RU2045759C1 - Method for screening of neuro-mental diseases - Google Patents

Abstract

FIELD: medicine. SUBSTANCE: method is carried out by immunofermentative analysis, blood serum is tested on plates being covered by absorbed protein S100, increased titers of anti-S100 antibodies indicates neuro-mental disease. EFFECT: simplifies the method, decreases its duration.

Description

Изобретение относится к медицине, биотехнологии, иммунологии и психиатрии. The invention relates to medicine, biotechnology, immunology and psychiatry.

Предлагаемая тест-система ELITEST-1 может быть использована в качестве диагностикума для детекции повышенного уровня сывороточных аутоантител к видонеспецифичному белку S-100, что является универсальной особенностью разных нервно-психических болезней (шизофрении, эпилепсии, рассеянного склероза, маниакально-депрессивного психоза, детского церебрального паралича, гепато-церебральной дистрофии). Тест-система ELITEST-1 может применяться для оперативного и массового выявления клинически неманифестированных форм нервно-психических болезней при массовых диспансерных обследованиях населения, для выявления лиц, составляющих группы повышенного риска развития нервно-психических заболеваний (например, для целей профотбора и определения профессиональной пригодности лиц для выполнения работ, связанных с повышенной ответственностью), а также для отслеживания (мониторинга) за динамикой клинического состояния больных и подбора оптимальных схем индивидуального медикаментозного лечения. The proposed ELITEST-1 test system can be used as a diagnosticum for detecting elevated serum autoantibodies to the species-specific protein S-100, which is a universal feature of various neuropsychiatric diseases (schizophrenia, epilepsy, multiple sclerosis, manic-depressive psychosis, and cerebral infant paralysis, hepato-cerebral dystrophy). The ELITEST-1 test system can be used for the rapid and mass detection of clinically non-manifest forms of neuropsychiatric diseases in mass dispensary examinations of the population, for identifying individuals at higher risk of developing neuropsychiatric diseases (for example, for the purpose of professional selection and determining the professional suitability of individuals to perform work associated with increased responsibility), as well as to monitor (monitor) the dynamics of the clinical condition of patients and select the optimal individual drug treatment regimens.

Тест-система ELITEST-1 осуществляется в условиях ин витро на основе инструментального лабораторного анализа. The ELITEST-1 test system is carried out in vitro based on instrumental laboratory analysis.

В качестве аналога предлагаемого способа выбран способ применения белков S-100 для выявления у обследуемых индивидуумов реакции гиперчувствительности замедленного типа к данным белкам, проводимой в условиях ин виво методом кожно-аллергических проб. As an analogue of the proposed method, the method of using S-100 proteins was selected for detecting delayed-type hypersensitivity reactions to these proteins in the examined individuals, carried out in vivo by the method of skin-allergic tests.

В качестве прототипа выбран способ получения набора антигенов ELITEST-24 из мозга. В прототипе описана технология получения 24-компонентного набора мозговых антигенов и использования его для выявления и дифференциальной диагностики нервно-психических заболеваний человека в условиях ин витро, на основе твердофазного иммуноферментного анализа. As a prototype, a method for obtaining a set of ELITEST-24 antigens from the brain was selected. The prototype describes the technology for producing a 24-component set of brain antigens and using it for the detection and differential diagnosis of human neuropsychiatric diseases in vitro based on an enzyme-linked immunosorbent assay.

Способ диагностики, описанный в прототипе, позволяет устранить два главных недостатка аналога: во-первых, отказаться от тестирования ин виво (в аналоге антиген вводится в виде раствора обследуемым лицам подкожно, что потенциально создает возможность широкого круга осложнений, вплоть до развития аллергического шока), во-вторых, позволяет объективизировать результаты анализа и дать реальную количественную оценку получаемым данным, что практически невозможно при использовании метода кожно-аллергических проб. The diagnostic method described in the prototype eliminates two main drawbacks of the analogue: firstly, to refuse to test in vivo (in the analogue, the antigen is administered subcutaneously to the test subjects, which potentially creates the possibility of a wide range of complications, up to the development of allergic shock), secondly, it allows you to objectify the results of the analysis and give a real quantitative assessment of the data obtained, which is almost impossible when using the method of skin-allergic tests.

Проведение иммуноферментных анализов проб тестируемых лиц на основе тест-системы ELITEST-24, описанной в прототипе, позволяет получить детальные данные о характере и особенностях "антимозговых" аутоиммунных процессов обследуемых лиц и после соответствующей компьютерной обработки результатов, с высокой степенью достоверности подтвердить или отвергнуть диагноз конкретного нервно-психического заболевания. В то же время, ряд особенностей прототипа, резко снижает возможность и целесообразность использования его для целей первичного массового скрининга больших контингентов людей. Enzyme-linked immunosorbent assays of samples of test persons based on the ELITEST-24 test system described in the prototype provide detailed data on the nature and characteristics of the "anti-brain" autoimmune processes of the subjects and, after appropriate computer processing of the results, confirm or reject the diagnosis of a particular patient with a high degree of certainty. mental illness. At the same time, a number of features of the prototype sharply reduces the possibility and expediency of using it for primary mass screening of large contingents of people.

