RU2189592C1 - Способ диагностики пилорического хеликобактериоза - Google Patents
Способ диагностики пилорического хеликобактериоза Download PDFInfo
- Publication number
- RU2189592C1 RU2189592C1 RU2001106833A RU2001106833A RU2189592C1 RU 2189592 C1 RU2189592 C1 RU 2189592C1 RU 2001106833 A RU2001106833 A RU 2001106833A RU 2001106833 A RU2001106833 A RU 2001106833A RU 2189592 C1 RU2189592 C1 RU 2189592C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- ammonia
- blood serum
- pylori
- pyloric
- urea
- Prior art date
Links
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Изобретение может быть использовано в медицине, а именно в медицинской микробиологии и гастроэнтерологии для выявления Helicobacter pylori (HP). У больного производят сочетанный забор желудочного содержимого и сыворотки крови, проводят определение уровня аммиака фотометрическим способом с использованием метода H. Keller и мочевины стандартным диацетил-монооксимным способом, рассчитывают индексы соотношения мочевины сыворотки крови к аммиаку желудочного содержимого (А) и аммиака сыворотки крови к аммиаку желудочного содержимого и при их значении ниже 11 и выше 1 соответственно устанавливают диагноз пилорического хеликобактериоза. Способ надежен, прост в использовании.
Description
Изобретение относится к области медицины, а именно к медицинской микробиологии, и может быть использовано в гастроэнтерологии для выявления Helicobacter pylori.
Известен способ диагностики Helicobacter pylori [1], который выполняется следующим образом: во время эндоскопического исследования осуществляют забор биоптата слизистой оболочки желудка и погружают его в стандартную индикаторную среду Christensen при комнатной температуре на 24 часа. Под воздействием фермента - микробной уреазы H.pylori происходит расщепление мочевины в растворе до аммиака, который, вызывая сдвиг рН в щелочную сторону, обусловливает изменение желтой окраски раствора на красную (розовую, фиолетовую) благодаря изменению окраски индикатора.
Способ имеет ряд следующих недостатков:
- способ травматичен для больного;
- способ длителен (продолжительность анализа 24 часа);
- вследствие очагового расселения H.pylori на слизистой оболочке желудка биоптат может не содержать искомый микроорганизм и дать исследователю ложную информацию об отсутствии H. pylori у данного больного (ложноотрицательный результат);
- поскольку используется не чистая культура, а биоптат, который может содержать разнообразную контаминантную микрофлору, тест может дать ложноположительный результат и повлечь необоснованное применение антибиотиков у исследуемого пациента;
- специфичность и чувствительность теста достаточно низкие (вследствие вышеперечисленных условий) и составляют соответственно 88 и 74%.
- способ травматичен для больного;
- способ длителен (продолжительность анализа 24 часа);
- вследствие очагового расселения H.pylori на слизистой оболочке желудка биоптат может не содержать искомый микроорганизм и дать исследователю ложную информацию об отсутствии H. pylori у данного больного (ложноотрицательный результат);
- поскольку используется не чистая культура, а биоптат, который может содержать разнообразную контаминантную микрофлору, тест может дать ложноположительный результат и повлечь необоснованное применение антибиотиков у исследуемого пациента;
- специфичность и чувствительность теста достаточно низкие (вследствие вышеперечисленных условий) и составляют соответственно 88 и 74%.
Известен способ диагностики Helicobacter pylori [2], который выполняется следующим образом: голодный пациент с пробным завтраком принимает раствор, приготовленный на дистиллированной воде и содержащий 250 мг мочевины, помеченной изотопом 13С. Затем через 20, 30, 40, 50 минут у исследуемого пациента берутся пробы выдыхаемого воздуха и исследуются при помощи автоматизированного масс-спектрометра с калькуляцией содержания изотопа, а затем и общей продукции CO2 к общей поверхности тела. Уреазная активность выражается как количество микромоль мочевины, гидролизованной за 1 минуту.
Несмотря на высокую точность способа стоимость оборудования для его осуществления чрезвычайно высока и составляет несколько сотен тысяч долларов и даже в США такая лаборатория доступна только единичным крупным научным центрам. Кроме того, указанный способ чрезвычайно трудоемкий и требует участия большого количества персонала. Все вышеупомянутые условия крайне ограничивают возможности широкомасштабного применения данного способа в клинической практике и в научных исследованиях.
Наиболее близким к предлагаемому способу является уреазный тест, основанный на определении уровня аммиака в желудочном содержимом [3]. Указанный способ диагностики пилорического хеликобактериоза осуществляется следующим образом: желудочное содержимое пациента подвергают анализу в колбе Erlenmeyer, закрытой резиновой пробкой с вентилем после подщелачивания едким натром (индикатор феноловый красный) с помощью газораспылительных трубок Dräger-Lübeck.. Через 10 минут после начала реакции газ откачивается с помощью специального насоса через трубочку 5/а. Образующийся аммиак определяется полуколичественно по зоне изменения цвета индикатора бромфенолблау.
