RU2065877C1 - Способ получения афинного сорбента для очистки протеиназ - Google Patents
Способ получения афинного сорбента для очистки протеиназ Download PDFInfo
- Publication number
- RU2065877C1 RU2065877C1 RU95115807A RU95115807A RU2065877C1 RU 2065877 C1 RU2065877 C1 RU 2065877C1 RU 95115807 A RU95115807 A RU 95115807A RU 95115807 A RU95115807 A RU 95115807A RU 2065877 C1 RU2065877 C1 RU 2065877C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- sorbent
- proteinases
- antibiotic
- affinic
- purifying
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
Abstract
Использование: изобретение относится к биотехнологии, в частности к способу получения афинного сорбента для очистки протеиназ и может быть использовано в пищевой промышленности, биохимии, медицине, в производстве моющих средств, в ферментативном синтезе пептидов, а также для исследовательских целей. Сущность изобретения заключается в том, что для получения афинного сорбента для очистки протеиназ осуществляют синтез аминосодержащего нерастворимого носителя, в качестве которого используют природные биополимеры, например, хитин или хитозан, с антибиотиками-полипептидами и конденсирующим агентом, в качестве которого используют 10-25%-ный водный раствор глутарового альдегида, причем на 1 г природного биополимера берут 0,15-0,5 г антибиотика и 0,15-0,5 г глутарового альдегида и процесс проводят при 15-37 oС. 1 з.п.ф-лы. 1 табл.
Description
Изобретение относится к биотехнологии, в частности к способу получения афинного сорбента для очистки протеиназ, и может быть использовано в пищевой промышленности, биохимии, медицине, в производстве моющих средств, в фермантативном синтезе пептидов, а также для исследовательских целей.
Известен способ получения бацитрацин-сафарозы сорбента для афинной хроматографии протеиназ. По этому способу в качестве носителя используют производные агарозы, которые неустойчивы в кислой среде и могут разрушаться целлюлозами в процессе хроматографии. Кроме того, в качестве конденсирующего реагента при синтезе используют высокотоксичный бромциан [1]
Наиболее близким по технической сущности и достигаемому результату является способ получения афинного сорбента для очистки протеиназ, включающий взаимодействие аминопроизводного кремнеземсодержащего материала, используемого в качестве инертного носителя с антибиотиком-полипептидом и конденсирующим агентом при рН 1,8-9,5. Недостатками данного способа являются низкий выход сорбента, использование в качестве конденсирующего агента концерогенного вещества п-бензохинона. Также к недостатку способа следует отнести применение инертных силикатных материалов, которые для взаимодействия с антибиотиками-полипептидами должны быть аминированы аминопропилтриэтоксисисиланом, являющимся труднодоступным, дорогостоящим реагентом.
Наиболее близким по технической сущности и достигаемому результату является способ получения афинного сорбента для очистки протеиназ, включающий взаимодействие аминопроизводного кремнеземсодержащего материала, используемого в качестве инертного носителя с антибиотиком-полипептидом и конденсирующим агентом при рН 1,8-9,5. Недостатками данного способа являются низкий выход сорбента, использование в качестве конденсирующего агента концерогенного вещества п-бензохинона. Также к недостатку способа следует отнести применение инертных силикатных материалов, которые для взаимодействия с антибиотиками-полипептидами должны быть аминированы аминопропилтриэтоксисисиланом, являющимся труднодоступным, дорогостоящим реагентом.
Целью изобретения является упрощение процесса, увеличение выхода сорбента, неиспользование концерогенных веществ. Это достигается способом получения афинного сорбента для очистки протеиназ, включающим взаимодействие аминсодержащего нерастворимого носителя, в качестве которого используют природные биополимеры, например, хитин или хитозан, с антибиотиками-полипептидами и с конденсирующим агентом, в качестве которого используют водный раствор (10-25% ) глутарового альдегида, причем на 1 г природного биополимера берут 0,15-0,5 г антибиотика и 0,15-0,5 г глутарового альдегида и процесс проводят при 15-37o С.
Предложенный способ отличается от известного использованием в качестве нерастворимого аминсодержащего носителя природного биополимера (в качестве конденсирующего агента глутарового альдегида при соотношении на 1 г носителя берут 0,15-0,5 г антибиотика и 0,15-0,5 г глутарового альдегида) и проведении процесса при 15-37o С.
