RU2129375C1 - Биопрепарат фитоспорин жидкий для защиты растений от болезней - Google Patents
Биопрепарат фитоспорин жидкий для защиты растений от болезней Download PDFInfo
- Publication number
- RU2129375C1 RU2129375C1 RU98105008A RU98105008A RU2129375C1 RU 2129375 C1 RU2129375 C1 RU 2129375C1 RU 98105008 A RU98105008 A RU 98105008A RU 98105008 A RU98105008 A RU 98105008A RU 2129375 C1 RU2129375 C1 RU 2129375C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- biomass
- liquid
- preparation
- phytosporin
- drug
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Изобретение относится к биотехнологии, в частности, к биопрепаратам, используемым для защиты растений от болезней. Биопрепарат Фитоспорин жидкий является культуральной жидкостью, содержащей 15-25 млрд кл/мл эндофитной бактерии Bacillus subtilis ВНИИСХМ 128 (26Д), антибиотические вещества с литической активностью 100-200 ЕД/мл , вызывающие лизис фитопатогенных грибов и бактерий. Добавление стабилизатора в препарат и стабилизатор биомассы - гуми 0,5 - 2% обеспечивает сохранение количества живых колонеобразующих клеток в препарате в течение 6-8 месяцев и улучшает его свойства за счет обогащения гуминовыми кислотами, полезными для почвообразования. 4 табл.
Description
Изобретение относится к биотехнологии, а именно к биопрепаратам, предназначенным для ингибирования развития фитопатогенных грибов и бактерий.
В настоящее время создан биопрепарат Фитоспорин сухой на основе живых клеток и спор эндофитной бактерии Bacillus subtilis 26 ВНИИСХМ 128 для защиты растений от комплекса болезней (патент N 2099947) (1).
Препарат содержит живые клетки и споры В. subtilis и наполнитель. Препарат разлит в стерильные ампулы, лиофильно высушен и запаян. В качестве наполнителя препарат может содержать сыворотку крови крупного рогатого скота (КРС), молоко, обрат, сахарозо-желатиновую смесь (4% сахарозы, 1% желатины). Необходимость наполнителя обусловлена его защитным действием для бактериальных клеток при лиофильном высушивании препарата.
Однако, недостатком предложенной формы биопрепарата Фитоспорина - сухой порошок в ампулах, является:
1) необходимость приобретения и обслуживания дорогостоящих и энергоемких аппаратов для лиофильной сушки, а сам период сушки довольно длителен (50-80 ч);
2) неудобство использования ампул с препаратом для приготовления больших объемов рабочих разведении препарата перед их применением для обработки растений;
3) препарат содержит только биомассу антагонистически активного штамма В. subtilis 26Д и не содержит готовые антибиотические вещества, обладающие литической активностью в отношении патогенных грибов, которые продуцируются бактериальными клетками в процессе культивирования и содержатся в культуральной жидкости.
1) необходимость приобретения и обслуживания дорогостоящих и энергоемких аппаратов для лиофильной сушки, а сам период сушки довольно длителен (50-80 ч);
2) неудобство использования ампул с препаратом для приготовления больших объемов рабочих разведении препарата перед их применением для обработки растений;
3) препарат содержит только биомассу антагонистически активного штамма В. subtilis 26Д и не содержит готовые антибиотические вещества, обладающие литической активностью в отношении патогенных грибов, которые продуцируются бактериальными клетками в процессе культивирования и содержатся в культуральной жидкости.
Задачей изобретения является создание новой формы биопрепарата Фитоспорин, менее дорогостоящей, удобной в использовании, содержащей готовые антибиотические вещества для защиты растений от болезней, вызываемых бактериями и грибами.
Поставленная задача решается получением биомассы штамма Bacillus subtilis 26 путем гомогенного глубинного культивирования в жидкой питательной среде, содержащей минеральные соли, органический источник азота (пептон или триптон) и углеводы.