Недостатком прототипа является низкая точность способа: чувствительность равна 83%, а специфичность - 80%. Из полученных данных следует вывод, что у 17% больных правильный диагноз с помощью данного способа установить невозможно, а 20 больным из 100 согласно указанному способу будет необоснованно рекомендовано употребление антибиотиков. Кроме того, способ технологически достаточно сложен и трудоемок. Следует также отметить, что при повышении уровня как мочевины, так и аммиака в сыворотке крови (по различным причинам) концентрация аммиака в желудочном содержимом может значительно повыситься за счет прямой диффузии и привести исследователя к ложным результатам [4, 5, 6] . Таким образом, вышеупомянутый последний способ недостаточно информативен и может сопровождаться ложноположительными и ложноотрицательными результатами вследствие недостаточной чувствительности реактива и возможных колебаний уровней исходных азотистых метаболитов крови.
Технический результат - повышение точности и упрощение способа.
Предлагаемый способ диагностики осуществляется следующим образом: у больного производят сочетанный забор желудочного содержимого и сыворотки крови, проводят определение уровня аммиака фотометрическим способом с использованием метода Н. Keller и мочевины стандартным диацетил-монооксимным методом и устанавливают диагноз пилорического хеликобактериоза по расчету следующих индексов соотношения:
A) X/Y,
где Х - мочевина сыворотки крови (ммоль/л),
Y - аммиак желудочного содержимого (ммоль/л)
B) Y/Z,
где Y - аммиак желудочного содержимого (ммоль/л),
Z - аммиак сыворотки крови (ммоль/л).
A) X/Y,
где Х - мочевина сыворотки крови (ммоль/л),
Y - аммиак желудочного содержимого (ммоль/л)
B) Y/Z,
где Y - аммиак желудочного содержимого (ммоль/л),
Z - аммиак сыворотки крови (ммоль/л).
Диагноз пилорического хеликобактериоза устанавливают при величине индекса А не выше 11, а индекса В - более 1.
Общими для предлагаемого объекта изобретения и прототипа существенными признаками являются: забор желудочного содержимого, определение в оном концентрации аммиака и установление диагноза исходя из данных анализа, указывающих на неадекватное увеличение уровня ионов аммония в желудочном содержимом пациента.
Отличительными признаками предлагаемого способа являются определение наряду с аммиаком желудочного содержимого уровней мочевины и аммиака в сыворотке крови пациента, использование индексов соотношения, позволяющих исключить ложноположительный результат анализа.
Существенным моментом, позволяющим преодолеть низкую чувствительность способа-прототипа является использование для детекции аммиака другого метода, основанного на цветной реакции, предложенной М. Berthelot [7], и позволяющего определить аммиак в среде без предварительного выделения. Обязательная предшествующая реакция депротеинизации позволяет исключить ложнопозитивный результат за счет удаления из реакционной среды потенциальных источников аммиака, не связанных с присутствием H.pylori. Определение уровня аммиака проводится при помощи прямого колориметрирования, а не с использованием полуколичественной шкалы оценки, как в прототипе. Использование метода, предложенного Н. Keller et al. [7], позволяет практически свести к нулю ложноотрицательные результаты и продемонстрировать значительно более высокую чувствительность предлагаемого способа в сравнении с способом прототипа. По своей точности данную группу методов можно считать методом выбора [8] . Метод, предложенный Н. Keller et al. [7], прост в исполнении и не требует привлечения дополнительной аппаратуры и специальных реактивов, не имеющихся в распоряжении стандартно оснащенной биохимической лаборатории. Определение уровня мочевины сыворотки крови также является рутинной процедурой, проводящейся всегда наряду с определением уровня белка, билирубина и аминотрансфераз. Сочетанный забор желудочного содержимого (для рН-метрии) и сыворотки крови является обязательнoй рутинной процедурой для любого гастроэнтерологического стационара и не потребует дополнительной нагрузки персонала.
Предлагаемый способ вследствие своей технологической простоты и доступности лабораторного оборудования может быть использован в любой биохимической лаборатории, где имеется фотоэлектроколориметр. Способ удобен еще и тем, что он является малоинвазивным и атравматичным, т.е. не требует эндоскопии с биопсией и может быть использован у пациентов с катетеризацией желудка (в т.ч. и тех, кто находится в отделении ургентного профиля), а также у пациентов, у которых взятие биопсии может привести к серьезной угрозе для здоровья (гемофилия и т.д.). Приведенная совокупность существенных признаков в литературе не описана.
