RU2147892C1 - Method of preparing preparation based on virus-bacterial strains from local focus for preparing mixed vaccine or polyvalent hyperimmune serum against cattle disease - Google Patents
Method of preparing preparation based on virus-bacterial strains from local focus for preparing mixed vaccine or polyvalent hyperimmune serum against cattle disease Download PDFInfo
- Publication number
- RU2147892C1 RU2147892C1 RU98117373A RU98117373A RU2147892C1 RU 2147892 C1 RU2147892 C1 RU 2147892C1 RU 98117373 A RU98117373 A RU 98117373A RU 98117373 A RU98117373 A RU 98117373A RU 2147892 C1 RU2147892 C1 RU 2147892C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- preparation
- components
- mixture
- strains
- days
- Prior art date
Links
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии и биотехнологии, в частности к получению вакцин или сывороток против вирусно-бактериальных заболеваний крупного рогатого скота. The invention relates to the field of veterinary microbiology and biotechnology, in particular to the production of vaccines or sera against viral and bacterial diseases of cattle.
Известно, что против многих инфекционных заболеваний крупного рогатого скота (КРС) в настоящее время не разработаны вакцинные и сывороточные препараты (например, против лейкоза) и в ряде случаев не идентифицированы их возбудители. В связи с вышесказанным разработка ассоциированной вакцины или поливалентной гипериммунной сыворотки против местных вирусно-бактериальных заболеваний КРС имеет крайне важное значение для ветеринарии, животноводства и здравоохранения. It is known that vaccines and serum preparations (for example, against leukemia) have not been developed against many infectious diseases of cattle (cattle) and in some cases their pathogens have not been identified. In connection with the foregoing, the development of an associated vaccine or polyvalent hyperimmune serum against local viral and bacterial diseases of cattle is extremely important for veterinary medicine, animal husbandry and health.
Известен способ получения препарата для приготовления иммуноглобулина "Поликаниглоб", используемого при лечении и профилактике вирусных инфекций, включающий раздельное выращивание культуральных штаммов парвовируса "Геркулес" ВГНКИ N 29, аденовируса типа-2 "Ада" ВГНКИ N 15 и вируса чумы плотоядных "ЭПМ" (Заявка на патент РФ N 94031759, МПК6 A 61 K 39/40, C 12 N 7/00, опубл. 20.11.96). Для получения иммуноглобулина лошадей-продуцентов иммунизируют раздельно указанными компонентами (культуральными штаммами) препарата по схеме: первая инъекция внутримышечно в область шеи и крупа в объеме 10 - 100 см3 каждого антигена, вторую инъекцию проводят на 7-й день в область шейных лимфоузлов в объеме 30 - 90 см3 каждого антигена, третью и четвертую инъекции осуществляют соответственно на 22-й и 37-й день внутривенно в объеме 80 - 120 см3 каждого антигена. На 44-й день забирают кровь от каждой группы лошадей, отделяют сыворотки, стерилизуют и смешивают в равных объемах. Затем смесь сывороток обрабатывают ПЭГ-6000 Д и полученный осадок очищают методом каскадной фильтрации на нитроцеллюлозных фильтрах с диаметром пор от 1,2 до 0,22 мкм. Иммуноглобулин "Поликаниглоб" может использоваться с профилактической и лечебной целями против парвовирусного энтерита, аденовирусных инфекций и чумы собак.A known method of obtaining a preparation for the preparation of immunoglobulin "Polikaniglob" used in the treatment and prevention of viral infections, including the separate cultivation of culture strains of parvovirus "Hercules" VGNKI N 29, adenovirus type-2 "Ada" VGNKI N 15 and carnivore plague virus "EPM" ( Application for RF patent N 94031759, IPC 6 A 61 K 39/40, C 12 N 7/00, publ. 20.11.96). To obtain immunoglobulin, producing horses are immunized with the indicated components (culture strains) of the drug separately according to the scheme: the first injection intramuscularly into the neck and croup in the volume of 10-100 cm 3 of each antigen, the second injection is carried out on the 7th day into the region of the cervical lymph nodes in the volume 30 - 90 cm 3 of each antigen, the third and fourth injections are carried out respectively on the 22nd and 37th day intravenously in a volume of 80 - 120 cm 3 of each antigen. On the 44th day, blood is taken from each group of horses, the sera are separated, sterilized and mixed in equal volumes. Then the mixture of sera is treated with PEG-6000 D and the resulting precipitate is purified by cascade filtration on nitrocellulose filters with a pore diameter of 1.2 to 0.22 μm. Immunoglobulin "Polycaniglob" can be used for prophylactic and therapeutic purposes against parvovirus enteritis, adenovirus infections and dog plague.