Способ-прототип обладает следующими недостатками:
во-первых, получение компонентов набора ELITEST-24 требует расхода значительных количеств дорогих реагентов (амфолинов), а само проведение препаративного изоэлектрофокусирования (основной момент в получении набора ELITEST-24) больших объемов сложных по составу смесей (суммарные экстракты мозга животных), требует высокого уровня профессионализма специалиста-биохимика (использование же способа ELITEST-1 позволяет достигнуть качественного упрощения);
во-вторых, проведение диагностического тестирования и обработка получаемых результатов занимают не менее 2 сут. Причем, один оператор способен проводить анализы до 10 тестируемых проб в день (до 100 проб при условии автоматизации способа), т.е. использование способа ELITEST-1 позволяет достигнуть ускорения в получении результатов;
в-третьих, информация, содержащаяся в результатах иммуноферментного тестирования на основе набора ELITEST-24 не может быть оценена (расшифрована) без применения достаточно сложного математического аппарата (многофакторный анализ на основе метода наименьших квадратов) и компьютерной обработки данных для их сравнения с информационными банками, характеризующими "спектры" антигенной направленности тысяч проб сывороток больных разными формами нервно-психических заболеваний. Таким образом, использование способа ELITEST-1 позволяет достигнуть качественного упрощения получения результатов по сравнению с прототипом;
в-четвертых, проведение анализа на основе ELITEST-24 требует сравнительно большого расхода стандартных одноразовых планшетов для иммуноферментных реакций и большого расхода проявляющих иммунореагентов (на одном 96-луночном планшете производится тестирование проб сывороток 2 больных).The prototype method has the following disadvantages:
firstly, obtaining the components of the ELITEST-24 kit requires the consumption of significant amounts of expensive reagents (ampholines), and the preparative isoelectric focusing (the main point in obtaining the ELITEST-24 kit) of large volumes of complex mixtures (total animal brain extracts) requires high the level of professionalism of a specialist biochemist (using the ELITEST-1 method allows to achieve qualitative simplification);
secondly, carrying out diagnostic testing and processing the obtained results take at least 2 days. Moreover, one operator is capable of analyzing up to 10 test samples per day (up to 100 samples subject to the automation of the method), i.e. using the ELITEST-1 method allows to achieve acceleration in obtaining results;
thirdly, the information contained in the results of an enzyme-linked immunosorbent assay based on the ELITEST-24 kit cannot be evaluated (decoded) without the use of a sufficiently sophisticated mathematical apparatus (multivariate analysis based on the least squares method) and computer processing of data to compare them with information banks, characterizing the "spectra" of the antigenic orientation of thousands of serum samples from patients with various forms of neuropsychiatric diseases. Thus, the use of the ELITEST-1 method allows to achieve a qualitative simplification of obtaining results in comparison with the prototype;
fourthly, the analysis based on ELITEST-24 requires a relatively large consumption of standard disposable plates for enzyme-linked immunosorbent reactions and a large consumption of developing immunoreagents (on a single 96-well plate, testing of serum samples of 2 patients is performed).

Все отмеченные недостатки обуславливают нерентабельность (по сути невозможность) применения способа-прототипа для первичных массовых скрининговых обследований населения, но полностью разрешается заявляемым способом, основанным на тест-системе ELITEST-1. All of the noted drawbacks determine the unprofitability (essentially impossibility) of using the prototype method for primary mass screening examinations of the population, but it is completely resolved by the claimed method based on the ELITEST-1 test system.

Техническим результатом изобретения является качественное упрощение детекции иммунопатологических изменений гуморального иммунитета, характерного для многих форм нервно-психических заболеваний, за счет выявления в тестируемых пробах сыворотки крови повышенного уровня аутоантител к видонеспецифичным мозгоспецифическим белкам S-100. Последнее является характерной особенностью более 75% проб сывороток крови больных шизофренией, эпилепсией, маниакально-депрессивным психозом, рассеянным склерозом, детским церебральным параличем, гепатоцеребральной дистрофией и опухолями мозга вне зависимости от конкретной нозологической формы болезни. The technical result of the invention is a qualitative simplification of the detection of immunopathological changes in humoral immunity, characteristic of many forms of neuropsychiatric diseases, due to the identification of high levels of autoantibodies to species-specific brain-specific proteins S-100 in the tested blood serum samples. The latter is a characteristic feature of more than 75% of blood serum samples of patients with schizophrenia, epilepsy, manic-depressive psychosis, multiple sclerosis, cerebral palsy, hepatocerebral dystrophy and brain tumors, regardless of the specific nosological form of the disease.

Дополнительным результатом является разработка простого и дешевого способа объективизации диагностики нервно-психических заболеваний, пригодного для массового скриннинга. An additional result is the development of a simple and cheap way to objectify the diagnosis of neuropsychiatric diseases, suitable for mass screening.

Технический результат достигается путем реализации существенных признаков предлагаемого способа, в результате сорбции на стандартные 96-луночные планшеты для ИФА мозгоспецифических белков группы S-100, раститровки на них тестирующих проб сывороток, взятых в разведениях 1:100, 1:200 и 1:400 и объединенных референс-сывороток полученных от 100 здоровых лиц, и взятых в тех же разведениях, выявлении образующихся на твердой фазе антиген-антительных комплексов (S100-антитела) с помощью коньюгатов вторичных (антивидовых) иммуноглобулинов, меченных пероксидазой хрена, проявлении реакции в лунках о-фенилендиамином/-Н₂О₂ и сравнении уровня интенсивности реакции в лунках, содержащих разведения тестируемых сывороток с референс-лунками.The technical result is achieved by the implementation of the essential features of the proposed method, as a result of sorption on standard 96-well plates for ELISA of brain-specific proteins of the S-100 group, the test samples of sera taken in dilutions 1: 100, 1: 200 and 1: 400 and made on them combined reference sera obtained from 100 healthy individuals and taken in the same dilutions, detecting antigen-antibody complexes (S100 antibodies) formed on the solid phase using conjugates of secondary (antispecies) immunoglobulins labeled with peroxide the basics of horseradish, the manifestation of the reaction in the wells of o-phenylenediamine / -H ₂ O ₂ and comparing the level of reaction intensity in the wells containing dilutions of the test sera with reference wells.

