RU2044770C1 - Process for preparing biologically active substances from biomass or chlorella microalga - Google Patents

Abstract

FIELD: biotechnology, microbiology, preparation of biologically active substances. SUBSTANCE: a biomass of CHLORELLA microalga is extracted with an organic solvent to isolate a lipid-pigment complex. The remaining biomass is subjected to enzymatic hydrolysis with enzymes of cellulolytic and preteolytic activities, heat treated to inactivate the enzymes and the protein hydrolysate is separated in the form of an aqueous phase. The remaining biomass which is not a cell destructate may be used as a protein additive for the preparation of animal feed. The process makes it possible to extract biologically active substances from the biomass of CHLORELLA microalga and to obtain several products for different purposes. EFFECT: more efficient extraction process. 2 cl, 2 tbl

Description

Изобретение касается микробиологической промышленности, а именно переработки биомассы, продуцируемой микроорганизмами, точнее изобретение касается способа извлечения биологически активных веществ из биомассы микроводоросли Chlorella. The invention relates to the microbiological industry, namely the processing of biomass produced by microorganisms, more precisely, the invention relates to a method for extracting biologically active substances from the biomass of the microalgae Chlorella.

Извлекаемые биологически активные вещества найдут применение в фармацевтической промышленности, при изготовлении косметических средств, в медицинской микробиологии для приготовления питательных сред, в сельском хозяйстве для получения кормовых добавок. Recoverable biologically active substances will find application in the pharmaceutical industry, in the manufacture of cosmetics, in medical microbiology for the preparation of nutrient media, in agriculture to obtain feed additives.

Известен способ извлечения биологически активных веществ из биомассы микроводоросли Chlorella [1] заключающийся в том, что водную суспензию сухой биомассы подвергают кипячению в течение 5 мин для увеличения проницаемости клеточных оболочек и денатурации белка, а затем осуществляют гидролитическое расщепление ферментами. Ферментолиз проводят сначала ферментом, разрушающим полисахариды, содержащиеся в биомассе, а затем ферментами, разрушающими протеины, используя при этом соответственно Целлоконингин Г-3х и протосубтилин Г-10х. После окончания гидролиза через 5-6 ч водную фазу отделяют от осадка центрифугированием при 7000 об/мин в течение 20 мин. Жидкий ферментативный гидролизат высушивают в распылительной сушилке. Указанный способ обеспечивает выход аминного азота до 8500 мг на 1 кг сухой хлореллы. Оставшийся после отделения жидкой фракции осадок содержит значительное количество веществ липидной природы (более 20%). There is a method of extracting biologically active substances from the biomass of the microalgae Chlorella [1] consisting in the fact that an aqueous suspension of dry biomass is boiled for 5 minutes to increase the permeability of cell walls and protein denaturation, and then hydrolytic digestion with enzymes is carried out. Fermentolysis is carried out first by an enzyme that destroys the polysaccharides contained in biomass, and then by enzymes that destroy proteins, while using respectively Celloconingin G-3x and protosubtilin G-10x. After hydrolysis is completed, after 5-6 hours, the aqueous phase is separated from the precipitate by centrifugation at 7000 rpm for 20 minutes. The liquid enzymatic hydrolyzate is dried in a spray dryer. The specified method provides an output of amine nitrogen up to 8500 mg per 1 kg of dry chlorella. The precipitate remaining after separation of the liquid fraction contains a significant amount of lipid substances (more than 20%).