Проведенный анализ позволяет сделать вывод о соответствии предлагаемого способа критерию "новизна".
Пробы желудочного содержимого и сыворотки крови, взятые от 90 пациентов, исследовали на присутствие пилорического хеликобактериоза. Полученные данные верифицировали цитологически, серологически (наборы "Anti-H.pylori EIA", Roche, Швейцария) и при помощи полимеразной цепной реакции на обнаружение фрагмента ДНК H.pylori, кодирующего синтез субъединицы А уреазы микроорганизма. Величина индекса А у H.pylori-позитивных пациентов (n=70) составила 4,84±2,92 (0,23-10,64), а у H.pylori-негативных пациентов (n=20) - 105,9±49,5 (28,94-334,16). Величина индекса В у H.pylori-позитивных пациентов (n=70) составила 16,4±9,8 (3,74-106,8), а у H.pylori-негативных пациентов (n= 20) - 0,65±0,17 (0,16-0,94). Согласно данным статистического анализа (стандартный параметрический тест Стьюдента) различие было достоверно (р<0,01). Чувствительность и специфичность индекса А были равны соответственно 100% при произвольном значении, равном 11 и исчисленном из величины mean+2SD для H.pylori-позитивных пациентов. Чувствительность и специфичность индекса В были равны соответственно 100% при произвольном значении верхней границы нормативного показателя 1,0, исчисленного из величины mean+2SD для H. pylori-негативных пациентов. Таким образом, расхождения результатов индексов А и В при внутригрупповом сравнении предлагаемым способом отмечено не было.
Способ иллюстрируется следующими примерами.
Пример 1. Больной Марат X., 10 лет, обратился в клинику с жалобами на боли в области пупка, возникающие сразу после приема пищи, тошноту и рвоту. При фиброгастроскопии выявлена плоская эрозия, диаметром 4 мм в области привратника, а также язва, 4 мм диаметром, в луковице двенадцатиперстной кишки. После проведения анализов по описанному способу величина индекса А была равна 0,23, что соответствует инфицированию H.pylori. Величина индекса В была равна 8,89, что окончательно подтвердило факт инфицирования пациента H. pylori. При цитологическом, серологическом и молекулярно-биологическом исследовании диагноз H.pylori инфекции был подтвержден.
Пример 2. Больной Артем П., 14 лет, обратился в клинику с жалобами на боли в околопупочной области, не связанные с приемом пищи. При проведении фиброгастроскопии у больного обнаружен гипертрофический дуоденит и слабая эритема слизистой оболочки тела желудка. В процессе тестирования по описанному способу величина индекса А была равна 38,3, что не соответствует инфицированию H. pylori. Величина индекса В была равна 0,76, исходя из чего был сделан вывод об отсутствии инфекции H.pylori. При цитологическом, серологическом и молекулярно-биологическом исследовании у пациента было подтверждено отсутствие пилорического хеликобактериоза.
Проведенное исследование свидетельствует о том, что предложенный способ диагностики пилорического хеликобактериоза является эффективным и надежным и может быть рекомендован для широкого клинического применения.
Источники информации
1. Das S.S., Bain L.A., Karim Q.N. et al. // Rapid diagnosis of Campylobacter pyloridis infection //J. Clin. Pathol. 1987, Vol. 40, 6, р. 701-702.
1. Das S.S., Bain L.A., Karim Q.N. et al. // Rapid diagnosis of Campylobacter pyloridis infection //J. Clin. Pathol. 1987, Vol. 40, 6, р. 701-702.
2. Klein P. D. , Graham D.Y. // Detection Campylobacer pylori by the 13C-urea breath test. In: Campylobacter pylori and gastroduodenal disease. Ed. by B. J. Rathbone, R.V. Heatley. Blackwell Scientific publ., Oxford, 1990, p. 94-105.
3. Bornschein W., Bauernfeind A., Heilmann K..L. // Urease schnelltestes bei Campylobacter pylori besiedlung der magenschleimhaut // Gastroenterol. J. 1989, Bd. 49, 2, s. 54-58.
4. Kim H., Park С., Jang W.I. et al. // The gastric juice urea and ammonia levels in patients with Campylobacter pylori // Amer. J. Clin. Pathol. 1990, vol. 94, 2, р. 187-191.
5. Fitzgerald O. , Murphy P. // Studies on physiological chemistry and clinical significance of urease with special reference to the stomach // Irish. J. Med. Sci. 1950, vol. 292, 2, p. 97-159.
6. Chittajallu R.S., Neithercut W.D., Mac Donald A.M.I., Mc Coll K.E.L. // Effect of increasing Helicobacter pylori ammonia production by urea infusion on plasma gastrin concentrations // Gut 1991, vol. 32, 1, p. 21-24.
