RU2084533C1 - Method of detection of helicobacter pylori for diagnosis of gastroduodenal pathology dependent on thereof - Google Patents

Abstract

FIELD: medicinal microbiology, gastroenterology. SUBSTANCE: in sterile tube the following components were added: buffered isotonic sodium chloride, pyo- and klebsiella bacteriophages and the examined biopathological material with suspicion for H. pylori obtained after fibrogastroscopy and indicator disk with urea were immersed. The presence of H. pylori is determined in the case of solution staining for crimson-colored color and its absence - in the case of the retaining light-green color. EFFECT: improved method of detection. 2 tbl

Description

Изобретение относится к области медицины, а именно к медицинской микробиологии, и может быть использовано в гастроэнтерологии для выявления Helicobacter pylori в биоптатах для лабораторной диагностики вызываемых ими заболеваний. The invention relates to medicine, namely to medical microbiology, and can be used in gastroenterology for the detection of Helicobacter pylori in biopsy specimens for laboratory diagnosis of the diseases they cause.

Известен способ постановки уреазного теста для выявления Helicobacter pylori в биоптатах при диагностике вызываемых ими заболеваний (Hazell S. Borody T. Zal A. Lee A. //. Compylobacter pyloridis gastritis I Detection of Urease as a. marler of bacterial colonization and gastritis // Amer. J. Zastroeutorol. 1987, v. 82, N 4, p. 292 296). При этом перед постановкой уреазного теста для снижения вероятности неспецифических ложноположительных результатов, обусловленных другими микроорганизмами, биоптаты предварительно обрабатывали азидом натрия. Тест-система включала: 0,05 мл 0,01 М фосфатного буфера, содержащего 2% мочевины; 0,05% фенолового красного и 0,02% азида натрия. Результаты учитывали через 18 ч, чувствительность и специфичность составляли 91% и 100% соответственно. There is a method of setting up a urease test to detect Helicobacter pylori in biopsy specimens in the diagnosis of the diseases caused by them (Hazell S. Borody T. Zal A. Lee A. //. Compylobacter pyloridis gastritis I Detection of Urease as a. Marler of bacterial colonization and gastritis // Amer. J. Zastroeutorol. 1987, v. 82, No. 4, p. 292,296). Moreover, before staging a urease test to reduce the likelihood of nonspecific false-positive results caused by other microorganisms, the biopsy specimens were pre-treated with sodium azide. The test system included: 0.05 ml of 0.01 M phosphate buffer containing 2% urea; 0.05% phenol red and 0.02% sodium azide. The results were taken into account after 18 h, sensitivity and specificity were 91% and 100%, respectively.

Вышеуказанное применение азида натрия повышало в известной степени специфичность уреазного теста, но снижало его чувствительность, поскольку при этом не исключалась вероятность бактерицидного действия азида натрия на обнаруживаемые Helicobacter pylori (HP). Кроме того, время тестирования составляло 18 ч. The above use of sodium azide increased to a certain extent the specificity of the urease test, but reduced its sensitivity, since it did not exclude the possibility of a bactericidal effect of sodium azide on detectable Helicobacter pylori (HP). In addition, the testing time was 18 hours.

Цель изобретения сокращение времени тестирования и повышение чувствительности уразного теста при выявлении HP в биоптатах. The purpose of the invention is to reduce testing time and increase the sensitivity of the uraza test in detecting HP in biopsy specimens.

Эта цель достигается благодаря внесению в тест-систему 0,05 мл пиобактериофага и 0,05 мл клебсиеллезного бактериофага. This goal is achieved by introducing 0.05 ml of pyobacteriophage and 0.05 ml of Klebsiella bacteriophage into the test system.

Способ постановки уреазного теста заключается в том, что в стерильную пробирку вносят 0,3 мл забуференного изотонического раствора хлорида натрия, по 0,05 мл пил- и клебсиеллезного бактериофага (НПО "Иммунопрепарат, г. Уфа). Затем погружают исследуемый на наличие H. pylori биоптат, извлеченный в процессе фиброгастроскопии, и индикаторный диск с мочевиной (СИБ, г. Горький). Пробирка с исследуемым материалом закрывается, при 37^oC инкубируется в течение 2 ч. По истечении указанного срока при положительном результате на наличие H. pylori наблюдается окрашивание раствора в малиновый цвет, при отрицательном светло-зеленый (исходный). Преимуществом предложенного способа является повышение чувствительности до 100% при сохраненном уровне специфичности, а также сокращение времени исследования до 2 ч, т.е. в 9 раз в сравнении с прототипом.The method for setting up the urease test consists in adding 0.3 ml of a buffered isotonic sodium chloride solution, 0.05 ml of saw and Klebsiella bacteriophage (NPO Immunopreparat, Ufa) into a sterile tube. Then, the test person is immersed for H. pylori biopsy specimen extracted during fibrogastroscopy and an indicator disk with urea (NIB, Gorky). The test tube with the test material is closed, incubated for 2 hours at 37 ^o C. After this period, with a positive result for H. pylori is observed painting the solution in raspberry color, with a negative light green (initial). The advantage of the proposed method is to increase the sensitivity to 100% while maintaining the level of specificity, as well as reducing the study time to 2 hours, ie 9 times in comparison with the prototype.