Однако известный способ позволяет выделить из биомассы хлореллы только один продукт белковой природы, оставляя в шроте не менее ценные биологически активные вещества липидной природы (пигменты, а том числе каротиноиды, фосфолипиды, гликолипиды), которые являются не менее ценными и используются широко в медицине (например, каротиноиды), косметологии, бытовой химии. В известном способе не предусмотрена инактивация ферментов после окончания гидролиза, в результате чего полученный белковый гидролизат может содержать некоторое количество протеолитических ферментов, что ограничивает сферу применения белкового гидролизата, так как они могут оказывать местно-раздражающее действие на кожу при использовании белкового гидролизата в составе косметических средств. Белковый гидролизат, полученный из необезжиренной биомассы, содержит примеси хлорофилла, который является ингибитором роста многих бактериальных культур. Поэтому использование белкового гидролизата, полученного по такой методике, в составе микробиологических питательных средств нежелательно. However, the known method allows to isolate only one product of protein nature from the chlorella biomass, leaving at least valuable biologically active substances of lipid nature in the meal (pigments, including carotenoids, phospholipids, glycolipids), which are no less valuable and are widely used in medicine (for example , carotenoids), cosmetology, household chemicals. The known method does not provide for the inactivation of enzymes after hydrolysis, as a result of which the resulting protein hydrolyzate may contain a number of proteolytic enzymes, which limits the scope of application of the protein hydrolyzate, since they can have a local irritant effect on the skin when using the protein hydrolyzate in cosmetics . Protein hydrolyzate obtained from non-fat biomass contains impurities of chlorophyll, which is an inhibitor of the growth of many bacterial cultures. Therefore, the use of protein hydrolyzate obtained by this method in the composition of microbiological nutrients is undesirable.

В основу предлагаемого изобретения положена задача путем последовательной обработки биомассы микроводорослей выделить из нее два продукта, обладающих биологической активностью, и при этом повысить выход и качество белкового продукта. The basis of the present invention is the task of sequentially processing the biomass of microalgae to isolate from it two products with biological activity, and at the same time increase the yield and quality of the protein product.

Для этого в способе извлечения биологически активных веществ из биомассы микроводоросли Chlorella, включающем термообработку биомассы при 100^оС, двухстадийный ферментативный гидролиз с помощью ферментов целлюлолитического и протеолитического действия с последующим кипячением и отделением водной фазы, содержащей белковый гидролизат, и негидролизуемый остаток биомассы, согласно изобретению биомассу микроводоросли предварительно обрабатывают органическим растворителем и полученный липид-пигментный комплекс отделяют, ферментативный гидролиз ведут до достижения в водной фазе реакционной массы содержания сухого вещества от 5,0 до 5,8%
В качестве ферментов можно использовать протеолитические ферменты в сочетании с целлюлолитическими, что позволяет разрушить клеточные оболочки хлореллы и осуществить гидролиз белков.For this extraction method, the biologically active substances from the biomass of microalgae Chlorella, comprising the heat treatment of biomass at ¹⁰⁰ ° C, two-stage enzymatic hydrolysis using enzymes cellulolytic and proteolytic action followed by boiling and separating an aqueous phase containing a protein hydrolyzate and non-hydrolyzable biomass residue, according to the invention microalgae biomass is pre-treated with an organic solvent and the resulting lipid-pigment complex is separated, enzymatic Drolysis is carried out until a dry matter content of from 5.0 to 5.8% is reached in the aqueous phase of the reaction mass
As enzymes, proteolytic enzymes can be used in combination with cellulolytic ones, which allows one to destroy the cell walls of chlorella and carry out hydrolysis of proteins.

Для достижения максимального значения выхода липид-пигментного комплекса целесообразно исходную биомассу хлореллы подвергать воздействию смеси этанола с экстракционным бензином, взятым в соотношении 1:2 соответственно. To achieve the maximum yield value of the lipid-pigment complex, it is advisable to expose the initial biomass of chlorella to a mixture of ethanol with extraction gasoline, taken in a ratio of 1: 2, respectively.

Извлеченный липид-пигментный комплекс содержит 50,02-56,20 мас. гликолипидов и фосфолипидов, 31,4-39,8 мас. хлорофиллов и диацилглицеролов, 1,7-6,4 мас. триацилглицеролов, 2,1-5,7 мас. свободных жирных кислот, 0,4-2,2 мас. углеводов и каротиноидов, остальное неидентифицированные соединения, а извлеченный белковый гидролизат содержит, от абс. сух.вещ. свободные аминокислоты 60,62, остаточный белок 4,12, остаточные нуклеиновые кислоты 0,01, сумма углеводов 21,12. The extracted lipid-pigment complex contains 50.02-56.20 wt. glycolipids and phospholipids, 31.4-39.8 wt. chlorophylls and diacylglycerols, 1.7-6.4 wt. triacylglycerols, 2.1-5.7 wt. free fatty acids, 0.4-2.2 wt. carbohydrates and carotenoids, the rest are unidentified compounds, and the extracted protein hydrolyzate contains, from abs. dry free amino acids 60.62, residual protein 4.12, residual nucleic acids 0.01, the amount of carbohydrates 21.12.

