RU2141108C1 - Способ определения люизита в водно-спиртовых экстрактах - Google Patents
Способ определения люизита в водно-спиртовых экстрактах Download PDFInfo
- Publication number
- RU2141108C1 RU2141108C1 RU98106728A RU98106728A RU2141108C1 RU 2141108 C1 RU2141108 C1 RU 2141108C1 RU 98106728 A RU98106728 A RU 98106728A RU 98106728 A RU98106728 A RU 98106728A RU 2141108 C1 RU2141108 C1 RU 2141108C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- lewisite
- luisite
- luciferase
- solution
- control
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Способ применяется для экспрессного обнаружения люизита в водно-спиртовых экстрактах из различных сред при решении задач контроля загрязнений окружающей среды, а также экологического мониторинга в местах хранения и уничтожения запасов люизита. При проведении анализа в качестве реактива используется раствор, содержащий фермент люциферазу, миристиновый альдегид и флавинмононуклеотид, восстановленный в натрий-фосфатном буфере, а о наличии и величине концентрации люизита судят по отношению интенсивностей биолюминесценции в контрольной и опытной пробах при длине волны 490 нм. Технический результат - повышение чувствительности, производительности, а также снижение трудоемкости процесса. 1 табл.
Description
Изобретение относится к области исследования и анализа химических свойств вещества, а именно к исследованиям веществ в растворах с использованием фермента люциферазы, и может быть использовано в аналитической химии для экспрессного обнаружения люизита в водно-спиртовых экстрактах из различных сред при решении задач контроля загрязнений окружающей среды, а также экологического мониторинга в местах хранения и уничтожения запасов люизита.
Известен способ обнаружения люизита в водно-спиртовых экстрактах, в котором используют метод отгона образующегося в реакции со щелочью ацетилена с помощью водорода. Определение концентрации люизита или его оксида в исследуемом растворе производится колориметрическим методом по образованию розовой или вишневой окраски раствора. Предел обнаружения составляет 3-5 • 10-5 мг/мл (см. Руководство по работе в автомобильной радиометрической и химической лаборатории АЛ-4М. - М: Воениздат, 1988).
К причинам, препятствующим достижению указанного ниже технического результата при использовании известного способа, относится то, что в известном способе не достигается требуемая чувствительность обнаружения, возможность проведения количественных измерений концентраций люизита, необходимая производительность проведения анализа, а процесс выполнения измерения является трудоемким и требует высокой квалификации оператора.
Известен также способ определения люизита по выделяющемуся в процессе реакции с концентрированной серной кислотой в присутствии сернокислой меди и металлического цинка мышьяковистого водорода с последующим его взаимодействием с индикаторной бумагой и уксусно-свинцовой ватой (см. Руководство по работе в автомобильной радиометрической и химической лаборатории АЛ-4М. - М: Воениздат, 1988).
Наиболее близким способом того же назначения к заявленному изобретению по совокупности признаков является способ определения люизита в водно-спиртовых растворах, в котором путем взаимодействия анализируемого образца с реактивами судят о наличии люизита в данных растворах. Способ заключается в следующем: в пробирку к 4-6 мл исследуемого водно-спиртового раствора прибавляют 0.5 мл 30%-ного раствора едкого кали, раствор перемешивают и по истечении 4-5 мин подкисляют концентрированной уксусной кислотой до слабокислой реакции по лакмусу, приливают 0.5 мл реактива на ацетилен, состоящего из меди азотнокислой, аммиака, гидроксиламина солянокислого, желатина и спирта этилового. Окрашивание раствора в розовый или вишневый цвет и выпадение хлопьевидного осадка такого же цвета указывает на присутствие люизита или его оксида. Чувствительность определения 0.003-0.005 мг/мл (см. Руководство по работе в автомобильной радиометрической и химической лаборатории АЛ-4М. - М: Воениздат, 1988). Данный способ принят за прототип.
К причинам, препятствующим достижению указанного ниже технического результата при использовании известного способа, принятого за прототип, относится то, что в известном способе не достигается требуемая чувствительность обнаружения и производительность проведения анализов, возможность количественного измерения концентраций люизита в водно-спиртовых растворах, а процесс выполнения измерения является трудоемким и требует высокой квалификации оператора.
Задача изобретения - повышение чувствительности, производительности, возможность проведения измерения концентраций, а также снижение трудоемкости операций при обнаружении люизита в водно-спиртовых растворах вследствие применения биохимической реакции на основе взаимодействия фермента люциферазы с люизитом и последующим измерением интенсивности биолюминесценции.