П р и м е р 1. Синтез бацитрацин-хитозана. К 1 г хитозана прибавляют 25 мл 25% -ного глутарового альдегида (10 мкМ) в 0,1 М фосфатном буфере при рН 6,9. После перемешивания в течение 4 ч при комнатной температуре помещают в термостат на 37o С и оставляют на ночь. Затем сорбент отфильтровывают, промывают тем же буфером и помещают в раствор 0,5 г (9 мкМ) бацитрацина в том же буфере, перемешивают 30 мин и оставляют на ночь в термостате при 37 oС. Готовый сорбент отфильтровывают, промывают буфером и водой. Содержание бацитрацина в образце 8,5 мкМ/г, выход 94% Для определения включения антибиотика в сорбент навеску в 20 мг гидролизуют 5,7 н НС 48 ч при 105 oС и измеряют количественно содержание аминокислот (Asp, Glu, Val, Lys) на аминокислотном анализаторе. Выход реакции рассчитывают по отношению количества присоединяющегося антибиотика к количеству антибиотика, вводимого в реакцию (мкМ), принимая за 100% исходное содержание антибиотика в реакционной смеси на 1 г хитина или хитозана.
Из данных таблицы видно, что по известному способу наибольший выход достигается при избытке бацитрацина 340 мкМ. В предложенном способе в целях экономии предлагается уменьшить количество дефицитных антибиотиков до 9 мкМ, т.е. в 38 раз. При этом выход повышается до 94%
Таким образом, способ обладает существенными преимуществами по сравнению с известным. Вместо инертных силикатных материалов в известном способе, требующем для активации применения дорогостоящего аминопропилтриэтоксисилана, предлагаются природные биополимеры отходы крабьего промысла хитин или хитозан, уже имеющие на поверхности аминогруппы и не требующие активации.
Таким образом, способ обладает существенными преимуществами по сравнению с известным. Вместо инертных силикатных материалов в известном способе, требующем для активации применения дорогостоящего аминопропилтриэтоксисилана, предлагаются природные биополимеры отходы крабьего промысла хитин или хитозан, уже имеющие на поверхности аминогруппы и не требующие активации.
Россия располагает большими сырьевыми ресурсами ракообразных для производства хитина и хитозана. Учитывая экологические аспекты утилизации отходов, эти биополимеры являются достаточно дешевыми носителями для афинных сорбентов, не уступающие в этом отношении макропористым силикатным материалом. Хитин и хитозан обладают высокой химической и биологической стойкостью, достаточной проницаемостью. Эти материалы характеризуются значительной степенью гидрофильности и могут использоваться в гранульной форме.
Вместо канцерогенного п-бензохинона предлагается в качестве конденсирующего агента использовать безвредный глутаровый альдегид.
Синтез проводят при более низких температурах (15 37oС), что снижает затраты энергии и уменьшает возможность побочных реакций.
Предлагаемый способ дает возможность лучше контролировать процесс, т.к. исходное количество аминогрупп на хитине или хитозане можно заранее определить и подобрать соответствующее количество антибиотика. Расход антибиотика сокращается в предлагаемом способе в 3,7-23 раза, а выход афинного сорбента увеличивается в 4-23 раза по сравнению с известным способом. Синтезированные по предлагаемому способу сорбенты по качеству сравнимы с применяемыми ранее. ТТТ1
Claims (2)
1. Способ получения афинного сорбента для очистки протеиназ, включающий взаимодействие аминосодержащего нерастворимого носителя с антибиотиками-полипептидами и конденсирующим агентом, отличающийся тем, что в качестве аминосодержащего нерастворимого носителя используют природные биополимеры, например, хитин или хитозан, а в качестве конденсирующего агента глутаровый альдегид, причем на 1 г природного биополимера берут 0,15 0,5 антибиотика и 0,15 0,5 г глутарового альдегида.
