RU2020102451A - Направляемые нуклеиновыми кислотами нуклеазы - Google Patents
Направляемые нуклеиновыми кислотами нуклеазы Download PDFInfo
- Publication number
- RU2020102451A RU2020102451A RU2020102451A RU2020102451A RU2020102451A RU 2020102451 A RU2020102451 A RU 2020102451A RU 2020102451 A RU2020102451 A RU 2020102451A RU 2020102451 A RU2020102451 A RU 2020102451A RU 2020102451 A RU2020102451 A RU 2020102451A
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- nucleic acid
- sequence
- nuclease
- seq
- composition
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/70—Vectors or expression systems specially adapted for E. coli
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
- A61K48/0008—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'non-active' part of the composition delivered, e.g. wherein such 'non-active' part is not delivered simultaneously with the 'active' part of the composition
- A61K48/0016—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'non-active' part of the composition delivered, e.g. wherein such 'non-active' part is not delivered simultaneously with the 'active' part of the composition wherein the nucleic acid is delivered as a 'naked' nucleic acid, i.e. not combined with an entity such as a cationic lipid
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
- C12N15/102—Mutagenizing nucleic acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/111—General methods applicable to biologically active non-coding nucleic acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/80—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi
- C12N15/81—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi for yeasts
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/87—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation
- C12N15/90—Stable introduction of foreign DNA into chromosome
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
- C12N9/22—Ribonucleases RNAses, DNAses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/20—Type of nucleic acid involving clustered regularly interspaced short palindromic repeats [CRISPRs]
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Mycology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Claims (156)
1. Способ модификации области-мишени в геноме клетки, включающий:
(a) приведение клетки в контакт с:
направляемой нуклеиновой кислотой нуклеазой, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7;
сконструированной направляющей нуклеиновой кислотой, способной формировать комплекс с направляемой нуклеиновой кислотой нуклеазой; и
редактирующей последовательностью, кодирующей нуклеиновую кислоту, комплементарную указанной области-мишени, имеющей изменение в последовательности, по сравнению с областью-мишенью; и
(b) обеспечение возможности для нуклеазы, направляющей нуклеиновой кислоты и редактирующей последовательности осуществлять геномное редактирование в области-мишени генома клетки.
2. Способ по п.1, где сконструированная направляющая нуклеиновая кислота и редактирующая последовательность представлены в форме одиночной нуклеиновой кислоты.
3. Способ по п.2, где одиночная нуклеиновая кислота дополнительно содержит мутацию в участке мотива, смежного с протоспейсером (PAM).
4. Способ по п.1, где направляемая нуклеиновой кислотой нуклеаза кодирована нуклеиновой кислотой с по меньшей мере 85% идентичностью с SEQ ID NO: 47, или 203-222.
5. Способ по п.1, где направляемая нуклеиновой кислотой нуклеаза кодирована нуклеиновой кислотой с по меньшей мере 85% идентичностью с SEQ ID NO: 133, или 183-202.
6. Способ по п.1, где направляемая нуклеиновой кислотой нуклеаза кодирована нуклеиновой кислотой с по меньшей мере 85% идентичностью с SEQ ID NO: 153, или 243-262.
7. Способ по п.1, где направляемая нуклеиновой кислотой нуклеаза кодирована нуклеиновой кислотой с по меньшей мере 85% идентичностью с SEQ ID NO: 223-242.
8. Способ по п.1, где сконструированная направляющая нуклеиновая кислота содержит любую из SEQ ID NO: 172-182.
9. Способ по п.1, где сконструированная направляющая нуклеиновая кислота содержит последовательность петли, содержащую последовательность из UAUU, UUUU, UGUU, UCUU, UCUUU или UAGU.
10. Система направляемых нуклеиновой кислотой нуклеаз, содержащая:
(a) направляемую нуклеиновой кислотой нуклеазу, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7;
(b) сконструированную направляющую нуклеиновую кислоту, способную формировать комплекс с направляемой нуклеиновой кислотой нуклеазой, и
(c) редактирующую последовательность, имеющую изменение последовательности, по сравнению с последовательностью области-мишени в геноме клетки;
где система приводит к геномному редактированию в области-мишени в геноме клетки, облегчаемому нуклеазой, сконструированной направляющей нуклеиновой кислотой и редактирующей последовательностью.
11. Система по п.10, где направляемая нуклеиновой кислотой нуклеаза кодирована нуклеиновой кислотой с по меньшей мере 85% идентичностью с SEQ ID NO: 47, или 203-222.
12. Система по п.10, где направляемая нуклеиновой кислотой нуклеаза кодирована нуклеиновой кислотой с по меньшей мере 85% идентичностью с SEQ ID NO: 133, или 183-202.
13. Система по п.10, где направляемая нуклеиновой кислотой нуклеаза кодирована нуклеиновой кислотой с по меньшей мере 85% идентичностью с SEQ ID NO: 153, или 243-262.
14. Система по п.10, где направляемая нуклеиновой кислотой нуклеаза кодирована нуклеиновой кислотой с по меньшей мере 85% идентичностью с SEQ ID NO: 223-242.
15. Система по п.10, где направляемая нуклеиновой кислотой нуклеаза имеет оптимизированный кодонный состав для клетки, подлежащей редактированию.
16. Система по п.10, где сконструированная направляющая нуклеиновая кислота содержит любую из SEQ ID NO: 172-182.
17. Система по п.10, где сконструированная направляющая нуклеиновая кислота содержит последовательность петли, содержащую последовательность из UAUU, UUUU, UGUU, UCUU, UCUUU или UAGU.