Глубинное культивирование осуществляют при 37-50oC при насыщении среды кислородом в пределах 60-70% и перемешивании со скоростью вращения мешалки 250-300 об/мин. Контроль за ростом культуры проводят путем отбора проб через каждые 2 часа и определении концентрации микробных клеток по оптическому стандарту мутности и на ФЕК 56М, наличие спор определяют в мазках культуры, окрашенных по Грамму, антибиотическую активность культурального фильтрата определяют путем ее добавления к тестовым штаммам культур фитопатогенных грибов и оценивают по снижению оптической плотности в единицах литической активности (2).
Культивирование проводят в течение 12-16 часов. Полученная культуральная жидкость, содержит 15-25 млрд кл/мл (70-100% спор) и антибиотические вещества, за счет чего усиливается специфическая активность жидкого препарата Фитоспорина. К полученной биомассе добавляется стабилизатор биомассы гуми 0,5-2%, что обеспечивает сохранение количества живых колониеобразующих клеток в препарате в течение 6-8 месяцев.
Культуральная жидкость, содержащая споровую биомассу штамма В. subtilis 26, антибиотические вещества, обеспечивающие литическую активность и стабилизатор биомассы используется в качестве бактерийного препарата Фитоспорин в жидкой форме.
Использование гуми, как стабилизатора биомассы препарата Фитоспорин, улучшает его свойства в качестве сельскохозяйственного препарата за счет обогащения гуминовыми кислотами, полезными для почвообразования (3).
Препарат содержит живые клетки В. subtilis ВНИИСХМ 128, антибиотические вещества и стабилизатор, об.%:
Биомасса В. subtilis ВНИИСХМ 128 - (15-20)•109
Живых микробных клеток в 1 мл культуральной жидкости - 98,5-97
Стабилизатор - 0,5-2
Антибиотические вещества : литическая активностью - 100-200 ЕД
Необходимость стабилизатора обусловлена его защитным действием для бактериальных клеток при хранении препарата в течение 6-8 месяцев.
Биомасса В. subtilis ВНИИСХМ 128 - (15-20)•109
Живых микробных клеток в 1 мл культуральной жидкости - 98,5-97
Стабилизатор - 0,5-2
Антибиотические вещества : литическая активностью - 100-200 ЕД
Необходимость стабилизатора обусловлена его защитным действием для бактериальных клеток при хранении препарата в течение 6-8 месяцев.
Пример 1. На основе штамма В7 subtilis ВНИИСХМ 128 с типичными морфологическими и культуральными признаками и биохимическими свойствами приготовлены 6 вариантов препарата с различным содержанием микробных клеток и разной концентрацией стабилизатора.
Вариант 1.
Препарат, содержащий, об.%:
Биомасса В. subtilis ВНИИСХМ 128, - 10•109
Живых клеток в 1 мл культуральной жидкости - 98,9
Стабилизатор биомассы - гуми - 0,1
Вариант 2.
Биомасса В. subtilis ВНИИСХМ 128, - 10•109
Живых клеток в 1 мл культуральной жидкости - 98,9
Стабилизатор биомассы - гуми - 0,1
Вариант 2.
Препарат, содержащий, об.%:
Биомасса В. subtilis ВНИИСХМ 128, - 15•109
Живых клеток в 1 мл культуральной жидкости - 98,9
Стабилизатор биомассы - гуми - 0,1
Вариант 3.
Биомасса В. subtilis ВНИИСХМ 128, - 15•109
Живых клеток в 1 мл культуральной жидкости - 98,9
Стабилизатор биомассы - гуми - 0,1
Вариант 3.
Биомасса В. subtilis ВНИИСХМ 128, - 20•109
Живых клеток в 1 мл культуральной жидкости - 98,5
Стабилизатор биомассы - гуми - 0,5
Вариант 4.
Живых клеток в 1 мл культуральной жидкости - 98,5
Стабилизатор биомассы - гуми - 0,5
Вариант 4.
Биомасса В. subtilis ВНИИСХМ 128, - 25•109
Живых клеток в 1 мл культуральной жидкости - 98
Стабилизатор биомассы - гуми - 1
Вариант 5.