7. Keller H., Müller-Beissenhirtz W., Neumann E. // Eine methode zur ammoniakbestimmung im capillarblut // Klin. Wschr. 1967, Bd. 45, 6, S. 314-316.
8. Братанов И.И. // Клинические и лабораторные исследования в педиатрии // София. Медицина и физкультура, 1968, с.737.
Claims (1)
- Способ диагностики пилорического хеликобактериоза, включающий взятие желудочного содержимого, определение в нем уровня аммиака, отличающийся тем, что дополнительно в сыворотке крови фотометрически определяют уровни аммиака по H. Keller и мочевины диацетил-монооксимным способом, рассчитывают индексы соотношения мочевины сыворотки крови к аммиаку желудочного содержимого (А) и аммиака сыворотки крови к аммиаку желудочного содержимого (В), и при их значении ниже 11 и выше 1 соответственно, устанавливают диагноз пилорического хеликобактериоза.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2001106833A RU2189592C1 (ru) | 2001-03-12 | 2001-03-12 | Способ диагностики пилорического хеликобактериоза |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2001106833A RU2189592C1 (ru) | 2001-03-12 | 2001-03-12 | Способ диагностики пилорического хеликобактериоза |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2189592C1 true RU2189592C1 (ru) | 2002-09-20 |
Family
ID=20247112
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2001106833A RU2189592C1 (ru) | 2001-03-12 | 2001-03-12 | Способ диагностики пилорического хеликобактериоза |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2189592C1 (ru) |
-
2001
- 2001-03-12 RU RU2001106833A patent/RU2189592C1/ru active
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
BORNSCHEIN W., et al.// Urease schnell-testes bei Campylobacter pylori besiedlung der magenschleimhaut // Gastroenterol. J., 1989, Bd. 49, № 2, s. 54-58. * |
СТАРОСТИН Б.И. и др. Экспресс-метод диагностики инфицированности Helicobacter pylori желудка и двенадцатиперстной кишки. Клиническая медицина, 1989, № 2, с.51. * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US5439801A (en) | Test composition for the rapid detection of helicobacter pylori in gastric biopsy tissue | |
Skrebinska et al. | Diagnosis of Helicobacter pylori infection | |
Mokuolu et al. | Gastric juice urease activity as a diagnostic test for Helicobacter pylori infection. | |
Neithercut et al. | Detection of Helicobacter pylori infection of the gastric mucosa by measurement of gastric aspirate ammonium and urea concentrations. | |
KR100247941B1 (ko) | 헬리코박터 피롤리의 검출용 조성물, 검출용 키트 및 검출방법 | |
Kuo et al. | The media of rapid urease test influence the diagnosis of Helicobacter pylori | |
US20040029205A1 (en) | Diagnostic system for differentiating sputum from saliva | |
RU2189592C1 (ru) | Способ диагностики пилорического хеликобактериоза | |
JP2949474B2 (ja) | ペプシノーゲンi/ii比の変化率を基礎としたヘリコバクター・ピロリ除菌判定方法 | |
EP0253927A1 (en) | A breath test for measuring urease activity in the stomach using carbon isotope urea | |
CN112695066B (zh) | 一种胃幽门螺杆菌培养鉴定药敏试剂盒及检测方法 | |
Yoshimura et al. | A 13 C-urea breath test in children with Helicobacter pylori infection: assessment of eradication therapy and follow-up after treatment | |
EP3240907B1 (en) | Ultra-rapid detection of helicobacter pylori in gastric mucosal biopsies | |
JPH08145991A (ja) | ウレアーゼ活性を有する微生物の感染判定方法 | |
CN101887062A (zh) | 含有13c-尿素溶液的检测幽门螺旋杆菌试剂盒 | |
JPH10148636A (ja) | ペプシノーゲン i/ii 比の変化率を基礎としたヘリコバクター・ピロリ除菌判定方法 | |
RU2100010C1 (ru) | Способ неинвазивной диагностики хеликобактериоза ин виво | |
RU2790397C1 (ru) | Способ неинвазивной диагностики инфекции Helicobacter pylori с помощью 13С-уреазного дыхательного теста | |
US20050238580A1 (en) | Use of 4-galactosyl-xylose in humans for the in vivo evaluation of intestinal lactase as a non-invasive diagnostic test of the deficiency of said enzyme | |
JPH11318490A (ja) | ヘリコバクターピロリの検出方法 | |
Yatoo et al. | Diagnostic Techniques in Goats | |
KR100306587B1 (ko) | 헬리코박터파이로리감염의진단방법및그를위한신속요소분해효소반응키트 | |
JPS592700A (ja) | 総ポリアミンの測定方法 | |
JP2000321271A (ja) | ヘリコバクター・ピロリ感染の検出方法及び検出用キット | |
RU1797064C (ru) | Способ диагностики хронического алкоголизма |