Извлечение биологически активных веществ согласно предлагаемому изобретению осуществляют из биомассы микроводоросли рода Chlorella, полученной при выращивании на минеральной среде при освещении и подаче углекислого газа. В основном используемая биомасса имеет следующий химический состав, мас. белок 45-50, углеводы 18-20, липиды 18-20, зола 8-10. The extraction of biologically active substances according to the invention is carried out from the biomass of a microalgae of the genus Chlorella, obtained by growing on a mineral medium under illumination and supply of carbon dioxide. Mostly used biomass has the following chemical composition, wt. protein 45-50, carbohydrates 18-20, lipids 18-20, ash 8-10.

Витамины, мг. аскорбиновая кислота 120-200, бета-каротин 30-60, тиамин 0,3-0,5, рибофлавин 2,0-3,5, пиридоксин 0,5-0,9, токоферолы 18-20. Vitamins, mg. ascorbic acid 120-200, beta-carotene 30-60, thiamine 0.3-0.5, riboflavin 2.0-3.5, pyridoxine 0.5-0.9, tocopherols 18-20.

Биомассу без предварительной тепловой обработки, разрушающей каротиноиды биомассы, подвергают согласно изобретению сначала воздействию органических растворителей, например этанола, бензина, смесью бензина с этанолом в соотношении 1: 2 соответственно. При этом происходит экстрагирование следующих соединений: гликолипидов и фосфолипидов в количестве от 50,02 до 56,20 мас. хлорофиллов и диацилглицеролов в количестве от 31,4 до 39,8 мас. триацилглицеролов в количестве от 1,7 до 6,4 мас. свободных жирных кислот в количестве от 2,1 до 5,8 мас. углеводов и каротиноидов в количестве от 0,4 до 2,2 мас. После окончания экстрагирования проводят разделение, например, с помощью фильтрования экстракта и обезжиренной биомассы. Отделенный экстракт сгущают, например, в вакуумном испарителе с получением комплекса биологически активных веществ, названных липид-пигментным комплексом. Выход последнего составляет от 11,0 до 15,0 мас. Обезжиренную биомассу затем подвергают тепловой обработке при 100^оС путем разваривания ее в водной среде для увеличения проницаемости клеточных оболочек в отношении применяемых в дальнейшем ферментных препаратов, после чего согласно изобретению осуществляют ферментативный гидролиз, используя протеолитические ферменты в сочетании с целлюлолитическими, а предпочтительно используя целловиридин П10х и протосубтилин Г-10х. Комбинированное действие фермента целловиридина П-10х, обладающего разнообразным ферментативным комплексом и высокой активностью в отношении разрушения компонентов, входящих в состав клеточных оболочек микроводоросли рода Chlorella, и протеолитического ферментного препарата протосубтилина Г-10х приводит к более глубокому гидролизу белков микроводоросли и соответственно более высокому выходу аминного азота из биомассы клеток. Ферментолиз осуществляют до достижения в водной фазе реакционной массы концентрации сухих веществ 5,0-5,8% По окончании ферментолиза проводят инактивацию ферментов, например, при повышенной температуре, после чего осуществляют отделение, например центрифугированием, водной фазы реакционной массы, представляющей собой белковый гидролизат от негидролизуемого остатка биомассы. После высушивания белковый гидролизат, выход которого составляет около 33 мас. представляет собой порошок светлого цвета с влажностью не более 7% и имеет следующий состав, мас. Азот общий 10,36 белковый 0,66 небелковый 9 "Свободные" аминокислоты 60,62 Остаточный белок 4,12 Нуклеотиды 6,85 Сумма углеводов 21,12
Аминокислотный состав сухого гидролизата, к сумме аминокислот: Лизин 4,50 Гистидин 1,86 Аргинин 6,23 Аспарагиновая кислота 8,22 Треонин 1,08 Серин 5,11 Глютаминовая кислота 8,84 Пролин 7,07 Глицин 10,20 Аланин 27,00 Валин 5,48 Метионин 0,67 Изолейцин 1,96 Лейцин 8,05 Тирозин 1,87 Фенилаланин 1,79