Живых клеток в 1 мл культуральной жидкости - 98
Стабилизатор биомассы - гуми - 1
Вариант 5.
Биомасса В. subtilis ВНИИСХМ 128, - 20•109
Живых клеток в 1 мл культуральной жидкости - 97
Стабилизатор биомассы - гуми - 2
Вариант 6.
Живых клеток в 1 мл культуральной жидкости - 97
Стабилизатор биомассы - гуми - 2
Вариант 6.
Биомасса В. subtilis ВНИИСХМ 128, - 20•109
Живых клеток в 1 мл культуральной жидкости - 96
Стабилизатор биомассы - гуми - 3
Литическая активность культуральной жидкости во всех вариантах препарата составляла 100-200 ЕД.
Живых клеток в 1 мл культуральной жидкости - 96
Стабилизатор биомассы - гуми - 3
Литическая активность культуральной жидкости во всех вариантах препарата составляла 100-200 ЕД.
Изготовленные варианты препарата разливали в стерильные емкости на 10 л.
В изготовленных препаратах оптимальные количества бактериальных клеток В. subtilus ВНИИСХМ 128 в 1 мл культуральной жидкости составили 15•109 - 25•109 при их объемном содержании 98,9-96%. Оптимальное содержание стабилизатора - гуми было 0,5-2%.
Полученные варианты препарата проверяли на безвредность для животных, а также специфическую антагонистическую активность в отношении тест-культур - представителей различных групп фитопатогенных бактерий и грибов.
Для определения безвредности содержимое каждого варианта препарата в объеме 1 мл вводили перорально мышам. Для каждого варианта препарата использовали не менее 10 мышей массой 16-18 г. Препарата считали безвредным, если все мыши оставались живыми в течение 5 суток наблюдения. Результаты испытаний представлены в табл. 1 (см. в конце описания)
Испытания показали, что все варианты препарата Фитоспорина жидкого безвредны. Все животные остались живыми в течение периода наблюдения, ни у одного из них не выявлены признаки заболеваний, первоначальная масса животных увеличилась.
Испытания показали, что все варианты препарата Фитоспорина жидкого безвредны. Все животные остались живыми в течение периода наблюдения, ни у одного из них не выявлены признаки заболеваний, первоначальная масса животных увеличилась.
Для определения специфической активности исследовали антагонистическую активность вариантов препарата в отношении тест-культур фитопатогенных бактерий и грибов.
Исследование проводили методом отсроченного антагонизма. Для этого содержимое ампулы растворяли в 1 мл физиологического раствора. Полученную взвесь высевали петлей в центре чашки Петри с агаризованной средой Гаузе N 2 (для изучения активности к бактериальным тест-культурам) и на картофельный агар (для изучения антагонистической активности к тест-культурам грибов). Посевы инкубировали в термостате при температуре 28oC в течение 72 часов. Затем к выросшей культуре подсевали штрихами тест-микроорганизмы (500 млн суспензий суточных культур тест-бактерий и суспензии спор грибов в физиологическом растворе). Чашки с тест культурами бактерий инкубировали при температуре 37oC в течение 18 часов, с тест-культурами грибов - при 28oC в течение 5 суток. Учет результатов опытов проводили по величине зон подавления роста тест-культур. Контролем служили тест-культуры, параллельно выращенные на чашках Петри с агаризованной средой Гаузе N 2 и картофельным агаром без культуры антагониста. Результаты испытаний представлены в табл. 2 и 3 (см. в конце описания).
Полученные данные показывают, что исследованные варианты препарата Фитоспорин жидкий безвредны для животных и характеризуются специфической антагонистической активностью в отношении тест-культур фитопатогенных микроорганизмов.
Для изучения срока годности препарата Фитоспорин жидкий, серии препарата, изготовленные в 1997 году были заложены на хранение и подвергались переконтролю на содержание живых колониеобразующих клеток через каждые 2 месяца. Количество живых колониеобразующих клеток (КОЕ) определяли высевом на плотные питательные среды: Гаузе 2 или картофельный агар и подсчетом выросших колоний.