18. Система по п.10, где сконструированная направляющая нуклеиновая кислота и редактирующая последовательность представлены в форме одиночной нуклеиновой кислоты.
19. Система по п.18, где одиночная нуклеиновая кислота дополнительно содержит мутацию в участке мотива, смежного с протоспейсером (PAM).
20. Композиция, содержащая
(a) направляемую нуклеиновой кислотой нуклеазу, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7; и
(b) сконструированную направляющую нуклеиновую кислоту, способную формировать комплекс с направляемой нуклеиновой кислотой нуклеазой, где сконструированная направляющая нуклеиновая кислота содержит последовательность петли, содержащую последовательность из UAUU, UUUU, UGUU, UCUU, UCUUU, или UAGU.
21. Композиция по п.20, где сконструированная направляющая нуклеиновая кислота представляет собой гетерологичную сконструированную направляющую нуклеиновую кислоту.
22. Композиция по п.20, где сконструированная направляющая нуклеиновая кислота содержит любую из SEQ ID NO: 172-182.
23. Композиция по п.20, где нуклеаза кодирована последовательностью нуклеиновой кислоты с оптимизированным кодонным составом для использования в клетках из конкретного организма.
24. Композиция по п.22, где последовательность нуклеиновой кислоты имеет оптимизированный кодонный состав для E. coli.
25. Композиция по п.22, где последовательность нуклеиновой кислоты имеет оптимизированный кодонный состав для S. cerevisiae.
26. Композиция по п.22, где последовательность нуклеиновой кислоты имеет оптимизированный кодонный состав для клеток млекопитающих.
27. Композиция по п.22, где последовательность нуклеиновой кислоты имеет оптимизированный кодонный состав для клеток человека.
28. Композиция по п.22, где последовательность нуклеиновой кислоты имеет оптимизированный кодонный состав для клеток растений.
29. Система направляемых нуклеиновой кислотой нуклеаз, содержащая:
(a) направляемую нуклеиновой кислотой нуклеазу, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7; и
(b) гетерологичную сконструированную направляющую нуклеиновую кислоту, способную формировать комплекс с направляемой нуклеиновой кислотой нуклеазой.
30. Система по п.29, дополнительно содержащая (c) редактирующую последовательность, имеющую изменение последовательности, по сравнению с последовательностью области-мишени.
31. Система по п.30, где нацеливающая система приводит к редактированию в области-мишени, облегчаемому нуклеазой, гетерологичной сконструированной направляющей нуклеиновой кислотой и редактирующей последовательностью.
32. Система по п.29, где сконструированная направляющая нуклеиновая кислота содержит последовательность петли, содержащую последовательность из UAUU, UUUU, UGUU, UCUU, UCUUU или UAGU.
33. Система по п.29, где сконструированная направляющая нуклеиновая кислота содержит любую из SEQ ID NO: 172-182.
34. Система по п.29, где нуклеаза кодирована последовательностью нуклеиновой кислоты с оптимизированным кодонным составом для использования в клетках из конкретного организма.
35. Система по п.30, где последовательность нуклеиновой кислоты имеет оптимизированный кодонный состав для E. coli.
36. Система по п.30, где последовательность нуклеиновой кислоты имеет оптимизированный кодонный состав для S. cerevisiae.
37. Система по п.30, где последовательность нуклеиновой кислоты имеет оптимизированный кодонный состав для клеток млекопитающих.
38. Система по п.30, где последовательность нуклеиновой кислоты имеет оптимизированный кодонный состав для клеток человека.
39. Система по п.30, где последовательность нуклеиновой кислоты имеет оптимизированный кодонный состав для клеток растений.
40. Способ модификации области-мишени в геноме клетки, включающий:
(a) приведение клетки в контакт с:
направляемая нуклеиновой кислотой нуклеаза, содержащей аминокислотную последовательность из SEQ ID NO: 2;
сконструированной направляющей нуклеиновой кислотой, способной формировать комплекс с направляемой нуклеиновой кислотой нуклеазой; и
редактирующей последовательностью, кодирующей нуклеиновую кислоту, комплементарную указанной области-мишени, имеющей изменение в последовательности, по сравнению с областью-мишенью; и
(b) обеспечение возможности для нуклеазы, направляющей нуклеиновой кислоты и редактирующей последовательности осуществлять геномное редактирование в области-мишени генома клетки.
41. Способ по п.40, где сконструированная направляющая нуклеиновая кислота и редактирующая последовательность представлены в форме одиночной нуклеиновой кислоты.
42. Способ по п.41, где одиночная нуклеиновая кислота дополнительно содержит мутацию в участке мотива, смежного с протоспейсером (PAM).
43. Способ по п.40, где направляемая нуклеиновой кислотой нуклеаза кодирована нуклеиновой кислотой с по меньшей мере 85% идентичностью с SEQ ID NO: 42 или 283-302.
44. Способ по п.40, где направляемая нуклеиновой кислотой нуклеаза кодирована нуклеиновой кислотой с по меньшей мере 85% идентичностью с SEQ ID NO: 128 или 263-282.
45. Способ по п.40, где направляемая нуклеиновой кислотой нуклеаза кодирована нуклеиновой кислотой с по меньшей мере 85% идентичностью с SEQ ID NO: 148 или 323-342.
46. Способ по п.40, где направляемая нуклеиновой кислотой нуклеаза кодирована нуклеиновой кислотой с по меньшей мере 85% идентичностью с SEQ ID NO: 303-322.
