin coffee (hereinafter for brevity, “betulin coffee”, other less used names of this substance are 3-O-coffee-betulin and 3-O- (3,4- dihydroxycinamoamide) betulin As studies of the authors of the present invention (described below) have shown, it is the presence of this substance in the composition that made it possible to obtain it in a water-soluble form, in the form of nanodispersions.
Исследования показали, что смеси, содержащие кофеат бетулина, в отличие от композиций, не содержащих его или содержащих в незначительных количествах, образуют стабильные нанодисперсии, причем увеличение содержания кофеата бетулина приводит к уменьшению размера частиц. Дисперсии со значительным содержанием кофеата бетулина (5 и более процентов) по данным электронной микрографии состоят в основном из сферических частиц диаметром от 30 до 300 нм. Смеси, содержащие меньше кофеата бетулина или не содержащие вовсе, в тех же условиях образуют кристаллы разнообразной формы с размерами более 1 мкм, склонные к агрегации. Наиболее совершенные дисперсии с наименьшим размером частиц образует чистый кофеат бетулина.Studies have shown that mixtures containing betulin caffeate, in contrast to compositions not containing it or containing small amounts, form stable nanodispersions, and an increase in the content of betulin caffeate leads to a decrease in particle size. Dispersions with a significant content of betulin caffeate (5 percent or more) according to electron micrographs consist mainly of spherical particles with a diameter of 30 to 300 nm. Mixtures containing less betulin coffee or not at all, under the same conditions, form crystals of various shapes with sizes greater than 1 μm, prone to aggregation. The finest dispersions with the smallest particle size are pure betulin coffee.
Способствуют достижению указанного технического результата - увеличению растворимости композиции и уменьшению по сравнению с прототипом содержания бетулина, обладающего, как указано выше, способностью образования крупных, плохо растворимых кристаллов. Важно отметить, что при заявляемом содержании бетулина в композиции (от 65 до 71 мас.%) она не утрачивает своей биологической активности.They contribute to the achievement of the indicated technical result — an increase in the solubility of the composition and a decrease in the content of betulin, which, as indicated above, has the ability to form large, poorly soluble crystals as compared to the prototype. It is important to note that with the claimed content of betulin in the composition (from 65 to 71 wt.%), It does not lose its biological activity.
Другим объектом настоящего изобретения является способ получения композиции биологически активных веществ в виде нанодисперсии, согласно которому композицию растворяют в органическом растворителе, прибавляют к раствору воду при соотношении вода:раствор около 25:1 и энергично перемешивают раствор и воду с последующим удалением растворителя и основной части воды.Another object of the present invention is a method for producing a composition of biologically active substances in the form of nanodispersion, according to which the composition is dissolved in an organic solvent, water is added to the solution at a water: solution ratio of about 25: 1, and the solution and water are mixed vigorously, followed by removal of the solvent and the main part of water .
При этом получаются нанодисперсии с размером частиц 20-200 нм в концентрациях до 1,5 мг/мл или выше.In this case, nanodispersions are obtained with a particle size of 20-200 nm in concentrations up to 1.5 mg / ml or higher.
Раскрытие изобретения.Disclosure of the invention.
Кора березы сегодня используется для получения ценных биологически активных веществ. Из наружного слоя коры березы (бересты) в 1788 году русский химик и фармацевт, академик Ловиц Т.Е. выделил вещество, названное позднее «бетулин» (бетулинол - тритерпеновый спирт). Именно бетулин является защитным веществом дерева и окрашивает его ствол в белый цвет.Birch bark is used today to produce valuable biologically active substances. From the outer layer of birch bark (birch bark) in 1788, a Russian chemist and pharmacist, Academician T. Lovits isolated a substance called later "betulin" (betulinol - triterpene alcohol). It is betulin that is the protective substance of the tree and paints its trunk in white.
Целебные свойства этого природного соединения далеко еще не познаны медициной. Интерес к этому уникальному биологически активному и малотоксичному веществу российских и зарубежных ученых только возрастает (Семенченко, 1993, Кожевников, 1955, Eckerman, 1985, Wheeler, 1899, Sheth, 1973, Fugioka, 1994, Дьячук, 2000 и др.).The healing properties of this natural compound are far from known by medicine. Interest in this unique biologically active and low-toxic substance of Russian and foreign scientists is only growing (Semenchenko, 1993, Kozhevnikov, 1955, Eckerman, 1985, Wheeler, 1899, Sheth, 1973, Fugioka, 1994, Dyachuk, 2000, etc.).