Положительный эффект от реализации изобретения сводится к получению однокомпонентного диагностикума ELITEST-1 с помощью которого в среднем за 3 ч можно выявить среди группы из нескольких десятков или сотен обследуемых лиц тех индивидуумов, сыворотки которых содержат повышенные уровни аутоантител к мозгоспецифическим белкам S100, что является универсальным признаком наличия (или начала развития) разных форм нервно-психических заболеваний. Данные, получаемые в результате использования тест-системы ELITEST-1, позволяют оперативно (за 3 ч) и объективно, на основе инструментального иммуноферментного анализа выявить лиц больных теми или иными заболеваниями, в том числе их скрытыми, доклиническими и латентными формами, либо относящихся к группе повышенного риска развития нервно-психических заболеваний. Следует отметить, что в отличие от прецизионной диагностической тест-системы антигенов ELITEST-24 (прототип), заявляемый способ не позволяет проводить дифференциальную диагностику, он предназначен для определения наличия или отсутствия (или риска возникновения) нервно-психических заболеваний у обследуемых лиц без одновременного уточнения конкретного диагноза. Однако, исходя из себестоимости использования (у ELITEST-1 в 120 раз ниже, чем у ЕLITEST-24), оперативности получения результатов (3 ч против 48 ч в прототипе) и отсутствия необходимости сложных рассчетов (тогда как данные, получаемые с помощью набора ELITEST-24, невозможно оценить без применения специализированной программы компьютерного анализа) на этапах первичного скрининга сывороток больших контингентов населения, наиболее целесообразным представляется использование тест-системы ELITEST-1. Затем, те 3-5% сывороток, в которых будет выявлена позитивная реакция (предположительное наличие нервно-психического заболевания или риска его развития), целесообразно подвернуть комплексной прецезионной иммунохимической оценки с использованием набора антигенов ELITEST-24 с целью установления конкретного диагноза заболевания. The positive effect of the invention is reduced to obtaining a single-component ELITEST-1 diagnosticum with the help of which, in an average of 3 hours, one can identify among individuals from several tens or hundreds of examined individuals those individuals whose sera contain elevated levels of autoantibodies to brain-specific proteins S100, which is a universal feature the presence (or onset of development) of various forms of neuropsychiatric diseases. The data obtained as a result of using the ELITEST-1 test system make it possible to quickly (in 3 hours) and objectively, based on instrumental enzyme-linked immunosorbent assay, to identify patients with certain diseases, including their latent, preclinical and latent forms, or related to group at increased risk of developing neuropsychic diseases. It should be noted that in contrast to the precision diagnostic test system of antigens ELITEST-24 (prototype), the inventive method does not allow differential diagnosis, it is intended to determine the presence or absence (or risk) of neuropsychiatric diseases in the subjects without simultaneous clarification specific diagnosis. However, based on the cost of use (ELITEST-1 is 120 times lower than ELITEST-24), the speed of obtaining results (3 hours versus 48 hours in the prototype) and the absence of the need for complex calculations (whereas the data obtained using the ELITEST set -24, it is impossible to evaluate without the use of a specialized computer analysis program) at the stages of the initial screening of sera of large populations, the most appropriate is the use of the ELITEST-1 test system. Then, those 3-5% of sera in which a positive reaction will be detected (the presumed presence of a neuropsychiatric disease or the risk of its development), it is advisable to undergo a comprehensive precision immunochemical assessment using the ELITEST-24 antigen kit to establish a specific diagnosis of the disease.

Необходимо отметить, что выполнение анализов производится в условиях ин витро без какого-либо вреда для обследуемого. Анализы могут выполняться как в ручном режиме (пропускная способность одного оператора до 150 анализов в день), так и в автоматизированном режиме (пропускная способность оператора в этом случае составляет 1000-2000 анализов в день). При этом точность детекции случаев нервно-психической патологии (в среднем 75%) имеет тот же порядок, что и в прототипе (в среднем 80%). It should be noted that the analysis is performed in vitro without any harm to the subject. Analyzes can be performed both in manual mode (throughput of one operator up to 150 analyzes per day), and in automated mode (throughput of the operator in this case is 1000-2000 analyzes per day). Moreover, the accuracy of detection of cases of neuropsychiatric pathology (on average 75%) has the same order as in the prototype (on average 80%).

Использованный способ получения S100 общеизвестен. Процедуры иммуноферментного анализа выполнялись по общепринятым схемам сэндвич-варианта ИФА. The method used to obtain S100 is well known. Enzyme-linked immunosorbent assay procedures were performed according to generally accepted ELISA sandwich variants.

Способ осуществляется следующим образом. Процедуры выполнения иммуноферментного анализа осуществлялись по общепринятым методам. В ампулы (флаконы), содержащие по 0,1 мг лиофилизированного S100 вносили по 1 мл 0,1 М карбонатного буфера рН 9,5, растворяли, доводили концентрацию белка до 2 мкг/мл тем же буфером и вносили в лунки стандартных 96-лучночных планшетов для иммуноферментного анализа по 100 мкл. После 18 ч инкубации при 4^оС избыток несорбированного антигена удаляли, промывали лунки 4-кратно отмывным буфером (0,01 М фосфатный буфер рН 7,4 с 0,15 М NaCl и 0,05% Твина-20). Затем в лунки вносили по 100 мкл тестируемых сывороток в разведениях 1:100, 1:200, 1: 400 (в 90 лунок), а в 6 оставшихся лунок планшета такие же разведения референс-сывороток в двух повторах. После инкубации 1 ч при 37^оС лунки 4-кратно отмывали отмывным буфером и вносили в них по 100 мкл конъюгатов вторичных антител (направленных к IgG человека) меченных пероксидазой хрена. После дополнительной инкубации 1 ч при 37^оС лунки 4-кратно отмывали и вносили в них по 100 мкл раствора хромогена (0,01% раствор о-фенилендиамина с 0,001% Н₂О₂) инкубировали 20 мин в темноте при комнатной температуре и останавливали реакцию добавлением 50 мкл 2 М Н₂SО₄, после чего интенсивность реакции в каждой из лунок измеряли фотометрически на длине волны 490 нм.The method is as follows. Enzyme-linked immunosorbent assay procedures were carried out according to generally accepted methods. In ampoules (vials) containing 0.1 mg of lyophilized S100, 1 ml of 0.1 M carbonate buffer pH 9.5 was added, dissolved, the protein concentration was adjusted to 2 μg / ml with the same buffer and added to the wells of standard 96-well enzyme immunoassay tablets of 100 μl. After 18 h incubation at ⁴ ° C nesorbirovannogo excess antigen was removed, the wells were washed 4 times with otmyvnym buffer (0.01 M phosphate buffer pH 7.4 with 0.15 M NaCl and 0.05% Tween-20). Then, 100 μl of the tested sera were introduced into the wells in 1: 100, 1: 200, 1: 400 dilutions (in 90 wells), and the same dilutions of reference serums in two replicates in the 6 remaining wells of the plate. After incubation for 1 hour at ³⁷ ° C the wells were washed 4 times with otmyvnym buffer and applied to them by 100 .mu.l of conjugate secondary antibody (directed to human IgG) labeled with horseradish peroxidase. After additional incubation for 1 hour at ³⁷ ° C the wells were washed 4-times and applied to them by 100 l of the chromogen solution (0.01% solution of o-phenylenediamine with 0.001% H ₂ O ₂₎ was incubated for 20 minutes in the dark at room temperature and quenched the reaction by adding 50 μl of 2 M H ₂ SO ₄ , after which the reaction intensity in each of the wells was measured photometrically at a wavelength of 490 nm.