Пиобактериофаг комбинированный жидкий (стафилококковый, стрептококковый, коли, пcевдомонас аеругиноза, протейный) выпускается НПО "Иммунопрепарат" (г. Уфа) и предназначен для лечения и профилактики различных форм гнойно-воспалительных и энтеральных заболеваний, вызванных перечисленными выше возбудителями, путем перорального или местного применения. Выпускается во флаконах по 20 и 100 мл, хранится в течение года при +4^oC в сухом темном месте.Combined liquid pyobacteriophage (staphylococcal, streptococcal, coli, pseudomonas aeruginosa, proteic) is produced by the NGO Immunopreparat (Ufa) and is intended for the treatment and prevention of various forms of purulent-inflammatory and enteric diseases caused by the above pathogens by oral or local application . Available in bottles of 20 and 100 ml, stored for a year at +4 ^o C in a dry, dark place.

Бактериофаг клебсиеллезный поливалентный очищенный жидкий выпускается НПО "Иммунопрепарат" (г. Уфа). Предназначен для лечения озены, риносклеромы, гнойно-воспалительных и энтеральных заболеваний, вызываемых клебсиеллами, путем перорального или местного применения. Выпускается в ампулах по 5 мл или 10 мл, во флаконах по 20 мл. Срок годности при +4^oC 1 год.The bacteriophage, Klebsiella polyvalent purified liquid, is produced by the NPO Immunopreparat (Ufa). It is intended for the treatment of ozena, rhinoscleromas, purulent-inflammatory and enteric diseases caused by Klebsiella by oral or topical application. Available in ampoules of 5 ml or 10 ml, in bottles of 20 ml. Shelf life at +4 ^o C 1 year.

При бактериальном обсеменении биоптатов обработка последних указанными бактериофагами исключает вероятность ложноположительных результатов в процессе индикации H. pylori обусловленными бактериями родов Proteus, Klebsiedda. In case of bacterial contamination of biopsy samples, treatment of the latter with the indicated bacteriophages excludes the probability of false positive results in the process of H. pylori indication due to bacteria of the genera Proteus, Klebsiedda.

Индикацию HP в биоптатах осуществляли при использовании диска с мочевиной систем индикаторных бумажных (СИБ, г. Горький), применяемых для идентификации вибрионов. СИБ представляют собой диски хроматографической бумаги, содержащие определенное количество мочевины в сочетании с индикатором, стабилизированные пленкообразующим полимером поливиниловым спиртом для дифференцировки холерных вибрионов от других микроорганизмов по уреазной активности. Срок хранения при 20±5^oC 2 года.Indication of HP in biopsy specimens was carried out using a urea disk of indicator paper systems (NIB, Gorky) used to identify vibrios. NIBs are chromatographic paper disks containing a certain amount of urea in combination with an indicator stabilized by a film-forming polymer with polyvinyl alcohol to differentiate cholera vibrioes from other microorganisms by urease activity. Shelf life at 20 ± 5 ^o C 2 years.

Пробы биопсийного материала от 20 больных, извлеченные в процессе фиброгастроскопии, исследовали на наличие X. pylori по уреазной активности последних. Полученные данные верифицировали гистологически путем визуального обнаружения HP в биоптатах после окраски по Гимзе и серологически при использовании набора "Roshe" (Швейцария). Результаты приведены в табл. 1. Samples of biopsy material from 20 patients, extracted during fibrogastroscopy, were examined for the presence of X. pylori by the urease activity of the latter. The data obtained were verified histologically by visual detection of HP in biopsy specimens after Giemsa staining and serologically using the Roshe kit (Switzerland). The results are shown in table. one.

Таким образом установлено, что в 5 случаях уреазный тест давал ложноположительные результаты. Thus, it was found that in 5 cases, the urease test gave false positive results.

Высев проб исследуемого материала на питательные среды показал, что в 5 случаях ложноположительный результат уреазного теста был связан с наличием в биоптатах Proteus (3) и Klebsiella (2), обладающих уреазной активностью. Sowing samples of the studied material on nutrient media showed that in 5 cases the false-positive result of the urease test was associated with the presence of Proteus (3) and Klebsiella (2) with urease activity in the biopsy specimens.