Специалисты Российской компании «Березовый мир» создали промышленную установку и новую технологию по получению экстракта из коры березы. Полученный продукт «Бересты экстракт сухой» (БЭС) представляет собой сумму природных тритерпеновых соединений, основным из которых является бетулин, с содержанием его в экстракте около 70%.Specialists of the Russian company Birch World created an industrial installation and a new technology for extracting birch bark. The resulting product “Birch bark extract dry” (BES) is the sum of natural triterpene compounds, the main of which is betulin, with its content in the extract of about 70%.
Проведенные исследования показали высокую активность экстракта, обусловленную содержанием в экстракте суммы природных тритерпеновых соединений.Studies have shown a high activity of the extract, due to the content in the extract of the amount of natural triterpene compounds.
В таблице 1 показаны виды биологической и терапевтической активностей, обнаруженных и исследовавшихся у БЭС.Table 1 shows the types of biological and therapeutic activities detected and studied in BES.
Вместе с тем, была выявлена крайне плохая растворимость БЭС в воде, что затрудняет его использование в качестве лекарственного препарата, уменьшает его эффективность как БАД. Поэтому создание водорастворимой формы БЭС весьма актуально, так как должно привести к увеличению его биодоступности.At the same time, the extremely poor solubility of BAS in water was revealed, which complicates its use as a medicine and reduces its effectiveness as a dietary supplement. Therefore, the creation of a water-soluble form of BES is very important, as it should lead to an increase in its bioavailability.
В составе БЭС кроме бетулина, бетулиновой кислоты и лупеола как основных тритерпеновых соединений, определяющих его биологическую активность, в процессе исследований авторами настоящего изобретения было обнаружено присутствие химического соединения, которое было идентифицировано ими как 3-O-(3,4-дигидроксициннамоил)бетулин (далее кофеат бетулина), являющийся сложным эфиром бетулина и кофейной (3,4-дигидрокси-транс-коричной) кислоты. Он имеет химическую формулуIn addition to betulin, betulinic acid, and lupeol as the main triterpene compounds that determine its biological activity, the authors of the present invention found the presence of a chemical compound that they identified as 3-O- (3,4-dihydroxycinamamoyl) betulin ( hereinafter betulin coffee), which is an ester of betulin and coffee (3,4-dihydroxy-trans-cinnamic) acid. It has the chemical formula
На фиг.1 представлен 1H-ЯМР спектр (CDCl3, 400 МГц) кофеата бетулина, на фиг.2 - то же его фрагмента в алифатической части, на фиг.3 - то же его фрагмента в ароматической части, на фиг.4 - электронный спектр кофеата бетулина в этаноле с=1,66×10-4M, на фиг.5 - хроматограмма кофеата бетулина, выделенного из БЭС колоночной хроматографией на силикагеле, на фиг.6 - масс-спектр кофеата бетулина.Figure 1 presents 1 H-NMR spectrum (CDCl 3 , 400 MHz) of betulin coffee, figure 2 is the same fragment in the aliphatic part, figure 3 is the same fragment in the aromatic part, figure 4 - the electronic spectrum of betulin caffeate in ethanol with = 1.66 × 10 -4 M, Fig. 5 is a chromatogram of betulin caffeate isolated from BES by column chromatography on silica gel, and Fig. 6 is a mass spectrum of betulin caffeate.
Кофеат бутулина отличается от других компонентов композиции (бетулина и лупеола) меньшей хроматографической подвижностью (то есть, вероятно, наличием дополнительных полярных групп) и интенсивным поглощением в УФ-диапазоне, характерным для ароматических и гетероароматических соединений.Butulin caffeine differs from other components of the composition (betulin and lupeol) in lower chromatographic mobility (that is, probably, the presence of additional polar groups) and intense absorption in the UV range, characteristic of aromatic and heteroaromatic compounds.