Однако поливалентные сыворотки, производимые с использованием препарата, изготовленного данным способом, могут быть неэффективными в различных регионах, например России, в связи с тем, что они были созданы на основе отличающихся в антигенном отношении вирусных штаммов, выделенных от животных, обитающих в других регионах страны. При приготовлении поливалентных сывороток с использованием препарата, изготовленного по указанному способу, производится разбавление специфических антител (на конечном этапе получения сыворотки), полученных от разных животных-продуцентов, инфицированных разными вирусными штаммами. В результате использование подобного рода поливалентных сывороток требует введения их больным животным в большом количестве, увеличивая таким образом нагрузку на их иммунную систему и получая при этом слабый лечебный и профилактический эффект. Кроме того, отсутствие в данном препарате антител против патогенных для животных бактерий ограничивает спектр действия иммуноглобулина и требует при лечении и профилактике заболеваний животных введения дополнительных сывороток, содержащих антитела против бактериальных антигенов. However, polyvalent serums produced using a preparation made by this method may be ineffective in various regions, for example Russia, due to the fact that they were created on the basis of antigenically different viral strains isolated from animals living in other regions of the country . In the preparation of polyvalent sera using a preparation made according to the specified method, specific antibodies are diluted (at the final stage of obtaining serum) obtained from different animal producers infected with different viral strains. As a result, the use of this kind of polyvalent serums requires the introduction of large quantities of these into sick animals, thereby increasing the load on their immune system and, at the same time, obtaining a weak therapeutic and prophylactic effect. In addition, the absence of antibodies against animal bacteria pathogenic for animals in this preparation limits the spectrum of action of immunoglobulin and requires the administration of additional sera containing antibodies against bacterial antigens in the treatment and prevention of animal diseases.
Наиболее близким техническим решением (прототипом) является способ получения препарата (бактериальной вакцины) против некробактериоза крупного рогатого скота, включающий предварительное выделение из местного очага эпизоотического штамма некробактериоза КРС, его идентификацию, наработку биомассы культуры возбудителя микробиологическим способом, разделение выращенной культуры на биомассу и культуральную жидкость, экстракцию антигена из биомассы и параллельно осаждение экзотоксина из культуральной жидкости, инактивацию антигенов формалином, объединение инактивированных антигенов с последующим добавлением адъюванта на основе минерального масла и ланолина и получением целевого продукта (Патент РФ N 2043773, МПК6 A 61 K 39/114, опубл. 20.09.95).The closest technical solution (prototype) is a method for producing a preparation (bacterial vaccine) against cattle necrobacteriosis, including preliminary isolation of an epizootic strain of cattle necrobacteriosis from the local focus, its identification, biomass production of the pathogen culture by microbiological method, separation of the grown culture into biomass and culture fluid extraction of antigen from biomass and, in parallel, precipitation of exotoxin from the culture fluid, inactivation of antigens ormalinom, combining inactivated antigens with subsequent addition of an adjuvant based on mineral oil and lanolin and give the desired product (RF Patent N 2043773, IPC 6 A 61 K 39/114, publ. 20.09.95).
Недостатком данного способа является узкий спектр действия препарата (вакцины), приготавливаемого на его основе, вследствие использования для приготовления препарата только одной эпизоотической культуры возбудителя некробактериоза. The disadvantage of this method is the narrow spectrum of action of the drug (vaccine), prepared on its basis, due to the use for the preparation of the drug only one epizootic culture of the causative agent of necrobacteriosis.
Задачей предлагаемого изобретения является создание такого способа, который позволил бы получать универсальный препарат на основе местных вирусно-бактериальных штаммов для приготовления ассоциированной вакцины или поливалентной гипериммунной сыворотки против заболеваний КРС более широкого спектра действия. The objective of the invention is the creation of such a method that would allow to obtain a universal preparation based on local viral and bacterial strains for the preparation of an associated vaccine or polyvalent hyperimmune serum against diseases of cattle with a wider spectrum of action.