47. Способ по п.40, где сконструированная направляющая нуклеиновая кислота содержит любую из SEQ ID NO: 172-182.
48. Способ по п.40, где сконструированная направляющая нуклеиновая кислота содержит последовательность петли, содержащую последовательность из UAUU, UUUU, UGUU, UCUU, UCUUU или UAGU.
49. Система направляемых нуклеиновой кислотой нуклеаз, содержащая:
(a) направляемую нуклеиновой кислотой нуклеазу, содержащую аминокислотную последовательность из SEQ ID NO: 2;
(b) сконструированную направляющую нуклеиновую кислоту, способную формировать комплекс с направляемой нуклеиновой кислотой нуклеазой, и
(c) редактирующую последовательность, имеющую изменение последовательности, по сравнению с последовательностью области-мишени в геноме клетки;
где система приводит к геномному редактированию в области-мишени в геноме клетки облегчаемому нуклеазой, сконструированной направляющей нуклеиновой кислотой и редактирующей последовательностью.
50. Система по п.49, где направляемая нуклеиновой кислотой нуклеаза кодирована нуклеиновой кислотой с по меньшей мере 85% идентичностью с SEQ ID NO: 42 или 283-302.
51. Система по п.49, где направляемая нуклеиновой кислотой нуклеаза кодирована нуклеиновой кислотой с по меньшей мере 85% идентичностью с SEQ ID NO: 128, или 263-282.
52. Система по п.49, где направляемая нуклеиновой кислотой нуклеаза кодирована нуклеиновой кислотой с по меньшей мере 85% идентичностью с SEQ ID NO: 148, или 323-342.
53. Система по п.49, где направляемая нуклеиновой кислотой нуклеаза кодирована нуклеиновой кислотой с по меньшей мере 85% идентичностью с SEQ ID NO: 303-322.
54. Система по п.49, где направляемая нуклеиновой кислотой нуклеаза имеет оптимизированный кодонный состав для клетки, подлежащей редактированию.
55. Система по п.49, где сконструированная направляющая нуклеиновая кислота содержит любую из SEQ ID NO: 172-182.
56. Система по п.49, где сконструированная направляющая нуклеиновая кислота содержит последовательность петли, содержащую последовательность из UAUU, UUUU, UGUU, UCUU, UCUUU или UAGU.
57. Система по п.49, где сконструированная направляющая нуклеиновая кислота и редактирующая последовательность представлены в форме одиночной нуклеиновой кислоты.
58. Система по п.57, где одиночная нуклеиновая кислота дополнительно содержит мутацию в участке мотива, смежного с протоспейсером (PAM).
59. Композиция, содержащая
(a) направляемую нуклеиновой кислотой нуклеазу, содержащую аминокислотную последовательность из SEQ ID NO: 2; и
(b) сконструированную направляющую нуклеиновую кислоту, способную формировать комплекс с направляемой нуклеиновой кислотой нуклеазой, где сконструированная направляющая нуклеиновая кислота содержит последовательность петли, содержащую последовательность из UAUU, UUUU, UGUU, UCUU, UCUUU или UAGU.
60. Композиция по п.59, где сконструированная направляющая нуклеиновая кислота представляет собой гетерологичную сконструированную направляющую нуклеиновую кислоту.
61. Композиция по п.59, где сконструированная направляющая нуклеиновая кислота содержит любую из SEQ ID NO: 172-182.
62. Композиция по п.59, где нуклеаза кодирована последовательностью нуклеиновой кислоты с оптимизированным кодонным составом для использования в клетках из конкретного организма.
63. Композиция по п.62, где последовательность нуклеиновой кислоты имеет оптимизированный кодонный состав для E. coli.
64. Композиция по п.62, где последовательность нуклеиновой кислоты имеет оптимизированный кодонный состав для S. cerevisiae.
65. Композиция по п.62, где последовательность нуклеиновой кислоты имеет оптимизированный кодонный состав для клеток млекопитающих.
66. Композиция по п.62, где последовательность нуклеиновой кислоты имеет оптимизированный кодонный состав для клеток человека.
67. Композиция по п.62, где последовательность нуклеиновой кислоты имеет оптимизированный кодонный состав для клеток растений.
68. Система направляемых нуклеиновой кислотой нуклеаз, содержащая:
(a) направляемую нуклеиновой кислотой нуклеазу, содержащую аминокислотную последовательность из SEQ ID NO: 2; и
(b) гетерологичную сконструированную направляющую нуклеиновую кислоту, способную формировать комплекс с направляемой нуклеиновой кислотой нуклеазой.
69. Система по п.68, дополнительно содержащая (c) редактирующую последовательность, имеющую изменение последовательности, по сравнению с последовательностью области-мишени.
70. Система по п.69, где нацеливающая система приводит к редактированию в области-мишени, облегчаемому нуклеазой, гетерологичной сконструированной направляющей нуклеиновой кислотой и редактирующей последовательностью.
71. Система по п.68, где сконструированная направляющая нуклеиновая кислота содержит последовательность петли, содержащую последовательность из UAUU, UUUU, UGUU, UCUU, UCUUU или UAGU.
72. Система по п.68, где сконструированная направляющая нуклеиновая кислота содержит любую из SEQ ID NO: 172-182.
73. Система по п.68, где нуклеаза кодирована последовательностью нуклеиновой кислоты с оптимизированным кодонным составом для использования в клетках из конкретного организма.