Задача достигается тем, что в качестве реактива используется раствор, содержащий фермент люциферазу, миристиновый альдегид и флавинмононуклеотид, восстановленный в натрий-фосфатном буфере, а о наличии и величине концентрации люизита судят по отношению интенсивностей биолюминесценции в контрольной и опытной пробах.
При протекании биохимической реакции происходит генерация квантов света в видимой области спектра с длиной волны 490 нм, которые регистрируются ФЭУ. Квантовый выход реакции очень высок. В связи с этим возможна регистрация малейших изменений интенсивности биолюминесценции, вызванных изменением активности фермента под действием люизита. Кроме того, люцифераза является тиоловым ферментом, который резко снижает свою активность под действием тиоловых ядов, к которым относится люизит и который блокирует SH-группы активного центра фермента. Данное обстоятельство обеспечивает высокую чувствительность обнаружения люизита. Кроме того, биолюминесцентная реакция под действием фермента люциферазы протекает очень быстро. Время достижения максимальной интенсивности свечения составляет 2-3 с, что обеспечивает возможность получения информации о пробе при автоматизации процесса обработки информации в течение 10-20 с. Это позволяет достигать высокую производительность проведения анализа.
Пример проведения анализа.
Анализ проводят при температуре воздуха 20-22oC и влажности воздуха 65%.
Стандартные концентрации люизита создают методом последовательных разбавлений на 10%-ном этиловом спирте.
Получение субстрата люциферазной реакции (ФМН•H2) осуществляют искусственным путем с последующим введением в реакционную среду.
Биолюминесцентная реакция, запускаемая восстановленным флавинмононуклеотидом (ФМНH2), катализируется люциферазой. Чувствительность обнаружения люизита определяют по формуле:
где Imоп, Imк - средние максимальные значения интенсивности свечения в опытной и контрольной пробах соответственно (определяют по результатам трех измерений).
где Imоп, Imк - средние максимальные значения интенсивности свечения в опытной и контрольной пробах соответственно (определяют по результатам трех измерений).
При контрольных измерениях в биолюминесцентной системе, запускаемой ФМНH2, используют реакционную смесь следующего состава: 50 мкл 0.0005%-ной суспензии тетрадеканаля в воде, 20 мкл препарата люциферазы из Photobacterium leiognathi (активность 10 мВ/мкл, содержание белка - 0.18 мг/л), 50 мкл 0.1 М фосфатного буфера, pH 7.0; 200 мкл 10% C2H5OH и 500 мкл раствора ФМНH2 (5.4•10-4 М).
Для опытной пробы к реакционной смеси вместо 200 мкл 10%-ного этилового спирта добавляют раствор люизита заданной концентрации в 10% C2H5OH, остальные растворы те же.
Подготовка измерений.
Добавляют 10 мл 0.1 М натрий-фосфатного буфера (pH 7.0) к препарату люциферазы и тщательно перемешивают, не вспенивая. Добавляют к 50 мкл альдегида 5 мл H2O и тщательно перемешивают. Приготовляют растворы люизита. Заполняют резервуар для ФМНH2 раствором ФМН с ЭДТА, включают лампу, через 10 мин после восстановления ФМН (обесцвечивания раствора) приступают к анализу.
Процедура измерения.
Кювету, содержащую 50 мкл раствора миристинового альдегида, 20 мкл раствора препарата люциферазы и 50 мкл 0.1 M натрий-фосфатного буфера (pH 7.0), 200 мкл 10% C2H5OH помещают в биолюминометр и добавляют 500 мкл ФМНH2. Записывают динамику свечения в контроле или определяют максимальную интенсивность свечения. В кювету, содержащую 50 мкл раствора альдегида, 20 мкл раствора препарата люциферазы, добавляют 200 мкл раствора люизита и 50 мкл 0.1 М натрий-фосфатного буфера (pH 7.0), помещают в биолюминометр и добавляют 500 мкл ФМНH2. Записывают динамику свечения и определяют Im. Для уменьшения ошибки измерения проводят при постоянной температуре.
В таблице представлены результаты по проверке способа на чувствительность определения люизита.
Данные, представленные в таблице, свидетельствуют о том, что способ позволяет проводить определение люизита в водно-спиртовых экстрактах с чувствительностью 5•10-6 мг/мл или 1•10-6 мг в пробе.
Таким образом, предлагаемое изобретение предназначено для использования в промышленности, а именно в аналитической химии, для экспрессного обнаружения люизита в водно-спиртовых экстрактах из различных сред при решении задач контроля загрязнений окружающей среды, а также экологического мониторинга в местах хранения и уничтожения запасов люизита и подтверждена возможность его осуществления с помощью описанных в заявке известных средств и методов.