Указанная задача решается тем, что в способе получения препарата на основе местных вирусно-бактериальных штаммов для приготовления ассоциированной вакцины или поливалентной гипериммунной сыворотки против заболеваний крупного рогатого скота, включающем предварительное выделение из местного очага одного из эпизоотических штаммов возбудителей болезней, его идентификацию, наработку биомассы культуры возбудителя микробиологическим способом и, при необходимости, инактивацию биомассы культуры возбудителя химическим реагентом, согласно изобретению для приготовления компонентов "А", "Б" и "В" препарата из местного очага выделяют все эпизоотические штаммы возбудителей болезней, как бактериального, так и вирусного происхождения, которые после идентификации раздельно культивируют, причем вирусные штаммы выращивают на монослоях культур клеток, например MDBK, первичнотрипсинизированной культуре клеток почек телят, с добавлением питательной среды (например Игла МЭМ) до получения конечной концентрации каждого вируса не менее 1•106 ЦПД/50 на 1 мл с последующим сливом вируссодержащей суспензии каждого штамма в равных объемах в общую емкость при перемешивании с получением компонента "А" препарата, который инактивируют формалином в конечной концентрации не более 0,2 - 0,4 мас.% и инкубируют не менее 3-5 суток при комнатной температуре с получением компонента "Б" препарата, а бактериальные штаммы культивируют в матрацах на микробиологическом питательном агаре (например агар Хоттингера, ГРМ - агар), до получения конечной концентрации каждого штамма бактерий не менее 1•1011 кл/мл с последующим их сбором в равных объемах в общую емкость с использованием раствора Эрла, полученную смесь биомассы штаммов бактерий инактивируют формалином в конечной концентрации 0,2 - 0,4 мас.% с последующей инкубацией не менее 3-5 суток при комнатной температуре с получением компонента "В" препарата.This problem is solved by the fact that in the method for producing a preparation based on local viral and bacterial strains for the preparation of an associated vaccine or polyvalent hyperimmune serum against diseases of cattle, including preliminary isolation of one of the epizootic strains of pathogens from the local focus, its identification, and the production of biomass culture microbiological method and, if necessary, inactivation of the biomass of the pathogen culture with a chemical reagent, agrees about the invention for the preparation of components "A", "B" and "C" of the preparation from the local focus, all epizootic strains of pathogens of both bacterial and viral origin are isolated, which, after identification, are separately cultured, and the viral strains are grown on monolayers of cell cultures, for example MDBK, a primary trypsinized culture of calf kidney cells, with the addition of a nutrient medium (for example, a MEM needle) to obtain a final concentration of each virus of at least 1 • 10 6 CPD / 50 per 1 ml followed by discharge of virus-containing suspension of each strain in equal volumes into the total capacity with stirring to obtain component "A" of the drug, which is inactivated with formalin in a final concentration of not more than 0.2 - 0.4 wt.% and incubated for at least 3-5 days at room temperature obtaining the component “B” of the preparation, and the bacterial strains are cultivated in mattresses on microbiological nutrient agar (for example, Hottinger agar, GRM agar), until the final concentration of each bacterial strain is at least 1 • 10 11 cells / ml, followed by their collection in equal volumes in general capacitance using Earle solution, and the mixture of bacteria strains biomass inactivated by formalin at a final concentration of 0.2 - 0.4 wt%, followed by incubation for at least 3-5 days at room temperature to form component "B" formulation..
Получение в препарате конечной концентрации вирусов менее 1•106 ЦПД/50 на 1 мл и бактерий - менее 1•1011 кл/мл значительно снижает эффективность действия приготовляемых на его основе ассоциированной вакцины (обеспечивает низкий иммунитет) и гипериммунной сыворотки, полученной путем иммунизации лошадей этим препаратом (низкий титр антител).Obtaining a final concentration of viruses of less than 1 • 10 6 CPD / 50 per 1 ml and bacteria of less than 1 • 10 11 cells / ml significantly reduces the effectiveness of the associated vaccine prepared on its basis (provides low immunity) and hyperimmune serum obtained by immunization horses with this drug (low titer of antibodies).
Для приготовления ассоциированной вакцины используют компоненты "Б" и "В" препарата, которые смешивают в равных соотношениях, а в полученную смесь дополнительно вводят иммуномодулятор, например T-активин, или тимарис, или ридостин, при соотношении иммуномодулятора и смеси компонентов "Б" и "В" препарата не более 1:10. For the preparation of the associated vaccine, components “B” and “C” of the preparation are used, which are mixed in equal proportions, and an immunomodulator, for example T-activin, or timaris, or ridostin, is additionally added to the resulting mixture, with the ratio of the immunomodulator and the mixture of components “B” and "B" of the drug is not more than 1:10.
Иммуномодуляторы являются неспецифическими лекарственными средствами, обеспечивающими более эффективное действие вакцины без проявления негативных эффектов. Immunomodulators are non-specific drugs that provide a more effective vaccine without the manifestation of negative effects.
Ридостин (ВФС 42-245-7-94. Ридостин для инъекций. Введена в действие от 02.03.95) - иммуномодулятор, лекарственная форма dS-РНК киллерного штамма дрожжей Sac. cerevisiae, производится в НИКТИ БАВ ГНЦ ВБ "Вектор", г. Новосибирск. Получен путем ферментативного и механического разрушения клеточных стенок дрожжей и извлечения dS-РНК фракционированием раствором хлористого лития. Препарат восстанавливает иммунологическую активность, стимулирует процессы кроветворения. Ridostinum (VFS 42-245-7-94. Ridostinum for injection. Introduced from 02.03.95) - immunomodulator, dosage form dS-RNA of killer strain of Sac yeast. cerevisiae, produced in NIKTI BAS SSC WB "Vector", Novosibirsk. Obtained by enzymatic and mechanical destruction of the yeast cell walls and extraction of dS-RNA by fractionation with a solution of lithium chloride. The drug restores immunological activity, stimulates blood formation processes.