74. Система по п.73, где последовательность нуклеиновой кислоты имеет оптимизированный кодонный состав для E. coli.
75. Система по п.73, где последовательность нуклеиновой кислоты имеет оптимизированный кодонный состав для S. cerevisiae.
76. Система по п.73, где последовательность нуклеиновой кислоты имеет оптимизированный кодонный состав для клеток млекопитающих.
77. Система по п.73, где последовательность нуклеиновой кислоты имеет оптимизированный кодонный состав для клеток человека.
78. Система по п.73, где последовательность нуклеиновой кислоты имеет оптимизированный кодонный состав для клеток растений.
79. Способ модификации области-мишени в геноме клетки, включающий:
(a) приведение клетки в контакт с:
направляемой нуклеиновой кислотой нуклеазой, содержащей аминокислотную последовательность из SEQ ID NO: 4;
сконструированной направляющей нуклеиновой кислотой, способной формировать комплекс с направляемой нуклеиновой кислотой нуклеазой; и
редактирующей последовательностью, кодирующей нуклеиновую кислоту, комплементарную указанной области-мишени, имеющей изменение в последовательности, по сравнению с областью-мишенью; и
(b) обеспечение возможности для нуклеазы, направляющей нуклеиновой кислоты и редактирующей последовательности осуществлять геномное редактирование в области-мишени генома клетки.
80. Способ по п.79, где сконструированная направляющая нуклеиновая кислота и редактирующая последовательность представлены в форме одиночной нуклеиновой кислоты.
81. Способ по п.80, где одиночная нуклеиновая кислота дополнительно содержит мутацию в участке мотива, смежного с протоспейсером (PAM).
82. Способ по п.79, где направляемая нуклеиновой кислотой нуклеаза кодирована нуклеиновой кислотой с по меньшей мере 85% идентичностью с SEQ ID NO: 44 или 722-741.
83. Способ по п.79, где направляемая нуклеиновой кислотой нуклеаза кодирована нуклеиновой кислотой с по меньшей мере 85% идентичностью с SEQ ID NO: 130 или 742-761.
84. Способ по п.79, где направляемая нуклеиновой кислотой нуклеаза кодирована нуклеиновой кислотой с по меньшей мере 85% идентичностью с SEQ ID NO: 150 или 762-781.
85. Способ по п.79, где направляемая нуклеиновой кислотой нуклеаза кодирована нуклеиновой кислотой с по меньшей мере 85% идентичностью с SEQ ID NO: 782-801.
86. Способ по п.79, где сконструированная направляющая нуклеиновая кислота содержит любую из SEQ ID NO: 172-182.
87. Способ по п.79, где сконструированная направляющая нуклеиновая кислота содержит последовательность петли, содержащую последовательность из UAUU, UUUU, UGUU, UCUU, UCUUU или UAGU.
88. Система направляемых нуклеиновой кислотой нуклеаз, содержащая:
(a) направляемую нуклеиновой кислотой нуклеазу, содержащую аминокислотную последовательность из SEQ ID NO: 4;
(b) сконструированную направляющую нуклеиновую кислоту, способную формировать комплекс с направляемой нуклеиновой кислотой нуклеазой, и
(c) редактирующую последовательность, имеющую изменение последовательности, по сравнению с последовательностью области-мишени в геноме клетки;
где система приводит к геномному редактированию в области-мишени в геноме клетки облегчаемому нуклеазой, сконструированной направляющей нуклеиновой кислотой и редактирующей последовательностью.
89. Система по п.88, где направляемая нуклеиновой кислотой нуклеаза кодирована нуклеиновой кислотой с по меньшей мере 85% идентичностью с SEQ ID NO: 44 или 722-741.
90. Система по п.88, где направляемая нуклеиновой кислотой нуклеаза кодирована нуклеиновой кислотой с по меньшей мере 85% идентичностью с SEQ ID NO: 130 или 742-761.
91. Система по п.88, где направляемая нуклеиновой кислотой нуклеаза кодирована нуклеиновой кислотой с по меньшей мере 85% идентичностью с SEQ ID NO: 150 или 762-781.
92. Система по п.88, где направляемая нуклеиновой кислотой нуклеаза кодирована нуклеиновой кислотой с по меньшей мере 85% идентичностью с SEQ ID NO: 782-801.
93. Система по п.88, где направляемая нуклеиновой кислотой нуклеаза имеет оптимизированный кодонный состав для клетки, подлежащей редактированию.
94. Система по п.88, где сконструированная направляющая нуклеиновая кислота содержит любую из SEQ ID NO: 172-182.
95. Система по п.88, где сконструированная направляющая нуклеиновая кислота содержит последовательность петли, содержащую последовательность из UAUU, UUUU, UGUU, UCUU, UCUUU или UAGU.
96. Система по п.88, где сконструированная направляющая нуклеиновая кислота и редактирующая последовательность представлены в форме одиночной нуклеиновой кислоты.
97. Система по п.96, где одиночная нуклеиновая кислота дополнительно содержит мутацию в участке мотива, смежного с протоспейсером (PAM).
98. Композиция, содержащая
(a) направляемую нуклеиновой кислотой нуклеазу, содержащую аминокислотную последовательность из SEQ ID NO: 4; и
(b) сконструированную направляющую нуклеиновую кислоту, способную формировать комплекс с направляемой нуклеиновой кислотой нуклеазой, где сконструированная направляющая нуклеиновая кислота содержит последовательность петли, содержащую последовательность из UAUU, UUUU, UGUU, UCUU, UCUUU или UAGU.
