RU2192470C2 - Method of fusidic acid preparing - Google Patents

Abstract

FIELD: biotechnology, microbiological industry. SUBSTANCE: invention relates to production of antibiotics. Filtrate of cultural liquid of producer Fusidium coccineum is extracted with organic solvent and obtained reextract is treated with 25% sulfuric acid solution. Precipitate is crystallized by addition of methanol and purified fusidic acid is recrystallized with methanol aqueous solution with its concentration in solution 25%, not above. Fusidic acid is obtained as small-crystalline substance of crystal size 20 mcm, not above, as white powder containing impurities in the amount less 2%. EFFECT: high quality of fusidic acid.

Description

Изобретение относится к микробиологической промышленности, в частности к производству антибиотиков. The invention relates to the microbiological industry, in particular to the production of antibiotics.

Известен способ получения фузидиевой кислоты из фильтрата культуральной жидкости продуцента Fusidium coccineum путем экстракции органическим растворителем, затем щелочным водным раствором, обработки раствором хлористого кальция, добавления к выпавшему осадку метанола, отделения метанольного экстракта, концентрирования упариванием, подкисления, перекристаллизации и выделения очищенной фузидиевой кислоты (А.с. 1499922). A known method of producing fusidic acid from the filtrate of the culture fluid of the producer Fusidium coccineum by extraction with an organic solvent, then with an alkaline aqueous solution, treatment with a solution of calcium chloride, adding methanol to the precipitate, separation of the methanol extract, concentration by evaporation, acidification, recrystallization and isolation of purified fusidic acid (A .s. 1499922).

Недостатком известного способа является наличие стадии упаривания и невысокое качество готового продукта из-за большого количества примесей и крупнокристалличности готового продукта. The disadvantage of this method is the presence of the evaporation stage and low quality of the finished product due to the large number of impurities and coarse crystallinity of the finished product.

Наиболее близким к заявляемому является способ получения фузидиевой кислоты (ФК) из фильтрата культуральной жидкости продуцента Fusidium coccineum путем экстракции ее бутилацетатом, реэкстракции кальцинированной содой, обработки реэкстракта хлористым кальцием для выделения кальциевых солей фузидиевой кислоты с последующей их сушкой. Кальциевую соль ФК растворяют в метаноле, полученный метанольный концентрат охлаждают до (0±1)^oС, выдерживают в течение часа, при этом происходит кристаллизация технической фузидиевой кислоты (ТФК). Выпавшую в осадок ТФК промывают смесью метанола с обессоленной водой в соотношении 1:1 и сушат. Для очистки от примесей ТФК растворяют в метаноле, полученный метанольный концентрат охлаждают до (0±1)^oС, добавляют к нему обессоленную воду в количестве 45% от объема концентрата, выдерживают в течение часа, при этом происходит кристаллизация фармакопейной фузидиевой кислоты. Осадок фильтруют, промывают смесью метанола и обессоленной воды в соотношении 1: 1 и сушат (Промышленный регламент на производство фармакопейной фузидиевой кислоты. Утвержден 22.10.1992) [1].Closest to the claimed is a method of obtaining fusidic acid (FC) from the filtrate of the culture fluid of the producer Fusidium coccineum by extracting it with butyl acetate, stripping with soda ash, treating the stripping with calcium chloride to isolate the calcium salts of fusidic acid, followed by drying. The calcium salt of FC is dissolved in methanol, the resulting methanol concentrate is cooled to (0 ± 1) ^o C, incubated for an hour, while crystallization of technical fusidic acid (TFA) occurs. The precipitated TFA is washed with a mixture of methanol with demineralized water in a ratio of 1: 1 and dried. For purification from impurities, TFA is dissolved in methanol, the obtained methanol concentrate is cooled to (0 ± 1) ^o С, desalted water is added to it in an amount of 45% of the concentrate volume, it is kept for one hour, and pharmacopeia fusidic acid crystallizes. The precipitate is filtered, washed with a mixture of methanol and demineralized water in a ratio of 1: 1 and dried (Industrial regulation for the production of pharmacopoeial fusidic acid. Approved 10/22/1992) [1].

Недостатком известного способа является невысокое качество конечного продукта из-за присутствия 2 - 4% примесей, его крупнокристалличность (размер кристаллов 150 - 350 мкм), что приводит к необходимости дополнительного воздействия на субстанцию ФК при использовании ее в готовых лекарственных средствах: мазях, кремах, суспензиях. The disadvantage of this method is the low quality of the final product due to the presence of 2 - 4% of impurities, its coarse crystallinity (crystal size 150 - 350 microns), which leads to the need for additional exposure to the substance of FC when used in finished drugs: ointments, creams, suspensions.