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что процесс проводят при 15 - 37oС.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU95115807A RU2065877C1 (ru) | 1995-09-18 | 1995-09-18 | Способ получения афинного сорбента для очистки протеиназ |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU95115807A RU2065877C1 (ru) | 1995-09-18 | 1995-09-18 | Способ получения афинного сорбента для очистки протеиназ |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU95115807A RU95115807A (ru) | 1996-06-10 |
RU2065877C1 true RU2065877C1 (ru) | 1996-08-27 |
Family
ID=20171964
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU95115807A RU2065877C1 (ru) | 1995-09-18 | 1995-09-18 | Способ получения афинного сорбента для очистки протеиназ |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2065877C1 (ru) |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN109317114A (zh) * | 2018-12-24 | 2019-02-12 | 重庆大学 | 一种复合型磁性壳聚糖吸附材料的制备方法和应用 |
RU2700051C2 (ru) * | 2014-11-19 | 2019-09-12 | Перма-Фикс Инвайрнментал Сервисиз, Инк. | Сорбент, содержащий микропористый материал, и способ его получения |
US10500564B2 (en) | 2011-03-17 | 2019-12-10 | Perma-Fix Environmental Services, Inc. | Preparation of chitosan-based microporous composite material and its applications |
-
1995
- 1995-09-18 RU RU95115807A patent/RU2065877C1/ru active
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
1. Авторское свидетельство СССР N 644796, C 07G 7/02, 1979. 2. Авторское свидетельство СССР N 962302, C 12N 9/50, 1982. 3. Авторское свидетельство СССР N 942427, C 12N 9/50, 1984. * |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US10500564B2 (en) | 2011-03-17 | 2019-12-10 | Perma-Fix Environmental Services, Inc. | Preparation of chitosan-based microporous composite material and its applications |
RU2700051C2 (ru) * | 2014-11-19 | 2019-09-12 | Перма-Фикс Инвайрнментал Сервисиз, Инк. | Сорбент, содержащий микропористый материал, и способ его получения |
CN109317114A (zh) * | 2018-12-24 | 2019-02-12 | 重庆大学 | 一种复合型磁性壳聚糖吸附材料的制备方法和应用 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
RU95115807A (ru) | 1996-06-10 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US4983524A (en) | Method of immobilizing enzymes on a support with iridoid aglycone cross-linking agents | |
JPH11500159A (ja) | キトサン−グルカン複合体の調製方法、該複合体から調製可能な組成物および該複合体の使用 | |
CN1130386A (zh) | 肝素官能亲合性载体 | |
EP0550450A1 (en) | Use of crosslinked crystals as a novel form of enzyme immobilization | |
US4523997A (en) | Affinity chromatography matrix with built-in reaction indicator | |
JPH0427504B2 (ru) | ||
RU2065877C1 (ru) | Способ получения афинного сорбента для очистки протеиназ | |
Kusser et al. | Escherichia coli murein transglycosylase: purification by affinity chromatography and interaction with polynucleotides | |
KR20030013371A (ko) | 모노글리코사이드화 플라보노이드의 제조방법 | |
JPS5867192A (ja) | 5′−リボヌクレオチドの製法 | |
AU597568B2 (en) | Method for producing high-active biologically efficient compounds immobilized on a carrier | |
US5395856A (en) | HPLC avidin monomer affinity resin | |
JPH11152330A (ja) | ポリリジン、及びポリリジンの製造方法、及びポリリジン組成物、及びエンドトキシンを除去する医薬品の生産方法 | |
RU2230072C1 (ru) | Способ получения афинного сорбента для очистки ферментных препаратов | |
SU1479511A1 (ru) | Способ получени афинного сорбента | |
JPS61205483A (ja) | 細胞外酵素の安定化 | |
CA2002010A1 (en) | Immobilized enzyme and a method for application thereof | |
SU942427A1 (ru) | Способ очистки протеолитических ферментов | |
JPH0147997B2 (ru) | ||
KR950014967B1 (ko) | 모라노린 유도체의 제법 | |
RU93018605A (ru) | Способ производства натриевой соли дезоксирибонуклеиновой кислоты из животного сырья | |
Kumar et al. | Immobilization of enzymes and biotechnological perspective | |
SU1186243A1 (ru) | Способ получени адсорбента дл аффинной хроматографии | |
US5001063A (en) | Treatment of cellulosic ion exchange composites in hot aqueous medium to increase adsorption of macromolecules | |
RU2057761C1 (ru) | Способ получения водорастворимых олигомеров |