RU2228764C2 - Способ получения суспензионного диагностикума (варианты) - Google Patents
Способ получения суспензионного диагностикума (варианты) Download PDFInfo
- Publication number
- RU2228764C2 RU2228764C2 RU2002119466/13A RU2002119466A RU2228764C2 RU 2228764 C2 RU2228764 C2 RU 2228764C2 RU 2002119466/13 A RU2002119466/13 A RU 2002119466/13A RU 2002119466 A RU2002119466 A RU 2002119466A RU 2228764 C2 RU2228764 C2 RU 2228764C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- diagnosticum
- matrix
- suspension
- immunoglobulins
- sensitization
- Prior art date
Links
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Silicates, Zeolites, And Molecular Sieves (AREA)
Abstract
Изобретение относится к биотехнологии. Предложены способы получения суспензионного диагностикума путем сенсибилизации кремнеземной матрицы иммуноглобулинами, в качестве носителя используют суспензию окрашенных частиц аэросила, во втором случае - частицы алюмосиликата. Данные способы позволяют упростить и сократить время приготовления диагностикума и время исследования. 2 с.п. ф-лы.
Description
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в производстве суспензионных диагностикумов для выявления антигенов при экспресс-диагностике инфекционных заболеваний.
В последние годы усилилась тенденция использования инертных материалов в качестве носителей лигандов, что привело к возможности разработки и применения реакции суспензионной агглютинации (РСА) для выявления возбудителей различных заболеваний.
Известен способ получения диагностикума эритроцитарного [1], включающий сенсибилизацию формалинизированных эритроцитов лигандом в присутствии коньюгирующего агента с последующим их отмыванием. Сенсибилизацию проводят при температуре 54-57°С, а в качестве конъюгирующего агента используют смесь растворов меди сернокислой, хромовокислого калия и хлористого хрома.
Способность эритроцитарных препаратов ограничена, прежде всего особенностью самого биологического носителя и характером взаимодействия между сенситином и матрицей. Большое значение имеет качество самих эритроцитов, зависящее от многих условий, таких как пол, возраст, гормональный статус животного-продуцента, время взятия крови. В связи с этим, воспроизводимость результатов может варьировать. Недостатком является также длительность получения диагностикумов эритроцитарных и то, что окончательный учет результатов реакции проводят через 16-18 часов.
Перспективным является создание диагностикума на синтетической основе.
Известен способ получения диагностикума для серологических реакций на синтетических частицах за счет использования в качестве носителя суспензии окрашенных полиакролеиновых частиц, обработанных раствором казеина, активированных сшивающим агентом и сенсибилизированных иммуноглобулинами при рН 7,2-7,6 [2]. Используют диагностикум для определения антигенов в реакции суспензионной агломерации (РСА) в лунках U-образных микропланшет. Приготовление диагностикума занимает 7-8 ч, учет результатов производится через 1,5-2 ч.
Целью изобретения является упрощение, сокращение времени приготовления диагностикума, уменьшение времени, необходимого для получения конечного результата реакции при высокой чувствительности диагностикума.
Поставленная цель достигается способом получения диагностикума для серологической индикации возбудителей особо опасных инфекций путем связывания иммуноглобулинового сенситина с матрицей на основе соединений кремния в буферном растворе при рН (7,2+0,2), в котором в качестве матрицы предлагается использовать аэросил (пирогенная форма двуокиси кремния) или алюмосиликат с добавлением красителя (аурамина или фуксин), взятых в весовом соотношении 2:1, в качестве активатора поверхности - 1% вторичного алкилсульфата натрия. Сенситин - иммуноглобулины класса G из иммунной сыворотки. Сенсибилизацию ведут при температуре (37+1)°С в течение 2 часов.
Выбор в качестве матрицы аэросила и алюмосиликата обусловлен тем, что для них характерна высокая реакционная способность поверхностных групп при взаимодействии со многими органическими и неорганическими соединениями. Введение в матрицу красителя обуславливает цветовой эффект, в результате чего повышается наглядность серологического теста.
Активирование матрицы вторичным алкилсульфатом натрия приводит к предотвращению сближения частиц, их агрегирования, а на поверхности образуется мономолекулярный адсорбционный слой.
Выбранные соотношения между компонентами обеспечивают получение сорбентов заданного состава и строения и эффективное выявление возбудителей особо опасных инфекций.
При увеличении кислотности буферного раствора во время сенсибилизации снижается процент связывания сенситнна.
В течение 2 часов происходит максимальное связывание иммуноглобулинов. Суспензия комплекса матрица-антитело не должна давать агглютинацию при взаимодействии с гетерологичными антигенами. Для блокировки свободных активных центров матрицы используют бычий сывороточный альбумин (БСА) до 1%.