99. Композиция по п.98, где сконструированная направляющая нуклеиновая кислота представляет собой гетерологичную сконструированную направляющую нуклеиновую кислоту.
100. Композиция по п.98, где сконструированная направляющая нуклеиновая кислота содержит любую из SEQ ID NO: 172-182.
101. Композиция по п.98, где нуклеаза кодирована последовательностью нуклеиновой кислоты с оптимизированным кодонным составом для использования в клетках из конкретного организма.
102. Композиция по п.101, где последовательность нуклеиновой кислоты имеет оптимизированный кодонный состав для E. coli.
103. Композиция по п.101, где последовательность нуклеиновой кислоты имеет оптимизированный кодонный состав для S. cerevisiae.
104. Композиция по п.101, где последовательность нуклеиновой кислоты имеет оптимизированный кодонный состав для клеток млекопитающих.
105. Композиция по п.101, где последовательность нуклеиновой кислоты имеет оптимизированный кодонный состав для клеток человека.
106. Композиция по п.101, где последовательность нуклеиновой кислоты имеет оптимизированный кодонный состав для клеток растений.
107. Система направляемых нуклеиновой кислотой нуклеаз, содержащая:
(a) направляемую нуклеиновой кислотой нуклеазу, содержащую аминокислотную последовательность из SEQ ID NO: 4; и
(b) гетерологичную сконструированную направляющую нуклеиновую кислоту, способную формировать комплекс с направляемой нуклеиновой кислотой нуклеазой.
108. Система по п.107, дополнительно содержащая (c) редактирующую последовательность, имеющую изменение последовательности, по сравнению с последовательностью области-мишени.
109. Система по п.108, где нацеливающая система приводит к редактированию в области-мишени, облегчаемому нуклеазой, гетерологичной сконструированной направляющей нуклеиновой кислотой и редактирующей последовательностью.
110. Система по п.107, где сконструированная направляющая нуклеиновая кислота содержит последовательность петли, содержащую последовательность из UAUU, UUUU, UGUU, UCUU, UCUUU или UAGU.
111. Система по п.107, где сконструированная направляющая нуклеиновая кислота содержит любую из SEQ ID NO: 172-182.
112. Система по п.107, где нуклеаза кодирована последовательностью нуклеиновой кислоты с оптимизированным кодонным составом для использования в клетках из конкретного организма.
113. Система по п.112, где последовательность нуклеиновой кислоты имеет оптимизированный кодонный состав для E. coli.
114. Система по п.112, где последовательность нуклеиновой кислоты имеет оптимизированный кодонный состав для S. cerevisiae.
115. Система по п.112, где последовательность нуклеиновой кислоты имеет оптимизированный кодонный состав для клеток млекопитающих.
116. Система по п.112, где последовательность нуклеиновой кислоты имеет оптимизированный кодонный состав для клеток человека.
117. Система по п.112, где последовательность нуклеиновой кислоты имеет оптимизированный кодонный состав для клеток растений.
Applications Claiming Priority (5)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US15/632,001 US9982279B1 (en) | 2017-06-23 | 2017-06-23 | Nucleic acid-guided nucleases |
US15/631,989 | 2017-06-23 | ||
US15/632,001 | 2017-06-23 | ||
US15/631,989 US10011849B1 (en) | 2017-06-23 | 2017-06-23 | Nucleic acid-guided nucleases |
PCT/US2018/034779 WO2018236548A1 (en) | 2017-06-23 | 2018-05-25 | NUCLEIC ACID GUIDED NUCLEASES |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2022103603A Division RU2022103603A (ru) | 2017-06-23 | 2018-05-25 | Направляемые нуклеиновыми кислотами нуклеазы |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2020102451A true RU2020102451A (ru) | 2021-07-26 |
RU2020102451A3 RU2020102451A3 (ru) | 2021-11-25 |
RU2769475C2 RU2769475C2 (ru) | 2022-04-01 |
Family
ID=64737785
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2022103603A RU2022103603A (ru) | 2017-06-23 | 2018-05-25 | Направляемые нуклеиновыми кислотами нуклеазы |
RU2020102451A RU2769475C2 (ru) | 2017-06-23 | 2018-05-25 | Направляемые нуклеиновыми кислотами нуклеазы |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2022103603A RU2022103603A (ru) | 2017-06-23 | 2018-05-25 | Направляемые нуклеиновыми кислотами нуклеазы |
Country Status (12)
Country | Link |
---|---|
EP (2) | EP3916086A1 (ru) |
JP (2) | JP7136816B2 (ru) |