T-активин (иммуномодулятор) - препарат полипептидной природы, получаемый из вилочковой железы (тимуса) КРС, нормализует количественные и функциональные показатели T-системы иммунитета, стимулирует продукцию лимфокинов, в т. ч. α- и γ- интерферона, восстанавливает активность T-киллеров (Справочник. Лекарственные средства, применяемые в медицине. - М., 1989, - с. 370). T-activin (immunomodulator) - a preparation of a polypeptide nature obtained from the thymus gland (thymus) of cattle, normalizes the quantitative and functional parameters of the T-system of immunity, stimulates the production of lymphokines, including α- and γ-interferon, restores T- killers (Reference. Medicines used in medicine. - M., 1989, - p. 370).
Тимарис (иимуномодулятор) - препарат полипептидной природы, получаемый путем экстракции из вилочковой железы (тимуса) КРС, восстанавливает иммунологическую реактивность (регулирует количество и соотношение T- и B-лимфоцитов и их субпопуляций, стимулирует процессы кроветворения (Справочник. Лекарственные средства, применяемые в медицине. - М., 1989, - с. 381). Timaris (immunomodulator) - a preparation of polypeptide nature, obtained by extraction from cattle thymus (thymus), restores immunological reactivity (regulates the number and ratio of T- and B-lymphocytes and their subpopulations, stimulates hematopoiesis (Reference. Medicines used in medicine . - M., 1989, - p. 381).
При увеличении соотношения иммуномодулятора и компонентов препарата более 1:10 отмечено значительное токсическое действие иммуномодуляторов на организм вакцинируемого животного. With an increase in the ratio of immunomodulator and drug components more than 1:10, a significant toxic effect of immunomodulators on the body of the vaccinated animal was noted.
Для получения поливалентной гипериммунной сыворотки вначале приготавливают в равных соотношениях смесь компонентов "Б" и "В", а также в равных соотношениях смесь компонентов "А" и "В", лошадям-продуцентам подкожно в область шеи проводят первую инъекцию смеси компонентов "Б" и "В" препарата в объеме 10 - 20 мл; через 7 суток - вторую инъекцию смеси компонентов "А" и "В" препарата в объеме 40 - 50 мл и еще через 7 суток - третью инъекцию смеси компонентов "А" и "В" препарата в объеме 150 - 200 мл; через не менее 1,5 месяца проводят вновь трехкратную иммунизацию аналогично тому как, было описано ранее; через 8-9 суток после третьей (последней) инъекции компонентов препарата у лошадей-продуцентов осуществляют через стерильную герметичную систему забор крови в количестве до 10 литров в бутыли и еще через 5-6 суток осуществляют повторный забор крови в том же объеме; причем в каждый полученный образец крови объемом 10 л вводят не более 300 мл 10%-ного раствора цитрата натрия, далее материал отстаивают в течение 12 - 24 часов при комнатной температуре и добавляют в каждый образец крови объемом 10 л 10 - 15 мл 30%-ного раствора хлористого кальция, бутыли с образцами крови встряхивают и повторно отстаивают в течение 12 - 24 часов при комнатной температуре до образования сыворотки с последующим ее сливом в отдельные емкости. To obtain polyvalent hyperimmune serum, first a mixture of components “B” and “C” is prepared in equal proportions, as well as in equal proportions a mixture of components “A” and “C”, the first injection of a mixture of components “B” is given subcutaneously to the producing horses subcutaneously in the neck area and "B" of the drug in a volume of 10 to 20 ml; after 7 days - a second injection of a mixture of components "A" and "B" of the drug in a volume of 40 - 50 ml and another 7 days - a third injection of a mixture of components "A" and "B" of a preparation in a volume of 150 - 200 ml; after at least 1.5 months, a three-fold immunization is carried out again in the same way as previously described; 8-9 days after the third (last) injection of the components of the drug in horses producing, blood samples are taken through a sterile sealed system in an amount of up to 10 liters in a bottle, and after 5-6 days, blood is re-drawn in the same volume; moreover, no more than 300 ml of 10% sodium citrate solution is injected into each received blood sample with a volume of 10 l, then the material is settled for 12-24 hours at room temperature and 10-15 ml of 30% is added to each blood sample with a volume of 10 l calcium chloride solution, the bottles with blood samples are shaken and re-settled for 12-24 hours at room temperature until whey is formed, followed by its discharge into separate containers.