Качественно обнаружены цистеин, триптофан.Biomass without preliminary heat treatment, destroying the carotenoids of biomass, is subjected, according to the invention, first to the action of organic solvents, for example ethanol, gasoline, a mixture of gasoline with ethanol in a 1: 2 ratio, respectively. When this occurs, the extraction of the following compounds: glycolipids and phospholipids in an amount of from 50.02 to 56.20 wt. chlorophylls and diacylglycerols in an amount of from 31.4 to 39.8 wt. triacylglycerols in an amount of from 1.7 to 6.4 wt. free fatty acids in an amount of from 2.1 to 5.8 wt. carbohydrates and carotenoids in an amount of from 0.4 to 2.2 wt. After extraction is completed, separation is carried out, for example, by filtering the extract and fat-free biomass. The separated extract is concentrated, for example, in a vacuum evaporator to obtain a complex of biologically active substances called a lipid-pigment complex. The output of the latter is from 11.0 to 15.0 wt. Defatted biomass is then subjected to heat treatment at ¹⁰⁰ ° C by means of cooking it in an aqueous medium for increasing the permeability of cell membranes against applied hereinafter enzyme preparations, after which according to the invention is carried out enzymatic hydrolysis using a proteolytic enzyme in combination with cellulolytic and preferably using Celloviridin P10h and protosubtilin G-10x. The combined action of the enzyme celloviridin P-10x, which has a diverse enzymatic complex and high activity in relation to the destruction of the components that make up the cell walls of the microalgae of the genus Chlorella, and the proteolytic enzyme preparation protosubtilin G-10x leads to a deeper hydrolysis of the microalgae proteins and, accordingly, a higher yield of amine nitrogen from biomass cells. Fermentolysis is carried out until the solids concentration of 5.0-5.8% is reached in the aqueous phase of the reaction mass. At the end of the fermentolysis, enzymes are inactivated, for example, at elevated temperature, after which the aqueous phase of the reaction mixture, which is a protein hydrolyzate, is separated, for example, by centrifugation. from non-hydrolyzable biomass residue. After drying, the protein hydrolyzate, the yield of which is about 33 wt. is a light colored powder with a moisture content of not more than 7% and has the following composition, wt. Total nitrogen 10.36 protein 0.66 non-protein 9 "Free" amino acids 60.62 Residual protein 4.12 Nucleotides 6.85 Total carbohydrates 21.12
Amino acid composition of the dry hydrolyzate, to the sum of amino acids: Lysine 4.50 Histidine 1.86 Arginine 6.23 Aspartic acid 8.22 Threonine 1.08 Serine 5.11 Glutamic acid 8.84 Proline 7.07 Glycine 10.20 Alanine 27, 00 Valine 5.48 Methionine 0.67 Isoleucine 1.96 Leucine 8.05 Tyrosine 1.87 Phenylalanine 1.79
Qualitatively detected cysteine, tryptophan.

Остаток реакционной массы после отделения от нее белкового гидролизата представляет собой ферментативный деструктат клеток, так называемый шрот. В его составе содержится до 35% сырого протеина, главным образом свободные аминокислоты и низкомолекулярные пептиды, углеводы представлены соединениями типа крахмала. The remainder of the reaction mass after separation of the protein hydrolyzate from it is an enzymatic cell destruction, the so-called meal. It contains up to 35% of crude protein, mainly free amino acids and low molecular weight peptides, carbohydrates are represented by compounds such as starch.