1H-ЯМР спектр этого вещества (фиг.1) свидетельствует, что оно имеет в качестве фрагмента бетулин. Количество метильных групп и их химический сдвиг, характерный сигнал концевой двойной связи в положении 28 (4.57 и 4.67 м.д.), а также общий вид спектра показывает, что алифатическая часть молекулы представляет собой остаток бетулина (фиг.2). Так, сигналы протонов при С28 (3.81 и 3.34 м.д.) практически совпадают с сигналами аналогичных протонов в бетулине (3.78, 3.31 м.д.), а сигнал протона при С3 сдвинут (4.57 м.д.) в область сильного поля по сравнению с бетулином (3.17 м.д.), что дает основание предположить, что гидроксильная группа при С3 замещена. Положение сигнала протона при С19, очень чувствительного к изменениям в окружающей области, совпадает с таковым для бетулина (2.36 м.д.), что соответствует предполагаемой структуре. 1 H-NMR spectrum of this substance (figure 1) indicates that it has betulin as a fragment. The number of methyl groups and their chemical shift, a characteristic signal of the terminal double bond at position 28 (4.57 and 4.67 ppm), as well as the general view of the spectrum, shows that the aliphatic part of the molecule is the residue of betulin (figure 2). Thus, the proton signals at C28 (3.81 and 3.34 ppm) practically coincide with the signals of similar protons in betulin (3.78, 3.31 ppm), and the proton signal at C3 is shifted (4.57 ppm) to the high-field region compared with betulin (3.17 ppm), which suggests that the hydroxyl group at C3 is substituted. The position of the proton signal at C19, which is very sensitive to changes in the surrounding region, coincides with that for betulin (2.36 ppm), which corresponds to the proposed structure.
Кроме того, 1H-ЯМР спектр исследуемого соединения наряду с характерными для бетулина сигналами протонов метильных групп и алифатических колец содержит сигналы в области ароматических протонов. Суммарная интегральная интенсивность этих сигналов (относительно алифатической части) равна 5 (фиг.3). Из этого следует, что в составе молекулы присутствует ароматический или гетероароматический структурный компонент.In addition, the 1 H-NMR spectrum of the test compound along with the signals of protons of methyl groups and aliphatic rings characteristic of betulin contains signals in the region of aromatic protons. The total integrated intensity of these signals (relative to the aliphatic part) is equal to 5 (Fig.3). From this it follows that in the composition of the molecule there is an aromatic or heteroaromatic structural component.
Исходя из полученных и литературных данных авторы сделали вывод, что соединение является сложным эфиром бетулина и кофейной (3,4-дигидроксикоричной) кислоты - соединения, часто присутствующего в растительных источниках.Based on the obtained and published data, the authors concluded that the compound is an ester of betulin and caffeic (3,4-dihydroxycinnamic) acid, a compound often found in plant sources.
УФ-спектр исследуемого вещества практически совпадает со спектром кофейной кислоты, что говорит об идентичности хромофоров.The UV spectrum of the test substance almost coincides with the spectrum of caffeic acid, which indicates the identity of the chromophores.
Подтверждением индентификации выделенного вещества послужил масс-спектр, снятый в режиме регистрации отрицательных ионов (ионизация - электроспрей) (рис.6). Наличие кластерного иона 1207 подтверждает интерпретацию сигнала m/z=603 как молекулярного иона (М-Н)-. Таким образом, молекулярная масса равна 604, что совпадает с вычисленной молекулярной массой кофеата бетулина.The identification of the isolated substance was confirmed by the mass spectrum recorded in the registration mode of negative ions (ionization - electrospray) (Fig. 6). The presence of a cluster ion 1207 confirms the interpretation of the signal m / z = 603 as a molecular ion (M-H) - . Thus, the molecular weight is 604, which coincides with the calculated molecular weight of betulin caffeate.
Изменение химического сдвига (4.57 м.д., перекрывается с сигналом двойной связи) протона 3 в остатке бетулина указывает на то, что сложноэфирная связь образуется по 3-ОН группе лупанового скелета.A change in the chemical shift (4.57 ppm, overlaps with the double bond signal) of proton 3 in the betulin residue indicates that an ester bond is formed at the 3-OH group of the lupane backbone.
Окончательным доказательством структуры соединения можно считать практическое совпадение химических сдвигов протонов в 1H-ЯМР спектре со значениями, описанными в литературе для этого соединения (Pan H., Lundgren L.N., Andersson R. Triterpene caffeates from bark of Betula pubescens. Phytochemistry. 1994; V.37 (3): P.795-799).The final proof of the structure of the compound can be considered the practical coincidence of chemical proton shifts in the 1 H-NMR spectrum with the values described in the literature for this compound (Pan H., Lundgren LN, Andersson R. Triterpene caffeates from bark of Betula pubescens. Phytochemistry. 1994; V; .37 (3): P.795-799).