Количественную оценку иммунореактивности антител к S100 в тестируемых пробах сывороток выражали в виде показателя средней иммунореактивности (СИР), учитывающей интегральные значения иммунореактивности конкретной пробы в разных разведениях:
СИР

где ОП₁ оптическая плотность лунок с разведением сыворотки 1:100;
ОП₂ то же с разведением 1:200;
ОП₃ то же с разведением 1:400.A quantitative assessment of the immunoreactivity of antibodies to S100 in the tested serum samples was expressed as an indicator of average immunoreactivity (SIR), taking into account the integral values of the immunoreactivity of a particular sample in different dilutions:
SIR

where OP _{1 the} optical density of the wells with a dilution of serum 1: 100;
OP _{2 is} the same with a dilution of 1: 200;
OP _{3 is} the same with a dilution of 1: 400.

Величину полученного значения СИР каждой из тестируемых сывороток сравнивали со значениями СИР референс-сывороток, принимаемым за 100%
Результаты, полученные в ходе анализа 50 и более проб сывороток больных каждой из нозологических форм нервно-психических заболеваний (клинически надежно верифицировнные формы болезней. Всего более 400 проб), свидетельствуют, что существенно повышенная иммунореактивность проб сывороток с белками S100 характерная для:
85% больных шизофренией (n 120);
65% больных эпилепсией (n 76);
75% больных гепато-церебральной дистрофией (n 50);
70% больных детским церебральным параличом (n 142);
50% больных маниакально-депрессивным психозом (n 64).The value of the obtained SIR of each of the tested sera was compared with the SIR of the reference sera taken as 100%
The results obtained in the analysis of 50 or more serum samples of patients of each of the nosological forms of neuropsychiatric diseases (clinically reliably verified forms of diseases. Altogether more than 400 samples) indicate that a significantly increased immunoreactivity of serum samples with S100 proteins is characteristic for:
85% of patients with schizophrenia (n 120);
65% of patients with epilepsy (n 76);
75% of patients with hepato-cerebral dystrophy (n 50);
70% of patients with cerebral palsy (n 142);
50% of patients with manic-depressive psychosis (n 64).

Величину СИР считали превышающей норму реакции в случае, если ее значение было выше или равно 120% от значений СИР референс-сывороток. The value of SRI was considered to exceed the reaction rate if its value was higher than or equal to 120% of the values of SRI of reference serums.

Величина 120% представляет удвоенную ошибку средней иммунореактивности с белком S100 сывороток крови психически, неврологически и соматически здоровых лиц, определенную эмпирически при n 50. The value of 120% represents a double error of the average immunoreactivity with the S100 protein of blood serum of mentally, neurologically and somatically healthy individuals, determined empirically at n 50.

Важно отметить, что тест-система ELITEST-1 (планшеты для иммуноферментного анализа с адсорбированными в лунках очищенными белками S100), можно готовиться непосредственно перед употреблением как описано выше, либо быть приготовлена заблаговременно. В последнем случае, планшеты, отмытые от избытка несорбированного антигена, осушали и хранили при -20^оС в течение 2-4 мес. до использования. Подобное "отставленное" использование тест-системы ELITEST-1 не сказывалось на качестве получаемых результатов. Очевидно, что такой вариант ("отставленный") применение тест-системы ELITEST-1 может быть удобен при подготовке к периодическим крупномасштабным обследованиям населения (диспансерные обследования нескольких тысяч лиц), причем, собственно тест-система может готовиться централизованно, а покрытые S100 планшеты рассылаться на места использования (поликлиники, диспансеры, выездные экспедиционные группы). Причем анализы могут выполняться как на свежих пробах сывороток, так и на пробах хранившихся до 1 года при -70^оС (при необходимости отсроченного проведения анализов).It is important to note that the ELITEST-1 test system (enzyme-linked immunosorbent assay plates with purified S100 proteins adsorbed in wells) can be prepared immediately before use as described above, or can be prepared in advance. In the latter case, the plates were washed from excess nesorbirovannogo antigen, dried and stored at ^-20 ° C for 2-4 months. before use. Such "delayed" use of the ELITEST-1 test system did not affect the quality of the results. Obviously, this option (“delayed") using the ELITEST-1 test system can be convenient when preparing for periodic large-scale population surveys (dispensary examinations of several thousand people), moreover, the test system itself can be prepared centrally, and S100-coated tablets will be distributed to places of use (clinics, dispensaries, field expeditionary teams). And tests can be carried out both on fresh serum samples and on samples stored for up to 1 year at ^-70 ° C (delayed analyzes if necessary).