Препарат с тремя отдельными компонентами (компонент "А" - смесь живых вирусных штаммов, компонент "Б" - смесь инактивированных вирусных штаммов и компонент "В" - смесь инактивированных бактериальных штаммов), включающими штаммы возбудителей заболеваний, полученных из местного очага, позволяет приготавливать как ассоциированные вакцины, обеспечивающие более длительный и напряженный иммунитет, так и поливалентные гипериммунные сыворотки более широкого спектра действия и более специфичные для КРС данного региона, а значит и действующие более эффективно. The drug with three separate components (component "A" is a mixture of live viral strains, component "B" is a mixture of inactivated viral strains and component "C" is a mixture of inactivated bacterial strains), including strains of pathogens obtained from the local focus, can be prepared as associated vaccines providing a longer and more intense immunity, as well as multivalent hyperimmune serums with a wider spectrum of activity and more specific for cattle in this region, and therefore acting its effective.
Пример 1. Технология получения препарата на основе вирусно-бактериальных штаммов из местного очага
В АО "Салаир" Маслянинского района Новосибирской области осенью 1992 года от телят, больных респираторными и кишечными заболеваниями инфекционной природы с септическими явлениями (температурная реакция 40,0 - 41,0oC), с помощью простых (например агар Хоттингера, ГРМ - агар, тиогликолиевая среда) и дифференциально-диагностических микробиологических сред (среда Олькеницкого, Эндо, висмут-сульфитная) выделены Эшерихия коли и Сальмонеллы. Кроме того, путем проведения 4 пассажей на перевиваемой культуре клеток MDCK, выделены вирусы инфекционного ринотрахеита и парагриппа 3.Example 1. The technology of obtaining the drug based on viral and bacterial strains from the local focus
In Salair JSC, Maslyaninsky District, Novosibirsk Region, in the autumn of 1992, calves suffering from respiratory and intestinal diseases of an infectious nature with septic phenomena (temperature reaction 40.0 - 41.0 o C), using simple ones (for example, Hottinger agar, timing belt agar , thioglycolic medium) and differential diagnostic microbiological media (Olkenitsky, Endo, bismuth-sulfite medium) Escherichia coli and Salmonella are identified. In addition, by conducting 4 passages on an inoculated MDCK cell culture, infectious rhinotracheitis and parainfluenza 3 viruses were isolated.
Выделенные вирусы нарабатывают на культуре клеток MDCK в конечной концентрации не менее 1•106 ЦПД/50 на 1 мл. Вирусные биомассы смешивают и делят на две части, одну из которых (компонент "А") хранят при температуре -18oC в отдельной емкости, а другую - смешивают с формалином в конечной его концентрации 0,3 мас.% и инкубируют при комнатной температуре в течение 3 - 5 суток с получением компонента "Б" препарата, который также хранят в холодильнике при -18oC.Isolated viruses are produced on a MDCK cell culture in a final concentration of at least 1 • 10 6 CPD / 50 per 1 ml. Viral biomass is mixed and divided into two parts, one of which (component "A") is stored at a temperature of -18 o C in a separate container, and the other is mixed with formalin in its final concentration of 0.3 wt.% And incubated at room temperature within 3 to 5 days to obtain component "B" of the drug, which is also stored in the refrigerator at -18 o C.
Полученные бактерии нарабатывают в матрацах на микробиологическом питательном агаре (ГРМ-агар) и собирают с помощью шпателя и раствора Эрла в отдельные емкости (конечная концентрация каждого вида бактерий составляет при этом 1•1011 клеток на 1 мл). Оба вида бактерий смешивают вместе и к полученной смеси добавляют формальдегид в конечной концентрации 0,3%. После проведенной инкубации в течение 5 суток при комнатной температуре получают компонент "В" препарата, который хранят в холодильнике при +4oC.The resulting bacteria are produced in mattresses on microbiological nutrient agar (GRM agar) and collected using a spatula and Earl solution in separate containers (the final concentration of each type of bacteria is 1 • 10 11 cells per 1 ml). Both types of bacteria are mixed together and formaldehyde is added to the resulting mixture at a final concentration of 0.3%. After incubation for 5 days at room temperature, component “B” of the preparation is obtained, which is stored in a refrigerator at + 4 o C.
Пример 2. Технология приготовления ассоциированной вакцины против заболеваний крупного рогатого скота и исследование эффективности ее действия
Для приготовления ассоциированной вакцины используют компоненты "Б" и "В" препарата, которые смешивают в равных соотношениях, а в полученную смесь дополнительно вводят иимуномодулятор, например тимарис, в количестве 1 мл на 10 мл смеси компонентов "Б" и "В" препарата. Полученную ассоциированную вакцину исследуют на специфическую стерильность на культуре клеток MDCK и на микробиологической питательной среде (ГРМ - агар). Кроме того, эту вакцину исследуют на реактогенность и безвредность по ответной реакции организма лабораторных животных (белые мыши массой 14 - 16 г и морские свинки массой 200 - 250 г), которым вводят вакцину подкожно (в объеме 0,2 мл и 0,5 мл соответственно). Таким образом приготовленный препарат представляет собой вакцину на основе местных вирусных и бактериальных штаммов для конкретного животноводческого хозяйства (АО "Салаир").Example 2. The technology of preparation of the associated vaccine against diseases of cattle and the study of its effectiveness
To prepare the associated vaccine, components “B” and “C” of the preparation are used, which are mixed in equal proportions, and an immunomodulator, for example timaris, is additionally added to the resulting mixture in the amount of 1 ml per 10 ml of the mixture of components “B” and “C” of the preparation. The resulting associated vaccine is tested for specific sterility on an MDCK cell culture and on a microbiological growth medium (GRM agar). In addition, this vaccine is tested for reactogenicity and harmlessness in response to laboratory animals (white mice weighing 14–16 g and guinea pigs weighing 200–250 g), which are injected subcutaneously (in a volume of 0.2 ml and 0.5 ml respectively). Thus, the prepared preparation is a vaccine based on local viral and bacterial strains for a specific livestock farm (Salair JSC).