При дальнейших исследованиях авторами было обнаружено, что при определенном (выше 5%) содержании идентифицированного вещества (кофеата бетулина) оно оказывает влияние на водорастворимость экстракта бересты, в частности делая возможным приготовление из него устойчивых нанодисперсий - эффективной лекарственной формы, представляющей собой нанокристаллы активного вещества, как правило, стабилизированные поверхностно-активными веществами. Поскольку в этом случае активное вещество является одновременно и носителем, включение его (отношение активное вещество/носитель) максимально близко к 100%.In further studies, the authors found that at a certain (above 5%) content of the identified substance (betulin coffee), it affects the water solubility of the birch bark extract, in particular, making it possible to prepare stable nanodispersions from it - an effective dosage form, which is nanocrystals of the active substance, generally stabilized by surfactants. Since in this case the active substance is also a carrier, its inclusion (the ratio of active substance / carrier) is as close to 100% as possible.
Способ получения композиции биологически активных веществ в форме наносуспензии согласно изобретению включает в себя следующие операции:A method of obtaining a composition of biologically active substances in the form of a nanosuspension according to the invention includes the following operations:
- растворение экстракта (композиции) в органическом растворителе при предпочтительной концентрации 2,5-5 г/л:- dissolving the extract (composition) in an organic solvent at a preferred concentration of 2.5-5 g / l:
- введение указанного раствора в контакт с большим количеством (до 25 объемов по отношению к объему раствора) воды или водных растворов растворителей;- bringing said solution into contact with a large amount (up to 25 volumes relative to the volume of the solution) of water or aqueous solvent solutions;
- перемешивание полученной смеси;- mixing the resulting mixture;
- удаление растворителя и основной части воды.- removal of solvent and the bulk of the water.
Было обнаружено, что стабильность нанодисперсии возрастает при ее приготовлении при низких температурах, близких к 0°С.It was found that the stability of nanodispersion increases when it is prepared at low temperatures close to 0 ° C.
В качестве растворителей могут использоваться смешивающиеся с водой органические растворители, такие как тетрагидрофуран, ацетон, диоксан.Miscible with water, organic solvents such as tetrahydrofuran, acetone, dioxane can be used as solvents.
Удаление растворителя может осуществляться выпариванием, лиофилизацией, ультрафильтрацией, вымораживанием и т.п.Solvent removal can be carried out by evaporation, lyophilization, ultrafiltration, freezing, etc.
При получении нанодисперсии в момент образования наночастиц происходит диффузия молекул растворителя из первоначально образовавшихся капель раствора композиции в воду и диффузия молекул воды в упомянутые капли. Результатом первого процесса является уменьшение размеров капель, увеличение концентрации компонентов композиции в капле, что приводит, в конце концов, к достижению концентрации насыщения какого-либо соединения. Из такого пересыщенного раствора должны выпадать кристаллы, что и происходит, если в растворе достаточно чистое вещество, и увеличение концентрации происходит достаточно медленно. С другой стороны, если в смеси присутствуют вещества, кристаллизующиеся с трудом (как, например, кофеат бетулина), вместо кристаллов образуется аморфный осадок. Второй процесс (диффузия воды в капли раствора композиции) приводит к катастрофическому уменьшению растворимости всех веществ в капле, что также ведет к образованию твердой субстанции. И так же, как и в первом случае, возможно альтернативное образование либо кристаллов, либо аморфной субстанции. Исследования показали, что в композициях с содержанием кофеата бетулина 5% и выше образуются в основном сферические частицы; при меньшем содержании кофеата бетулина - кристаллы бетулина гораздо большего размера чем сферические аморфные частицы.When nanodispersion is obtained at the time of the formation of the nanoparticles, the solvent molecules diffuse from the initially formed drops of the composition solution into water and the water molecules diffuse into the said drops. The result of the first process is a reduction in the size of the droplets, an increase in the concentration of the components of the composition in the droplet, which ultimately leads to the achievement of a saturation concentration of any compound. Crystals should precipitate from such a supersaturated solution, which happens if the substance is sufficiently pure, and the concentration increases slowly enough. On the other hand, if substances that crystallize with difficulty (such as betulin coffee) are present in the mixture, an amorphous precipitate forms instead of crystals. The second process (water diffusion into droplets of the composition solution) leads to a catastrophic decrease in the solubility of all substances in the droplet, which also leads to the formation of a solid substance. And just as in the first case, an alternative formation of either crystals or an amorphous substance is possible. Studies have shown that in compositions with a betulin caffeate content of 5% or higher, mainly spherical particles are formed; with a lower content of betulin caffeate, betulin crystals are much larger than spherical amorphous particles.