П р и м е р 1. Сбор анамнеза у первичного больного с клиническим диагнозом: пограничное состояние (депрессивный синдром?)
Больная А. 54 года. Наследственность психическими заболеваниями не отягощена. Родилась в деревне, дошкольный период помнит очень смутно. В школу пошла с 7 лет. Училась без особого интереса. По характеру была спокойная, малообщительная, в свободное время любила заниматься домашним хозяйством. В 20 лет переехала в Москву, устроилась работать машинисткой. Вскоре вышла замуж. От рака имеет сына и дочь. По характеру оставалась спокойной, малообщительной, любила заниматься хозяйством, ухаживать за мужем, детьми. В этом году после смерти брата, которого очень любила, у больной резко снизилось настроение, ничего не могла делать, нарушился сон, появилось чувство тревоги, ощущение тяжести за грудиной, снизился аппетит, в течение месяца похудела на 5 кг. Отмечались суточные колебания настроения, особенно плохо чувствовала себя с утра. Через два месяца впервые обратилась к психиатру и была госпитализирована в психиатрическую больницу, где находилась 45 дней. Получала амитриптилин, тазепам, элениум. К моменту выписки настроение полностью нормализовалось, улучшился сон, исчезли тревога, чувство тяжести за грудиной. Психическое состояние при стационировании: ориентирована в пространстве, времени, выражение лица тоскливое, движения, речь замедленные. Жалуется на безысходную тоску, чувство тяжести и сжатия в области грудины. Считает, что она повинна в гибели брата, так как могла бы это предупредить, но не сделала этого. Ест с принуждением.PRI me R 1. History of the primary patient with a clinical diagnosis: borderline state (depressive syndrome?)
Patient A. 54 years. The heredity of mental illness is not burdened. Born in the village, the preschool period is remembered very vaguely. I went to school from the age of 7. She studied without much interest. The character was calm, uncommunicative, in her free time she loved to do household chores. At 20, she moved to Moscow, got a job as a typist. Soon got married. From cancer has a son and daughter. By nature, she remained calm, uncommunicative, loved to do household work, take care of her husband and children. This year, after the death of her brother, whom she loved very much, the patient's mood sharply decreased, she could not do anything, sleep was disturbed, she had a feeling of anxiety, a feeling of heaviness behind her breastbone, her appetite decreased, she lost 5 kg within a month. Daily diurnal fluctuations of mood were noted, I felt especially bad in the morning. Two months later, she first visited a psychiatrist and was hospitalized in a psychiatric hospital, where she spent 45 days. Received amitriptyline, tazepam, elenium. By the time of discharge, the mood was completely normal, sleep improved, anxiety, a feeling of heaviness behind the sternum disappeared. Mental state during hospitalization: oriented in space, time, sad expression, movements, speech slowed down. Complains of hopeless anguish, a feeling of heaviness and contraction in the sternum. She believes that she is guilty of the death of her brother, as she could have warned this, but did not. Eats with duress.

Проведение диагностического теста "ELITEST-1". Carrying out the diagnostic test "ELITEST-1".

Установлен титр реагирования с тест-системой, соответствующий 115% Это значение не превышает 120% уровня, принятого за пограничный уровень сывороточной иммунореактивности нормальных лиц. A response titer with a test system corresponding to 115% was established. This value does not exceed 120% of the level accepted for the borderline level of serum immunoreactivity of normal individuals.

Вывод: Соответственно полученному результату на "ELITEST-1" наличие нервно-психической патологии не подтверждено. Conclusion: According to the result obtained on "ELITEST-1", the presence of neuropsychiatric pathology has not been confirmed.

П р и м е р 2. Сбор анамнеза у больного с диагнозом злокачественная "ядерная" шизофрения. PRI me R 2. History of a patient with a diagnosis of malignant "nuclear" schizophrenia.

Больной Ч. 20 лет. Наследственность психическими заболеваниями не отягощена. Беременность и роды у его матери проходили без осложнений. Раннее развитие без особенностей, ходить и говорить начал вовремя. По характеру был спокойным, малообщительным, предпочитал играть в одиночестве, но сверстников не сторонился, в контакт с ними вступал достаточно легко. Из перенесенных в дошкольном возрасте заболеваний были: простудные, корь, скарлатина. Течение заболеваний было неосложненным, в течение двух лет (с 5 до 7 лет) был страх темноты, засыпал только при свете и в присутствии кого-либо из родителей. Почему пугала темнота, определенно сказать не мог. С поступлением в 1 класс страх темноты исчез. В школу пошел с семи лет. Учился средне, без особого интереса. К выполнению домашних заданий относился недобросовестно, части списывал их у одноклассников. По характеру оставался тихим, спокойным. Однажды сообщил родителям, что слышит внутри головы какие-то голоса. Был стационирован в психиатрическую больницу. В стационаpе у больного отмечались стереотипные движения, гримасничанье, повышение тонуса мышц шейной и жевательной группы. Иногда на долгие часы он застывал в одной позе, иногда становился резко возбужденным, агрессивным, рвал на себе одежду, нападал на больных, персонал. Внешне был всегда неряшлив, не умывался, волосы растрепаны. Отличался повышенным аппетитом, часто брал или отнимал пищу у других больных. В 1981 г. был переведен в больницу им. П.П.Кащенко. С того момента состояние остается практически неизменным: к контакту недоступен, большую часть времени проводит в постели, при этом что-то поет, бормочет. Совершает вычурные движения руками, отмечается повышенный аппетит, при этом может есть все, что угодно: конфеты поедает с обертками, несколько раз пытался проглотить целлофановый пакет, в котором хранятся продукты. Все это время больной получал массивные дозы нейролептиков, но состояние его не улучшалось. Patient C., 20 years old. The heredity of mental illness is not burdened. Pregnancy and childbirth in his mother took place without complications. Early development without features, started walking and talking on time. By nature he was calm, uncommunicative, he preferred to play alone, but he did not shy away from his peers, he came into contact with them quite easily. Of the diseases transferred in preschool age were: colds, measles, scarlet fever. The course of the disease was uncomplicated, for two years (from 5 to 7 years) there was a fear of darkness, fell asleep only in the light and in the presence of one of the parents. Why the darkness scared, definitely could not say. With admission to Grade 1, the fear of darkness disappeared. I went to school from the age of seven. He studied medium, without much interest. He did not take good homework; he wrote off parts from classmates. By nature he remained quiet, calm. Once he told his parents that he hears some voices inside his head. He was hospitalized in a psychiatric hospital. In the patient’s hospital, stereotypical movements, grimacing, and increased muscle tone of the cervical and chewing groups were noted. Sometimes for long hours he froze in one pose, sometimes he became sharply excited, aggressive, tore his clothes on, attacked the sick, staff. Outwardly, he was always messy, did not wash, his hair was disheveled. It was distinguished by increased appetite, often took or took food from other patients. In 1981 he was transferred to the hospital. P.P. Kashchenko. From that moment, the state remains almost unchanged: it is inaccessible to the contact, spends most of the time in bed, while singing and muttering. He makes fanciful movements with his hands, there is an increased appetite, and he can eat anything: he eats sweets with wrappers, several times he tried to swallow a plastic bag in which food is stored. All this time the patient received massive doses of antipsychotics, but his condition did not improve.