Перед применением препарата в хозяйстве показатели реактогенности и безвредности оценивают на группе изолированных телят, используя при этом от 5 до 10 животных, которым вводят подкожно по 5 мл вакцины. Наблюдение за лабораторными и домашними животными проводилось в течение 14 - 20 дней. Общее время, связанное с приготовлением конечной формы вакцины составляло 1,5 месяца. После получения хороших результатов на изолированных телятах, вакцинации подвергают двукратно стельных сухостойных коров за 2 и 1 месяц до отела, а также телят в возрасте 25 - 30 дней и 2 месяца. Before using the drug on the farm, reactogenicity and harmlessness indicators are evaluated on a group of isolated calves, using from 5 to 10 animals that are injected subcutaneously with 5 ml of the vaccine. Observation of laboratory and domestic animals was carried out for 14 to 20 days. The total time associated with the preparation of the final form of the vaccine was 1.5 months. After obtaining good results on isolated calves, double-layed dry cows are vaccinated 2 and 1 month before calving, as well as calves aged 25-30 days and 2 months.
Для этого проводят подкожную иммунизацию животных вакциной в области шеи. Перед применением вакцину разводят в 50 мл растворителя (физиологический раствор). При этом 1 доза каждого компонента препарата составляет 2 мл первичной вакцинации и 6 мл при повторной вакцинации. В результате проведенной работы гибель КРС в хозяйстве снизилась в 3 раза по сравнению с предыдущими годами, когда данная работа не проводилась. For this, subcutaneous immunization of animals with a vaccine is carried out in the neck. Before use, the vaccine is diluted in 50 ml of solvent (saline). In this case, 1 dose of each component of the drug is 2 ml of primary vaccination and 6 ml during re-vaccination. As a result of the work, the death of cattle in the farm decreased by 3 times compared to previous years, when this work was not carried out.
Пример 3. Технология получения поливалентной гипериммунной сыворотки против заболеваний КРС и исследование эффективности ее действия
Для получения поливалентной гипериммунной сыворотки вначале приготавливают в равных соотношениях смесь компонентов "Б" и "В" и смесь компонентов "А" и "В" заявляемого препарата. Таким образом приготовленные смеси на основе местных вирусных и бактериальных штаммов для конкретного животноводческого хозяйства (АО "Салаир") использовали для проведения трехкратной иммунизации трех лошадей. Вначале проводят первый цикл трехкратной иммунизации лошадей: животным-продуцентам подкожно в область шеи проводят первую инъекцию смеси компонентов "Б" и "В" препарата в объеме 10 - 20 мл. Через 7 суток проводят вторую инъекцию смеси компонентов "А" и "В" препарата в объеме 40 - 50 мл и еще через 7 суток - третью инъекцию смеси компонентов "А" и "В" препарата в объеме 150 - 200 мл. Затем через не менее 1,5 месяцев после последней иммунизации первого цикла проводят второй цикл иммунизации, аналогично первому. Через 8 - 9 суток после третьей (последней) инъекции компонентов препарата второго цикла иммунизации у лошадей-продуцентов осуществляют через стерильную герметичную систему забор крови в количестве до 10 литров в бутыли и еще через 5-6 суток осуществляют повторный забор крови в том же объеме. Причем в каждый полученный образец крови объемом 10 л вводят 300 мл 10%-ного раствора цитрата натрия. Далее материал отстаивают в течение 12 - 24 часов при комнатной температуре и добавляют в каждый образец крови объемом 10 л 10 - 15 мл 30%-ного раствора хлористого кальция. Бутыли с образцами крови встряхивают для образования пены с фибрином и повторно отстаивают в течение 12 - 24 часов при комнатной температуре до образования сыворотки с последующим ее сливом в отдельные емкости.Example 3. The technology of obtaining polyvalent hyperimmune serum against diseases of cattle and a study of its effectiveness
To obtain multivalent hyperimmune serum, first prepare in equal proportions a mixture of components "B" and "C" and a mixture of components "A" and "C" of the claimed drug. Thus prepared mixtures based on local viral and bacterial strains for a specific livestock farm (Salair JSC) were used to immunize three horses three times. First, the first cycle of three immunization of horses is carried out: the animals-producers are injected subcutaneously into the neck area with the first injection of a mixture of components "B" and "C" of the drug in a volume of 10 - 20 ml. After 7 days, a second injection of a mixture of components "A" and "B" of the drug in a volume of 40 - 50 ml is carried out and after another 7 days - a third injection of a mixture of components "A" and "B" of a preparation in a volume of 150 - 200 ml. Then, at least 1.5 months after the last immunization of the first cycle, a second immunization cycle is carried out, similar to the first. 8 to 9 days after the third (last) injection of the components of the preparation of the second immunization cycle, horses-producers carry out blood sampling in a bottle of up to 10 liters in a bottle through a sterile sealed system and re-take blood in the same volume after another 5-6 days. Moreover, 300 ml of a 10% sodium citrate solution are injected into each blood sample obtained with a volume of 10 l. Further, the material is defended for 12-24 hours at room temperature and 10-15 ml of a 30% solution of calcium chloride are added to each blood sample with a volume of 10 l. The bottles with blood samples are shaken to foam with fibrin and re-settled for 12-24 hours at room temperature until serum is formed, followed by its discharge into separate containers.