Авторы изобретения полагают, что кофеат бетулина является «цементирующим» веществом при получении нанодисперсий.The inventors believe that betulin caffeine is a "cementing" substance in the preparation of nanodispersions.
Известно, что в аморфном состоянии лекарственные субстанции имеют лучшую растворимость и большую скорость растворения, чем в кристаллическом состоянии, то есть лучшую биодоступность.It is known that in an amorphous state, drug substances have better solubility and a greater dissolution rate than in a crystalline state, that is, better bioavailability.
Далее изобретение будет описано на основе примеров его осуществления, не имеющих ограничительного характера.The invention will now be described on the basis of non-limiting examples of its implementation.
Пример 1. Получение композиции биологически активных веществ.Example 1. Obtaining a composition of biologically active substances.
Композицию биологически активных веществ получали в виде экстракта бересты способом по патенту РФ №2192879, принадлежащему заявителю данной заявки.The composition of biologically active substances was obtained in the form of a birch bark extract according to the patent of the Russian Federation No. 2192879, which belongs to the applicant of this application.
Экстракцию измельченной бересты осуществляли толуолом в течение около 1,5 часов при постоянном перемешивании и температуре 90-110°С. После завершения процесса экстракции осуществляли фильтрацию массы через ткань при температуре 40-50°С.The extraction of crushed birch bark was carried out with toluene for about 1.5 hours with constant stirring and a temperature of 90-110 ° C. After completion of the extraction process, the mass was filtered through tissue at a temperature of 40-50 ° C.
Из шрота был частично отогнан толуол, а оставшуюся массу охлаждали в течение 6-10 часов до температуры 15-5°С, после чего проводили повторную тканевую фильтрацию и промывку массы на фильтре толуолом. Затем осуществляли вакуумную отгонку толуола и получали конечный продукт в виде кристаллов желтоватого цвета. Полученный экстракт подвергли высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) при следующих условиях: колонка Separon S6×C18(3,3·150 мм), элюент: ацетонитрил/метанол/вода + фосфорная кислота 40/40/20+0,6 мл на 100 мл смеси, расход элюента 0,5 мл/мин.Toluene was partially distilled from the meal, and the remaining mass was cooled for 6-10 hours to a temperature of 15-5 ° C, after which repeated tissue filtration and washing of the mass on the filter with toluene were carried out. Then, vacuum distillation of toluene was carried out and the final product was obtained in the form of yellowish crystals. The obtained extract was subjected to high performance liquid chromatography (HPLC) under the following conditions: Separon S6 × C 18 column (3.3 × 150 mm), eluent: acetonitrile / methanol / water +
Детекция осуществлялась с помощью УФ-детектора при 210 нм. Состав экстракта по результатам ВЭЖХ, %:Detection was carried out using a UV detector at 210 nm. The composition of the extract according to the results of HPLC,%:
бетулин - 65,betulin - 65,
лупеол - 12,Lupeol - 12,
кофеат бетулин 15,
сопутствующие вещества - остальное до 100%.related substances - the rest is up to 100%.
Пример 2.Example 2
Получали экстракт по примеру 1 и подвергали его дополнительной очистке этиловым спиртом, затем промывке водой и сушке. При этом получали кристаллы от кремового до белого цвета (при дополнительной очистке увеличивалось содержание бетулина и лупеола и уменьшалось содержание кофеата бетулина, придававшего кристаллам желтый цвет). По результатам ВЭЖХ экстракт имел следующий состав, %:The extract was obtained according to example 1 and subjected to additional purification with ethyl alcohol, then washing with water and drying. In this case, crystals were obtained from cream to white (with additional purification, the content of betulin and lupeol increased and the content of betulin caffeate, which gave the crystals yellow, decreased). According to the results of HPLC, the extract had the following composition,%:
бетулин - 71,betulin - 71,
лупеол - 16,Lupeol - 16,
кофеат бетулина - 5,betulin coffee - 5,
сопутствующие вещества - остальное до 100%.related substances - the rest is up to 100%.