Проведение диагностического теста "ELITEST-1". Carrying out the diagnostic test "ELITEST-1".

Установлен титр реагирования с тест-системой, соответствующий 155% Это значение превышает 120% уровня, принятого за пограничный уровень сывороточной иммунореактивности нормальных лиц. A response titer with a test system corresponding to 155% was established. This value exceeds 120% of the level accepted for the borderline level of serum immunoreactivity of normal individuals.

Вывод: Соответственно полученному результату на "ELITEST-1" подтверждено наличие нервно-психической патологии. Conclusion: According to the result on "ELITEST-1" confirmed the presence of neuropsychic pathology.

П р и м е р 3. Сбор анамнеза у больного с диагнозом эпилепсия с выраженными изменениями личности. PRI me R 3. History of the patient with a diagnosis of epilepsy with severe personality changes.

Больной М. 53 года, инвалид второй группы. Неоднократно стационировался в психиатрическую клинику им. С.С.Корсакова. Предъявлял жалобы на периодически возникающие судорожные припадки, слабость, вялость, головные боли. Наследственность психическими заболеваниями не отягощена. Больной родился от первой беременности в срок. Роды были затяжные, с наложением акушерских щипцов. Раннее детство было без особенностей. Часть наблюдалась рвота. Заболевания в детском возрасте: детские инфекции. До 13 лет страдал ночным энурезом. Во сне беспокоен, часто просыпался. В дальнейшем эти явления исчезли. От службы в армии освобожден в связи с появлением судорожных припадков. В 18 лет впервые возник большой судорожный припадок, когда, по рассказам сослуживцев, по дороге внезапно упал, начались судороги во всем теле, сопровождавшиеся мочеиспусканием и дефекацией. В дальнейшем припадки повторялись 1-2 раза в полгода. В возрасте 22 года припадки участились и стали ежемесячными. Пароксизмы стали редкими (1-2 раза в год). В 38 лет у больного появились головные боли. Стал конфликтен, медлителен. В 50-летнем возрасте в связи с заметным снижением проф. уровня и значительными изменениями личности поставлена вторая группа инвалидности. В настоящее время не работает. Примерно 1 раз в неделю бывают пароксизмы по типу амбулаторного автоматизма. Patient M., 53 years old, disabled person of the second group. Repeatedly hospitalized in a psychiatric clinic. S.S. Korsakova. He complained of recurrent seizures, weakness, lethargy, and headaches. The heredity of mental illness is not burdened. The patient was born from the first pregnancy on time. The birth was protracted, with the imposition of obstetric forceps. Early childhood was without features. A portion was observed vomiting. Diseases in childhood: childhood infections. Until the age of 13, he suffered from nocturnal enuresis. Restless in a dream, often woke up. Subsequently, these phenomena disappeared. He was released from military service in connection with the appearance of convulsive seizures. At the age of 18, a large convulsive seizure first occurred, when, according to colleagues, it suddenly fell along the road, convulsions began in the whole body, accompanied by urination and defecation. Subsequently, seizures were repeated 1-2 times in six months. At the age of 22, seizures became more frequent and became monthly. Paroxysms have become rare (1-2 times a year). At 38, the patient developed headaches. He became conflicted, slow. At the age of 50, due to a marked decrease in prof. level and significant personality changes posed the second group of disability. Currently not working. About once a week there are paroxysms of the type of outpatient automatism.

Психическое состояние: больной ориентирован в месте собственной личности, однако затрудняется назвать точную дату, хотя правильно называет месяц и год. Контактен. На вопросы отмечает развернуто, обстоятельно, не всегда по существу, самостоятельно переключается на описание своих расстройств. Галлюцинарные и бредовые расстройства отсутствуют. Все внимание больного сосредоточено на собственном заболевании. В значительной степени изменена память. Настроение подвержено колебаниям. На фоне благодушия и благожелательности часто возникают приступы раздражительности. Конфликтует с персоналом и больными по поводу соблюдения режима. Злопамятен. Критического отношения к своему состоянию нет. Основной целью жизни считает заботу о собственном здоровье. При электроэнцефалографическом исследовании установлены признаки очаговой билатеральной пароксизмальной активности, явления ареактивности и десинхронизации. Mental state: the patient is oriented in the place of his own personality, however, it is difficult to give an exact date, although he correctly names the month and year. Contact. He answers notes questions in detail, in detail, not always essentially, independently switches to a description of his disorders. Hallucinatory and delusional disorders are absent. All the patient's attention is focused on their own disease. The memory has been significantly changed. The mood is subject to fluctuations. Amid complacency and benevolence, bouts of irritability often occur. Conflicts with staff and patients about compliance. Vindictive. There is no critical attitude to his condition. The main goal of life is taking care of one's own health. An electroencephalographic study revealed signs of focal bilateral paroxysmal activity, the phenomenon of areactivity and desynchronization.

Проведение диагностического теста "ELITEST-1". Carrying out the diagnostic test "ELITEST-1".

Установлен титр реагирования с тест-системой, соответствующий 256% Это значение превышает 120% уровня, принятого за пограничный уровень сывороточной иммунореактивности нормальных лиц. A response titer with a test system corresponding to 256% was established. This value exceeds 120% of the level accepted for the borderline level of serum immunoreactivity of normal individuals.

Вывод: Соответственно полученному результату на "ELITEST-1" подтверждено наличие нервно-психической патологии. Conclusion: According to the result on "ELITEST-1" confirmed the presence of neuropsychic pathology.

П р и м е р 4. Сбор анамнеза у больного с диагнозом рассеянный склероз (псевдотуморозная форма). PRI me R 4. History of a patient with a diagnosis of multiple sclerosis (pseudotumor form).