В табл. 4 представлены данные контроля 6 вариантов препарата Фитоспорин жидкий.
Как следует из данных таблицы, при использовании стабилизатора биомассы, живые микробные клетки в препарате сохраняются.
Использованные источники информации
1. Менликеев М.Я., Смирнов В.В., Байгузина Ф.А. и др. Биопрепарат Фитоспорин для защиты растений от болезней / Патент N 2099947, RU, C 12 N /20, опубл 25.12.97, бюл N 12.
1. Менликеев М.Я., Смирнов В.В., Байгузина Ф.А. и др. Биопрепарат Фитоспорин для защиты растений от болезней / Патент N 2099947, RU, C 12 N /20, опубл 25.12.97, бюл N 12.
2. Кислухина О.В., Калунянц К.А., Авиженис В.Ю. Технология производства лизосубтилина ГЗ Х // Тезисы докладов ВНИИИ биосинтеза белковых веществ. - 1974. - Вып. 2. - С. 77-83.
Claims (1)
- Биопрепарат фитоспорин жидкий для защиты растений от болезней, содержащий живые микробные клетки и споры бактерий Bacillus subtilis ВНИИСХМ 128 (26Д), отличающийся тем, что количество живых микробных клеток в 1 мл препарата составляет 15 - 25 млрд и он содержит антибиотические вещества с литической активностью 100 - 200 ЕД в 1 мл и стабилизатор биомассы - гуми 0,5 - 2%.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU98105008A RU2129375C1 (ru) | 1998-03-30 | 1998-03-30 | Биопрепарат фитоспорин жидкий для защиты растений от болезней |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU98105008A RU2129375C1 (ru) | 1998-03-30 | 1998-03-30 | Биопрепарат фитоспорин жидкий для защиты растений от болезней |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2129375C1 true RU2129375C1 (ru) | 1999-04-27 |
Family
ID=20203562
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU98105008A RU2129375C1 (ru) | 1998-03-30 | 1998-03-30 | Биопрепарат фитоспорин жидкий для защиты растений от болезней |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2129375C1 (ru) |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2621356C1 (ru) * | 2015-12-03 | 2017-06-02 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Всероссийский научно-исследовательский институт биологической защиты растений" | Биофунгицид для защиты сельскохозяйственных культур от болезней и повышения урожайности |
RU2729388C1 (ru) * | 2020-03-31 | 2020-08-06 | Юрий Алексеевич Воронин | Полифункциональное средство для растений |
RU2758599C1 (ru) * | 2020-12-24 | 2021-11-01 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Рязанский государственный агротехнологический университет имени П.А. Костычева" | Способ стимулирования роста и развития семян ярового рапса |
RU2774687C1 (ru) * | 2021-02-17 | 2022-06-21 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Казанский государственный аграрный университет" (ФГБОУ ВО Казанский ГАУ) | Способ получения жидких бактериальных биопрепаратов с диатомитом для защиты сельскохозяйственных культур от болезней |
-
1998
- 1998-03-30 RU RU98105008A patent/RU2129375C1/ru active
Cited By (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2621356C1 (ru) * | 2015-12-03 | 2017-06-02 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Всероссийский научно-исследовательский институт биологической защиты растений" | Биофунгицид для защиты сельскохозяйственных культур от болезней и повышения урожайности |
RU2729388C1 (ru) * | 2020-03-31 | 2020-08-06 | Юрий Алексеевич Воронин | Полифункциональное средство для растений |
RU2758599C1 (ru) * | 2020-12-24 | 2021-11-01 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Рязанский государственный агротехнологический университет имени П.А. Костычева" | Способ стимулирования роста и развития семян ярового рапса |