Пример 3.Example 3
В круглодонную колбу с 5 мг композиции, полученной по примеру 1, в 1 мл тетрагидрофурана (5 мг/мл) при сильном перемешивании добавляли пипеткой 25 мл дистиллированной воды. Дисперсию перемешивали еще в течение 5 минут. Растворитель упаривали на роторном испарителе при температуре не выше 35-40°С. Полученную нанодисперсию обрабатывали на ультразвуковой бане и затем концентрировали на роторном испарителе до 1-1.5 мг/мл. Спектротурбодиметрией оценили средний размер полученных наночастиц как 187 нм. Одну из электронных микрофотографий образца можно видеть на фиг.7. Кроме сферических наночастиц частиц другой формы не наблюдалось.In a round bottom flask with 5 mg of the composition obtained according to example 1, in 1 ml of tetrahydrofuran (5 mg / ml) with vigorous stirring was added a pipette of 25 ml of distilled water. The dispersion was mixed for another 5 minutes. The solvent was evaporated on a rotary evaporator at a temperature not exceeding 35-40 ° C. The obtained nanodispersion was processed in an ultrasonic bath and then concentrated on a rotary evaporator to 1-1.5 mg / ml. Spectroturbodimetry estimated the average size of the obtained nanoparticles as 187 nm. One of the electron micrographs of the sample can be seen in Fig.7. In addition to spherical nanoparticles, particles of a different shape were not observed.
На основе микрофотографий построена гистограмма (фиг.8), из которой видно, что в нанодисперсии присутствуют частицы от 20 до 200 нм, в наибольшем же количестве частицы размером от 90 до 110 нм.Based on microphotographs, a histogram was constructed (Fig. 8), from which it can be seen that particles from 20 to 200 nm are present in the nanodispersion, while the largest number of particles are from 90 to 110 nm in size.
Пример 4.Example 4
В круглодонную колбу с 5 мг композиции, полученной по примеру 1, в 1 мл тетрагидрофурана (5 мг/мл) при сильном перемешивании пипеткой добавляли необходимый избыток дистиллированной воды (12.5 мл или 6 мл). Дисперсию перемешивали еще в течение 5 минут. Растворитель упаривали на роторном испарителе при температуре не выше 35-40°С. Полученную нанодисперсию обрабатывали на ультразвуковой бане и затем концентрировали на роторном испарителе до 1-1.5 мг/мл. Полученные таким образом дисперсии имели изначально более крупные частицы, чем в примере 2 (средний размер в 445 нм при избытке воды 12.5:1 и 259 нм при избытке воды 6:1), и не были стабильны (нанодисперсии, приготовленные при избытке воды 25:1 оставались стабильными, по крайней мере, в течение одной недели).In a round bottom flask with 5 mg of the composition obtained according to example 1, in 1 ml of tetrahydrofuran (5 mg / ml), with the strong stirring with a pipette, the necessary excess of distilled water (12.5 ml or 6 ml) was added. The dispersion was mixed for another 5 minutes. The solvent was evaporated on a rotary evaporator at a temperature not exceeding 35-40 ° C. The obtained nanodispersion was processed in an ultrasonic bath and then concentrated on a rotary evaporator to 1-1.5 mg / ml. The dispersions thus obtained had initially larger particles than in Example 2 (average size 445 nm with an excess of water 12.5: 1 and 259 nm with an excess of water 6: 1), and were not stable (nanodispersions prepared with an excess of water 25: 1 remained stable for at least one week).
Пример 5.Example 5
По методике, представленной в примере 3, была приготовлена нанодисперсия кофеата бетулина. На электронной микрофотографии (фиг.9) видны сферические частицы, неотличимые от наночастиц, получаемых из композиции по примеру 3. Этот дает основания полагать, что сферическая форма наночастиц обусловлена именно присутствием в композиции кофеата бутулина, поскольку при попытках получить нанодисперсии из бетулина и лупеола образовывались грубые дисперсии, состоящие из нанодосок, наноканатов и т.п., но сферические частицы обнаружены не были.According to the methodology presented in example 3, a nanodispersion of betulin caffeate was prepared. Electron micrographs (Fig. 9) show spherical particles indistinguishable from nanoparticles obtained from the composition of Example 3. This suggests that the spherical shape of the nanoparticles is due to the presence of butulin in the composition of caffeate, since when trying to obtain nanodispersions from betulin and lupeol coarse dispersions consisting of nanosubs, nanoscopic ropes, etc., but spherical particles were not detected.
Пример 6.Example 6
Спектротурбодиметрией был оценен средний размер наночастиц, полученных по примеру 3 при температуре, близкой к 0°С и 55-60°С. Он оказался равным 144 нм и 2300 нм соответственно. На электронных микрофотографиях дисперсий, полученных при повышенной температуре, видны крупные нанокристаллы, собирающиеся в агрегаты. Существенно то, что дисперсии, приготовленные при пониженной температуре, получались более стабильными, не нуждались в обработке на ультразвуковой бане при получении.Spectroturbodimetry was estimated the average size of the nanoparticles obtained in example 3 at a temperature close to 0 ° C and 55-60 ° C. It turned out to be equal to 144 nm and 2300 nm, respectively. On electron micrographs of dispersions obtained at elevated temperature, large nanocrystals are collected in aggregates. It is significant that the dispersions prepared at a lower temperature were more stable, did not need to be processed in an ultrasonic bath upon receipt.