Изобретение направлено на повышение качества ФК по показателям "примеси" и "размеры кристаллов". The invention is aimed at improving the quality of the FC in terms of "impurities" and "crystal sizes".

Указанный результат достигается тем, что предлагаемый способ получения ФК из фильтрата культуральной жидкости продуцента Fusidium coccineum включает экстракцию ее органическим растворителем, реэкстракцию водным щелочным раствором, выделение ФК водным раствором серной кислоты и ее кристаллизацию, при этом кристаллизацию и очистку фузидиевой кислоты ведут безводным метанолом с последующей перекристаллизацией 20-25%-ным раствором метанола. The specified result is achieved by the fact that the proposed method for producing FA from the filtrate of the culture fluid of the producer Fusidium coccineum involves extraction with an organic solvent, stripping with an aqueous alkaline solution, isolation of FA with an aqueous solution of sulfuric acid and its crystallization, while crystallization and purification of fusidic acid are carried out with anhydrous methanol followed by recrystallization with a 20-25% methanol solution.

Отличительными признаками заявленного способа являются:
- получение очищенной ФК (ОФК) из чистой ФК путем кристаллизации ее из безводного метанола;
- получение мелкокристаллической ФК (МФК) путем перекристаллизации ее из водного метанола.Distinctive features of the claimed method are:
- obtaining purified FC (OFK) from pure FC by crystallizing it from anhydrous methanol;
- obtaining fine crystalline FA (MPA) by recrystallization from aqueous methanol.

Кристаллизация ОФК из безводного метанола позволяет получить более чистый конечный продукт. В процессе проведения экспериментов был выявлен эффект более высокой растворимости примесных компонентов в метаноле по сравнению с водно-метанольным раствором. Полученная предлагаемым способом фузидиевая кислота содержит менее 2% примесей против 2-4% в продукте, изготовленном по прототипу. Crystallization of OFC from anhydrous methanol allows a cleaner final product to be obtained. In the course of the experiments, the effect of a higher solubility of impurity components in methanol was revealed in comparison with a water-methanol solution. Obtained by the proposed method fusidic acid contains less than 2% impurities against 2-4% in the product made according to the prototype.

В процессе проведения экспериментов проверялось влияние содержания метанола в среде для перекристаллизации ОФК. Установлено, что осадки и размерами кристаллов не более 20 мкм образуются при перекристаллизации ОФК из водных растворов, содержащих не более 25% метанола. In the course of the experiments, the effect of the methanol content in the medium for the recrystallization of RPA was checked. It was found that precipitates with crystal sizes of not more than 20 μm are formed during the recrystallization of OPC from aqueous solutions containing not more than 25% methanol.

В общем случае способ реализуется следующим образом:
Из 140 л подкисленного до рН 6,0 - 6,5 фильтрата культуральной жидкости продуцента Fusidium coccineum бутилацетатом в количестве 70 л при перемешивании экстрагируют антибиотик Полученный бутилацетатный экстракт объемом 70 л отделяют и обрабатывают 2,5%-ным раствором кальцинированной соды (концентрирование антибиотика щелочным раствором), получают 21 л реэкстракта с рН 10,0-10,2.In the General case, the method is implemented as follows:
From an amount of 70 L acidified to pH 6.0 - 6.5 of the filtrate of the culture fluid of the producer Fusidium coccineum butyl acetate, the antibiotic is extracted with stirring. The resulting 70 L butyl acetate extract is separated and treated with a 2.5% soda ash solution (alkaline concentration of the antibiotic solution), get 21 l of reextract with a pH of 10.0 to 10.2.

К полученному реэкстракту при перемешивании постепенно добавляют 25%-ный водный раствор серной кислоты до значения рН 2,0 - 2,5, при этом выпадает осадок фузидиевой кислоты-сырца, который отфильтровывают и промывают обессоленной водой. Получают 210 г пасты фузидиевой кислоты-сырца, которые растворяют в метаноле (10 частей метанола на 1 кг ФК-сырца) при нагревании до (37±1)^oС, добавляют водный раствор борогидрида калия (общее количество воды, переданное в аппарат, не должно составлять 45% от объема метанольного концентрата фузидиевой кислоты с учетом содержания воды в сырце). Смесь при перемешивании охлаждают до (0±1)^oС, при этом происходит кристаллизация чистой фузидиевой кислоты (ЧФК). Осадок ЧФК отфильтровывают, промывают 50%-ным водным метанолом и сушат при (60±1)^oС. Получают 30 г ЧФК.With stirring, a 25% aqueous solution of sulfuric acid is gradually added to the obtained reextract to a pH of 2.0 - 2.5, and a precipitate of crude fusidic acid precipitates, which is filtered off and washed with demineralized water. Get 210 g of paste of raw fusidic acid, which is dissolved in methanol (10 parts of methanol per 1 kg of raw FC) when heated to (37 ± 1) ^o C, add an aqueous solution of potassium borohydride (total amount of water transferred to the device, not should be 45% of the volume of methanol concentrate fusidic acid, taking into account the water content in the raw). The mixture is cooled with stirring to (0 ± 1) ^o C, while crystallization of pure fusidic acid (PFA) occurs. The PFC precipitate was filtered off, washed with 50% aqueous methanol and dried at (60 ± 1) ^° C. 30 g of PFC were obtained.