Таким образом, в результате последовательной переработки биомассы микроводорослей рода Chlorella получают не только ценные биологически активные вещества в количествах, значительно превышающих ранее достигнутые (по отношению к исходному продукту), но и шрот, который может быть использован, например, в кормовых целях для рыболовства и животноводства. Учитывая химический состав шрота, он был исследован как белковая кормовая добавка в составе кормового рациона для с/х животных (телята). Было установлено, что шрот по своим химическим и кормовым свойствам близок к шроту подсолнечника и может включаться в кормовой рацион в качестве источника белка (до 20% от общего белка рациона). Thus, as a result of the sequential processing of the biomass of microalgae of the genus Chlorella, not only valuable biologically active substances are obtained in quantities significantly higher than previously achieved (in relation to the initial product), but also meal, which can be used, for example, for fodder purposes for fishing and animal husbandry. Given the chemical composition of the meal, it was studied as a protein feed additive in the feed ration for agricultural animals (calves). It was found that meal in its chemical and feed properties is close to meal of sunflower and can be included in the feed ration as a source of protein (up to 20% of the total diet protein).

П р и м е р 1. 1 кг сухой биомассы Chlorella vulgaris ЛАРГ-3 экстрагируют 10 л экстрагента, например этанола. Экстракцию проводят в два этапа. Сначала биомассу заливают 6 л экстрагента и перемешивают в течение 6 ч при комнатной температуре. Экстракт отделяют фильтрованием, а оставшуюся биомассу заливают свежей порцией этанола в объеме 4 л, перемешивают в течение 3 ч и фильтруют. Экстракты объединяют и сгущают в вакуумном испарителе при температуре не выше 45^оС. Конечными продуктами являются липид-пигментный комплекс и обезжиренная биомасса. Выход липид-пигментного комплекса (ЛПК) при такой обработке составляет 110 г (11% от исходной биомассы). Состав полученного ЛПК приведен в табл.2. Обезжиренную биомассу подвергают ферментативному гидролизу. Для этого остаток биомассы 890 г смешивают с 10-кратным количеством воды и разваривают при температуре 100^оС в течение 5-10 мин. Затем смесь охлаждают до 50^оС, доводят рН до 4,5-5,0 и вносят фермент целлюлозу 1000 в количестве 8,9 г для разрушения полисахаридного комплекса клеток. Количество фермента составляет 1% от веса биомассы водорослей. Фермент предварительно размешивают в небольшом количестве воды (например, 100 мл). Процесс гидролиза продолжают 3 ч при перемешивании и температуре 45-50^оС. По окончании первого этапа гидролиза в реакционную смесь добавляют раствор NaOH до достижения рН 6,5, фермент ренниномезинтерин Г-20х (предварительно размещенный в небольшом количестве воды) в количестве 8,9 г и гидролиз проводят еще 6 ч при 45-50^оС. Затем реакционную смесь нагревают до 100-105^оС (для инактивации ферментов), охлаждают до комнатной температуры и сепарируют при 6000 об/мин. Полученные продукты (белковый гидролизат и шрот) высушивают на распылительной сушилке. Выход гидролизата 360 г (36% от исходной биомассы). Выход шрота 530 г (53% от исходной биомассы).PRI me R 1. 1 kg of dry biomass Chlorella vulgaris LARG-3 is extracted with 10 l of extractant, for example ethanol. Extraction is carried out in two stages. First, biomass is poured into 6 L of extractant and stirred for 6 hours at room temperature. The extract was separated by filtration, and the remaining biomass was poured with a fresh portion of ethanol in a volume of 4 L, stirred for 3 hours and filtered. The extracts were combined and concentrated in a vacuum evaporator at a temperature not higher than 45 ° ^C. The end product is a lipid-pigment complex and defatted biomass. The yield of lipid-pigment complex (LPC) during this treatment is 110 g (11% of the initial biomass). The composition of the obtained LPC is given in table.2. Fat-free biomass is subjected to enzymatic hydrolysis. For this, the remaining biomass of 890 g is mixed with 10 times the amount of water and boiled at a temperature of 100 ^about C for 5-10 minutes. The mixture was then cooled ^to 50 ° C, pH was adjusted to 4.5-5.0 and 1000 make cellulose enzyme in an amount of 8.9 g to destroy the polysaccharide complex cells. The amount of enzyme is 1% of the weight of algae biomass. The enzyme is pre-mixed in a small amount of water (for example, 100 ml). Hydrolysis was continued for 3 h under stirring at 45-50 ^C. After the first hydrolysis step the reaction mixture was added NaOH solution until a pH of 6.5, renninomezinterin enzyme L-20X (previously placed in a small amount of water) in an amount of 8 9 g and the hydrolysis is carried out for 6 hours at 45-50 ^C. The reaction mixture was heated to 100-105 ^{° C} (to inactivate the enzymes), cooled to room temperature, and separated at 6000 rev / min. The resulting products (protein hydrolyzate and meal) are dried on a spray dryer. Hydrolyzate yield 360 g (36% of the initial biomass). The yield of meal is 530 g (53% of the initial biomass).