Claims (1)
- Способ определения люизита в водно-спиртовых экстрактах, основанный на взаимодействии анализируемого образца с реактивами, отличающийся тем, что в качестве реактива используется раствор, содержащий фермент люциферазу, миристиновый альдегид и флавинмононуклеотид, восстановленный в натрий-фосфатном буфере, а о наличии и величине концентрации люизита с чувствительностью 5•10-6 мг/мл или 1•10-6 мг в пробе судят по отношению интенсивностей биолюминесценции в контрольной и опытной пробах при длине волны 490 нм.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU98106728A RU2141108C1 (ru) | 1998-02-03 | 1998-02-03 | Способ определения люизита в водно-спиртовых экстрактах |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU98106728A RU2141108C1 (ru) | 1998-02-03 | 1998-02-03 | Способ определения люизита в водно-спиртовых экстрактах |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2141108C1 true RU2141108C1 (ru) | 1999-11-10 |
Family
ID=20204601
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU98106728A RU2141108C1 (ru) | 1998-02-03 | 1998-02-03 | Способ определения люизита в водно-спиртовых экстрактах |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2141108C1 (ru) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2472149C1 (ru) * | 2011-07-19 | 2013-01-10 | Министерство Промышленности И Торговли Российской Федерации | Способ определения массовой концентрации люизита в воде, содержащей иприт, газохроматографическим методом с применением пламенно-ионизационного детектора |
-
1998
- 1998-02-03 RU RU98106728A patent/RU2141108C1/ru active
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
Руководство по работе в автомобильной радиометрической и химической лаборатории АЛ-4М. - М.: Воениздат, 1988. * |
Франке З. Химия отравляющих веществ. - М.: Химия, 1973, т.2, с.52-61, 100-101. Егоров П.Т., Шляхов И.А., Алабин Н.И. Гражданская оборона. - М.: Высшая школа, 1977, с.123-127. * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2472149C1 (ru) * | 2011-07-19 | 2013-01-10 | Министерство Промышленности И Торговли Российской Федерации | Способ определения массовой концентрации люизита в воде, содержащей иприт, газохроматографическим методом с применением пламенно-ионизационного детектора |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
García-Campaña et al. | Principles and recent analytical applications of chemiluminescence | |
Lever | Improved fluorometric determination of tetracyclines | |
US3973911A (en) | Sulfur oxide determination | |
Pérez-Ruiz et al. | Determination of proteins in serum by fluorescence quenching of Rose Bengal using the stopped-flow mixing technique | |
RU2141108C1 (ru) | Способ определения люизита в водно-спиртовых экстрактах | |
AU535721B2 (en) | Biocide conc. in aqueous systems | |
Carré et al. | Fluorimetric nitrite analysis using 2, 3-diaminonaphthalene: an improvement of the method | |
CN110698390B (zh) | 一种识别亚硫酸氢根的荧光探针及其制备方法和检测方法 | |
RU2105289C1 (ru) | Способ индикации и количественного определения паров аммиака в воздухе | |
CN110749574B (zh) | 双波长共振瑞利散射法测定全氟辛烷磺酸的方法及应用 | |
RU2011968C1 (ru) | Способ количественного определения анилина и его мононитропроизводных | |
CN108732150A (zh) | 检测样本中过氧化亚硝酸盐的方法 | |
CN113072528B (zh) | 一种可逆检测亚硫酸氢根/甲醛的近红外比率荧光探针、制备方法与应用 | |
CN118169094B (zh) | 一种共混溶液在检测四环素浓度上的应用及其检测方法 | |
CN109913207B (zh) | 一种检测苯硫酚的长波发射的荧光探针 | |
RU1831676C (ru) | Способ определени дамилена малеината (амитриптилина малеината) | |
EP0022757B1 (en) | Method for determining creatine kinase in samples containing atp | |
SU636534A1 (ru) | Способ определени общего белка в растворе | |
RU2009471C1 (ru) | Способ количественного определения бензидина и 3,3-диметоксибензидина | |
RU1793341C (ru) | Способ определени семикарбазона 5-нитрофурфурола | |
SU1712841A1 (ru) | Способ определени @ -аминоизовалериановой кислоты | |
RU1800329C (ru) | Способ количественного определени анабазина гидрохлорида | |
SU1636741A1 (ru) | Способ определени бензилового спирта в воздухе | |
SU1684638A1 (ru) | Способ количественного определени полиэтиленполиамина | |
RU2065598C1 (ru) | Способ определения оксипроизводных бензола в водных растворах |