Пример 7.Example 7
Для исследования влияния концентрации композиции на размер наночастиц была приготовлена серия дисперсий с разной концентрацией: 2.5, 5, 7, 9 и 10 мг/мл. Было установлено, что стабильными получаются дисперсии, полученные из растворов с концентрацией 2.5 и 5 мг/мл, в остальных быстро образуется осадок.To study the effect of the concentration of the composition on the size of the nanoparticles, a series of dispersions was prepared with different concentrations: 2.5, 5, 7, 9, and 10 mg / ml. It was found that dispersions obtained from solutions with a concentration of 2.5 and 5 mg / ml are stable, while a precipitate forms quickly in the rest.
Промышленная применимостьIndustrial applicability
Получение композиции в виде нанодисперсий, состоящих из сферических частиц, в которых вещества находятся в аморфном состоянии, имеет несколько положительных качеств: большая удельная поверхность, что увеличивает скорость растворения субстанции в желудке и особенно в кишечнике, и аморфное состояние веществ, что ведет к тем же результатам; отсутствие кристаллов резко увеличивает стабильность дисперсии при хранении. Следовательно, присутствие кофеата бетулина в определенных концентрациях в композиции согласно настоящему изобретению приводит к кардинальному улучшению потребительских качеств композиции биологически активных веществ, как субстанции для приготовления лекарственных препаратов или БАД. К этому следует добавить, что кофеат бетулина усиливает биологическую активность композиции, обладая сильными антиоксидантными свойствами.Obtaining a composition in the form of nanodispersions, consisting of spherical particles in which the substances are in an amorphous state, has several positive qualities: a large specific surface area, which increases the dissolution rate of the substance in the stomach and especially in the intestine, and the amorphous state of substances, which leads to the same results; the absence of crystals dramatically increases the stability of the dispersion during storage. Therefore, the presence of betulin caffeate in certain concentrations in the composition according to the present invention leads to a dramatic improvement in the consumer qualities of the composition of biologically active substances, as substances for the preparation of drugs or dietary supplements. It should be added that betulin caffeate enhances the biological activity of the composition, possessing strong antioxidant properties.
Claims (8)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2006127735/13A RU2322091C1 (en) | 2006-08-01 | 2006-08-01 | Composition of biologically active substances and method for preparing its nanodispersion |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2006127735/13A RU2322091C1 (en) | 2006-08-01 | 2006-08-01 | Composition of biologically active substances and method for preparing its nanodispersion |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2322091C1 true RU2322091C1 (en) | 2008-04-20 |
Family
ID=39453860
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2006127735/13A RU2322091C1 (en) | 2006-08-01 | 2006-08-01 | Composition of biologically active substances and method for preparing its nanodispersion |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2322091C1 (en) |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2452475C2 (en) * | 2010-06-17 | 2012-06-10 | Закрытое акционерное общество "СНС-фарма" | Agent for wounds, burns and infectious inflammatory diseases of skin, appendages and mucous membranes |
| RU2454241C2 (en) * | 2010-05-18 | 2012-06-27 | Российская Федерация, От Имени Которой Выступает Министерство Образования И Науки Российской Федерации | Method for production of water dispersions of spherical nano-particles of birch bark triterpenoids |
| RU2462037C2 (en) * | 2010-09-23 | 2012-09-27 | Общество с ограниченной ответственностью "Березовый мир" | Method for preservation of milk and defatted milk products |
| RU2494754C1 (en) * | 2012-06-20 | 2013-10-10 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Московский государственный университет тонких химических технологий имени М.В. Ломоносова" (МИТХТ им. М.В. Ломоносова) | Method for preparing aqueous dispersions of nanoparticles of natural triterpenoid mixture |
| RU2545714C1 (en) * | 2014-01-14 | 2015-04-10 | Общество с ограниченной ответственностью "Развитие БиоТехнологий" | Method of production of adjuvant for viral vaccines |
| RU2714765C2 (en) * | 2018-07-09 | 2020-02-19 | федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Самарский государственный технический университет" | Method of producing willow herb extract |