П р и м е р 2. 1 кг сухой биомассы микроводоросли рода Chlorella смешивают с 10 л экстрагента и проводят экстракцию при комнатной температуре. В качестве экстрагента используют этанол. После окончания экстракции проводят разделение липидов и обезжиренной биомассы путем фильтрования. Полученный экстракт сгущают в вакуумном испарителе при температуре не выше 45^оС. Конечными продуктами являются липид-пигментный комплекс и обезжиренная биомасса. Выход липид-пигментного комплекса при такой обработке составляет 110 г (11% от исходной биомассы). Состав полученного липид-пигментного комплекса приведен в табл.2.PRI me R 2. 1 kg of dry biomass microalgae of the genus Chlorella are mixed with 10 l of extractant and extraction is carried out at room temperature. Ethanol is used as an extractant. After extraction is completed, lipids and fat-free biomass are separated by filtration. The resulting extract was concentrated in a vacuum evaporator at a temperature not higher than 45 ° ^C. The end product is a lipid-pigment complex and defatted biomass. The yield of the lipid-pigment complex during this treatment is 110 g (11% of the initial biomass). The composition of the obtained lipid-pigment complex is shown in table.2.

Обезжиренную биомассу подвергают ферментативному гидролизу. Остаток биомассы 890 г смешивают с 10-кратным количеством воды, разваривают и проводят ферментативный гидролиз с последовательным использованием двух ферментов целловиридина П-10х и протосубтилина Г-10х. Первый фермент осуществляет разрушение полисахаридного комплекса клеток. Длительность процесса гидролиза 3 ч. С использованием второго фермента осуществляют гидролиз белков. Длительность процесса гидролиза 15 ч. После достижения в водной фазе содержания сухого вещества, равного 5% осуществляют инактивацию ферментов путем кипячения реакционной массы. Затем проводят разделение жидкого гидролизата и негидролизуемого остатка (шрота) на сепараторе при 6000 об/мин. Полученные продукты (белковый гидролизат и шрот) высушивают на распылительной сушилке. Выход гидролизата 250 г (25% от исходной биомассы). Выход шрота 640 г (64% от исходной биомассы). Fat-free biomass is subjected to enzymatic hydrolysis. The remaining biomass of 890 g is mixed with a 10-fold amount of water, digested and enzymatic hydrolysis is carried out using two enzymes celloviridine P-10x and protosubtilin G-10x. The first enzyme disrupts the polysaccharide complex of cells. The duration of the hydrolysis process is 3 hours. Using a second enzyme, protein hydrolysis is carried out. The duration of the hydrolysis process is 15 hours. After reaching a dry matter content of 5% in the aqueous phase, enzymes are inactivated by boiling the reaction mass. Then, the liquid hydrolyzate and the non-hydrolyzable residue (meal) are separated on a separator at 6000 rpm. The resulting products (protein hydrolyzate and meal) are dried on a spray dryer. The hydrolyzate yield is 250 g (25% of the initial biomass). The yield of meal is 640 g (64% of the initial biomass).

П р и м е р 3. 1 кг сухой биомассы микроводоросли рода Chlorella смешивают с 10 л экстрагента, в качестве которого берут бензин экстракционный и проводят экстракцию липидов при комнатной температуре. После окончания процесса экстракции проводят разделение экстракта и обезжиренной биомассы. Полученный экстракт сгущают в вакуумном испарителе при 45-50^оС. Конечными продуктами являются липид-пигментный комплекс и обезжиренная биомасса. Выход липид-пигментного комплекса составляет 120 г (12% от исходной биомассы). Химический состав липид-пигментного комплекса приведен в табл.2.PRI me R 3. 1 kg of dry biomass microalgae of the genus Chlorella mixed with 10 l of extractant, which is used as extraction gasoline and lipid extraction is carried out at room temperature. After the extraction process is completed, the extract is separated from the non-fat biomass. The resulting extract was concentrated in a vacuum evaporator at 45-50 ° ^C. The end product is a lipid-pigment complex and defatted biomass. The output of the lipid-pigment complex is 120 g (12% of the initial biomass). The chemical composition of the lipid-pigment complex is shown in table.2.