KR (2) | KR102321388B1 (ru) |
CN (1) | CN111511906A (ru) |
AU (2) | AU2018289077B2 (ru) |
CA (1) | CA3067951A1 (ru) |
ES (1) | ES2971549T3 (ru) |
IL (1) | IL271342A (ru) |
MX (1) | MX2019015047A (ru) |
NZ (1) | NZ760730A (ru) |
RU (2) | RU2022103603A (ru) |
WO (1) | WO2018236548A1 (ru) |
Families Citing this family (30)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US10011849B1 (en) | 2017-06-23 | 2018-07-03 | Inscripta, Inc. | Nucleic acid-guided nucleases |
US9982279B1 (en) | 2017-06-23 | 2018-05-29 | Inscripta, Inc. | Nucleic acid-guided nucleases |
CN114096667A (zh) * | 2019-07-08 | 2022-02-25 | 因思科瑞普特公司 | 经由LexA-Rad51融合蛋白增加核酸指导的细胞编辑 |
KR20220053671A (ko) * | 2019-09-04 | 2022-04-29 | 에디진 인크. | 오프 타겟 평가 기반의 유전자 편집 치료의 평가 방법 |
EP4069837A4 (en) * | 2019-12-10 | 2024-03-13 | Inscripta, Inc. | NEW MAD NUCLEASES |
US10704033B1 (en) * | 2019-12-13 | 2020-07-07 | Inscripta, Inc. | Nucleic acid-guided nucleases |
US11584781B2 (en) | 2019-12-30 | 2023-02-21 | Eligo Bioscience | Chimeric receptor binding proteins resistant to proteolytic degradation |
US11746352B2 (en) | 2019-12-30 | 2023-09-05 | Eligo Bioscience | Microbiome modulation of a host by delivery of DNA payloads with minimized spread |
CN115605600A (zh) | 2020-02-28 | 2023-01-13 | 科沃施种子欧洲股份两合公司(De) | 未成熟花序分生组织编辑 |
WO2021170787A1 (en) | 2020-02-28 | 2021-09-02 | KWS SAAT SE & Co. KGaA | Method for rapid genome modification in recalcitrant plants |
EP3922719A1 (en) | 2020-06-12 | 2021-12-15 | Eligo Bioscience | Specific decolonization of antibiotic resistant bacteria for prophylactic purposes |
US20230348920A1 (en) | 2020-06-29 | 2023-11-02 | KWS SAAT SE & Co. KGaA | Boosting homology directed repair in plants |
US20230235361A1 (en) | 2020-07-03 | 2023-07-27 | Eligo Bioscience | Method of containment of nucleic acid vectors introduced in a microbiome population |
US20240026369A1 (en) | 2020-10-27 | 2024-01-25 | KWS SAAT SE & Co. KGaA | Use of enhanced pol theta activity for eukaryotic genome engineering |
US11661459B2 (en) | 2020-12-03 | 2023-05-30 | Century Therapeutics, Inc. | Artificial cell death polypeptide for chimeric antigen receptor and uses thereof |
WO2022120334A1 (en) | 2020-12-03 | 2022-06-09 | Century Therapeutics, Inc. | Genetically engineered cells and uses thereof |
WO2022144381A1 (en) | 2020-12-30 | 2022-07-07 | Eligo Bioscience | Microbiome modulation of a host by delivery of dna payloads with minimized spread |
EP4271805A1 (en) * | 2020-12-31 | 2023-11-08 | Gigamune, Inc. | Novel nucleic acid-guided nucleases |
CN114277015B (zh) * | 2021-03-16 | 2023-12-15 | 山东舜丰生物科技有限公司 | Crispr酶以及应用 |
WO2022238552A1 (en) | 2021-05-12 | 2022-11-17 | Eligo Bioscience | Production bacterial cells and use thereof in production methods |
WO2022243437A1 (en) | 2021-05-19 | 2022-11-24 | KWS SAAT SE & Co. KGaA | Sample preparation with oppositely oriented guide polynucleotides |
EP4347818A2 (en) | 2021-06-01 | 2024-04-10 | Arbor Biotechnologies, Inc. | Gene editing systems comprising a crispr nuclease and uses thereof |
EP4166670A1 (en) | 2021-10-18 | 2023-04-19 | KWS SAAT SE & Co. KGaA | Plant-tag-based weeding control |
CN113846075A (zh) * | 2021-11-29 | 2021-12-28 | 科稷达隆(北京)生物技术有限公司 | Mad7-nls融合蛋白、用于植物基因组定点编辑的核酸构建物及其应用 |
WO2023240147A1 (en) | 2022-06-08 | 2023-12-14 | Century Therapeutics, Inc. | Genetically engineered cells expressing cd16 variants and nkg2d and uses thereof |
WO2023240169A1 (en) | 2022-06-08 | 2023-12-14 | Century Therapeutics, Inc. | Immunoeffector cells derived from induced pluripotent stem cells genetically engineered with membrane bound il12 and uses thereof |
WO2024047562A1 (en) | 2022-09-02 | 2024-03-07 | Janssen Biotech, Inc. | Materials and processes for bioengineering cellular hypoimmunogenicity |
WO2024062138A1 (en) | 2022-09-23 | 2024-03-28 | Mnemo Therapeutics | Immune cells comprising a modified suv39h1 gene |
WO2024102838A1 (en) | 2022-11-09 | 2024-05-16 | Century Therapeutics, Inc. | Engineered interleukin-7 receptors and uses thereof |
WO2024103017A2 (en) | 2022-11-10 | 2024-05-16 | Century Therapeutics, Inc. | Genetically engineered cells having anti-nectin4 chimeric antigen receptors, and uses thereof |
Family Cites Families (33)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4217344A (en) | 1976-06-23 | 1980-08-12 | L'oreal | Compositions containing aqueous dispersions of lipid spheres |