По сравнению с прототипом [2] по предлагаемому способу сокращается время приготовления диагностикума в 2 раза и учет результатов - 1-5 мин, по предлагаемому способу нет необходимости в планшетах, а реакция также наглядна.
Способ осуществляют следующим образом.
Пример 1. 100 мг аэросила, 50 мг аурамина растирают в фарфоровой ступке, просеивают. Из этого порошка готовят 2% суспензию в 0,1 М фосфатно-солевом буферном растворе (ФСБ), рН (7,2+0,2). Далее проводят активирование матрицы, добавляя 0,075 мл вторичного алкилсульфата натрия, инкубируя в течение 30 мин при температуре (37+1)°С. Для сенсибилизации используют иммуноглобулины туляремийные в концентрации 0,5 мг/мл, в объеме 3 мл, инкубируют в течение 2 ч при температуре (37+1)°С, отмывают от несвязавшихся антител и красителя 0,1 М ФСБ, центрифугируя трижды при 5000 об/мин в течение 10 мин, последний осадок растворяют в растворе БСА до 1% взвеси диагностикума и добавляют 1% формалина.
Методика постановки реакции.
На обезжиренное стекло нанести по 2 капли взвеси туляремийного микроба в концентрации от 2×107 до 1×10 4 м.к./мл. На стекло с отрицательным контролем нанести 2 капли 0,1 М ФСБ. На стекла с опытом и отрицательным контролем добавить по 1 капле диагностикума суспензионного туляремийного иммуноглобулинового. Капли тщательно перемешивают и при легком покачивании стекла наблюдают в течение 1-5 мин в косопроходящем свете за изменением структуры суспензии. Благодаря интенсивной окраске суспензии (желтый цвет) значительно повышается демонстративность реакции и облегчается ее визуальный учет.
В отрицательном контроле агглютинация отсутствует, в то время как на стеклах со взвесями туляремийного микроба наблюдается полное просветление жидкости с крупнозернистыми хлопьями, т.е. четкая агглютинация. Чувствительность диагностикума составила 2,5×106 м.к./мл.
Пример 2. Процесс ведут аналогично примеру №1, только в качестве матрицы используют алюмосиликат вместо аэросила. Результаты получены аналогичные.
Пример 3. Процесс ведут аналогично примеру №1, только в качестве сенситина используют иммуноглобулины холерные. Чувствительность диагиостикума составила 2×107 м.к./мл.
Пример 4. Процесс ведут аналогично примеру №2, только в качестве сенситина используют иммуноглобулины холерные. Чувствительность диагностикума составила 2×107 м.к./мл.
Пример 5. Процесс ведут аналогично примеру №1, только в качестве красителя используют фуксин вместо аурамина. Чувствительность диагностикума составила 2,5×106 м.к./мл.
Пример 6. Процесс ведут аналогично примеру №2, только в качестве красителя используют фуксин вместо аурамина. Чувствительность диагностикума составила 2,5×106 м.к./мл.
Испытано по 3 серии диагностикумов: туляремийного и холерного в 5 повторностях. Диагностикумы проверены В РСА на стекле с гомо- и гетерологичными взвесями. Для сравнения использован эритроцитарный туляремийный диагностикум в РНГА, приготовленный из тех же серий сывороток.
В результате испытаний препараты зарекомендовали себя как высокоактивные, специфичные, позволяющие провести экспресс-диагностику в течение 1-5 мин, по чувствительности не уступающие эритроцитарным диагностикумам, а по экспрессности значительно превосходящие последние, так как учет конечного результата РНГА через 16-18 ч.
Данный способ экономически выгоден, поскольку значительно сокращает как процесс получения препарата, так и время исследования.
ЛИТЕРАТУРА
1. Г.Н.Хорват, А.А.Арзанов. Способ получения эритроцитарного диагностикума. Патент РФ N 1774872, А 61 К 47/00, опубликованный 07.11.92, бюллетень N 41.
2. Е.П.Ерохин, С.В.Прозоровский, И.С.Тартаковский, О.В.Радченко, Ю.В.Лукин, В.П.Зубов, Н.Д.Темежникова, Г.В.Гальцева, В.М.Костюковский, И.А.Базиков, А.А Зайцев, Д.Н.Авдеев и Н.К.Мисуренко. Способ получения антительного диагностикума. Авторское свидетельство №1596926 G 01 N 33/544, С 12 N 1/00, опубликованное 24.02.89.