В 20 пробирок с изотоническим раствором хлорида натрия вносили по 0,05 мл пиобактериофага и клебселлезного бактериофага (до светло-зеленого окрашивания), погружали в биоптаты, извлеченные в процессе фиброгастроскопии 20 больных, и помещали по 1 диску с мочевиной. Инкубировали 2 ч при 37^oC.In 0 test tubes with an isotonic sodium chloride solution, 0.05 ml of pyobacteriophage and Klebseliosis bacteriophage (before light green staining) were added, immersed in biopsy specimens extracted during fibrogastroscopy of 20 patients, and 1 urea disk was placed. Incubated for 2 hours at 37 ^o C.

Результаты отражены в табл. 2. The results are shown in table. 2.

Проведенные исследования свидетельствуют, что предложенный способ постановки уреазного теста для диагностики заболеваний, вызываемых H. pylori, при использовании бактериофагов является эффективным и имеет ряд преимуществ в сравнении с прототипом: 100% чувствительность, сокращение экспозиции до 2 часов (в 9 раз). Studies show that the proposed method of setting up a urease test for the diagnosis of diseases caused by H. pylori using bacteriophages is effective and has several advantages compared to the prototype: 100% sensitivity, reduction of exposure to 2 hours (9 times).

Применение способа делает возможной диагностику гастродуоденальной патологии человека в условиях клинико-бактериологической лаборатории лечебно-профилактических учреждений. The application of the method makes possible the diagnosis of gastroduodenal pathology of a person in a clinical and bacteriological laboratory of medical institutions.

Пример 1. Example 1

В клинику поступил больной В. в возрасте 13 лет с жалобами на боли в эпигастрии. В процессе фиброгастроскопии в антральном отделе желудка была обнаружена "полная" эрозия, взят биопсийный материал. После обработки биоптата по описанному выше способу и инкубации в течение 2 ч в термостате при 37^oC выявили малиновое окрашивание раствора, на основании чего был сделан вывод о наличии HP в материале, а следовательно, лабораторно подтвердили диагноз - пилорический хеликобактериоз и была начала соответствующая этиотропная терапия заболевания. Биопсийный материал исследовали гистологически, а сыворотку больного иммуноферментным методом, по результатам которых диагноз также подтвердился, но в более поздние сроки.Patient V. was admitted to the clinic at the age of 13 with complaints of pain in the epigastrium. In the process of fibrogastroscopy in the antrum of the stomach, "complete" erosion was detected, and biopsy material was taken. After processing the biopsy specimen according to the method described above and incubating for 2 hours in a thermostat at 37 ^° C, a raspberry staining of the solution was revealed, on the basis of which it was concluded that HP was present in the material, and therefore, the diagnosis was confirmed by laboratory tests - pyloric helicobacteriosis and the corresponding etiotropic disease therapy. Biopsy material was examined histologically, and the patient's serum by enzyme immunoassay, according to the results of which the diagnosis was also confirmed, but at a later date.

Пример 2. Example 2

В клинику на дообследование поступил подросток Б в возрасте 14 лет по поводу болей в эпигастрии. При фиброгастроскопии выявлен субатрофический с дуодено-гастральным рефлексом IV ст. и взят материал для исследования. В процессе тестирования биоптата по описанному выше способу не выявлено изменение окраски индикатора, был сделан вывод об отсутствии HP, что позднее подтвердилось гистологически и серологически. A teenager B, aged 14, was admitted to the clinic for an examination for epigastric pain. When fibrogastroscopy revealed subatrophic with duodeno-gastric reflex IV Art. and material was taken for research. In the process of testing the biopsy specimen according to the method described above, no discoloration of the indicator was detected, it was concluded that there was no HP, which was later confirmed histologically and serologically.

Claims (1)

Способ выявления Helicobacter pylori для диагностики обусловленной ими гастродуоденальной патологии, включающий отбор биоптата, обработку его бактерицидом, внесение в тест-систему, состоящую из буфера, мочевины, бактерицида и индикатора фенолового красного, с последующей оценкой результатов, отличающийся тем, что в качестве бактерицида используют пио- и клебсиеллезный бактериофаги, применяют индикатор, стабилизированный поливиниловым спиртом, а о наличии Helicobacter pylori судят по малиновому окрашиванию. A method for detecting Helicobacter pylori for the diagnosis of gastroduodenal pathology caused by them, including the selection of a biopsy sample, treatment with a bactericide, adding it to a test system consisting of a buffer, urea, a bactericide and a phenol red indicator, followed by evaluation of the results, characterized in that the bactericide is used pio- and klebsiellosis bacteriophages, an indicator stabilized with polyvinyl alcohol is used, and the presence of Helicobacter pylori is judged by raspberry staining.

Images