US4235871A (en) | 1978-02-24 | 1980-11-25 | Papahadjopoulos Demetrios P | Method of encapsulating biologically active materials in lipid vesicles |
US4186183A (en) | 1978-03-29 | 1980-01-29 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army | Liposome carriers in chemotherapy of leishmaniasis |
US4261975A (en) | 1979-09-19 | 1981-04-14 | Merck & Co., Inc. | Viral liposome particle |
US4485054A (en) | 1982-10-04 | 1984-11-27 | Lipoderm Pharmaceuticals Limited | Method of encapsulating biologically active materials in multilamellar lipid vesicles (MLV) |
US4501728A (en) | 1983-01-06 | 1985-02-26 | Technology Unlimited, Inc. | Masking of liposomes from RES recognition |
US4897355A (en) | 1985-01-07 | 1990-01-30 | Syntex (U.S.A.) Inc. | N[ω,(ω-1)-dialkyloxy]- and N-[ω,(ω-1)-dialkenyloxy]-alk-1-yl-N,N,N-tetrasubstituted ammonium lipids and uses therefor |
US5049386A (en) | 1985-01-07 | 1991-09-17 | Syntex (U.S.A.) Inc. | N-ω,(ω-1)-dialkyloxy)- and N-(ω,(ω-1)-dialkenyloxy)Alk-1-YL-N,N,N-tetrasubstituted ammonium lipids and uses therefor |
US4946787A (en) | 1985-01-07 | 1990-08-07 | Syntex (U.S.A.) Inc. | N-(ω,(ω-1)-dialkyloxy)- and N-(ω,(ω-1)-dialkenyloxy)-alk-1-yl-N,N,N-tetrasubstituted ammonium lipids and uses therefor |
US4797368A (en) | 1985-03-15 | 1989-01-10 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Adeno-associated virus as eukaryotic expression vector |
US4774085A (en) | 1985-07-09 | 1988-09-27 | 501 Board of Regents, Univ. of Texas | Pharmaceutical administration systems containing a mixture of immunomodulators |
US4837028A (en) | 1986-12-24 | 1989-06-06 | Liposome Technology, Inc. | Liposomes with enhanced circulation time |
US5143854A (en) | 1989-06-07 | 1992-09-01 | Affymax Technologies N.V. | Large scale photolithographic solid phase synthesis of polypeptides and receptor binding screening thereof |
US5264618A (en) | 1990-04-19 | 1993-11-23 | Vical, Inc. | Cationic lipids for intracellular delivery of biologically active molecules |
AU7979491A (en) | 1990-05-03 | 1991-11-27 | Vical, Inc. | Intracellular delivery of biologically active substances by means of self-assembling lipid complexes |
US5210015A (en) | 1990-08-06 | 1993-05-11 | Hoffman-La Roche Inc. | Homogeneous assay system using the nuclease activity of a nucleic acid polymerase |
US5173414A (en) | 1990-10-30 | 1992-12-22 | Applied Immune Sciences, Inc. | Production of recombinant adeno-associated virus vectors |
US5587308A (en) | 1992-06-02 | 1996-12-24 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health & Human Services | Modified adeno-associated virus vector capable of expression from a novel promoter |
EP0831854A4 (en) | 1995-06-06 | 2001-01-24 | Isis Pharmaceuticals Inc | OLIGONUCLEOTIDS WITH PHOSPHOROTHIOATE BINDINGS OF HIGH CHIRAL PURITY |
US5985662A (en) | 1995-07-13 | 1999-11-16 | Isis Pharmaceuticals Inc. | Antisense inhibition of hepatitis B virus replication |
IL135776A0 (en) | 1997-10-24 | 2001-05-20 | Life Technologies Inc | Recombinational cloning using nucleic acids having recombination sites |
US9405700B2 (en) | 2010-11-04 | 2016-08-02 | Sonics, Inc. | Methods and apparatus for virtualization in an integrated circuit |
DK3401400T3 (da) | 2012-05-25 | 2019-06-03 | Univ California | Fremgangsmåder og sammensætninger til rna-styret mål-dna-modifikation og til rna-styret transskriptionsmodulering |
US8697359B1 (en) | 2012-12-12 | 2014-04-15 | The Broad Institute, Inc. | CRISPR-Cas systems and methods for altering expression of gene products |
WO2014093701A1 (en) * | 2012-12-12 | 2014-06-19 | The Broad Institute, Inc. | Functional genomics using crispr-cas systems, compositions, methods, knock out libraries and applications thereof |
US9790490B2 (en) * | 2015-06-18 | 2017-10-17 | The Broad Institute Inc. | CRISPR enzymes and systems |
JP2018532402A (ja) * | 2015-09-24 | 2018-11-08 | クリスパー セラピューティクス アーゲー | Rnaプログラム可能エンドヌクレアーゼの新規のファミリーならびにゲノム編集および他の適用におけるそれらの使用 |
EP3383409A4 (en) * | 2015-12-02 | 2019-10-02 | The Regents of The University of California | COMPOSITIONS AND METHODS FOR MODIFYING TARGET NUCLEIC ACID |
WO2017106657A1 (en) * | 2015-12-18 | 2017-06-22 | The Broad Institute Inc. | Novel crispr enzymes and systems |