Обезжиренную биомассу (880 г) смешивают с 10-кратным количеством воды, разваривают, подвергают ферментативному гидролизу, проводят разделение и сушку в условиях, аналогичных описанным в примере 1. Выход сухого гидролизата при этом составляет 270 г (27% от исходной биомассы). Fat-free biomass (880 g) is mixed with 10 times the amount of water, boiled, subjected to enzymatic hydrolysis, separation and drying are carried out under conditions similar to those described in example 1. The yield of dry hydrolyzate is 270 g (27% of the original biomass).

П р и м е р 4. 1 кг сухой биомассы микроводоросли рода Chlorella смешивают с 10 л экстрагента, в качестве которого используют смесь этанола и бензина в соотношении 1:2. Экстракцию проводят при комнатной температуре. После окончания процесса экстракции экстракт и обезжиренную биомассу разделяют путем фильтрования. Экстракт сгущают в вакуумном испарителе при 45-50^оС. Конечными продуктами являются липид-пигментный комплекс и обезжиренная биомасса. Выход липид- пигментного комплекса составляет 150 г (15% от исходной биомассы). Состав липид-пигментного комплекса, полученного данным способом, приведен в табл.2.PRI me R 4. 1 kg of dry biomass microalgae of the genus Chlorella mixed with 10 l of extractant, which is used as a mixture of ethanol and gasoline in a ratio of 1: 2. The extraction is carried out at room temperature. After completion of the extraction process, the extract and non-fat biomass are separated by filtration. The extract was concentrated in a vacuum evaporator at 45-50 ° ^C. The end product is a lipid-pigment complex and defatted biomass. The output of the lipid-pigment complex is 150 g (15% of the initial biomass). The composition of the lipid-pigment complex obtained by this method is shown in table.2.

Обезжиренную биомассу подвергают ферментативному гидролизу, разделению и сушке в условиях, аналогичных описанным в примере 1. Выход гидролизата при этом составляет 330 г (33% от исходной биомассы). Fat-free biomass is subjected to enzymatic hydrolysis, separation and drying under conditions similar to those described in example 1. The hydrolyzate yield in this case is 330 g (33% of the initial biomass).

Claims (1)

1. СПОСОБ ИЗВЛЕЧЕНИЯ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ ИЗ БИОМАССЫ МИКРОВОДОРОСЛИ РОДА CHLORELLA, включающий термообработку биомассы при 100^oС, двустадийный ферментативный гидролиз с помощью ферментов целлюлолитического и протеолитического действия с последующим кипячением и отделением водной фазы, содержащей белковый гидролизат, и негидролизуемого остатка биомассы, отличающийся тем, что биомассу микроводоросли предварительно обрабатывают органическим растворителем и полученный липидпигментный комплекс отделяют, ферментативный гидролиз ведут до достижения в водной фазе реакционной массы содержания сухого вещества 5,0 5,8%
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве органического растворителя используют смесь этанола с бензином в соотношении 1:2.1. METHOD FOR REMOVING BIOLOGICALLY ACTIVE SUBSTANCES FROM THE BIOMASS OF THE CHLORELLA MICROALGAE, including heat treatment of biomass at 100 ^° C, two-stage enzymatic hydrolysis using cellulolytic and proteolytic enzymes, followed by boiling and separation of hydrolysis and hydrolysis that the microalgae biomass is pre-treated with an organic solvent and the resulting lipid-pigment complex is separated, enzymatic hydrolysis lead to the achievement in the aqueous phase of the reaction mass dry matter content of 5.0 to 5.8%
2. The method according to claim 1, characterized in that as an organic solvent use a mixture of ethanol with gasoline in a ratio of 1: 2.

Images