Claims (2)
1. Способ получения суспензионного диагностикума путем сенсибилизации кремнеземной матрицы иммуноглобулинами с последующей отмывкой целевого продукта, отличающийся тем, что в качестве матрицы используют суспензию окрашенных частиц аэросила, активированных вторичным алкилсульфатом натрия, при этом соотношение матрицы к красителю по весу составляет 2:1, сенсибилизацию проводят при температуре 37+1°С, в течение 2 ч, при рН 7,2+0,2 и в соотношении 0,5 мг иммуноглобулинов на 50 мг матрицы.
2. Способ получения суспензионного диагностикума путем сенсибилизации кремнеземной матрицы иммуноглобулинами с последующей отмывкой целевого продукта, отличающийся тем, что в качестве матрицы используют суспензию окрашенных частиц алюмосиликата, активированных вторичным алкилсульфатом натрия, при этом соотношение матрицы к красителю по весу составляет 2:1, сенсибилизацию проводят при температуре 37+1°С, в течение 2 ч, при рН 7,2+0,2 и в соотношении 0,5 мг иммуноглобулинов на 50 мг матрицы.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2002119466/13A RU2228764C2 (ru) | 2002-07-18 | 2002-07-18 | Способ получения суспензионного диагностикума (варианты) |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2002119466/13A RU2228764C2 (ru) | 2002-07-18 | 2002-07-18 | Способ получения суспензионного диагностикума (варианты) |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2002119466A RU2002119466A (ru) | 2004-03-27 |
RU2228764C2 true RU2228764C2 (ru) | 2004-05-20 |
Family
ID=32678698
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2002119466/13A RU2228764C2 (ru) | 2002-07-18 | 2002-07-18 | Способ получения суспензионного диагностикума (варианты) |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2228764C2 (ru) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
MD2790C2 (ru) * | 2004-08-04 | 2006-02-28 | Национальный Научно-Практический Центр Превентивной Медицины Министерства Здравоохранения Республики Молдова | Способ получения эритроцитарного коклюшного диагностического препарата |
-
2002
- 2002-07-18 RU RU2002119466/13A patent/RU2228764C2/ru not_active IP Right Cessation
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
MD2790C2 (ru) * | 2004-08-04 | 2006-02-28 | Национальный Научно-Практический Центр Превентивной Медицины Министерства Здравоохранения Республики Молдова | Способ получения эритроцитарного коклюшного диагностического препарата |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
RU2002119466A (ru) | 2004-03-27 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6742978B2 (ja) | ラテラルフローおよび関連する免疫アッセイにおけるシグナル増幅 | |
CN102072957B (zh) | 丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒及其制备方法 | |
WO1995015498A1 (en) | Immunoassays employing generic anti-hapten antibodies and materials for use therein | |
JPS5991370A (ja) | 血液型判定のための螢光スクリ−ニング | |
CN102645534A (zh) | 基于量子点编码微球芯片检测丙型肝炎病毒的方法 | |
EP0194156B1 (en) | Method of measuring the amount of immune antibody in serum | |
JPH09504094A (ja) | 磁性ラテックス粒子および非磁性粒子を用いて免疫物質をアッセイする方法 | |
KR100500793B1 (ko) | C형간염바이러스감염증진단약 | |
EP1709451B1 (en) | Reducing time to result for blood bank diagnostic testing | |
RU2228764C2 (ru) | Способ получения суспензионного диагностикума (варианты) | |
US4547466A (en) | Detecting rheumatoid factor with synthetic particles having immune complexes thereon | |
CN100414296C (zh) | 镶嵌式高通量三维立体生物检测方法及试剂盒 | |
JPH01193647A (ja) | 抗原・抗体の測定法 | |
CA2090392C (en) | Coupling of antigens and antibodies to non-fixed erythrocytes | |
JP2596321B2 (ja) | 糖化ヘモグロビンの測定方法 | |
RU2203499C1 (ru) | Способ постановки диагностической реакции при бруцеллезе | |
JPH02210262A (ja) | 間接凝集反応測定法 | |
KR0160122B1 (ko) | 신장증후성 출혈열의 진단용 시약 | |
CN113912677B (zh) | 丙肝病毒检测相关肽及其可视时间分辨荧光微球试纸条 | |
JP3276092B2 (ja) | 免疫学的凝集反応試薬及びその担体 | |
RU2818259C2 (ru) | Устройство, содержащее шарики, для диагностики in vitro и его применения | |
RU2139539C1 (ru) | Способ получения трепонемного антигенного диагностикума | |
JPH01158354A (ja) | 免疫学的多成分測定用試薬と測定方法 | |
US5288610A (en) | Detecting reagent for antiplatelet antibody | |
Godjevargova et al. | Multiplex fluorescent immunoassay device based on magnetic nanoparticles |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20060719 |