RU2774687C1 (ru) * | 2021-02-17 | 2022-06-21 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Казанский государственный аграрный университет" (ФГБОУ ВО Казанский ГАУ) | Способ получения жидких бактериальных биопрепаратов с диатомитом для защиты сельскохозяйственных культур от болезней |
RU2787400C1 (ru) * | 2021-12-21 | 2023-01-09 | Общество с ограниченной ответственностью "Аргенса" | Агробиовит П1 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN117535169B (zh) | 地衣芽孢杆菌zlp-81及其应用 | |
CN117535170B (zh) | 一种枯草芽孢杆菌zlp-121及其应用 | |
RU2201678C2 (ru) | Биопрепарат для защиты растений от грибных и бактериальных болезней | |
CN111979220A (zh) | 一种激活微生物制剂的载体分子伴侣 | |
RU2129375C1 (ru) | Биопрепарат фитоспорин жидкий для защиты растений от болезней | |
CN117004524B (zh) | 解淀粉芽孢杆菌zlp-01及其应用 | |
RU2099947C1 (ru) | Биопрепарат фитоспорин для защиты растений от болезней | |
KR100422457B1 (ko) | 길항미생물 버홀더리아 글라디올리 지비-0999 균주, 이를포함하는 미생물제제 및 이를 이용하여 식물의 풋마름병을방제하는 방법 | |
RU2398872C1 (ru) | ШТАММ БАКТЕРИЙ Bacillus licheniformis, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОБИОТИЧЕСКОЙ КОРМОВОЙ ДОБАВКИ, ПРЕДНАЗНАЧЕННОЙ ДЛЯ ПРОИЗВОДСТВА ВЫСОКОКАЧЕСТВЕННЫХ КОРМОВ, ПОВЫШАЮЩИХ ПРОДУКТИВНОСТЬ И СНИЖАЮЩИХ РИСК ЖЕЛУДОЧНО-КИШЕЧНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ ЖИВОТНЫХ, ПТИЦЫ И РЫБ | |
CN105543094A (zh) | 一种液态光合细菌高活力保存方法 | |
RU2340371C1 (ru) | Субстанция для дерматологических лекарственных средств на основе коллагеназы микробного происхождения "ультрализин" | |
Chobchuenchom et al. | Isolation and characterization of pathogens attacking Pomacea canaliculata | |
RU2422511C1 (ru) | ШТАММ БАКТЕРИЙ Brevibacillus laterosporus, ПРОДУЦИРУЮЩИЙ ШИРОКИЙ СПЕКТР БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ СОЕДИНЕНИЙ | |
RU2428470C1 (ru) | Штамм staphylococcus hominis klp-1 - продуцент низкомолекулярных пептидных соединений, ингибирующих развитие грамположительных бактерий | |
RU2203947C1 (ru) | Штамм бактерий bacillus licheniformis, используемый для получения пробиотического препарата, предназначенного для профилактики и лечения желудочно-кишечных заболеваний животных, птицы и рыбы | |
RU2612150C2 (ru) | Штамм микромицета Penicillium vulpinum F-1523, обладающий антибактериальной активностью в отношении возбудителя сибирской язвы Bacillus anthracis | |
RU2100029C1 (ru) | Среда для культивирования бактерии-симбионта bacillus pulvifaciens или bacillus subtilis - продуцента пробиотика | |
RU2241346C2 (ru) | Способ консервирования кормов с использованием бактериального препарата | |
RU2758857C1 (ru) | Способ криоконсервации вегетативного посевного материала micromonospora purpurea var. violacea штамма 7r продуцента гентамицина | |
RU2105810C1 (ru) | Штамм бактерий bacillus subtilis, используемый для обеззараживания птичьего помета и навоза от патогенных микроорганизмов | |
CN117535168B (zh) | 巨大芽孢杆菌zlp-21及其应用 | |
RU2804275C1 (ru) | Штамм бактерий Bacillus mojavensis RCAM05965, обладающий антагонистической активностью по отношению к Candida albicans, Serratia marcescens, Escherichia coli и перспективный для производства пробиотика для человека и/или животных | |
CN103320347B (zh) | 具有溶栓活性的枯草芽孢杆菌及其发酵方法 | |
RU2820305C1 (ru) | Штамм "SAU-21Л" бактерий Staphylococcus aureus для изготовления биопрепаратов для специфической профилактики мастита коров | |
RU2412991C2 (ru) | Питательная двухфазная среда для культивирования микроорганизмов |