30 г ЧФК растворяют в 4 частях метанола при нагревании до (53±2)^oC и перемешивают до полного растворения осадка, осветляют активированным углем и перемешивают в течение 15 мин. Суспензию фильтруют, охлаждают до (0±2)^oC и выдерживают при перемешивании 1,0 - 1,5 ч, отфильтровывают осадок, промывают его метанолом в количестве 60 мл, охлажденным до (0±2)^oC. Получают 55 г пасты высокоочищенной фузидиевой кислоты (ВФК).30 g of PFC are dissolved in 4 parts of methanol when heated to (53 ± 2) ^o C and stirred until the precipitate is completely dissolved, clarified with activated carbon and stirred for 15 minutes. The suspension is filtered, cooled to (0 ± 2) ^o C and kept under stirring for 1.0 - 1.5 hours, the precipitate is filtered off, washed with 60 ml of methanol, cooled to (0 ± 2) ^o C. 55 g of paste are obtained. highly purified fusidic acid (IFC).

55 г пасты ВФК растворяют в 4 частях метанола при работающей мешалке и нагреве суспензии до (48±2)^oC до полного растворения осадка. Отфильтрованный метанольный концентрат загружают в охлажденную до (16±1)^oC водно-метанольную смесь (20 л воды и 2 л метанола на 1 кг пасты ВФК, взятой на растворение), охлаждают реакционную массу до 2 - 4^oС, доводят 18%-ной соляной кислотой рН до 4,0-4,5, перемешивают 1 ч, фильтруют. Промывку осадка осуществляют охлажденной до 2-4^oС водно-метанольной смесью с объемной долей метанола 40%, промытый осадок сушат, получают 20 г мелкокристаллической фузидиевой кислоты.55 g of IFC paste are dissolved in 4 parts of methanol with the stirrer operating and heating the suspension to (48 ± 2) ^o C until the precipitate is completely dissolved. The filtered methanol concentrate is loaded into a water-methanol mixture cooled to (16 ± 1) ^o C (20 l of water and 2 l of methanol per 1 kg of WFC paste taken for dissolution), the reaction mass is cooled to 2 - 4 ^o C, adjusted to 18% hydrochloric acid, pH to 4.0-4.5, stirred for 1 h, filtered. Washing the precipitate is carried out cooled to 2-4 ^{° C.} with a water-methanol mixture with a volume fraction of methanol of 40%, the washed precipitate is dried, and 20 g of fine crystalline fusidic acid are obtained.

Полученный таким образом препарат представляет собой белый порошок с размерами кристаллов менее 20 мкм и суммой специфических примесей менее 2%. The preparation thus obtained is a white powder with a crystal size of less than 20 microns and a sum of specific impurities of less than 2%.

Таким образом, из полученных данных следует, что получение высокоочищенной мелкокристаллической фузидиевой кислоты обеспечивает заявленная совокупность операций с указанным порядком их выполнения и оптимальными условиями проведения. Thus, it follows from the data obtained that the preparation of highly purified fine-crystalline fusidic acid provides the claimed combination of operations with the indicated order of their execution and optimal conditions.

Claims (1)

Способ получения фузидиевой кислоты путем экстракции фильтрата культуральной жидкости продуцента Fusidium coccineum органическим растворителем с последующей реэкстракцией водным щелочным раствором, выделением и кристаллизацией, отличающийся тем, что кристаллизацию и очистку фузидиевой кислоты ведут безводным метанолом с последующей перекристаллизацией водным метанолом с содержанием его в растворе не более 25%. A method of producing fusidic acid by extracting the filtrate of the culture fluid of the producer Fusidium coccineum with an organic solvent, followed by reextraction with an aqueous alkaline solution, isolation and crystallization, characterized in that the crystallization and purification of fusidic acid is carried out with anhydrous methanol, followed by recrystallization with aqueous methanol with a content of not more than 25 %