Перед применением поливалентной сыворотки в хозяйстве показатели ее реактогенности и безвредности оценивают на лабораторных животных (белые мыши массой 14 - 16 г и морские свинки массой 200 - 250 г), которым вводят сыворотку подкожно (в объеме 0,2 мл и 0,5 мл соответственно). Наблюдение за лабораторными и домашними животными проводят в течение 14 - 20 дней. Специфическая активность антител к вирусам инфекционного ринотрахеита и парагриппа в такой сыворотке составляла в реакции нейтрализации 1:512 - 1:1024, а к Э. коли и Сальмонеллам в реакции приципитации в геле по Оухтерлони 1:32 - 1: 128. Общее время, связанное с приготовлением конечной формы препарата, составляет 3-4 месяца. После получения хороших результатов испытания сыворотку вводят внутримышечно в объеме 5 - 10 мл однократно больным телятам в АО "Салаир" и здоровым с профилактической целью. В результате проведенной работы гибель КРС в хозяйстве снизилась в 3 раза по сравнению с предыдущими годами, когда данная работа не проводилась. Before using polyvalent serum on the farm, the indicators of its reactogenicity and harmlessness are assessed on laboratory animals (white mice weighing 14-16 g and guinea pigs weighing 200-250 g), which are injected subcutaneously (in a volume of 0.2 ml and 0.5 ml, respectively ) Observation of laboratory and domestic animals is carried out for 14 to 20 days. The specific activity of antibodies to infectious rhinotracheitis and parainfluenza viruses in such serum was 1: 512 - 1: 1024 in the neutralization reaction, and for E. coli and Salmonella in the Ouchterloni gel precipitation reaction 1:32 - 1: 128. The total time associated with with the preparation of the final form of the drug, is 3-4 months. After obtaining good test results, serum is injected intramuscularly in a volume of 5 - 10 ml once to sick calves in Salair JSC and healthy for prophylactic purposes. As a result of the work, the death of cattle in the farm decreased by 3 times compared to previous years, when this work was not carried out.
При использовании препарата, изготовленного предлагаемым способом, удается получать сыворотки, содержащие антитела ко всем возбудителям заболевания в высоких титрах, равных тем, которые получаются при иммунизации животных одним или двумя микроорганизмами. When using the drug manufactured by the proposed method, it is possible to obtain serum containing antibodies to all pathogens of the disease in high titers equal to those obtained by immunizing animals with one or two microorganisms.
В результате широкого внедрения поливалентных гипериммунных сывороток против местных вирусно-бактериальных заболеваний КРС предполагается погасить энзоотические очаги инфекционных заболеваний среди КРС, существенно снизить объем циркуляции соответствующих вирусов и микробов в природе, что уменьшит в свою очередь опасность инфицирования человека, других домашних и диких животных и птиц. При этом создастся возможность производить экологически чистые (касаясь вирусно-бактериальных загрязнений) мясомолочные продукты высокого качества. As a result of the widespread introduction of polyvalent hyperimmune serums against local viral and bacterial diseases of cattle, it is proposed to extinguish the enzootic foci of infectious diseases among cattle and significantly reduce the circulation of the corresponding viruses and microbes in nature, which in turn will reduce the risk of infection in humans, other domestic and wild animals and birds . This will create the opportunity to produce environmentally friendly (regarding viral and bacterial contamination) high-quality meat and dairy products.
Промышленная применимость. Изобретение может быть использовано в ветеринарии, прикладной микробиологии и вирусологии. Industrial applicability. The invention can be used in veterinary medicine, applied microbiology and virology.