| RU2750690C1 (en) * | 2020-11-27 | 2021-07-01 | Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования «Дальневосточный федеральный университет» (ДВФУ) | Caviar product |
-
2006
- 2006-08-01 RU RU2006127735/13A patent/RU2322091C1/en active
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2454241C2 (en) * | 2010-05-18 | 2012-06-27 | Российская Федерация, От Имени Которой Выступает Министерство Образования И Науки Российской Федерации | Method for production of water dispersions of spherical nano-particles of birch bark triterpenoids |
| RU2452475C2 (en) * | 2010-06-17 | 2012-06-10 | Закрытое акционерное общество "СНС-фарма" | Agent for wounds, burns and infectious inflammatory diseases of skin, appendages and mucous membranes |
| RU2462037C2 (en) * | 2010-09-23 | 2012-09-27 | Общество с ограниченной ответственностью "Березовый мир" | Method for preservation of milk and defatted milk products |
| RU2494754C1 (en) * | 2012-06-20 | 2013-10-10 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Московский государственный университет тонких химических технологий имени М.В. Ломоносова" (МИТХТ им. М.В. Ломоносова) | Method for preparing aqueous dispersions of nanoparticles of natural triterpenoid mixture |
| RU2545714C1 (en) * | 2014-01-14 | 2015-04-10 | Общество с ограниченной ответственностью "Развитие БиоТехнологий" | Method of production of adjuvant for viral vaccines |
| RU2714765C2 (en) * | 2018-07-09 | 2020-02-19 | федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Самарский государственный технический университет" | Method of producing willow herb extract |
| RU2750690C1 (en) * | 2020-11-27 | 2021-07-01 | Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования «Дальневосточный федеральный университет» (ДВФУ) | Caviar product |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2322091C1 (en) | Composition of biologically active substances and method for preparing its nanodispersion | |
| JP5538611B2 (en) | Maillard reaction inhibitor | |
| US7078063B2 (en) | Water soluble extract from plant of Solanum genus and the preparation process thereof, and pharmaceutical composition containing the water soluble extract | |
| MX2008012066A (en) | Extracts and methods comprising ganoderma species. | |
| JP2009057361A (en) | Process for preparation of plant extract for treating skin disorder and enhancing healing of wound | |
| CA2688410C (en) | A composition comprising camomile and black cumin oil and therapeutic uses thereof | |
| KR100601395B1 (en) | A Method For Preparing Water-soluble Propolis Extract And Powder | |
| CN101254217B (en) | Preparation of extract of regeneratabl portion of yew and applications of same for preparing oral anti-cancer medicine | |
| Pande et al. | Preparation and evaluation of phytosomes of pomegrane peels | |
| JPH05502457A (en) | Kava kava extracts, their manufacturing process and uses | |
| US20100298251A1 (en) | Wound-healing agent containing momordicae semen extract | |
| KR100893779B1 (en) | The extracting method of Angelica gigas Nakai that has effect of scavenging action on free radical | |
| RU2386446C1 (en) | Method for preparing betulin nanosuspension and/or its derivatives | |
| Garmashov et al. | Technological parameters of countercurrent extraction: deriving bioactive compounds from plant raw materials | |
| RU2637414C1 (en) | Method for production of preparation with anti-inflammatory activity | |
| JP2001181192A (en) | Moisture-proof galenical extract | |
| RU2665968C1 (en) | Method for obtaining an agent of choleretic, anti-inflammatory and antioxidant activity | |
| RU2112524C1 (en) | Composition of components for drug | |
| TWI618540B (en) | Composition for preventing renal toxicity caused by drug toxicity, preparation method thereof and Its use | |
| RU2372934C1 (en) | Method for preparing antiinflammatory agent | |
| ES2341232T3 (en) | SOLUBLE WATER EXTRACT FROM A SOLANUM GENDER PLANT AND PREPARATION PROCEDURE OF THE SAME, AND PHARMACEUTICAL COMPOSITION CONTAINING THE WATER SOLUBLE EXTRACT. | |
| Jain et al. | Formulation and Evaluation of Phytosomes Loaded with Pithecellobium Bijeninum Leaf Extract | |
| JP2004024104A (en) | Propolis extract, method for producing the same, hypotensive agent containing the same, food preparation and propolis composition | |
| CN109985075B (en) | Ginkgo leaf extract injection and preparation method thereof | |
| RU2797119C2 (en) | Method for obtaining a drug with immunomodulatory activity |