Больной Ж. 28 лет, инженер, поступил в клинику с жалобами на головные боли, онемение и слабость в правой руке. Считает себя больным около 3-4 недель, когда впервые обратил внимание на онемение в пальцах правой руки, иногда немела и правая щека. Появилась тяжесть в голове. Patient Zh. 28, an engineer, was admitted to the hospital with complaints of headaches, numbness and weakness in his right hand. Considers himself ill for about 3-4 weeks, when he first drew attention to numbness in the fingers of his right hand, sometimes his right cheek was numb. There was a heaviness in the head.

При осмотре: больной в сознании, ориентирован, артериальное давление 120/80 мм рт. ст. пульс 68 ударов в минуту, ритмичный. Нистагм при взгляде влево. Легкий парез правой руки преимуществено в дистальных отделах, сухожильные рефлексы выше справа. На протяжении надели отмечалось постепенное углубление пареза в правой руке, появилась слабость в ноге и нарушение поверхностной и глубокой чувствительности в области туловища и конечности справа. Мышечный тонус в правых конечностях повышен. Снимки черепа: костно-деструктивные изменения не определяются. На протяжении последующих 3 лет у больного дважды наблюдался рецидив болезни, вновь нарастала слабость в правых конечностях, головная боль, дизартрия, поперхивание при глотании и нарушения координации. Под влиянием лечения в состоянии больного каждый раз наступало заметное улучшение. On examination: the patient is conscious, oriented, blood pressure 120/80 mm RT. Art. pulse 68 beats per minute, rhythmic. Nystagmus when looking to the left. Slight paresis of the right hand is predominantly in the distal regions, tendon reflexes are higher on the right. Over the course of putting on, a gradual deepening of the paresis in the right hand was noted, weakness appeared in the leg and a violation of superficial and deep sensitivity in the region of the trunk and limb on the right. Muscle tone in the right extremities is increased. Skull images: bone-destructive changes are not determined. Over the next 3 years, the patient had a relapse of the disease twice, weakness in the right extremities, headache, dysarthria, choking on swallowing and impaired coordination increased again. Under the influence of treatment in the patient's condition, a noticeable improvement occurred each time.

Проведение диагностического теста "ELITEST-1". Установлен титр реагирования с тест-системой, соответствующий 170% Это значение превышает 120% уровня, принятого за пограничный уровень сывороточной иммунореактивности нормальных лиц. Carrying out the diagnostic test "ELITEST-1". A response titer with a test system corresponding to 170% was established. This value exceeds 120% of the level accepted for the borderline level of serum immunoreactivity of normal individuals.

Вывод: Соответственно полученному результату на "ELITEST-1" подтверждено наличие нервно-психической патологии. Conclusion: According to the result on "ELITEST-1" confirmed the presence of neuropsychic pathology.

П р и м е р 5. Сбор анамнеза больного с диагнозом детский церебральный паралич (ранняя стадия). PRI me R 5. Collection of medical history of a patient with a diagnosis of cerebral palsy (early stage).

Вася П. 4 мес. родился в условиях тяжелых родов, в асфиксии. В первые дни жизни обнаружил слабость, а затем отсутствие сосательного, ладонно-ротового, поискового рефлекса, реакции опоры, рефлекса ползания, не поднимал головы из положения лежа на животе, не поворачивал ее в сторону и т.д. Преобладал тонус разгибателей в мышцах нижних конечностей и был слегка повышен тонус сгибателей в верхних конечностях. К концу первого месяца появилась возможность поворота и поднимания головы в положении лежа на животе, наметилась реакция опоры, рефлекс ползания. Однако выявилась четкая активность тонических лабиринтного и шейного рефлексов. Появилась фиксации взора, первые элементы прослеживания за предметами. Стал прибавлять в весе. К концу 2-го началу 3-го месяца можно было отметить медленно, но неуклонно нарастающую паталогическую активность лабиринтных тонических рефлексов. Резкое напряжение мышц сопровождалось выраженными болевыми ощущениями, ребенок почти всегда издавал хриплые крики и стоны. Через неделю, в течение которой вводился АКТГ, ребенок начал периодически высасывать 50-70 г молока, значительно реже стали приступы торсионной дистонии. К концу 10-го дня вновь участились приступы торсии, резко повысился тонус разгибателей шеи, спины, конечностей при любом положении тела ребенка. После соответствующей терапии состояние ребенка нормализовалось. Впервые появились движения мимических мышц лица, напоминающих улыбку. Vasya P. 4 months born in difficult birth, in asphyxiation. In the first days of life, he found weakness, and then the absence of a sucking, palmar-mouth, search reflex, support reaction, crawl reflex, did not raise his head from a prone position, did not turn it to the side, etc. The tone of extensors in the muscles of the lower extremities prevailed and the tone of the flexors in the upper limbs was slightly increased. By the end of the first month, it became possible to turn and raise the head while lying on the stomach, there was a reaction of support, a crawl reflex. However, a clear activity of the tonic labyrinth and cervical reflexes was revealed. There was a fixation of the gaze, the first elements of tracking objects. He began to gain weight. Toward the end of the 2nd beginning of the 3rd month, it was possible to note a slowly but steadily increasing pathological activity of labyrinth tonic reflexes. Sharp muscle tension was accompanied by severe pain, the child almost always made hoarse cries and groans. After a week, during which ACTH was administered, the child began to periodically suck out 50-70 g of milk, and attacks of torsion dystonia became much less common. By the end of the 10th day, torsion attacks became more frequent, the tone of the extensors of the neck, back, and limbs increased sharply in any position of the child's body. After appropriate therapy, the child's condition returned to normal. For the first time there were movements of facial muscles of the face, resembling a smile.

Проведение диагностического теста "ELITEST-1". Carrying out the diagnostic test "ELITEST-1".

Установлен титр реагирования с тест-системой, соответствующей 280% уровня, принятого за пограничный уровень сывороточной иммунореактивности нормальных лиц. A response titer was established with a test system corresponding to 280% of the level accepted as a borderline level of serum immunoreactivity in normal individuals.