Claims (3)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU98117373A RU2147892C1 (en) | 1998-09-22 | 1998-09-22 | Method of preparing preparation based on virus-bacterial strains from local focus for preparing mixed vaccine or polyvalent hyperimmune serum against cattle disease |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU98117373A RU2147892C1 (en) | 1998-09-22 | 1998-09-22 | Method of preparing preparation based on virus-bacterial strains from local focus for preparing mixed vaccine or polyvalent hyperimmune serum against cattle disease |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2147892C1 true RU2147892C1 (en) | 2000-04-27 |
Family
ID=20210567
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU98117373A RU2147892C1 (en) | 1998-09-22 | 1998-09-22 | Method of preparing preparation based on virus-bacterial strains from local focus for preparing mixed vaccine or polyvalent hyperimmune serum against cattle disease |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2147892C1 (en) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2456021C2 (en) * | 2010-02-24 | 2012-07-20 | ФГОУ ВПО "Дагестанская государственная сельскохозяйственная академия" | Method for preparing cattle parainfluenza-3 hyperimmune serum |
| RU2539105C1 (en) * | 2013-10-04 | 2015-01-10 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Саратовский научно-исследовательский ветеринарный институт" | Preparation for treatment of necrotic stomatitis of cattle |
-
1998
- 1998-09-22 RU RU98117373A patent/RU2147892C1/en not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Иммунопрофилактика болезней животных. - М.: Колос, 1981, с.144-145. * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2456021C2 (en) * | 2010-02-24 | 2012-07-20 | ФГОУ ВПО "Дагестанская государственная сельскохозяйственная академия" | Method for preparing cattle parainfluenza-3 hyperimmune serum |
| RU2539105C1 (en) * | 2013-10-04 | 2015-01-10 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Саратовский научно-исследовательский ветеринарный институт" | Preparation for treatment of necrotic stomatitis of cattle |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US3911108A (en) | Process of producing bovine milk products containing specific antibodies | |
| CN101475639B (en) | Mixed yolk antibody for preventing and treating duck infectious serositis and preparation thereof | |
| RU2593718C1 (en) | Inactivated emulsion vaccine against foot-and-mouth disease types a, o, asia-1 | |
| RU2451745C2 (en) | A 2045/KYRGYZSTAN/ 2007 STRAIN OF FOOT-AND-MOUTH DISEASE VIRUS Aphtae epizooticae TYPE A FOR ANTIGENIC AND IMMUNOGENIC PERFORMANCE CONTROL OF FOOT-AND-MOUTH DISEASE VACCINES AND FOR PRODUCTION OF BIOPREPARATIONS FOR DIAGNOSIS AND SPECIFIC PREVENTION OF FOOT-AND-MOUTH DISEASE TYPE A | |
| RU2147892C1 (en) | Method of preparing preparation based on virus-bacterial strains from local focus for preparing mixed vaccine or polyvalent hyperimmune serum against cattle disease | |
| RU2549434C2 (en) | Method for making brucellosis diagnostic serum | |
| RU2143921C1 (en) | Vaccine against foot and mouth of type a and method of its preparing | |
| RU2432174C1 (en) | Method for producing colibacillosis anatoxin | |
| US3470294A (en) | Vaccine for immunization of dogs and foxes against distemper,hepatitis contagiosa and leptospirosis and process for preparing it | |
| RU2212895C2 (en) | Vaccine against o-type foot-and-mouth disease and method for its preparing | |
| RU2220744C1 (en) | Vaccine against foot-and-mouth asia-1 type and method for it preparing | |
| SU997599A3 (en) | Process for preparing heterovaccine for treating trichomonas syndrome | |
| RU2294760C2 (en) | Sorbed inactivated vaccine against foot-and-mouth disease of type a | |
| RU2291709C1 (en) | Immunoprophylaxis of calf viral respiratory diseases | |
| RU2753410C2 (en) | Method for obtaining toxoid vaccine against escherichiosis of animals | |
| RU2764600C1 (en) | Vaccine against escherichiosis of calves and piglets | |
| RU2457859C1 (en) | Cattle viral diarrhoeia vaccine | |
| RU2766549C1 (en) | Method for preventing escherichiosis in piglets | |
| RU2065749C1 (en) | Method of prophylaxis of brucellosis in cattle | |
| SU555664A1 (en) | Method for preparing polyvalent vaccine against leptospirosis in animals | |
| RU2777479C1 (en) | Method for specific prevention of rhinopneumonia and strangles in horses using an associated vaccine in herding conditions | |
| RU2766249C1 (en) | Method for preventing escherichiosis in calves | |
| RU2814593C1 (en) | Method of preventing escherichiosis in calves | |
| RU2806810C1 (en) | Hydroxide aluminum oil vaccine against escherichiosis in calves and piglets | |
| RU2056861C1 (en) | Mixed vaccine against anthrax and foot-and-mouth and a method of anthrax and foot-and-mouth prophylaxis |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20070923 |