US9896696B2 (en) * | 2016-02-15 | 2018-02-20 | Benson Hill Biosystems, Inc. | Compositions and methods for modifying genomes |
CN106244591A (zh) * | 2016-08-23 | 2016-12-21 | 苏州吉玛基因股份有限公司 | 修饰crRNA在CRISPR/Cpf1基因编辑***中的应用 |
AU2017280353B2 (en) | 2016-06-24 | 2021-11-11 | Inscripta, Inc. | Methods for generating barcoded combinatorial libraries |
US9982279B1 (en) * | 2017-06-23 | 2018-05-29 | Inscripta, Inc. | Nucleic acid-guided nucleases |
-
2018
- 2018-05-25 RU RU2022103603A patent/RU2022103603A/ru unknown
- 2018-05-25 EP EP21167880.0A patent/EP3916086A1/en active Pending
- 2018-05-25 AU AU2018289077A patent/AU2018289077B2/en active Active
- 2018-05-25 CA CA3067951A patent/CA3067951A1/en active Pending
- 2018-05-25 NZ NZ760730A patent/NZ760730A/en unknown
- 2018-05-25 CN CN201880054732.5A patent/CN111511906A/zh active Pending
- 2018-05-25 KR KR1020207002319A patent/KR102321388B1/ko active IP Right Grant
- 2018-05-25 WO PCT/US2018/034779 patent/WO2018236548A1/en unknown
- 2018-05-25 EP EP18821213.8A patent/EP3642334B1/en active Active
- 2018-05-25 JP JP2019571011A patent/JP7136816B2/ja active Active
- 2018-05-25 RU RU2020102451A patent/RU2769475C2/ru active
- 2018-05-25 KR KR1020217035078A patent/KR102558931B1/ko active IP Right Grant
- 2018-05-25 MX MX2019015047A patent/MX2019015047A/es unknown
- 2018-05-25 ES ES18821213T patent/ES2971549T3/es active Active
-
2019
- 2019-12-11 IL IL271342A patent/IL271342A/en unknown
-
2022
- 2022-04-04 AU AU2022202248A patent/AU2022202248A1/en active Pending
- 2022-09-01 JP JP2022138875A patent/JP2022169775A/ja active Pending
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
WO2018236548A1 (en) | 2018-12-27 |
MX2019015047A (es) | 2020-08-03 |
RU2020102451A3 (ru) | 2021-11-25 |
CA3067951A1 (en) | 2018-12-27 |
NZ760730A (en) | 2023-04-28 |
AU2018289077B2 (en) | 2022-03-10 |
EP3642334B1 (en) | 2023-12-27 |
CN111511906A (zh) | 2020-08-07 |
KR102321388B1 (ko) | 2021-11-03 |
JP7136816B2 (ja) | 2022-09-13 |
KR102558931B1 (ko) | 2023-07-21 |
EP3916086A1 (en) | 2021-12-01 |
ES2971549T3 (es) | 2024-06-05 |
AU2022202248A1 (en) | 2022-04-21 |
AU2018289077A1 (en) | 2020-01-30 |
EP3642334A4 (en) | 2021-03-24 |
JP2022169775A (ja) | 2022-11-09 |
RU2022103603A (ru) | 2022-03-11 |
EP3642334A1 (en) | 2020-04-29 |
EP3642334C0 (en) | 2023-12-27 |
KR20200020903A (ko) | 2020-02-26 |
JP2020530264A (ja) | 2020-10-22 |
KR20210132244A (ko) | 2021-11-03 |
RU2769475C2 (ru) | 2022-04-01 |
IL271342A (en) | 2020-01-30 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2020102451A (ru) | Направляемые нуклеиновыми кислотами нуклеазы | |
AU2018253496A1 (en) | Isolated Polynucleotides and Polypeptides and Methods of Using Same for Increasing Plant Yield, Biomass, Growth Rate, Vigor, Oil Content, Abiotic Stress Tolerance of Plants and Nitrogen Use Efficiency | |
GB2582100A (en) | CAS12C Compositions and methods of use | |
CN109136248B (zh) | 多靶点编辑载体及其构建方法和应用 | |
NZ600375A (en) | Herbicide tolerant soybean plants and methods for identifying same | |
SG178940A1 (en) | Products and methods for enhanced transgene expression and processing | |
NZ602352A (en) | Toxin genes and methods for their use | |
CN104611317B (zh) | 一种提高l-天冬酰胺酶分泌表达的方法 | |
RU2015143513A (ru) | Микровезикула и способ ее получения | |
EA202190454A1 (ru) | Новый crispr-ассоциированный белок и его применение | |
CN104561077A (zh) | 重组工程介导的谷氨酸棒杆菌atcc 13032的基因敲除方法 | |
JP2016510990A5 (ru) | ||
JP2020511931A5 (ru) | ||
WO2015158031A1 (zh) | 用于毕赤酵母重组质粒和表达耐辐射球菌ppri蛋白的毕赤酵母重组菌的dna分子 | |
CN109722436A (zh) | 基于CRISPR-Cas9的基因组无痕编辑的载体与应用 | |
CN103031299B (zh) | 一种基于定向点突变的革兰阴性菌无疤痕基因敲除方法 | |
CN112029699A (zh) | 一种基于内源CRISPR-Cas***的丁酸梭菌基因编辑***及其应用 | |
CN104195152A (zh) | 一种钙调磷酸酶催化亚基基因及其应用 | |
EP3455360A1 (en) | Dna constructs for manufacturing bio-therapeutic polypeptides for use in animal vaccines and therapeutics | |
CN104419709A (zh) | 烟草中一个钾转运体基因及其编码蛋白与应用 | |
AU2007208928A8 (en) | Transgenic plant transformed with stress-responsive gene | |
CN102660574A (zh) | 一种建立双启动子甲醇酵母高效表达重组人金属硫蛋白***的方法及该蛋白的制备纯化 | |
US20110236933A1 (en) | RECOMBINANT EUKARYOTIC EXPRESSION PLASMID ENCODING pprI GENE OF DEINOCOCCUS RADIODURANS R1 AND ITS FUNCTIONS | |
Kujoth et al. | Gene editing in dimorphic fungi using CRISPR/Cas9 | |
CN104975043A (zh) | 构建重组mva病毒的带有标记基因自删除***的穿梭载体 |