Вывод: Соответственно полученному результату на "ELITEST-1" подтверждено наличие нервно-психической патологии. Conclusion: According to the result on "ELITEST-1" confirmed the presence of neuropsychic pathology.

Всего с помощью теста ELITEST-1 было проанализировано 662 пробы сывороток (из них 220 проб, полученных от соматически и психо-неврологически здоровых лиц и 442 пробы, полученных от больных нервно-психическими заболеваниями: больных шизофренией 120; больных эпилепсией 76; больных гепато-церебральной дистрофией 50; больных детским церебральным параличем 142; больных маниакально-депрессивным психозом 64). При этом ложноположительные результаты (уровень реактивности выше 120% у клинически здоровых лиц) были выявлены в 4% случаев и ложноотрицательные результаты (реактивность ниже 120% у лиц с диагнозом нервно-психического заболевания) в 25% случаев. In total, using the ELITEST-1 test, 662 serum samples were analyzed (of which 220 samples obtained from somatically and psycho-neurologically healthy individuals and 442 samples obtained from patients with neuropsychiatric diseases: 120 patients with schizophrenia; 76 patients with epilepsy; 76 patients with hepatitis cerebral dystrophy 50; patients with cerebral palsy 142; patients with manic-depressive psychosis 64). Moreover, false-positive results (reactivity level above 120% in clinically healthy individuals) were detected in 4% of cases and false-negative results (reactivity below 120% in individuals diagnosed with a mental illness) in 25% of cases.

Применение диагностикума ELITEST-1 для обнаружения нервно-психических заболеваний на основе иммуноферментного анализа позволяет проводить массовую экспресс-диагностику с получением результата в течение 3 ч. Выполнение исследования производится в условиях "ин витро" и требует 10 мкл крови тестируемого лица. The use of the ELITEST-1 diagnosticum for the detection of neuropsychiatric diseases based on an enzyme-linked immunosorbent assay allows for mass express diagnostics to obtain a result within 3 hours. The study is performed in vitro and requires 10 μl of blood of the test person.

Количественная оценка содержания аутоантител к белкам S100 по показателю средней иммунореактивности позволяют использовать диагностикум ELITEST-1 для отслеживания динамики и контроля за состоянием больных на протяжении длительных периодов времени, оценки эффективности проводимой терапии и подбора оптимальных препаратов и схем лечения заболевания. A quantitative assessment of the content of autoantibodies to S100 proteins by the average immunoreactivity index allows using the ELITEST-1 diagnosticum to track the dynamics and monitor the condition of patients over long periods of time, assess the effectiveness of the therapy and select the optimal drugs and treatment regimens for the disease.

Получение реагентов не требует сложной и дорогостоящей аппаратуры и реактивов, а проведение процедур анализа проводится оператором-лаборантом. Obtaining reagents does not require complex and expensive equipment and reagents, and the analysis procedures are carried out by the laboratory operator.

Диагностикум ELITEST-1 характеризуется существенно меньшей себестоимостью (в 120 раз ниже) и большей пропускной способностью (в 20 раз выше) по сравнению с прецизионной диагностической тест-системой ELITEST-24. Предлагается возможность широкого внедрения способа в практику на основе договорной цены. Diagnostic ELITEST-1 is characterized by significantly lower cost (120 times lower) and higher throughput (20 times higher) compared to the precision diagnostic test system ELITEST-24. The possibility of widespread implementation of the method into practice on the basis of a negotiated price is proposed.

Целесообразность, социальная и медицинская значимость новых объективных методов диагностики нервно-психических отклонений очевидна, так как заболеваемость, например шизофренией составляет от 1 до 4% населения Земли (по данным ВОЗ), а простые, надежные и объективные методы их диагностики отсутствуют. The feasibility, social and medical significance of new objective methods for diagnosing neuropsychiatric abnormalities is obvious, since the incidence of schizophrenia, for example, is from 1 to 4% of the world's population (according to WHO), and there are no simple, reliable and objective methods for their diagnosis.

Имеются экспериментальные указания на то, что изменения гуморального иммунитета, выявляемые описанным методом, могут детектироваться до развития клинически выраженного процесса. В этой связи можно полагать, что широкое применение простого и дешевого диагностикума ELITEST-1 будет способствовать объективному выявлению групп "повышенного риска" заболевания, что важно для проведения профилактических мероприятий и для оценки профессиональной пригодности при отборе лиц на определенные должности и профессии, например, связанные с повышенной ответственностью и/или риском для жизни и здоровья оператора и других лиц. There are experimental indications that changes in humoral immunity detected by the described method can be detected before the development of a clinically pronounced process. In this regard, it can be assumed that the widespread use of a simple and cheap diagnostic kit ELITEST-1 will contribute to the objective identification of groups of "increased risk" of the disease, which is important for preventive measures and to assess professional suitability in the selection of individuals for certain positions and professions, for example, related with increased responsibility and / or risk to the life and health of the operator and others.

Claims (1)

СПОСОБ СКРИНИНГА НЕРВНО-ПСИХИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ, включающий забор крови, получение сыворотки, получение тест-системы и проведение иммуноферментного анализа на твердой фазе для выявления комплексов антиген антитело с применением вторичных конъюгатов 1gG, меченных пероксидазой хрена, с последующим расчетом интегральной иммунореактивности, отличающийся тем, что сыворотку добавляют в лунки планшета, содержащего адсорбированный белок S 100 и при получении данных о превышении иммунореактивности тестируемой сыворотки уровня нормальных фоновых значений не менее чем на 20% определяют наличие нервно-психического заболевания. METHOD FOR NEROPSYCHIC DISEASES SCREENING, including blood sampling, serum preparation, obtaining a test system and conducting an enzyme-linked immunosorbent assay for the detection of antigen-antibody complexes using 1gG secondary conjugates labeled with horseradish peroxidase, followed by calculation of the integral immunoassay serum is added to the wells of the tablet containing the adsorbed protein S 100 and upon receipt of data on the excess of immunoreactivity of the tested serum the level of normal phon s values of no less than 20% determined by the presence of neuro-psychiatric illness.